JP2016525139A

JP2016525139A - 安定化された抗体組成物

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Publication number: JP2016525139A
Application number: JP2016528526A
Authority: JP
Inventors: グンターバーンハルド; シェレーディーター; ペティグリューアンソニー; グラフゲシェ
Original assignee: ノバリックゲーエムベーハー
Priority date: 2013-07-23
Filing date: 2014-07-23
Publication date: 2016-08-22
Anticipated expiration: 2034-07-23
Also published as: CA2918419A1; PT3024484T; MX2016001018A; US20160159902A1; JP6503349B2; US20210340248A1; AU2014295052A1; KR102272568B1; CA2918419C; PL3024484T3; CN105555311B; ES2687094T3; MX370207B; EP3024484A1; BR112016001522B1; US10273298B2; AU2014295052B2; WO2015011199A1; HK1224218A1; CN105555311A

Abstract

本発明は、半フッ素化アルカンから選択される液体ビヒクルに基づく抗体の新規な組成物を提供する。これらのビヒクルの使用は、抗体およびこれらの誘導体の安定性および保存可能期間の改善を提供する。この組成物は、局所投与または非経口注射のために有用である。

Description

本発明は、抗体組成物、特に、治療的または診断的使用のための医薬製剤として有用な組成物の分野に関する。

抗体系療法は、抗体工学およびその作製技術の数多くの新しい開発と併せて、近年多数の疾患、例えばがんもしくは自己免疫疾患のための有効な治療選択肢の最先端となっている。

抗体の製剤化および送達に関係する主要な課題の１つは、特に長期保存および輸送のための抗体治療薬の安定性および形態の維持である。他のタイプのタンパク質系治療薬と同様に、抗体は、ストレス条件下、例えば凍結−解凍による温度変化または輸送の間の温度変化、光、酸素または化学物質／溶媒への曝露、せん断ストレスおよびｐＨストレスにおいて物理的および化学的に不安定性になりやすい。

抗体は、変性（例えば、三次構造および／または二次構造の喪失）することも、または相互作用して凝集体を形成することもある。抗体の凝集は、液体および固体の両方の状態で起こり得るが、特に液体製剤において、とりわけ高濃度の抗体において問題である。抗体は、通常比較的高用量で治療的に有効である。したがって、例えば用量体積の最小化およびより患者に優しい投与（例えば、静脈内注入の代わりに皮下注射、注射回数の低減）のための高抗体濃度が、医薬製剤において概して望ましい。

実際には、凝集は抗体治療薬の活性の喪失につながり、信頼性のない、および効果のない投薬につながり得る。より重大なことには、凝集は毒性を示し、望ましくないまたは深刻な免疫原性応答を誘発することもある。流動を妨げる大型の粒子の沈殿をもたらす凝集は、いずれの種類の非経口用途に対しても望ましくない。

酸化、脱アミド、異性化、ジスルフィド結合形成および他の不可逆性架橋反応などの化学的経路を介した抗体の改変および分解もまた継時的に起こり得、抗体の不活性化および凝集の誘発につながる。これらの反応は、凝集と併せて、多くの場合昇温において加速され、結果として冷却がほぼ常に必要条件である。これらの化学反応の多くにおいて、水もまた、例えばアミド結合の加水開裂においてメディエーターまたは反応中間体のいずれかとして重要な役割を果たす。したがって、例えば、固体状態の粉末製剤を形成するための凍結乾燥またはフリーズドライによる水の除去は、抗体治療薬の安定な製剤の調製に対する有効な手段であり得る。

市販の治療用抗体または抗体誘導体／断片の製剤のいくつかは、熟練した開業医または医療補助の施術者により投与直前に、滅菌条件下で水性媒体により再構成される必要のある凍結乾燥粉末製剤に基づく。例えば、オマリズマブ（例えば、Ｘｏｌａｉｒ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ製）が単回使用のバイアル中の凍結乾燥粉末として利用可能である。

しかし、実際の投与前の余分なステップとしての、滅菌水性媒体における凍結乾燥抗体の再構成は、不適当な操作（例えば振とう）または投薬および汚染のリスクを伴う。再構成ステップそれ自体は、溶解ステップの間、水性媒体のｐＨまたは温度が最適以下である場合、再水和を可能にする時間が短すぎる場合、またはバイアルがあまりに激しく浸透された場合凝集を誘発し得る。通常試料を廃棄することが求められる推奨時間内に凍結乾燥抗体製品を適切に溶解することに失敗した場合、廃棄物となる傾向もまた高い。

凍結乾燥過程のステップそれ自体は、凝集および／または分解を誘導し得ることに留意されたい。さらなる安定化賦形剤、例えば糖類またはポリオールが、他の賦形剤、例えば充填剤と併せて多くの場合凍結乾燥前の組成物に加えられる。抗体のより長期の保存可能期間を支援するために、最終製剤中の多数の成分に加えて、他の賦形剤の添加が凍結乾燥後に必要とされることもある。

即時使用の液体製剤は、投与のための調製の容易さのため一般に使用者に好まれる。凍結乾燥は時間がかかり、薬物開発および日常の製造の両方の間に費用がかかるため、安定であれば、液体製剤が凍結乾燥の回避のために医薬品製造業者にとっても魅力的である。実際には、抗体または抗体誘導体の多くの市販の製剤は水溶液系である。水性製剤に関しては、さまざまな分解化学反応の可能性を促進または低減するという観点で、媒体のｐＨは抗体の安定性に有意な影響を有し得る。結論として、最適なバッファー系が、他の製剤化賦形剤、例えば、酸化防止剤フリーラジカルスカベンジャー、界面活性剤および他の抗凝集添加剤または抗体に安定化を提供し、水性環境における保存の間に継時的に起こり得るさまざまな分解過程の可能性を相殺するための防腐剤と併せて常に必要である。

凍結乾燥および水溶液に対する別の製剤選択肢、例えば、担体ビヒクルとして非水性液体の使用もまた公知である。例えば、国際公開番号第ＷＯ２０１２／１２１７５４号明細書は、ゴマ油などの疎水性ビヒクルおよびオレイン酸エチルなどの粘度低下剤および抗ＴＮＦα抗体を含む、非水性の、高濃度懸濁液製剤を記載している。これらの組成物は、より注射しやすい油性担体を作製するために、担体に完全に混和性の粘度低下剤の添加を必要とする。概して、脂質および油の非経口使用は、痛みおよび他の望ましくない副作用を注射部位に引き起こす可能性がある。これらのタイプの化合物は治療剤の放出を減速させることもでき、急速または迅速な生体利用が好ましい場合理想的ではない。

過フッ素化化合物は、生物学的活性剤、例えばタンパク質およびペプチドの非水性液体担体候補として記載されている。例えば、米国特許第６４５８３７６号明細書は、オリゴペプチドおよびタンパク質成長因子を含む治療用／診断用化合物が、パーフルオロカーボンまたはフッ素化シリコーン油に、少なくとも１種の界面活性剤の存在下で懸濁される眼科用途（局所適用点眼薬など）に提唱される組成物を記載している。しかし、抗体または抗体の断片および誘導体を含むこのような組成物は言及されていない。

米国特許第６７３０３２８号明細書は、非水性、疎水性、非反応性ビヒクル、例えば鉱物油、パーフルオロデカリン、メトキシフルラン、パーフルオロトリブチルアミンおよびテトラデカンが、タンパク質、タンパク質性化合物および核酸を含む懸濁液組成物に使用される、熱安定性製剤を記載している。この製剤は、非経口、経皮、粘膜、経口および腸内方法の投与用、ならびに長期連続投与および埋込装置を介した送達のためのこれらの使用が提唱される。しかし、このようなビヒクル中の抗体または抗体の断片もしくは誘導体の懸濁液の具体的な例は開示されておらず、このような組成物の３ヶ月を超える時点における昇温下の安定性に関する教示もない。これらのタイプの組成物の実際の組織適合性もまた実証されていなかった。

国際公開番号第ＷＯ２０１１／０７３１３４号明細書は、分子量１２０２．３１を有する環状ポリペプチドであるシクロスポリンを、場合によりエタノールなどの共溶媒が存在する半フッ素化アルカン中溶液として開示している。懸濁液およびエマルジョンが任意選択の選択肢として述べられているが、このようなタイプの組成物の具体的開示も、または抗体もしくは抗体の断片もしくは誘導体のようなキロダルトン範囲の高分子量タンパク質種を含むどのような組成物の具体的開示もない。

したがって、本発明の目的は、当分野において現在公知の製剤に関係する制限および不利益のいずれかを克服する、新規な抗体組成物を導入することである。

国際公開番号第ＷＯ２０１２／１２１７５４号明細書米国特許第６４５８３７６号明細書米国特許第６７３０３２８号明細書国際公開番号第ＷＯ２０１１／０７３１３４号明細書

第１の態様において、本発明は、抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質と、式ＲＦＲＨ（式中、ＲＦは４から１２の炭素原子を有する線形過フッ素化炭水化物セグメントであり、ＲＨは４から８の炭素を有する線形アルキル基である）の半フッ素化アルカンを含む液体ビヒクルとの新規な組成物を提供する。抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質は、分散液または懸濁液を形成するように組成物中に組み込まれる。

別の態様において、抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質は、モノクローナル抗体、抗体断片、ポリクローナル抗体、抗体断片を含む融合タンパク質または抗体薬物複合体から選択することができる。

さらなる態様において、本発明は、抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質と、式ＲＦＲＨ（式中、ＲＦは４から１２の炭素原子を有する線形過フッ素化炭水化物セグメントであり、ＲＨは４から８の炭素を有する線形アルキル基である）の半フッ素化アルカンを含む液体ビヒクルとを含み、抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質が、分散液または懸濁液を形成するように組成物中に組み込まれた組成物を投与するステップを含む、疾患または病態を治療、予防または診断するための方法を、それを必要とする患者において提供する。

さらに別の実施形態において、本発明は、抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質と、式ＲＦＲＨ（式中、ＲＦは４から１２の炭素原子を有する線形過フッ素化炭水化物セグメントであり、ＲＨは４から８の炭素を有する線形アルキル基である）の半フッ素化アルカンを含む液体ビヒクルとを、懸濁液または分散液を形成するように混合するステップを含む、抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質を安定化させる方法を提供する。

第１の態様において、本発明は、抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質と、式ＲＦＲＨ（式中、ＲＦは４から１２の炭素原子を有する線形過フッ素化炭水化物セグメントであり、ＲＨは４から８の炭素を有する線形アルキル基である）の半フッ素化アルカンを含む液体ビヒクルとを含む組成物を提供する。さらに、抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質は、分散液または懸濁液を形成するように組成物中に組み込まれる；すなわち、抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質は、液体ビヒクル中に分散または懸濁される。

半フッ素化アルカンは、医薬としての見地から多数の有利性を提供する。半フッ素化アルカンは、実質的に非毒性であり、局所投与または非経口投与された場合、さまざまなタイプのヒトおよび動物の組織により忍容性であることが見出されている。加えて、これらは化学的に不活性であり、概して医薬製剤中の活性および不活性成分と適合性である。これらはまた、おそらくこれらの固有の両親媒性のため、広範囲の化合物、例えば小分子活性成分および多数の一般的な医薬として許容される賦形剤に溶解可能である。さらに、半フッ素化アルカンは、不溶性または難溶性の化合物（例えば抗原結合タンパク質またはポリペプチド）のためのビヒクルとして作用する場合、非常に有用な物理的または医薬的特性を有する、すなわち、固体、非分散性堆積物を殆ど、または全く形成しないと思われる分散液または懸濁液を形成する。

抗原結合タンパク質またはポリペプチドを含む組成物中の液体ビヒクルとしての半フッ素化アルカンの存在が、これらの成分に対して著しい安定化効果を有することが、本発明者らにより見出されている。特に、半フッ素化アルカンを液体ビヒクルとして含む組成物は、これらの凝集を実質的に予防または阻害でき、室温および４０℃ほどの高温であっても、生物学的活性を消失することなく長期間にわたって化学的分解を低減できる。

半フッ素化アルカン中の抗原結合タンパク質の分散液および懸濁液が、著しい程度の物理的安定性を示すこともまた見出されている。浮遊または堆積の発生はゆっくりと起こり、分散液または懸濁液を含む容器（例えばバイアル）を穏やかに振とうまたは揺り動かした後に用量を取り出すために十分な時間が残されている。半フッ素化アルカン中の抗原結合タンパク質粒子は、これらの元々の粒径分布を大幅に保持し、容易に再分散可能であると思われ、再分散が困難な凝集体は形成されないと思われる。重要なことには、このことは、正確さおよび再現性の点から高レベルの投薬正確性を提供する。

対照的に、他の化学的不活性ビヒクル中の懸濁液または分散液は不安的な傾向があり、密で再分散が困難な凝集体の形成につながり、正確な投薬を困難にするか、または場合によって不可能にし、例えば、通常皮下注射に使用される細いゲージの針の詰まりなどにつながる。凝集されたタンパク質粒子はまた、有害な免疫原性反応の誘発の高いリスクが存在する。

不安定な懸濁液または分散液は、分散相または連続相の相対密度に依存して、分散相の浮遊により、または分散相の堆積により急速に分離する傾向がある。このような挙動は通常、密な再分散が困難な凝集体の急速な形成を伴う。急速な浮遊または堆積は、正確および再現性の投薬を、不可能でないとしても、困難にする。例えば、注射可能または眼科用懸濁液が振とう後急速に沈む場合、および振とう後すぐに満たされた容器から初回用量を取り出さない場合、取り出された用量は意図された数より少ない薬物粒子を含有する可能性がある（または容器を逆転した場合、意図された用量より多くが分散される）。同じ容器から取り出された後続の用量もまた、高すぎるか、または低すぎる薬物用量を体積当たりに含有すると思われる。再分散が困難な凝集体を再分散させる試みにおいて、抗原結合ポリペプチドおよびタンパク質の激しい振とうは、これらのさらなる凝集および劣化をさらに誘発する恐れもある。

本発明の鍵となる有利性は、液体ビヒクルとして機能する、組成物中の半フッ素化アルカンの存在によりもたらされる。半フッ素化アルカン系懸濁液の有利性は、優れた医薬品の品質および効能をもたらし、さらに患者および／または健康管理の提供者のための使用利便性を向上させる。

半フッ素化アルカンは、水素原子のいくつかがフッ素により置き換えられた線形または分枝型のアルカンである。本発明に使用される半フッ素化アルカン（ＳＦＡ）において、１つの線形非フッ素化炭水化物セグメントおよび１つの線形過フッ素化炭水化物セグメントが存在する。したがってこれらの化合物は、一般式Ｆ（ＣＦ_２）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＨに従う。本発明によれば、ｎは４から１２の範囲から選択され、ｍは４から８の範囲から選択される。

半フッ素化アルカンに頻繁に使用される命名法は、過フッ素化炭水化物セグメントをＲＦと指定し、非フッ素化セグメントをＲＨと指定する。または、この化合物は、それぞれＦｎＨｍと称することもでき、Ｆは過フッ素化炭水化物セグメントを意味し、Ｈは非フッ素化セグメントを意味し、ｎおよびｍは個別のセグメントの炭素原子数を定義する。例えば、Ｆ３Ｈ３はパーフルオロプロピルプロパン、Ｆ（ＣＦ_２）_３（ＣＨ_２）_３Ｈを表す。さらに、このタイプの命名法は、通常線形セグメントを有する化合物に使用される。したがって、特に他のことが明記されない限り、Ｆ３Ｈ３は１−パーフルオロプロピルプロパンを意味し、２−パーフルオロプロピルプロパン、１−パーフルオロイソプロピルプロパンまたは２−パーフルオロイソプロピルプロパンを意味するものではないとみなすべきである。

好ましい半フッ素化アルカンとしては、特に化合物Ｆ４Ｈ５、Ｆ４Ｈ６、Ｆ４Ｈ８、Ｆ６Ｈ４、Ｆ６Ｈ６、Ｆ６Ｈ８およびＦ６Ｈ１０が挙げられる。本発明を実行するために特に好ましいものは、Ｆ４Ｈ５、Ｆ４Ｈ６、Ｆ６Ｈ６およびＦ６Ｈ８である。別の特に好ましい実施形態において、本発明の組成物はＦ６Ｈ８を含む。

場合により、該組成物は複数のＳＦＡを含んでもよい。例えば、ある密度または粘度などの特定の標的特性を得るために、ＳＦＡを組み合わせることが有用であり得る。ＳＦＡの混合物が使用される場合、混合物が、Ｆ４Ｈ５、Ｆ４Ｈ６、Ｆ６Ｈ４、Ｆ６Ｈ６、Ｆ６Ｈ８およびＦ６Ｈ１０の少なくとも１つ、特にＦ４Ｈ５、Ｆ４Ｈ６、Ｆ６Ｈ６およびＦ６Ｈ８の１つを含むことがさらに好ましい。別の実施形態において、混合物は、Ｆ４Ｈ５、Ｆ４Ｈ６、Ｆ６Ｈ４、Ｆ６Ｈ６、Ｆ６Ｈ８およびＦ６Ｈ１０から選択される少なくとも２つのメンバー、特にＦ４Ｈ５、Ｆ６Ｈ６およびＦ６Ｈ８から選択される少なくとも２つのメンバーを含む。

液体ＳＦＡは化学的および生理的に不活性であり、無色および安定である。これらの典型的な密度は１．１から１．７ｇ／ｃｍ^３の範囲であり、これらの表面張力は１９ｍＮ／ｍほどに小さくてよい。ＲＦＲＨタイプのＳＦＡは水に不溶性であるがいくらか両親媒性であり、非フッ素化セグメントのサイズの上昇に相関して親油性が上昇する。

ＲＦＲＨタイプの液体ＳＦＡは、網膜の展開（ｕｎｆｏｌｄｉｎｇ）および再適用のため、代用硝子体液として長期タンポナーデのため、（Ｈ．Ｍｅｉｎｅｒｔｅｔａｌ．，ＥｕｒｏｐｅａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＯｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１０（３），ｐｐ．１８９−１９７，２０００）および硝子体−網膜外科手術後の残留シリコーン油の洗い流し溶液として市販品として使用されている。実験的に、これらは代用血液としても使用されている（Ｈ．Ｍｅｉｎｅｒｔｅｔａｌ．，Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ，ＡｒｔｉｆｉｃｉａｌＣｅｌｌｓ，ａｎｄＩｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２１（５），ｐｐ．５８３−９５，１９９３）。これらの適用により、ＳＦＡは生理学的忍容性化合物として確立されている。他方で、ＳＦＡは現在承認されている薬物製品の賦形剤としては使用されていない。

本発明の組成物は抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質を含む。概してポリペプチドおよびタンパク質は、ペプチド結合により相互に連結されたアミノ酸単位のポリマーを表す。ポリペプチドとタンパク質との間を識別するために多くの場合使用されるサイズの境界はやや恣意的なので、これらの分子に関する２つの表現は、本発明の文脈において、相互に排他的であると理解するべきではなく、ポリペプチドをタンパク質と称することもでき、また逆もまた同様である。典型的には、「ポリペプチド」という用語は、単一のポリマー鎖だけを指し、一方「タンパク質」という表現は、非共有結合により相互に連結された２つまたはそれ以上のポリペプチド鎖もまた指すことができる。

より詳細には、また本発明の文脈において使用される場合、抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質は、これらの単量体において完全長抗体および全抗体（免疫グロブリンとしても公知である）または多量体型ならびに抗原に特異的に結合可能な完全長抗体に由来する、任意の断片、鎖、ドメインもしくは任意の改変体を指す。抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥまたはＩｇＭ免疫グロブリンのアイソタイプまたはクラスのいずれかに属していてよい。抗原に特異的に結合可能な抗体断片を含む融合タンパク質および抗体薬物複合体もまた、本明細書において使用される抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質の定義の範囲内にある。

完全長抗体は、Ｆｃ（結晶化可能断片）ドメインおよびＦａｂ（抗原結合断片）ドメインを有する一般構造で構成されるＹ字型糖タンパク質である。これらは、ジスルフィド結合を介して相互連結され、Ｙ字型構造を形成する２つの重鎖（Ｈ）および２つの軽鎖（Ｌ）ポリペプチド構造から構造的に構成される。それぞれのタイプの鎖は、可変領域（Ｖ）および定常領域（Ｃ）を含み、重鎖は１つの可変鎖領域（Ｖ_Ｈ）およびさまざまな定常領域（例えばＣ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２など）を含み、軽鎖は１つの可変鎖領域（Ｖ_Ｌ）および１つの定常領域（Ｃ_Ｌ）を含む。Ｖ領域は、さらなるサブドメイン／領域、すなわち、より保存されたアミノ酸残基を含むフレームワーク（ＦＲ）領域と、アミノ酸残基に関する可変性が高い領域で構成される超可変（ＨＶ）または相補性決定領域（ＣＤＲ）にさらに特徴付けることができる。鎖の可変領域は抗体の結合特異性を決定し、抗体の抗原結合Ｆａｂドメインを形成する。

本発明の好ましい実施形態において、組成物は、抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質を含み、該抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体断片、抗体断片を含む融合タンパク質、抗体薬物複合体またはこれらの任意の組み合わせから選択される。

本発明の特に好ましい実施形態において、組成物はモノクローナル抗体（ｍＡｂ）から選択される抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質を含む。モノクローナル抗体は、単一のエピトープまたは抗原に対する結合部位に対して特異的な抗体の均一な集団から得られる抗体を指す。モノクローナル抗体は、当分野において公知の抗体工学技術、例えばハイブリドーマまたは組換えＤＮＡ方法を使用して作製することができる。

抗原結合ポリペプチドおよびタンパク質ならびにモノクローナル抗体の範囲には抗体断片もまた含まれる。本明細書において定義されるように、抗体断片は、抗体の任意の領域、鎖、ドメインまたは抗原と相互作用でき、抗原に特異的に結合できるこれらの任意の構築体もしくは複合体を含み、結合能力に関して一価、二価またはさらに多価であってもよい。このような抗体断片は、当分野において公知の方法、例えば、完全長天然抗体の（例えばタンパク質分解による）解体から、タンパク質合成、遺伝子工学／ＤＮＡ組換え法、化学的架橋またはこれらの任意の組み合わせから作製することができる。抗体断片は一般に、完全長抗体の可変Ｖ領域に登場するさまざまなドメインもしくは領域の組み合わせに由来する。

本発明のある実施形態において、組成物は抗体断片から選択される抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質を含み、該抗体断片は、抗原結合断片（Ｆａｂ）、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体、ミニボディまたはダイアボディである。

特に好ましい抗体断片は、抗原結合ドメイン断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’とも称される）またはジスルフィド結合により連結された２つのＦａｂ断片を含むＦａｂ二量体である。Ｆａｂの例は、アブシキシマブ、セルトリズマブ，デジファブ（ｄｉｇｉｆａｂ）およびラニビズマブである。好ましいＦａｂはセルトリズマブ（セルトリズマブ・ペゴルとしても公知）であり、これは、ポリエチレングリコールとコンジュゲートされた組換えヒト化抗体Ｆａｂ’断片である。セルトリズマブは分子量９１ｋＤａを有し、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）を対象とする。

本発明のさらに別の実施形態において、組成物は、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、例えばリンカーにより接合された重鎖（Ｖ_Ｈ）および軽鎖（Ｖ_Ｌ）可変ドメインまたはこれらの複合型多量体／多価構築体、例えばダイアボディ（二価二量体）、トリアボディ、（三価三量体）またはテトラボディ（四価四量体）を含む単鎖可変断片を含んでよい。多量体抗体断片もまた多重特異的であってよく、例えば二重特異的ダイアボディは、それぞれが異なる抗原に対する特異性を有する２つの断片で構成され得る。さらに好ましい抗体断片としては、単一ドメイン抗体（ｄａＢ）、例えば抗原に特異的に結合可能な単一のＶ_ＨまたはＶ_Ｌドメインを含む抗体断片が挙げられる。本発明の範囲内の抗体断片としては、ｓｃＦｖ−Ｃ_Ｈ二量体構築体、すなわちミニボディもまた挙げられる。

さらなる実施形態によれば、組成物は、少なくとも１０ＫＤａ、少なくとも１５ｋＤａ、少なくとも３５ｋＤａ、少なくとも５０ｋＤａ、少なくとも７０ｋＤａまたは少なくとも９０ｋＤａから選択される分子量を有する抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質を含む。また、少なくとも１００ｋＤａ、例えば１００−１５０ｋＤａまたはさらに１５０ｋＤａより大きい分子量を有する抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質が好ましい。７０ｋＤａから１６０ｋＤａの範囲の分子量を有する抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質が特に好ましい。

本発明のさらなる実施形態において、抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質は、抗体断片を含む融合タンパク質から選択することができる。抗体断片は、別の生体活性タンパク質またはポリペプチド断片、例えば、ポリペプチド毒素、酵素、サイトカイン、膜タンパク質などと融合することができる。抗体断片を含む融合タンパク質の例としては、エタネルセプトおよびアタシセプトが挙げられる。エタネルセプトは、分子量１５０ｋＤａを有する組換えヒトタンパク質であり、ＩｇＧ１のＦｃ部分と融合された７５ｋＤａの腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）のリガンド結合部分を有する。

本発明の別の実施形態において、抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質は抗体薬物複合体から選択することができ、該抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質は、例えばリンカーまたは化学的架橋を介して小分子薬物または放射標識された成分、例えば放射性核種に共有結合される。抗体薬物複合体の例としては、ゲムツズマブ・オゾガマイシン、ブレンツキシマブ・ベドチン、_９０Ｙ−標識イブリツモマブ・チウキセタン、_１３１Ｉ−標識トシツモマブ、_９９ｍＴｃ−標識アルシツモマブが挙げられる。本明細書において使用する場合、抗体薬物複合体という用語は、例えばＰＥＧ化（例えば、セルトリズマブ・ペゴル、ヒト化ＴＮＦ阻害剤モノクローナル抗体のＰＥＧ化Ｆａｂ’断片）または脂質化により実質的に化学的修飾された抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質もまた指すことができる。

本明細書において理解されるように、抗原結合ポリペプチドおよびタンパク質は、キメラ、ヒト化またはヒトであってよい。キメラモノクローナル抗体は、例えば、複数の種由来の抗体配列、例えばネズミおよびヒトの抗体配列に由来する重鎖または軽鎖のドメインまたは領域を含むハイブリッドモノクローナル抗体を指す。ヒト化モノクローナル抗体は、概して少なくとも８５−９５％のヒト由来配列の寄与を有する、ヒト抗体配列に構造的に優勢に由来するモノクローナル抗体を指し、一方、ヒトモノクローナル抗体という用語は、ヒト生殖細胞系抗体配列のみに由来するモノクローナル抗体を指す。好ましい実施形態において、組成物は、モノクローナル抗体から選択される抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質で構成され、該モノクローナル抗体はキメラ、ヒト化またはヒト抗体である。

別の実施形態において、組成物は、ポリクローナル抗体または抗原の複数のエピトープを認識可能な抗体の異種混合物を含んでよい。

好ましい実施形態において、抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質は、治療用もしくは診断用化合物またはワクチンである。本明細書において使用する場合、治療用化合物は、疾患または病態を予防する、疾患または病態の任意の症状を緩和する、任意の疾患または病態を改善する、疾患または病態の進行を遅延させるなどために有用な化合物である。診断用化合物は、生物の状態を決定するために、または疾患、病態、症状もしくは患者の表現型を診断するために有用である。治療用化合物は、患者に投与しなければならないが、一方、診断薬は特定の症例に依存して、ｉｎｖｉｖｏまたはｉｎｖｉｔｒｏで使用することができる。誤解を避けるために記すと、治療用または診断用化合物は、治療的または診断的な有効量で本発明の組成物中に組み込まれる。

特に好ましい実施形態において、本発明の組成物は、治療的に有効なモノクローナル抗体もしくは抗体断片または疾患もしくは病態、例えば自己免疫疾患もしくは炎症状態、神経障害もしくはがんの治療のために投与され得るモノクローナル抗体または抗体断片を含む。がんの治療のための例示的モノクローナル抗体または抗体断片としては、アレムツズマブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、ゲムツズマブ、イピリムマブ、イブリツモマブ、ニモツズマブ、オファツムマブ、パニツムマブ、リツキシマブ、トシツモマブおよびトラスツズマブが挙げられる。自己免疫または炎症状態の治療のための例示的モノクローナル抗体または抗体断片としては、アダリムマブ、アレムツズマブ、ベリムマブ、ブリアキヌマブ、カナキヌマブ、エクリズマブ、エプラツズマブ、エファリズマブ、ゴリムマブ、インフリキシマブ、メポリズマブ、ナタリズマブ、オファツムマブ、オクレリズマブ、オテリキシズマブ、オマリズマブ、レスリズマブ、リツキシマブ、テプリズマブ、トシリズマブ、ウステキヌマブおよびベドリズマブが挙げられる。疾患または病態の治療、予防または診断のために投与することができるモノクローナル抗体または抗体断片のさらなる例としては、バシリキシマブ、ダクリズマブ、デノスマブ、エクリズマブ、パリビズマブおよびモタビズマブが挙げられる。

本発明による懸濁液または分散液の組成物は、抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質、例えば、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体断片、抗体断片を含む融合タンパク質、抗体薬物複合体またはこれらの任意の組み合わせから選択されるがん治療薬と、式ＲＦＲＨ（式中、ＲＦは４から１２の炭素原子を有する線形過フッ素化炭水化物セグメントであり、ＲＨは４から８の炭素原子を有する線形アルキル基である）の半フッ素化アルカンを含む液体ビヒクルとを特に含むことができる。血管新生阻害剤として作用する、または腫瘍細胞増殖を阻害可能な（抗増殖剤）抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質が特に関係がある。抗体断片は、抗原結合断片（Ｆａｂ）、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体、ミニボディまたはダイアボディであってよい。

例えば、本発明による組成物は、ベバシズマブおよび液体ビヒクルで構成されてよく、該液体ビヒクルは式ＲＦＲＨ（式中、ＲＦは４から１２の炭素原子を有する線形過フッ素化炭水化物セグメントであり、ＲＨは４から８の炭素原子を有する線形アルキル基である）の半フッ素化アルカンを含み、ベバシズマブは、分散液または懸濁液の形態で組成物中に組み込まれる。ベバシズマブの抗原結合断片もまた企図される。ベバシズマブ（商品名Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））は、ＶＥＧＦ−Ａ（血管内皮成長因子Ａ）を標的とし、血管新生阻害剤として作用するヒト化ネズミ抗体である。ベバシズマブを含む本発明の組成物は、疾患および病態、例えば、結腸直腸、肺、乳房、腎臓または脳（グリア芽腫）のがん、および眼の病態、例えば加齢黄斑変性（ＡＭＤ）の治療または予防に使用することができる。

さらに組成物は、パイプライン名Ｆｓｎ０５０３およびＦｓｎ１００６で公知の抗体を含むことができる。Ｆｓｎ１００６は、ヒトＥＧＦＲ（上皮成長因子受容体）リガンドアンフィレグリンおよびＨＢ−ＥＧＦ（ヘパリン結合性上皮成長因子）に結合可能な二重特異性抗体であり、細胞増殖を阻害するように作用できる。Ｆｓｎ１００６はヒト化ＩｇＧ１／カッパアイソタイプである。Ｆｓｎ１００６が細胞のＫ−ｒａｓ突然変異状態とは関係なく働き、したがって、セツキシマブなどの現在のＥＧＦＲ標的化特性を上回る有意な有利性を有することが実証されている。Ｆｓｎ０５０３もまた、ヒトカテプシンＳのタンパク質分解活性を標的とし、これを阻害するヒト化ＩｇＧ１／カッパ抗体である。Ｆｓｎ０５０３は、がんおよび他の血管新生関連疾患、特に細胞外マトリックスのカテプシンＳ媒介リモデリングが関与する疾患の治療に使用することができる。

またさらなる好ましい実施形態において、本発明による懸濁液または分散液組成物は、抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質、例えばモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体断片、抗体断片を含む融合タンパク質、抗体薬物複合体またはこれらの任意の組み合わせから選択されるＴＮＦ阻害剤と、式ＲＦＲＨ（式中、ＲＦは４から１２の炭素原子を有する線形過フッ素化炭水化物セグメントであり、ＲＨは４から８の炭素原子を有する線形アルキル基である）の半フッ素化アルカンを含む液体ビヒクルとを含むことができる。例示的ＴＮＦ阻害剤は、インフリキシマブ、エタネルセプト（ｅｔａｎｅｒｃｅｒｐｔ）およびセルトリズマブならびにこれらの後発生物製剤である。本発明の組成物は、これらのＴＮＦ阻害剤および液体ビヒクルを含むことができ、液体ビヒクルは、Ｆ４Ｈ５、Ｆ４Ｈ６、Ｆ４Ｈ８、Ｆ６Ｈ４、Ｆ６Ｈ６、Ｆ６Ｈ８およびＦ６Ｈ１０から選択される半フッ素化アルカンからなる。特に、これらの組成物は、胃腸系に影響を与える自己免疫疾患、例えばクローン病、潰瘍性大腸炎または関節および皮膚に影響を与える病態、例えば関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎および尋常性乾癬の療法に使用することができる。

さらに別の実施形態において、本発明の組成物は、抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質を、好ましくは少なくとも０．５ｍｇ／ｍＬ、例えば０．５−１０ｍｇ／ｍｌの濃度で含む。さらなる好ましい実施形態において、該濃度は少なくとも１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも２５ｍｇ／ｍＬまたは少なくとも３５ｍｇ／ｍＬである。

さらなる態様において、本発明は、抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質と、半フッ素化アルカンを含む液体ビヒクルとを混合するステップを含む、抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質を安定化する方法を提示する。半フッ素化アルカンは、式ＲＦＲＨ（式中、ＲＦは４から１２の炭素原子を有する線形過フッ素化炭水化物セグメントであり、ＲＨは４から８の炭素原子を有する線形アルキル基である）である。本方法によれば、抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質と、液体ビヒクルとを混合するステップは、懸濁液または分散液を形成するように実行される。抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質を安定化するこのような方法は、例えば疾患または病態の治療、予防または診断などにおいて医薬品として使用するための組成物の調製に、それを必要とする患者において有用であり得る。場合により、安定化のこのような方法はまた、抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質の調製、製造または合成に使用することができる。

本明細書において使用する場合、安定性という用語は、一定期間にわたる抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質の化学的または物理的完全性および／または生物活性の維持として定義される。抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質の安定化は、抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質を、その生物学的および／または治療的活性形態から不活性形態への分解または劣化の予防または遅延を含む。不安定性は、凝集、変性、断片化または化学的改変、例えば酸化、架橋、脱アミド化、および抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質を含む組成物に登場する他の成分との反応などの事象から起こり得る。

組成物中の抗原結合タンパク質またはポリペプチドの安定性は、当分野において公知の方法、限定するものではないが、ＥＬＩＳＡなどの免疫アッセイ技術による抗原結合活性などの生物学的活性の測定、または抗原結合タンパク質もしくはポリペプチドに対する純度または物理的／化学的変化を決定する他の技術、例えばサイズ排除クロマトグラフィー、キャピラリーゲル電気泳動、円偏光二色性または質量分析法を使用して特徴付けることができる。安定性は、初期時点、例えば組成物の製剤化または調製の時点（すなわち、この事例が懸濁液または分散液であり得る場合）におけるこれらのタイプの特徴付け方法を介して得られる測定と、後期時点、すなわち、所与の環境または条件において保存後に得られる測定との比較により決定される。

本発明者らにより、半フッ素化アルカンを含む液体ビヒクル中の抗原結合タンパク質が、２５℃において少なくとも６ヶ月間安定なままであることが見出されている。より詳細には、抗原結合タンパク質は、同じ期間にわたって４０℃の温度において保存した場合と同等に安定であった。すなわち、抗原結合タンパク質を含む組成物は、その初期の抗原結合活性と同じまたは同様の抗原結合活性を有効に保持した。

好ましい実施形態において、本発明の組成物は、これらの初期の抗原結合活性の少なくとも８５％または少なくとも９０％、例えば９０−９５％、またはさらに９５％を超えて、２５℃において、または室温において、または室温から４０℃の間の温度において３ヶ月の保存の間保持する。別の好ましい実施形態において、本発明の組成物は、これらの初期の抗原結合活性の少なくとも８５％または少なくとも９０％、例えば９０−９５％、またはさらに９５％を超えて、２５℃において、または室温（ＲＴ）において、またはＲＴから４０℃の間の温度において６ヶ月の保存の間保持する。さらに別の実施形態において、本発明の組成物は、これらの初期の抗原結合活性の少なくとも８５％を、ＲＴから４０℃の間で相対湿度５０−７５％の間において６ヶ月の保存の間保持する。他の実施形態において、保存の期間は、４−６週、６−１２週または３−６ヶ月または６−１２ヶ月であり得る。さらなる実施形態において、保存の間の湿度（ＲＨ）は、少なくとも４０％または少なくとも５０％または少なくとも６５％または少なくとも７５％であり得る。

すでに述べたように、抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質は、分散液または懸濁液を形成するように組成物中に組み込まれる。言い換えると、抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質は、半フッ素化アルカンを含む液体ビヒクル中に分散または懸濁される。抗原結合タンパク質が液体担体中に分散することにより懸濁液が形成されるかどうかは、例えば、抗原結合タンパク質の性質、担体中のその濃度および選択されたＳＦＡ（複数可）に依存する。

本明細書において使用する場合、懸濁液は、ある種の分散液、すなわち、少なくとも１つの連続（またはコヒーレント）相および連続相中に分散された少なくとも１つの不連続（または内）相を有する系として定義することができる。懸濁液において、分散相は固体状態である。本発明の実行に有用な懸濁液は、少なくとも生理学的温度において液体であり、これは連続相が液体であることを意味する。通常、懸濁液は室温においても液体である。懸濁液の範囲を超えて、分散液という用語は、抗原結合タンパク質およびポリペプチドが液体相中に細かく分散されるコロイド系を含むと理解される。いくつかの実施形態において、抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質はまた、少なくとも部分的に溶媒和される。

抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質の安定化された懸濁液または分散液は、抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質と、半フッ素化アルカンを含む液体ビヒクルとを混合するステップを含む方法を介して調製される。得られた懸濁液または分散液の安定性は、限定するものではないが、例えば懸濁粒子の再分散性、粒径分布および継時的な粒径の成長を含むさまざまな物理的属性の、当分野において公知の方法を使用した測定により特徴付けることができる。

特定の一実施形態において、組成物は、抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質と、１またはそれ以上のＳＦＡとだけを含む、すなわち組成物は、抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質と、１またはそれ以上の上で定義されたＳＦＡとからなる。別の好ましい実施形態において、抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質と、１またはそれ以上のＳＦＡとを含む組成物は、有効または実質的に水を含まない、すなわち組成物は、他の固体もしくは液体成分または抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質それ自体を介して導入された残存量の水をおそらく除き、水を含まない。他の事例において、抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質と、半フッ素化アルカンを含む液体ビヒクルとを含む懸濁液または分散液組成物は水を含まないものであり得る。

先行技術において公知のいくつかの他の懸濁液または分散液とは対照的に、本発明の製剤は、これらの物理的安定化のために界面活性剤を全く必要としないか、または少量の界面活性剤だけを必要とする。界面活性剤は、特に、皮下もしくは筋肉内注射により、または点眼により投与した場合、刺激および局所毒性の大きな可能性を有するので、これは有意な有利性である。好ましい実施形態の１つによれば、本発明の組成物は、界面活性剤を実質的に含まない。さらなる実施形態において、複数の界面活性剤が組み込まれる場合、１またはそれ以上の界面活性剤の合計量は、約１０ｗｔ％以下、特に、それぞれ約５ｗｔ％以下または好ましくは約２ｗｔ％以下である。さらなる好ましい実施形態において、この量は、それぞれ約１ｗｔ％以下または約０．５ｗｔ％以下である。この文脈において、本明細書に記載のＳＦＡは、異なる親油性程度により特徴付けられるフッ素化および非フッ素化アルキル（またはアルキレン）基を含むこれらの化学構造のため、いくらかの両親媒性特性を保有するが、界面活性剤の範囲内にあると理解されない。

存在しないか、または少量だけ存在する界面活性剤は、さまざまなタイプの医薬組成物に賦形剤として一般的に使用される非イオン性、陽イオン性、陰イオン性および双性イオン性界面活性剤、例えば湿潤剤、乳化剤、分散剤、可溶化剤などを含む。潜在的に有用と思われる界面活性剤の例としては、チロキサポール、ポロキサマー、例えばＰｌｕｒｏｎｉｃＦ６８ＬＦまたはＬｕｔｒｏｌＦ６８、ＰｌｕｒｏｎｉｃＬ−Ｇ２ＬＦおよびＰｌｕｒｏｎｉｃＬ６２Ｄ、ポリソルベート、例えばポリソルベート２０およびポリソルベート８０、ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体、ソルビタンエステル、ポリオキシステアレート、レシチン、精製または合成リン脂質ならびにこれらの２以上の混合物が挙げられる。

本発明の組成物は、例えば粘度などの液体ビヒクルの特性を改変するために、場合により非フッ素化有機液体を含んでもよい。このような他の液体は、グリセリド油、液体ワックスおよび液体パラフィンもしくは高度の生体適合性を示す有機溶媒または複数の液体賦形剤の混合物から選択される油であってよい。

１またはそれ以上のＳＦＡと組み合わせて使用できる、潜在的に有用な油性賦形剤の例としては、トリグリセリド油（すなわち、ダイズ油、オリーブ油、ゴマ油、綿実油、ヒマシ油、スイートアーモンド油）、鉱物油（すなわち、ワセリンおよび液体パラフィン）、中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）、油性脂肪酸、イソプロピルミリステート、油性脂肪アルコール、ソルビトールおよび脂肪酸のエステル、油性スクロースエステルまたは眼に生理学的に忍容性である任意の他の油性物質が挙げられる。

潜在的に有用な有機溶媒の例としては、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールおよびエタノールが挙げられる。共溶媒の濃度は、ＳＦＡまたはＳＦＡ混合物の濃度に対して低いことが好ましい。エタノールなどの有機溶媒が使用される場合、およそ５ｗｔ％のレベルより低く保つことが推奨され得る。より好ましくは、エタノールの含有率は、約０．１から約２ｗｔ％、最も好ましくは約１ｗｔ％以下である。

組成物は、当然のことながらさらなる医薬品賦形剤を必要に応じて、または有用に含んでよい。潜在的に有用な賦形剤としては、酸、塩基、抗酸化剤、安定剤、相乗剤、着色剤、増粘剤、および必要であれば特定の場合において防腐剤が挙げられる。しかし、概して本発明は、微生物学的に安定な非水性組成物の製剤化の手段を提供する。これは、ＳＦＡが普通は微生物汚染が起こりにくいという事実のためである。したがって、多用途容器に充填される防腐剤非含有組成物の製剤化が可能である。防腐剤非含有組成物は、多くの患者により忍容性であり、最終製品のコスト低下が可能である。

本発明の液体懸濁液は、従来の方法により調製することができる。原理上は、活性成分を含む固体粒子を、ＳＦＡを含む液体ビヒクルに分散させることができる。または、粒子を、ＳＦＡ系ビヒクルに対して制御された条件下で、活性成分（および場合により１またはそれ以上の固体賦形剤）の有機溶液を通常加えることによってその場に沈殿させることができる。

固体粒子は、抗原結合タンパク質または粒子の溶液の凍結乾燥またはスプレードライにより調製することができる。該溶液は水性であっても、または非水性であってもよく、有用または必要な医薬品賦形剤をさらに含んでもよい。

分散相の粒径は、粒子を液体ビヒクルと組み合わせる前または後に調整することもできる。好ましい実施形態の１つにおいて、適切に選択された粒径をすでに有する活性成分の粒子が提供される。このような選択された粒径を有する粉末は、結晶工学による個別の化合物の合成から直接得ることができ、またはボールミル、ハンマーミル、ローラーミル、コロイドミル、ジェットミルなどの標準的機器を使用する従来の粉砕または製粉方法により合成後に得ることができる。懸濁液の調製後に粒径を縮小すべき場合、超音波処理およびさまざまなタイプのホモジナイザー、例えばコロイドミルまたは高圧ホモジナイザーが使用できる。

本発明は、組成物を、好ましくは抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質と液体ビヒクルとを含み、液体ビヒクルが半フッ素化アルカンを含む懸濁液または分散液の形態で患者に投与するステップを含む、疾患または病態を治療、予防または診断する方法を、それを必要とする患者においてさらに提供する。本発明による懸濁液の優れた物理的特性は、これらの組成物を患者の眼、耳、鼻または肺への局所投与、または注射による非経口投与に特に有用にする。例えば、本発明の組成物は、局所適用または注射により患者の眼に投与可能である。注射の好ましい様式は、経皮、皮下、筋肉内および局所領域注射が挙げられる。最も好ましくは、皮下および筋肉内経路の投与である。

図１は、Ｆ６Ｈ８中の抗体の結合活性を示す。図２は、ベバシズマブのＦ４Ｈ５およびＦ６Ｈ８懸濁液における熱変性に対する安定性を示す。図３は、Ｆｓｎ１００６のＦ４Ｈ５およびＦ６Ｈ８懸濁液における熱変性に対する安定性を示す。図４は、Ｆｓｎ０５０３のＦ４Ｈ５およびＦ６Ｈ８懸濁液における熱変性に対する安定性を示す。

（実施例１）
抗ＥＣＳＣＲ（内皮細胞特異的走化性制御因子（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌ−ｓｐｅｃｉｆｉｃｃｈｅｍｏｔａｘｉｓｒｅｇｕｌａｔｏｒ）モノクローナル抗体（クローンｉｄ１３Ｇ１１１Ａ３１Ａ７、内皮マーカーＥＣＳＣＲに結合するハイブリドーマ細胞から発現されたネズミＩｇＧ／ｋ抗体）のＦ６Ｈ８中で２５℃および４０℃における安定性を、６ヶ月にわたって研究した。

凍結乾燥された０．２５ｍｇの抗ＥＣＳＣＲモノクローナル抗体（元はＰＢＳバッファー中で−８０℃において保存された）の試料を、Ｆ６Ｈ８中で１ｍｇ／ｍＬの濃度に再構成した。再構成された試料を、クリンプガラスバイアル中で２５℃／６０％ＲＨおよび４０℃／７５％ＲＨにおいて保存した。これらの試料の結合活性を、保存３ヶ月後および６ヶ月後に決定した。

第１の対照として機能するために、凍結乾燥抗体の他の試料を、−８０℃において凍結乾燥形態で保存した。これらを分析の直前にＰＢＳ中で再構成した。第２の対照は、凍結乾燥されていないが、４℃において冷蔵下で維持されたＰＢＳ中の抗体の試料からなった。

抗体試料のＥＣＳＣＲ抗原に対する結合活性を、ＥＬＩＳＡにより以下のプロトコルを使用して決定した：
ＮｕｎｃＭａｘｉＳｏｒｐ（商標）平底Ｅｌｉｓａプレートを、ＥＣＳＣＲ抗原および無関係な陰性抗原でコーティングすることによって調製した。抗原をコーティングバッファーで１μｇ／ｍＬの濃度に希釈し、プレートと共に４℃において一晩インキュベートした。このプレートをその後２００μＬの３％のブロッキング溶液でブロックし、ＲＴにおいてシェーカー上で１−２時間インキュベートし、次いでＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０溶液で３回洗浄し、吸い取り乾燥させた（ｂｌｏｔｔｅｄｄｒｙ）。抗体試料をＰＢＳで１μｇ／ｍＬに希釈した。１００ｎｇまたは１０ｎｇの各希釈試料を、ＥＣＳＣＲ抗原でコーティングされたウェルおよび陰性対照抗原でコーティングされたウェルに加えた。プレートをシェーカー上でＲＴにおいて１時間インキュベートし、その後ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０で洗浄して、吸い取り乾燥した。抗体のアリコートを、ＰＢＳ中１：５０００希釈のヤギ抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ二次抗体コンジュゲート（Ｂｉｏｒａｄ，ＣａｔａｌｏｇｕｅＮｒ．１７０−６５１６）でプローブした。プレートをシェーカー上でＲＴにおいて１時間インキュベートし、次いでＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０溶液で３回洗浄し、吸い取り乾燥した。プレートを３７℃において１０分間、１００μＬのＴＭＢ（３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン）と一緒にインキュベートし、次いで５０μＬ／ウェルの１ＭＨＣｌを加えた。吸光度を、４５０ｎｍにおいて分光光度計により測定した。

再構成の初期時点に決定された結合活性と対照試料との比較により、２５℃において保存されても、またはより高温の４０℃において保存されたとしても、Ｆ６Ｈ８中の抗体の（３つの試料の平均から決定された）結合活性が６ヶ月間にわたる保存後も維持されることが示される（図１）。結合活性は、−８０℃において保存された凍結乾燥抗ＥＣＳＣＲモノクローナル抗体試料（対照１、図１）および４℃においてＰＢＳ中で保存された、凍結乾燥されたことがない試料（対照２、図１）に関して観察された結合活性と同等である。

（実施例２）
ベバシズマブ、Ｆｓｎ１００６およびＦｓｎ０５０３の安定性を、２５℃、５０℃および７０℃において４週の期間にわたって研究した。

凍結乾燥プロトコル：上記の抗体それぞれのストック溶液を得た；Ｆｓｎ１００６およびＦｓｎ０５０３はＰＢＳ中の溶液、ベバシズマブ（商品名Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））はその市販の保存バッファー中。８０ｍｇのベバシズマブの等価重量を＞７０００ＭＷＣＯの透析チューブに移し、３×２Ｌ体積のＰＢＳに対して７２時間透析した。抗体溶液をＰＢＳで０．５ｍｇ／ｍｌに希釈して、５００μｌの各溶液のアリコートを、凍結乾燥用に個別の５ｍｌの琥珀色のガラス医薬品グレードのバイアルに取った。凍結乾燥は４８時間のサイクルにわたって実施した。

凍結乾燥抗体の再懸濁液：凍結乾燥抗体を、Ｆ４Ｈ５、Ｆ６Ｈ８、Ｆ６Ｈ８中５０体積％のＦ４Ｈ５、ＰＢＳ（１３７ｍＭＮａＣｌ、２．７ｍＭＫＣｌ、１０ｍＭＮａ_２ＨＰＯ_４、１．８ｍＭＫＨ_２ＰＯ_４、ｐＨ＝７．４）に０．５ｍｇ／ｍＬの濃度で、慎重にボルテックス混合しながら懸濁した。ＰＢＳにおける凍結乾燥抗体の再懸濁は溶液を形成するが、一方、半フッ素化アルカンとは懸濁液を形成した。得られた懸濁液および溶液を、２５℃および５０℃において４週間（２８日）、琥珀色のガラスバイアルにおいて保存した。２３日後、５０℃の試料を、７０℃条件に供した。

抗体試料の結合活性を、ＥＬＩＳＡ試験によりｔ＝０（再懸濁液直後）、ｔ＝２週、およびｔ＝４週に決定した。対照として、再懸濁されたことがない凍結乾燥抗体試料（−８０℃において保存）および凍結乾燥されたことがないＰＢＳ中抗体溶液（４℃において保存）を使用した。

ＥＬＩＳＡプロトコル：各抗体のＥＬＩＳＡ試験のために、ＮｕｎｃＭａｘｉｓｏｒｐ９６ウェルプレートを、１００ｎｇ／ウェルの１００μｌの０．２Ｍの炭酸バッファー、ｐＨ９．５中の適切な抗原を加え、１時間、３７℃においてインキュベートすることによって標的抗原でコーティングした。０．１％ｔｗｅｅｎ２０（ＰＢＳ−Ｔ）含有ＰＢＳで洗浄後、プレートに２００μｌのＰＢＳ中４％ミルク粉末を加え、室温において２時間、シェーカー上でインキュベートすることによってブロックした。さらに洗浄後、抗体試料を適用した。１ｍｌの×０．５ＰＢＳを各非水性バイアルに加えた。抗体を、５分間穏やかに揺り動かすことによって溶液中に抽出した。１μｌの水層を、その後９９９μｌのＰＢＳを含有するバイアルに移した（名目上の値が５０ｎｇ／ウェルになるように）。１００μｌの各試料バイアルを、その後１００μｌで６連に播種した。このプレートを一晩、４℃においてインキュベートした。洗浄後、二次抗体（ヤギ抗ヒトＨＲＰコンジュゲート）をＰＢＳ中１：６０，０００希釈で適用し、１００μｌを各ウェルに加え、プレートを１時間室温において振とうしながらインキュベートした。プレートを、その後３体積のＰＢＳ−Ｔで洗浄し、次いで２体積のＰＢＳで洗浄した。１００μｌのＴＭＢ溶液をその後適用し、プレートを１０分間、３７℃においてインキュベートした。反応を、５０μｌの１ＭＨＣｌを加えることによって停止させた。吸光度λ＝４５０ｎｍにおいて各ウェルを読み取った。

表１ベバシズマブ活性（平均ＯＤ±２ＳＤ、４５０ｎｍにおいて）
表２Ｆｓｎ１００６活性（平均ＯＤ±２ＳＤ、４５０ｎｍにおいて）
表３Ｆｓｎ０５０３活性（平均ＯＤ±２ＳＤ、４５０ｎｍにおいて）

Ｆ４Ｈ５、Ｆ６Ｈ８およびＦ６Ｈ８中５０体積％Ｆ４Ｈ５において懸濁液として保存されたベバシズマブ、Ｆｓｎ１００６およびＦｓｎ０５０３の活性は、４週間の間、２５℃および５０℃の試料の最後５日間の保存温度７０℃への上昇を含む５０℃の両方において実質的に一貫していた。対照的に、ＰＢＳバッファー中のこれらの抗体の溶液により実証された結合活性は、保存温度とは無関係に、４週間の終わりに有意に劣化した。

（実施例３）
ＳＦＡおよびＰＢＳバッファー中で５０℃から８０℃の間の温度において保存されたベバシズマブ、Ｆｓｎ１００６およびＦｓｎ０５０３の結合活性を検査した。

凍結乾燥抗体のベバシズマブ、Ｆｓｎ１００６およびＦｓｎ０５０３（上記の実施例２のように調製）を、Ｆ４Ｈ５、Ｆ６Ｈ８およびＰＢＳに濃度０．５ｍｇ／ｍｌで慎重にボルテックス混合しながら再懸濁した。これらの凍結乾燥抗体のＰＢＳでの再懸濁液は溶液を得、一方ＳＦＡでは懸濁液を形成した。

懸濁液／溶液試料を、それぞれ５０℃、５５℃、６０℃、６５℃、７０℃、７５℃および８０℃の温度で２時間保持し、その後実施例２に記載のＰＢＳバッファー抽出およびＥＬＩＳＡ法を使用する活性アッセイの前に１０℃に冷却した。各実験は３回実施した。４０℃で熱した試料は、対照として使用した。

ベバシズマブ（図２）、Ｆｓｎ１００６（図３）およびＦｓｎ０５０３（図４）のＦ４Ｈ５およびＦ６Ｈ８中懸濁液が、水性バッファー中の試料と比較して熱変性に対して有意な安定性を実証したことが見出された。結合活性は、これらの半フッ素化アルカンで製剤化された抗体に関して５０℃から８０℃の間で適正に一定なままであった。対照的に、水性ＰＢＳバッファー中で保存されたこれらの抗体の活性は、６０℃を超える温度においてはっきりと劣化した。

（実施例４）
インフリキシマブ（ヒト定常領域とネズミ可変領域とのキメラモノクローナル抗体、分子量１４９ｋＤａ）、融合タンパク質のエタネルセプト（ＩｇＧ１のＦｃ部分と融合された、７５ｋＤａのＴＮＦＲ（腫瘍壊死因子受容体）のリガンド結合部分を含む、分子量１５０ｋＤａの組換えヒトタンパク質）およびセルトリズマブ（およそ４０ｋＤａのポリエチレングリコールとコンジュゲートされた組換えＦａｂ’を含む、分子量９１ｋＤａの抗体断片）またはこれらの後発生物製剤から選択される抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質と、式ＲＦＲＨ（式中、ＲＦは４から１２の炭素原子を有する線形過フッ素化炭水化物セグメントであり、ＲＨは４から８の炭素を有する線形アルキル基である）（例えばＦ４Ｈ５およびＦ６Ｈ８）の半フッ素化アルカンを含む液体ビヒクルとを含む組成物の安定性を研究し、異なる媒体中の製剤と比較する。

抗体を凍結乾燥し、半フッ素化アルカンで再構成する。比較懸濁液／溶液もまた他の媒体で調製する。下記の安定性試験を、これらの製剤について実施する：
・ＩＣＨ条件下の保存安定性（２５および４０℃）。
・ＩＣＨ条件以外の温度安定性、すなわち熱変性
これらを実施例１−３に記載の方法と同様に実施する。これらの抗原結合ポリペプチドの安定性をアッセイするために適切な分析方法を実施する。抗体の活性および有効性をモニターするためのアッセイおよび上記の安定性実験の過程の間の凝集レベルをモニターするためのアッセイとしては、上記の実施例１−３のプロトコルと同様のＥＬＩＳＡなどの技術が挙げられる。

この分析方法を、抗体懸濁液から直接得られた試料を用いて、または分析技術に依存して、水性バッファー抽出試料に対して実施する。

抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質を含む組成物が、改善された安定性および凝集体の形成に対する傾向の低下を示すことが期待される。

Claims

抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質と、液体ビヒクルとを含み、前記液体ビヒクルが式
ＲＦＲＨ
（式中、ＲＦは４から１２の炭素原子を有する線形過フッ素化炭水化物セグメントであり、ＲＨは４から８の炭素原子を有する線形アルキル基である）の半フッ素化アルカンを含み、前記抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質が、分散液または懸濁液を形成するように組み込まれる、組成物。
前記抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質が、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体断片、抗体断片を含む融合タンパク質、抗体薬物複合体またはこれらの任意の組み合わせから選択される、請求項１に記載の組成物。
前記抗体断片が、抗原結合断片（Ｆａｂ）、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体、ミニボディまたはダイアボディである、請求項２に記載の組成物。
前記モノクローナル抗体がキメラ、ヒト化またはヒト抗体である、請求項２に記載の組成物。
前記抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質が、少なくとも９０ｋＤａの分子量を有する、請求項１から４のいずれかに記載の組成物。
前記半フッ素化アルカンが、Ｆ４Ｈ５、Ｆ４Ｈ６、Ｆ４Ｈ８、Ｆ６Ｈ４、Ｆ６Ｈ６、Ｆ６Ｈ８およびＦ６Ｈ１０から選択される、請求項１から５のいずれかに記載の組成物。
有効に水を含まない、請求項１から６のいずれかに記載の組成物。
前記組成物が、この初期の抗原結合活性の少なくとも８５％を、ＲＴから４０℃の間の温度において６ヶ月の保存の間保持する、請求項１から７のいずれかに記載の組成物。
前記抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質が少なくとも０．５ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項１から８のいずれかに記載の組成物。
医薬品としての使用のための、請求項１から９のいずれかに記載の組成物。
皮下、経皮、筋肉内または局所領域注射による非経口投与用の医薬品としての使用のための、請求項１０に記載の組成物。
抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質と、式
ＲＦＲＨ
（式中、ＲＦは４から１２の炭素原子を有する線形過フッ素化炭水化物セグメントであり、ＲＨは４から８の炭素原子を有する線形アルキル基である）の半フッ素化アルカンを含む液体ビヒクルとを、懸濁液または分散液を形成するように混合するステップを含む、抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質を安定化させる方法。
前記抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質が、初期の抗原結合活性の少なくとも８５％を、ＲＴから４０℃の間の温度において６ヶ月の保存の間保持する、請求項１２に記載の方法。
がんまたは自己免疫疾患の治療用の医薬品としての使用のための、請求項１０に記載の組成物。
前記抗原結合ポリペプチドまたはタンパク質が、血管新生阻害剤、抗増殖剤またはＴＮＦ阻害剤である、請求項１に記載の組成物。