JP5161882B2 - インフルエンザウイルスｈ５ｎ１を中和しうるヒト結合性分子およびその使用 - Google Patents

インフルエンザウイルスｈ５ｎ１を中和しうるヒト結合性分子およびその使用 Download PDF

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Description

(本発明の分野)
本発明は薬に関する。とりわけ、本発明は、インフルエンザウイルスH5N1による感染の診断、予防および/または処置に関する。
(本発明の背景)
インフルエンザウイルスは3種類、A、BおよびCから構成される。インフルエンザA型ウイルスは、ヒト、ウマ、海洋哺乳類、ブタ、フェレット、およびニワトリを含む、広範囲な鳥類および哺乳類に感染する。動物において、ほとんどのインフルエンザA型ウイルスは、気道(呼吸器)および腸管の軽度な局所感染を引き起こす。しかし、死亡数が100%に達することがある家禽において全身感染を引き起こすH5N1のような高度に病原性のインフルエンザA型株が存在する。インフルエンザA型に感染した動物は、インフルエンザウイルスのための保有体(リザーバー)として働くことが多く、および一定のサブタイプは種の壁を横切ってヒトに渡ることが示された。
インフルエンザA型ウイルスは、表面の糖タンパク質、すなわち、ウイルス付着および細胞遊離(cellular release)のために必要な血球凝集素(HA)およびノイラミニダーゼ(NA)をコード化する2つの遺伝子の抗原性領域における対立遺伝子変異に基づくサブタイプに分類することができる。他の主要なウイルスタンパク質には、核タンパク質、ヌクレオカプシド構造タンパク質、膜タンパク質(M1およびM2)、ポリメラーゼ(PA、PBおよびPB2)および非構造タンパク質(NS1およびNS2)が含まれる。
現在、HA(H1-H16)の16種のサブタイプ、および9種のNA(N1-N9)抗原性変異体が、インフルエンザA型ウイルスにおいて既知である。以前、3種のサブタイプだけがヒトにおいて広まる(circulate)循環することが知られていた(H1N1、H1N2およびH3N2)。しかし、近年では、トリインフルエンザA型の病原性H5N1サブタイプは、1997年および2003年に香港において立証されたように、種の壁を横切り、およびヒトに感染することが報告され、数人の患者の死を導いた。
ヒトにおいて、トリインフルエンザウイルスは、気道(呼吸器)、ならびに腸管、肝臓、脾臓、腎臓および他の器官の細胞に感染する。トリインフルエンザ感染の症状には、発熱、息切れおよび咳を含む呼吸困難性、リンパ球減少、下痢および血糖値調整の困難性が含まれる。季節性インフルエンザと対照的に、最も危険性がある群は、集団の大半(バルク)を形成する健康な成人である。一定のトリインフルエンザA型サブタイプ、特にH5N1の高病原性、およびヒトにまで乗り越えて感染するそれらの論証された能力により、有意な経済的および公衆衛生上の危険が、これらのウイルス株と関係して、真実の流行および大流行(パンデミック)の脅威を含めて存在する。脅威の規模は、5000万を超える人々が死んだ1918年のインフルエンザの大流行によって例示される。
現在、H5N1感染のための効果的なワクチンを利用できず、そのため、免疫グロブリンによる受動免疫療法が代わりの戦略でありえる。1918年の大流行の間の受動免疫の使用は、伝えられるところでは死亡の比率を半分にした。ヒトにおけるそれらの治療上の利益の点からみて、このようにして、結合性分子、なるべくならヒト結合性分子で、H5N1を中和しうるもののための必要性が存在する。本発明は、これらの結合性分子を提供し、およびそれらを、薬において、とりわけH5N1感染の診断、防止および/または処置のために用いることができることを示す。
図において、抗体CR6307(左部分)、CR6323(中間部分)およびCR5111(右部分)を用いる異なる血球凝集素(HAs)の免疫ブロット分析を提示する。組換え型HAsを還元性SDS-PAGE分析および免疫ブロット分析にかけた。レーン1で、H5N1TVのsHAを示し、レーン2では、組換え型HA、サブタイプH3(A/Vietnam(ベトナム)/1203/2004(H5N1))を示し、レーン3では、組換え型HA、サブタイプH3(A/Wyoming(ワイオミング州)/3/2003(H3N2))を示し、およびレーン4では、組換え型HA、サブタイプH1(A/New Caledonia(ニューカレドニア)/20/99(H1N1))を示す。HA0、HA1およびHA2が見出される位置もまた指し示す。 ある調査におけるマウスの群あたりの平均臨床スコアを示し(例12)、そこでは、インフルエンザH5N1ウイルスでの感染の1日前に、マウスが3種のヒトH5N1単クローン抗体CR6261、CR6323およびCR6325により、異なった用量において予防的に処置された。 感染後21日の間で、抗H5N1抗体によるマウスの予防上の処置の間の体重における変化を示す(例12)。 図2および3の調査における異なる群において生存するマウスの数を示す(例12)。 図2〜4の調査における抗H5N1抗体の与えられた用量に関しての死亡率を示す(例12)。 ある調査におけるマウスの群あたりの平均臨床スコアを示し(例13)、そこではマウスをH5N1インフルエンザウイルスの致死的用量により感染させ、および感染後異なる時点(4時間、1、2および3日)にてCR6261抗H5N1単クローン抗体、または非関連抗体CR2006を用いて処置した(感染後日1(日付1)にて投与した)。 図6において記載する研究の各群において生存する動物の数を示す。群1〜4のすべての動物は、群1における1種の動物を除いて、全体の調査で、感染後21日まで生き残った。群5のすべての動物は、日9で死亡した。 各群における図6について記載するような調査の間でのマウスの平均体重を示す。群5でのマウスの体重の測定を日9にて停止し、それはその群におけるすべてのマウスがその時までには死んだからである。群1〜4でのすべての残留するマウスは感染後の日21にて正常なレベルの体重に達したが、各群がどれくらい速く回復したかは処置の時間に依存した。 調査の各群において生存する動物の割合(パーセンテージ)を示し、そこでは、マウスにH1N1インフルエンザウイルスの致死的用量を感染させ、および異なる時点(感染に先立つ1日、感染後1、2および3日)にて、CR6261抗H5N1単クローン抗体、または非-関連性抗体CR57を用いて(感染後日1で投与(管理)して)処置した。 図9のために記載するような調査の間の各群でのマウスの平均体重を示す。群5におけるマウスの体重の測定は日9にて停止し、それはその群におけるすべてのマウスがその時までに死んだからである。群1〜4におけるすべての残りのマウスは感染後の日21にて正常なレベルの体重に達したが、各群がどれくらい速く回復したかは処置の時間に依存した。
(本発明の説明)
ここでは、本発明において用いるような用語の定義を以下に続ける。
“結合性分子”は、本明細書で用いるように、単クローン(性)(モノクローナル)抗体で、キメラのか、ヒト化された、またはヒトの単クローン抗体のようなものを含む無傷の免疫グロブリンに、または免疫グロブリンの断片であって、免疫グロブリン、例は、H5N1の結合相手(binding partner)に対する特異的結合性について無傷の免疫グロブリンと競合するものを備える抗原結合性および/または可変性のドメインに言及する。構造にかかわらず、抗原結合性断片は無傷の免疫グロブリンによって認識される同じ抗原と結合する。抗原結合性断片は、結合性分子のアミノ酸配列の少なくとも2、5、10、15、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、125、150、175、200、または250の近接するアミノ酸残基のアミノ酸配列を備えるペプチドまたはポリペプチドを含むことができる。
用語“結合性分子”には、本明細書で用いるように、この技術において既知のすべての免疫グロブリンのクラス(部類)およびサブクラス(下位クラス)が包含される。それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、結合性分子は、無傷の抗体の5つの主要なクラス中に分かつことができ、すなわち、IgA、IgD、IgE、IgG、およびIgMであり、およびこれらのいくつか(5または6種くらい)はさらに、サブクラス(アイソタイプ)で、例は、IgA1、IgA2、IgG1、IgG2、IgG3およびIgG4に分かれうる。
抗原結合性断片には、なかんずく、Fab、F(ab’)、F(ab’)2、Fv、dAb、Fd、相補性決定領域(CDR)断片、単鎖抗体(scFv)、二価の単鎖抗体、単鎖ファージ抗体、二重特異性抗体(diabodies)、三重特異性抗体(triabodies)、四重特異性抗体(tetrabodies)、(ポリ)ペプチドに対する特異的な抗原結合性を与えるのに十分な免疫グロブリンの断片を少なくとも含む(ポリ)ペプチド、その他が含まれる。上記の断片は、合成的に、または無傷の免疫グロブリンの酵素的な、または化学的な開裂によって生産されえ、またはそれらは組換えＤＮＡ技術による遺伝子的に改変され(genetically engineered)うる。生産の方法は、この技術においてよく知られ、および例えば、Antibodies(アンティボディーズ(抗体)）：A Laboratory Manual(ア・ラボラトリー・マニュアル)、E. Harlow(ハーロー)およびD、Lane(レーン)(1988年)、Cold Spring Harbor Laboratory(コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー)、 Cold Spring Harbor、New York(ニューヨーク州)において記述され、それを本明細書において参照することによって組込む。結合性分子またはその抗原結合性断片は、1種またはそれよりも多くの結合性部位を持ちうる。1種よりも多くの結合性部位がある場合、結合性部位は互いに対して同一でありえ、またはそれらは異なってもよい。
結合性分子はネイキッド(裸)または非複合型(unconjugated)の結合性分子でありうるが、しかしまた、免疫複合体の1部であることができる。ネイキッドまたは非複合型の結合性分子は、なかんずく、有毒な物質、放射性物質、リポソーム、酵素のような、作動体(エフェクター)構成成分(モエティ)またはタグ(標識)と共に複合化されず、動作可能に(operatively)連結されず、またはさもなければ、物理的にまたは機能的に関係することのない結合性分子に言及することを意図する。ネイキッドまたは非複合型の結合性分子が、安定化され、多量体を形成し、ヒト化され、または他の任意のやり方において、作動体の構成成分またはタグの付着によるものを除き、操作された結合性分子を排除しないことは理解される。したがって、すべての翻訳後に修飾されたネイキッドおよび非複合型の結合性分子はこれと共に含まれ、そこでは、修飾が、自然な結合性分子の生成性細胞の環境において、組換え型の結合性分子の生成性細胞によって作成され、および初期の結合性分子の調製の後に、人間の手によって導入されるものが包含される。もちろん、用語のネイキッドまたは非複合型の結合性分子は、体への投与後に作動体細胞および/または分子との機能的な関係を形成するために結合性分子の能力を排除せず、それはそのような相互作用の若干が生物学的効果を発揮するために必要だからである。関係した作動体の群またはタグの欠如は、したがって、インビトロ(試験管内)で、インビボ(生体内)でではなく、ネイキッドまたは非複合型の結合性分子に対する定義において適用される。
用語“生物学的試料”には、本明細書で用いるように、多様な試料の種類が包含され、それには、血液および生物学的な供給源の他の液状試料、生検標本または組織培養物のような固形組織試料、またはそこから導き出される細胞およびその子孫が含まれる。その用語にはまた、それらの調達後、何らかのやり方において操作された試料が含まれ、それは、試薬、一定の成分で、タンパク質またはポリヌクレオチドのようなもののための可溶化、または強化を用いる処置によってのようなものである。その用語には、任意の種から得られる種々種類の臨床学的試料が包含され、およびまた、培養物における細胞、細胞上清および細胞可溶化物が含まれる。
用語“相補性決定領域”(CDR)は、本明細書で用いるように、結合性分子で、免疫グロブリンのようなものの可変領域の範囲内の配列を意味し、それは通常、抗原結合性部位に対する大きな範囲に貢献し、その部位は、形状および抗原上で認識されるエピトープへの荷電分布において相補的である。CDR領域は、タンパク質またはタンパク質断片の線形エピトープ、不連続なエピトープ、または立体配置上の(conformational)エピトープに、いずれかがその自然な立体配置におけるタンパク質上に存在するように、または若干の場合に、変性されたような、例は、SDSにおける可溶化によるもののタンパク質上に存在するように、特異的であることができる。エピトープはまた、タンパク質の翻訳後修飾から構成されうる。
用語“欠失”は、本明細書で用いられるように、アミノ酸またはヌクレオチドの配列のいずかでもの変化を表し、そこでは、１種またはそれよりも多くのアミノ酸またはヌクレオチドの残基が、それぞれ、親(もと)の、自然に生じることが多い、分子と比較して不存在である。
用語“発現調節性(expression-regulating)核酸配列”は、本明細書で用いられるように、特定の宿主の有機体において作動可能に(operably)連結されたコード配列の発現に必要な、および/またはそれに作用するポリヌクレオチド配列に言及する。発現調節性核酸配列で、なかんずく、適切な転写開始、終結、プロモーター、エンハンサー配列；リプレッサーまたはアクチベーター配列；効率的なRNAプロセシングシグナル(処理信号)で、スプライシングおよびポリアデニル化の信号のようなもの；細胞質のmRNAを安定させる配列；翻訳効率を高める配列(例は、リボソーム結合性部位)；タンパク質安定性を高める配列；および望ましいとき、タンパク質分泌を高める配列のようなものは、一般に好まれる(of choice)宿主有機体において活性を示す任意の核酸配列であることができ、およびタンパク質をコード化する遺伝子から導き出すことができ、それは、宿主有機体に対して相同性または非相同性(異種性)のいずれかでもある。発現調節性配列の識別および採用は、この技術における熟練者にとって日常的なことである。
用語“機能上の変形(変異)”は、本明細書で用いられるように、結合性分子に言及し、それは、ヌクレオチドおよび/またはアミノ酸の配列を備え、それは親の結合性分子のヌクレオチドおよび/またはアミノ酸の配列に比較して1種またはそれよりも多くのヌクレオチドおよび/またはアミノ酸の配列によって変えられ、およびそれは、結合性パートナー、例は、H5N1への結合性について親の結合性分子と競合することがまだ可能である。言い換えると、親の結合性分子のアミノ酸および/またはヌクレオチドの配列における修飾は、ヌクレオチド配列によってコード化され、またはアミノ酸配列を含むことでの結合性分子の結合性の特徴にあまり影響を及ぼさず、または変えず、すなわち、結合性分子は、その標的を認識および結合することがまだ可能である。機能上の変形は、ヌクレオチドおよびアミノ酸の置換、付加および欠失を含む保存的な配列修飾を持ちうる。これらの修飾は、この技術において既知の標準的技術であって、部位特異的変異誘発およびランダム(無作為)PCR媒介変異誘発のようなものによって導入することができ、および自然な、ならびに非自然的なヌクレオチドおよびアミノ酸を備えうる。
保存的なアミノ酸置換には、アミノ酸残基が、似た構造または化学的特性を持つアミノ酸残基と置き換えられるものが含まれる。似た側鎖を持つアミノ酸残基の族(ファミリー)は、この技術において規定されている。これらの族には、塩基性側鎖(例は、リジン、アルギニン、ヒスチジン)、酸性側鎖(例は、アスパラギン酸、グルタミン酸)、非荷電性の極性側鎖(例は、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン)、非極性側鎖(例は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン)、ベータ分枝(beta-branched)側鎖(例は、スレオニン、バリン、イソロイシン)および芳香族側鎖(例は、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン)を有するアミノ酸が包含される。熟練した職人にとって、上記で用いるものとは別のアミノ酸残基の族の分類をもまた採用することができることは明らかである。さらにまた、変形は、非保存的なアミノ酸置換、例は、アミノ酸の、異なる構造的または化学的な特性を持つアミノ酸残基での置換えを持ちうる。似た軽微(マイナー)な変動(バリエーション)にはまた、アミノ酸の欠失または挿入、またはその双方ともを含みうる。どのアミノ酸残基が免疫学的活性を無くすることなく、置換され、挿入され、または欠失されうるかを定めることにおける手引き(ガイダンス)は、この技術においてよく知られるコンピュータープログラムを用いて見出しうる。
ヌクレオチド配列における変異は、ある座(ローカス)(点変異)にて作成される単一の改変(single alteration)で、転移(transition)または塩基転換(トランスバージョン)変異のようなものでありえ、または代わりに、多重(マルチプル)のヌクレオチドが、単一の座にて挿入、欠失または変化されうる。加えて、1種またはそれよりも多くの改変は、ヌクレオチド配列内の任意の数の座にて作成されうる。変異は、この技術において既知の任意の適切な方法によって実行しうる。
用語“宿主”は、本明細書で用いられるように、有機体または細胞に言及することを意図し、その中には、クローニングベクターまたは発現ベクターのようなベクターが導入されている。有機体または細胞は、原核生物または真核生物であることができる。この用語が特定の対象物の有機体または細胞にだけでなくそのような有機体または細胞の子孫にも同様に言及することを意図することを理解すべきである。一定の修飾が、変異または環境の影響のいずれかでものために、後世において生じうるので、そのような子孫は、実際、親の有機体または細胞と同一でなくてよいが、用語“宿主”の範囲内に、本明細書で用いられるようにまだ含まれている。
用語“ヒト”は、本明細書で規定されるように、結合性分子に適用されるとき、直接にヒトから導き出されるか、またはヒトの配列に基づくかのいずれかでもの分子に言及する。結合性分子がヒト配列から導き出され、またはそれに基づき、および次いで修飾されるとき、それはまだ、本明細書の全体を通して用いられるように、ヒトであると考えられる。言い換えると、用語のヒトは、結合性分子に適用されるとき、ヒトの生殖系列の(germline)免疫グロブリン配列から導き出される可変および定常の領域を持つか、またはヒトまたはヒトのリンパ球において生じる可変または定常の領域に基づく結合性分子、および若干の形態において修飾されるものが包含されることを意図する。このようにして、ヒト結合性分子には、ヒトの生殖系列の免疫グロブリン配列によってコード化されないアミノ酸残基が含まれえ、置換および/または欠失が包含される(例は、変異であり、例として、インビトロでの無作為または部位特異的変異誘発によって、またはインビボでの体細胞変異によって導入されるもの)。 “基づいて(系)”は、本明細書で用いるように、核酸配列が、鋳型から正確にコピー(複写)され、または軽微な変異を伴うもので、誤りを生じやすいPCR法によってのようなもの、または鋳型、または軽微な変異を伴うものに合成的に適合されうる状況に言及する。ヒト配列に基づく半合成分子はまた、本明細書で用いられるようにヒトのものと考えられる。
用語“挿入”はまた、用語“付加”として知られ、アミノ酸またはヌクレオチドの配列の変化を表わし(denotes)、親の配列と比較して、1種またはそれよりも多くのアミノ酸またはヌクレオチドの残基の付加を招く。
用語“分離(単離)された”は、本明細書で規定するように、結合性分子に適用されるとき、他のタンパク質またはポリペプチドを実質含まない、特に、異なる抗原特異性(antigenic specificities)を持つ他の結合性分子を含まず、およびまた、他の細胞性物質および/または化学物質を実質含まない結合性分子に言及する。例えば、結合性分子が組換え的に生産されるとき、それらは培養媒体を実質含まないのが好ましく、および結合性分子が化学合成によって生産されるとき、それらは化学的前駆体または他の化学物質を実質含まないのが好ましく、すなわち、それらはタンパク質の合成に関与する化学的前駆体または他の化学物質から分けられる。用語“分離された”は、本明細書で規定されるように、結合性分子をコード化する核酸分子に適用するとき、結合性分子をコード化するヌクレオチド配列が他のヌクレオチド配列、特にH5N1以外の結合性相手を結合する結合性分子をコード化するヌクレオチド配列を含まない核酸分子に言及することを意図する。さらに、用語“分離された”は、天然の(native)核酸分子をその自然な宿主において自然に付随する(accompany)他の細胞性成分、例は、リボソーム、ポリメラーゼまたはそれが自然に関係するゲノム配列から実質的に分けられる核酸分子に言及する。さらに、“分離された”核酸分子で、cDNAのようなものは、組換え技術によって生成されるときに、他の細胞性物質、または培養媒体を実質含まず、または化学的に合成されるとき、化学的前駆体または他の化学物質を実質含まないことができる。
用語“単クローン抗体”は、本明細書で用いられるように、単一の分子組成の抗体分子の調製に言及する。単クローン抗体は、特定のエピトープのための単一の結合特異性および親和性(アフィニティ)を表示する。したがって、用語“ヒト単クローン抗体”は、ヒトの生殖系列の免疫グロブリン配列から導き出され、または基づくか、または完全な合成配列から導き出される可変および定常の領域を持つ単一の結合特異性を表示する抗体に言及する。単クローン抗体を調製する方法は関連性がない。
用語“自然に生じる”は、本明細書で用いるように、ある対象体に適用するとき、対象体を自然において(in nature)見出すことができるという事実に言及する。例えば、ポリペプチドまたはポリヌクレオチドの配列は、有機体において存在し、自然において供給源から分離することができ、およびそれは実験室において人によって意図的に修飾されなかったものであり、自然に生じる。
用語“核酸分子”は、本発明において用いられるように、ヌクレオチドのポリマー(重合体)の形態に言及し、およびそれには、RNA、cDNA、ゲノムDNA、および合成の形態のセンスおよびアンチセンスの鎖、および上記のものの混合されたポリマーが含まれる。ヌクレオチドは、リボヌクレオチド、デオキシヌクレオチドまたはいずれかの種類のヌクレオチドの修飾された形態に言及する。その用語はまた、DNAの単鎖および二本鎖の形態を含む。加えて、ポリヌクレオチドは、自然に生じる、および/または非自然に生じるヌクレオチド連結によって一緒に連結される、いずれかまたは双方の自然に生じ、および修飾されるヌクレオチドを含みうる。核酸分子は、化学的または生化学的に修飾されえ、または非自然または誘導体化されたヌクレオチドの塩基を含みえ、そのことはこの技術における熟練の者によって容易に理解される。そのような修飾には、例えば、類似物を伴って自然に生じるヌクレオチドの１種またはそれよりも多くのラベル、メチル化、置換、ヌクレオチド間の修飾で、無電荷の連結（例は、メチルホスホン酸、ホスホトリエステル、ホスホロアミド酸、カルバミン酸、その他）、荷電連結（例は、ホスホロチオエート、ジチオリン酸、その他）、懸垂部分(pendent moieties、例は、ポリペプチド)、介入物(例は、アクリジン、ソラレン、その他)、キレート(化)剤、アルキル化剤、および修飾された連結(例は、アルファアノマー核酸、その他)が含まれる。上記用語はまた、単鎖、二本鎖、部分的に二重、三重、ヘアピン化(hairpinned)、環状およびパドロックドの立体配置を含む、任意のトポロジーの立体配置を含むことを意図する。また、合成分子も含まれ、それは、ポリヌクレオチドに、それらの水素結合および他の化学的相互作用を介して指定された配列に結合する能力においてまねる。そのような分子は、この技術において既知であり、および例えば、ペプチドの連結が分子の骨格においてリン酸塩の連結を代用するものを含む。核酸配列への言及には、特に明記しない限り、その補完物(complement)が包含される。このように、特定の配列を持つ核酸分子への言及は、その補完的な鎖がその補完的な配列と共に、包含されることを理解されなければならない。補完的な鎖はまた、例は、アンチセンス療法、ハイブリダイゼーションのプローブおよびPCRのプライマーのために、有用である。
用語“作動可能に連結された”は、通常、物理的に結合され、および互いの機能的な関係におけるものである2またはそれよりも多くの核酸配列の要素に言及する。例として、プロモーターは作動可能にコード配列に連結され、プロモーターが、コード配列の転写または発現を惹起または調整することが可能であるならば、その場合、そのコード配列はプロモーターの“調節下”であると理解されなければならない。
用語“製薬上許容可能な賦形剤(excipient)”によって、任意の不活性物質が意味され、それは、活性分子で、承諾可能なまたは便利な剤形を調製するための薬物、薬剤、または結合性分子のようなものと組み合わせる。“製薬上許容可能な賦形剤”は、受容体に対して採用される薬用量(dosage)および濃度にて無毒であり、および薬物、薬剤または結合性分子を備える調剤の他の原材料と適合性な賦形剤である。製薬上許容可能な賦形剤はこの技術において広く適用される。
用語“特異的な結合性”は、本明細書で用いられるように、結合性分子で、例は、抗体と、およびその結合性の相手で、例は、抗原との相互作用を参照して、その相互作用が特定の構造、例は、結合性の相手上の、抗原決定基またはエピトープの存在に依存することを意味する。言い換えると、抗体は、優先的に(選択的に、preferentially)、結合性の相手が他の分子または有機体の混合物において存在するときでも、結合性の相手を結合し、または認識する。結合性は、共有結合または非共有結合的な相互作用または双方の組合せによって媒介されうる。また、言い換えると、用語“特異的な結合性”は、抗原またはその断片と免疫特異的に(immunospecifically)結合し、および他の抗原と免疫特異的に結合しないことを意味する。抗原と免疫特異的に結合する結合性分子は、他のペプチドまたはポリペプチドに対して、例は、放射免疫アッセイ(RIA)、酵素結合抗体免疫測定法(ELISA)、BIACORE、またはこの技術で知られている他のアッセイによって定められるようなより一層低い親和性を伴って結合しうる。結合性分子またはその断片は、免疫特異的に抗原に対して結合し、関連する抗原と交差反応性であり得る。なるべくなら、免疫特異的に抗原に対して結合する結合性分子またはその断片は、他の抗原と交差反応しない。
“置換”は、本明細書で用いられるように、1種またはそれよりも多くのアミノ酸またはヌクレオチドの、異なるアミノ酸またはヌクレオチドによるそれぞれの置き換えを意味する。
用語“治療上効果的な量”は、本明細書で定められるように、結合性分子の量に言及し、それは、H5N1での感染から招かれる条件を防止し、寛解させ(ameliorating)および/または処置するために効果的である。
用語“処置”は、治療上の処置、ならびに治癒し、または停止させ(halt)または少なくとも病気の進行を遅らせる(retard)ための予防上の、または防止上の措置(measures)に言及する。処置が必要なものには、すでにH5N1での感染から得られる条件で苦しめられている(inflicted with)もの、ならびにH5N1での感染が防止されるものが含まれる。部分的に、または全体的にH5N1での感染から回復された対象体はまた、処置の必要があるかもしれない。防止には、H5N1の広がりを抑制し、または減少させ、またはH5N1での感染と関係する症状の1種またはそれよりも多くのその発生(onset)、または発達(development)または進行(progression)を抑制し、または減少させることが包含される。
用語“ベクター”は核酸分子を表し、それには、第2の核酸分子がそれを複製し、および若干の場合において発現することになる宿主中への導入のために挿入することができる。言い換えると、ベクターは、核酸を、それが連結されるものに輸送することが可能である。クローニング(クローン化)ならびに発現のベクターは、本明細書で用いられるように、“ベクター”によって考慮される。ベクターには、制限されないが、プラスミド、コスミド、細菌の人工染色体(BAC)および酵母の人工染色体(YAC)およびバクテリオファージまたは植物または動物(ヒトを含む)のウイルスから導き出したベクターが含まれる。ベクターは、提案された宿主によって認識される複製の起点、および発現ベクターの場合において、プロモーターおよび宿主によって認識される他の調整性領域を備える。第2の核酸分子を含むベクターは、細胞中に、形質転換、形質移入(トランスフェクション)によって、またはウイルス侵入機構を使用することによって導入される。一定のベクターは、宿主において自己複製が可能であり、その中に、それらが導入される(例は、細菌性の複製の起点を持つベクターは、細菌において複製することができる)。他のベクターは、宿主への導入に際し、宿主のゲノム中に統合され、およびそれによって宿主のゲノムに加えて複製される。
(発明の概略)
本発明は、インフルエンザウイルスH5N1へ特異的に結合し、およびH5N1に対する中和性活性を見せることが可能なヒト結合性分子を提供する。本発明はまた、インフルエンザのサブタイプ(亜種)の間で分け合われる血球凝集素(haemagglutinin)タンパク質におけるエピトープに結合する結合性分子を提供し、およびしたがって、H5-、H1-、H2-、H6-およびH9のインフルエンザに基づくサブタイプであり、H5N1、H1N1および他のインフルエンザの株で、HAタンパク質をこれらの特定のエピトープと共に含むもののようなものの間で交差反応する結合性分子に関する。本発明はまた、ヒト結合性分子の少なくとも結合性領域をコード化する核酸分子に関係がある。本発明はさらに、本発明に従うヒト結合性分子の使用を、H5N1感染を持つか、または発達させる危険性にて、対象体の予防および/または処置において提供する。その他に、本発明はH5N1の診断/検出において、本発明に従うヒト結合性分子の使用に関係がある。
(詳細な記載)
第1の局面では、本発明は、インフルエンザウイルスA、特にインフルエンザウイルスAサブタイプH5N1に特異的に結合することが可能な結合性分子を包含する。なるべくなら結合性分子はヒト結合性分子である。なるべくなら、本発明の結合性分子はインフルエンザウイルスAサブタイプH5N1に対する中和性活性を見せる。さらなる局面では、本発明の結合性分子は、異なるインフルエンザウイルスH5N1株に特異的に結合し、および/または中和性活性を持つことが可能である。これらの株は、クレイド(分岐群)1、クレイド2またはクレイド3のインフルエンザウイルスH5N1株の構成員(メンバー)でありうる。2004年および2005年のH5N1の大流行(outbreak)からのHA遺伝子の系統発生の分析は、HA遺伝子の2つの異なる系列、クレイド1、クレイド2またはクレイド3と称されるものを示した。これらのクレイドの各々においてウイルスは、アジアの非オーバーラップの地理的な領域において分布する。インドシナ半島からのH5N1型ウイルスはクレイド1内に密接に(tightly)クラスター形成する一方、いくつかの周囲の国からのH5N1分離株はクレイド1分離株から区別され、およびより一層多岐にわたる(divergent)クレイド2に属する。クレイド1のH5N1型ウイルスは、ベトナム、タイおよびカンボジアにおいてヒトおよびトリから分離され、しかし、ラオスおよびマレーシアのトリからだけは異なった。クレイド2のウイルスは、中国、インドネシア、日本、および韓国においてもっぱらトリだけから分離されるウイルスで見出された。トリおよびヒトから2003年および1997年に香港において分離されたウイルスは、クレイド1′(また、クレイド1において類別される)および3を、それぞれ作り上げた(WHO Global Influenza Program Surveillance Network(世界保健機構、グローバル・インフルエンザ・プログラム・サーベイランス・ネットワーク)(2005年)を参照)。クレイドの血球凝集素は、それらのアミノ酸配列において異なる。クレイド1の株の例には、制限されないが、A/香港/213/03、A/ベトナム/1194/04、A/ベトナム/1203/04およびA/タイ/1(KAN-1)/2004が含まれる。クレイド2の株の例には、制限されないが、A/インドネシア/5/05、A/バー頭のガチョウ(bar headed goose)/チンハイ(Qinghai)/1A/05、A/シチメンチョウ/トルコ/1/05およびA/アンホイ/1/05が含まれる。クレイド3の株には、制限されないが、A/香港/156/97およびA/ガチョウ/広東(Guangdong)/1/96が含まれる。他の株には、例は、WHO Global Influenza Program Surveillance Network、2005年において、およびhttp://www.who.int/csr/disease/avian_influenza/guidelines/recommendationvaccine.pdf上で見出すことができる。なるべくなら、本発明の結合性分子は、クレイド1、クレイド2およびクレイド3の株に特異的に結合し、およびそれらに対して中和性活性を持つことが可能である。本発明の結合性分子は、生存可能で、生きており、および/または感染性であるか、または不活性化/減弱化された(attenuated)形態にあるインフルエンザウイルスH5N1に特異的に結合することが可能でありうる。インフルエンザウイルスH5N1を不活性化し/減弱化させるための方法は、この技術においてよく知られており、およびそれには、制限されないが、ホルマリン、β-プロピオラクトン(BPL)、メルチオレート(merthiolate)、および/または紫外光での処置が含まれる。
本発明の結合性分子はまた、インフルエンザウイルスH5N1の1種またはそれよりも多くの断片で、なかんずく、サブタイプH5N1から導き出される1種またはそれよりも多くのタンパク質および/または(ポリ)ペプチドまたはH5N1の1種またはそれよりも多くの組換え的に生産されるタンパク質および／またはポリペプチドの調製物のようなものに結合することが可能でありうる。H5N1感染を処置および/または防止する方法のために、結合性分子は、H5N1の表面の接触可能な(surface accessible)タンパク質で、表面糖タンパク質、血球凝集素(HA)およびノイラミニダーゼ(NA)で、それらは、ウイルスの付着および細胞遊離のために必要であり、または膜タンパク質(M1およびM2)のようなものに特異的に結合することが可能であるのが好ましい。特定の具体例において、本発明の結合性分子は、H5N1の株のHA分子に特異的に結合することが可能である。それらは、HA分子のHA1および/またはHA2のサブユニットに特異的に結合することが可能でありうる。それらは、HA分子のHA1および/またはHA2のサブユニット上の、線形または構造的な、および/または立体配置上のエピトープに特異的に結合することが可能でありうる。HA分子は、ウイルスから精製されえ、または組換え的に生産されえ、および随意に使用前に分離しうる。代わりにHAは細胞の表面上に発現されうる。
診断上の目的のために、結合性分子はまた、H5N1の表面上に存在しないタンパク質で、核タンパク質、ヌクレオカプシド構造タンパク質、ポリメラーゼ(PA、PBおよびPB2)、および非構造的なタンパク質(NS1およびNS2)を含むものに特異的に結合することが可能でありうる。種々のH5N1の株のタンパク質のヌクレオチドおよび/またはアミノ酸配列は、GenBank(ジェンバンク)-データベース、NCBIインフルエンザウイルス配列データベース(Influenza Virus Sequence Database)、インフルエンザ配列データベース(Influenza Sequence Database、ISD)、EMBL-データベースおよび/または他のデータベースにおいて見出すことができる。そのような配列をそれぞれのデータベースにおいて見出すことは、熟練者の十分に手の届く範囲である。
別の具体例において、本発明の結合性分子は、上述のタンパク質および/またはポリペプチドの断片に特異的に結合することが可能であり、そこでは、断片が少なくとも本発明の結合性分子によって認識される抗原決定基を備える。本明細書で用いられるように、“抗原決定基”は、本発明の結合性分子に、検出可能な抗原結合性分子複合体を形成するのに十分に高い親和性を伴って結合することが可能なモイエティ(部分)である。本発明の結合性分子は、HA(また、本明細書で可溶性HA(sHA)と呼ぶ)の細胞外の１部分(パート)に特異的に結合することが可能でありえ、または可能でないかもしれない。
本発明の結合性分子は、多クローン抗体または単クローン抗体のような無傷の免疫グロブリン分子でありえ、または結合性分子は、抗原結合性断片であることができ、それらには、制限されないが、Fab、F(ab′)、F(ab′)2、Fv、dAb、Fd、相補性決定領域(CDR)断片、単鎖抗体(scFv)、二価単鎖抗体、単鎖ファージ抗体、二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体、および(ポリ)ペプチドが含まれ、それには、少なくとも、インフルエンザウイルスH5N1の株またはその断片への特異的抗原結合性を与えるのに十分である免疫グロブリンの断片が含まれる。好適例において、本発明の結合性分子はヒト単クローン抗体である。
本発明の結合性分子は、非分離の、または分離された形態において用いることができる。さらに、本発明の結合性分子は、単独で、または本発明の少なくとも1種の結合性分子(またはその変異または断片)を備える混合物において用いることができる。言い換えると、結合性分子は、組合せにおいて、例は、本発明のもの、その変形または断片の2つまたはそれよりも多くの結合性分子を備える製薬上の組成物として用いることができる。例えば、異なるが、補完的な活性を持つ結合性分子は、望ましい予防上、治療上または診断上の効果を達成するために、単一の治療において組み合わせることができ、しかし、代わりに、同一の活性を持つ結合性分子はまた、望ましい予防上、治療上または診断上の効果を達成するために、単一の治療に組み合わせることができる。随意に、混合物はさらに、少なくとも1種の他の治療上の薬剤を備える。なるべくなら、治療上の薬剤で、例は、M2抑制剤(インヒビター)(例は、アマンチジン(amantidine)、リマンタジン)および/またはノイラミニダーゼ抑制剤(例は、ザナミビル、オセルタミビル)のようなものは、インフルエンザウイルスH5N1感染の予防および/または治療に有用である。
典型的に、本発明に従う結合性分子は、それらの結合性の相手、即ち、インフルエンザウイルスH5N1またはその断片に、0.2×10-4M、1.0×10-5M、1.0×10-6M、1.0×10-7Mより低く、好ましくは1.0×10-8Mより低く、より一層好ましくは1.0×10-9Mより低く、さらに一層好ましくは1.0×10-10Mより低く、さらにより一層好ましくは1.0×10-11Mより低く、およびとりわけ、1.0×10-12Mより低い親和性定数(Kd-値)を伴って結合することができる。親和性定数は抗体アイソタイプのために変動することができる。例えば、IgMアイソタイプのための親和性結合は、少なくとも約1.0×10-7Mの結合親和性に言及する。親和性定数は、例として、表面のプラズモン共鳴を用い、例えば、BIACORE(バイアコア)システム(Pharmacia Biosensor AB(ファルマシア・バイオセンサーAB社)、Uppsala(ウプサラ)、スウェーデン国)を使用して、測定することができる。
本発明に従う結合性分子は、インフルエンザウイルスH5N1またはその断片に、例として、試料においてまたは懸濁物においてのような可溶性の形態において結合しえ、担体(キャリヤー)または基材、例は、マイクロタイタープレート、膜およびビーズ、その他に結合し、または付着するインフルエンザウイルスH5N1またはその断片に結合しうる。担体または基材は、ガラス、プラスチック(例は、ポリスチレン)、多糖類、ナイロン、ニトロセルロース、またはテフロン(商標)、その他で作成されうる。そのような支持体の表面は、固形または多孔体で、および任意の便利な形状でよい。さらに、結合性分子は、インフルエンザウイルスH5N1と、精製/分離され、または非精製の/非分離の形態において結合しうる。
本発明の結合性分子は中和活性を見せる。中和活性は、例として、本明細書で説明するようにして測定することができる。中和活性を測定する代わりのアッセイは、例として、WHO Manual on Animal Influenza Diagnosis and Surveillance, Geneva(動物インフルエンザ診断およびサーベイランスにおけるWHOマニュアル、ジュネーブ)、2005年、2002.5版に記載されている。
本発明は、分離されたヒト結合性分子に関し、それは、インフルエンザ血球凝集素タンパク質(HA)のHA2サブユニットにおけるエピトープを認識し、および結合することができ、前記結合性分子はH5サブタイプのHAを備えるインフルエンザウイルスに対して中和活性を持つことにおいて特徴づけられる。H5サブタイプのそのようなHAを含み、および汎発性の脅威(pandemic threats)を考慮した重要な株であるインフルエンザの株の例は、H5N1、H5N2、H5N8、およびH5N9である。少なくともH5N1インフルエンザの株を中和する結合分子が特に好まれる。なるべくなら、本発明に従う前記結合性分子は、前記HAタンパク質に結合するためのHAタンパク質のHA1サブユニットにおけるエピトープに依存しない。既知のネズミ抗体で、この技術で記述されたもの(C179)はまた、HA2ドメインにおいて同じエピトープに結合し、また、HAタンパク質のHA1ドメインにおけるエピトープへの結合に依存する。これは、それが抗体によってもはや認識されない脱出変異体(escape mutants)の可能性を増すので、不利である。また、本発明の多数の抗体(CR6307およびCR6323のようなもの)は、立体配置上のエピトープに依存せず、および還元された形態でさえH2Aエピトープを認識しない(ウェスタンブロットにおける使用のとき)。これはこの技術からの抗体に勝る利点であり、それは、立体配置上の変化がタンパク質の別の1部分での変異は何でもそれによってHAタンパク質において誘導されるとき、そのような立体配置上の変化が本発明の抗体をHA2エピトープに結びつけることをおそらく妨げず、一方で、立体配置に依存する抗体が、そのような変異が生じるときに、結合することがあまり良好にできないかもしれないからである。
別の好適例において、本発明に従う結合性分子はまた、H1サブタイプのHAを備えるインフルエンザウイルスに対する中和活性を持ち、およびなるべくなら、そこでは、前記結合性分子はまた、H2、H6および/またはH9のサブタイプのHAを備えるインフルエンザウイルスに対する中和活性持つ。本明細書において、本発明の結合性分子が、H5、H1、H2、H6およびH9のサブタイプにおいて存在するHA2エピトープで存在するエピトープと相互作用することが示され、および本発明の結合性分子が、このエピトープ分配(epitope sharing)のため、インフルエンザのサブタイプの間で交差中和することが示された。本発明の結合性分子が、H2Aドメインにおけるその特定の1部分への結合性に依存し(および別の−変異性の傾向(mutational prone)−HA1におけるエピトープに依存しないで)、インフルエンザウイルスのサブタイプの間を交差中和することができ、それは、それらがHA1内でのドメインへの結合性に依存すると思われないからであり、それは、抗原性のドリフトにより著しく変えられうると結論づけられる。熟練した者は、本明細書において開示したものに基づいて、今回、抗体が実際に異なるサブタイプからのHAタンパク質と交差反応するかどうか定め、およびまた、それらが異なるサブタイプのインフルエンザウイルスを、インビボで中和することが可能かどうか定めることができる。
本発明の別の好ましい局面では、本発明の結合性分子は、HA2サブユニットにおいてエピトープに結合し、それは、アミノ酸配列からなる群、すなわちGVTNKVNSIIDK(配列番号368)、GVTNKVNSIINK(配列番号369)、GVTNKENSIIDK(配列番号370)、GVTNKVNRIIDK(配列番号371)、GITNKVNSVIEK(配列番号372)、GITNKENSVIEK(配列番号373)、GITNKVNSIIDK(配列番号374)、およびKITSKVNNIVDK(配列番号375)から選ばれる。表13において示すデータから結論することができるように、本発明の一定の結合性分子、CR6261、CR6325およびCR6329は、H5N1において存在するGVTNKVNSIIDK(配列番号368)のエピトープに相互作用し、およびC179の結合性に影響するHA1においてTGLRNのエピトープにおける変異によって妨げられない。さらに、若干の結合性分子で、CR6307およびCR6323のようなものは、Okuno(オクノ)ら(1993年)において位置6でのバリン−>グルタミン酸の変異を伴って開示されるように、脱出変異体によってさえも妨げられない(GVTNKENSIIDK(配列番号370)によって実証される)。このエピトープは、HA2領域での延びたアルファ螺旋の1部分である。この推定上のエピトープ(putative epitope)における残基は、大部分の溶媒に曝されると予測され、全角(出願時は肉太体(ボールド体))で下線を引き、すなわちGVＴNKEＮSIＩDK(配列番号370)である。これらのアミノ酸は結合性分子に最も接触可能であり、およびこのようにしてエピトープの最も重要な領域を作成しうる。この概念(notion)と一致して、強調(ハイライト)されたアミノ酸は、表示するすべての配列において同一性(アイデンティティ)および位置を絶対的に(absolutly、absolutely)に保存される。この知識は、上記のような同じ配列(即ち、H3、H7およびBの株)を運ばないインフルエンザサブタイプにおける結合性エピトープを予測するのに用いることができた。
本発明に従う結合性分子は、なるべくなら、次のものからなる群、すなわち
a)配列番号1の重鎖CDR1領域、配列番号2の重鎖CDR2領域、および配列番号3の重鎖CDR3領域を備える結合性分子、
b)配列番号16の重鎖CDR1領域、配列番号17の重鎖CDR2領域、および配列番号18の重鎖CDR3領域を備える結合性分子、
c)配列番号1の重鎖CDR1領域、配列番号22の重鎖CDR2領域、および配列番号23の重鎖CDR3領域を備える結合性分子、
d)配列番号27の重鎖CDR1領域、配列番号28の重鎖CDR2領域、および配列番号29の重鎖CDR3領域を備える結合性分子、
e)配列番号39の重鎖CDR1領域、配列番号40の重鎖CDR2領域、および配列番号41の重鎖CDR3領域を備える結合性分子、
f)配列番号45の重鎖CDR1領域、配列番号46の重鎖CDR2領域、および配列番号47の重鎖CDR3領域を備える結合性分子、
g)配列番号1の重鎖CDR1領域、配列番号49の重鎖CDR2領域、および配列番号50の重鎖CDR3領域を備える結合性分子、
h)配列番号52の重鎖CDR1領域、配列番号53の重鎖CDR2領域、および配列番号54の重鎖CDR3領域を備える結合性分子、
i)配列番号262の重鎖CDR1領域、配列番号263の重鎖CDR2領域、および配列番号264の重鎖CDR3領域を備える結合性分子、
j)配列番号268の重鎖CDR1領域、配列番号269の重鎖CDR2領域、および配列番号270の重鎖CDR3領域を備える結合性分子、
k)配列番号274の重鎖CDR1領域、配列番号275の重鎖CDR2領域、および配列番号276の重鎖CDR3領域を備える結合性分子、
l)配列番号280の重鎖CDR1領域、配列番号281の重鎖CDR2領域、および配列番号282の重鎖CDR3領域を備える結合性分子、
m)配列番号286の重鎖CDR1領域、配列番号287の重鎖CDR2領域、および配列番号288の重鎖CDR3領域を備える結合性分子、
n)配列番号292の重鎖CDR1領域、配列番号293の重鎖CDR2領域、および配列番号294の重鎖CDR3領域を備える結合性分子、
o)配列番号304の重鎖CDR1領域、配列番号305の重鎖CDR2領域、および配列番号306の重鎖CDR3領域を備える結合性分子、および
p)配列番号310の重鎖CDR1領域、配列番号311の重鎖CDR2領域、および配列番号312の重鎖CDR3領域を備える結合性分子
より選ばれる。
好適例において、本発明に従う結合性分子は、薬としての使用のためのもので、およびなるべくなら、インフルエンザ感染の診断上、治療上および/または予防上の処置のためのものである。そのような使用の1種の局面では、前記インフルエンザ感染は、汎発性大流行と関係するインフルエンザウイルスによって起こり、または汎発性大流行に関係する可能性を持つ(国際公開(WO)第2007/045674号およびその表群を参照)。なるべくなら、インフルエンザウイルス株は、汎発性大流行と関係し、およびそこでは、これらの株によって起こる病気を、本発明の結合性分子によって処置することができ、その株は、H1N1、H5N1、H5N2、H5N8、H5N9、H2−に基づくウイルス、およびH9N2からなる群より選ばれる。
本発明はまた、本発明に従う結合性分子、および製薬上許容可能な賦形剤を備える製薬上の組成物に関する。
さらに別の具体例において、本発明は、インフルエンザウイルス感染の診断、予防、および/または処置のための薬の調製における、本発明に従う結合性分子の使用に関する。そのような感染は小ない人口(small population)において発生することがあるが、しかしまた、季節的流行において、または、更に悪いことに、何百万もの個体が危険にさらされる世界的な流行病(パンデミックス)において、世界中で拡がることもある。本発明は、そのような季節的流行ならびに潜在的な流行病を引き起こすインフルエンザ株の感染を中和することができる結合性分子を提供する。重要なことに、保護および処置は、今回、多重のインフルエンザ株に関して、本発明の結合性分子を用いて構想(envisioned)することができ、それは、異なるインフルエンザ株のHAタンパク質間で分かち合うエピトープの結合性のために、そのような株の間の交差−中和化が、今回、本発明の結合性分子を用いて可能であることが開示されたからである。これは、高度に有利であり、それは結合性分子が哺乳類を保護することができるからであり、それは、それらを感染の前、または後のいずれかでも管理(投与)するとき(本例において開示するようにし)、およびしたがってまた、感染がH1、H2、H5、H6またはH9に基づく株によって引き起こされるかどうか明らかでないとき(発生の初期段階)もそうである。医療従事者(Health workers)、軍隊ならびに一般的集団は、本発明の結合性分子を用いて、予防的に処置し、または感染により処置しうる。潜在的に、本発明の結合性分子を調製し、および莫大な蓄えにおいて貯蔵することができ、それは異なる汎発性の株に対する保護を提供するからであり、およびこれは将来に可能なインフルエンザの流行病の準備において有益である。
好適例において、本発明に従うヒト結合性分子は、次のものからなる群、すなわち
a)配列番号1のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR1領域、配列番号2のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR2領域、および配列番号3のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR3領域、配列番号4のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR1領域、配列番号5のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR2領域、および配列番号6のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR3領域を備えるヒト結合性分子、b)配列番号1のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR1領域、配列番号2のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR2領域、および配列番号3のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR3領域、配列番号7のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR1領域、配列番号8のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR2領域、および配列番号9のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR3領域を備えるヒト結合性分子、c)配列番号1のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR1領域、配列番号2のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR2領域、および配列番号3のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR3領域、配列番号10のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR1領域、配列番号11のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR2領域、および配列番号12のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR3領域を備えるヒト結合性分子、d)配列番号1のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR1領域、配列番号2のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR2領域、および配列番号3のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR3領域、配列番号13のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR1領域、配列番号14のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR2領域、および配列番号15のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR3領域を備えるヒト結合性分子、e)配列番号16のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR1領域、配列番号17のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR2領域、および配列番号18のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR3領域、配列番号19のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR1領域、配列番号20のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR2領域、および配列番号21のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR3領域を備えるヒト結合性分子、f)配列番号1のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR1領域、配列番号22のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR2領域、および配列番号23のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR3領域、配列番号24のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR1領域、配列番号25のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR2領域、および配列番号26のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR3領域を備えるヒト結合性分子、g)配列番号27のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR1領域、配列番号28のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR2領域、および配列番号29のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR3領域、配列番号30のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR1領域、配列番号31のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR2領域、および配列番号32のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR3領域を備えるヒト結合性分子、h)配列番号1のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR1領域、配列番号2のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR2領域、および配列番号3のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR3領域、配列番号33のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR1領域、配列番号34のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR2領域、および配列番号35のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR3領域を備えるヒト結合性分子、i)配列番号1のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR1領域、配列番号2のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR2領域、および配列番号3のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR3領域、配列番号36のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR1領域、配列番号37のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR2領域、および配列番号38のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR3領域を備えるヒト結合性分子、j)配列番号39のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR1領域、配列番号40のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR2領域、および配列番号41のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR3領域、配列番号42のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR1領域、配列番号43のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR2領域、および配列番号44のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR3領域を備えるヒト結合性分子、k)配列番号45のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR1領域、配列番号46のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR2領域、および配列番号47のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR3領域、配列番号7のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR1領域、配列番号8のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR2領域、および配列番号48のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR3領域を備えるヒト結合性分子、l)配列番号1のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR1領域、配列番号49のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR2領域、および配列番号50のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR3領域、配列番号33のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR1領域、配列番号34のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR2領域、および配列番号51のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR3領域を備えるヒト結合性分子、m)配列番号52のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR1領域、配列番号53のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR2領域、および配列番号54のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR3領域、配列番号55のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR1領域、配列番号56のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR2領域、および配列番号57のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR3領域を備えるヒト結合性分子、n)配列番号262のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR1領域、配列番号263のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR2領域、および配列番号264のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR3領域、配列番号265のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR1領域、配列番号266のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR2領域、および配列番号267のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR3領域を備えるヒト結合性分子、o)配列番号268のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR1領域、配列番号269のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR2領域、および配列番号270のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR3領域、配列番号271のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR1領域、配列番号272のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR2領域、および配列番号273のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR3領域を備えるヒト結合性分子、p)配列番号274のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR1領域、配列番号275のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR2領域、および配列番号276のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR3領域、配列番号277のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR1領域、配列番号278のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR2領域、および配列番号279のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR3領域を備えるヒト結合性分子、q)配列番号280のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR1領域、配列番号281のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR2領域、および配列番号282のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR3領域、配列番号283のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR1領域、配列番号284のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR2領域、および配列番号285のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR3領域を備えるヒト結合性分子、r)配列番号286のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR1領域、配列番号287のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR2領域、および配列番号288のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR3領域、配列番号289のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR1領域、配列番号290のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR
2領域、および配列番号291のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR3領域を備えるヒト結合性分子、s)配列番号292のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR1領域、配列番号293のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR2領域、および配列番号294のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR3領域、配列番号295のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR1領域、配列番号296のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR2領域、および配列番号297のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR3領域を備えるヒト結合性分子、t)配列番号304のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR1領域、配列番号305のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR2領域、および配列番号306のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR3領域、配列番号307のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR1領域、配列番号308のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR2領域、および配列番号309のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR3領域を備えるヒト結合性分子、u)配列番号310のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR1領域、配列番号311のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR2領域、および配列番号312のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR3領域、配列番号313のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR1領域、配列番号314のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR2領域、および配列番号315のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR3領域を備えるヒト結合性分子、v)配列番号238のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR1領域、配列番号239のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR2領域、および配列番号240のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR3領域、配列番号241のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR1領域、配列番号242のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR2領域、および配列番号243のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR3領域を備えるヒト結合性分子、w)配列番号244のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR1領域、配列番号245のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR2領域、および配列番号246のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR3領域、配列番号247のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR1領域、配列番号248のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR2領域、および配列番号249のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR3領域を備えるヒト結合性分子、x)配列番号250のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR1領域、配列番号251のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR2領域、および配列番号252のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR3領
域、配列番号253のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR1領域、配列番号254のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR2領域、および配列番号255のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR3領域を備えるヒト結合性分子、y)配列番号256のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR1領域、配列番号257のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR2領域、および配列番号258のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR3領域、配列番号259のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR1領域、配列番号260のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR2領域、および配列番号261のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR3領域を備えるヒト結合性分子、およびz)配列番号298のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR1領域、配列番号299のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR2領域、および配列番号300のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR3領域、配列番号301のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR1領域、配列番号302のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR2領域、および配列番号303のアミノ酸配列を持つ軽鎖CDR3領域を備えるヒト結合性分子より選ばれる。
特定の具体例において、本発明の結合性分子は、配列番号1のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR1領域、配列番号2のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR2領域、および配列番号3のアミノ酸配列を持つ重鎖CDR3領域を備える。本発明の結合性分子のCDR領域は、表7において示。CDR領域はKabat(カバット)ら(1991年)に従いSequences of Proteins of Immunological Interest(免疫学的に興味あるタンパク質の配列)に記述されている。本発明の具体例において、結合性分子は、本明細書に開示するように、2、3、4、5またはすべての6つのCDR領域を備えうる。好ましくは、本発明に従う結合性分子は、本明細書に開示するCDRsの少なくとも2つを備える。
具体例において、本発明の結合性分子は、VH生殖系列VH1-69を備える(Tomlinson(トムリンソン)IM、Williams(ウィリアムズ)SC、Ignatovitch(イグナトビッチ) O、Corbett(コーベット)SJ、Winter(ウィンター)G．の V-BASE Sequence Directory(Vベース配列要覧)。Cambridge United Kingdom(ケンブリッジ英国): MRC Centre for Protein Engineering(MRCタンパク質工学センター) (1997年)参照)。さらに別の具体例において、本発明に従う結合性分子は、重鎖を備え、それは、次の、すなわち配列番号59、配列番号61、配列番号63、配列番号65、配列番号67、配列番号69、配列番号71、配列番号73、配列番号75、配列番号77、配列番号79、配列番号81、配列番号83、配列番号317、配列番号321、配列番号325、配列番号329、配列番号333、配列番号337、配列番号341、配列番号345、配列番号349、配列番号353、配列番号357、配列番号361、および配列番号365からなる群より選ばれるアミノ酸配列の可変性重鎖を備える。更なる具体例において、本発明に従う結合性分子は、軽鎖を備え、それは、次の、すなわち配列番号85、配列番号87、配列番号89、配列番号91、配列番号93、配列番号95、配列番号97、配列番号99、配列番号101、配列番号103、配列番号105、配列番号107、配列番号109、配列番号319、配列番号323、配列番号327、配列番号331、配列番号335、配列番号339、配列番号343、配列番号347、配列番号351、配列番号355、配列番号359、配列番号363、および配列番号367からなる群より選ばれるアミノ酸配列の可変的な軽鎖を備える。表8は、本発明の結合性分子の重鎖および軽鎖の可変領域を特定する。
本明細書に規定するように、本発明の別の局面は、結合性分子の機能的な変形(variants)を含む。分子は、本発明に従う結合性分子の機能的な変形であると考えられ、それは、それらの変形が、インフルエンザウイルスH5N1またはその断片の特異的な結合について、親の結合性分子と競合することが可能な場合である。言い換えると、そのとき、機能的な変形がまだインフルエンザウイルスH5N1またはその断片に結合することができる。なるべくなら、機能的な変形は、少なくとも2つ(またはより一層多く)の異なるインフルエンザウイルスH5N1の株またはその断片への特異的な結合について競合することが可能であり、それらは親の結合性分子によって特異的に結合される。さらに、分子は、本発明に従う結合性分子の機能的な変形と考えられ、それは、それらがインフルエンザウイルスH5N1に対して中和活性を持ち、好ましくは、少なくとも2つ(またはより一層多く)のインフルエンザウイルスH5N1の株に対してであり、それに対しては親の結合性分子が中和活性を見せる。機能的な変形には、制限されないが、一次構造の配列において実質類似する誘導体が含まれ、しかし、例は、インビトロ、またはインビボの修飾、化学的、および/または生化学的なもので、親の結合性分子において見出されないものが含まれる。そのような修飾には、なかんずく、アセチル化、アシル化、ヌクレオチドまたはヌクレオチドの誘導体の共有結合、脂質または脂質の誘導体の共有結合、架橋結合、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、ヒドロキシル化、メチル化、酸化、ペグ化(pegylation)、タンパク質分解処理(proteolytic processing)、リン酸化、および同様のものが含まれる。
代わりに、機能的な変形は、本発明において規定するように、結合性分子であることができ、これには、親の結合性分子のアミノ酸配列と比較して1種またはそれよりも多くのアミノ酸の置換、付加、欠失または組合せを含むアミノ酸配列が備わる。さらにまた、機能的な変形には、アミノまたはカルボキシル末端でのどちらか、または双方でのアミノ酸配列の切り詰め(truncations)が備わることができる。本発明に従う機能的な変形は、親の結合性分子と比較して同じまたは異なる、より一層高い、またはより一層低い、結合親和性を持ちうるが、まだ、インフルエンザウイルスH5N1またはその断片に結合することが可能である。例として、本発明に従う機能的な変形は、親の結合性分子と比較して、インフルエンザウイルスH5N1またはその断片のための増加または減少した結合親和性を持ちうる。なるべくなら、可変領域のアミノ酸配列には、制限されないが、フレームワーク領域、高頻度可変(hypervariable)領域、とりわけ、CDR3領域が含まれ、修飾される。概して、軽鎖および重鎖の可変領域には、3つの高頻度可変領域が備わり、3つのCDRs、およびより一層高く保存された領域、いわゆるフレームワーク領域(FRs)を備える。高頻度可変領域は、CDRsからのアミノ酸残基および高頻度可変なループからのアミノ酸残基を備える。本発明の範囲内に入ることを意図する機能的な変形は、本明細書で規定するように、親の結合性分子とのアミノ酸配列相同性で、少なくとも約50%から約99%まで、好ましくは少なくとも約60%から約99%まで、より一層好ましくは少なくとも約70%から約99%まで、さらにより一層好ましくは少なくとも約80%から約99%まで、最も好ましくは少なくとも約90%から約99%まで、とりわけ、特に少なくとも約95%から約99%まで、およびとりわけ、少なくとも約97%から約99%までを持つ。なかんずく、この技術に熟練する人に既知のGap(ギャップ)またはBestfit(ベストフィット)のようなコンピュータアルゴリズムを用い、比較され、および類似しまたは同一なアミノ酸残基を定めるべきアミノ酸配列を最適に比較する(align)ことができる。機能的な変形は、その親の結合性分子またはその１部分を変えることによって得ることができ、この技術において既知の一般的な分子生物学的方法によって行われ、それには、制限されないが、誤りを生じやすいPCR、オリゴヌクレオチド指定変異誘発(oligonucleotide-directed mutagenesis)、部位特異的変異誘発および重鎖および/または軽鎖のシャッフル(shuffling)が含まれる。具体例において、本発明の機能的な変形は、インフルエンザウイルスH5N1に対して中和活性を持つ。中和活性は、親の結合性分子と比較して、同一またはより一層高いまたはより一層低くてよい。これからは、用語(ヒト)結合性分子を用いるとき、これにはまた(ヒト)結合性分子の機能的な変形が包含される。
またさらなる局面では、本発明には、免疫複合体が含まれ、即ち、本明細書で規定するような少なくとも1種の結合性分子を備え、およびさらに少なくとも1種のタグ(標識)で、なかんずく、検出可能な部分/薬剤のようなものを備える。また、本発明において考慮されるものには、本発明に従う免疫複合体の混合物または本発明に従う少なくとも1種の免疫複合体、および別の分子で、治療上の薬剤または別の結合性分子または免疫複合体のようなものの混合物である。さらなる具体例において、本発明の免疫複合体は、1種よりも多いタグを備えうる。これらのタグは、互いに同じまたは区別されることができ、および結合性分子に対して、非共有結合的に接合/共役(コンジュゲート)させることができる。タグ(タグ群)はまた、ヒト結合分子に対して直接的に共有結合的に接合/共役することができる。代わりに、タグ(タグ群)は、結合性分子に対して1種またはそれよりも多い連結性化合物を使って結合分子に接合/共役させることができる。結合性分子にタグを共役させるための技術は、熟練した職人によく知られている。
本発明の免疫複合体のタグは治療上の薬剤でありえ、しかし、それらはまた検出可能な部分/薬剤でありうる。治療および/または防止において適切なタグは、毒素またはその機能的な1部分、抗生物質、酵素、食菌作用または免疫刺激を高める他の結合性分子でありうる。検出可能な薬剤を備える免疫複合体は、診断上で、例えば、対象体がインフルエンザウイルスH5N1株に感染したかどうかを評価するために、またはインフルエンザウイルスH5N1感染の発達または進行を臨床的試験手法の1部分として監視し、例は、所定の治療計画(treatment regimen)の有効性を定めるために用いることができる。しかし、それらはまた、他の検出および/または分析的および/または診断上の目的のために用いてもよい。検出可能な部分/薬剤には、制限されないが、酵素、補欠分子族(prosthetic group)、蛍光物質、発光物質(ルミネセント材料)、生物発光物質、放射性物質、陽電子放出性金属(positron emitting metal)、および非放射性常磁性金属イオンが含まれる。結合性分子に、検出および/または分析的および/または診断上の目的のためのラベルをつける(表示をする)のに用いるタグは、とりわけ、(組織)試料の免疫組織化学的染色、フローサイトメトリー検出、スキャンレーザーサイトメトリー検出、蛍光免疫アッセイ、酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISAs)、放射免疫アッセイ(RIAs)、バイオアッセイ(例は、食作用アッセイ)、ウエスタンブロット法の適用、その他のようなものを用いる特異的な検出/分析/診断の技術および/または方法に依存する。この技術において既知の検出/分析/診断の技術および/または方法のための適切なラベルは熟練した職人の十分に手の届く範囲内である。
さらにまた、本発明のヒト結合性分子または免疫複合体はまた、固形支持体に付着させることができ、それは特にインフルエンザウイルスH5N1またはその断片のインビトロでの免疫アッセイまたは精製のために特に有用である。そのような固形支持体は、多孔性または非多孔性、平坦または非平坦でよい。本発明の結合性分子は、マーカー(目印)配列で、ペプチドのようなものに、精製を促進するために融合させることができる。その例には、制限されないが、ヘキサヒスチジンのタグ、血球凝集素(HA)のタグ、mycタグまたはフラッグのタグが含まれる。代わりに、抗体は、抗体のヘテロ複合体(heteroconjugate)を形成するよう、第2の抗体に共役させることができる。別の局面では、本発明の結合性分子は1種またはそれよりも多くの抗原に共役/付着させうる。好ましくは、これらの抗原は、結合性分子-抗原共役物が投与される対象体の免疫系により認識される抗原である。抗原は、同一でよく、しかしまた互いに異なってよい。抗原および結合性分子を付着するための共役の方法は、この技術においてよく知られ、および制限されないが、架橋結合性薬剤の使用が含まれる。本発明の結合性分子は、インフルエンザウイルスH5N1に結合し、および結合性分子に付着する抗原は複合体上の強力なT細胞攻撃を惹起し、それは結局的にインフルエンザウイルスH5N1の破壊を導く。
共役による化学的な免疫複合体の生産の次に、直接または間接的に、例として、リンカー(つなぎ役)を介して、免疫複合体を、本発明の結合性分子および適切なタグを備える融合タンパク質として生産することができる。融合タンパク質は、この技術で知られる方法によって、例は、結合性分子をフレーム(枠)においてコード化するヌクレオチド配列を、適切なタグ(タグ群)をコード化するヌクレオチド配列と共に備える核酸分子を組換え的に構築し、および次いでその核酸分子を発現させることによるようなもので生産することができる。
本発明の別の局面では、少なくとも本発明に従う結合性分子、機能的な変形または免疫複合体をコード化する核酸分子を提供する。そのような核酸分子が、先に記載したように、クローン化目的ための、例は、親和性の成熟(affinity maturation)のプロセス(処理)において、中間体として用いることができる。好適例において、核酸分子は分離または精製される。
熟練した人は、これらの核酸分子の機能的な変形はまた、本発明の1部分であることが意図されることを理解する。機能的な変形は、標準的な遺伝暗号を用い、親の核酸分子から翻訳されるものと同一のアミノ酸配列を提供するために、直接的に翻訳することができる核酸配列である。
なるべくなら、核酸分子は、先に記載したようにCDR領域を備える結合性分子をコード化する。さらなる具体例において、核酸分子は、本発明の結合性分子の2、3、4、5またはさらにすべての6つのCDR領域を備える結合性分子をコード化する。
別の具体例において、核酸分子は、先に記載したように可変性重鎖配列を備える重鎖を含む結合性分子をコード化する。別の具体例において、核酸分子は、先に記載のように可変性軽鎖配列を備える軽鎖を含む結合性分子をコード化する。本発明の結合性分子のヌクレオチド配列は、例のセクション(区分)において与える(例えば、表6および8を参照)。
本発明の別の局面では、ベクターで、即ち、核酸構築物であり、本発明に従う1種またはそれよりも多い核酸分子を備えるものを提供する。ベクターは、プラスミドで、なかんずく、F、R1、RP1、Col、pBR322、TOL、Ti、その他；コスミド；ファージで、ラムダ、ラムダ形(lambdoid、人字)、M13、ミュー(Mu)、P1、P22、Qβ、T偶数系(イーブン)、T奇数系(トッド)、T2、T4、T7、その他；植物ウイルスのようなものから導き出すことができる。ベクターは、クローニングのため、および/または本発明の結合性分子の発現のために用いることができ、および遺伝子治療目的のためにさえも用いられうる。本発明に従う1種またはそれよりも多くの核酸分子を備えるベクターは、1種またはそれよりも多くの発現調整性核酸分子に作動可能に連結され、また、本発明によって保護される。ベクターの選別(choice)は、後続する組換え的手法および用いる宿主に依存する。宿主細胞におけるベクターの導入は、なかんずく、リン酸カルシウム形質移入、ウイルス感染、DEAEデキストラン媒介形質移入、リポフェクタミン(lipofectamin、lipofectamine)形質移入またはエレクトロポーレーション(電気穿孔法)によってもたらすことができる。ベクターは自己的に(autonomously)複製しえ、またはそれが統合された染色体と一緒に複製しうる。なるべくなら、ベクターは、1種またはそれよりも多くの選択(選定)マーカーを含む。マーカーの選別は、一般に好まれる宿主細胞に依存しえるが、しかし、これはこの技術において熟練する者にとってよく知られるように本発明に対して重大ではない。それらには、制限されないが、カナマイシン、ネオマイシン、ピューロマイシン、ハイグロマイシン、ゼオシン(zeocin)、単純ヘルペスウイルスからのチミジンキナーゼ遺伝子(HSV-TK)、マウスからのジヒドロ葉酸還元酵素遺伝子(dhfr)が含まれる。先に記載のようにヒト結合性分子をコード化する1種またはそれよりも多くの核酸分子を備えるベクターは、ヒト結合性分子を分離するのに用いることができるタンパク質またはペプチドをコード化する1種またはそれよりも多くの核酸分子に動作可能に作動可能に連結され、また本発明によって保護される。これらのタンパク質またはペプチドには、制限されないが、グルタチオン-S-転移酵素、マルトース結合性タンパク質、金属結合性ポリヒスチジン、緑色蛍光タンパク質、ルシフェラーゼ(発光酵素)およびベータ-ガラクトシダーゼが含まれる。
上述のベクターの1種またはそれよりも多くのコピーを含む宿主は、本発明の付加的な対象体である。なるべくなら、宿主は宿主細胞である。宿主細胞には、制限されないが、哺乳類、植物、昆虫、菌類(真菌)または細菌の起源の細胞が含まれる。細菌細胞には、制限されないが、Escherichia(エシェリキア)属、E. coli(大腸菌)のようなもの、およびPseudomonas(シュードモナス)属のいくつかの種のようなグラム陽性細菌またはグラム陰性細菌からの細胞が含まれる。菌類細胞の群において、好ましくは、酵母細胞が用いられる。酵母における発現は、なかんずく、Pichia pastoris(ピキア・パストリス、メタノール資化性酵母)、Saccharomyces cerevisiae(サッカロマイセス・セレビシエ、出芽酵母)、Hansenula polymorpha(ハンゼヌラ・ポリモルファ)のような酵母菌株を用いることによって達成することができる。さらに、Drosophila(ショウジョウバエ)およびSf9からの細胞のような昆虫細胞を宿主細胞として用いることができる。その他に、宿主細胞は、なかんずく穀物植物からの細胞で、林業植物(forestry plants)のようなもの、または食物を提供する植物(plants providing food)からの細胞、および原材料で、穀類植物(cereal plants)または薬用植物のようなもの、または鑑賞植物(ornamentals)からの細胞、または球根穀物(flower bulb crops)からの細胞のような植物細胞であることができる。形質転換(トランスジェニック)植物または植物細胞は、既知の方法、例えば、アグロバクテリウム属−媒介遺伝子移送(transfer)、葉片の形質転換、ポリエチレングリコール−誘導されたDNA移送、エレクトロポーレーション、超音波処理、マイクロインジェクションまたは弾道的(ballistic)遺伝子移送によるプロトプラスト(原形質体)形質転換によって生産される。加えて、適切な発現システム(系)はバキュロウイルスシステムであることができる。チャイニーズハムスター卵巣(Chinese Hamster Ovary、CHO)細胞、COS細胞、BHK細胞、NSO細胞またはボーズ(Bowes)メラノーマ(黒色腫)細胞のよう
な哺乳類の細胞を用いた発現システムは、本発明において好適である。哺乳類の細胞は、発現されたタンパク質を、翻訳後修飾と共に提供し、それは、哺乳類の起源の自然な分子と最も似ている。本発明が、ヒトに投与されなければならないかもしれない分子を扱うので、完全なヒト発現システムが特に好ましい。したがって、さらにより一層好ましくは、宿主細胞はヒト細胞である。ヒト細胞の例は、なかんずく、HeLa(ヒーラ)、911、AT1080、A549、293およびHEK293T細胞である。好適な具体例において、ヒトの生産株細胞(producer cells)は、少なくとも、アデノウイルスE1領域を発現可能な形式(expressible format)においてコード化する核酸配列の機能的な部分を備える。さらにより一層好ましい具体例において、前記宿主細胞は、ヒト網膜から導き出し、およびアデノウイルスE1配列を備える核酸により不死化され、911細胞、またはヨーロピアン・コレクション・オブ・セル・カルチャーズ（ECACC）、CAMR(応用微生物研究センター)、Salisbury(ソールズベリー)、Wiltshire(ウィルトシャー)、SP4 OJG、英国に、1996年２月２９日付けで、受託番号第96022940号の下に寄託され、およびPER.C6(R)(商標)の下で市販される細胞系のようなものである(PER.C6は、Crucell Holland B.V.(クルセル・ホランド・ベー．ヴェー．)の登録商標である)。本出願の目的のために、“PER.C6細胞”は第96022940号または祖先、寄託した細胞の祖先の上流または下流の継代物(passages)ならびにそれからの子孫、ならびに前述のものの任意のものの派生物に言及する。組換え型タンパク質の宿主細胞における生産は、この技術においてよく知られた方法に従って実行することができる。興味あるタンパク質のための生産プラットホーム(生産構築基盤)としての商標PER.C6(R)の下で市販される細胞の使用は、国際公開第WO 00/63403号において記載され、その開示を本明細書において参照することにより、その全体を組込む。
本発明に従い結合性分子を生産する方法は、本発明の付加的な1部分である。その方法には、次の工程、a)本発明に従う宿主を、結合性分子の発現につながる(conducive to)条件の下に培養する工程、およびb)随意に、発現した結合性分子を回収する工程が備わる。発現した結合分子は、細胞フリー(含まない)抽出物から回収することができるが、なるべくなら、それらは培養媒体から回収される。生産の上記方法はまた、結合性分子の機能的な変形および/または本発明の免疫複合体を作成するのに用いられることができる。タンパク質で、結合性分子のようなものを、細胞フリー抽出物または培養媒体から回収するための方法は、この技術において熟練した人にはよく知られている。上記に記載した方法によって得られるような、結合性分子、機能的な変形および/または免疫複合体はまた、本発明の1部分でもある。
代わりに、宿主細胞のような、宿主における発現の次に、本発明の結合性分子および免疫複合体は、慣習的なペプチドシンセサイザー(合成機)によって、または、本発明に従うDNA分子から導き出されるRNAの核酸を用いる細胞フリー翻訳システムにおいて合成的に生産することができる。上記記載の合成的製造方法または細胞フリー翻訳システムによって得られるような結合性分子および免疫複合体はさらに、本発明の1部分である。
さらに別の具体例において、本発明の結合性分子はまた、トランスジェニック(遺伝子導入)の、非ヒトの、なかんずく、ラビット(ウサギ)、ヤギまたはウシのような哺乳類において生産することができ、および例として、そのミルク(乳)に分泌される。
さらに別の代わりの具体例において、本発明に従う結合性分子、好ましくはインフルエンザウイルスH5N1またはその断片に特異的に結合するヒト結合性分子は、トランスジェニックの非ヒト哺乳類で、例として、トランスジェニックマウスまたはラビットのようなもので、それがヒト免疫グロブリン遺伝子を発現するものによって発生させうる。なるべくなら、トランスジェニックの非ヒト哺乳類は、ヒトの重鎖の導入遺伝子(トランスジーン)およびヒトの軽鎖の導入遺伝子で、先に記載のようなヒト結合性分子のすべてまたはその1部(ポーション)をコード化するものを備えるゲノムを持つ。トランスジェニックの非ヒト哺乳類は、インフルエンザウイルスH5N1またはその断片の、精製され、または豊富にされた調製物を用いて免疫化されうる。非ヒト哺乳類を免疫化するためのプロトコル(手順)は、この技術においてよく確立されている。Using Antibodies(抗体の使用)：A Laboratory Manual、E. Harlow、D. Lane(1998年)による編集、Cold Spring Harbor Laboratory、Cold Spring Harbor、New YorkおよびCurrent Protocols in Immunology(カレント・プロトコル・イン・イムノロジー)、J. E. Coligan(コリガン)、A. M. Kruisbeek(クロイシビーク)、D. H. Margulies(マーギュリーズ)、E. M. Shevach(シェバハ)、W. Strober(ストロバー)による編集、(2001年)、John Wiley & Sons Inc.(ジョン・ウィリー・アンド・サン社)、New Yorkを参照し、それらの開示を参照することによって、本明細書において組み込む。免疫化のプロトコルは、多重(複数)の免疫化を、フロイントの(Freund’s)完全なアジュバント(補助剤)およびフロイントの不完全なアジュバントのようなアジュバントを伴って、または伴わないいずれかが含まれことが多いが、またネイキッド(裸)のDNA免疫化が含まれうる。別の具体例において、ヒト結合性分子は、遺伝子導入動物から導き出されるB細胞、プラズマ細胞(形質細胞)および/またはメモリー細胞(免疫記憶細胞)によって生産される。さらに別の具体例において、ヒト結合性分子は、ハイブリドーマ(雑種細胞)によって生産され、それは上記記載のトランスジェニックの非ヒト哺乳類から得られるB細胞を不死化細胞に融合させることによって調製される。B細胞、形質細胞および上記記載のトランスジェニックの非ヒト哺乳類から得られうるようなハイブリドーマ、および上記記載のトランスジェニックの非ヒト哺乳類、B細胞、形質細胞および/またはメモリー細胞およびハイブリドーマから得られうるようなヒト結合性分子はまた、本発明の1部分である。
さらなる局面で、本発明は、結合性分子で、ヒト結合性分子のようなもので、例は、ヒト単クローン抗体またはその断片であり、インフルエンザウイルスH5N1またはそのような結合性分子をコード化する核酸分子に特異的に結合するものの識別の方法で、および次の工程、すなわち(a)複製可能な遺伝子のパッケージの表面上の結合性分子の収集物(collection)を、結合につながる条件の下でインフルエンザウイルスH5N1と接触させる工程、(b)少なくとも1回、インフルエンザウイルスH5N1またはその断片に結合する複製可能な遺伝子のパッケージのために選定する(selecting)工程、(c)インフルエンザウイルスH5N1またはその断片に結合する複製可能な遺伝子のパッケージを、インフルエンザウイルスH5N1またはその断片に結合しない複製可能な遺伝子のパッケージから分け、および回収する工程を具えるものを提供する。本明細書において用いられるような複製可能な遺伝子のパッケージは、原核生物または真核生物であることができ、およびそれには、細胞、胞子、酵母、細菌、ウイルス、(バクテリオ)ファージ、リボソームおよびポリソームが含まれる。好ましい複製可能な遺伝子のパッケージはファージである。結合性分子で、例として、単鎖Fvsのようなものは、複製可能な遺伝子のパッケージ上に表示され、即ち、それらは複製可能な遺伝子のパッケージの外面(exterior surface)にて位置付けられる基または分子に付着する。複製可能な遺伝子のパッケージは、選抜されるべき結合性分子を備える選抜可能な単位であり、結合性分子をコード化する核酸分子に連結される。核酸分子は、インビボで(例は、ベクターとして)、またはインビトロで(例は、PCR、転写および翻訳によって)のいずれでも複製可能であるべきである。インビボ複製は、自律的(細胞について)であり、宿主因子(ウイルスについて)の援助(assistance)を伴い、または宿主およびヘルパーウイルス(ファージミドについて)の援助を伴うことができる。結合性分子の収集物を表示する複製可能な遺伝子のパッケージは、表示されるべき外因性の結合性分子をコード化する核酸分子を、内因性タンパク質であり、複製可能な遺伝子のパッケージの外側表面(outer surface)から通常発現されるものを有する融合タンパク質を形成するために複製可能な遺伝子のパッケージのゲノム中に導入することによって形成される。融合タンパク質の発現、外側表面への輸送およびアセンブリー(組立て)は、複製可能な遺伝子のパッケージの外側表面から外因性の結合性分子の表示を招く。
本発明に従う方法における選定工程(工程群)は、生きている、およびまだ感染性で、または不活化されたインフルエンザH5N1型ウイルスを用いて実行することができる。インフルエンザウイルスH5N1の不活化は、この技術の熟練した職人によく知られるウイルス不活化方法で、なかんずく、ホルマリンを用いる処置、β-プロピオラクトン(BPL)、メチオレート(merthiolate、methiolate)および/または紫外線光のようなものによって実行されうる。試験する方法は、インフルエンザウイルスH5N1がまだ生きており、感染性および/または生存可能で、または部分的に、または完全に不活性化されている場合、この技術において熟練する人にとってよく知られている。上記方法において用いられるインフルエンザウイルスH5N1は、未分離の、例は、感染した個体の血清および/または血液において存在してよい。用いるインフルエンザウイルスH5N1はまた、適切な媒体における細胞培養から分離しうる。
具体例において、インフルエンザウイルスH5N1は、複製可能な遺伝子のパッケージと接触するとき、懸濁の状態にある。代わりに、それらはまた、接触が起こるときに、担体に接合しうる。具体例において、第1の、およびさらなる選定は、同じクレイドのインフルエンザウイルスH5N1株に対して起こりうる。代わりに、第1の、およびさらなる選定のラウンドは、異なるクレイドのインフルエンザウイルスH5N1株に対して実行されうる(例は、クレイド1の菌株上の第1の選定およびクレイド2または3の株上の第2の選定)。
代わりに、選定工程(工程群)は、インフルエンザウイルスH5N1の断片で、例は、細胞膜調製物、組換え型H5N1タンパク質またはポリペプチド、融合タンパク質で、H5N1タンパク質またはポリペプチドを備えるもの、細胞で、組換え型H5N1タンパク質またはポリペプチド、および同様のものを発現するもののようなものの存在において実行しうる。これらのタンパク質またはポリペプチドの細胞外に露出する部分はまた、選定物質として用いることができる。インフルエンザウイルスH5N1の断片は、用いる前に適切な物質に固定化しえ、または懸濁において用いうる。具体例では、選定はインフルエンザウイルスH5N1の異なる断片または異なるインフルエンザウイルスH5N1株の断片上で実行することができる。適切な選定の組合せの知見は、熟練した職人の十分に手の届く範囲である。選定は、ELISAまたはFACSによって実行されうる。
まださらなる局面では、本発明は、インフルエンザウイルスH5N1株またはその断片または核酸分子で、そのような結合性分子をコード化するものに特異的に結合する結合性分子を得る方法を提供し、そこでは、その方法は、次の工程a)結合性分子を識別する上記の方法を実行する工程、およびb)回収された複製可能な遺伝子のパッケージから、結合性分子および/または結合性分子をコード化する核酸分子を分離する工程を具える。複製可能な遺伝子のパッケージの表面上の結合性分子の収集物は、scFvsまたはFabsの収集物であることができる。一旦、新しいscFvまたはFabが、確立され、または結合性分子または結合性分子がコード化される核酸分子を識別する上記の方法を用い識別されれば、scFvまたはFabをコード化するDNAは、細菌またはファージから分離することができ、およびscFvs、二価scFvs、Fabs、または望ましい特異性の完全なヒト免疫グロブリン(例は、IgG、IgAまたはIgM)をコード化する構築物を作成するために、標準的な分子生物学的技術を組み合わせることができる。これらの構築物は、適切な細胞系中に形質移入することができ、および完全なヒト単クローン抗体を結果的に生産することができる(Huls(ハルス)ら、1999年；Boel(ボエル)ら、2000年参照)。
前述したように、好ましい複製可能な遺伝子のパッケージはファージである。(ヒト)結合性分子、例は、(ヒト)モノクローナル抗体のようなものを識別し、および得るためのファージ提示(Phage display)方法は、現在までに、この技術において熟練する人に知られ、よく確立された方法である。それらは、例は、米国特許第5,696,108号；Burton(バートン)およびBarbas(バルバス)、1994年；de Kruif(ド・クライフ)ら、1995b；および Phage Display :A Laboratory Manual. ：CF Barbas, DR Burton, JK Scott(スコット)およびGJ Silverman(シルバーマン)による編集、(2001年)、Cold Spring Harbor Laboratory Press(コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー・プレス社)、Cold Spring Harbor、New Yorkにおいて記載される。すべてのこれらの参考文献は、それらの全体において本明細書にこれと共に組み込む。ファージ提示ライブラリーの構築のために、ヒト単クローン抗体の重鎖および軽鎖の可変領域の遺伝子の収集物は、バクテリオファージ、好ましくは糸状バクテリオファージ、粒子の表面上に、例えば、単鎖Fv(scFv)において、またはFab形式(Fab format)において発現される(de Kruifら、1995b参照)。抗体断片発現性ファージのラージラボラトリーズは、一般的に1.0×109の抗体特異性よりも多くのものを含み、および免疫化した、または免疫化していない個体のB-リンパ球において発現される免疫グロブリンV-領域から組立てられうる。本発明の特定の具体例において、結合性分子のファージライブラリーで、なるべくなら、scFvファージライブラリーは、インフルエンザウイルス(例は、H5N1)に対して予防接種を受け、最近では無関係な病原体に対して予防接種を受け、最近インフルエンザウイルスH5N1感染を患う対象体から、または健康な個体から得られる細胞から分離されるRNAから調製される。RNAは、なかんずく、骨髄または末梢血で、好ましくは末梢血リンパ球または分離したB細胞またはメモリーB細胞のようなB細胞のサブポピュレーションさえから分離することができる。対象物は、動物、なるべくならヒトであることができる。好適例では、ライブラリーズは、IgMメモリーB細胞によって発現される免疫グロブリンV-領域から組み立てられうる。
代わりに、ファージ提示ライブラリーズは、部分的にインビトロで組み立てられた免疫グロブリンの可変領域から、ライブラリー(半合成のライブラリーズ)において付加的な抗体多様性を導入するために構築しうる。例えば、インビトロで、組み立てられた可変領域は、抗体特性のために重要である、例は、CDR領域の抗体領域において、合成的に生産され、ランダム化され、または部分的にランダム化されたDNAのストレッチズ(stretches)を含む。インフルエンザウイルスH5N1に特異的なファージ抗体は、そのウイルスまたはその断片に特異的なファージ発現性抗体の結合を許すために、ライブラリーから、そのウイルスまたはその断片を、ファージのライブラリーに曝すことによって選定することができる。未結合(Non-bound)ファージは、洗浄することによって除去し、および結合したファージは、E.coli(大腸菌)バクテリアの感染およびその後の繁殖のために溶出した。選定および繁殖の多重のラウンドは、通常、そのウイルスまたはその断片に対する特異的な結合性のファージについて十分に豊かにするのに要求される。必要ならば、ファージライブラリーをそのウイルスまたはその断片に曝す前に、ファージライブラリーをまず、ファージライブラリーが異なる株、即ち、非H5N1インフルエンザウイルスのウイルスまたはその断片のような非標的物質に曝すことによって控除することができる。これらのサブトラクター(subtractor)ウイルスまたはその断片は、固形相に結合することができ、または懸濁の状態であることができる。ファージはまた、複合抗原で、H5N1タンパク質または他の物質で随意に補われる(ポリ)ペプチドの複合混合物のようなものへの結合のために選定しうる。インフルエンザウイルスH5N1の1種またはそれよりも多くのタンパク質または(ポリ)ペプチドを発現する宿主細胞はまた、選定目的のためにも用いうる。これらの宿主細胞を用いるファージ提示方法は、標的分子を含まない、または似ているが、標的に対して同一でない、非標的分子を含む宿主細胞の過剰の添加により選抜する間に、非関連バインダー(結合剤)の控除によって拡げ、および改善することができ、およびそれによって関連した結合性分子を見出す機会が著しく高められる。もちろん、ウイルスまたはその断片を用いる選抜の前、間またはその後に、その控除が実行されうる。そのプロセスは、MABSTRACT(R)プロセス(MABSTRACT(R)は、Crucell Holland B.V.社の登録商標であり、また、米国特許第6,265,150号明細書を参照し、それを、本明細書において参考として組み込む。
さらに別の局面では、本発明は、インフルエンザウイルスH5N1に対し、好ましくは、少なくともクレイド1、クレイド2およびクレイド3のインフルエンザウイルスH5N1株に対する中和活性を潜在的に持つ結合性分子を得る方法を提供し、そこでは、その方法は、次の工程、(a)インフルエンザウイルスH5N1株またはその断片または上記記載のそのような結合性分子をコード化する核酸分子に特異的に結合する結合性分子を得る方法を実行する工程、および(b)分離された結合性分子がウイルスに対し、好ましくは少なくともクレイド1およびクレイド2の少なくともインフルエンザウイルスH5N1株に対する中和活性を持つかどうか確かめる工程を具える。結合性分子が中和活性を持つかどうか確かめるためのアッセイは、この技術においてよく知られている(WHO Animal on Influenza Diagnosis and Surveillance、Geneva：World Health Organisation、2005年、バージョン2002.5)。
さらなる局面では、本発明は上記に記載のような方法によって得られる中和活性を持つ結合性分子に関係がある。
まださらなる局面では、本発明は、少なくとも結合性分子、好ましくは本発明に従うヒト単クローン抗体、少なくともそれらの機能的な変形、本発明に従う少なくとも免疫複合体またはその組合せを備える組成を提供する。それに加え、組成物は、なかんずく、安定化分子(stabilizing molecules)で、アルブミンまたはポリエチレングリコール、または塩類のようなものを備えうる。好ましくは、用いられる塩類は、結合性分子の望ましい生物学的活性を保持し、および任意の望まれない毒性学的な効果を授けない。必要により、本発明のヒト結合性分子は、それらを酸または結合性分子を不活性化しうる他の自然な、または非自然な条件の作用から保護するために、物質において、またはその上で被覆されうる。
まださらなる局面では、本発明は、本発明において規定するように、少なくとも核酸分子を備える組成を提供する。組成は、水性溶液で、塩類(例は、先に記載のようなNaClまたは塩類)、洗剤(例は、SDS)および/または他の適切な構成要素を含むような水性溶液から構成されうる。
さらにまた、本発明は、少なくとも本発明のヒト単クローン抗体のような結合性分子(またはその機能的な断片または変形)、少なくとも本発明に従う免疫複合体、少なくとも本発明に従う組成、またはその組合せのような結合性分子を備える製薬上の組成物に関係がある。本発明の製薬上の組成物は少なくとも1種の製薬上許容可能な賦形剤をさらに備える。製薬上許容可能な賦形剤は熟練した人によく知られている。本発明に従う製薬上の組成物は少なくとも1種の他の治療上の薬剤をさらに備えうる。適切な薬剤はまた、熟練した職人によく知られている。
具体例において、製薬上の組成物はインフルエンザウイルスH5N1に対して中和活性を持つ2またはそれよりも多くの結合性分子を備えうる。具体例において、組合せで使われるとき、結合性分子は相乗的な中和活性を見せる。言い換えると、組成は、中和活性を持つ少なくとも2つの結合性分子を備え、結合性分子がインフルエンザウイルスH5N1を中和することにおいて相乗的に作用することで特徴づけられる。本明細書で用いるように、用語“相乗的”は、結合性分子の組み合わせられる効果が、組合せにおいて用いられるとき、それらを個々に用いるときにその付加的な効果よりも高いことを意味する。相乗的に作用する結合性分子は、インフルエンザウイルスH5N1の同じ、または別個の断片上の異なる構造に結合しうる。相乗効果を算出するやり方は、組合せインデックス(指標)によるものである。組合せインデックス(CI)の概念は、 Chou (シュー)およびTalalay(タラレイ)(1984年)によって記述されている。組成はまた、中和活性を持つ1種の結合性分子および1種の非中和性H5N1特異的結合性分子を備えうる。非中和性および中和性のH5N1特異的結合性分子はまた、インフルエンザウイルスH5N1を中和する際に相乗的に作用しうる。
本発明に従う製薬上の組成物はさらに、少なくとも1種の他の治療上、予防上および/または診断上の薬剤を含むことができる。好ましくは、製薬上の組成物は、少なくとも1種の他の予防上および/または治療上の薬剤を備える。好ましくは、前記更なる治療上および/または予防上の薬剤は、インフルエンザウイルスH5N1感染および/またはそのような感染から生じる条件を防止しおよび/または処置することが可能な薬剤である。治療上および/または予防上の薬剤には、制限されないが、抗ウイルス性薬剤が含まれる。そのような薬剤は、結合性分子、小分子、有機または無機の化合物、酵素、ポリヌクレオチド配列、抗ウイルス性ペプチド、その他であることができる。目下、インフルエンザウイルスH5N1に感染した受動体(患者)を処置するのに用いられる他の薬剤は、M2インヒビター(抑制剤)(例は、アマンチジン(amantidine)、リマンタジン)および/またはノイラミニダーゼ抑制剤(例は、ザナミビル、オセルタミビル)である。これらは、本発明の結合性分子との組合せにおいて用いることができる。インフルエンザウイルスH5N1での感染および/または実験的な相にあるそのような感染から生じる条件を防止しおよび/または処置することができる薬剤はまた、本発明において有用な他の治療上および/または予防上の薬剤としても用いられる。
本発明の結合性分子または製薬上の組成物は、ヒトでの使用前に適切な動物モデルシステムにおいて試験することができる。そのような動物モデルシステムには、制限されないが、マウス、フェレットおよびサルが含まれる。
典型的に、製薬上の組成物は、製造および貯蔵の条件下で滅菌され、および安定でなければならない。本発明の結合性分子、免疫複合体、核酸分子または組成は、配送(送達)の前またはその時点で適した製薬上許容可能な賦形剤における再構成のために、粉体の形態にあることができる。滅菌された注入(注射)可能な溶液の調製のための滅菌された粉体の場合、調製の好ましい方法は減圧乾燥およびフリーズドライ(凍結乾燥)であり、それは、活性な原材料に加えられた任意の追加的な望ましい原材料の粉体を、その前に滅菌ろ過された(sterile-filtered)その溶液から生じさせる。
代わりに、本発明の結合性分子、免疫複合体、核酸分子または組成は溶液の状態にあることができ、および適した薬学上許容可能な賦形剤は、配送の前またはそのときに、単位投薬量の注入可能な形態を提供するために、加え、および/または混合することができる。好ましくは、本発明において用いられる薬学上許容可能な賦形剤は、高い薬物濃度に適切であり、適当な流動性を維持することができ、および必要に応じて、吸収を遅らせることができる。
製薬上の組成物の投与の至適な経路の選別は、組成の範囲内の活性分子の物理化学的な特性、臨床的な状況の緊急性および活性分子の血しょう濃度の望ましい治療上の効果に対する関係を含むいくつかの因子によって影響される。例として、必要に応じて、本発明の結合性分子は担体を用いて調製することができ、それはそれらを迅速な放出(リリース)に対して保護するもので、移植片、経皮的なパッチ、およびマイクロカプセル化された配送システムを含む徐放調剤物のようなものである。生分解性の、生物学的適合性のポリマー(重合体)が、なかんずく、用いられ、エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエーテル(polyorthoesters)およびポリ乳酸のようなものである。さらに、結合性分子を、ヒト結合性分子の不活化を防止する物質または化合物を用いて被覆し、または結合性分子をそれらと共に同時投与することが必要であってもよい。例えば、結合性分子は、適した担体、例えば、リポソームまたは希釈剤において、対象体に投与しうる。
投与の経路は、2つの主要な範疇、経口および非経口投与に分かつことができる。好適な投与経路は、静脈内、または吸入によるものである。
経口の剤形は、なかんずく、タブレット(錠剤)、トローチ剤、薬用キャンディー(lozenges)、水性または油性の懸濁物、分散性(可能な)粉体または顆粒、エマルジョン(乳剤)類、硬質カプセル、柔質ゼラチンカプセル、シロップ剤(糖蜜)またはエリキシル剤(万能薬)、ピル(丸剤)、ドラジェ(糖衣錠)、液体、ゲル類、またはスラリー(泥状物)として調剤することができる。これらの調剤は、製薬上の賦形剤を含むことができ、それには、制限されないが、不活性な希釈剤、造粒剤および崩壊剤、結合剤(binding agents)、滑剤(lubricating agents)、保存剤、着色剤、香味料(flavouring agents)または甘味料、植物性または鉱物性の油、湿潤剤、および増粘剤が含まれる。
本発明の製薬上の組成物はまた、非経口投与のために調剤するができる。非経口投与のための調剤は、なかんずく、水性または非水性の等張性の滅菌した非毒性の注入または点滴溶液(infusion solutions)または懸濁物の形態であることができる。溶液または懸濁物は、薬剤を含みえ、それは、1,3-ブタンジオール、リンガー溶液(Ringer’s solution)、ハンクス溶液(Hank’s solution)、等張性塩化ナトリウム溶液、油、脂肪酸、局所的麻酔剤、保存剤、緩衝剤、粘性または溶解性増加薬剤、水溶性酸化防止剤、油溶性酸化防止剤および金属キレート試薬のような採用する投薬量および濃度にてレシピエント(受給体)に無毒である。
さらなる局面では、本発明のヒト単クローン抗体(その機能的な断片および変形)のような結合性分子、免疫複合体、組成または製薬上の組成物は、薬として用いることができる。それで、本発明の結合性分子、免疫複合体、組成または製薬上の組成物を用いるインフルエンザウイルスH5N1感染の処置および/または予防の方法は、本発明の別の1部分である。上記の分子を、なかんずく、インフルエンザウイルスH5N1感染の、診断、予防、処置、またはその組合せで用いることができる。それらは、インフルエンザウイルスH5N1感染を患う、これまでに無処置の受動体、およびインフルエンザウイルスH5N1感染の処置を受けたか、または処置を受けている受動体の処置に適する。それらは、医療管理従事者(healthcare workers)、感染した対象体の関係者(relatives)、(家禽)農家、その他のような受動体のために用いうる。
上記の分子または組成は、診断、予防および/または処置に役立つ他の分子と関連して採用しうる。それらはインビトロで、エキソビボで、またはインビボで用いることができる。例として、本発明のヒト単クローン抗体(またはその機能的な変形)のような結合性分子、免疫複合体、組成または製薬上の組成物は、インフルエンザウイルスH5N1に対するワクチンと共に同時投与することができる(利用できるならば)。代わりに、ワクチンはまた、本発明の分子の管理の前または後に投与しうる。ワクチンの代わりに、抗ウイルス薬剤を、本発明の結合性分子と関連して採用することもできる。適切な抗ウイルス薬剤は上述してある。
分子は、典型的に、治療上、または診断上効果的量において、本発明の組成および製薬上の組成物で調剤される。代わりに、それらは別々に調剤され、および管理されてもよい。例として、抗ウイルス薬剤のような他の分子は、全身的に適用されえ、一方、本発明の結合性分子は静脈内に適用されうる。
投与計画(Dosage regimens)は、至適な望ましい反応(例は、治療上の反応)を提供するために整える(adjusted)ことができる。適切な用量域(dosage range)は、例として、0.1〜100のmg/kg体重、好ましくは、0.5〜15のmg/kg体重でありうる。さらに、例えば、単一のボーラス(大量瞬時投与)は、投与されえ、いくつかの別けられた用量は、時間にわたり投与しえ、またはその用量を治療上の状況の緊急事態によって指示されるように比例的に減少させ、または増加させうる。本発明に従う分子および組成は好ましくは滅菌される。これらの分子および組成を滅菌させるための方法はこの技術においてよく知られている。診断、予防および/または処置において有用な他の分子は、本発明の結合性分子のために提案されるのと似た投与計画において管理することができる。他の分子が別々に投与される場合、それらは受動体に対し、先立って(例は、2分、5分、10分、15分、30分、45分、60分、2時間、4時間、6時間、8時間、10時間、12時間、14時間、16時間、18時間、20時間、22時間、24時間、2日、3日、4日、5日、7日、2週間、4週間または6週間前）、付随(併用)して、またはその後(例は、2分、5分、10分、15分、30分、45分、60分、2時間、4時間、6時間、8時間、10時間、12時間、14時間、16時間、18時間、20時間、22時間、24時間、2日、3日、4日、5日、7日、2週間、4週間または6週間後)の1種またはそれよりも多くの本発明のヒト結合性分子または製薬上の組成物の投与で管理しうる。正確な投与方式(dosing regimen）は通常、ヒト患者における臨床治験の間に整理される(sorted out)。
ヒト結合性分子およびヒト結合性分子を備える製薬上の組成物は特に有用であり、および人間にインビボでの治療上の薬剤として投与されるべきとき、投与された抗体に対するレシピエントの反応が、単クローン性のネズミ、キメラまたはヒト化した結合性分子の投与によって引き起こされる(occasioned)ものよりも著しく少ないことが多いことから、しばしば好まれる。
別の局面では、本発明は、結合性分子の使用に関し、それは、中和性のヒト単クローン性抗体(機能的断片およびその変形)、免疫複合体、核酸分子、組成物または本発明に従う製薬上の組成物のようなもので、インフルエンザウイルスH5N1感染の、診断、予防、処置、またはそれらの組合せのために薬の調製におけるものである。
その次に、少なくとも中和性のヒト単クローン抗体(機能的な断片およびその変形)、少なくとも免疫複合体、少なくとも核酸分子、少なくとも組成、少なくとも製薬上の組成物、少なくともベクター、少なくとも本発明に従う宿主またはその組合せのような少なくとも結合性分子を備えるキットはまた、本発明の1部分である。随意に、本発明のキットの上記記載の構成要素は、適切な容器において包まれ、および診断、予防および/または指示された条件の処置のためにラベル付けられる。上記記載の構成要素は、水性、好ましくは滅菌された、溶液として、または再構成のための、凍結乾燥された、好ましくは滅菌された、調剤として、ユニット(単位)または多重用量の容器において貯蔵されうる。容器は、ガラスまたはプラスチックのような多様な物質から形成されえ、および滅菌されたアクセスポート(例えば、その容器は、皮下注射のニードルによって孔をあけられ得る(pierceable)ストッパーを持つ静脈内溶液バッグまたはバイアルでありうる)。キットはさらに、製薬上許容可能な緩衝剤を備えるより一層多くの容器を含みうる。それはさらに、商業上およびユーザーの見地から望ましい他の物質を含み、それは、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、ニードル、シリンジ、適切な宿主の1種またはそれよりも多くのもののための培養媒体、および場合により、少なくとも1種の他の治療上、予防上、または診断上の薬剤さえを含みうる。キットに関係し、慣習的には、指図書が、治療上、予防上または診断上の生成物の商業上の包装において含まれ、それには、例えば、そのような治療上、予防上または診断上の製品の使用に関する指示、用法(usage)、投薬量、製造、管理、禁忌(contra-indications)および/または警告が含まれる。
本発明はさらに、試料におけるインフルエンザウイルスH5N1の検出の方法に関係があり、そこで、その方法は次の工程、(a)試料を、本発明に従う結合性分子(その機能的な断片および変形)または免疫複合体の診断上効果的な量と接触させる工程、および(b)結合性分子または免疫複合体が試料の分子に特異的に結合するかどうか定める工程を含む。試料は生物学的試料でありえ、それには、制限されないが、血液、血清、便(スツール)、痰(唾液)、鼻咽頭の吸引物(nasophargyal aspirates)、気管支洗浄(bronchial lavages)、尿、組織または(潜在的に)感染した対象物からの他の生物学的物質、または水、飲物、その他のような非生物学的試料が含まれる。そして、(潜在的に)感染した対象物はヒト対象物であってよいが、しかし、また、インフルエンザウイルスH5N1のキャリヤーとして疑われる動物は、本発明のヒト結合性分子または免疫複合体の存在のために試験されうる。試料は最初に、それを検出の方法により一層適切なものにするために操作してよい。操作は、なかんずく、ウイルスを含有すると疑われ、および/または含む試料を処置することを意味し、そのようなやり方で、ウイルスは崩れて、タンパク質、(ポリ)ペプチドまたは他の抗原性断片のような抗原性成分になる。好ましくは、本発明のヒト結合性分子または免疫複合体は、ヒト結合性分子およびウイルスまたはその抗原性断片で、試料において存在しうるものの間で免疫学的複合体の形成を許す状況下で試料に接触される。免疫学的複合体の形成は、あるとしたら、試料においてウイルスの存在を指示し、次いで検出され、および適切な手段によって測定される。そのような方法には、なかんずく、同質および異質な結合性免疫測定(binding immunoassay)で、放射性免疫アッセイ(RIA)、ELISA、免疫蛍光、免疫組織化学、FACS、BIACOREおよびウエスタンブロット分析が含まれる。
好適なアッセイ技術は、受動体の血清および血液および血液から導き出した生成物の大規模な臨床学的スクリーニング(選抜)のために、特にELISAおよびウエスタンブロット技術である。ELISA試験は特に好ましい。これらのアッセイにおける試薬としての使用のために、本発明の結合性分子または免疫複合体は、マイクロタイターウェルの内部表面に便利に結合される。本発明の結合性分子または免疫複合体は、マイクロタイターウェルに直接結合されうる。しかし、本発明の結合性分子または免疫複合体のウェルへの最大の結合は、本発明の結合性分子または免疫複合体の添加に先立って、ポリリジンを用いるウェルの前処置によって達成されうる。さらにまた、本発明の結合性分子または免疫複合体は、既知の手段によってウェルに共有結合的に付着しうる。概して、結合性分子または免疫複合体は、被膜(コーティング)のために0.01から100までのμg/mlの間で用いられるが、より一層高い、ならびにより一層低い量も用いうる。試料は次いで、本発明の結合性分子または免疫複合体を用いて被覆されたウェルに加えられる。
さらにまた、本発明の結合性分子は、インフルエンザウイルスH5N1の特定の結合性構造を識別するのに用いることができる。結合性構造は、タンパク質および/またはポリペプチドのエピトープであることができる。それらは線形であることができるが、また、構造的および/または立体配置上でありうる。1種の具体例において、結合性構造を、PEPSCAN分析(なかんずく、WO 84/03564、WO 93/09872、Slootstra(スルーツトラ)ら、1996年を参照)によって分析することができる。代わりに、インフルエンザウイルスH5N1のタンパク質からペプチドを備えるランダムなペプチドライブラリーは、本発明の結合性分子への結合が可能なペプチドのために選別することができる。見出される結合性構造/ペプチド/エピトープは、インフルエンザウイルスH5N1感染のワクチンとして、およびその診断のために用いることができる。タンパク質および/またはポリペプチド以外の断片が結合性分子によって結合される場合に、結合性構造は、質量分析、高性能液体クロマトグラフィーおよび核磁気共鳴によって識別することができる。
更なる局面では、本発明は、本発明のヒト結合性分子によって結合されるエピトープのように、インフルエンザウイルスH5N1の同じエピトープへの特異的な結合のために、結合性分子(または機能的な断片またはその変形)を選抜する方法を提供し、そこでは、その方法は、次の工程、(a)選抜される結合性分子、本発明の結合性分子およびインフルエンザウイルスH5N1またはその断片を接触させる工程、(b)選抜する結合性分子が、本発明の結合性分子と、インフルエンザウイルスH5N1への特異的な結合について競合することが可能であるかを測定する工程を具える。さらなる工程では、インフルエンザウイルスH5N1またはその断片への特異的に結合について競合することが可能な選抜された結合性分子が中和活性を持つならば、それを定めうる。本発明の結合性分子で、インフルエンザウイルスH5N1への特異的な結合について、本発明の結合性分子と競合することが可能な結合性分子は、本発明の別の1部分である。上記記載の選別方法において、“同じエピトープに特異的に結合する”はまた、本発明の結合性分子によって結合されるエピトープのように、実質または本質同じエピトープに特異的に結合すると考えられる。本発明の結合性分子のインフルエンザウイルスH5N1への結合を、ブロック(阻止)し、またはそれと競争する能力は、典型的に、選抜される結合性分子が本発明の結合性分子によって免疫特異的に認識されるインフルエンザウイルスH5N1上の結合性部位と構造的に重複するインフルエンザウイルスH5N1上のエピトープまたは結合性部位に結合することを指し示す。代わりに、このことは、選抜される結合性分子が本発明の結合性分子によって免疫特異的に認識される結合性部位に十分に近接した(proximal to)エピトープまたは結合性部位に、立体的に(sterically)または別のやり方でインフルエンザウイルスH5N1への本発明の結合性分子の結合を抑制するために結合することを指し示す。
一般に、競合阻害(competitive inhibition)はアッセイによって測定され、そこでは、抗原の組成、即ち、インフルエンザウイルスH5N1またはその断片を備える組成は、参照の結合性分子、即ち、本発明の結合性分子、および選抜される結合性分子を混ぜられる。通常、選抜される結合性分子は過度に存在する。ELISAsおよびウエスタンブロット法に基づくプロトコルは、そのような単純な競合の調査において用いるのに適切である。種またはアイソタイプの二次抗体を用いて、あるものは結合させた参照の結合性分子だけを検出可能であり、その結合は、選抜される結合性分子の存在によって減らされ、それは実質同じエピトープを認識する。選抜される参照の結合性分子および任意の結合性分子(種またはアイソタイプにかかわりなく)の間の結合性分子の競合の調査を行う上で、あるものは初めに、検出可能なラベルを用いて、例は、ビオチン、酵素による、放射性の、または他のラベルのようなもので、その後の識別を可能にするため、参照の結合性分子に標識付けをしてよい。これらの競合アッセイによって識別される結合性分子(“競合的結合性分子”または“交差反応結合性分子”)には、制限されないが、抗体、抗体断片、および他の結合性薬剤で、参照の結合性分子によって結合されるエピトープまたは結合性部位に結合するもの、即ち、本発明の結合性分子ならびに、抗体、抗体断片および他の結合性薬剤で、選抜される結合性分子および生じるための参照の結合性分子の間の競合的結合のための参照の結合性分子によって結合されるエピトープに十分に近接するエピトープまたは結合性部位に結合するものが含まれる。好ましくは、本発明の競合的な結合性分子は、過度に存在するとき、少なくとも10%だけ、好ましくは少なくとも25%だけ、より一層好ましくは少なくとも50%だけ、および最も好ましくは少なくとも75%〜90%またはそれよりもさらに高くまで、参照の結合性分子の特異的結合を、選定された標的種に対して抑制する。およそ、実質的に、本質的に、または同じエピトープに、本発明の結合性分子のように結合する1種またはそれよりも多くの競合的な結合性分子の識別は、率直な技術的事項である。競合的結合性分子の識別が参照の結合性分子、即ち、本発明の結合性分子に比較して定められるように、実際、参照の結合性分子および競合的結合性分子が結合するエピトープを定めることは、同じまたは実質同じエピトープに、参照の結合性分子のように結合する競合的結合性分子を識別するために何らかのやり方においても要求されないことが理解される。
（例）
本発明を例示するために、以下の例を提供する。例は、何らのやり方においても本発明の範囲を制限することは意図されない。
（例１）
メモリーB細胞から抽出したRNAを用いるscFvファージ提示ライブラリーの構築物
末梢血を、EDTA抗凝固試料チューブにおいて静脈穿刺(venapuncture)によって通常の健康なドナー(提供者)から収集した。血液試料(45ml)を、2回PBSを用いて希釈し、および、30mlのアリコート(分量)を、10mlのFicoll-Hypaque(フィコール-ハイパック(Pharmacia(ファルマシア社))を用いて下に置き(underplayed)、およびブレーク(中段)を伴わずに室温で20分間900×gにて遠心分離した。上澄みを、慎重に、ちょうどリンパ球性および血小板の画分を含む白い層より上で除去した。次に、この層を、慎重に除去し(〜10 ml)、新鮮な50mlのチューブに移し、および40mlのPBSを用いて3回洗浄して、および血小板を除去するために、室温で10分間400×gにて回転させた。リンパ球を含有する得られたペレットを、2%のFBSを含有するRPMI媒体において再懸濁させ、および細胞の数を細胞の計数によって定めた。ほぼ、1×108のリンパ球を、IgMメモリーB細胞の分離のためのマーカーとして、CD24、CD27および表面のIgMを用いる蛍光細胞ソート(分類)のために染色した。Yield Mode(イールド・モード(降伏モード))において設定されるBecton Dickinson Digital Vantage(ベクトン・ディキンソン・デジタル・バンテージ)装置(apparatus)を、物理的なメモリーB細胞ソートおよび分離のために用いた。リンパ球は、FSC/SSCウインドウからの小さな小型集団(small compact population)としてゲートで制御した(gated)。メモリーB細胞(CD24+/CD27+)をその後、未処理の(naive)B細胞(CD24+/CD27-)およびメモリーT細胞(CD24-/CD27+)から分けた。次の工程では、IgMメモリーB細胞(IgM+)を、IgM発現を用いるスイッチメモリーB細胞(IgM-)から分けた。この工程では、IgMメモリーB細胞を別々の試料チューブにおいて分類した。1×105個の細胞をDMEM/50%のFBSにおいて収集し、およびソートの完了の後、それらを10分間400×gで遠心分離し、および500μlのTRIZOL(トリゾール)において合計のRNA抽出溶液(Invitrogen(インビトロゲン社))を溶解した。TRIZOL溶液のプロトコルにおいて詳述されるように、RNAを200μlのクロロホルムおよびイソプロパノールの沈殿を用いる溶解溶液から抽出した。次に、1μlのPellet Paint(ペレ・ペイント)(Novogen(ノボゲン))を、ペレット化プロセス(処理)を高め、および視覚化するために適用した。完全なRNAの調製物を、23μlのDEPCで処理された超純水(Invitrogen)において溶解し、およびSuperScript III Reverse Transcriptase(スーパースクリプトIIIリバース・トランスクリプターゼ)(Invitrogen)を用いるcDNAの転換のために用いた。1μlのRandom Hexamers(ランダム・ヘキサマーズ)(500ng/μl)(Promega(プロメガ社))を、RNA試料に加え、および混合し、および加熱したリッドPCR機において5分間65℃にて融解した。試料を湿った氷(wet-ice)上でスナップ冷却し(snap-cooled)、および次の成分を加えた。すなわち、8μlの5X RT緩衝剤(250mMのTris(トリス)-HCl、pH 8.3、375mMのKCl、15mMのMgCl2)、2μlのdNTPs(各々の10mM)(Invitrogen)、2μlのDTT(100mM)、2μlのRNAseのInhibitor(インヒビター)(40U/μl)(Promega)、2μlのSuperScript III(200U/μl)(Invitrogen)である。取得した混合物を最初に室温で5分間インキュベーション(温置)し、および次いで加熱したリッドPCR機に50℃で1時間にて移した。反応を15分間75℃まで加熱することによって停止した。取得されるcDNAを超純水を用いて200μlに希釈し、およびさらに使用するまで-20℃にて貯蔵した。
2つのラウンドのPCR増幅のアプローチ(取組み)を、表1および2において示すプライマーの組みを用い、免疫グロブリンVHおよびVLの領域をそれぞれのドナーレパートリー(提供者の能力範囲)から分離するために適用した。手法を通して用いる増幅のためのPCRの処方は、以下の通りであった。すなわち、5μlのcDNAのテンプレート(鋳型)、32.75μlの超純水、各プライマーの2.5μl(10μM)、5μlの10×PCR緩衝剤(200mMのTris-HCl、pH 8.4、500mMのKCl)、1.5μlのMgCl2(50mM)、0.5μlのdNTP′sのもの(各々の25mM)、0.25μlのTaqポリメラーゼ(5U/μl)(Invitrogen)である。表1において言及するプライマーの組みを用いるそれぞれのcDNA上での第1のラウンドの増幅は、それぞれVH、Vkappa(Ｖカッパ)およびVlambda(Ｖラムダ)の領域のための約650の塩基対の7、6および9の生成物を産生した。IgMメモリーB細胞のVH領域増幅のために、OCMの一定のプライマー(constant primer)を、OH1からOH7までとの組合せにおいて用いた。第1ラウンドの増幅のための熱サイクリングプログラムは、次のようであった。すなわち、2分の96℃(変性工程)、30サイクルの30秒の96℃/30秒の55℃/60秒の72℃、10分の72℃の最終的な伸長および4℃の冷蔵である。生成物を、ゲル-抽出カラム(Qiagen(キアゲン社))を用いる1%のアガロースゲル上に負荷し、およびそれから分離し、および50μlの1mMのTris-HCl、pH 8.0にて溶出した。10パーセントの第1ラウンドの生成物(5μl)を、表2において言及するプライマーを用いる第2ラウンドの増幅にかけた。これらのプライマーを、それぞれのVLおよびVHの領域の、ファージベクターPDV-C06への方向性クローニング(directional cloning)を可能にする制限部位を用いて拡げた。第2ラウンドの増幅のためのPCRプログラムは次のようであった。すなわち、2分の96℃(変性工程)、30サイクルの30秒の96℃/30秒の60℃/60秒の72℃、10分の72℃の最終的な伸長および4℃の冷蔵である。第2ラウンドの生成物(〜350塩基対)を、最初に免疫グロブリン遺伝子の生成物において見出されるJセグメント(区域)の自然な発生に従ってプールし、それぞれVH、VkappaおよびVlambdaの可変領域(表3および4を参照)のための7、6および9のプールを招く。免疫ライブラリーにおける免疫グロブリンの配列の正常化した分布を得るために、6つのVkappaおよび9つのVlambdaの軽鎖のプールを、表3に言及するパーセンテージ(割合)に従って混合した。この単一の最終的なVLのプール(3μg)を、SalIおよびNotIの制限酵素を用いて一昼夜消化し、Qiagenのゲル-抽出カラムを用いる1.5%のアガロースゲル上に負荷し、およびそれから分離し(〜350塩基対)、および次のようにSalI-NotIカットPDV-C06ベクターにおいて連結した(〜5000塩基対)。すなわち、10μlのPDV-C06ベクター(50ng/μl)、7μlのVL挿入物(insert)(10ng/μl)、5μlの10×連結緩衝剤(NEB)、2.5のT4のDNA Ligase(リガーゼ)(400U/μl)(NEB)、25.5μlの超純水(挿入比率へのベクターは1：2であった)である。連結を、16℃の水浴において一昼夜実行した。次に、容量を水により2倍にし、等量のフェノール-クロロホルム-イソアミルアルコール(75：24：1)(Invitrogen)、それに次いでクロロホルム(Merck(メルク社))抽出を続け、および2時間、-20℃で、1μlのPellet Paint(Novogen)、10μlの酢酸ナトリウム(3M、pH 5.0)および100μlのイソプロパノールを用いて沈殿させた。取得した試料を、次いで4℃で30分間20.000×gにて遠心分離した。取得した沈殿物を、70%のエタノールを用いて洗浄し、および室温にて20.000×gで10分間遠心分離した。エタノールを減圧吸引によって除去し、およびペレットを数分間空気乾燥し、および次いで10mMのTris-HCl、pH 8.0を含有する50μlの緩衝剤において溶解させた。1μlの連結混合物を、1.7kV、200 Ohm(オーム)、25μF(時間定数〜4、5ミリ秒)にて設定されるGenepulser(ジーンプラスター)II装置(Biorad(バイオラッド社))を用いるチルド(冷や)された0.1cmの電気穿孔(エレクトロポーレーション)キュベット(Biorad)において、40μlのTG-１電気コンピテント細胞(Stratagene(ストラタジーン社))の形質転換のために用いた。パルスの直ぐ後に、細菌を37℃にて5%(w/v)のグルコース(ブドウ糖)(Sigma(シグマ社))を含有する1000μlのSOC媒体(Invitoregen)を有するキュベットからフラッシュ(洗い流)し、および15mlの丸底培養チューブに移した。別の500μlのSOC/グルコースを、キュベットから残存する細菌をフラッシュするために用い、および培養チューブに加えた。細菌を、220rpmにてシェーカーインキュベーター(振とう培養機)において37℃にて正確に1時間培養することによって回収した。形質転換した細菌を、50μg/mlのアンピシリンおよび5%(w/v)のグルコース(Sigma)により補われる200mlの2TYアガー(寒天)(16g/lのバクト-トリプトン(bacto-tryptone)、10g/lのバクト-イースト抽出物、5g/lのNaCl、15g/lのアガー、pH 7.0)を含有する大きな240mmの四角いペトリ皿(NUNC)にわたって平板培養した(plated)。1から1000までの希釈を、同じ媒体を含有する15cmのペトリ皿上に計数目的のために平板培養した。この形質転換の手法を20回順次(sequentially)繰り返し、および完全なライブラリーを、合計の30の大きな四角いペトリ皿にわたって平板培養し、および37℃の培養ストーブにおいて一昼夜増殖させた。典型的に、1×107の前後のcfuが上記プロトコルを用いて得られた。中間のVL軽鎖のライブラリーを、プレートから、細菌を穏やかにスクレイプ(掻爬)することによってプレートにつき10mlの2TY媒体中に収穫した。細胞塊を、OD600測定によって測定し、および細菌の2倍の500ODを、製造者の指示に従って2つのP500のマキシプレプ(maxiprep)カラム(Qiagen)を用いるマキシプラスミドDNA調製のために用いた。
VL可変領域に類似して、第2ラウンドのVH-JHの生成物を、最初に、通常のJセグメントの用法分配(表4参照)を得るために一緒に混合し、PH1からPH7までで呼ばれている7つのVHサブプールを招いた。プールを、表4において描くパーセンテージを用いて、正常化された配列の分配を獲得するために混合し、SfiIおよびXhoIの制限酵素で消化し、および前記に記載したように得られるSfiI-XhoIカットPDV-VL中間ライブラリーにおいて連結された1種のVH画分を取得した。連結のセットアップ、精製方法、TG1のその後の形質転換および細菌の収穫は、正確にVLの中間ライブラリー(上記参照)のために記載するようなものであった。最終的なライブラリー(ほぼ5×106cfu)を、挿入されたVH-VL領域のフランキングの(側面にある)プライマーの組みを用いるコロニーPCRにより挿入頻度について検査した。コロニーの95%より多くは、正しい長さの挿入物を示した(表5参照)。コロニーPCRの生成物を、その後のDNA配列分析のために、配列のバリエーション(変動)を検査し、および完全なORFを示すコロニーのパーセンテージを評価するために用いた。これは、典型的に70%を超えた(表5参照)。また、Ｖ遺伝子での変異の頻度を分析した。50の配列のうち、47(94%)は成熟プロセスを指し示す生殖系列の立体配置ではなく、およびライブラリーのためのRNA供給源として用いるＢ細胞のメモリー表現型と一致してなかった。最後に、ライブラリーをレスキュー(救出)し、およびCTヘルパーファージの使用によって増幅し(WO 02/103012参照)、および以下に記載のようなパンニング(酷評)方法によって、ファージ抗体選定について用いた。
（例2）
H5N1 に対する単鎖Fv断片を運ぶファージの選定
抗体断片を、本質的に、上記に記載したように構築する抗体ファージ提示ライブラリーおよび本質的に、米国特許第6,265,150号明細書およびWO 98/15833において記述されるような(その双方を、本明細書において参照することにより組み込む)、一般的なファージ提示技術およびMABSTRACT(R、商標)(マブストラクト)技術を用いて選定した。さらにまた、WO 02/103012において記載するような(それを、本明細書において参照することによって組み込む)方法およびヘルパーファージを、本発明において用いた。
選定を、組換え型血球凝集素(HA)サブタイプH5に対して実行し(A/ベトナム/1203/2004；配列番号110参照)、それは昆虫細胞(Protein Sciences(プロテイン・サイエンシーズ)、CT(コネチカット州)、USA)においてバキュロウイルスベクターを用いて生成された。分離株A/ベトナム/1194/2004(H5N1TV)からHAのアミノ酸配列およびインドネシアおよび中国において分離した株からのHas(H5N1IC)を表すコンセンサス(一致)のアミノ酸配列を、それぞれ、配列番号111および配列番号112において示す。選定をまた、H5N1からの可溶性組換え型HA(sHA)に対して実行した。分離株A/ベトナム/1194/2004(H5N1)からのHA(sHA)の細胞外(可溶性)部分のためにコード化する配列で、2004(クレイド1)でタイおよびベトナムにおいて分離されるインフルエンザ株において識別されるHAsを表すもの(H5N1TVのsHA、配列番号113)、およびコンセンサス配列で、2003/2004(クレイド2)でインドネシアおよび中国において分離されるH5N1菌株のHAsの可溶性部分を表すもの(H5N1ICのsHA、配列番号114)を、myc-およびhis-tagを含有する発現ベクターにおいて、標準的なDNAクローン化技術を用いてクローニングした。H5N1TVおよびH5N1ICのHAsは9つのアミノ酸位置にて異なり、すべてはその分子のHA1サブユニットにおいて位置付けられる。DNAトランスフェクションを、標準的な技術を用いる一過性のおよび/または安定な発現のためにPER.C6細胞にぴて実行した。SHAを製造者の指示に従ってHisTrapTM(商品名)FF Columns(カラム)(Amersham Biosciences(アマシャム・バイオサイエンシーズ社))を用い、培養物上清から金属キレート親和性クロマトグラフィーを使用して精製した。
HA抗原(H5N1TVの組換え型HAおよびsHA)を、PBS(5.0μg/ml)において希釈し、MaxiSorpTM(商品名)Nunc-Immuno Tubes(マキシソープ、ヌンク-イムノ・チューブ)(Nunc(ヌンク社))に加え、および回転ホイール上で4℃にて一昼夜インキュベーションした。イムノチューブを空にし、および3回、ブロック(遮断)緩衝剤(PBSの2%の脱脂粉乳(ELK))において洗浄した。その後、イムノチューブを完全にブロック緩衝剤で満たし、および室温で1〜2時間インキュベーションした。加えて、イムノチューブを、一昼夜、抗myc抗体で被覆し、およびH5N1TVの5g/mlのmyc-タグ付きsHAを含有するブロック緩衝剤と共にインキュベーションした。プールしたファージ提示ライブラリーのアリコート(500〜1000μl、0.5×1013 -１×1013cfu、CTヘルパーファージを用いて増幅した(WO 02/103012参照))を、室温にて1〜2時間、10%の非加熱不活化のウシ胎仔血清および2%のマウス血清で補われるブロック緩衝剤においてブロックした。ブロックされたファージライブラリーを、イムノチューブに加え、および室温にて2時間、インキュベーションし、および未結合ファージを除去するために、洗浄緩衝剤(PBSにおける0.05%(v/v)のTween-20)を用いて洗浄した。結合したファージを、室温にて10分間、1mlの100mMのトリエチルアミン(TEA)を伴うインキュベーションによってそれぞれの抗原から溶出した。その後、溶出したファージを、pHを中和するために、0.5mlの1MのTris-HCl、pH 7.5と混合した。この混合物を、ほぼ0.3のOD 600nmまで37℃で増殖させたXL1-Blue(ブルー)E.coli培養物の5mlを感染させるために用いた。ファージは37℃にて30分間XL1-Blueの細菌の感染を許した。次いで、混合物を、室温にて3000×gで10分間遠心分離し、および細菌のペレットを0.5mlの2-トリプトンイースト抽出物(2TY)媒体において再懸濁した。取得した細菌の懸濁物を、テトラサイクリン、アンピシリンおよびグルコースによって補う2つの2TYアガープレートわたって別けた。一昼夜の37℃でのプレートのインキュベーション後、本質的
にはDe Kruifら(1995a)およびWO 02/103012によって記述されるように、コロニーをプレートからスクレイプし、および豊富にされたファージライブラリーを調製するために用いた。手短には、スクレイプされた細菌を、アンピシリン、テトラサイクリンおよびグルコースを含有する2TY媒体に接種するために用い、および〜0.3のOD 600nmにまで37℃の温度にて増殖させた。CTヘルパーファージを加え、および媒体がアンピシリン、テトラサイクリンおよびカナマイシンを含有する2TYに変えられた後、細菌が感染することを許された。インキュベーションを一昼夜30℃で続けた。次の日に、細菌を2TY媒体から、媒体におけるファージを、ポリエチレングリコール(PEG)6000/NaClを用いて沈殿された後、遠心分離によって除去した。最後に、ファージを、1%のウシ血清アルブミン(BSA)を有する2mlのPBSにおいて溶解し、フィルター殺菌され、および選定の次のラウンドのために用いた。
代わりに、全長のHAを発現する細胞系を用いるファージ選定を実行した。このためには、分離株A/ベトナム/1194/2004(H5N1TV)からの全長HAの完全なコード配列を含有する発現ベクターおよびインドネシアおよび中国(H5N1IC)において分離されるH5N1菌株の全長HAsを表すコンセンサス配列を、PER.C6細胞を形質移入するために用いた。抗HA抗体を用いるFlow cytometry(フローサイトメトリー、血球計算)の分析を、H5N1TV-およびH5N1IC-で形質移入するPER.C6細胞(データを示さず)によってHA発現を保証する(assure)ために、各々のファージ選定と平行に実行した。10×106個の未形質移入のPER.C6細胞を、0.5mlのプールされたファージライブラリー、および4%のELKを補う0.5mlのPER.C6培養媒体において再懸濁し、エンド-オバー-エンドのローターの組みにおいて1時間、5rpmで４℃にてインキュベーションした。ファージライブラリー/未形質移入のPER.C6細胞の混合物の300×gで4℃にて5分の遠心分離後、ファージ含有の上清は第2の時間、10×106個の未形質移入のPER.C6細胞について控除した。控除されたファージ調製物を次に、1×106個のHA発現性PER. C6細胞と混合し、および２時間、エンド-オバー-エンドのローターにおいて5rpmで4℃にてインキュベーションした。その後、細胞を、2分間3000×gで回転させ、および細胞ペレットを、未結合ファージを洗い流すために1mlのPBS/0.05%のTween(ツイーン)-20において再懸濁した。細胞を3000×gで2分間遠心分離し、および洗浄を追加の5回のために繰り返した。各々の洗浄後、細胞を新しいチューブに移した。結合したファージを、抗原から、5rpmで室温にてエンド-オーバー-エンドの組みにおいて10分間、1mlの100mMのTEAによりインキュベートすることによって溶出した。細胞を3000×gで2分間回転し、および溶出したファージを0.5mlの1MのTris-HCl、pH 7.5を含有する50mlのチューブへ移した。溶出されたファージのレスキューおよび繁殖は、上記に記載したように実行した。2つのラウンドの選定は、個々の単鎖ファージ抗体の分離前に実行した。選定の第2
ラウンドの後、個々のE.coliコロニーは、単クローン性ファージ抗体を調製するために用いた。本質的に、個々のコロニーは96ウェルプレートフォーマット(形式)において対数期にまで増殖させ、およびVCS-M13ヘルパーファージに感染し、その後、ファージ抗体の産生は一昼夜進行することが許された。ファージ抗体を含有する上清は、HA抗原に結合するために、ELISAにおいて直接的に用いた。代わりに、ファージ抗体を、PEG/NaCl-沈殿させ、およびフローサイトメトリー分析のためにろ過滅菌された。
（例3）
HA特異単鎖ファージ抗体のバリデーション(検証)
選定した単鎖ファージ抗体を、上記に記載の選別において得、ELISAにおいて、特異性、即ち、HA抗原への結合性について検証した。この目的のため、組換え型HA(Protein Sciences、CT、USA)を発現するバキュロウイルスおよびH5N1TVおよびH5N1ICの精製したsHAsをMaxisorpTMのELISAプレート上に陰性コントロール抗原として固定化した。抗myc mA 9E10(Roche(ロシュ社))を、MaxisorpTM ELISAプレート上で、陰性コントロール抗原として固定した。コーティング後、プレートを、0.1%のv/v Tween-20を含有するPBSにより3回洗浄し、および室温で1時間3%のBSAまたは2%のELKを含有するPBSにおいてブロックした。選定した単鎖ファージ抗体を、1時間、ブロックしたファージ抗体を得るために4%のELKを含有するPBSの等量においてインキュベーションした。プレートを空にし、3回PBS/0.1%のTween-20を用いて洗浄し、およびブロックした単鎖ファージ抗体をウェルに添加した。インキュベーションを、1時間進めさせ、それらのプレートをPBS/0.1%のTween-20で洗浄し、および結合したファージ抗体を、ペルオキシダーゼに共役する抗M13抗体を用いて検出した(OD 492nmの測定を用いる)。コントロールとして、手法を、単鎖ファージ抗体を用いずに、および陰性コントロール単鎖ファージ抗体を用いて、同時に実行した。IgMメモリーB細胞ライブラリーを用いる異なるHA抗原上の選定から、組換え型HAまたはsHAのいずれかのために特異的な92の独特な単鎖ファージ抗体を取得した。
代わりに、HAを発現性PER.C6細胞への結合のために選ばれた単鎖抗体の反応性を、フローサイトメトリー分析を用いて試験した。PEG/NaCl沈殿されたファージを、等容量のPBS/2%のELKを用い、氷上で30分間ブロックした。ブロックしたファージを、ペレット化した細胞に添加し(未形質移入のPER.C6およびHA発現性PER.C6細胞)、および氷上で1時間インキュベーションした。細胞を、PBS/1%のBSAを用いて3回洗浄し、次いで、300×gで1分の遠心分離を続け、および細胞に対する単鎖ファージ抗体の結合を、ストレプトアビジン-フィコエリトリンの複合体(Caltag(カルタグ社))が続くビオチン化した抗M13抗体(Fitzgerald、フィッツジェラルド社)を用いて可視化した。HA発現性PER.C6細胞を用いる選定を、異なる組換え型HAタンパク質を用いる選定の間、識別されない24の独特な単鎖ファージ抗体を提供した。
（例4）
HA特異的scFvsの特徴付け
選定した特異的な単鎖ファージ抗体(scFv)クローンからプラスミドDNAを取得し、およびヌクレオチドおよびアミノ酸の配列を、標準的な技術に従って定めた。ヌクレオチドおよびアミノ酸の配列およびVHおよびVL遺伝子のアイデンティティ(同一性)(Tomlinson(トムリンソン)IMら、V-BASE Sequence Directory(V-BASEシークエンス・ディクショナリー)、Cambridge(ケンブリッジ)英国：MRC Centre for Protein Engineering(MRCセンター・フォー・プロテイン・エンジニアリング)(1997年)参照)で、scFvsのものを、表6において描写する。HA-特異的な免疫グロブリンのCDR領域を表7において示す。
（例5）
選定した単鎖Fvs からの十分なヒト免疫グロブリン分子(ヒトモノクローナル抗体)の構築
scFvsの重鎖および軽鎖の可変領域を、IgG発現ベクターpIg-C911-HCgamma(ガンマ)1(配列番号141参照)、pIG-C909-Ckappa(カッパ)(配列番号142参照)、またはpIg-C910-Clambda(ラムダ)(配列番号143参照)における発現のために、制限消化によって直接的にクローン化した。すべての構築物のためのヌクレオチド配列を、熟練した職人に既知の標準的な技術に従って実証した(verified)。ヒトIgG1の重鎖および軽鎖をコード化する得られる発現構築物を、293T細胞における組合せにおいて一時的に発現させ、およびヒトIgG1抗体を含有する上清を、標準的な精製手法により取得し、および生産した。ヒトIgG1抗体を、H5に対する10および0.003のμg/mlの間の濃度範囲において滴定した(データを示さず)。SARS-CoV特異的抗体が、コントロール抗体として含まれた。IgG1分子は、単鎖ファージ抗体のために例証されるのと同じ反応性のパターンを示した。
抗体の重鎖および軽鎖のヌクレオチドおよびアミノ酸の配列は、CR6141、CR6255、CR6257、CR6260、CR6261、CR6262、CR6268、CR6272、CR6296、CR6301、CR6307、CR6310、CR6314、CR6323、CR6325、CR6327、CR6328、CR6329、CR6331、CR6332、CR6334、CR6336、CR6339、CR6342、CR6343およびCR6344ならびにそれらの重鎖および軽鎖の可変領域と呼ばれ、表8において与えられる。その後、HA発現性PER.C6細胞への抗HA IgGの結合をフローサイトメトリーによって研究した。HAに結合する抗体のためのフローサイトメトリー分析は、抗体CR6255、CR6257、CR6260、CR6261、CR6262、CR6268、CR6307、CR6310、CR6314、CR6323、CR6325、CR6331およびCR6344が、HA(H5N1TV)-発現性PER.C6細胞に結合することを示した(表9参照)。抗体CR6261およびCR6344はまた、未形質移入のコントロール細胞への結合を表示したが、しかし、取得した信号は、HA(H5N1TV)発現性PER.C6細胞への結合のために得られる信号よりもほぼ10倍低かった(表9参照)。HA発現性細胞および未形質移入のコントロール細胞へのコントロール抗体CR3014の結合は観察されなかった。
（例6）
H5N1インフルエンザウイルスのH5N1特異的IgGsによるインビトロ中和(ウイルス中和アッセイ)
選定したIgGsがH5N1感染が可能であったかどうかを定めるために、インビトロウイルス中和アッセイ(VNA)を実行した。VNAを、MDCK細胞上で実行した(ATCC CCL-34)。MDCK細胞を、MDCK細胞培養媒体(抗生物質、20mMのHepes(ヘペス)および0.15%(w/v)の炭酸水素ナトリウムを補い(完全なMEM媒体)、10%(v/v)の胎仔ウシ血清を補うMEM媒体)において培養した。アッセイにおいて用いたH5N1のリアソータント(再集合体)の菌株NIBRG-14を、4×103 TCID50/ml(1ml当たり50%の組織培養感染性用量(tissue culture infective dose))のタイター(力価)にまで、Spearman(スピアマン)およびKarber(カーバー)の方法に従って算出するタイターと共に希釈した。IgG調製物(200μg/ml)を、連続的に、二つ組みの(duplicate)ウェルにおける完全なMEM媒体において、2倍に希釈した(1:2 -1:16)。それぞれのIgG希釈の25μlを、ウイルス懸濁物の25μlと混合し(100のTCID50/25μl)、および37℃で1時間インキュベーションした。懸濁物を次いで、二つ組みで、50μlの完全なMEM媒体においてコンフルエント(集密的)なMDCK培養を含有する96ウェルプレート上に移した。使用に先立ち、MDCK細胞を、MDCK細胞培養媒体においてウェルにつき3×104細胞にて播種し、細胞がコンフルエンス(集密)に達するまで増殖させ、300〜350μlのPBS、pH 7.4を用いて洗浄し、および最後に、50μl完全なMEM媒体を各ウェルに添加した。接種した細胞を、33℃にて3〜4日間培養し、および細胞変性(病理学的な)効果(CPE)の発達について毎日観察した。CPEを、陽性コントロール(NIBRG-14接種をした細胞)および陰性コントロール(モック(偽)の接種をした細胞)と比較した。個々の細胞培養におけるCPEの完全な不存在は、保護と規定した。シープ(ヒツジ)抗-A/ベトナム/1194/04 H5N1インフルエンザウイルスHA(04/214、NIBSC)を、アッセイにおける陽性コントロールとして用いた。
加えて、培養を、免疫組織的な化学を使ってウイルスの存在について試験した。このために、培養の上清を捨て、およびそれらの細胞を15分間、40%(v/v)のアセトンおよび60%(v/v)のメタノールを用いて固定した。固定した細胞を、37℃で30分間、ブロッキングバッファ(200mMのNaCl、0.2%(w/v)のウシ血清アルブミン(BSA)、0.01%のチメロサール、0.2%(v/v)のTween-20、20mMのTris-HCl、pH 7.45)で、2%(w/v)のBSAおよび5%(v/v)のヤギ血清を補うものでブロックした。その後、細胞を、37℃で1時間、洗浄緩衝剤において1:1000に希釈した50μlのマウス抗インフルエンザＡモノクローナル抗体ブレンド(Chemicon(ケミコン社))を用いインキュベーションした。3回の洗浄緩衝剤による洗浄の後、洗浄緩衝剤における1:1000に希釈したビオチン共役したヤギ抗マウスIgG(Jackson(ジャクソン社))の50μlを加え、および37℃で1時間インキュベーションした。洗浄緩衝剤による別の3回の洗浄の後、染色を、1μlのH2O2/1mlのAEC溶液を含有するAEC溶液(0.12%(w/v)の3-アミノ-9-エチルカルバゾール、30%(v/v)のN-N-ジメチルホルムアミドおよび70%(v/v)のアセテート緩衝剤)を用い視覚化した。洗浄緩衝剤での3回の洗浄の後、染色を顕微鏡下に分析した。
ヒト抗HA抗体を、CR6255、CR6257、CR6260、CR6261、CR6262、CR6268、CR6307、CR6310、CR6314、CR6323、CR6325、CR6331およびCR6344と呼び、上記記載のVNAを受けさせた。すべての抗体は、H5N1 リアソータントな菌株NIBRG-14を中和した。これらの抗体がMDCK培養をCPEに対して保護する濃度(μg/mlにおいて)は、表10において与える。CPEが観察されたウェルでは、ウイルスの存在が、免疫組織化学的な染色によって確かめられた(データを示さず)。
より正確にH5N1特異的IgGの中和効力(potency)定めるために、NIBRG-14を用いるインビトロでのウイルス中和アッセイを繰り返したが、しかし、このときは、IgG調製物をさらに希釈した。IgG調製物(200μg/ml)を、連続的に、完全なMEM媒体において2倍に希釈し(1:1 - 1:512)、および上記記載のようにVNAにおける4つの組みのウェルにおいて試験した。ヒト抗H5N1抗体で、CR6255、CR6257、CR6260、CR6261、CR6262、CR6268、CR6272、CR6307、CR6310、CR6314、CR6323、CR6325、CR6327、CR6328、CR6329、CR6331、CR6332、CR6334、CR6336、CR6339、CR6342、CR6343およびCR6344と呼ばれるものの中和効力をVNAにおいて定めた。すべての抗体は、CR6272およびCR6339を除き、H5N1 リアソータントな菌株NIBRG-14を中和した。これらの抗体がMDCK培養をCPEに対して保護する濃度(ウイルスの100のTCID50の存在において、μg/mlでのもの)を、表11において描写する。CPEが観察されたウェルでは、ウイルスの存在を、免疫組織化学的な染色によって確かめた(データを示さず)。
（例7）
H5N1特異的IgGのイムノブロット分析
抗HA抗体の特異性をさらに研究するために、異なる組換え型血球凝集素インフルエンザA抗原を、抗HAイムノブロット分析が続く還元性条件の下にSDS-PAGEを受けさせた。HA0ポリペプチドを、HA1およびHA2のサブユニットから構成する。抗体CR5111、H5N1特異的コントロール抗体は、HA1サブユニットおよびH5N1TVのsHAの無傷の(未開裂の)HA0ポリペプチドを認識した(図1、右部分、レーン1参照)。加えて、CR5111は、組換え型HAのHA1サブユニット、サブタイプH5(A/ベトナム/1203/2004(H5N1)、配列番号110参照)で、昆虫細胞においてバキュロウイルスベクターを用いて生産されたものを認識した(Protein Sciences、CT、USA)(図1、右部分、レーン2)。未開裂のHA0ポリペプチドを、このHA調製物において検出されなかった。レーン1および2のHAサブユニットの間のサイズ(大きさ)の違いは、昆虫細胞およびPER.C6細胞において発現されるHAの異なるグリコシル化によって説明されうる。CR5111は、組換え型HA、サブタイプH1(A/ニューカレドニア/20/99(H1N1))(図1、右部分、レーン4参照)または組換え型HA、サブタイプH3(A/ワイオミング州/3/2003(H3N2))(図1、右部分、レーン3))のHA1および/またはHA0ポリペプチドを認識しない。
抗体CR6307およびCR6323は、H5N1TVのHA2サブユニット(図1、左および中央部分、レーン1参照)および組換え型HA、サブタイプH5(A/ベトナム/1203/2004(H5N1)(図1、左および中央部分、レーン2参照)を認識した。興味深いことに、無傷の、未開裂のHA0ポリペプチドにおいての存在としてのHA2サブユニットは認識されない。明らかに、CR6307およびCR6323によって認識されるエピトープは、HA0の開裂により接近可能(accessible)になる。加えて、抗体CR6307およびCR6323は、組換え型HAのHA2サブユニット、サブタイプH1(A/ニューカレドニア/20/99(H1N1))(図1、左および中央部分、レーン4参照))を認識するが、しかし、組換え型HAのHA2サブユニット、サブタイプH3(A/ワイオミング州/3/2003(H3N2))(図1、左および中央部分、レーン3参照)、昆虫細胞においてバキュロウイルスベクターを用いて生産される双方の組換え型HAsは認識しない(Protein Sciences、 CT、USA)。中和性抗体CR6307およびCR6323の結合性部位が、サブタイプH1およびH5のインフルエンザＡ菌株の範囲内に保存されるので、結合性部位を備える分子は広く交差反応性の抗インフルエンザ抗体反応を誘導することが可能なワクチン(その1部分)として考えることができた。
抗体CR6307およびCR6323の次に、CR6141、CR6296、およびCR6301と呼ばれる抗体を、イムノブロット分析において用いた。3つの抗体の各々は、H5N1TVのsHAおよびと組換え型HA、サブタイプH5のHA2サブユニットに結合することができた(A/ベトナム/1203/2004;H5N1)(データを示さず)。
（例8）
H5N1特異的IgGのサブユニット特異性を決定するためのFACS分析
抗H5N1抗体の結合へのHA1サブユニットの貢献を評価するために、アッセイをセットアップ(構成)し、そこでは、HA1サブユニットがHA発現性PER.C6細胞から放出される。HA発現性PER.C6細胞を、PBS、pH 7.4を用いて3回洗浄し、および10分間、酸性化したPBS(pH 4.9)においてインキュベーションした。その後、細胞を、PBS、pH 7.4を用いて洗浄し、PBS、pH 7.4において、HA0分子をジスルフィド結合で連結したHA1およびHA2のサブユニットにまで開裂させるために、10μg/mlのトリプシンを用いて10分間処置した。最後に、細胞を、PBS、pH 7.4において、HA1サブユニットを膜定着したHA2サブユニットから放出させるために、20mMのDTTにおいて20分間インキュベーションした。未処置のおよび酸/トリプシン/DTT-処置した細胞を、1%w/vのBSAを含有するPBSにより2回洗浄した。フローサイトメトリー分析のために、2.5×105細胞が、染色当りに用いた。処置した細胞および未処置の細胞の陰性コントロール抗体CR3014を用いる染色は観察されなかった。抗体CR5111は、イムノブロット分析においてHA1サブユニットに結合し、未処置HA発現性PER.C6細胞の集団を染色するが、その一方、処置した細胞は認識されなかった(データを示さず)。このことは、CR5111がHA1サブユニットを認識するという更なる証明を提供する。処置した細胞および未処置の細胞を、抗体CR6307およびCR6323によって同様の程度に染色した(データを示さず)。HA1サブユニットの放出は、明らかに、抗体がHA2サブユニットに結合するイムノブロット分析からの結果をさらに立証するこれらの抗体の結合に影響を及ぼさなかった。抗体CR6325およびCR6331は、未処置の細胞に結合するが、一方、処置した細胞への結合は未処置の細胞への結合と比べ著しく減らされた（データを示さず）。これは、抗体のそれらのエピトープのための親和性が酸処置の際に誘導される立体配置上の(conformational)変化によって、またはHA1およびHA2のサブユニットを連結するジスルフィド結合の減少によって著しく減らされることを示唆する。
（例9）
ファージ抗体およびIgGsでの血球凝集素競合ELISA
非オーバーラップの、非競合性のエピトープに結合する抗体を識別するために、血球凝集素競合ELISAを実行した。Nunc-ImmunoTM Maxisorp F96プレートを、一昼夜、4℃にて、PBSにおいて、0.5μg/mlの組換え型HA、サブタイプH5(A/ベトナム/1203/2004(H5N1)(Protein Sciences)をコート(被覆)した。ウェルを室温で1時間、2%w/vの脱脂粉乳を含有する300μlのPBS(ブロッキング溶液)により洗浄する前に、未コートのタンパク質を洗い流した。ブロッキング溶液を捨て、およびブロッキング溶液における50μlの10μg/ml抗H5N1 IgGを、ウェル当たり室温で1時間インキュベーションした。その後、50%の最大限の結合(以前のアッセイにおいて定めるようなもの)を招く濃度の２倍の濃度におけるブロッキング溶液において50μlのファージ抗体を、ウェル当たりに加え、および室温で別の時間インキュベーションした。ウェルを、0.1%のv/vのTween-20を含有するPBSにより3回洗浄した。結合したファージ抗体を、ペルオキシダーゼ共役抗M13抗体を用いて検出した。ウェルを上記に記載したように再び洗浄し、およびELISAを、さらに100μlのOPD試薬(Sigma)の添加によって展開した(developed)。反応を50μlの1MのH2SO4を加えることによって停止させ、及び次いで492nmのODを測定した。ファージ抗体の結合を、IgGの存在下に、IgGが不存在な場合での結合のパーセンテージとして表し、それは100%に設定された。H5血球凝集素のHA1サブユニットにおけるエピトープを認識する、ファージ抗体SC05-111、および対応するIgG CR5111を、コントロールとして含めた。
結果は、大部分のファージ抗体およびIgGが、組換え型HA、サブタイプH5(A/ベトナム/1203/2004(H5N1))上でオーバーラップする(重なり合う)エピトープに結合することを指し示す(データを示さず)。SC05-111ファージ抗体の結合は、CR5111のIgGによってブロックされ、しかし任意の他のIgGsによってはブロックされず、他のIgGがCR5111の結合領域と異なるエピトープを認識することを示唆した。5つのIgGs、CR6262、CR6272、CR6307、CR6339、およびCR6343は、結合のために、残りのIgGよりも低い(狭い)範囲に競合した(25%より多くの残りの結合)。IgGsでCR6262、CR6272、CR6339およびCR6343のために、これはHAについてのより一層低い親和性によって説明することができる。これは、これらの抗体に対応するファージ抗体が他のIgGによってより一層効率的に離れて競合したという観察結果により支持される。ファージ抗体SC06-307の結合は、IgG CR6307によってブロックされるが、しかし、他のIgGsによってはあまり効率的でない。これは、SC06-307およびCR6307が他のIgGsによって認識されるエピトープと異なる独特なエピトープを認識することを示唆する。
（例10）
抗H5N1のIgGsを用いる交差反応性ELISA
抗H5N1抗体のエピトープがサブタイプH5以外のHAsの間で保存されるかどうかを試験するために、血球凝集素交差反応性ELISAを実行した。Nunc-ImmunoTM Maxisorp F96プレート(Nunc)を、PBSにおいて、0.5μg/mlの組換え型HA、サブタイプH1(A/ニューカレドニア/20/99(H1N1))、サブタイプH3(A/ワイオミング州/3/03(H3N2))、サブタイプH5(A/ベトナム/1203/04(H5N1))、サブタイプH7(A/オランダ/219/03(H7N7))およびサブタイプH9(A/香港/1073/99(H9N2))(Proteoin Sciences)を用いて、4℃で一昼夜コートした。追加的に、A/ニューケレドニア/20/99(H1N1)およびリアソータントな菌株NIBRG-14(A/ベトナム/1194/04(H5N1))の0.5μg/mlのHAを含有するBPL不活性ウイルス調製物を、PBSにおいて一昼夜プレート上でコートした。ウェルを、未コートのタンパク質を除去するために、0.1%v/vのTween-20を含有するPBSにより3回洗浄し、およびその後、室温で1時間2%w/vの脱脂粉乳を含有する300μlのPBS(ブロッキング溶液)を用いてブロックした。ブロッキング溶液を捨て、およびブロッキング溶液における5μg/mlの抗H5N1抗体のウェル当たり100μlを室温で1時間インキュベーションした。ウェルを、0.1%v/vのTween-20を含有するPBSにより3回洗浄し、および結合した抗体をペルオキシダーゼ共役マウス抗ヒトIgG抗体(Jackson)により検出した。反応を、上記のように展開し、および測定した。表12はすべての抗H5N1のIgGsが、組換え型HA、サブタイプH5(A/ベトナム/1203/2004(H5N1))およびNIBRG-14のBPL不活性ウイルス調製物で、それは株A/ベトナム/1194/2004(H5N1)のHAを含むものに結合したことを示す。サブタイプH3およびH7の組換え型HAsは、試験した抗H5N1 IgGsのいずれによっても認識されなかった。興味深いことに、すべての抗H5N1 IgGsは、CR5111およびCR6307を除いて、サブタイプH1およびH9の組換え型HA、および菌株A/ニューカレドニア/20/99(H1N1)のBPL不活性ウイルス調製物に結合した。これは、大部分の抗H5N1 IgGsのエピトープが異なるサブタイプのHA分子の間で保存されることを指し示す。
（例11）
抗H5N1 IgGsのエピトープマッピング
Okuno(オクノ)ら(1993年)およびSmirnov(スミルノフ)ら(1999年)は、インフルエンザAウイルスサブタイプH1、H2およびH5のHAsによって分け合う共有のエピトープの存在およびこのエピトープに対して指向されるネズミ単クローン性抗体C179によるこれらのサブタイプの中和を論証した。この立体配置上のエピトープを、HA1およびHA2のサブユニットにおいて位置付ける2つの異なる部位から構成する。双方の部位は、HA分子のステム領域の中央において、近接近して位置付けられる。上記の抗HA抗体がこのエピトープを認識するかどうか評価するために、この領域においてアミノ酸置換を含むHA分子が作成された。
抗体C179(Takara Bio Inc.(タカラ・バイオ社))によって認識されるエピトープは、HA1サブユニットの残基318-322およびHA2サブユニットの残基47-58を包含する領域に起因した(Okunoら1999年によって記述されたようなアミノ酸番号付け)。HA1サブユニットにおける位置318でのThrからLysへの置換またはHA2サブユニットにおける位置52でのValからGluへの置換を運ぶHAsを含有するエスケープウイルスは、C179によってもはや認識されず、および中和されなかった。これらの変異体(位置318のThrからLysへ、変異体I、位置52のValからGluへ、変異体II)、HA1サブユニットにおける位置320でのLeuからMetへの置換(変異体III、Met320はサブタイプH3およびH7のHA1の領域318〜322において存在する)、HA2サブユニットにおける位置54でのLeuからMetへの置換(変異体IV、Arg54はサブタイプH3およびH7のHA2の領域47〜58において存在する)およびHA2サブユニットにおける位置57でのAspからAsnへの置換(変異体V、Asn57は菌株A/香港/156/97(H5N1)のHA2の領域47〜58において存在する)を、分離株A/ベトナム/1194/2004(H5N1TV)からの十分な長さのHAにおいて導入し、およびPER.C6細胞において形質移入した。上記のように、C179およびこれらの変異体を発現するPER.C6細胞に対するヒト抗HA抗体の結合性を、FACS分析によって評価した。抗体CR5111は、HA1サブユニットにおけるエピトープに対して指向されるもので、および多クローン性抗H5ヒツジ血清は、形質移入したPER.C6細胞(データを示さず)によって、H5N1TVおよびHA変異体の発現を確かめた。陰性のコントロール抗体CR3014を用いる、または抗体の不存在における染色は観察されなかった(データを示さず)。予想通りに、抗体C179は、変異体ＩおよびIIを認識せず、それはC179エスケープウイルスにおいて同じアミノ酸置換をHAsとして運んだ(Okunoら、1993年参照)。さらにまた、C179は変異体IVに結合せず、一方では、変異体IIIおよびVへのC179の結合は影響を受けなかった。反応性の類似するパターンを抗体CR6342について観察し、それは抗体C179およびCR6342が類似したエピトープを認識することを示唆する。変異体IIを除いては、抗体CR6261、CR6325およびCR6329は、すべての変異体を認識した。これは、抗体CR6261、CR6325およびCR6329のエピトープがC179のものと異なることを示唆する。HA1サブユニットにおける置換がこれらの抗体の結合を抑止し(abrogate)なかったので、それらのエピトープはHA2サブユニットにおいてたぶん位置付けられる。抗体CR6307およびCR6323は、すべての変異体を認識し、それはまた、これらの抗体のエピトープがC179のものと異なることを示唆する。変異体の配列および抗体の結合の概要を、表13において与える。結論的に、結果は抗体CR6261、CR6325、CR6329、CR6307およびCR6323が、ネズミモノクローナル抗体C179によって認識されるエピトープにおける変異を、およびその結果として、この抗体によってもはや中和されないものとして持つインフルエンザウイルスに結合する理想的な候補であり、およびそれを中和することを指し示す。
（例12）
致死的なH5N1のインビボでのチャレンジ(攻撃)に対するヒトIgG単クローン性抗体の予防的活性
インフルエンザH5N1菌株A/香港/156/97の致死的な用量を、ヒトの単クローン性IgG抗体CR6261、CR6323およびCR6325の予防的効果を調査するために、マウスに投与した。ある日感染の前に、10匹のマウスの8つの群の各々で、抗体の異なる用量を、腹膜内に注入した。陰性コントロールとして、マウスの1つの群で、非関連のコントロール抗体(CR3014)を注入した。臨床学的徴候、体重減少および死亡率を、感染の後、21日まで監視した。この調査を、インビボでの単クローンヒト抗H5N1 IgG抗体の予防的効果を評価するために実行した。
H5N1菌株を、初めに、呼吸器疾病を患う3歳の小児から取得した。ウイルスを、MDCK細胞上で2回継代した。マウスを感染させるのに用いるバッチ[タイター8.1 log TCID50/ml]を、胚形成の(embryonated)卵でにおいて1度繁殖させた。
80匹の雌性の7週齢のBalb/cマウスを、H5N1ウイルスを用いるチャレンジに先立って次の注入を用いて、10匹のマウスの8つの群れに各々別けた。すなわち
１．15mg/kgのCR6261。
２．5mg/kgのCR6261。
３．2mg/kgのCR6261。
４．0.7mg/kgのCR6261。
５．15mg/kgのCR6323。
６．15mg/kgのCR6325。
７．500μlのラビット抗H5N3免疫血清(100×希釈したもの)。
８．15mg/kgのCR3014。
すべての動物を、調査の開始に先立って6日の期間の間、順応させ、および維持した。ある日H5N1ウイルスでの感染前に、500μlの抗体を腹腔内注入によって投与した。動物をウイルスの25のLD50(ほぼ50μl)で日0にて鼻腔内に接種し、21日間あとに続けた。動物への接種を完了した後、投与されたウイルスの実際の用量を、残る接種材料(inoculum)から少数(2、3くらい)の反復した試料を滴定することによって見積もった。接種材料のウイルスのタイター(TCID50/mL)をMDCK細胞上で測定した。結果は、ウイルスの不活化が接種材料の調製または管理の間に無意識に起こらなかったことを示した。群8は陰性コントロールとして働いた。この群における動物は、日0上にて無関係な単クローン性抗体(CR3014)を注入された。群7は、陽性コントロールとしての働きをすると思われた。この群においてのマウスは、H5N3インフルエンザウイルスに対して上昇するラビット多クローン性血清抗体を注入した。
臨床学的徴候および重量を、ウイルス接種後、日-1から21日まで毎日評価した。臨床学的徴候をスコアリングシステムを用いてスコア化し(scored)(0 =臨床学的徴候なし、1 =ラフコート(rough coat)、2 =ラフコート、より一層少ない反応性、取扱いの間受動的、3=ラフコート、ロールアップ(クルクル巻いた)、レイバードブリージング(laboured breathing)、取扱いの間受動的、4=ラフコート、ロールアップ、レイバードブリージング、胃の上で、その背後上に据え付けられるときロールバックする)、および記録した。生き残っている動物を安楽死させ、および日21において出血させた。血清IgG抗体レベルの分析のために、血液試料を、日0において各マウスから収集した。血清を、標準的な手法に従って調製した。感染後の血清を生じさせるために、血液を日21において生き残っている動物から収集した。血清を、ウイルス特異的な抗体の存在のためにアッセイするまで、-20℃±2℃にて保存した。血清を、H5N1 HK/97基材(サブストレート)の4のHAUを用いて、複製して試験した。タイターを、HIを示し、1/10の希釈剤にて開始する最も高い血清希釈の逆数(reciprocal of)として表した。
すべてのマウスは活動的(active)であり、および順応期間の間に病気の徴候を示すことなく健康に見えた。平均臨床スコア(各群において生存する動物の数によって別けられる合計の臨床スコア)を、日につき算出し、および結果を、図2(群についての平均臨床スコア)、表14(臨床スコア)および表15(呼吸困難(distress))において指し示す。陰性の臨床学的徴候の発症を、陰性コントロールのAb CR3014により接種した群(群8)における感染の後、日3にて観察した。呼吸困難は日6において最初に記録され、および1から4までの日の間続いた。臨床学的徴候は、15mg/kgのCR6325により処置したマウス(群6)において観察されなかった。群5(CR6323)において、1匹のマウスは日5から8までマイルドな(軽い)臨床学的徴候(スコア1)を示し、およびその翌日死んだ。群1において、1匹のマウスは、任意の以前の臨床学的徴候でも示さずに、日13において死んだ。CR6261のより一層高いAb用量は、平均して後の発症およびより一層低い臨床スコアと相関した。呼吸困難は、最も低い用量群(0.7mg/kg)において注目され、より一層高い用量群(2、5および15mg/kg)においてはすでなかった。すべてのマウスは、日9および13の間で(群2、3および5)、または、日17から(群4)、それらの臨床学的条件における改善を示した。ラビット多クローン性抗体を注入したマウス(群7)は、3日以内に重度の病気を発生させ、および次いで死亡し、ラビット抗体がインビボでの感染に対して保護しなかったことを実証した。2体の動物(群4での1体および群8での1体)を日10において安楽死させ、調査から取り除き、それらの動物が重度な病気であると考えられたからである(スコア4)。
H5N1で感染された動物は、体重減少の高変動度を示した(図3)。比例的な体重減少および発症の瞬間(moment of onset)は抗体の用量に関連した。抗体の最も高い用量により処置される群において、重量は、齢関連重量増加と一致して時間にわたって着実に増加した。CR6261の最も低い用量により接種した動物の群は、抗体のより一層高い用量を受ける動物の群よりも速く重量を失った。重量減少の総量は、より一層低い用量の群において、それぞれ、2および0.7mg/kgのCR6261を接種される群における開始される重量の約15および40%の平均重量損失を伴い、大きかった。より一層低い用量の群において、平均体重は、動物が若干の臨床学的な改善を示したのと同時に再び増加するように見えた。
図4は、各日において群につき生き残っているマウスの数を示す。投与される抗体の量および平均的生存時間の間のはっきりした用量反応関係が存在した。図5は、用量反応性の様式において死亡率を示す。最初のマウスは、最も低い用量群(0.7mg/kg)において、および陰性コントロール、CR3014を受けたマウスの群において、接種後の７日に死亡した。動物の50%未満を、0.7mg/kgのCR6261抗体が投与されたときに、死亡に対して保護した。しかし、9から10まで匹数のマウスは、抗体の最も高い用量が投与されたとき、生存した。陰性コントロール群(CR3014)のマウスは生存せず、本当に、100%の致死的チャレンジの用量がこの調査において用いられることを示した。
IgG抗体が感染に対して完全な保護を与えることができるかどうか評価するために、HIアッセイを、15mg/kgのCR6261を受けたマウス(群1)から日21にて血清を収集して実行する。このデータは、臨床学的所見(manifestation)を伴わないにもかかわらず、マウスがH5N1感染症を経験したことを示すべきである。
これらの結果は、少なくとも3つのヒト抗H5N1抗体が、本明細書において開示するように識別され、および発達し(CR6261、CR6323およびCR6325)、各々別々にインビボでインフルエンザH5N1の致死用量に対する保護を提供することができることを示す。投与されるCR6261抗体の量および平均的生存時間の間のはっきりした用量反応関係を観察した。それらの結果は、試験される各々の単クローン性抗H5N1 IgG抗体が、15mg/kgの用量での感染に先立ちある日に投与されるとき、マウスにおいてH5N1感染の臨床学的所見を防止することができたことを示す。
（例13）
インフルエンザH5N1型ウイルスのインビボでの致死的な用量での感染の後に投与したヒト単クローン性抗H5N1抗体の保護的および治療上の効果
調査を、本明細書において開示するような、単クローン性抗体の治療上の効果を試験するために実行し、CR6261によって、感染後モデルにおいて、インビボでの致死的なH5N1 A/HK/97インフルエンザウイルスのチャレンジに対して例証した。ウイルスバッチおよびマウスのタイプ、および齢は、例12において用いるものと同じであった。陰性コントロールとして、マウスの1つの群に、非関連のコントロール抗体(CR2006)を注入した。臨床学的徴候、重量減少および死亡率を、感染の後21日まで監視した。
58匹の雌性の7週齢のBalb/cマウスを、感染の後、以下の通り、異なる段階にて抗体を受けた5つの群において別けた。すなわち
１．10匹のマウス、感染後4時間での15mg/kgのCR6261
２．14匹のマウス、感染後1日での15mg/kgのCR6261
３．10匹のマウス、感染後2日での15mg/kgのCR6261
４．10匹のマウス、感染後3日での15mg/kgのCR6261
５．14匹のマウス、感染後1日での15mg/kgのCR2006
すべての動物を、調査の開始前に、6日の期間の間順化させた。動物を、H5N1インフルエンザウイルス(ほぼ50μl)の25のLD50で日0において鼻腔内に接種し、および21日間監視した。投与するウイルスの実際の用量を、動物の接種が完了した後、残る接種材料からの少数の反復した試料を滴定することによって見積もった。接種材料のウイルスタイター(TCID50/mL)をMDCK細胞上で定めた。それらの結果は、ウイルスの不活化が、その接種材料の調製または投与の間、意図せずには起こらなかったことを示した。接種の後の特定の時点で、500μlの抗体を、腹腔内注射によって投与した。群5は陰性コントロールとしての働きをした。この群の動物に、無関係な単クローン性抗体(CR2006)を、日1の感染後に注入した。
臨床学的徴候および重量を、日-1から日21まで毎日評価した。臨床学的徴候を、例12において記載するように、0から4までのスコアリング範囲を用いて、スコア化した。生存する動物を日21において安楽死させ、および出血させた。病理学的変化の評価のために、群2および5の4体の動物を、チャレンジの後、日6において死亡させた。これらの動物を、日0において既に予備選択し(pre-selected)、および他のものから離れて設定した。その理由のため、群2および5を、14体の動物を用い、選定後に残る10匹のマウスを用いて出発させた。臨床学的徴候および重量を、ウイルス接種の後、日-1から21日まで毎日評価した。
すべてのマウスは活動的であり、および順応期間の間に病気の徴候を示すことなく健康に見えた。平均臨床スコア(各群において生存する動物の数によって別けられる合計得の臨床スコア)を、日につき算出し、および結果を、図6(群当りの平均臨床スコア)、表16(臨床スコア)および表17(呼吸困難)において指し示す。明らかに、すべての群は、感染の後、日1ですでに臨床学的徴候を示したマウスを含んだ。抗体が投与された時間により、臨床学的徴候は減少し、およびすべての群において、臨床学的徴候は日15では再び欠けた。コントロール群5において、すべての動物は重度の臨床学的徴候で苦しみ、およびすべての動物は死亡し、またはそれらが、日9で、臨床スコアでレベル4に達したので、安楽死させた。これは、再び、インフルエンザウイルスの致死的な用量が動物に投与されたことを示す。群1において、動物は感染後の4時間にすでに抗体を受け、若干の動物は臨床学的徴候を展開せず、一方では、他はそうした。スコア化することができた臨床学的徴候を見せた動物の数を、表16において提供する。インフルエンザウイルスが呼吸器の器官に劇的な効果を及ぼすことができるので、また、呼吸困難を測定し、および本明細書において、表17において提供した。図7および表18は、すべての群のために生存する動物の数および死亡率をそれぞれ示す。未知の理由のために、感染の後4時間に抗体を受けた群1において1体の動物は、日10にて死亡した。インフルエンザ感染の後、抗体を受けた群のすべての残りの動物は、生存し、および日21では健康であった。これは、明らかに、すべてのマウスから得られた体重データにおいて示される。図8は、調査の21日の間に、マウスの各群における平均体重を示す。すべてのマウスの体重が感染により減少したが、体重は抗体の投与の後、正常なレベルに戻った(return)。明らかに、正常な体重レベルへの戻りは抗体処置の時期(タイミング)に依存し、そこでは、曝露の後4時間で処置した動物は、速く回復し、および日7にて正常なレベルに達し、感染の後3日に処置した動物は、日17にてそれらの通常の体重に達した。すべての動物は、日21で、調査の終了での同様なおよび健康な体重に達した。明らかに、陰性コントロール抗体を受けたすべての動物は体重を取り戻す(regain)というわけではなく、および測定が日9での死亡で停止した。
これらの結果は、本明細書において開示するように、単クローン抗体での感染後処置がH5N1インフルエンザウイルスに対して指向し、および抗体CR6261によって実証したもので、本明細書におけるマウスにおいて示したように、哺乳類の対象体を、H5N1インフルエンザウイルスの致死的な用量を用いるチャレンジの後に、救うことができることを示します。遅い段階でさえも、感染後3日で、抗体は、臨床学的徴候を、臨床学的徴候がもはや監視されることがないレベルにまで逆転させることができる。まったく、感染後日21で、すべての抗体処置した動物は、正常な体重レベルに達し、および任意の残りの臨床学的徴候を示さなかった。
（例14）
H5N1のHAに対して指向する単クローン性抗体を用いる異質インフルエンザサブタイプによる致死的なチャレンジに対するインビボでの交差保護
上記で開示したように(例11)、本発明の抗体の若干は明らかにH5血球凝集素タンパク質のHA2ドメインにおける単一のエピトープを認識する。例7において、本発明の一定の結合性分子が非立体配置上の様式においてHA2エピトープと相互作用することができることが示され、言い換えると、本明細書において開示するように、血球凝集素タンパク質が折られる形態は、これらの抗体の中和活性および保護的効果を妨害するように思われない。
抗原性ドリフト(=タンパク質のHA1領域内の免疫優性領域の変化で、毎年更新されるインフルエンザワクチンのための必要性が招かれる)の傾向がないインフルエンザ血球凝集素タンパク質部分の配列は、この技術において既知である。CR6261、CR6325およびCR6329によって認識されるHA2におけるエピトープは、アミノ酸配列GVTNKVNSIIDK(配列番号368、表13参照)に含まれ、およびまた、H1およびH9サブタイプの血球凝集素タンパク質において存在するものであり、表22を参照。例10において、本発明の結合性分子のエピトープへの相互作用がH5からのHAに制限されず、しかしまた、H1およびH9からのHAが認識されたことが示された(表12参照)。それゆえに、本発明の結合性分子は、異なるインフルエンザ血清型からの多重のHAタンパク質において存在するエピトープを認識する。
インビボでの治療のためのこれらの抗体の交差適用性(cross-applicability)を調査するために、実験を、例13において記載する実験の投薬予定(dosing schedule)と一致したマウスにおいて実行した。本実験では、1918年の汎発性大流行に関連し、および目下季節的にヒトにおいて循環する非常に高い、致死的な用量の別のインフルエンザウイルス、即ち、H1N1を、マウスに投与した。その後、マウスを、本発明の抗体、CR6261によって実証するもので処置し、および臨床学的徴候、呼吸困難および体重を、感染後、3週間監視した。以下に概説するように、H5N1に感染するとき、マウスが救うことができたこれらの結合性分子が、H1N1に感染するときにまた、哺乳類の対象体を救うこともできたことが判明した。
調査は、モノクローナル抗体の治療上の効果を試験するため、CR6261によって、インビボでの致死的なH1N1 A/WSN/33インフルエンザウイルスのチャレンジに対する感染後モデルにおいて、実証した。ウイルスバッチを、ATCC(VR-219)から取得し、および胚形成の卵において１度繁殖させた。タイターは8.5のlog TCID50/mlであった。陰性コントロールとして、マウスの1種の群に、無関係な単クローン性抗体(IgG1、λは‘CR57’と称し、アイソタイプは陰性コントロール抗体に合うもの)を注入した。臨床学的徴候、体重減少および死亡率を、感染の後21日まで監視した。
50匹の雌性の6から8までの週齢のBalb/cマウスを、感染に関連する異なる段階にて抗体を受けた5つの群において次のように別けた。すなわち
１．10匹のマウス、感染より前の1日の15mg/kgのCR6261
２．10匹のマウス、感染後1日の15mg/kgのCR6261
３．10匹のマウス、感染後2日の15mg/kgのCR6261
４．10匹のマウス、感染後3日の15mg/kgのCR6261
５．10匹のマウス、感染後1日の15mg/kgの陰性コントロールCR57
すべての動物を、調査の開始前に少なくとも4日の期間の間順化させ、および維持した。動物に、H1N1ウイルスの致死的な用量(6.6のlog TCID50、25×のLD50の均等量)を日0において、ほぼ50μlにて鼻腔内に接種し、および監視した。接種の前/後の特定の時点で、500μlの抗体を、腹腔内注入によって投与した。マウスの全体的な健康(General health)を、調査の間中監視した。臨床学的徴候および重量を、日-1から日21まで毎日評価した。例12および13において開示するように、臨床学的徴候を、0から4までに及ぶスコアリングレート(評定)によりスコア化した。生存する動物を、日21にでは安楽死させ、および出血させた。
各々の群のための死亡率を表19において提供し、調査の間中各調査群における生きているマウスの数を示す。調査プラン(計画)において予め規定するように、2匹のマウスは、接種事象の後短時間に死亡し(日1で、群２において１種および群3において１種)、分析から除外した。コントロール群5におけるすべてのマウスを、日9にてH5N1での以前の調査におけるのと似て死亡させた(表18参照)。H1N1のこの致死的なチャレンジの用量を生き残る動物のパーセンテージをまた、図9においてプロットする(図示する)。各群において関連する臨床学的徴候を示すマウスの数を、表20において提供する。臨床学的徴候は群1において観察されず、一方では、群2、3および4において、若干のマウスは接種により日14の後、完全に消えた臨床学的徴候を示した。群5におけるすべての動物は、日2にて臨床学的徴候を示し始めた。この群のマウスは回復しなかった。カテゴリー2または3において呼吸困難を示すマウスの数を表21において与える。臨床学的な困難は、群1〜4において日13の後、もう観察されず、一方では、コントロール群5においてすべての残りのマウスが重度の呼吸困難で苦しんだ。
図10は、各調査群でのマウスの平均体重を示す。明らかに、測定は日8の後、群5におけるマウスのために提供されない。この図から分かるように、抗H5N1抗体を受け、および臨床学的徴候から回復したすべてのマウスは、日21でそれらの期待される体重レベルを獲得した。
感染の前、または感染の後、投与されるとき、抗体はこれらのマウスを保護することができた。顕著に、感染の用量はむしろ高く、25×LD50用量で、高いタイターで肺において存在するときでも、抗体がウイルスに対する非常に強い保護を提供することが示された。これは、臨床的に関連性があり、それは、H5N1に似て高度に病原性のウイルスが、感染後、高いタイターまで複製するからであり、およびこれらの高いウイルスの負荷が感染したヒトにおいてしばしば重度の予後(outcome)を関連づけた。さらに、すべての保護されたマウスは、時間とともに完全にこの致死的な感染から回復した。HA2領域、抗原性ドリフトの傾向がない領域において(単一の)エピトープに結合する本発明の抗H5N1抗体(CR6261、CR6325およびCR6329のようなもの)は、多重のインフルエンザ血清型に対してインビボで交差保護を提供し、高度に変異に敏感なHA1領域に対する抗体の必要性を回避すると結論される。H5インフルエンザ血清型からのHAにおいて存在するだけであるエピトープによって制限されない本発明の結合性分子がHA2の安定な領域における同じエピトープを含むすべてのインフルエンザ血清型で、H1N1のようなもの、およびH2、H6およびH9の血球凝集素タンパク質を備えるインフルエンザウイルスの予防上、または治療上の処置において用いることができることは理解すべきである。
（例15）
親和性の調査
アフィニティ(親和性)の調査を、25℃および37℃でのBIAcore(BLAコア)3000のアナリティカルシステム(分析的システム)での表面のプラスモン共鳴分析を、75μl/分の流速でのランニング(移動)緩衝剤としてHBS-EP(Biacore AB(ビアコア社)、Sweden(スウェーデン国))を用いて実行した。IgGを、アミンカップリング(接合)を用いる研究等級のCM5 4-フローチャンネル(Fc)センサーチップ(Biacore AB、Sweden)上に固定した。H5N1型ウイルス(A/ベトナム/1203/2004)からのHAの様々な量を、HAタンパク質および固定したIgGの間の結合相互作用を分析するために注入した。20mMのNaOHを用いる再生を、結合したHAを除去するために各々の測定終了後に実行し、一方では、チップ上に固定したIgGを残した。
アフィニティ定数を、CR6261、CR6323およびCR6325の抗体のために定めた。HAの4倍の希釈における5つの濃度を注入し(注入に付き100μl)、次いで3600秒の解離フェーズ(相)、および10μlの20mMのNaOHを用いる再生を続けた。得られるデータを、1:1(Langmuir(ラングミュア))モデルを使用して合わせた。しかし、正確な解離定数(KD)を算出することはできなかった。このことは、25℃での極端に低い解離率により(延長された測定を用いてでさえ)、計算における受け入れがたい誤差につながった。実験を、37℃で繰り返したとき、識別できる(discernible)解離は起こったが、まだ正確にKDを測るのに十分に足りるものでなかった。実験を、抗体のために最も確実な(definitive)KDを確立するために実行する。これらは、少なくとも一桁(single digit)のnM範囲において、およびたぶんアフィニティのpM範囲にあることが見積もられる。これらの実験は、本発明の結合性分子がインフルエンザウイルスのHAタンパク質において存在するそれらのエピトープが非常に高度に親和性であることを示す。
以下に、本明細書において、配列番号58-143、配列番号212-237、および配列番号316-367として言及する核酸およびアミノ酸の配列の詳細を提供する。
配列番号58
gaggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaagtc 60
tcttgcaagg cttctggagg ccccttccgc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcctgagtg gatgggaggg atcatcccta tttttggtac aacaaaatac 180
gcaccgaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg atttcgcggg cacagtttac 240
atggagctga gcagcctgcg atctgaggac acggccatgt actactgtgc gaaacatatg 300
gggtaccagg tgcgcgaaac tatggacgtc tggggcaaag ggaccacggt caccgtctcg 360
agtgctagca ccaagggccc cagcgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420
ggcggcacag ccgccctggg ctgcctggtg aaggactact tccccgagcc cgtgaccgtg 480
agctggaaca gcggcgcctt gaccagcggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540
agcggcctgt acagcctgag cagcgtggtg accgtgccca gcagcagcct gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa acgcgtggag 660
cccaagagct gcgacaagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctgctgggc 720
ggaccctccg tgttcctgtt cccccccaag cccaaggaca ccctcatgat cagccggacc 780
cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg agccacgagg accccgaggt gaagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac gccaagacca agccccggga ggagcagtac 900
aacagcacct accgggtggt gagcgtgctc accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt gagcaacaag gccctgcctg cccccatcga gaagaccatc 1020
agcaaggcca agggccagcc ccgggagccc caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag 1080
gagatgacca agaaccaggt gtccctcacc tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200
gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tacagcaagc tcaccgtgga caagagccgg 1260
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320
acccagaaga gcctgagcct gagccccggc aag 1353
配列番号59
E V Q L V E S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G G P F R S Y A I S W V R Q A P G Q G P E W M G G I I P I F G T T K Y A P K F Q G R V T I T A D D F A G T V Y M E L S S L R S E D T A M Y Y C A K H M G Y Q V R E T M D V W G K G T T V T V S S A S T K G P S V F P L A P S S K S T S G G T A A L G C L V K D Y F P E P V T V S W N S G A L T S G V H T F P A V L Q S S G L Y S L S S V V T V P S S S L G T Q T Y I C N V N H K P S N T K V D K R V E P K S C D K T H T C P P C P A P E L L G G P S V F L F P P K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V K F N W Y V D G V E V H N A K T K P R E E Q Y N S T Y
R V V S V L T V L H Q D W L N G K E Y K C K V S N K A L P A P I E K T I S K A K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P V L D S D G S F F L Y S K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K
配列番号60
caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaagtc 60
tcttgcaagg cttctggagg ccccttccgc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcctgagtg gatgggaggg atcatcccta tttttggtac aacaaaatac 180
gcaccgaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg atttcgcggg cacagtttac 240
atggagctga gcagcctgcg atctgaggac acggccatgt actactgtgc gaaacatatg 300
gggtaccagg tgcgcgaaac tatggacgtc tggggcaaag ggaccacggt caccgtctcg 360
agtgctagca ccaagggccc cagcgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420
ggcggcacag ccgccctggg ctgcctggtg aaggactact tccccgagcc cgtgaccgtg 480
agctggaaca gcggcgcctt gaccagcggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540
agcggcctgt acagcctgag cagcgtggtg accgtgccca gcagcagcct gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa acgcgtggag 660
cccaagagct gcgacaagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctgctgggc 720
ggaccctccg tgttcctgtt cccccccaag cccaaggaca ccctcatgat cagccggacc 780
cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg agccacgagg accccgaggt gaagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac gccaagacca agccccggga ggagcagtac 900
aacagcacct accgggtggt gagcgtgctc accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt gagcaacaag gccctgcctg cccccatcga gaagaccatc 1020
agcaaggcca agggccagcc ccgggagccc caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag 1080
gagatgacca agaaccaggt gtccctcacc tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200
gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tacagcaagc tcaccgtgga caagagccgg 1260
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320
acccagaaga gcctgagcct gagccccggc aag 1353
配列番号61
Q V Q L V Q S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G G P F R S Y A I S W V R Q A P G Q G P E W M G G I I P I F G T T K Y A P K F Q G R V T I T A D D F A G T V Y M E L S S L R S E D T A M Y Y C A K H M G Y Q V R E T M D V W G K G T T V T V S S A S T K G P S V F P L A P S S K S T S G G T A A L G C L V K D Y F P E P V T V S W N S G A L T S G V H T F P A V L Q S S G L Y S L S S V V T V P S S S L G T Q T Y I C N V N H K P S N T K V D K R V E P K S C D K T H T C P P C P A P E L L G G P S V F L F P P K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V K F N W Y V D G V E V H N A K T K P R E E Q Y N S T Y
R V V S V L T V L H Q D W L N G K E Y K C K V S N K A L P A P I E K T I S K A K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P V L D S D G S F F L Y S K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K
配列番号62
gaggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaagtc 60
tcttgcaagg cttctggagg ccccttccgc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcctgagtg gatgggaggg atcatcccta tttttggtac aacaaaatac 180
gcaccgaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg atttcgcggg cacagtttac 240
atggagctga gcagcctgcg atctgaggac acggccatgt actactgtgc gaaacatatg 300
gggtaccagg tgcgcgaaac tatggacgtc tggggcaaag ggaccacggt caccgtctcg 360
agtgctagca ccaagggccc cagcgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420
ggcggcacag ccgccctggg ctgcctggtg aaggactact tccccgagcc cgtgaccgtg 480
agctggaaca gcggcgcctt gaccagcggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540
agcggcctgt acagcctgag cagcgtggtg accgtgccca gcagcagcct gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa acgcgtggag 660
cccaagagct gcgacaagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctgctgggc 720
ggaccctccg tgttcctgtt cccccccaag cccaaggaca ccctcatgat cagccggacc 780
cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg agccacgagg accccgaggt gaagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac gccaagacca agccccggga ggagcagtac 900
aacagcacct accgggtggt gagcgtgctc accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt gagcaacaag gccctgcctg cccccatcga gaagaccatc 1020
agcaaggcca agggccagcc ccgggagccc caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag 1080
gagatgacca agaaccaggt gtccctcacc tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200
gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tacagcaagc tcaccgtgga caagagccgg 1260
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320
acccagaaga gcctgagcct gagccccggc aag 1353
配列番号63
E V Q L V E S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G G P F R S Y A I S W V R Q A P G Q G P E W M G G I I P I F G T T K Y A P K F Q G R V T I T A D D F A G T V Y M E L S S L R S E D T A M Y Y C A K H M G Y Q V R E T M D V W G K G T T V T V S S A S T K G P S V F P L A P S S K S T S G G T A A L G C L V K D Y F P E P V T V S W N S G A L T S G V H T F P A V L Q S S G L Y S L S S V V T V P S S S L G T Q T Y I C N V N H K P S N T K V D K R V E P K S C D K T H T C P P C P A P E L L G G P S V F L F P P K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V K F N W Y V D G V E V H N A K T K P R E E Q Y N S T Y
R V V S V L T V L H Q D W L N G K E Y K C K V S N K A L P A P I E K T I S K A K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P V L D S D G S F F L Y S K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K
配列番号64
gaggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaagtc 60
tcttgcaagg cttctggagg ccccttccgc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcctgagtg gatgggaggg atcatcccta tttttggtac aacaaaatac 180
gcaccgaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg atttcgcggg cacagtttac 240
atggagctga gcagcctgcg atctgaggac acggccatgt actactgtgc gaaacatatg 300
gggtaccagg tgcgcgaaac tatggacgtc tggggcaaag ggaccacggt caccgtctcg 360
agtgctagca ccaagggccc cagcgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420
ggcggcacag ccgccctggg ctgcctggtg aaggactact tccccgagcc cgtgaccgtg 480
agctggaaca gcggcgcctt gaccagcggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540
agcggcctgt acagcctgag cagcgtggtg accgtgccca gcagcagcct gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa acgcgtggag 660
cccaagagct gcgacaagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctgctgggc 720
ggaccctccg tgttcctgtt cccccccaag cccaaggaca ccctcatgat cagccggacc 780
cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg agccacgagg accccgaggt gaagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac gccaagacca agccccggga ggagcagtac 900
aacagcacct accgggtggt gagcgtgctc accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt gagcaacaag gccctgcctg cccccatcga gaagaccatc 1020
agcaaggcca agggccagcc ccgggagccc caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag 1080
gagatgacca agaaccaggt gtccctcacc tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200
gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tacagcaagc tcaccgtgga caagagccgg 1260
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320
acccagaaga gcctgagcct gagccccggc aag 1353
配列番号65
E V Q L V E S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G G P F R S Y A I S W V R Q A P G Q G P E W M G G I I P I F G T T K Y A P K F Q G R V T I T A D D F A G T V Y M E L S S L R S E D T A M Y Y C A K H M G Y Q V R E T M D V W G K G T T V T V S S A S T K G P S V F P L A P S S K S T S G G T A A L G C L V K D Y F P E P V T V S W N S G A L T S G V H T F P A V L Q S S G L Y S L S S V V T V P S S S L G T Q T Y I C N V N H K P S N T K V D K R V E P K S C D K T H T C P P C P A P E L L G G P S V F L F P P K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V K F N W Y V D G V E V H N A K T K P R E E Q Y N S T Y
R V V S V L T V L H Q D W L N G K E Y K C K V S N K A L P A P I E K T I S K A K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P V L D S D G S F F L Y S K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K
配列番号66
caggtacagc tgcagcagtc aggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg tttccggagt cattttcagc ggcagtgcga tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag gccttgagtg gatgggaggg atcagccctc tctttggcac aacaaattac 180
gcacaaaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacc aatccacgaa cacaacctac 240
atggaggtga acagcctgag atatgaggac acggccgtgt atttctgtgc gcgaggtcca 300
aaatattaca gtgagtacat ggacgtctgg ggcaaaggga ccacggtcac cgtctcgagt 360
gctagcacca agggccccag cgtgttcccc ctggccccca gcagcaagag caccagcggc 420
ggcacagccg ccctgggctg cctggtgaag gactacttcc ccgagcccgt gaccgtgagc 480
tggaacagcg gcgccttgac cagcggcgtg cacaccttcc ccgccgtgct gcagagcagc 540
ggcctgtaca gcctgagcag cgtggtgacc gtgcccagca gcagcctggg cacccagacc 600
tacatctgca acgtgaacca caagcccagc aacaccaagg tggacaaacg cgtggagccc 660
aagagctgcg acaagaccca cacctgcccc ccctgccctg cccccgagct gctgggcgga 720
ccctccgtgt tcctgttccc ccccaagccc aaggacaccc tcatgatcag ccggaccccc 780
gaggtgacct gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaggacc ccgaggtgaa gttcaactgg 840
tacgtggacg gcgtggaggt gcacaacgcc aagaccaagc cccgggagga gcagtacaac 900
agcacctacc gggtggtgag cgtgctcacc gtgctgcacc aggactggct gaacggcaag 960
gagtacaagt gcaaggtgag caacaaggcc ctgcctgccc ccatcgagaa gaccatcagc 1020
aaggccaagg gccagccccg ggagccccag gtgtacaccc tgccccccag ccgggaggag 1080
atgaccaaga accaggtgtc cctcacctgt ctggtgaagg gcttctaccc cagcgacatc 1140
gccgtggagt gggagagcaa cggccagccc gagaacaact acaagaccac cccccctgtg 1200
ctggacagcg acggcagctt cttcctgtac agcaagctca ccgtggacaa gagccggtgg 1260
cagcagggca acgtgttcag ctgcagcgtg atgcacgagg ccctgcacaa ccactacacc 1320
cagaagagcc tgagcctgag ccccggcaag 1350
配列番号67
Q V Q L Q Q S G A E V K K P G S S V K V S C K V S G V I F S G S A I S W V R Q A P G Q G L E W M G G I S P L F G T T N Y A Q K F Q G R V T I T A D Q S T N T T Y M E V N S L R Y E D T A V Y F C A R G P K Y Y S E Y M D V W G K G T T V T V S S A S T K G P S V F P L A P S S K S T S G G T A A L G C L V K D Y F P E P V T V S W N S G A L T S G V H T F P A V L Q S S G L Y S L S S V V T V P S S S L G T Q T Y I C N V N H K P S N T K V D K R V E P K S C D K T H T C P P C P A P E L L G G P S V F L F P P K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V K F N W Y V D G V E V H N A K T K P R E E Q Y N S T Y R
V V S V L T V L H Q D W L N G K E Y K C K V S N K A L P A P I E K T I S K A K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P V L D S D G S F F L Y S K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K
配列番号68
caggtccagc tggtacagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcagt agttatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggagga atcatgggta tgtttggcac aactaactac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aattcacgag cgcagcctac 240
atggagctga ggagcctgag atctgaggac acggccgtct actactgtgc gaggtctagt 300
ggttattacc ccgaatactt ccaggactgg ggccagggca ccctggtcac cgtctcgagt 360
gctagcacca agggccccag cgtgttcccc ctggccccca gcagcaagag caccagcggc 420
ggcacagccg ccctgggctg cctggtgaag gactacttcc ccgagcccgt gaccgtgagc 480
tggaacagcg gcgccttgac cagcggcgtg cacaccttcc ccgccgtgct gcagagcagc 540
ggcctgtaca gcctgagcag cgtggtgacc gtgcccagca gcagcctggg cacccagacc 600
tacatctgca acgtgaacca caagcccagc aacaccaagg tggacaaacg cgtggagccc 660
aagagctgcg acaagaccca cacctgcccc ccctgccctg cccccgagct gctgggcgga 720
ccctccgtgt tcctgttccc ccccaagccc aaggacaccc tcatgatcag ccggaccccc 780
gaggtgacct gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaggacc ccgaggtgaa gttcaactgg 840
tacgtggacg gcgtggaggt gcacaacgcc aagaccaagc cccgggagga gcagtacaac 900
agcacctacc gggtggtgag cgtgctcacc gtgctgcacc aggactggct gaacggcaag 960
gagtacaagt gcaaggtgag caacaaggcc ctgcctgccc ccatcgagaa gaccatcagc 1020
aaggccaagg gccagccccg ggagccccag gtgtacaccc tgccccccag ccgggaggag 1080
atgaccaaga accaggtgtc cctcacctgt ctggtgaagg gcttctaccc cagcgacatc 1140
gccgtggagt gggagagcaa cggccagccc gagaacaact acaagaccac cccccctgtg 1200
ctggacagcg acggcagctt cttcctgtac agcaagctca ccgtggacaa gagccggtgg 1260
cagcagggca acgtgttcag ctgcagcgtg atgcacgagg ccctgcacaa ccactacacc 1320
cagaagagcc tgagcctgag ccccggcaag 1350
配列番号69
Q V Q L V Q S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G G T F S S Y A I S W V R Q A P G Q G L E W M G G I M G M F G T T N Y A Q K F Q G R V T I T A D E F T S A A Y M E L R S L R S E D T A V Y Y C A R S S G Y Y P E Y F Q D W G Q G T L V T V S S A S T K G P S V F P L A P S S K S T S G G T A A L G C L V K D Y F P E P V T V S W N S G A L T S G V H T F P A V L Q S S G L Y S L S S V V T V P S S S L G T Q T Y I C N V N H K P S N T K V D K R V E P K S C D K T H T C P P C P A P E L L G G P S V F L F P P K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V K F N W Y V D G V E V H N A K T K P R E E Q Y N S T Y R
V V S V L T V L H Q D W L N G K E Y K C K V S N K A L P A P I E K T I S K A K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P V L D S D G S F F L Y S K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K
配列番号70
caggtccagc tggtgcagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatagca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcc attagtagta gtagtagtta catatactac 180
gtagactcag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaggtggt 300
gggagctacg gggcctacga aggctttgac tactggggcc agggcaccct ggtcaccgtc 360
tcgagtgcta gcaccaaggg ccccagcgtg ttccccctgg cccccagcag caagagcacc 420
agcggcggca cagccgccct gggctgcctg gtgaaggact acttccccga gcccgtgacc 480
gtgagctgga acagcggcgc cttgaccagc ggcgtgcaca ccttccccgc cgtgctgcag 540
agcagcggcc tgtacagcct gagcagcgtg gtgaccgtgc ccagcagcag cctgggcacc 600
cagacctaca tctgcaacgt gaaccacaag cccagcaaca ccaaggtgga caaacgcgtg 660
gagcccaaga gctgcgacaa gacccacacc tgccccccct gccctgcccc cgagctgctg 720
ggcggaccct ccgtgttcct gttccccccc aagcccaagg acaccctcat gatcagccgg 780
acccccgagg tgacctgcgt ggtggtggac gtgagccacg aggaccccga ggtgaagttc 840
aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcac aacgccaaga ccaagccccg ggaggagcag 900
tacaacagca cctaccgggt ggtgagcgtg ctcaccgtgc tgcaccagga ctggctgaac 960
ggcaaggagt acaagtgcaa ggtgagcaac aaggccctgc ctgcccccat cgagaagacc 1020
atcagcaagg ccaagggcca gccccgggag ccccaggtgt acaccctgcc ccccagccgg 1080
gaggagatga ccaagaacca ggtgtccctc acctgtctgg tgaagggctt ctaccccagc 1140
gacatcgccg tggagtggga gagcaacggc cagcccgaga acaactacaa gaccaccccc 1200
cctgtgctgg acagcgacgg cagcttcttc ctgtacagca agctcaccgt ggacaagagc 1260
cggtggcagc agggcaacgt gttcagctgc agcgtgatgc acgaggccct gcacaaccac 1320
tacacccaga agagcctgag cctgagcccc ggcaag 1356
配列番号71
Q V Q L V Q S G G G L V K P G G S L R L S C A A S G F T F S S Y S M N W V R Q A P G K G L E W V S S I S S S S S Y I Y Y V D S V K G R F T I S R D N A K N S L Y L Q M N S L R A E D T A V Y Y C A R G G G S Y G A Y E G F D Y W G Q G T L V T V S S A S T K G P S V F P L A P S S K S T S G G T A A L G C L V K D Y F P E P V T V S W N S G A L T S G V H T F P A V L Q S S G L Y S L S S V V T V P S S S L G T Q T Y I C N V N H K P S N T K V D K R V E P K S C D K T H T C P P C P A P E L L G G P S V F L F P P K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V K F N W Y V D G V E V H N A K T K P R E E Q Y N S T
Y R V V S V L T V L H Q D W L N G K E Y K C K V S N K A L P A P I E K T I S K A K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P V L D S D G S F F L Y S K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K
配列番号72
gaggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaagtc 60
tcttgcaagg cttctggagg ccccttccgc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcctgagtg gatgggaggg atcatcccta tttttggtac aacaaaatac 180
gcaccgaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg atttcgcggg cacagtttac 240
atggagctga gcagcctgcg atctgaggac acggccatgt actactgtgc gaaacatatg 300
gggtaccagg tgcgcgaaac tatggacgtc tggggcaaag ggaccacggt caccgtctcg 360
agtgctagca ccaagggccc cagcgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420
ggcggcacag ccgccctggg ctgcctggtg aaggactact tccccgagcc cgtgaccgtg 480
agctggaaca gcggcgcctt gaccagcggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540
agcggcctgt acagcctgag cagcgtggtg accgtgccca gcagcagcct gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa acgcgtggag 660
cccaagagct gcgacaagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctgctgggc 720
ggaccctccg tgttcctgtt cccccccaag cccaaggaca ccctcatgat cagccggacc 780
cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg agccacgagg accccgaggt gaagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac gccaagacca agccccggga ggagcagtac 900
aacagcacct accgggtggt gagcgtgctc accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt gagcaacaag gccctgcctg cccccatcga gaagaccatc 1020
agcaaggcca agggccagcc ccgggagccc caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag 1080
gagatgacca agaaccaggt gtccctcacc tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200
gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tacagcaagc tcaccgtgga caagagccgg 1260
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320
acccagaaga gcctgagcct gagccccggc aag 1353
配列番号73
E V Q L V E S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G G P F R S Y A I S W V R Q A P G Q G P E W M G G I I P I F G T T K Y A P K F Q G R V T I T A D D F A G T V Y M E L S S L R S E D T A M Y Y C A K H M G Y Q V R E T M D V W G K G T T V T V S S A S T K G P S V F P L A P S S K S T S G G T A A L G C L V K D Y F P E P V T V S W N S G A L T S G V H T F P A V L Q S S G L Y S L S S V V T V P S S S L G T Q T Y I C N V N H K P S N T K V D K R V E P K S C D K T H T C P P C P A P E L L G G P S V F L F P P K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V K F N W Y V D G V E V H N A K T K P R E E Q Y N S T Y
R V V S V L T V L H Q D W L N G K E Y K C K V S N K A L P A P I E K T I S K A K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P V L D S D G S F F L Y S K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K
配列番号74
gaggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaagtc 60
tcttgcaagg cttctggagg ccccttccgc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcctgagtg gatgggaggg atcatcccta tttttggtac aacaaaatac 180
gcaccgaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg atttcgcggg cacagtttac 240
atggagctga gcagcctgcg atctgaggac acggccatgt actactgtgc gaaacatatg 300
gggtaccagg tgcgcgaaac tatggacgtc tggggcaaag ggaccacggt caccgtctcg 360
agtgctagca ccaagggccc cagcgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420
ggcggcacag ccgccctggg ctgcctggtg aaggactact tccccgagcc cgtgaccgtg 480
agctggaaca gcggcgcctt gaccagcggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540
agcggcctgt acagcctgag cagcgtggtg accgtgccca gcagcagcct gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa acgcgtggag 660
cccaagagct gcgacaagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctgctgggc 720
ggaccctccg tgttcctgtt cccccccaag cccaaggaca ccctcatgat cagccggacc 780
cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg agccacgagg accccgaggt gaagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac gccaagacca agccccggga ggagcagtac 900
aacagcacct accgggtggt gagcgtgctc accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt gagcaacaag gccctgcctg cccccatcga gaagaccatc 1020
agcaaggcca agggccagcc ccgggagccc caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag 1080
gagatgacca agaaccaggt gtccctcacc tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200
gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tacagcaagc tcaccgtgga caagagccgg 1260
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320
acccagaaga gcctgagcct gagccccggc aag 1353
配列番号75
E V Q L V E S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G G P F R S Y A I S W V R Q A P G Q G P E W M G G I I P I F G T T K Y A P K F Q G R V T I T A D D F A G T V Y M E L S S L R S E D T A M Y Y C A K H M G Y Q V R E T M D V W G K G T T V T V S S A S T K G P S V F P L A P S S K S T S G G T A A L G C L V K D Y F P E P V T V S W N S G A L T S G V H T F P A V L Q S S G L Y S L S S V V T V P S S S L G T Q T Y I C N V N H K P S N T K V D K R V E P K S C D K T H T C P P C P A P E L L G G P S V F L F P P K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V K F N W Y V D G V E V H N A K T K P R E E Q Y N S T Y
R V V S V L T V L H Q D W L N G K E Y K C K V S N K A L P A P I E K T I S K A K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P V L D S D G S F F L Y S K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K
配列番号76
gaggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc cagggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgtaagg cctctggagg caccttctcc agctatggta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggagac atcatcggta tgtttggttc aacaaactac 180
gcacagaact tccagggcag actcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaagtagt 300
ggttattacc ctgcatacct cccccactgg ggccagggca ccttggtcac cgtctcgagt 360
gctagcacca agggccccag cgtgttcccc ctggccccca gcagcaagag caccagcggc 420
ggcacagccg ccctgggctg cctggtgaag gactacttcc ccgagcccgt gaccgtgagc 480
tggaacagcg gcgccttgac cagcggcgtg cacaccttcc ccgccgtgct gcagagcagc 540
ggcctgtaca gcctgagcag cgtggtgacc gtgcccagca gcagcctggg cacccagacc 600
tacatctgca acgtgaacca caagcccagc aacaccaagg tggacaaacg cgtggagccc 660
aagagctgcg acaagaccca cacctgcccc ccctgccctg cccccgagct gctgggcgga 720
ccctccgtgt tcctgttccc ccccaagccc aaggacaccc tcatgatcag ccggaccccc 780
gaggtgacct gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaggacc ccgaggtgaa gttcaactgg 840
tacgtggacg gcgtggaggt gcacaacgcc aagaccaagc cccgggagga gcagtacaac 900
agcacctacc gggtggtgag cgtgctcacc gtgctgcacc aggactggct gaacggcaag 960
gagtacaagt gcaaggtgag caacaaggcc ctgcctgccc ccatcgagaa gaccatcagc 1020
aaggccaagg gccagccccg ggagccccag gtgtacaccc tgccccccag ccgggaggag 1080
atgaccaaga accaggtgtc cctcacctgt ctggtgaagg gcttctaccc cagcgacatc 1140
gccgtggagt gggagagcaa cggccagccc gagaacaact acaagaccac cccccctgtg 1200
ctggacagcg acggcagctt cttcctgtac agcaagctca ccgtggacaa gagccggtgg 1260
cagcagggca acgtgttcag ctgcagcgtg atgcacgagg ccctgcacaa ccactacacc 1320
cagaagagcc tgagcctgag ccccggcaag 1350
配列番号77
E V Q L V E S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G G T F S S Y G I S W V R Q A P G Q G L E W M G D I I G M F G S T N Y A Q N F Q G R L T I T A D E S T S T A Y M E L S S L R S E D T A V Y Y C A R S S G Y Y P A Y L P H W G Q G T L V T V S S A S T K G P S V F P L A P S S K S T S G G T A A L G C L V K D Y F P E P V T V S W N S G A L T S G V H T F P A V L Q S S G L Y S L S S V V T V P S S S L G T Q T Y I C N V N H K P S N T K V D K R V E P K S C D K T H T C P P C P A P E L L G G P S V F L F P P K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V K F N W Y V D G V E V H N A K T K P R E E Q Y N S T Y R
V V S V L T V L H Q D W L N G K E Y K C K V S N K A L P A P I E K T I S K A K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P V L D S D G S F F L Y S K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K
配列番号78
gaggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc cggggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc ttctattcta tgagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag gacttgagtg gatgggaggg atcatcccta tgtttggtac aacaaactac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggtcg aatccacgag cacagcctac 240
atggaggtga gcagcctgag atctgaggac acggccgttt attactgtgc gagaggtgat 300
aagggtatct actactacta catggacgtc tggggcaaag ggaccacggt caccgtctcg 360
agtgctagca ccaagggccc cagcgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420
ggcggcacag ccgccctggg ctgcctggtg aaggactact tccccgagcc cgtgaccgtg 480
agctggaaca gcggcgcctt gaccagcggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540
agcggcctgt acagcctgag cagcgtggtg accgtgccca gcagcagcct gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa acgcgtggag 660
cccaagagct gcgacaagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctgctgggc 720
ggaccctccg tgttcctgtt cccccccaag cccaaggaca ccctcatgat cagccggacc 780
cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg agccacgagg accccgaggt gaagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac gccaagacca agccccggga ggagcagtac 900
aacagcacct accgggtggt gagcgtgctc accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt gagcaacaag gccctgcctg cccccatcga gaagaccatc 1020
agcaaggcca agggccagcc ccgggagccc caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag 1080
gagatgacca agaaccaggt gtccctcacc tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200
gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tacagcaagc tcaccgtgga caagagccgg 1260
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320
acccagaaga gcctgagcct gagccccggc aag 1353
配列番号79
E V Q L V E S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G G T F S F Y S M S W V R Q A P G Q G L E W M G G I I P M F G T T N Y A Q K F Q G R V T I T A V E S T S T A Y M E V S S L R S E D T A V Y Y C A R G D K G I Y Y Y Y M D V W G K G T T V T V S S A S T K G P S V F P L A P S S K S T S G G T A A L G C L V K D Y F P E P V T V S W N S G A L T S G V H T F P A V L Q S S G L Y S L S S V V T V P S S S L G T Q T Y I C N V N H K P S N T K V D K R V E P K S C D K T H T C P P C P A P E L L G G P S V F L F P P K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V K F N W Y V D G V E V H N A K T K P R E E Q Y N S T Y
R V V S V L T V L H Q D W L N G K E Y K C K V S N K A L P A P I E K T I S K A K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P V L D S D G S F F L Y S K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K
配列番号80
gaggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcggta tgttcggtac agcaaactac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatttacgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaggaaat 300
tattactatg agagtagtct cgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcgagt 360
gctagcacca agggccccag cgtgttcccc ctggccccca gcagcaagag caccagcggc 420
ggcacagccg ccctgggctg cctggtgaag gactacttcc ccgagcccgt gaccgtgagc 480
tggaacagcg gcgccttgac cagcggcgtg cacaccttcc ccgccgtgct gcagagcagc 540
ggcctgtaca gcctgagcag cgtggtgacc gtgcccagca gcagcctggg cacccagacc 600
tacatctgca acgtgaacca caagcccagc aacaccaagg tggacaaacg cgtggagccc 660
aagagctgcg acaagaccca cacctgcccc ccctgccctg cccccgagct gctgggcgga 720
ccctccgtgt tcctgttccc ccccaagccc aaggacaccc tcatgatcag ccggaccccc 780
gaggtgacct gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaggacc ccgaggtgaa gttcaactgg 840
tacgtggacg gcgtggaggt gcacaacgcc aagaccaagc cccgggagga gcagtacaac 900
agcacctacc gggtggtgag cgtgctcacc gtgctgcacc aggactggct gaacggcaag 960
gagtacaagt gcaaggtgag caacaaggcc ctgcctgccc ccatcgagaa gaccatcagc 1020
aaggccaagg gccagccccg ggagccccag gtgtacaccc tgccccccag ccgggaggag 1080
atgaccaaga accaggtgtc cctcacctgt ctggtgaagg gcttctaccc cagcgacatc 1140
gccgtggagt gggagagcaa cggccagccc gagaacaact acaagaccac cccccctgtg 1200
ctggacagcg acggcagctt cttcctgtac agcaagctca ccgtggacaa gagccggtgg 1260
cagcagggca acgtgttcag ctgcagcgtg atgcacgagg ccctgcacaa ccactacacc 1320
cagaagagcc tgagcctgag ccccggcaag 1350
配列番号81
E V Q L V E S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G G T F S S Y A I S W V R Q A P G Q G L E W M G G I I G M F G T A N Y A Q K F Q G R V T I T A D E F T S T A Y M E L S S L R S E D T A V Y Y C A R G N Y Y Y E S S L D Y W G Q G T L V T V S S A S T K G P S V F P L A P S S K S T S G G T A A L G C L V K D Y F P E P V T V S W N S G A L T S G V H T F P A V L Q S S G L Y S L S S V V T V P S S S L G T Q T Y I C N V N H K P S N T K V D K R V E P K S C D K T H T C P P C P A P E L L G G P S V F L F P P K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V K F N W Y V D G V E V H N A K T K P R E E Q Y N S T Y R
V V S V L T V L H Q D W L N G K E Y K C K V S N K A L P A P I E K T I S K A K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P V L D S D G S F F L Y S K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K
配列番号82
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgagagtc 60
tcctgcaagg cttctggaag catcttcaga aactatgcta tgagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcgcta tttttgggac accaaagtac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatcgacgag cactgtctac 240
atggaactga gcggactgag atctgaggac acggccatgt attactgtgc gaggattccc 300
cactataatt ttggttcggg gagttatttc gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360
gtctcgagtg ctagcaccaa gggccccagc gtgttccccc tggcccccag cagcaagagc 420
accagcggcg gcacagccgc cctgggctgc ctggtgaagg actacttccc cgagcccgtg 480
accgtgagct ggaacagcgg cgccttgacc agcggcgtgc acaccttccc cgccgtgctg 540
cagagcagcg gcctgtacag cctgagcagc gtggtgaccg tgcccagcag cagcctgggc 600
acccagacct acatctgcaa cgtgaaccac aagcccagca acaccaaggt ggacaaacgc 660
gtggagccca agagctgcga caagacccac acctgccccc cctgccctgc ccccgagctg 720
ctgggcggac cctccgtgtt cctgttcccc cccaagccca aggacaccct catgatcagc 780
cggacccccg aggtgacctg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaggaccc cgaggtgaag 840
ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cacaacgcca agaccaagcc ccgggaggag 900
cagtacaaca gcacctaccg ggtggtgagc gtgctcaccg tgctgcacca ggactggctg 960
aacggcaagg agtacaagtg caaggtgagc aacaaggccc tgcctgcccc catcgagaag 1020
accatcagca aggccaaggg ccagccccgg gagccccagg tgtacaccct gccccccagc 1080
cgggaggaga tgaccaagaa ccaggtgtcc ctcacctgtc tggtgaaggg cttctacccc 1140
agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaac ggccagcccg agaacaacta caagaccacc 1200
ccccctgtgc tggacagcga cggcagcttc ttcctgtaca gcaagctcac cgtggacaag 1260
agccggtggc agcagggcaa cgtgttcagc tgcagcgtga tgcacgaggc cctgcacaac 1320
cactacaccc agaagagcct gagcctgagc cccggcaag 1359
配列番号83
Q V Q L V Q S G A E V K K P G S S V R V S C K A S G S I F R N Y A M S W V R Q A P G Q G L E W M G G I I A I F G T P K Y A Q K F Q G R V T I T A D E S T S T V Y M E L S G L R S E D T A M Y Y C A R I P H Y N F G S G S Y F D Y W G Q G T L V T V S S A S T K G P S V F P L A P S S K S T S G G T A A L G C L V K D Y F P E P V T V S W N S G A L T S G V H T F P A V L Q S S G L Y S L S S V V T V P S S S L G T Q T Y I C N V N H K P S N T K V D K R V E P K S C D K T H T C P P C P A P E L L G G P S V F L F P P K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V K F N W Y V D G V E V H N A K T K P R E E Q Y N S
T Y R V V S V L T V L H Q D W L N G K E Y K C K V S N K A L P A P I E K T I S K A K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P V L D S D G S F F L Y S K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K
配列番号84
tcctatgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60
tcttgttctg gaagcacgtt caacatcgga agtaatgctg tagactggta ccggcagctc 120
ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat agtaataatc agcggccctc aggggtccct 180
gaccgattct ctggctccag gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccag 240
tctgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg acatcctgaa tgttccggta 300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta ggtgcggccg caggccagcc caaggccgct 360
cccagcgtga ccctgttccc cccctcctcc gaggagctgc aggccaacaa ggccaccctg 420
gtgtgcctca tcagcgactt ctaccctggc gccgtgaccg tggcctggaa ggccgacagc 480
agccccgtga aggccggcgt ggagaccacc acccccagca agcagagcaa caacaagtac 540
gccgccagca gctacctgag cctcaccccc gagcagtgga agagccaccg gagctacagc 600
tgccaggtga cccacgaggg cagcaccgtg gagaagaccg tggcccccac cgagtgcagc 660
配列番号85
S Y V L T Q P P S A S G T P G Q R V T I S C S G S T F N I G S N A V D W Y R Q L P G T A P K L L I Y S N N Q R P S G V P D R F S G S R S G T S A S L A I S G L Q S E D E A D Y Y C A A W D D I L N V P V F G G G T K L T V L G A A A G Q P K A A P S V T L F P P S S E E L Q A N K A T L V C L I S D F Y P G A V T V A W K A D S S P V K A G V E T T T P S K Q S N N K Y A A S S Y L S L T P E Q W K S H R S Y S C Q V T H E G S T V E K T V A P T E C S
配列番号86
cagtctgccc tgactcagcc tgccgccgtg tctgggtctc ctggacagtc gatcaccatc 60
tcctgcactg gaaccagcag tgacgttggt ggttataact atgtctcctg gtaccaacag 120
cacccaggca aagcccccaa actcatgatt tatgaggtca gtaatcggcc ctcaggggtt 180
tctaatcgct tctctggctc caagtctggc aacacggcct ccctgaccat ctctgggctc 240
caggctgagg acgaggctga ttattactgc agctcatata caagcagcag cacttatgtc 300
ttcggaactg ggaccaaggt caccgtccta ggtgcggccg caggccagcc caaggccgct 360
cccagcgtga ccctgttccc cccctcctcc gaggagctgc aggccaacaa ggccaccctg 420
gtgtgcctca tcagcgactt ctaccctggc gccgtgaccg tggcctggaa ggccgacagc 480
agccccgtga aggccggcgt ggagaccacc acccccagca agcagagcaa caacaagtac 540
gccgccagca gctacctgag cctcaccccc gagcagtgga agagccaccg gagctacagc 600
tgccaggtga cccacgaggg cagcaccgtg gagaagaccg tggcccccac cgagtgcagc 660
配列番号87
Q S A L T Q P A A V S G S P G Q S I T I S C T G T S S D V G G Y N Y V S W Y Q Q H P G K A P K L M I Y E V S N R P S G V S N R F S G S K S G N T A S L T I S G L Q A E D E A D Y Y C S S Y T S S S T Y V F G T G T K V T V L G A A A G Q P K A A P S V T L F P P S S E E L Q A N K A T L V C L I S D F Y P G A V T V A W K A D S S P V K A G V E T T T P S K Q S N N K Y A A S S Y L S L T P E Q W K S H R S Y S C Q V T H E G S T V E K T V A P T E C S
配列番号88
tcctatgtgc tgactcagcc accctcagtc tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60
tcttgctctg gaagccgctc caacgtcgga gataattctg tatattggta tcaacacgtc 120
ccagaaatgg cccccaaact cctcgtctat aagaatactc aacggccctc aggagtccct 180
gcccggtttt ccggctccaa gtctggcact tcagcctccc tggccatcat tggcctccag 240
tccggcgatg aggctgatta ttattgtgtg gcatgggatg acagcgtaga tggctatgtc 300
ttcggatctg ggaccaaggt caccgtccta ggtgcggccg caggccagcc caaggccgct 360
cccagcgtga ccctgttccc cccctcctcc gaggagctgc aggccaacaa ggccaccctg 420
gtgtgcctca tcagcgactt ctaccctggc gccgtgaccg tggcctggaa ggccgacagc 480
agccccgtga aggccggcgt ggagaccacc acccccagca agcagagcaa caacaagtac 540
gccgccagca gctacctgag cctcaccccc gagcagtgga agagccaccg gagctacagc 600
tgccaggtga cccacgaggg cagcaccgtg gagaagaccg tggcccccac cgagtgcagc 660
配列番号89
S Y V L T Q P P S V S G T P G Q R V T I S C S G S R S N V G D N S V Y W Y Q H V P E M A P K L L V Y K N T Q R P S G V P A R F S G S K S G T S A S L A I I G L Q S G D E A D Y Y C V A W D D S V D G Y V F G S G T K V T V L G A A A G Q P K A A P S V T L F P P S S E E L Q A N K A T L V C L I S D F Y P G A V T V A W K A D S S P V K A G V E T T T P S K Q S N N K Y A A S S Y L S L T P E Q W K S H R S Y S C Q V T H E G S T V E K T V A P T E C S
配列番号90
cagtctgtgt tgacgcagcc gccctcagtg tctgcggccc caggacagaa ggtcaccatc 60
tcctgctctg gaagcagctc caacattggg aatgattatg tatcctggta ccagcagctc 120
ccaggaacag cccccaaact cctcatttat gacaataata agcgaccctc agggattcct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacg tcagccaccc tgggcatcac cggactccag 240
actggggacg aggccaacta ttactgcgca acatgggatc gccgcccgac tgcttatgtt 300
gtcttcggcg gagggaccaa gctgaccgtc ctaggtgcgg ccgcaggcca gcccaaggcc 360
gctcccagcg tgaccctgtt ccccccctcc tccgaggagc tgcaggccaa caaggccacc 420
ctggtgtgcc tcatcagcga cttctaccct ggcgccgtga ccgtggcctg gaaggccgac 480
agcagccccg tgaaggccgg cgtggagacc accaccccca gcaagcagag caacaacaag 540
tacgccgcca gcagctacct gagcctcacc cccgagcagt ggaagagcca ccggagctac 600
agctgccagg tgacccacga gggcagcacc gtggagaaga ccgtggcccc caccgagtgc 660
agc 663
配列番号91
Q S V L T Q P P S V S A A P G Q K V T I S C S G S S S N I G N D Y V S W Y Q Q L P G T A P K L L I Y D N N K R P S G I P D R F S G S K S G T S A T L G I T G L Q T G D E A N Y Y C A T W D R R P T A Y V V F G G G T K L T V L G A A A G Q P K A A P S V T L F P P S S E E L Q A N K A T L V C L I S D F Y P G A V T V A W K A D S S P V K A G V E T T T P S K Q S N N K Y A A S S Y L S L T P E Q W K S H R S Y S C Q V T H E G S T V E K T V A P T E C S
配列番号92
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcgagtca gggcattagc agttatttag cctggtatca gcagaagcca 120
gggaaagttc ctacactcct gatctatgat gcatccactt tgcgatcagg ggtcccatct 180
cgcttcagtg gcagtggatc tgcgacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagatgttg caacttatta ctgtcaaagg tataacagtg cccccccgat caccttcggc 300
caagggacac gactggagat taaacgtgcg gccgcaccca gcgtgttcat cttccccccc 360
tccgacgagc agctgaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420
ccccgggagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480
gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac tccacctaca gcctgagcag caccctcacc 540
ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600
ctgagcagcc ccgtgaccaa gagcttcaac cggggcgagt gt 642
配列番号93
D I Q M T Q S P S S L S A S V G D R V T I T C R A S Q G I S S Y L A W Y Q Q K P G K V P T L L I Y D A S T L R S G V P S R F S G S G S A T D F T L T I S S L Q P E D V A T Y Y C Q R Y N S A P P I T F G Q G T R L E I K R A A A P S V F I F P P S D E Q L K S G T A S V V C L L N N F Y P R E A K V Q W K V D N A L Q S G N S Q E S V T E Q D S K D S T Y S L S S T L T L S K A D Y E K H K V Y A C E V T H Q G L S S P V T K S F N R G E C
配列番号94
cagtctgtgc tgactcagcc accctcagag tccgtgtccc caggacagac agccagcgtc 60
acctgctctg gacataaatt gggggataaa tatgtttcgt ggtatcagca gaagccaggc 120
cagtcccctg tattactcat ctatcaagat aacaggcggc cctcagggat ccctgagcga 180
ttcataggct ccaactctgg gaacacagcc actctgacca tcagcgggac ccaggctctg 240
gatgaggctg actattactg tcaggcgtgg gacagcagca ctgcggtttt cggcggaggg 300
accaagctga ccgtcctagg tgcggccgca ggccagccca aggccgctcc cagcgtgacc 360
ctgttccccc cctcctccga ggagctgcag gccaacaagg ccaccctggt gtgcctcatc 420
agcgacttct accctggcgc cgtgaccgtg gcctggaagg ccgacagcag ccccgtgaag 480
gccggcgtgg agaccaccac ccccagcaag cagagcaaca acaagtacgc cgccagcagc 540
tacctgagcc tcacccccga gcagtggaag agccaccgga gctacagctg ccaggtgacc 600
cacgagggca gcaccgtgga gaagaccgtg gcccccaccg agtgcagc 648
配列番号95
Q S V L T Q P P S E S V S P G Q T A S V T C S G H K L G D K Y V S W Y Q Q K P G Q S P V L L I Y Q D N R R P S G I P E R F I G S N S G N T A T L T I S G T Q A L D E A D Y Y C Q A W D S S T A V F G G G T K L T V L G A A A G Q P K A A P S V T L F P P S S E E L Q A N K A T L V C L I S D F Y P G A V T V A W K A D S S P V K A G V E T T T P S K Q S N N K Y A A S S Y L S L T P E Q W K S H R S Y S C Q V T H E G S T V E K T V A P T E C S
配列番号96
gaaattgtgc tgactcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gcgtgttagc agctacttag cctggtacca acagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca gggccgctgg catcccagac 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag actggagcct 240
gaagattctg cagtgtatta ctgtcagcag tatggtagga caccgctcac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa acgtgcggcc gcacccagcg tgttcatctt ccccccctcc 360
gacgagcagc tgaagagcgg caccgccagc gtggtgtgcc tgctgaacaa cttctacccc 420
cgggaggcca aggtgcagtg gaaggtggac aacgccctgc agagcggcaa cagccaggag 480
agcgtgaccg agcaggacag caaggactcc acctacagcc tgagcagcac cctcaccctg 540
agcaaggccg actacgagaa gcacaaggtg tacgcctgcg aggtgaccca ccagggcctg 600
agcagccccg tgaccaagag cttcaaccgg ggcgagtgt 639
配列番号97
E I V L T Q S P G T L S L S P G E R A T L S C R A S Q R V S S Y L A W Y Q Q K P G Q A P R L L I Y G A S T R A A G I P D R F S G S G S G T D F T L T I S R L E P E D S A V Y Y C Q Q Y G R T P L T F G G G T K V E I K R A A A P S V F I F P P S D E Q L K S G T A S V V C L L N N F Y P R E A K V Q W K V D N A L Q S G N S Q E S V T E Q D S K D S T Y S L S S T L T L S K A D Y E K H K V Y A C E V T H Q G L S S P V T K S F N R G E C
配列番号98
tcctatgtgc tgactcagcc accctcggtg tcagtggccc caggacagac ggccaggatt 60
acctgtgggg gaaacaacat tggaagtaaa agtgtgcact ggtaccagca gaagccaggc 120
caggcccctg tgctggtcgt ctatgatgat agcgaccggc cctcagggat ccctgagcga 180
ttctctggct ccaactctgg gaacacggcc accctgacca tcagcagggt cgaagccggg 240
gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg gatagtagta gtgatcatgc tgtgttcgga 300
ggaggcaccc agctgaccgt cctcggtgcg gccgcaggcc agcccaaggc cgctcccagc 360
gtgaccctgt tccccccctc ctccgaggag ctgcaggcca acaaggccac cctggtgtgc 420
ctcatcagcg acttctaccc tggcgccgtg accgtggcct ggaaggccga cagcagcccc 480
gtgaaggccg gcgtggagac caccaccccc agcaagcaga gcaacaacaa gtacgccgcc 540
agcagctacc tgagcctcac ccccgagcag tggaagagcc accggagcta cagctgccag 600
gtgacccacg agggcagcac cgtggagaag accgtggccc ccaccgagtg cagc 654
配列番号99
S Y V L T Q P P S V S V A P G Q T A R I T C G G N N I G S K S V H W Y Q Q K P G Q A P V L V V Y D D S D R P S G I P E R F S G S N S G N T A T L T I S R V E A G D E A D Y Y C Q V W D S S S D H A V F G G G T Q L T V L G A A A G Q P K A A P S V T L F P P S S E E L Q A N K A T L V C L I S D F Y P G A V T V A W K A D S S P V K A G V E T T T P S K Q S N N K Y A A S S Y L S L T P E Q W K S H R S Y S C Q V T H E G S T V E K T V A P T E C S
配列番号100
tcctatgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60
tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga agtaattatg tatactggta ccagcagctc 120
ccaggcacgg cccccaaact cctcatctat agggatggtc agcggccctc aggggtccct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tggactccgg 240
tccgatgatg aggctgatta ttactgtgca acatgggatg acaacctgag tggtccagta 300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta ggtgcggccg caggccagcc caaggccgct 360
cccagcgtga ccctgttccc cccctcctcc gaggagctgc aggccaacaa ggccaccctg 420
gtgtgcctca tcagcgactt ctaccctggc gccgtgaccg tggcctggaa ggccgacagc 480
agccccgtga aggccggcgt ggagaccacc acccccagca agcagagcaa caacaagtac 540
gccgccagca gctacctgag cctcaccccc gagcagtgga agagccaccg gagctacagc 600
tgccaggtga cccacgaggg cagcaccgtg gagaagaccg tggcccccac cgagtgcagc 660
配列番号101
S Y V L T Q P P S A S G T P G Q R V T I S C S G S S S N I G S N Y V Y W Y Q Q L P G T A P K L L I Y R D G Q R P S G V P D R F S G S K S G T S A S L A I S G L R S D D E A D Y Y C A T W D D N L S G P V F G G G T K L T V L G A A A G Q P K A A P S V T L F P P S S E E L Q A N K A T L V C L I S D F Y P G A V T V A W K A D S S P V K A G V E T T T P S K Q S N N K Y A A S S Y L S L T P E Q W K S H R S Y S C Q V T H E G S T V E K T V A P T E C S
配列番号102
gaaattgtgt tgacccagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120
cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180
gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240
cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcacccag aactttcggc 300
ggagggacca aggtggagat caaacgtgcg gccgcaccca gcgtgttcat cttccccccc 360
tccgacgagc agctgaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420
ccccgggagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480
gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac tccacctaca gcctgagcag caccctcacc 540
ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600
ctgagcagcc ccgtgaccaa gagcttcaac cggggcgagt gt 642
配列番号103
E I V L T Q S P G T L S L S P G E R A T L S C R A S Q S V S S S Y L A W Y Q Q K P G Q A P R L L I Y G A S S R A T G I P D R F S G S G S G T D F T L T I S R L E P E D F A V Y Y C Q Q Y G S S P R T F G G G T K V E I K R A A A P S V F I F P P S D E Q L K S G T A S V V C L L N N F Y P R E A K V Q W K V D N A L Q S G N S Q E S V T E Q D S K D S T Y S L S S T L T L S K A D Y E K H K V Y A C E V T H Q G L S S P V T K S F N R G E C
配列番号104
cagtctgccc tgactcagcc tgcctccgtg tctgggtctc ctggacagtc gatcaccatc 60
tcctgcactg gaaccagcag tgacgttggt ggttataact atgtctcctg gtaccaacag 120
cacccaggca aagcccccaa actcatgatt tatgaggtca gtaatcggcc ctcaggggtt 180
tctaatcgct tctctggctc caagtctggc aacacggcct ccctgaccat ctctgggctc 240
caggctgagg acgaggctga ttattactgc agctcatata caagcagcag cactcttgtc 300
ttcggaactg ggaccaaggt caccgtccta ggtgcggccg caggccagcc caaggccgct 360
cccagcgtga ccctgttccc cccctcctcc gaggagctgc aggccaacaa ggccaccctg 420
gtgtgcctca tcagcgactt ctaccctggc gccgtgaccg tggcctggaa ggccgacagc 480
agccccgtga aggccggcgt ggagaccacc acccccagca agcagagcaa caacaagtac 540
gccgccagca gctacctgag cctcaccccc gagcagtgga agagccaccg gagctacagc 600
tgccaggtga cccacgaggg cagcaccgtg gagaagaccg tggcccccac cgagtgcagc 660
配列番号105
Q S A L T Q P A S V S G S P G Q S I T I S C T G T S S D V G G Y N Y V S W Y Q Q H P G K A P K L M I Y E V S N R P S G V S N R F S G S K S G N T A S L T I S G L Q A E D E A D Y Y C S S Y T S S S T L V F G T G T K V T V L G A A A G Q P K A A P S V T L F P P S S E E L Q A N K A T L V C L I S D F Y P G A V T V A W K A D S S P V K A G V E T T T P S K Q S N N K Y A A S S Y L S L T P E Q W K S H R S Y S C Q V T H E G S T V E K T V A P T E C S
配列番号106
cagtctgtcg tgacgcagcc gccctcggtg tcagtggccc caggacagac ggccaggatt 60
acctgtgggg gaaacaacat tggaagtaaa agtgtgcact ggtaccagca gaagccaggc 120
caggcccctg tgctggtcgt ctatgatgat agcgaccggc cctcagggat ccctgagcga 180
ttctctggct ccaactctgg gaacacggcc accctgacca tcagcagggt cgaagccggg 240
gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg gatagtagta gtgatcatta tgtcttcgga 300
actgggacca aggtcaccgt cctaggtgcg gccgcaggcc agcccaaggc cgctcccagc 360
gtgaccctgt tccccccctc ctccgaggag ctgcaggcca acaaggccac cctggtgtgc 420
ctcatcagcg acttctaccc tggcgccgtg accgtggcct ggaaggccga cagcagcccc 480
gtgaaggccg gcgtggagac caccaccccc agcaagcaga gcaacaacaa gtacgccgcc 540
agcagctacc tgagcctcac ccccgagcag tggaagagcc accggagcta cagctgccag 600
gtgacccacg agggcagcac cgtggagaag accgtggccc ccaccgagtg cagc 654
配列番号107
Q S V V T Q P P S V S V A P G Q T A R I T C G G N N I G S K S V H W Y Q Q K P G Q A P V L V V Y D D S D R P S G I P E R F S G S N S G N T A T L T I S R V E A G D E A D Y Y C Q V W D S S S D H Y V F G T G T K V T V L G A A A G Q P K A A P S V T L F P P S S E E L Q A N K A T L V C L I S D F Y P G A V T V A W K A D S S P V K A G V E T T T P S K Q S N N K Y A A S S Y L S L T P E Q W K S H R S Y S C Q V T H E G S T V E K T V A P T E C S
配列番号108
actgtgttga cacagccgcc ctcagtgtct ggggccccag ggcagagggt caccatctcc 60
tgcactggga gcagctccaa catcggggca ggttatgatg tacactggta ccagcagctt 120
ccaggaacag cccccaaact cctcatctat ggtaacagca atcggccctc aggggtccct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacg tcagccaccc tgggcatcac cggactccag 240
actggggacg aggccgatta ttactgcgga acatgggata gcagcctgag tgcttatgtc 300
ttcggaactg ggaccaaggt caccgtccta ggtgcggccg caggccagcc caaggccgct 360
cccagcgtga ccctgttccc cccctcctcc gaggagctgc aggccaacaa ggccaccctg 420
gtgtgcctca tcagcgactt ctaccctggc gccgtgaccg tggcctggaa ggccgacagc 480
agccccgtga aggccggcgt ggagaccacc acccccagca agcagagcaa caacaagtac 540
gccgccagca gctacctgag cctcaccccc gagcagtgga agagccaccg gagctacagc 600
tgccaggtga cccacgaggg cagcaccgtg gagaagaccg tggcccccac cgagtgcagc 660
配列番号109
T V L T Q P P S V S G A P G Q R V T I S C T G S S S N I G A G Y D V H W Y Q Q L P G T A P K L L I Y G N S N R P S G V P D R F S G S K S G T S A T L G I T G L Q T G D E A D Y Y C G T W D S S L S A Y V F G T G T K V T V L G A A A G Q P K A A P S V T L F P P S S E E L Q A N K A T L V C L I S D F Y P G A V T V A W K A D S S P V K A G V E T T T P S K Q S N N K Y A A S S Y L S L T P E Q W K S H R S Y S C Q V T H E G S T V E K T V A P T E C S
配列番号110
M E K I V L L F A I V S L V K S D Q I C I G Y H A N N S T E Q V D T I M E K N V T V T H A Q D I L E K K H N G K L C D L D G V K P L I L R D C S V A G W L L G N P M C D E F I N V P E W S Y I V E K A N P V N D L C Y P G D F N D Y E E L K H L L S R I N H F E K I Q I I P K S S W S S H E A S L G V S S A C P Y Q G K S S F F R N V V W L I K K N S T Y P T I K R S Y N N T N Q E D L L V L W G I H H P N D A A E Q T K L Y Q N P T T Y I S V G T S T L N Q R L V P R I A T R S K V N G Q S G R M E F F W T I L K P N D A I N F E S N G N F I A P E Y A Y K I V K K G D S T I M K S E L E Y G N C N T K C Q T P M G A I N S S M P F H N I H P L T I G E C P K Y V K S N R L V L A T G L R N S P Q R E R R R K K R G L F G A I A G F I E G G W Q G M V D G W Y G Y H H S N E Q G S G Y A A D K E S T Q K A I D G V T N K V N S I I D K M N T Q F E A V G R E F N N L E R R I E N L N K K M E D G F L D V W T Y N A E L L V L M E N E R T L D F H D S N V K N L Y D K V R L Q L R D N A K E L G N G C F E F Y H K C D N E C M E S V R N G T Y D Y P Q Y S E E A R L K R E E I S G V K L E S I G I Y Q I L S I Y S T V A S S L A L A I M V A G L S L W M C S N G S L Q C R
配列番号111
M E K I V L L F A I V S L V K S D Q I C I G Y H A N N S T E Q V D T I M E K N V T V T H A Q D I L E K T H N G K L C D L D G V K P L I L R D C S V A G W L L G N P M C D E F I N V P E W S Y I V E K A N P V N D L C Y P G D F N D Y E E L K H L L S R I N H F E K I Q I I P K S S W S S H E A S L G V S S A C P Y Q G K S S F F R N V V W L I K K N S T Y P T I K R S Y N N T N Q E D L L V L W G I H H P N D A A E Q T K L Y Q N P T T Y I S V G T S T L N Q R L V P R I A T R S K V N G Q S G R M E F F W T I L K P N D A I N F E S N G N F I A P E Y A Y K I V K K G D S T I M K S E L E Y G N C N T K C Q T P M G A I N S S M P F H N I H P L T I G E C P K Y V K S N R L V L A T G L R N S P Q R E R R R K K R G L F G A I A G F I E G G W Q G M V D G W Y G Y H H S N E Q G S G Y A A D K E S T Q K A I D G V T N K V N S I I D K M N T Q F E A V G R E F N N L E R R I E N L N K K M E D G F L D V W T Y N A E L L V L M E N E R T L D F H D S N V K N L Y D K V R L Q L R D N A K E L G N G C F E F Y H K C D N E C M E S V R N G T Y D Y P Q Y S E E A R L K R E E I S G V K L E S I G I Y Q I L S I Y S T V A S S L A L A I M V A G L S L W M C S N G S L Q C R
配列番号112
M E K I V L L L A I V S L V K S D Q I C I G Y H A N N S T E Q V D T I M E K N V T V T H A Q D I L E K T H N G K L C D L D G V K P L I L R D C S V A G W L L G N P M C D E F I N V P E W S Y I V E K A N P A N D L C Y P G N F N D Y E E L K H L L S R I N H F E K I Q I I P K S S W S D H E A S S G V S S A C P Y Q G K S S F F R N V V W L I K K N S S Y P T I K R S Y N N T N Q E D L L V L W G I H H P N D A A E Q T R L Y Q N P T T Y I S V G T S T L N Q R L V P K I A T R S K V N G Q S G R M E F F W T I L K P N D A I N F E S N G N F I A P E Y A Y K I V K K G D S A I M K S E L E Y G N C N T K C Q T P M G A I N S S M P F H N I H P L T I G E C P K Y V K S N R L V L A T G L R N S P Q R E R R R K K R G L F G A I A G F I E G G W Q G M V D G W Y G Y H H S N E Q G S G Y A A D K E S T Q K A I D G V T N K V N S I I D K M N T Q F E A V G R E F N N L E R R I E N L N K K M E D G F L D V W T Y N A E L L V L M E N E R T L D F H D S N V K N L Y D K V R L Q L R D N A K E L G N G C F E F Y H K C D N E C M E S V R N G T Y D Y P Q Y S E E A R L K R E E I S G V K L E S I G I Y Q I L S I Y S T V A S S L A L A I M V A G L S L W M C S N G S L Q C R
配列番号113
M E K I V L L F A I V S L V K S D Q I C I G Y H A N N S T E Q V D T I M E K N V T V T H A Q D I L E K T H N G K L C D L D G V K P L I L R D C S V A G W L L G N P M C D E F I N V P E W S Y I V E K A N P V N D L C Y P G D F N D Y E E L K H L L S R I N H F E K I Q I I P K S S W S S H E A S L G V S S A C P Y Q G K S S F F R N V V W L I K K N S T Y P T I K R S Y N N T N Q E D L L V L W G I H H P N D A A E Q T K L Y Q N P T T Y I S V G T S T L N Q R L V P R I A T R S K V N G Q S G R M E F F W T I L K P N D A I N F E S N G N F I A P E Y A Y K I V K K G D S T I M K S E L E Y G N C N T K C Q T P M G A I N S S M P F H N I H P L T I G E C P K Y V K S N R L V L A T G L R N S P Q R E R R R K K R G L F G A I A G F I E G G W Q G M V D G W Y G Y H H S N E Q G S G Y A A D K E S T Q K A I D G V T N K V N S I I D K M N T Q F E A V G R E F N N L E R R I E N L N K K M E D G F L D V W T Y N A E L L V L M E N E R T L D F H D S N V K N L Y D K V R L Q L R D N A K E L G N G C F E F Y H K C D N E C M E S V R N G T Y D Y P Q Y S E E A R L K R E E I S G V K L E S I G I Y Q I Q H S G G R S S L E G P R F E Q K L I S E E D L N M H T G H H H H H H
配列番号114
M E K I V L L L A I V S L V K S D Q I C I G Y H A N N S T E Q V D T I M E K N V T V T H A Q D I L E K T H N G K L C D L D G V K P L I L R D C S V A G W L L G N P M C D E F I N V P E W S Y I V E K A N P A N D L C Y P G N F N D Y E E L K H L L S R I N H F E K I Q I I P K S S W S D H E A S S G V S S A C P Y Q G K S S F F R N V V W L I K K N S S Y P T I K R S Y N N T N Q E D L L V L W G I H H P N D A A E Q T R L Y Q N P T T Y I S V G T S T L N Q R L V P K I A T R S K V N G Q S G R M E F F W T I L K P N D A I N F E S N G N F I A P E Y A Y K I V K K G D S A I M K S E L E Y G N C N T K C Q T P M G A I N S S M P F H N I H P L T I G E C P K Y V K S N R L V L A T G L R N S P Q R E R R R K K R G L F G A I A G F I E G G W Q G M V D G W Y G Y H H S N E Q G S G Y A A D K E S T Q K A I D G V T N K V N S I I D K M N T Q F E A V G R E F N N L E R R I E N L N K K M E D G F L D V W T Y N A E L L V L M E N E R T L D F H D S N V K N L Y D K V R L Q L R D N A K E L G N G C F E F Y H K C D N E C M E S V R N G T Y D Y P Q Y S E E A R L K R E E I S G V K L E S I G I Y Q I Q H S G G R S S L E G P R F E Q K L I S E E D L N M H T G H H H H H H
配列番号115
gaggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaagtc 60
tcttgcaagg cttctggagg ccccttccgc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcctgagtg gatgggaggg atcatcccta tttttggtac aacaaaatac 180
gcaccgaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg atttcgcggg cacagtttac 240
atggagctga gcagcctgcg atctgaggac acggccatgt actactgtgc gaaacatatg 300
gggtaccagg tgcgcgaaac tatggacgtc tggggcaaag ggaccacggt caccgtctcg 360
agcggtacgg gcggttcagg cggaaccggc agcggcactg gcgggtcgac gtcctatgtg 420
ctgactcagc caccctcagc gtctgggacc cccgggcaga gggtcaccat ctcttgttct 480
ggaagcacgt tcaacatcgg aagtaatgct gtagactggt accggcagct cccaggaacg 540
gcccccaaac tcctcatcta tagtaataat cagcggccct caggggtccc tgaccgattc 600
tctggctcca ggtctggcac ctcagcctcc ctggccatca gtgggctcca gtctgaggat 660
gaggctgatt attactgtgc agcatgggat gacatcctga atgttccggt attcggcgga 720
gggaccaagc tgaccgtcct aggt 744
配列番号116
E V Q L V E S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G G P F R S Y A I S W V R Q A P G Q G P E W M G G I I P I F G T T K Y A P K F Q G R V T I T A D D F A G T V Y M E L S S L R S E D T A M Y Y C A K H M G Y Q V R E T M D V W G K G T T V T V S S G T G G S G G T G S G T G G S T S Y V L T Q P P S A S G T P G Q R V T I S C S G S T F N I G S N A V D W Y R Q L P G T A P K L L I Y S N N Q R P S G V P D R F S G S R S G T S A S L A I S G L Q S E D E A D Y Y C A A W D D I L N V P V F G G G T K L T V L G
配列番号117
caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaagtc 60
tcttgcaagg cttctggagg ccccttccgc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcctgagtg gatgggaggg atcatcccta tttttggtac aacaaaatac 180
gcaccgaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg atttcgcggg cacagtttac 240
atggagctga gcagcctgcg atctgaggac acggccatgt actactgtgc gaaacatatg 300
gggtaccagg tgcgcgaaac tatggacgtc tggggcaaag ggaccacggt caccgtctcg 360
agcggtacgg gcggttcagg cggaaccggc agcggcactg gcgggtcgac gcagtctgcc 420
ctgactcagc ctgccgccgt gtctgggtct cctggacagt cgatcaccat ctcctgcact 480
ggaaccagca gtgacgttgg tggttataac tatgtctcct ggtaccaaca gcacccaggc 540
aaagccccca aactcatgat ttatgaggtc agtaatcggc cctcaggggt ttctaatcgc 600
ttctctggct ccaagtctgg caacacggcc tccctgacca tctctgggct ccaggctgag 660
gacgaggctg attattactg cagctcatat acaagcagca gcacttatgt cttcggaact 720
gggaccaagg tcaccgtcct aggt 744
配列番号118
Q V Q L V Q S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G G P F R S Y A I S W V R Q A P G Q G P E W M G G I I P I F G T T K Y A P K F Q G R V T I T A D D F A G T V Y M E L S S L R S E D T A M Y Y C A K H M G Y Q V R E T M D V W G K G T T V T V S S G T G G S G G T G S G T G G S T Q S A L T Q P A A V S G S P G Q S I T I S C T G T S S D V G G Y N Y V S W Y Q Q H P G K A P K L M I Y E V S N R P S G V S N R F S G S K S G N T A S L T I S G L Q A E D E A D Y Y C S S Y T S S S T Y V F G T G T K V T V L G
配列番号119
gaggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaagtc 60
tcttgcaagg cttctggagg ccccttccgc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcctgagtg gatgggaggg atcatcccta tttttggtac aacaaaatac 180
gcaccgaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg atttcgcggg cacagtttac 240
atggagctga gcagcctgcg atctgaggac acggccatgt actactgtgc gaaacatatg 300
gggtaccagg tgcgcgaaac tatggacgtc tggggcaaag ggaccacggt caccgtctcg 360
agcggtacgg gcggttcagg cggaaccggc agcggcactg gcgggtcgac gtcctatgtg 420
ctgactcagc caccctcagt ctctgggacc cccgggcaga gggtcaccat ctcttgctct 480
ggaagccgct ccaacgtcgg agataattct gtatattggt atcaacacgt cccagaaatg 540
gcccccaaac tcctcgtcta taagaatact caacggccct caggagtccc tgcccggttt 600
tccggctcca agtctggcac ttcagcctcc ctggccatca ttggcctcca gtccggcgat 660
gaggctgatt attattgtgt ggcatgggat gacagcgtag atggctatgt cttcggatct 720
gggaccaagg tcaccgtcct aggt 744
配列番号120
E V Q L V E S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G G P F R S Y A I S W V R Q A P G Q G P E W M G G I I P I F G T T K Y A P K F Q G R V T I T A D D F A G T V Y M E L S S L R S E D T A M Y Y C A K H M G Y Q V R E T M D V W G K G T T V T V S S G T G G S G G T G S G T G G S T S Y V L T Q P P S V S G T P G Q R V T I S C S G S R S N V G D N S V Y W Y Q H V P E M A P K L L V Y K N T Q R P S G V P A R F S G S K S G T S A S L A I I G L Q S G D E A D Y Y C V A W D D S V D G Y V F G S G T K V T V L G
配列番号121
gaggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaagtc 60
tcttgcaagg cttctggagg ccccttccgc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcctgagtg gatgggaggg atcatcccta tttttggtac aacaaaatac 180
gcaccgaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg atttcgcggg cacagtttac 240
atggagctga gcagcctgcg atctgaggac acggccatgt actactgtgc gaaacatatg 300
gggtaccagg tgcgcgaaac tatggacgtc tggggcaaag ggaccacggt caccgtctcg 360
agcggtacgg gcggttcagg cggaaccggc agcggcactg gcgggtcgac gcagtctgtg 420
ttgacgcagc cgccctcagt gtctgcggcc ccaggacaga aggtcaccat ctcctgctct 480
ggaagcagct ccaacattgg gaatgattat gtatcctggt accagcagct cccaggaaca 540
gcccccaaac tcctcattta tgacaataat aagcgaccct cagggattcc tgaccgattc 600
tctggctcca agtctggcac gtcagccacc ctgggcatca ccggactcca gactggggac 660
gaggccaact attactgcgc aacatgggat cgccgcccga ctgcttatgt tgtcttcggc 720
ggagggacca agctgaccgt cctaggt 747
配列番号122
E V Q L V E S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G G P F R S Y A I S W V R Q A P G Q G P E W M G G I I P I F G T T K Y A P K F Q G R V T I T A D D F A G T V Y M E L S S L R S E D T A M Y Y C A K H M G Y Q V R E T M D V W G K G T T V T V S S G T G G S G G T G S G T G G S T Q S V L T Q P P S V S A A P G Q K V T I S C S G S S S N I G N D Y V S W Y Q Q L P G T A P K L L I Y D N N K R P S G I P D R F S G S K S G T S A T L G I T G L Q T G D E A N Y Y C A T W D R R P T A Y V V F G G G T K L T V L G
配列番号123
caggtacagc tgcagcagtc aggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg tttccggagt cattttcagc ggcagtgcga tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag gccttgagtg gatgggaggg atcagccctc tctttggcac aacaaattac 180
gcacaaaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacc aatccacgaa cacaacctac 240
atggaggtga acagcctgag atatgaggac acggccgtgt atttctgtgc gcgaggtcca 300
aaatattaca gtgagtacat ggacgtctgg ggcaaaggga ccacggtcac cgtctcgagc 360
ggtacgggcg gttcaggcgg aaccggcagc ggcactggcg ggtcgacgga catccagatg 420
acccagtctc catcctccct gtctgcatct gtaggagaca gagtcaccat cacttgccgg 480
gcgagtcagg gcattagcag ttatttagcc tggtatcagc agaagccagg gaaagttcct 540
acactcctga tctatgatgc atccactttg cgatcagggg tcccatctcg cttcagtggc 600
agtggatctg cgacagattt cactctcacc atcagcagcc tgcagcctga agatgttgca 660
acttattact gtcaaaggta taacagtgcc cccccgatca ccttcggcca agggacacga 720
ctggagatta aacgt 735
配列番号124
Q V Q L Q Q S G A E V K K P G S S V K V S C K V S G V I F S G S A I S W V R Q A P G Q G L E W M G G I S P L F G T T N Y A Q K F Q G R V T I T A D Q S T N T T Y M E V N S L R Y E D T A V Y F C A R G P K Y Y S E Y M D V W G K G T T V T V S S G T G G S G G T G S G T G G S T D I Q M T Q S P S S L S A S V G D R V T I T C R A S Q G I S S Y L A W Y Q Q K P G K V P T L L I Y D A S T L R S G V P S R F S G S G S A T D F T L T I S S L Q P E D V A T Y Y C Q R Y N S A P P I T F G Q G T R L E I K R
配列番号125
caggtccagc tggtacagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcagt agttatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggagga atcatgggta tgtttggcac aactaactac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aattcacgag cgcagcctac 240
atggagctga ggagcctgag atctgaggac acggccgtct actactgtgc gaggtctagt 300
ggttattacc ccgaatactt ccaggactgg ggccagggca ccctggtcac cgtctcgagc 360
ggtacgggcg gttcaggcgg aaccggcagc ggcactggcg ggtcgacgca gtctgtgctg 420
actcagccac cctcagagtc cgtgtcccca ggacagacag ccagcgtcac ctgctctgga 480
cataaattgg gggataaata tgtttcgtgg tatcagcaga agccaggcca gtcccctgta 540
ttactcatct atcaagataa caggcggccc tcagggatcc ctgagcgatt cataggctcc 600
aactctggga acacagccac tctgaccatc agcgggaccc aggctctgga tgaggctgac 660
tattactgtc aggcgtggga cagcagcact gcggttttcg gcggagggac caagctgacc 720
gtcctaggt 729
配列番号126
Q V Q L V Q S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G G T F S S Y A I S W V R Q A P G Q G L E W M G G I M G M F G T T N Y A Q K F Q G R V T I T A D E F T S A A Y M E L R S L R S E D T A V Y Y C A R S S G Y Y P E Y F Q D W G Q G T L V T V S S G T G G S G G T G S G T G G S T Q S V L T Q P P S E S V S P G Q T A S V T C S G H K L G D K Y V S W Y Q Q K P G Q S P V L L I Y Q D N R R P S G I P E R F I G S N S G N T A T L T I S G T Q A L D E A D Y Y C Q A W D S S T A V F G G G T K L T V L G
配列番号127
caggtccagc tggtgcagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatagca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcc attagtagta gtagtagtta catatactac 180
gtagactcag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaggtggt 300
gggagctacg gggcctacga aggctttgac tactggggcc agggcaccct ggtcaccgtc 360
tcgagcggta cgggcggttc aggcggaacc ggcagcggca ctggcgggtc gacggaaatt 420
gtgctgactc agtctccagg caccctgtct ttgtctccag gggaaagagc caccctctcc 480
tgcagggcca gtcagcgtgt tagcagctac ttagcctggt accaacagaa acctggccag 540
gctcccaggc tcctcatcta tggtgcatcc accagggccg ctggcatccc agacaggttc 600
agtggcagtg ggtctgggac agacttcact ctcaccatca gcagactgga gcctgaagat 660
tctgcagtgt attactgtca gcagtatggt aggacaccgc tcactttcgg cggagggacc 720
aaggtggaga tcaaacgt 738
配列番号128
Q V Q L V Q S G G G L V K P G G S L R L S C A A S G F T F S S Y S M N W V R Q A P G K G L E W V S S I S S S S S Y I Y Y V D S V K G R F T I S R D N A K N S L Y L Q M N S L R A E D T A V Y Y C A R G G G S Y G A Y E G F D Y W G Q G T L V T V S S G T G G S G G T G S G T G G S T E I V L T Q S P G T L S L S P G E R A T L S C R A S Q R V S S Y L A W Y Q Q K P G Q A P R L L I Y G A S T R A A G I P D R F S G S G S G T D F T L T I S R L E P E D S A V Y Y C Q Q Y G R T P L T F G G G T K V E I K R
配列番号129
gaggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaagtc 60
tcttgcaagg cttctggagg ccccttccgc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcctgagtg gatgggaggg atcatcccta tttttggtac aacaaaatac 180
gcaccgaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg atttcgcggg cacagtttac 240
atggagctga gcagcctgcg atctgaggac acggccatgt actactgtgc gaaacatatg 300
gggtaccagg tgcgcgaaac tatggacgtc tggggcaaag ggaccacggt caccgtctcg 360
agcggtacgg gcggttcagg cggaaccggc agcggcactg gcgggtcgac gtcctatgtg 420
ctgactcagc caccctcggt gtcagtggcc ccaggacaga cggccaggat tacctgtggg 480
ggaaacaaca ttggaagtaa aagtgtgcac tggtaccagc agaagccagg ccaggcccct 540
gtgctggtcg tctatgatga tagcgaccgg ccctcaggga tccctgagcg attctctggc 600
tccaactctg ggaacacggc caccctgacc atcagcaggg tcgaagccgg ggatgaggcc 660
gactattact gtcaggtgtg ggatagtagt agtgatcatg ctgtgttcgg aggaggcacc 720
cagctgaccg tcctcggt 738
配列番号130
E V Q L V E S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G G P F R S Y A I S W V R Q A P G Q G P E W M G G I I P I F G T T K Y A P K F Q G R V T I T A D D F A G T V Y M E L S S L R S E D T A M Y Y C A K H M G Y Q V R E T M D V W G K G T T V T V S S G T G G S G G T G S G T G G S T S Y V L T Q P P S V S V A P G Q T A R I T C G G N N I G S K S V H W Y Q Q K P G Q A P V L V V Y D D S D R P S G I P E R F S G S N S G N T A T L T I S R V E A G D E A D Y Y C Q V W D S S S D H A V F G G G T Q L T V L G
配列番号131
gaggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaagtc 60
tcttgcaagg cttctggagg ccccttccgc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcctgagtg gatgggaggg atcatcccta tttttggtac aacaaaatac 180
gcaccgaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg atttcgcggg cacagtttac 240
atggagctga gcagcctgcg atctgaggac acggccatgt actactgtgc gaaacatatg 300
gggtaccagg tgcgcgaaac tatggacgtc tggggcaaag ggaccacggt caccgtctcg 360
agcggtacgg gcggttcagg cggaaccggc agcggcactg gcgggtcgac gtcctatgtg 420
ctgactcagc caccctcagc gtctgggacc cccgggcaga gggtcaccat ctcttgttct 480
ggaagcagct ccaacatcgg aagtaattat gtatactggt accagcagct cccaggcacg 540
gcccccaaac tcctcatcta tagggatggt cagcggccct caggggtccc tgaccgattc 600
tctggctcca agtctggcac ctcagcctcc ctggccatca gtggactccg gtccgatgat 660
gaggctgatt attactgtgc aacatgggat gacaacctga gtggtccagt attcggcgga 720
gggaccaagc tgaccgtcct aggt 744
配列番号132
E V Q L V E S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G G P F R S Y A I S W V R Q A P G Q G P E W M G G I I P I F G T T K Y A P K F Q G R V T I T A D D F A G T V Y M E L S S L R S E D T A M Y Y C A K H M G Y Q V R E T M D V W G K G T T V T V S S G T G G S G G T G S G T G G S T S Y V L T Q P P S A S G T P G Q R V T I S C S G S S S N I G S N Y V Y W Y Q Q L P G T A P K L L I Y R D G Q R P S G V P D R F S G S K S G T S A S L A I S G L R S D D E A D Y Y C A T W D D N L S G P V F G G G T K L T V L G
配列番号133
gaggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc cagggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgtaagg cctctggagg caccttctcc agctatggta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggagac atcatcggta tgtttggttc aacaaactac 180
gcacagaact tccagggcag actcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaagtagt 300
ggttattacc ctgcatacct cccccactgg ggccagggca ccttggtcac cgtctcgagc 360
ggtacgggcg gttcaggcgg aaccggcagc ggcactggcg ggtcgacgga aattgtgttg 420
acccagtctc caggcaccct gtctttgtct ccaggggaaa gagccaccct ctcctgcagg 480
gccagtcaga gtgttagcag cagctactta gcctggtacc agcagaaacc tggccaggct 540
cccaggctcc tcatctatgg tgcatccagc agggccactg gcatcccaga caggttcagt 600
ggcagtgggt ctgggacaga cttcactctc accatcagca gactggagcc tgaagatttt 660
gcagtgtatt actgtcagca gtatggtagc tcacccagaa ctttcggcgg agggaccaag 720
gtggagatca aacgt 735
配列番号134
E V Q L V E S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G G T F S S Y G I S W V R Q A P G Q G L E W M G D I I G M F G S T N Y A Q N F Q G R L T I T A D E S T S T A Y M E L S S L R S E D T A V Y Y C A R S S G Y Y P A Y L P H W G Q G T L V T V S S G T G G S G G T G S G T G G S T E I V L T Q S P G T L S L S P G E R A T L S C R A S Q S V S S S Y L A W Y Q Q K P G Q A P R L L I Y G A S S R A T G I P D R F S G S G S G T D F T L T I S R L E P E D F A V Y Y C Q Q Y G S S P R T F G G G T K V E I K R
配列番号135
gaggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc cggggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc ttctattcta tgagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag gacttgagtg gatgggaggg atcatcccta tgtttggtac aacaaactac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggtcg aatccacgag cacagcctac 240
atggaggtga gcagcctgag atctgaggac acggccgttt attactgtgc gagaggtgat 300
aagggtatct actactacta catggacgtc tggggcaaag ggaccacggt caccgtctcg 360
agcggtacgg gcggttcagg cggaaccggc agcggcactg gcgggtcgac gcagtctgcc 420
ctgactcagc ctgcctccgt gtctgggtct cctggacagt cgatcaccat ctcctgcact 480
ggaaccagca gtgacgttgg tggttataac tatgtctcct ggtaccaaca gcacccaggc 540
aaagccccca aactcatgat ttatgaggtc agtaatcggc cctcaggggt ttctaatcgc 600
ttctctggct ccaagtctgg caacacggcc tccctgacca tctctgggct ccaggctgag 660
gacgaggctg attattactg cagctcatat acaagcagca gcactcttgt cttcggaact 720
gggaccaagg tcaccgtcct aggt 744
配列番号136
E V Q L V E S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G G T F S F Y S M S W V R Q A P G Q G L E W M G G I I P M F G T T N Y A Q K F Q G R V T I T A V E S T S T A Y M E V S S L R S E D T A V Y Y C A R G D K G I Y Y Y Y M D V W G K G T T V T V S S G T G G S G G T G S G T G G S T Q S A L T Q P A S V S G S P G Q S I T I S C T G T S S D V G G Y N Y V S W Y Q Q H P G K A P K L M I Y E V S N R P S G V S N R F S G S K S G N T A S L T I S G L Q A E D E A D Y Y C S S Y T S S S T L V F G T G T K V T V L G
配列番号137
gaggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcggta tgttcggtac agcaaactac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatttacgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaggaaat 300
tattactatg agagtagtct cgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcgagc 360
ggtacgggcg gttcaggcgg aaccggcagc ggcactggcg ggtcgacgca gtctgtcgtg 420
acgcagccgc cctcggtgtc agtggcccca ggacagacgg ccaggattac ctgtggggga 480
aacaacattg gaagtaaaag tgtgcactgg taccagcaga agccaggcca ggcccctgtg 540
ctggtcgtct atgatgatag cgaccggccc tcagggatcc ctgagcgatt ctctggctcc 600
aactctggga acacggccac cctgaccatc agcagggtcg aagccgggga tgaggccgac 660
tattactgtc aggtgtggga tagtagtagt gatcattatg tcttcggaac tgggaccaag 720
gtcaccgtcc taggt 735
配列番号138
E V Q L V E S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G G T F S S Y A I S W V R Q A P G Q G L E W M G G I I G M F G T A N Y A Q K F Q G R V T I T A D E F T S T A Y M E L S S L R S E D T A V Y Y C A R G N Y Y Y E S S L D Y W G Q G T L V T V S S G T G G S G G T G S G T G G S T Q S V V T Q P P S V S V A P G Q T A R I T C G G N N I G S K S V H W Y Q Q K P G Q A P V L V V Y D D S D R P S G I P E R F S G S N S G N T A T L T I S R V E A G D E A D Y Y C Q V W D S S S D H Y V F G T G T K V T V L G
配列番号139
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgagagtc 60
tcctgcaagg cttctggaag catcttcaga aactatgcta tgagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcgcta tttttgggac accaaagtac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatcgacgag cactgtctac 240
atggaactga gcggactgag atctgaggac acggccatgt attactgtgc gaggattccc 300
cactataatt ttggttcggg gagttatttc gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360
gtctcgagcg gtacgggcgg ttcaggcgga accggcagcg gcactggcgg gtcgacgact 420
gtgttgacac agccgccctc agtgtctggg gccccagggc agagggtcac catctcctgc 480
actgggagca gctccaacat cggggcaggt tatgatgtac actggtacca gcagcttcca 540
ggaacagccc ccaaactcct catctatggt aacagcaatc ggccctcagg ggtccctgac 600
cgattctctg gctccaagtc tggcacgtca gccaccctgg gcatcaccgg actccagact 660
ggggacgagg ccgattatta ctgcggaaca tgggatagca gcctgagtgc ttatgtcttc 720
ggaactggga ccaaggtcac cgtcctaggt 750
配列番号140
Q V Q L V Q S G A E V K K P G S S V R V S C K A S G S I F R N Y A M S W V R Q A P G Q G L E W M G G I I A I F G T P K Y A Q K F Q G R V T I T A D E S T S T V Y M E L S G L R S E D T A M Y Y C A R I P H Y N F G S G S Y F D Y W G Q G T L V T V S S G T G G S G G T G S G T G G S T T V L T Q P P S V S G A P G Q R V T I S C T G S S S N I G A G Y D V H W Y Q Q L P G T A P K L L I Y G N S N R P S G V P D R F S G S K S G T S A T L G I T G L Q T G D E A D Y Y C G T W D S S L S A Y V F G T G T K V T V L G
配列番号141
tcgacggatc gggagatctc ccgatcccct atggtgcact ctcagtacaa tctgctctga 60
tgccgcatag ttaagccagt atctgctccc tgcttgtgtg ttggaggtcg ctgagtagtg 120
cgcgagcaaa atttaagcta caacaaggca aggcttgacc gacaattgca tgaagaatct 180
gcttagggtt aggcgttttg cgctgcttcg ctaggtggtc aatattggcc attagccata 240
ttattcattg gttatatagc ataaatcaat attggctatt ggccattgca tacgttgtat 300
ccatatcata atatgtacat ttatattggc tcatgtccaa cattaccgcc atgttgacat 360
tgattattga ctagttatta atagtaatca attacggggt cattagttca tagcccatat 420
atggagttcc gcgttacata acttacggta aatggcccgc ctggctgacc gcccaacgac 480
ccccgcccat tgacgtcaat aatgacgtat gttcccatag taacgccaat agggactttc 540
cattgacgtc aatgggtgga gtatttacgg taaactgccc acttggcagt acatcaagtg 600
tatcatatgc caagtacgcc ccctattgac gtcaatgacg gtaaatggcc cgcctggcat 660
tatgcccagt acatgacctt atgggacttt cctacttggc agtacatcta cgtattagtc 720
atcgctatta ccatggtgat gcggttttgg cagtacatca atgggcgtgg atagcggttt 780
gactcacggg gatttccaag tctccacccc attgacgtca atgggagttt gttttggcac 840
caaaatcaac gggactttcc aaaatgtcgt aacaactccg ccccattgac gcaaatgggc 900
ggtaggcgtg tacggtggga ggtctatata agcagagctc gtttagtgaa ccgtcagatc 960
gcctggagac gccatccacg ctgttttgac ctccatagaa gacaccggga ccgatccagc 1020
ctccgcggcc gggaacggtg cattggaagc tggcctggat atcctgactc tcttaggtag 1080
ccttgcagaa gttggtcgtg aggcactggg caggtaagta tcaaggttac aagacaggtt 1140
taaggagatc aatagaaact gggcttgtcg agacagagaa gactcttgcg tttctgatag 1200
gcacctattg gtcttactga catccacttt gcctttctct ccacaggtgt ccactcccag 1260
ttcaattaca gctcgccacc atgggatgga gctgtatcat cctcttcttg gtactgctgc 1320
tggcccagcc ggccagtgac cttgaccggt gcaccacttt tgatgatgtt caagctccta 1380
attacactca acatacttca tctatgaggg gggtttacta tcctgatgaa atttttagat 1440
cggacactct ttatttaact caggatttat ttcttccatt ttattctaat gttacagggt 1500
ttcatactat taatcatacg tttggcaacc ctgtcatacc ttttaaggat ggtatttatt 1560
ttgctgccac agagaaatca aatgttgtcc gtggttgggt ttttggttct accatgaaca 1620
acaagtcaca gtcggtgatt attattaaca attctactaa tgttgttata cgagcatgta 1680
actttgaatt gtgtgacaac cctttctttg ctgtttctaa acccatgggt acacagacac 1740
atactatgat attcgataat gcatttaatt gcactttcga gtacatatct gatgcctttt 1800
cgcttgatgt ttcagaaaag tcaggtaatt ttaaacactt acgagagttt gtgtttaaaa 1860
ataaagatgg gtttctctat gtttataagg gctatcaacc tatagatgta gttcgtgatc 1920
taccttctgg ttttaacact ttgaaaccta tttttaagtt gcctcttggt attaacatta 1980
caaattttag agccattctt acagcctttt cacctgctca agacatttgg ggcacgtcag 2040
ctgcagccta ttttgttggc tatttaaagc caactacatt tatgctcaag tatgatgaaa 2100
atggtacaat cacagatgct gttgattgtt ctcaaaatcc acttgctgaa ctcaaatgct 2160
ctgttaagag ctttgagatt gacaaaggaa tttaccagac ctctaatttc agggttgttc 2220
cctcaggaga tgttgtgaga ttccctaata ttacaaactt gtgtcctttt ggagaggttt 2280
ttaatgctac taaattccct tctgtctatg catgggagag aaaaaaaatt tctaattgtg 2340
ttgctgatta ctctgtgctc tacaactcaa catttttttc aacctttaag tgctatggcg 2400
tttctgccac taagttgaat gatctttgct tctccaatgt ctatgcagat tcttttgtag 2460
tcaagggaga tgatgtaaga caaatagcgc caggacaaac tggtgttatt gctgattata 2520
attataaatt gccagatgat ttcatgggtt gtgtccttgc ttggaatact aggaacattg 2580
atgctacttc aactggtaat tataattata aatataggta tcttagacat ggcaagctta 2640
ggccctttga gagagacata tctaatgtgc ctttctcccc tgatggcaaa ccttgcaccc 2700
cacctgctct taattgttat tggccattaa atgattatgg tttttacacc actactggca 2760
ttggctacca accttacaga gttgtagtac tttcttttga acttttaaat gcaccggcca 2820
cggtttgtgg accaaaatta tccactgacc ttattaagaa ccagtgtgtc aattttaatt 2880
ttaatggact cactggtact ggtgtgttaa ctccttcttc aaagagattt caaccatttc 2940
aacaatttgg ccgtgatgtt tctgatttca ctgattccgt tcgagatcct aaaacatctg 3000
aaatattaga catttcacct tgctcttttg ggggtgtaag tgtaattaca cctggaacaa 3060
atgcttcatc tgaagttgct gttctatatc aagatgttaa ctgcactgat gtttctacag 3120
caattcatgc agatcaactc acaccagctt ggcgcatata ttctactgga aacaatgtat 3180
tccagactca ggcaggctgt cttataggag ctgagcatgt cgacacttct tatgagtgcg 3240
acattcctat tggagctggc atttgtgcta gttaccatac agtttcttta ttacgtagta 3300
ctagccaaaa atctattgtg gcttatacta tgtctttagg tgctgatagt tcaattgctt 3360
actctaataa caccattgct atacctacta acttttcaat tagcattact acagaagtaa 3420
tgcctgtttc tatggctaaa acctccgtag attgtaatat gtacatctgc ggagattcta 3480
ctgaatgtgc taatttgctt ctccaatatg gtagcttttg cacacaacta aatcgtgcac 3540
tctcaggtat tgctgctgaa caggatcgca acacacgtga agtgttcgct caagtcaaac 3600
aaatgtacaa aaccccaact ttgaaatatt ttggtggttt taatttttca caaatattac 3660
ctgaccctct aaagccaact aagaggtctt ttattgagga cttgctcttt aataaggtga 3720
cactcgctga tgctggcttc atgaagcaat atggcgaatg cctaggtgat attaatgcta 3780
gagatctcat ttgtgcgcag aagttcaatg gacttacagt gttgccacct ctgctcactg 3840
atgatatgat tgctgcctac actgctgctc tagttagtgg tactgccact gctggatgga 3900
catttggtgc tggcgctgct cttcaaatac cttttgctat gcaaatggca tataggttca 3960
atggcattgg agttacccaa aatgttctct atgagaacca aaaacaaatc gccaaccaat 4020
ttaacaaggc gattagtcaa attcaagaat cacttacaac aacatcaact gcattgggca 4080
agctgcaaga cgttgttaac cagaatgctc aagcattaaa cacacttgtt aaacaactta 4140
gctctaattt tggtgcaatt tcaagtgtgc taaatgatat cctttcgcga cttgataaag 4200
tcgaggcgga ggtacaaatt gacaggttaa ttacaggcag acttcaaagc cttcaaacct 4260
atgtaacaca acaactaatc agggctgctg aaatcagggc ttctgctaat cttgctgcta 4320
ctaaaatgtc tgagtgtgtt cttggacaat caaaaagagt tgacttttgt ggaaagggct 4380
accaccttat gtccttccca caagcagccc cgcatggtgt tgtcttccta catgtcacgt 4440
atgtgccatc ccaggagagg aacttcacca cagcgccagc aatttgtcat gaaggcaaag 4500
catacttccc tcgtgaaggt gtttttgtgt ttaatggcac ttcttggttt attacacaga 4560
ggaacttctt ttctccacaa ataattacta cagacaatac atttgtctca ggaaattgtg 4620
atgtcgttat tggcatcatt aacaacacag tttatgatcc tctgcaacct gagcttgact 4680
cattcaaaga agagctggac aagtacttca aaaatcatac atcaccagat gttgattttg 4740
gcgacatttc aggcattaac gcttctgtcg tcaacattca aaaagaaatt gaccgcctca 4800
atgaggtcgc taaaaattta aatgaatcac tcattgacct tcaagaactg ggaaaatatg 4860
agcaatatat taaatggcct ctcgacgaac aaaaactcat ctcagaagag gatctgaatg 4920
ctgtgggcca ggacacgcag gaggtcatcg tggtgccaca ctccttgccc tttaaggtgg 4980
tggtgatctc agccatcctg gccctggtgg tgctcaccat catctccctt atcatcctca 5040
tcatgctttg gcagaagaag ccacgttagg cggccgctcg agtgctagca ccaagggccc 5100
cagcgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc ggcggcacag ccgccctggg 5160
ctgcctggtg aaggactact tccccgagcc cgtgaccgtg agctggaaca gcggcgcctt 5220
gaccagcggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc agcggcctgt acagcctgag 5280
cagcgtggtg accgtgccca gcagcagcct gggcacccag acctacatct gcaacgtgaa 5340
ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa acgcgtggag cccaagagct gcgacaagac 5400
ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctgctgggc ggaccctccg tgttcctgtt 5460
cccccccaag cccaaggaca ccctcatgat cagccggacc cccgaggtga cctgcgtggt 5520
ggtggacgtg agccacgagg accccgaggt gaagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga 5580
ggtgcacaac gccaagacca agccccggga ggagcagtac aacagcacct accgggtggt 5640
gagcgtgctc accgtgctgc accaggactg gctgaacggc aaggagtaca agtgcaaggt 5700
gagcaacaag gccctgcctg cccccatcga gaagaccatc agcaaggcca agggccagcc 5760
ccgggagccc caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag gagatgacca agaaccaggt 5820
gtccctcacc tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggagag 5880
caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct gtgctggaca gcgacggcag 5940
cttcttcctg tacagcaagc tcaccgtgga caagagccgg tggcagcagg gcaacgtgtt 6000
cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac acccagaaga gcctgagcct 6060
gagccccggc aagtgataat ctagagggcc cgtttaaacc cgctgatcag cctcgactgt 6120
gccttctagt tgccagccat ctgttgtttg cccctccccc gtgccttcct tgaccctgga 6180
aggtgccact cccactgtcc tttcctaata aaatgaggaa attgcatcgc attgtctgag 6240
taggtgtcat tctattctgg ggggtggggt ggggcaggac agcaaggggg aggattggga 6300
agacaatagc aggcatgctg gggatgcggt gggctctatg gcttctgagg cggaaagaac 6360
cagctggggc tctagggggt atccccacgc gccctgtagc ggcgcattaa gcgcggcggg 6420
tgtggtggtt acgcgcagcg tgaccgctac acttgccagc gccctagcgc ccgctccttt 6480
cgctttcttc ccttcctttc tcgccacgtt cgccggcttt ccccgtcaag ctctaaatcg 6540
ggggctccct ttagggttcc gatttagtgc tttacggcac ctcgacccca aaaaacttga 6600
ttagggtgat ggttcacgta gtgggccatc gccctgatag acggtttttc gccctttgac 6660
gttggagtcc acgttcttta atagtggact cttgttccaa actggaacaa cactcaaccc 6720
tatctcggtc tattcttttg atttataagg gattttgccg atttcggcct attggttaaa 6780
aaatgagctg atttaacaaa aatttaacgc gaattaattc tgtggaatgt gtgtcagtta 6840
gggtgtggaa agtccccagg ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat gcatctcaat 6900
tagtcagcaa ccaggtgtgg aaagtcccca ggctccccag caggcagaag tatgcaaagc 6960
atgcatctca attagtcagc aaccatagtc ccgcccctaa ctccgcccat cccgccccta 7020
actccgccca gttccgccca ttctccgccc catggctgac taattttttt tatttatgca 7080
gaggccgagg ccgcctctgc ctctgagcta ttccagaagt agtgaggagg cttttttgga 7140
ggcctaggct tttgcaaaaa gctcccggga gcttgtatat ccattttcgg atctgatcaa 7200
gagacaggat gaggatcgtt tcgcatgatt gaacaagatg gattgcacgc aggttctccg 7260
gccgcttggg tggagaggct attcggctat gactgggcac aacagacaat cggctgctct 7320
gatgccgccg tgttccggct gtcagcgcag gggcgcccgg ttctttttgt caagaccgac 7380
ctgtccggtg ccctgaatga actgcaggac gaggcagcgc ggctatcgtg gctggccacg 7440
acgggcgttc cttgcgcagc tgtgctcgac gttgtcactg aagcgggaag ggactggctg 7500
ctattgggcg aagtgccggg gcaggatctc ctgtcatctc accttgctcc tgccgagaaa 7560
gtatccatca tggctgatgc aatgcggcgg ctgcatacgc ttgatccggc tacctgccca 7620
ttcgaccacc aagcgaaaca tcgcatcgag cgagcacgta ctcggatgga agccggtctt 7680
gtcgatcagg atgatctgga cgaagagcat caggggctcg cgccagccga actgttcgcc 7740
aggctcaagg cgcgcatgcc cgacggcgag gatctcgtcg tgacccatgg cgatgcctgc 7800
ttgccgaata tcatggtgga aaatggccgc ttttctggat tcatcgactg tggccggctg 7860
ggtgtggcgg accgctatca ggacatagcg ttggctaccc gtgatattgc tgaagagctt 7920
ggcggcgaat gggctgaccg cttcctcgtg ctttacggta tcgccgctcc cgattcgcag 7980
cgcatcgcct tctatcgcct tcttgacgag ttcttctgag cgggactctg gggttcgaaa 8040
tgaccgacca agcgacgccc aacctgccat cacgagattt cgattccacc gccgccttct 8100
atgaaaggtt gggcttcgga atcgttttcc gggacgccgg ctggatgatc ctccagcgcg 8160
gggatctcat gctggagttc ttcgcccacc ccaacttgtt tattgcagct tataatggtt 8220
acaaataaag caatagcatc acaaatttca caaataaagc atttttttca ctgcattcta 8280
gttgtggttt gtccaaactc atcaatgtat cttatcatgt ctgtataccg tcgacctcta 8340
gctagagctt ggcgtaatca tggtcatagc tgtttcctgt gtgaaattgt tatccgctca 8400
caattccaca caacatacga gccggaagca taaagtgtaa agcctggggt gcctaatgag 8460
tgagctaact cacattaatt gcgttgcgct cactgcccgc tttccagtcg ggaaacctgt 8520
cgtgccagct gcattaatga atcggccaac gcgcggggag aggcggtttg cgtattgggc 8580
gctcttccgc ttcctcgctc actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg 8640
tatcagctca ctcaaaggcg gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa 8700
agaacatgtg agcaaaaggc cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg 8760
cgtttttcca taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga 8820
ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg 8880
tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg 8940
gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc 9000
gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg 9060
gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca 9120
ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt 9180
ggcctaacta cggctacact agaagaacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag 9240
ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg 9300
gtttttttgt ttgcaagcag cagattacgc gcagaaaaaa aggatctcaa gaagatcctt 9360
tgatcttttc tacggggtct gacgctcagt ggaacgaaaa ctcacgttaa gggattttgg 9420
tcatgagatt atcaaaaagg atcttcacct agatcctttt aaattaaaaa tgaagtttta 9480
aatcaatcta aagtatatat gagtaaactt ggtctgacag ttaccaatgc ttaatcagtg 9540
aggcacctat ctcagcgatc tgtctatttc gttcatccat agttgcctga ctccccgtcg 9600
tgtagataac tacgatacgg gagggcttac catctggccc cagtgctgca atgataccgc 9660
gagacccacg ctcaccggct ccagatttat cagcaataaa ccagccagcc ggaagggccg 9720
agcgcagaag tggtcctgca actttatccg cctccatcca gtctattaat tgttgccggg 9780
aagctagagt aagtagttcg ccagttaata gtttgcgcaa cgttgttgcc attgctacag 9840
gcatcgtggt gtcacgctcg tcgtttggta tggcttcatt cagctccggt tcccaacgat 9900
caaggcgagt tacatgatcc cccatgttgt gcaaaaaagc ggttagctcc ttcggtcctc 9960
cgatcgttgt cagaagtaag ttggccgcag tgttatcact catggttatg gcagcactgc 10020
ataattctct tactgtcatg ccatccgtaa gatgcttttc tgtgactggt gagtactcaa 10080
ccaagtcatt ctgagaatag tgtatgcggc gaccgagttg ctcttgcccg gcgtcaatac 10140
gggataatac cgcgccacat agcagaactt taaaagtgct catcattgga aaacgttctt 10200
cggggcgaaa actctcaagg atcttaccgc tgttgagatc cagttcgatg taacccactc 10260
gtgcacccaa ctgatcttca gcatctttta ctttcaccag cgtttctggg tgagcaaaaa 10320
caggaaggca aaatgccgca aaaaagggaa taagggcgac acggaaatgt tgaatactca 10380
tactcttcct ttttcaatat tattgaagca tttatcaggg ttattgtctc atgagcggat 10440
acatatttga atgtatttag aaaaataaac aaataggggt tccgcgcaca tttccccgaa 10500
aagtgccacc tgacg 10515
配列番号142
tcgacggatc gggagatctc ccgatcccct atggtgcact ctcagtacaa tctgctctga 60
tgccgcatag ttaagccagt atctgctccc tgcttgtgtg ttggaggtcg ctgagtagtg 120
cgcgagcaaa atttaagcta caacaaggca aggcttgacc gacaattgtt aattaacatg 180
aagaatctgc ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgct aggtggtcaa tattggccat 240
tagccatatt attcattggt tatatagcat aaatcaatat tggctattgg ccattgcata 300
cgttgtatcc atatcataat atgtacattt atattggctc atgtccaaca ttaccgccat 360
gttgacattg attattgact agttattaat agtaatcaat tacggggtca ttagttcata 420
gcccatatat ggagttccgc gttacataac ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc 480
ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa tgacgtatgt tcccatagta acgccaatag 540
ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt atttacggta aactgcccac ttggcagtac 600
atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg 660
cctggcatta tgcccagtac atgaccttat gggactttcc tacttggcag tacatctacg 720
tattagtcat cgctattacc atggtgatgc ggttttggca gtacatcaat gggcgtggat 780
agcggtttga ctcacgggga tttccaagtc tccaccccat tgacgtcaat gggagtttgt 840
tttggcacca aaatcaacgg gactttccaa aatgtcgtaa caactccgcc ccattgacgc 900
aaatgggcgg taggcgtgta cggtgggagg tctatataag cagagctcgt ttagtgaacc 960
gtcagatcgc ctggagacgc catccacgct gttttgacct ccatagaaga caccgggacc 1020
gatccagcct ccgcggccgg gaacggtgca ttggaatcga tgactctctt aggtagcctt 1080
gcagaagttg gtcgtgaggc actgggcagg taagtatcaa ggttacaaga caggtttaag 1140
gagatcaata gaaactgggc ttgtcgagac agagaagact cttgcgtttc tgataggcac 1200
ctattggtct tactgacatc cactttgcct ttctctccac aggtgtccac tcccagttca 1260
attacagctc gccaccatgc ggctgcccgc ccagctgctg ggccttctca tgctgtgggt 1320
gcccgcctcg agatctatcg atgcatgcca tggtaccaag cttgccacca tgagcagcag 1380
ctcttggctg ctgctgagcc tggtggccgt gacagccgcc cagagcacca tcgaggagca 1440
ggccaagacc ttcctggaca agttcaacca cgaggccgag gacctgttct accagagcag 1500
cctggccagc tggaactaca acaccaacat caccgaggag aacgtgcaga acatgaacaa 1560
cgccggcgac aagtggagcg ccttcctgaa ggagcagagc acactggccc agatgtaccc 1620
cctgcaggag atccagaacc tgaccgtgaa gctgcagctg caggccctgc agcagaacgg 1680
cagcagcgtg ctgagcgagg acaagagcaa gcggctgaac accatcctga acaccatgtc 1740
caccatctac agcaccggca aagtgtgcaa ccccgacaac ccccaggagt gcctgctgct 1800
ggagcccggc ctgaacgaga tcatggccaa cagcctggac tacaacgagc ggctgtgggc 1860
ctgggagagc tggcggagcg aagtgggcaa gcagctgcgg cccctgtacg aggagtacgt 1920
ggtgctgaag aacgagatgg ccagggccaa ccactacgag gactacggcg actactggag 1980
aggcgactac gaagtgaacg gcgtggacgg ctacgactac agcagaggcc agctgatcga 2040
ggacgtggag cacaccttcg aggagatcaa gcctctgtac gagcacctgc acgcctacgt 2100
gcgggccaag ctgatgaacg cctaccccag ctacatcagc cccatcggct gcctgcccgc 2160
ccacctgctg ggcgacatgt ggggccggtt ctggaccaac ctgtacagcc tgaccgtgcc 2220
cttcggccag aagcccaaca tcgacgtgac cgacgccatg gtggaccagg cctgggacgc 2280
ccagcggatc ttcaaggagg ccgagaagtt cttcgtgagc gtgggcctgc ccaacatgac 2340
ccagggcttt tgggagaaca gcatgctgac cgaccccggc aatgtgcaga aggccgtgtg 2400
ccaccccacc gcctgggacc tgggcaaggg cgacttccgg atcctgatgt gcaccaaagt 2460
gaccatggac gacttcctga ccgcccacca cgagatgggc cacatccagt acgacatggc 2520
ctacgccgcc cagcccttcc tgctgcggaa cggcgccaac gagggctttc acgaggccgt 2580
gggcgagatc atgagcctga gcgccgccac ccccaagcac ctgaagagca tcggcctgct 2640
gagccccgac ttccaggagg acaacgagac cgagatcaac ttcctgctga agcaggccct 2700
gaccatcgtg ggcaccctgc ccttcaccta catgctggag aagtggcggt ggatggtgtt 2760
taagggcgag atccccaagg accagtggat gaagaagtgg tgggagatga agcgggagat 2820
cgtgggcgtg gtggagcccg tgccccacga cgagacctac tgcgaccccg ccagcctgtt 2880
ccacgtgagc aacgactact ccttcatccg gtactacacc cggaccctgt accagttcca 2940
gttccaggag gccctgtgcc aggccgccaa gcacgagggc cccctgcaca agtgcgacat 3000
cagcaacagc accgaggccg gacagaaact gttcaacatg ctgcggctgg gcaagagcga 3060
gccctggacc ctggccctgg agaatgtggt gggcgccaag aacatgaatg tgcgccccct 3120
gctgaactac ttcgagcccc tgttcacctg gctgaaggac cagaacaaga acagcttcgt 3180
gggctggagc accgactgga gcccctacgc cgaccagagc atcaaagtgc ggatcagcct 3240
gaagagcgcc ctgggcgaca aggcctacga gtggaacgac aacgagatgt acctgttccg 3300
gagcagcgtg gcctatgcca tgcggcagta cttcctgaaa gtgaagaacc agatgatcct 3360
gttcggcgag gaggacgtga gagtggccaa cctgaagccc cggatcagct tcaacttctt 3420
cgtgaccgcc cccaagaacg tgagcgacat catcccccgg accgaagtgg agaaggccat 3480
ccggatgagc cggagccgga tcaacgacgc cttccggctg aacgacaact ccctggagtt 3540
cctgggcatc cagcccaccc tgggccctcc caaccagccc cccgtgagca tctggctgat 3600
cgtgtttggc gtggtgatgg gcgtgatcgt ggtgggaatc gtgatcctga tcttcaccgg 3660
catccgggac cggaagaaga agaacaaggc ccggagcggc gagaacccct acgccagcat 3720
cgatatcagc aagggcgaga acaaccccgg cttccagaac accgacgacg tgcagaccag 3780
cttctgataa tctagaacga gctcgaattc gaagcttctg cagacgcgtc gacgtcatat 3840
ggatccgata tcgccgtggc ggccgcaccc agcgtgttca tcttcccccc ctccgacgag 3900
cagctgaaga gcggcaccgc cagcgtggtg tgcctgctga acaacttcta cccccgggag 3960
gccaaggtgc agtggaaggt ggacaacgcc ctgcagagcg gcaacagcca ggagagcgtg 4020
accgagcagg acagcaagga ctccacctac agcctgagca gcaccctcac cctgagcaag 4080
gccgactacg agaagcacaa ggtgtacgcc tgcgaggtga cccaccaggg cctgagcagc 4140
cccgtgacca agagcttcaa ccggggcgag tgttaataga cttaagttta aaccgctgat 4200
cagcctcgac tgtgccttct agttgccagc catctgttgt ttgcccctcc cccgtgcctt 4260
ccttgaccct ggaaggtgcc actcccactg tcctttccta ataaaatgag gaaattgcat 4320
cgcattgtct gagtaggtgt cattctattc tggggggtgg ggtggggcag gacagcaagg 4380
gggaggattg ggaagacaat agcaggcatg ctggggatgc ggtgggctct atggcttctg 4440
aggcggaaag aaccagctgg ggctctaggg ggtatcccca cgcgccctgt agcggcgcat 4500
taagcgcggc gggtgtggtg gttacgcgca gcgtgaccgc tacacttgcc agcgccctag 4560
cgcccgctcc tttcgctttc ttcccttcct ttctcgccac gttcgccggc tttccccgtc 4620
aagctctaaa tcgggggctc cctttagggt tccgatttag tgctttacgg cacctcgacc 4680
ccaaaaaact tgattagggt gatggttcac gtagtgggcc atcgccctga tagacggttt 4740
ttcgcccttt gacgttggag tccacgttct ttaatagtgg actcttgttc caaactggaa 4800
caacactcaa ccctatctcg gtctattctt ttgatttata agggattttg gccatttcgg 4860
cctattggtt aaaaaatgag ctgatttaac aaaaatttaa cgcgaattaa ttctgtggaa 4920
tgtgtgtcag ttagggtgtg gaaagtcccc aggctcccca gcaggcagaa gtatgcaaag 4980
catgcatctc aattagtcag caaccaggtg tggaaagtcc ccaggctccc cagcaggcag 5040
aagtatgcaa agcatgcatc tcaattagtc agcaaccata gtcccgcccc taactccgcc 5100
catcccgccc ctaactccgc ccagttccgc ccattctccg ccccatggct gactaatttt 5160
ttttatttat gcagaggccg aggccgcctc tgcctctgag ctattccaga agtagtgagg 5220
aggctttttt ggaggcctag gcttttgcaa aaagctcccg ggagcttgta tatccatttt 5280
cggatctgat cagcacgtga tgaaaaagcc tgaactcacc gcgacgtctg tcgagaagtt 5340
tctgatcgaa aagttcgaca gcgtctccga cctgatgcag ctctcggagg gcgaagaatc 5400
tcgtgctttc agcttcgatg taggagggcg tggatatgtc ctgcgggtaa atagctgcgc 5460
cgatggtttc tacaaagatc gttatgttta tcggcacttt gcatcggccg cgctcccgat 5520
tccggaagtg cttgacattg gggaattcag cgagagcctg acctattgca tctcccgccg 5580
tgcacagggt gtcacgttgc aagacctgcc tgaaaccgaa ctgcccgctg ttctgcagcc 5640
ggtcgcggag gccatggatg cgatcgctgc ggccgatctt agccagacga gcgggttcgg 5700
cccattcgga ccacaaggaa tcggtcaata cactacatgg cgtgatttca tatgcgcgat 5760
tgctgatccc catgtgtatc actggcaaac tgtgatggac gacaccgtca gtgcgtccgt 5820
cgcgcaggct ctcgatgagc tgatgctttg ggccgaggac tgccccgaag tccggcacct 5880
cgtgcacgcg gatttcggct ccaacaatgt cctgacggac aatggccgca taacagcggt 5940
cattgactgg agcgaggcga tgttcgggga ttcccaatac gaggtcgcca acatcttctt 6000
ctggaggccg tggttggctt gtatggagca gcagacgcgc tacttcgagc ggaggcatcc 6060
ggagcttgca ggatcgccgc ggctccgggc gtatatgctc cgcattggtc ttgaccaact 6120
ctatcagagc ttggttgacg gcaatttcga tgatgcagct tgggcgcagg gtcgatgcga 6180
cgcaatcgtc cgatccggag ccgggactgt cgggcgtaca caaatcgccc gcagaagcgc 6240
ggccgtctgg accgatggct gtgtagaagt actcgccgat agtggaaacc gacgccccag 6300
cactcgtccg agggcaaagg aatagcacgt gctacgagat ttcgattcca ccgccgcctt 6360
ctatgaaagg ttgggcttcg gaatcgtttt ccgggacgcc ggctggatga tcctccagcg 6420
cggggatctc atgctggagt tcttcgccca ccccaacttg tttattgcag cttataatgg 6480
ttacaaataa agcaatagca tcacaaattt cacaaataaa gcattttttt cactgcattc 6540
tagttgtggt ttgtccaaac tcatcaatgt atcttatcat gtctgtatac cgtcgacctc 6600
tagctagagc ttggcgtaat catggtcata gctgtttcct gtgtgaaatt gttatccgct 6660
cacaattcca cacaacatac gagccggaag cataaagtgt aaagcctggg gtgcctaatg 6720
agtgagctaa ctcacattaa ttgcgttgcg ctcactgccc gctttccagt cgggaaacct 6780
gtcgtgccag ctgcattaat gaatcggcca acgcgcgggg agaggcggtt tgcgtattgg 6840
gcgctcttcc gcttcctcgc tcactgactc gctgcgctcg gtcgttcggc tgcggcgagc 6900
ggtatcagct cactcaaagg cggtaatacg gttatccaca gaatcagggg ataacgcagg 6960
aaagaacatg tgagcaaaag gccagcaaaa ggccaggaac cgtaaaaagg ccgcgttgct 7020
ggcgtttttc cataggctcc gcccccctga cgagcatcac aaaaatcgac gctcaagtca 7080
gaggtggcga aacccgacag gactataaag ataccaggcg tttccccctg gaagctccct 7140
cgtgcgctct cctgttccga ccctgccgct taccggatac ctgtccgcct ttctcccttc 7200
gggaagcgtg gcgctttctc atagctcacg ctgtaggtat ctcagttcgg tgtaggtcgt 7260
tcgctccaag ctgggctgtg tgcacgaacc ccccgttcag cccgaccgct gcgccttatc 7320
cggtaactat cgtcttgagt ccaacccggt aagacacgac ttatcgccac tggcagcagc 7380
cactggtaac aggattagca gagcgaggta tgtaggcggt gctacagagt tcttgaagtg 7440
gtggcctaac tacggctaca ctagaagaac agtatttggt atctgcgctc tgctgaagcc 7500
agttaccttc ggaaaaagag ttggtagctc ttgatccggc aaacaaacca ccgctggtag 7560
cggttttttt gtttgcaagc agcagattac gcgcagaaaa aaaggatctc aagaagatcc 7620
tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca gtggaacgaa aactcacgtt aagggatttt 7680
ggtcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac ctagatcctt ttaaattaaa aatgaagttt 7740
taaatcaatc taaagtatat atgagtaaac ttggtctgac agttaccaat gcttaatcag 7800
tgaggcacct atctcagcga tctgtctatt tcgttcatcc atagttgcct gactccccgt 7860
cgtgtagata actacgatac gggagggctt accatctggc cccagtgctg caatgatacc 7920
gcgagaccca cgctcaccgg ctccagattt atcagcaata aaccagccag ccggaagggc 7980
cgagcgcaga agtggtcctg caactttatc cgcctccatc cagtctatta attgttgccg 8040
ggaagctaga gtaagtagtt cgccagttaa tagtttgcgc aacgttgttg ccattgctac 8100
aggcatcgtg gtgtcacgct cgtcgtttgg tatggcttca ttcagctccg gttcccaacg 8160
atcaaggcga gttacatgat cccccatgtt gtgcaaaaaa gcggttagct ccttcggtcc 8220
tccgatcgtt gtcagaagta agttggccgc agtgttatca ctcatggtta tggcagcact 8280
gcataattct cttactgtca tgccatccgt aagatgcttt tctgtgactg gtgagtactc 8340
aaccaagtca ttctgagaat agtgtatgcg gcgaccgagt tgctcttgcc cggcgtcaat 8400
acgggataat accgcgccac atagcagaac tttaaaagtg ctcatcattg gaaaacgttc 8460
ttcggggcga aaactctcaa ggatcttacc gctgttgaga tccagttcga tgtaacccac 8520
tcgtgcaccc aactgatctt cagcatcttt tactttcacc agcgtttctg ggtgagcaaa 8580
aacaggaagg caaaatgccg caaaaaaggg aataagggcg acacggaaat gttgaatact 8640
catactcttc ctttttcaat attattgaag catttatcag ggttattgtc tcatgagcgg 8700
atacatattt gaatgtattt agaaaaataa acaaataggg gttccgcgca catttccccg 8760
aaaagtgcca cctgacg 8777
配列番号143
tcgacggatc gggagatctc ccgatcccct atggtgcact ctcagtacaa tctgctctga 60
tgccgcatag ttaagccagt atctgctccc tgcttgtgtg ttggaggtcg ctgagtagtg 120
cgcgagcaaa atttaagcta caacaaggca aggcttgacc gacaattgtt aattaacatg 180
aagaatctgc ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgct aggtggtcaa tattggccat 240
tagccatatt attcattggt tatatagcat aaatcaatat tggctattgg ccattgcata 300
cgttgtatcc atatcataat atgtacattt atattggctc atgtccaaca ttaccgccat 360
gttgacattg attattgact agttattaat agtaatcaat tacggggtca ttagttcata 420
gcccatatat ggagttccgc gttacataac ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc 480
ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa tgacgtatgt tcccatagta acgccaatag 540
ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt atttacggta aactgcccac ttggcagtac 600
atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg 660
cctggcatta tgcccagtac atgaccttat gggactttcc tacttggcag tacatctacg 720
tattagtcat cgctattacc atggtgatgc ggttttggca gtacatcaat gggcgtggat 780
agcggtttga ctcacgggga tttccaagtc tccaccccat tgacgtcaat gggagtttgt 840
tttggcacca aaatcaacgg gactttccaa aatgtcgtaa caactccgcc ccattgacgc 900
aaatgggcgg taggcgtgta cggtgggagg tctatataag cagagctcgt ttagtgaacc 960
gtcagatcgc ctggagacgc catccacgct gttttgacct ccatagaaga caccgggacc 1020
gatccagcct ccgcggccgg gaacggtgca ttggaatcga tgactctctt aggtagcctt 1080
gcagaagttg gtcgtgaggc actgggcagg taagtatcaa ggttacaaga caggtttaag 1140
gagatcaata gaaactgggc ttgtcgagac agagaagact cttgcgtttc tgataggcac 1200
ctattggtct tactgacatc cactttgcct ttctctccac aggtgtccac tcccagttca 1260
attacagctc gccaccatgc ggttctccgc tcagctgctg ggccttctgg tgctgtggat 1320
tcccggcgtc tcgagatcta tcgatgcatg ccatggtacc aagcttgcca ccatgagcag 1380
cagctcttgg ctgctgctga gcctggtggc cgtgacagcc gcccagagca ccatcgagga 1440
gcaggccaag accttcctgg acaagttcaa ccacgaggcc gaggacctgt tctaccagag 1500
cagcctggcc agctggaact acaacaccaa catcaccgag gagaacgtgc agaacatgaa 1560
caacgccggc gacaagtgga gcgccttcct gaaggagcag agcacactgg cccagatgta 1620
ccccctgcag gagatccaga acctgaccgt gaagctgcag ctgcaggccc tgcagcagaa 1680
cggcagcagc gtgctgagcg aggacaagag caagcggctg aacaccatcc tgaacaccat 1740
gtccaccatc tacagcaccg gcaaagtgtg caaccccgac aacccccagg agtgcctgct 1800
gctggagccc ggcctgaacg agatcatggc caacagcctg gactacaacg agcggctgtg 1860
ggcctgggag agctggcgga gcgaagtggg caagcagctg cggcccctgt acgaggagta 1920
cgtggtgctg aagaacgaga tggccagggc caaccactac gaggactacg gcgactactg 1980
gagaggcgac tacgaagtga acggcgtgga cggctacgac tacagcagag gccagctgat 2040
cgaggacgtg gagcacacct tcgaggagat caagcctctg tacgagcacc tgcacgccta 2100
cgtgcgggcc aagctgatga acgcctaccc cagctacatc agccccatcg gctgcctgcc 2160
cgcccacctg ctgggcgaca tgtggggccg gttctggacc aacctgtaca gcctgaccgt 2220
gcccttcggc cagaagccca acatcgacgt gaccgacgcc atggtggacc aggcctggga 2280
cgcccagcgg atcttcaagg aggccgagaa gttcttcgtg agcgtgggcc tgcccaacat 2340
gacccagggc ttttgggaga acagcatgct gaccgacccc ggcaatgtgc agaaggccgt 2400
gtgccacccc accgcctggg acctgggcaa gggcgacttc cggatcctga tgtgcaccaa 2460
agtgaccatg gacgacttcc tgaccgccca ccacgagatg ggccacatcc agtacgacat 2520
ggcctacgcc gcccagccct tcctgctgcg gaacggcgcc aacgagggct ttcacgaggc 2580
cgtgggcgag atcatgagcc tgagcgccgc cacccccaag cacctgaaga gcatcggcct 2640
gctgagcccc gacttccagg aggacaacga gaccgagatc aacttcctgc tgaagcaggc 2700
cctgaccatc gtgggcaccc tgcccttcac ctacatgctg gagaagtggc ggtggatggt 2760
gtttaagggc gagatcccca aggaccagtg gatgaagaag tggtgggaga tgaagcggga 2820
gatcgtgggc gtggtggagc ccgtgcccca cgacgagacc tactgcgacc ccgccagcct 2880
gttccacgtg agcaacgact actccttcat ccggtactac acccggaccc tgtaccagtt 2940
ccagttccag gaggccctgt gccaggccgc caagcacgag ggccccctgc acaagtgcga 3000
catcagcaac agcaccgagg ccggacagaa actgttcaac atgctgcggc tgggcaagag 3060
cgagccctgg accctggccc tggagaatgt ggtgggcgcc aagaacatga atgtgcgccc 3120
cctgctgaac tacttcgagc ccctgttcac ctggctgaag gaccagaaca agaacagctt 3180
cgtgggctgg agcaccgact ggagccccta cgccgaccag agcatcaaag tgcggatcag 3240
cctgaagagc gccctgggcg acaaggccta cgagtggaac gacaacgaga tgtacctgtt 3300
ccggagcagc gtggcctatg ccatgcggca gtacttcctg aaagtgaaga accagatgat 3360
cctgttcggc gaggaggacg tgagagtggc caacctgaag ccccggatca gcttcaactt 3420
cttcgtgacc gcccccaaga acgtgagcga catcatcccc cggaccgaag tggagaaggc 3480
catccggatg agccggagcc ggatcaacga cgccttccgg ctgaacgaca actccctgga 3540
gttcctgggc atccagccca ccctgggccc tcccaaccag ccccccgtga gcatctggct 3600
gatcgtgttt ggcgtggtga tgggcgtgat cgtggtggga atcgtgatcc tgatcttcac 3660
cggcatccgg gaccggaaga agaagaacaa ggcccggagc ggcgagaacc cctacgccag 3720
catcgatatc agcaagggcg agaacaaccc cggcttccag aacaccgacg acgtgcagac 3780
cagcttctga taatctagaa cgagctcgaa ttcgaagctt ctgcagacgc gtcgacgtca 3840
tatggatccg atatcgccgt ggcggccgca ggccagccca aggccgctcc cagcgtgacc 3900
ctgttccccc cctcctccga ggagctgcag gccaacaagg ccaccctggt gtgcctcatc 3960
agcgacttct accctggcgc cgtgaccgtg gcctggaagg ccgacagcag ccccgtgaag 4020
gccggcgtgg agaccaccac ccccagcaag cagagcaaca acaagtacgc cgccagcagc 4080
tacctgagcc tcacccccga gcagtggaag agccaccgga gctacagctg ccaggtgacc 4140
cacgagggca gcaccgtgga gaagaccgtg gcccccaccg agtgcagcta atagacttaa 4200
gtttaaaccg ctgatcagcc tcgactgtgc cttctagttg ccagccatct gttgtttgcc 4260
cctcccccgt gccttccttg accctggaag gtgccactcc cactgtcctt tcctaataaa 4320
atgaggaaat tgcatcgcat tgtctgagta ggtgtcattc tattctgggg ggtggggtgg 4380
ggcaggacag caagggggag gattgggaag acaatagcag gcatgctggg gatgcggtgg 4440
gctctatggc ttctgaggcg gaaagaacca gctggggctc tagggggtat ccccacgcgc 4500
cctgtagcgg cgcattaagc gcggcgggtg tggtggttac gcgcagcgtg accgctacac 4560
ttgccagcgc cctagcgccc gctcctttcg ctttcttccc ttcctttctc gccacgttcg 4620
ccggctttcc ccgtcaagct ctaaatcggg ggctcccttt agggttccga tttagtgctt 4680
tacggcacct cgaccccaaa aaacttgatt agggtgatgg ttcacgtagt gggccatcgc 4740
cctgatagac ggtttttcgc cctttgacgt tggagtccac gttctttaat agtggactct 4800
tgttccaaac tggaacaaca ctcaacccta tctcggtcta ttcttttgat ttataaggga 4860
ttttggccat ttcggcctat tggttaaaaa atgagctgat ttaacaaaaa tttaacgcga 4920
attaattctg tggaatgtgt gtcagttagg gtgtggaaag tccccaggct ccccagcagg 4980
cagaagtatg caaagcatgc atctcaatta gtcagcaacc aggtgtggaa agtccccagg 5040
ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa ccatagtccc 5100
gcccctaact ccgcccatcc cgcccctaac tccgcccagt tccgcccatt ctccgcccca 5160
tggctgacta atttttttta tttatgcaga ggccgaggcc gcctctgcct ctgagctatt 5220
ccagaagtag tgaggaggct tttttggagg cctaggcttt tgcaaaaagc tcccgggagc 5280
ttgtatatcc attttcggat ctgatcagca cgtgatgaaa aagcctgaac tcaccgcgac 5340
gtctgtcgag aagtttctga tcgaaaagtt cgacagcgtc tccgacctga tgcagctctc 5400
ggagggcgaa gaatctcgtg ctttcagctt cgatgtagga gggcgtggat atgtcctgcg 5460
ggtaaatagc tgcgccgatg gtttctacaa agatcgttat gtttatcggc actttgcatc 5520
ggccgcgctc ccgattccgg aagtgcttga cattggggaa ttcagcgaga gcctgaccta 5580
ttgcatctcc cgccgtgcac agggtgtcac gttgcaagac ctgcctgaaa ccgaactgcc 5640
cgctgttctg cagccggtcg cggaggccat ggatgcgatc gctgcggccg atcttagcca 5700
gacgagcggg ttcggcccat tcggaccgca aggaatcggt caatacacta catggcgtga 5760
tttcatatgc gcgattgctg atccccatgt gtatcactgg caaactgtga tggacgacac 5820
cgtcagtgcg tccgtcgcgc aggctctcga tgagctgatg ctttgggccg aggactgccc 5880
cgaagtccgg cacctcgtgc acgcggattt cggctccaac aatgtcctga cggacaatgg 5940
ccgcataaca gcggtcattg actggagcga ggcgatgttc ggggattccc aatacgaggt 6000
cgccaacatc ttcttctgga ggccgtggtt ggcttgtatg gagcagcaga cgcgctactt 6060
cgagcggagg catccggagc ttgcaggatc gccgcggctc cgggcgtata tgctccgcat 6120
tggtcttgac caactctatc agagcttggt tgacggcaat ttcgatgatg cagcttgggc 6180
gcagggtcga tgcgacgcaa tcgtccgatc cggagccggg actgtcgggc gtacacaaat 6240
cgcccgcaga agcgcggccg tctggaccga tggctgtgta gaagtactcg ccgatagtgg 6300
aaaccgacgc cccagcactc gtccgagggc aaaggaatag cacgtgctac gagatttcga 6360
ttccaccgcc gccttctatg aaaggttggg cttcggaatc gttttccggg acgccggctg 6420
gatgatcctc cagcgcgggg atctcatgct ggagttcttc gcccacccca acttgtttat 6480
tgcagcttat aatggttaca aataaagcaa tagcatcaca aatttcacaa ataaagcatt 6540
tttttcactg cattctagtt gtggtttgtc caaactcatc aatgtatctt atcatgtctg 6600
tataccgtcg acctctagct agagcttggc gtaatcatgg tcatagctgt ttcctgtgtg 6660
aaattgttat ccgctcacaa ttccacacaa catacgagcc ggaagcataa agtgtaaagc 6720
ctggggtgcc taatgagtga gctaactcac attaattgcg ttgcgctcac tgcccgcttt 6780
ccagtcggga aacctgtcgt gccagctgca ttaatgaatc ggccaacgcg cggggagagg 6840
cggtttgcgt attgggcgct cttccgcttc ctcgctcact gactcgctgc gctcggtcgt 6900
tcggctgcgg cgagcggtat cagctcactc aaaggcggta atacggttat ccacagaatc 6960
aggggataac gcaggaaaga acatgtgagc aaaaggccag caaaaggcca ggaaccgtaa 7020
aaaggccgcg ttgctggcgt ttttccatag gctccgcccc cctgacgagc atcacaaaaa 7080
tcgacgctca agtcagaggt ggcgaaaccc gacaggacta taaagatacc aggcgtttcc 7140
ccctggaagc tccctcgtgc gctctcctgt tccgaccctg ccgcttaccg gatacctgtc 7200
cgcctttctc ccttcgggaa gcgtggcgct ttctcatagc tcacgctgta ggtatctcag 7260
ttcggtgtag gtcgttcgct ccaagctggg ctgtgtgcac gaaccccccg ttcagcccga 7320
ccgctgcgcc ttatccggta actatcgtct tgagtccaac ccggtaagac acgacttatc 7380
gccactggca gcagccactg gtaacaggat tagcagagcg aggtatgtag gcggtgctac 7440
agagttcttg aagtggtggc ctaactacgg ctacactaga agaacagtat ttggtatctg 7500
cgctctgctg aagccagtta ccttcggaaa aagagttggt agctcttgat ccggcaaaca 7560
aaccaccgct ggtagcggtt tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg 7620
atctcaagaa gatcctttga tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc 7680
acgttaaggg attttggtca tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa 7740
ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagtta 7800
ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt 7860
tgcctgactc cccgtcgtgt agataactac gatacgggag ggcttaccat ctggccccag 7920
tgctgcaatg ataccgcgag acccacgctc accggctcca gatttatcag caataaacca 7980
gccagccgga agggccgagc gcagaagtgg tcctgcaact ttatccgcct ccatccagtc 8040
tattaattgt tgccgggaag ctagagtaag tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt 8100
tgttgccatt gctacaggca tcgtggtgtc acgctcgtcg tttggtatgg cttcattcag 8160
ctccggttcc caacgatcaa ggcgagttac atgatccccc atgttgtgca aaaaagcggt 8220
tagctccttc ggtcctccga tcgttgtcag aagtaagttg gccgcagtgt tatcactcat 8280
ggttatggca gcactgcata attctcttac tgtcatgcca tccgtaagat gcttttctgt 8340
gactggtgag tactcaacca agtcattctg agaatagtgt atgcggcgac cgagttgctc 8400
ttgcccggcg tcaatacggg ataataccgc gccacatagc agaactttaa aagtgctcat 8460
cattggaaaa cgttcttcgg ggcgaaaact ctcaaggatc ttaccgctgt tgagatccag 8520
ttcgatgtaa cccactcgtg cacccaactg atcttcagca tcttttactt tcaccagcgt 8580
ttctgggtga gcaaaaacag gaaggcaaaa tgccgcaaaa aagggaataa gggcgacacg 8640
gaaatgttga atactcatac tcttcctttt tcaatattat tgaagcattt atcagggtta 8700
ttgtctcatg agcggataca tatttgaatg tatttagaaa aataaacaaa taggggttcc 8760
gcgcacattt ccccgaaaag tgccacctga cg 8792
配列番号212
gaggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctgggta caccttcacc ggctactatg tgtactgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcgctt acaatggtaa cacaaactat 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaagac acggctgtgt attactgtgc gagaagtaga 300
tccctggacg tctggggcca agggaccacg gtcaccgtct cgagcggtac gggcggttca 360
ggcggaaccg gcagcggcac tggcgggtcg acggatgttg tgatgactca gtctccagac 420
tccctggctg tgtctctggg cgagagggcc accatcaact gcaagtccag ccagagtgtt 480
ttatacagct ccaacaataa gaactactta gcttggtacc agcagaaacc aggacagcct 540
cctaagctgc tcatttactg ggcatctacc cgggaatccg gggtccctga ccgattcagt 600
ggcagcgggt ctgggacaga tttcactctc accatcagca gcctgcaggc tgaagatgtg 660
gcagtttatt actgtcagca atattatagt actcctctca ctttcggcgg agggaccaaa 720
gtggatatca aacgt 735
配列番号213
E V Q L V Q S G A E V K K P G A S V K V S C K A S G Y T F T G Y Y V Y W V R Q A P G Q G L E W M G W I S A Y N G N T N Y A Q K F Q G R V T I T A D K S T S T A Y M E L S S L R S E D T A V Y Y C A R S R S L D V W G Q G T T V T V S S G T G G S G G T G S G T G G S T D V V M T Q S P D S L A V S L G E R A T I N C K S S Q S V L Y S S N N K N Y L A W Y Q Q K P G Q P P K L L I Y W A S T R E S G V P D R F S G S G S G T D F T L T I S S L Q A E D V A V Y Y C Q Q Y Y S T P L T F G G G T K V D I K R
配列番号214
cagatgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttctcc agttatgcta tcacctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcggta tgtttggttc aacaaactac 180
gcacagaact tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctcag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaagtact 300
ggttattacc ctgcatacct ccaccactgg ggccagggca ccctggtcac cgtctcgagc 360
ggtacgggcg gttcaggcgg aaccggcagc ggcactggcg ggtcgacgca gtctgccctg 420
actcagcctc gctcagtgtc cgggtctcct ggacagtcag tcaccatctc ctgcactgga 480
accagcagtg atgttggtgg ttataactat gtctcctggt accaacagca cccaggcaaa 540
gcccccaaac tcatgattta tgatgtcagt aagcggccct caggggtccc tgatcgcttc 600
tctggctcca agtctggcaa cacggcctcc ctgaccatct ctgggctcca ggctgaggat 660
gaggctgatt attactgcag ctcatataca agcagcagca ctcatgtctt cggaactggg 720
accaaggtca ccgtcctagg t 741
配列番号215
Q M Q L V Q S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G G T F S S Y A I T W V R Q A P G Q G L E W M G G I I G M F G S T N Y A Q N F Q G R V T I T A D E S T S T A Y M E L S S L R S E D T A V Y Y C A R S T G Y Y P A Y L H H W G Q G T L V T V S S G T G G S G G T G S G T G G S T Q S A L T Q P R S V S G S P G Q S V T I S C T G T S S D V G G Y N Y V S W Y Q Q H P G K A P K L M I Y D V S K R P S G V P D R F S G S K S G N T A S L T I S G L Q A E D E A D Y Y C S S Y T S S S T H V F G T G T K V T V L G
配列番号216
gaggtgcagc tggtggagac cggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60
tcctgcaagg catctggata caccttcacc agctactata tgcactgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcaacccta acagtggtgg cacaaactat 180
gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accagggaca cgtccatcag cacagcctac 240
atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagagggg 300
aaatggggac ctcaagcggc ttttgatatc tggggccaag ggacaatggt caccgtctcg 360
agcggtacgg gcggttcagg cggaaccggc agcggcactg gcgggtcgac ggaaattgtg 420
atgacgcagt ctccaggcac cctgtctttg tctccagggg aaagagccac cctctcctgc 480
agggccagtc agagtgttag cagcagctac ttagcctggt accagcagaa acctggccag 540
gctcccaggc tcctcatcta tgatgcatcc agcagggcca ctgacatccc agacaggttc 600
agtggcagtg ggtctgggac agacttcact ctcaccatca gcagactgga gcctgaagat 660
tttgcagtgt attactgtca gcagtatggt agctcacttt ggacgttcgg ccaagggacc 720
aaggtggaga tcaaacgt 738
配列番号217
E V Q L V E T G A E V K K P G A S V K V S C K A S G Y T F T S Y Y M H W V R Q A P G Q G L E W M G W I N P N S G G T N Y A Q K F Q G R V T M T R D T S I S T A Y M E L S R L R S D D T A V Y Y C A R E G K W G P Q A A F D I W G Q G T M V T V S S G T G G S G G T G S G T G G S T E I V M T Q S P G T L S L S P G E R A T L S C R A S Q S V S S S Y L A W Y Q Q K P G Q A P R L L I Y D A S S R A T D I P D R F S G S G S G T D F T L T I S R L E P E D F A V Y Y C Q Q Y G S S L W T F G Q G T K V E I K R
配列番号218
gaggtgcagc tggtagagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc atctatgcca tgagctgggt ccgccaggca 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtagta gtggtgatag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca acgccaggaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagtctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagcgtat 300
ggctacacgt tcgacccctg gggccaggga accctggtca ccgtctcgag cggtacgggc 360
ggttcaggcg gaaccggcag cggcactggc gggtcgacgg aaattgtgct gactcagtct 420
ccactctccc tgcccgtcac ccctggagag ccggcctcca tctcctgcag gtctagtcag 480
agcctcctgc atagtaatgg atacaactat ttggattggt acctgcagaa gccagggcag 540
tctccacagc tcctgatcta tttgggttct aatcgggcct ccggggtccc tgacaggttc 600
agtggcagtg gatcaggcac agattttaca ctgaaaatca gcagagtgga ggctgaggat 660
gttggggttt attactgcat gcaagctcta caaactcccc tcactttcgg cggagggacc 720
aaggtggaga tcaaacgt 738
配列番号219
E V Q L V E S G G G L V Q P G G S L R L S C A A S G F T F S I Y A M S W V R Q A P G K G L E W V S A I S S S G D S T Y Y A D S V K G R F T I S R D N A R N T L Y L Q M N S L R A E D T A V Y Y C A R A Y G Y T F D P W G Q G T L V T V S S G T G G S G G T G S G T G G S T E I V L T Q S P L S L P V T P G E P A S I S C R S S Q S L L H S N G Y N Y L D W Y L Q K P G Q S P Q L L I Y L G S N R A S G V P D R F S G S G S G T D F T L K I S R V E A E D V G V Y Y C M Q A L Q T P L T F G G G T K V E I K R
配列番号220
gaggtgcagc tggtggagac cggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cctctggagg caccttcagg acccatgcta tcagttgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcgcta tcttcggaac agcaaactac 180
gcacagaagt tccagggcag aatcacgatt accgcggacg aatccacgag tacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt atttctgtgc gagaggcagt 300
ggttatcata tatcgacacc ctttgacaac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcg 360
agcggtacgg gcggttcagg cggaaccggc agcggcactg gcgggtcgac gtcctatgtg 420
ctgactcagc caccctcggt gtcagtggcc ccaggacaga cggccaggat tacctgtggg 480
ggaaacaaca ttggaagtaa aggtgtgcac tggtaccagc agaagcctgg ccaggcccct 540
gtgctggtcg tctatgatga tagcgaccgg ccctcaggga tccctgagcg attctctggc 600
tccaactctg ggaacacggc caccctgacc atcagcaggg tcgaagccgg ggatgaggcc 660
gactattact gtcaggtgtg ggatagtagt agtgatcatg tggtattcgg cggagggacc 720
aagctgaccg tcctaggt 738
配列番号221
E V Q L V E T G A E V K K P G S S V K V S C K A S G G T F R T H A I S W V R Q A P G Q G L E W M G G I I A I F G T A N Y A Q K F Q G R I T I T A D E S T S T A Y M E L S S L R S E D T A V Y F C A R G S G Y H I S T P F D N W G Q G T L V T V S S G T G G S G G T G S G T G G S T S Y V L T Q P P S V S V A P G Q T A R I T C G G N N I G S K G V H W Y Q Q K P G Q A P V L V V Y D D S D R P S G I P E R F S G S N S G N T A T L T I S R V E A G D E A D Y Y C Q V W D S S S D H V V F G G G T K L T V L G
配列番号222
gaggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggaca catcttcagc ggctatgcaa tcagttgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tctttggtac aacaaactac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacc aatccacgag cacagcctac 240
atggacctga gcaacttgag atctgaggac acggccgtct attactgtgc gagagtgaaa 300
gatggatatt gtactcttac cagctgccct gtcggctggt acttcgatct ctggggccgt 360
ggcaccctgg tcactgtctc gagcggtacg ggcggttcag gcggaaccgg cagcggcact 420
ggcgggtcga cggaaattgt gatgacgcag tctccaggca ccctgtcttt gtctccaggg 480
gaaagagcca ccctctcgtg cagggccagt cagagtgtta gcagcagcta cttagcctgg 540
taccagcaga aacctggcca ggctcccagg ctcctcatct ttggtgcctc cagcagggcc 600
actggcatcc cagacaggtt cagtggcagt gggtctggga cagacttcac tctcaccatc 660
agcagactgg agcctgaaga ttttgcagtg tattactgtc agcagtatgg tagctcactc 720
actttcggcg gagggaccaa gctggagatc aaacgt 756
配列番号223
E V Q L V E S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G H I F S G Y A I S W V R Q A P G Q G L E W M G G I I P I F G T T N Y A Q K F Q G R V T I T A D Q S T S T A Y M D L S N L R S E D T A V Y Y C A R V K D G Y C T L T S C P V G W Y F D L W G R G T L V T V S S G T G G S G G T G S G T G G S T E I V M T Q S P G T L S L S P G E R A T L S C R A S Q S V S S S Y L A W Y Q Q K P G Q A P R L L I F G A S S R A T G I P D R F S G S G S G T D F T L T I S R L E P E D F A V Y Y C Q Q Y G S S L T F G G G T K L E I K R
配列番号224
gaggtccagc tggtacagtc tggggctgag gttaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg catcttcaga agcaattcta tcagttgggt gcgacaggcc 120
cctgggcaag ggcttgagtg gatgggaggg atcttcgctc ttttcggaac aacagactac 180
gcgcagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatcttcgac cacagtctac 240
ctggagctga gtagcctgac atctgaggac acggccgttt attactgtgc gagaggcagt 300
ggctacacca cacgcaacta ctttgactac tggggccagg gcaccctggt caccgtctcg 360
agcggtacgg gcggttcagg cggaaccggc agcggcactg gcgggtcgac ggaaattgtg 420
ctgactcagt ctccaggcac cctgtctttg tctccagggg aaagagccac actctcctgc 480
agggccagtc agagtgttag cagcaactac ttaggctggt accagcagaa acctggccag 540
gctcccaggc tcctgatcta tggtgcatcc agcagggcca gtggcatccc agacaggttc 600
agtggcggtg ggtctgggac agacttcact ctcaccatca gcagactgga gcctgaagat 660
tttgcagtgt attactgtca gcagtatggt agctcacccc tcactttcgg cggagggacc 720
aaggtggaga tcaaacgt 738
配列番号225
E V Q L V Q S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G G I F R S N S I S W V R Q A P G Q G L E W M G G I F A L F G T T D Y A Q K F Q G R V T I T A D E S S T T V Y L E L S S L T S E D T A V Y Y C A R G S G Y T T R N Y F D Y W G Q G T L V T V S S G T G G S G G T G S G T G G S T E I V L T Q S P G T L S L S P G E R A T L S C R A S Q S V S S N Y L G W Y Q Q K P G Q A P R L L I Y G A S S R A S G I P D R F S G G G S G T D F T L T I S R L E P E D F A V Y Y C Q Q Y G S S P L T F G G G T K V E I K R
配列番号226
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtaaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg ccccttccgc aattttgcta tcaactgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcgctg tctttgggac gacaaagtac 180
gcacataagt tccagggcag agtcaccatc accgcggacg actccacaaa tacagcttac 240
atggagctgg gcagcctgaa atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaggtccc 300
cactactact cctcctacat ggacgtctgg ggcgaaggga ccacggtcac cgtctcgagc 360
ggtacgggcg gttcaggcgg aaccggcagc ggcactggcg ggtcgacgga catccagttg 420
acccagtctc catcctccct gtctgcatct gtaggagaca gagtcaccat cacttgccgg 480
gcgagtcagg gcattagcac ttatttagcc tggtatcagc agaaacccgg gaaagttcct 540
aaactcctga tctatgctgc atccactttg caatcagggg tcccatctcg gttcagtggc 600
agtggatctg ggacagattt cactctcacc atcagcagcc tgcagcctga agatgttgca 660
acttattact gtcaaaagta taacagtgcc ccttctttcg gccctgggac caaagtggat 720
atcaaacgt 729
配列番号227
Q V Q L V Q S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G G P F R N F A I N W V R Q A P G Q G L E W M G G I I A V F G T T K Y A H K F Q G R V T I T A D D S T N T A Y M E L G S L K S E D T A V Y Y C A R G P H Y Y S S Y M D V W G E G T T V T V S S G T G G S G G T G S G T G G S T D I Q L T Q S P S S L S A S V G D R V T I T C R A S Q G I S T Y L A W Y Q Q K P G K V P K L L I Y A A S T L Q S G V P S R F S G S G S G T D F T L T I S S L Q P E D V A T Y Y C Q K Y N S A P S F G P G T K V D I K R
配列番号228
gaggtgcagc tggtggagac tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
ccctgcaaat cttctggaag ccccttcagg agtaatgctg tcagctgggt gcgacaggcc 120
cccggacaag ggcttgagtg ggtgggagga atcctcggtg tctttggttc accaagctac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccaccaa cacagtccac 240
atggagctga gaggtttgag atctgaggac acggccgtgt attattgtgc gagaggtcct 300
acctactact actcctacat ggacgtctgg ggcaaaggga ccacggtcac cgtctcgagc 360
ggtacgggcg gttcaggcgg aaccggcagc ggcactggcg ggtcgacgtc ctatgtgctg 420
actcagccac cctcggagtc agtggcccca ggacagacgg ccaggattac ctgtggggga 480
aataacattg gaagaaatag tgtgcactgg tatcagcaga agccaggcca ggcccctgtg 540
ctggtcgtgt atgatgatag cgaccggccc tcagggatcc ctgagcgatt ttctggctcc 600
aagtctggga acacggccac cctgattatc agcagggtcg aagtcgggga tgaggccgac 660
tactactgtc aggtgtggca tagtagtagt gatcattatg tcttcggaac tgggaccaag 720
gtcaccgtcc taggt 735
配列番号229
E V Q L V E T G A E V K K P G S S V K V P C K S S G S P F R S N A V S W V R Q A P G Q G L E W V G G I L G V F G S P S Y A Q K F Q G R V T I T A D E S T N T V H M E L R G L R S E D T A V Y Y C A R G P T Y Y Y S Y M D V W G K G T T V T V S S G T G G S G G T G S G T G G S T S Y V L T Q P P S E S V A P G Q T A R I T C G G N N I G R N S V H W Y Q Q K P G Q A P V L V V Y D D S D R P S G I P E R F S G S K S G N T A T L I I S R V E V G D E A D Y Y C Q V W H S S S D H Y V F G T G T K V T V L G
配列番号230
cagatgcagc tggtacaatc tggagctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcttcggta tgtttgggac agcaaactac 180
gcgcagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aattcacgag cgcggcctac 240
atggagctga gcagcctggg atctgaggac acggccatgt attactgtgc gaggtctagt 300
ggttattacc cccaatactt ccaggactgg ggccagggca ccctggtcac cgtctcgagc 360
ggtacgggcg gttcaggcgg aaccggcagc ggcactggcg ggtcgacgga aattgtgatg 420
acacagtctc caggcaccct gtctttgtct ccagggcaaa gagccaccct ctcctgcagg 480
gccagtcaga gtgttagcag cagctactta gcctggtacc agcagaaacc tggccaggct 540
cccagactcc tcatgtatgg tgcatccagc agggccactg gcatcccaga caggttcagt 600
ggcagtgggt ctgggacaga cttcactctc accatcagca gactggagcc tgaagatttt 660
gcagtgtatt actgtcagca gtatggtagc tcatcgctca ctttcggcgg agggaccaag 720
ctggagatca aacgt 735
配列番号231
Q M Q L V Q S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G G T F S S Y A I S W V R Q A P G Q G L E W M G G I F G M F G T A N Y A Q K F Q G R V T I T A D E F T S A A Y M E L S S L G S E D T A M Y Y C A R S S G Y Y P Q Y F Q D W G Q G T L V T V S S G T G G S G G T G S G T G G S T E I V M T Q S P G T L S L S P G Q R A T L S C R A S Q S V S S S Y L A W Y Q Q K P G Q A P R L L M Y G A S S R A T G I P D R F S G S G S G T D F T L T I S R L E P E D F A V Y Y C Q Q Y G S S S L T F G G G T K L E I K R
配列番号232
gaggtgcagc tggtggagtc cggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg catcttcaac agttatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggc atcatcgcta tctttcatac accaaagtac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgaa cacagcctac 240
atggaactga gaagcctgaa atctgaggac acggccctgt attactgtgc gagagggtcc 300
acttacgatt tttcgagtgg ccttgactac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcg 360
agcggtacgg gcggttcagg cggaaccggc agcggcactg gcgggtcgac gcaggcaggg 420
ctgactcagc caccctcggt gtcagtggcc ccaggacaga cggccaggat tacctgtggg 480
ggaaacaaca ttggaagtaa aagtgtgcac tggtaccagc agaagccagg ccaggcccct 540
gtcctagtcg tctatgatga tagcgaccgg ccctcaggga tccctgagcg attctctggc 600
tccaactctg ggaacacggc caccctgacc atcagcaggg tcgaagccgg ggatgaggcc 660
gactattact gtcaggtgtg ggatagtagt agtgatcatg tggtattcgg cggagggacc 720
aagctgaccg tcctaggt 738
配列番号233
E V Q L V E S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G G I F N S Y A I S W V R Q A P G Q G L E W M G G I I A I F H T P K Y A Q K F Q G R V T I T A D E S T N T A Y M E L R S L K S E D T A L Y Y C A R G S T Y D F S S G L D Y W G Q G T L V T V S S G T G G S G G T G S G T G G S T Q A G L T Q P P S V S V A P G Q T A R I T C G G N N I G S K S V H W Y Q Q K P G Q A P V L V V Y D D S D R P S G I P E R F S G S N S G N T A T L T I S R V E A G D E A D Y Y C Q V W D S S S D H V V F G G G T K L T V L G
配列番号234
caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg cttcttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgccaggcc 120
cctggacaag gacttgagtg gatggggggg gtcatcccta tctttcgtac agcaaactac 180
gcacagaact tccagggcag agtcaccatt accgcggacg aattcacatc gtatatggag 240
ctgagcagcc tgagatctga cgacacggcc gtgtattact gtgcgaggtt gaattaccat 300
gattcgggga cttattataa cgccccccgg ggctggttcg acccctgggg ccagggaacc 360
ctggtcaccg tctcgagcgg tacgggcggt tcaggcggaa ccggcagcgg cactggcggg 420
tcgacggaca tccagatgac ccagtctcca gactccctgg ctgtgtctct gggcgagaag 480
gccaccatca actgcaagtc cagccagagt attttaaaca gctccaacaa taagaactac 540
ttagcttggt accagcagaa accaggacag cctcctaagc tgctcattta ctgggcatct 600
acccgggaat ccggggtccc tgaccgattc agtggcagcg ggtctgggac agatttcact 660
ctcaccatca gcagcctgca ggctgaagat gtggcagttt attactgtca gcaatattat 720
agtagtccgc cgacgttcgg ccaagggacc aaggtggaaa tcaaacgt 768
配列番号235
Q V Q L V Q S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G G F F S S Y A I S W V R Q A P G Q G L E W M G G V I P I F R T A N Y A Q N F Q G R V T I T A D E F T S Y M E L S S L R S D D T A V Y Y C A R L N Y H D S G T Y Y N A P R G W F D P W G Q G T L V T V S S G T G G S G G T G S G T G G S T D I Q M T Q S P D S L A V S L G E K A T I N C K S S Q S I L N S S N N K N Y L A W Y Q Q K P G Q P P K L L I Y W A S T R E S G V P D R F S G S G S G T D F T L T I S S L Q A E D V A V Y Y C Q Q Y Y S S P P T F G Q G T K V E I K R
配列番号236
caggtccagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagt caccttcagt tactatgcta tgagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggagga atcagcccta tgtttgggac aacaacctac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt actgcggacg actccacgag tacagcctac 240
atggaggtga ggagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagatcttcg 300
aattactatg atagtgtata tgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcgagc 360
ggtacgggcg gttcaggcgg aaccggcagc ggcactggcg ggtcgacgca gtctgtcgtg 420
acgcagccgc cctcggagtc agtggcccca ggacagacgg ccaggattac ctgtggggga 480
cataacattg gaagtaatag tgtgcactgg taccagcaga agccaggcca ggcccctgtg 540
ctggtcgtgt atgataatag cgaccggccc tcagggatcc ctgagcgatt ctctggctcc 600
aactctggga acacggccac cctgaccatc agcagggtcg aagccgggga tgaggccgac 660
tattactgtc aggtgtgggg tagtagtagt gaccattatg tcttcggaac tgggaccaag 720
gtcaccgtcc taggt 735
配列番号237
Q V Q L V Q S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G V T F S Y Y A M S W V R Q A P G Q G L E W M G G I S P M F G T T T Y A Q K F Q G R V T I T A D D S T S T A Y M E V R S L R S E D T A V Y Y C A R S S N Y Y D S V Y D Y W G Q G T L V T V S S G T G G S G G T G S G T G G S T Q S V V T Q P P S E S V A P G Q T A R I T C G G H N I G S N S V H W Y Q Q K P G Q A P V L V V Y D N S D R P S G I P E R F S G S N S G N T A T L T I S R V E A G D E A D Y Y C Q V W G S S S D H Y V F G T G T K V T V L G
配列番号316
gaggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctgggta caccttcacc ggctactatg tgtactgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcgctt acaatggtaa cacaaactat 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaagac acggctgtgt attactgtgc gagaagtaga 300
tccctggacg tctggggcca agggaccacg gtcaccgtct cgagtgctag caccaagggc 360
cccagcgtgt tccccctggc ccccagcagc aagagcacca gcggcggcac agccgccctg 420
ggctgcctgg tgaaggacta cttccccgag cccgtgaccg tgagctggaa cagcggcgcc 480
ttgaccagcg gcgtgcacac cttccccgcc gtgctgcaga gcagcggcct gtacagcctg 540
agcagcgtgg tgaccgtgcc cagcagcagc ctgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg 600
aaccacaagc ccagcaacac caaggtggac aaacgcgtgg agcccaagag ctgcgacaag 660
acccacacct gccccccctg ccctgccccc gagctgctgg gcggaccctc cgtgttcctg 720
ttccccccca agcccaagga caccctcatg atcagccgga cccccgaggt gacctgcgtg 780
gtggtggacg tgagccacga ggaccccgag gtgaagttca actggtacgt ggacggcgtg 840
gaggtgcaca acgccaagac caagccccgg gaggagcagt acaacagcac ctaccgggtg 900
gtgagcgtgc tcaccgtgct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 960
gtgagcaaca aggccctgcc tgcccccatc gagaagacca tcagcaaggc caagggccag 1020
ccccgggagc cccaggtgta caccctgccc cccagccggg aggagatgac caagaaccag 1080
gtgtccctca cctgtctggt gaagggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140
agcaacggcc agcccgagaa caactacaag accacccccc ctgtgctgga cagcgacggc 1200
agcttcttcc tgtacagcaa gctcaccgtg gacaagagcc ggtggcagca gggcaacgtg 1260
ttcagctgca gcgtgatgca cgaggccctg cacaaccact acacccagaa gagcctgagc 1320
ctgagccccg gcaag 1335
配列番号317
E V Q L V Q S G A E V K K P G A S V K V S C K A S G Y T F T G Y Y V Y W V R Q A P G Q G L E W M G W I S A Y N G N T N Y A Q K F Q G R V T I T A D K S T S T A Y M E L S S L R S E D T A V Y Y C A R S R S L D V W G Q G T T V T V S S A S T K G P S V F P L A P S S K S T S G G T A A L G C L V K D Y F P E P V T V S W N S G A L T S G V H T F P A V L Q S S G L Y S L S S V V T V P S S S L G T Q T Y I C N V N H K P S N T K V D K R V E P K S C D K T H T C P P C P A P E L L G G P S V F L F P P K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V K F N W Y V D G V E V H N A K T K P R E E Q Y N S T Y R V V S V L
T V L H Q D W L N G K E Y K C K V S N K A L P A P I E K T I S K A K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P V L D S D G S F F L Y S K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K
配列番号318
gatgttgtga tgactcagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccagcca gagtgtttta tacagctcca acaataagaa ctacttagct 120
tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atctacccgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaata ttatagtact 300
cctctcactt tcggcggagg gaccaaagtg gatatcaaac gtgcggccgc acccagcgtg 360
ttcatcttcc ccccctccga cgagcagctg aagagcggca ccgccagcgt ggtgtgcctg 420
ctgaacaact tctacccccg ggaggccaag gtgcagtgga aggtggacaa cgccctgcag 480
agcggcaaca gccaggagag cgtgaccgag caggacagca aggactccac ctacagcctg 540
agcagcaccc tcaccctgag caaggccgac tacgagaagc acaaggtgta cgcctgcgag 600
gtgacccacc agggcctgag cagccccgtg accaagagct tcaaccgggg cgagtgt 657
配列番号319
D V V M T Q S P D S L A V S L G E R A T I N C K S S Q S V L Y S S N N K N Y L A W Y Q Q K P G Q P P K L L I Y W A S T R E S G V P D R F S G S G S G T D F T L T I S S L Q A E D V A V Y Y C Q Q Y Y S T P L T F G G G T K V D I K R A A A P S V F I F P P S D E Q L K S G T A S V V C L L N N F Y P R E A K V Q W K V D N A L Q S G N S Q E S V T E Q D S K D S T Y S L S S T L T L S K A D Y E K H K V Y A C E V T H Q G L S S P V T K S F N R G E C
配列番号320
cagatgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttctcc agttatgcta tcacctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcggta tgtttggttc aacaaactac 180
gcacagaact tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctcag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaagtact 300
ggttattacc ctgcatacct ccaccactgg ggccagggca ccctggtcac cgtctcgagt 360
gctagcacca agggccccag cgtgttcccc ctggccccca gcagcaagag caccagcggc 420
ggcacagccg ccctgggctg cctggtgaag gactacttcc ccgagcccgt gaccgtgagc 480
tggaacagcg gcgccttgac cagcggcgtg cacaccttcc ccgccgtgct gcagagcagc 540
ggcctgtaca gcctgagcag cgtggtgacc gtgcccagca gcagcctggg cacccagacc 600
tacatctgca acgtgaacca caagcccagc aacaccaagg tggacaaacg cgtggagccc 660
aagagctgcg acaagaccca cacctgcccc ccctgccctg cccccgagct gctgggcgga 720
ccctccgtgt tcctgttccc ccccaagccc aaggacaccc tcatgatcag ccggaccccc 780
gaggtgacct gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaggacc ccgaggtgaa gttcaactgg 840
tacgtggacg gcgtggaggt gcacaacgcc aagaccaagc cccgggagga gcagtacaac 900
agcacctacc gggtggtgag cgtgctcacc gtgctgcacc aggactggct gaacggcaag 960
gagtacaagt gcaaggtgag caacaaggcc ctgcctgccc ccatcgagaa gaccatcagc 1020
aaggccaagg gccagccccg ggagccccag gtgtacaccc tgccccccag ccgggaggag 1080
atgaccaaga accaggtgtc cctcacctgt ctggtgaagg gcttctaccc cagcgacatc 1140
gccgtggagt gggagagcaa cggccagccc gagaacaact acaagaccac cccccctgtg 1200
ctggacagcg acggcagctt cttcctgtac agcaagctca ccgtggacaa gagccggtgg 1260
cagcagggca acgtgttcag ctgcagcgtg atgcacgagg ccctgcacaa ccactacacc 1320
cagaagagcc tgagcctgag ccccggcaag 1350
配列番号321
Q M Q L V Q S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G G T F S S Y A I T W V R Q A P G Q G L E W M G G I I G M F G S T N Y A Q N F Q G R V T I T A D E S T S T A Y M E L S S L R S E D T A V Y Y C A R S T G Y Y P A Y L H H W G Q G T L V T V S S A S T K G P S V F P L A P S S K S T S G G T A A L G C L V K D Y F P E P V T V S W N S G A L T S G V H T F P A V L Q S S G L Y S L S S V V T V P S S S L G T Q T Y I C N V N H K P S N T K V D K R V E P K S C D K T H T C P P C P A P E L L G G P S V F L F P P K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V K F N W Y V D G V E V H N A K T K P R E E Q Y N S T Y R
V V S V L T V L H Q D W L N G K E Y K C K V S N K A L P A P I E K T I S K A K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P V L D S D G S F F L Y S K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K
配列番号322
cagtctgccc tgactcagcc tcgctcagtg tccgggtctc ctggacagtc agtcaccatc 60
tcctgcactg gaaccagcag tgatgttggt ggttataact atgtctcctg gtaccaacag 120
cacccaggca aagcccccaa actcatgatt tatgatgtca gtaagcggcc ctcaggggtc 180
cctgatcgct tctctggctc caagtctggc aacacggcct ccctgaccat ctctgggctc 240
caggctgagg atgaggctga ttattactgc agctcatata caagcagcag cactcatgtc 300
ttcggaactg ggaccaaggt caccgtccta ggtgcggccg caggccagcc caaggccgct 360
cccagcgtga ccctgttccc cccctcctcc gaggagctgc aggccaacaa ggccaccctg 420
gtgtgcctca tcagcgactt ctaccctggc gccgtgaccg tggcctggaa ggccgacagc 480
agccccgtga aggccggcgt ggagaccacc acccccagca agcagagcaa caacaagtac 540
gccgccagca gctacctgag cctcaccccc gagcagtgga agagccaccg gagctacagc 600
tgccaggtga cccacgaggg cagcaccgtg gagaagaccg tggcccccac cgagtgcagc 660
配列番号323
Q S A L T Q P R S V S G S P G Q S V T I S C T G T S S D V G G Y N Y V S W Y Q Q H P G K A P K L M I Y D V S K R P S G V P D R F S G S K S G N T A S L T I S G L Q A E D E A D Y Y C S S Y T S S S T H V F G T G T K V T V L G A A A G Q P K A A P S V T L F P P S S E E L Q A N K A T L V C L I S D F Y P G A V T V A W K A D S S P V K A G V E T T T P S K Q S N N K Y A A S S Y L S L T P E Q W K S H R S Y S C Q V T H E G S T V E K T V A P T E C S
配列番号324
gaggtgcagc tggtggagac cggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60
tcctgcaagg catctggata caccttcacc agctactata tgcactgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcaacccta acagtggtgg cacaaactat 180
gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accagggaca cgtccatcag cacagcctac 240
atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagagggg 300
aaatggggac ctcaagcggc ttttgatatc tggggccaag ggacaatggt caccgtctcg 360
agtgctagca ccaagggccc cagcgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420
ggcggcacag ccgccctggg ctgcctggtg aaggactact tccccgagcc cgtgaccgtg 480
agctggaaca gcggcgcctt gaccagcggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540
agcggcctgt acagcctgag cagcgtggtg accgtgccca gcagcagcct gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa acgcgtggag 660
cccaagagct gcgacaagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctgctgggc 720
ggaccctccg tgttcctgtt cccccccaag cccaaggaca ccctcatgat cagccggacc 780
cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg agccacgagg accccgaggt gaagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac gccaagacca agccccggga ggagcagtac 900
aacagcacct accgggtggt gagcgtgctc accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt gagcaacaag gccctgcctg cccccatcga gaagaccatc 1020
agcaaggcca agggccagcc ccgggagccc caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag 1080
gagatgacca agaaccaggt gtccctcacc tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200
gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tacagcaagc tcaccgtgga caagagccgg 1260
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320
acccagaaga gcctgagcct gagccccggc aag 1353
配列番号325
E V Q L V E T G A E V K K P G A S V K V S C K A S G Y T F T S Y Y M H W V R Q A P G Q G L E W M G W I N P N S G G T N Y A Q K F Q G R V T M T R D T S I S T A Y M E L S R L R S D D T A V Y Y C A R E G K W G P Q A A F D I W G Q G T M V T V S S A S T K G P S V F P L A P S S K S T S G G T A A L G C L V K D Y F P E P V T V S W N S G A L T S G V H T F P A V L Q S S G L Y S L S S V V T V P S S S L G T Q T Y I C N V N H K P S N T K V D K R V E P K S C D K T H T C P P C P A P E L L G G P S V F L F P P K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V K F N W Y V D G V E V H N A K T K P R E E Q Y N S T Y
R V V S V L T V L H Q D W L N G K E Y K C K V S N K A L P A P I E K T I S K A K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P V L D S D G S F F L Y S K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K
配列番号326
gaaattgtga tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120
cctggccagg ctcccaggct cctcatctat gatgcatcca gcagggccac tgacatccca 180
gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240
cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcactttg gacgttcggc 300
caagggacca aggtggagat caaacgtgcg gccgcaccca gcgtgttcat cttccccccc 360
tccgacgagc agctgaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420
ccccgggagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480
gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac tccacctaca gcctgagcag caccctcacc 540
ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600
ctgagcagcc ccgtgaccaa gagcttcaac cggggcgagt gt 642
配列番号327
E I V M T Q S P G T L S L S P G E R A T L S C R A S Q S V S S S Y L A W Y Q Q K P G Q A P R L L I Y D A S S R A T D I P D R F S G S G S G T D F T L T I S R L E P E D F A V Y Y C Q Q Y G S S L W T F G Q G T K V E I K R A A A P S V F I F P P S D E Q L K S G T A S V V C L L N N F Y P R E A K V Q W K V D N A L Q S G N S Q E S V T E Q D S K D S T Y S L S S T L T L S K A D Y E K H K V Y A C E V T H Q G L S S P V T K S F N R G E C
配列番号328
gaggtgcagc tggtagagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc atctatgcca tgagctgggt ccgccaggca 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtagta gtggtgatag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca acgccaggaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagtctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagcgtat 300
ggctacacgt tcgacccctg gggccaggga accctggtca ccgtctcgag tgctagcacc 360
aagggcccca gcgtgttccc cctggccccc agcagcaaga gcaccagcgg cggcacagcc 420
gccctgggct gcctggtgaa ggactacttc cccgagcccg tgaccgtgag ctggaacagc 480
ggcgccttga ccagcggcgt gcacaccttc cccgccgtgc tgcagagcag cggcctgtac 540
agcctgagca gcgtggtgac cgtgcccagc agcagcctgg gcacccagac ctacatctgc 600
aacgtgaacc acaagcccag caacaccaag gtggacaaac gcgtggagcc caagagctgc 660
gacaagaccc acacctgccc cccctgccct gcccccgagc tgctgggcgg accctccgtg 720
ttcctgttcc cccccaagcc caaggacacc ctcatgatca gccggacccc cgaggtgacc 780
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaggac cccgaggtga agttcaactg gtacgtggac 840
ggcgtggagg tgcacaacgc caagaccaag ccccgggagg agcagtacaa cagcacctac 900
cgggtggtga gcgtgctcac cgtgctgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 960
tgcaaggtga gcaacaaggc cctgcctgcc cccatcgaga agaccatcag caaggccaag 1020
ggccagcccc gggagcccca ggtgtacacc ctgcccccca gccgggagga gatgaccaag 1080
aaccaggtgt ccctcacctg tctggtgaag ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 1140
tgggagagca acggccagcc cgagaacaac tacaagacca ccccccctgt gctggacagc 1200
gacggcagct tcttcctgta cagcaagctc accgtggaca agagccggtg gcagcagggc 1260
aacgtgttca gctgcagcgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagagc 1320
ctgagcctga gccccggcaa g 1341
配列番号329
E V Q L V E S G G G L V Q P G G S L R L S C A A S G F T F S I Y A M S W V R Q A P G K G L E W V S A I S S S G D S T Y Y A D S V K G R F T I S R D N A R N T L Y L Q M N S L R A E D T A V Y Y C A R A Y G Y T F D P W G Q G T L V T V S S A S T K G P S V F P L A P S S K S T S G G T A A L G C L V K D Y F P E P V T V S W N S G A L T S G V H T F P A V L Q S S G L Y S L S S V V T V P S S S L G T Q T Y I C N V N H K P S N T K V D K R V E P K S C D K T H T C P P C P A P E L L G G P S V F L F P P K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V K F N W Y V D G V E V H N A K T K P R E E Q Y N S T Y R V V S
V L T V L H Q D W L N G K E Y K C K V S N K A L P A P I E K T I S K A K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P V L D S D G S F F L Y S K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K
配列番号330
gaaattgtgc tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg catagtaatg gatacaacta tttggattgg 120
tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc 180
tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240
agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaagctct acaaactccc 300
ctcactttcg gcggagggac caaggtggag atcaaacgtg cggccgcacc cagcgtgttc 360
atcttccccc cctccgacga gcagctgaag agcggcaccg ccagcgtggt gtgcctgctg 420
aacaacttct acccccggga ggccaaggtg cagtggaagg tggacaacgc cctgcagagc 480
ggcaacagcc aggagagcgt gaccgagcag gacagcaagg actccaccta cagcctgagc 540
agcaccctca ccctgagcaa ggccgactac gagaagcaca aggtgtacgc ctgcgaggtg 600
acccaccagg gcctgagcag ccccgtgacc aagagcttca accggggcga gtgt 654
配列番号331
E I V L T Q S P L S L P V T P G E P A S I S C R S S Q S L L H S N G Y N Y L D W Y L Q K P G Q S P Q L L I Y L G S N R A S G V P D R F S G S G S G T D F T L K I S R V E A E D V G V Y Y C M Q A L Q T P L T F G G G T K V E I K R A A A P S V F I F P P S D E Q L K S G T A S V V C L L N N F Y P R E A K V Q W K V D N A L Q S G N S Q E S V T E Q D S K D S T Y S L S S T L T L S K A D Y E K H K V Y A C E V T H Q G L S S P V T K S F N R G E C
配列番号332
gaggtgcagc tggtggagac cggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cctctggagg caccttcagg acccatgcta tcagttgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcgcta tcttcggaac agcaaactac 180
gcacagaagt tccagggcag aatcacgatt accgcggacg aatccacgag tacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt atttctgtgc gagaggcagt 300
ggttatcata tatcgacacc ctttgacaac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcg 360
agtgctagca ccaagggccc cagcgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420
ggcggcacag ccgccctggg ctgcctggtg aaggactact tccccgagcc cgtgaccgtg 480
agctggaaca gcggcgcctt gaccagcggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540
agcggcctgt acagcctgag cagcgtggtg accgtgccca gcagcagcct gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa acgcgtggag 660
cccaagagct gcgacaagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctgctgggc 720
ggaccctccg tgttcctgtt cccccccaag cccaaggaca ccctcatgat cagccggacc 780
cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg agccacgagg accccgaggt gaagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac gccaagacca agccccggga ggagcagtac 900
aacagcacct accgggtggt gagcgtgctc accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt gagcaacaag gccctgcctg cccccatcga gaagaccatc 1020
agcaaggcca agggccagcc ccgggagccc caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag 1080
gagatgacca agaaccaggt gtccctcacc tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200
gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tacagcaagc tcaccgtgga caagagccgg 1260
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320
acccagaaga gcctgagcct gagccccggc aag 1353
配列番号333
E V Q L V E T G A E V K K P G S S V K V S C K A S G G T F R T H A I S W V R Q A P G Q G L E W M G G I I A I F G T A N Y A Q K F Q G R I T I T A D E S T S T A Y M E L S S L R S E D T A V Y F C A R G S G Y H I S T P F D N W G Q G T L V T V S S A S T K G P S V F P L A P S S K S T S G G T A A L G C L V K D Y F P E P V T V S W N S G A L T S G V H T F P A V L Q S S G L Y S L S S V V T V P S S S L G T Q T Y I C N V N H K P S N T K V D K R V E P K S C D K T H T C P P C P A P E L L G G P S V F L F P P K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V K F N W Y V D G V E V H N A K T K P R E E Q Y N S T Y
R V V S V L T V L H Q D W L N G K E Y K C K V S N K A L P A P I E K T I S K A K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P V L D S D G S F F L Y S K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K
配列番号334
tcctatgtgc tgactcagcc accctcggtg tcagtggccc caggacagac ggccaggatt 60
acctgtgggg gaaacaacat tggaagtaaa ggtgtgcact ggtaccagca gaagcctggc 120
caggcccctg tgctggtcgt ctatgatgat agcgaccggc cctcagggat ccctgagcga 180
ttctctggct ccaactctgg gaacacggcc accctgacca tcagcagggt cgaagccggg 240
gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg gatagtagta gtgatcatgt ggtattcggc 300
ggagggacca agctgaccgt cctaggtgcg gccgcaggcc agcccaaggc cgctcccagc 360
gtgaccctgt tccccccctc ctccgaggag ctgcaggcca acaaggccac cctggtgtgc 420
ctcatcagcg acttctaccc tggcgccgtg accgtggcct ggaaggccga cagcagcccc 480
gtgaaggccg gcgtggagac caccaccccc agcaagcaga gcaacaacaa gtacgccgcc 540
agcagctacc tgagcctcac ccccgagcag tggaagagcc accggagcta cagctgccag 600
gtgacccacg agggcagcac cgtggagaag accgtggccc ccaccgagtg cagc 654
配列番号335
S Y V L T Q P P S V S V A P G Q T A R I T C G G N N I G S K G V H W Y Q Q K P G Q A P V L V V Y D D S D R P S G I P E R F S G S N S G N T A T L T I S R V E A G D E A D Y Y C Q V W D S S S D H V V F G G G T K L T V L G A A A G Q P K A A P S V T L F P P S S E E L Q A N K A T L V C L I S D F Y P G A V T V A W K A D S S P V K A G V E T T T P S K Q S N N K Y A A S S Y L S L T P E Q W K S H R S Y S C Q V T H E G S T V E K T V A P T E C S
配列番号336
gaggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggaca catcttcagc ggctatgcaa tcagttgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tctttggtac aacaaactac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacc aatccacgag cacagcctac 240
atggacctga gcaacttgag atctgaggac acggccgtct attactgtgc gagagtgaaa 300
gatggatatt gtactcttac cagctgccct gtcggctggt acttcgatct ctggggccgt 360
ggcaccctgg tcactgtctc gagtgctagc accaagggcc ccagcgtgtt ccccctggcc 420
cccagcagca agagcaccag cggcggcaca gccgccctgg gctgcctggt gaaggactac 480
ttccccgagc ccgtgaccgt gagctggaac agcggcgcct tgaccagcgg cgtgcacacc 540
ttccccgccg tgctgcagag cagcggcctg tacagcctga gcagcgtggt gaccgtgccc 600
agcagcagcc tgggcaccca gacctacatc tgcaacgtga accacaagcc cagcaacacc 660
aaggtggaca aacgcgtgga gcccaagagc tgcgacaaga cccacacctg ccccccctgc 720
cctgcccccg agctgctggg cggaccctcc gtgttcctgt tcccccccaa gcccaaggac 780
accctcatga tcagccggac ccccgaggtg acctgcgtgg tggtggacgt gagccacgag 840
gaccccgagg tgaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcacaa cgccaagacc 900
aagccccggg aggagcagta caacagcacc taccgggtgg tgagcgtgct caccgtgctg 960
caccaggact ggctgaacgg caaggagtac aagtgcaagg tgagcaacaa ggccctgcct 1020
gcccccatcg agaagaccat cagcaaggcc aagggccagc cccgggagcc ccaggtgtac 1080
accctgcccc ccagccggga ggagatgacc aagaaccagg tgtccctcac ctgtctggtg 1140
aagggcttct accccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaacggcca gcccgagaac 1200
aactacaaga ccaccccccc tgtgctggac agcgacggca gcttcttcct gtacagcaag 1260
ctcaccgtgg acaagagccg gtggcagcag ggcaacgtgt tcagctgcag cgtgatgcac 1320
gaggccctgc acaaccacta cacccagaag agcctgagcc tgagccccgg caag 1374
配列番号337
E V Q L V E S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G H I F S G Y A I S W V R Q A P G Q G L E W M G G I I P I F G T T N Y A Q K F Q G R V T I T A D Q S T S T A Y M D L S N L R S E D T A V Y Y C A R V K D G Y C T L T S C P V G W Y F D L W G R G T L V T V S S A S T K G P S V F P L A P S S K S T S G G T A A L G C L V K D Y F P E P V T V S W N S G A L T S G V H T F P A V L Q S S G L Y S L S S V V T V P S S S L G T Q T Y I C N V N H K P S N T K V D K R V E P K S C D K T H T C P P C P A P E L L G G P S V F L F P P K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V K F N W Y V D G V E V H N A K T K P R E
E Q Y N S T Y R V V S V L T V L H Q D W L N G K E Y K C K V S N K A L P A P I E K T I S K A K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P V L D S D G S F F L Y S K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K
配列番号338
gaaattgtga tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcgtgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120
cctggccagg ctcccaggct cctcatcttt ggtgcctcca gcagggccac tggcatccca 180
gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240
cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcactcac tttcggcgga 300
gggaccaagc tggagatcaa acgtgcggcc gcacccagcg tgttcatctt ccccccctcc 360
gacgagcagc tgaagagcgg caccgccagc gtggtgtgcc tgctgaacaa cttctacccc 420
cgggaggcca aggtgcagtg gaaggtggac aacgccctgc agagcggcaa cagccaggag 480
agcgtgaccg agcaggacag caaggactcc acctacagcc tgagcagcac cctcaccctg 540
agcaaggccg actacgagaa gcacaaggtg tacgcctgcg aggtgaccca ccagggcctg 600
agcagccccg tgaccaagag cttcaaccgg ggcgagtgt 639
配列番号339
E I V M T Q S P G T L S L S P G E R A T L S C R A S Q S V S S S Y L A W Y Q Q K P G Q A P R L L I F G A S S R A T G I P D R F S G S G S G T D F T L T I S R L E P E D F A V Y Y C Q Q Y G S S L T F G G G T K L E I K R A A A P S V F I F P P S D E Q L K S G T A S V V C L L N N F Y P R E A K V Q W K V D N A L Q S G N S Q E S V T E Q D S K D S T Y S L S S T L T L S K A D Y E K H K V Y A C E V T H Q G L S S P V T K S F N R G E C
配列番号340
gaggtccagc tggtacagtc tggggctgag gttaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg catcttcaga agcaattcta tcagttgggt gcgacaggcc 120
cctgggcaag ggcttgagtg gatgggaggg atcttcgctc ttttcggaac aacagactac 180
gcgcagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatcttcgac cacagtctac 240
ctggagctga gtagcctgac atctgaggac acggccgttt attactgtgc gagaggcagt 300
ggctacacca cacgcaacta ctttgactac tggggccagg gcaccctggt caccgtctcg 360
agtgctagca ccaagggccc cagcgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420
ggcggcacag ccgccctggg ctgcctggtg aaggactact tccccgagcc cgtgaccgtg 480
agctggaaca gcggcgcctt gaccagcggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540
agcggcctgt acagcctgag cagcgtggtg accgtgccca gcagcagcct gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa acgcgtggag 660
cccaagagct gcgacaagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctgctgggc 720
ggaccctccg tgttcctgtt cccccccaag cccaaggaca ccctcatgat cagccggacc 780
cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg agccacgagg accccgaggt gaagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac gccaagacca agccccggga ggagcagtac 900
aacagcacct accgggtggt gagcgtgctc accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt gagcaacaag gccctgcctg cccccatcga gaagaccatc 1020
agcaaggcca agggccagcc ccgggagccc caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag 1080
gagatgacca agaaccaggt gtccctcacc tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200
gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tacagcaagc tcaccgtgga caagagccgg 1260
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320
acccagaaga gcctgagcct gagccccggc aag 1353
配列番号341
E V Q L V Q S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G G I F R S N S I S W V R Q A P G Q G L E W M G G I F A L F G T T D Y A Q K F Q G R V T I T A D E S S T T V Y L E L S S L T S E D T A V Y Y C A R G S G Y T T R N Y F D Y W G Q G T L V T V S S A S T K G P S V F P L A P S S K S T S G G T A A L G C L V K D Y F P E P V T V S W N S G A L T S G V H T F P A V L Q S S G L Y S L S S V V T V P S S S L G T Q T Y I C N V N H K P S N T K V D K R V E P K S C D K T H T C P P C P A P E L L G G P S V F L F P P K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V K F N W Y V D G V E V H N A K T K P R E E Q Y N S T Y
R V V S V L T V L H Q D W L N G K E Y K C K V S N K A L P A P I E K T I S K A K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P V L D S D G S F F L Y S K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K
配列番号342
gaaattgtgc tgactcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccaca 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcaactact taggctggta ccagcagaaa 120
cctggccagg ctcccaggct cctgatctat ggtgcatcca gcagggccag tggcatccca 180
gacaggttca gtggcggtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240
cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcacccct cactttcggc 300
ggagggacca aggtggagat caaacgtgcg gccgcaggcc agcccaaggc cgctcccagc 360
gtgaccctgt tccccccctc ctccgaggag ctgcaggcca acaaggccac cctggtgtgc 420
ctcatcagcg acttctaccc tggcgccgtg accgtggcct ggaaggccga cagcagcccc 480
gtgaaggccg gcgtggagac caccaccccc agcaagcaga gcaacaacaa gtacgccgcc 540
agcagctacc tgagcctcac ccccgagcag tggaagagcc accggagcta cagctgccag 600
gtgacccacg agggcagcac cgtggagaag accgtggccc ccaccgagtg cagc 654
配列番号343
E I V L T Q S P G T L S L S P G E R A T L S C R A S Q S V S S N Y L G W Y Q Q K P G Q A P R L L I Y G A S S R A S G I P D R F S G G G S G T D F T L T I S R L E P E D F A V Y Y C Q Q Y G S S P L T F G G G T K V E I K R A A A G Q P K A A P S V T L F P P S S E E L Q A N K A T L V C L I S D F Y P G A V T V A W K A D S S P V K A G V E T T T P S K Q S N N K Y A A S S Y L S L T P E Q W K S H R S Y S C Q V T H E G S T V E K T V A P T E C S
配列番号344
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtaaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg ccccttccgc aattttgcta tcaactgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcgctg tctttgggac gacaaagtac 180
gcacataagt tccagggcag agtcaccatc accgcggacg actccacaaa tacagcttac 240
atggagctgg gcagcctgaa atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaggtccc 300
cactactact cctcctacat ggacgtctgg ggcgaaggga ccacggtcac cgtctcgagt 360
gctagcacca agggccccag cgtgttcccc ctggccccca gcagcaagag caccagcggc 420
ggcacagccg ccctgggctg cctggtgaag gactacttcc ccgagcccgt gaccgtgagc 480
tggaacagcg gcgccttgac cagcggcgtg cacaccttcc ccgccgtgct gcagagcagc 540
ggcctgtaca gcctgagcag cgtggtgacc gtgcccagca gcagcctggg cacccagacc 600
tacatctgca acgtgaacca caagcccagc aacaccaagg tggacaaacg cgtggagccc 660
aagagctgcg acaagaccca cacctgcccc ccctgccctg cccccgagct gctgggcgga 720
ccctccgtgt tcctgttccc ccccaagccc aaggacaccc tcatgatcag ccggaccccc 780
gaggtgacct gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaggacc ccgaggtgaa gttcaactgg 840
tacgtggacg gcgtggaggt gcacaacgcc aagaccaagc cccgggagga gcagtacaac 900
agcacctacc gggtggtgag cgtgctcacc gtgctgcacc aggactggct gaacggcaag 960
gagtacaagt gcaaggtgag caacaaggcc ctgcctgccc ccatcgagaa gaccatcagc 1020
aaggccaagg gccagccccg ggagccccag gtgtacaccc tgccccccag ccgggaggag 1080
atgaccaaga accaggtgtc cctcacctgt ctggtgaagg gcttctaccc cagcgacatc 1140
gccgtggagt gggagagcaa cggccagccc gagaacaact acaagaccac cccccctgtg 1200
ctggacagcg acggcagctt cttcctgtac agcaagctca ccgtggacaa gagccggtgg 1260
cagcagggca acgtgttcag ctgcagcgtg atgcacgagg ccctgcacaa ccactacacc 1320
cagaagagcc tgagcctgag ccccggcaag 1350
配列番号345
Q V Q L V Q S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G G P F R N F A I N W V R Q A P G Q G L E W M G G I I A V F G T T K Y A H K F Q G R V T I T A D D S T N T A Y M E L G S L K S E D T A V Y Y C A R G P H Y Y S S Y M D V W G E G T T V T V S S A S T K G P S V F P L A P S S K S T S G G T A A L G C L V K D Y F P E P V T V S W N S G A L T S G V H T F P A V L Q S S G L Y S L S S V V T V P S S S L G T Q T Y I C N V N H K P S N T K V D K R V E P K S C D K T H T C P P C P A P E L L G G P S V F L F P P K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V K F N W Y V D G V E V H N A K T K P R E E Q Y N S T Y R
V V S V L T V L H Q D W L N G K E Y K C K V S N K A L P A P I E K T I S K A K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P V L D S D G S F F L Y S K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K
配列番号346
gacatccagt tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcgagtca gggcattagc acttatttag cctggtatca gcagaaaccc 120
gggaaagttc ctaaactcct gatctatgct gcatccactt tgcaatcagg ggtcccatct 180
cggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagatgttg caacttatta ctgtcaaaag tataacagtg ccccttcttt cggccctggg 300
accaaagtgg atatcaaacg tgcggccgca cccagcgtgt tcatcttccc cccctccgac 360
gagcagctga agagcggcac cgccagcgtg gtgtgcctgc tgaacaactt ctacccccgg 420
gaggccaagg tgcagtggaa ggtggacaac gccctgcaga gcggcaacag ccaggagagc 480
gtgaccgagc aggacagcaa ggactccacc tacagcctga gcagcaccct caccctgagc 540
aaggccgact acgagaagca caaggtgtac gcctgcgagg tgacccacca gggcctgagc 600
agccccgtga ccaagagctt caaccggggc gagtgt 636
配列番号347
D I Q L T Q S P S S L S A S V G D R V T I T C R A S Q G I S T Y L A W Y Q Q K P G K V P K L L I Y A A S T L Q S G V P S R F S G S G S G T D F T L T I S S L Q P E D V A T Y Y C Q K Y N S A P S F G P G T K V D I K R A A A P S V F I F P P S D E Q L K S G T A S V V C L L N N F Y P R E A K V Q W K V D N A L Q S G N S Q E S V T E Q D S K D S T Y S L S S T L T L S K A D Y E K H K V Y A C E V T H Q G L S S P V T K S F N R G E C
配列番号348
gaggtgcagc tggtggagac tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
ccctgcaaat cttctggaag ccccttcagg agtaatgctg tcagctgggt gcgacaggcc 120
cccggacaag ggcttgagtg ggtgggagga atcctcggtg tctttggttc accaagctac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccaccaa cacagtccac 240
atggagctga gaggtttgag atctgaggac acggccgtgt attattgtgc gagaggtcct 300
acctactact actcctacat ggacgtctgg ggcaaaggga ccacggtcac cgtctcgagt 360
gctagcacca agggccccag cgtgttcccc ctggccccca gcagcaagag caccagcggc 420
ggcacagccg ccctgggctg cctggtgaag gactacttcc ccgagcccgt gaccgtgagc 480
tggaacagcg gcgccttgac cagcggcgtg cacaccttcc ccgccgtgct gcagagcagc 540
ggcctgtaca gcctgagcag cgtggtgacc gtgcccagca gcagcctggg cacccagacc 600
tacatctgca acgtgaacca caagcccagc aacaccaagg tggacaaacg cgtggagccc 660
aagagctgcg acaagaccca cacctgcccc ccctgccctg cccccgagct gctgggcgga 720
ccctccgtgt tcctgttccc ccccaagccc aaggacaccc tcatgatcag ccggaccccc 780
gaggtgacct gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaggacc ccgaggtgaa gttcaactgg 840
tacgtggacg gcgtggaggt gcacaacgcc aagaccaagc cccgggagga gcagtacaac 900
agcacctacc gggtggtgag cgtgctcacc gtgctgcacc aggactggct gaacggcaag 960
gagtacaagt gcaaggtgag caacaaggcc ctgcctgccc ccatcgagaa gaccatcagc 1020
aaggccaagg gccagccccg ggagccccag gtgtacaccc tgccccccag ccgggaggag 1080
atgaccaaga accaggtgtc cctcacctgt ctggtgaagg gcttctaccc cagcgacatc 1140
gccgtggagt gggagagcaa cggccagccc gagaacaact acaagaccac cccccctgtg 1200
ctggacagcg acggcagctt cttcctgtac agcaagctca ccgtggacaa gagccggtgg 1260
cagcagggca acgtgttcag ctgcagcgtg atgcacgagg ccctgcacaa ccactacacc 1320
cagaagagcc tgagcctgag ccccggcaag 1350
配列番号349
E V Q L V E T G A E V K K P G S S V K V P C K S S G S P F R S N A V S W V R Q A P G Q G L E W V G G I L G V F G S P S Y A Q K F Q G R V T I T A D E S T N T V H M E L R G L R S E D T A V Y Y C A R G P T Y Y Y S Y M D V W G K G T T V T V S S A S T K G P S V F P L A P S S K S T S G G T A A L G C L V K D Y F P E P V T V S W N S G A L T S G V H T F P A V L Q S S G L Y S L S S V V T V P S S S L G T Q T Y I C N V N H K P S N T K V D K R V E P K S C D K T H T C P P C P A P E L L G G P S V F L F P P K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V K F N W Y V D G V E V H N A K T K P R E E Q Y N S T Y R
V V S V L T V L H Q D W L N G K E Y K C K V S N K A L P A P I E K T I S K A K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P V L D S D G S F F L Y S K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K
配列番号350
tcctatgtgc tgactcagcc accctcggag tcagtggccc caggacagac ggccaggatt 60
acctgtgggg gaaataacat tggaagaaat agtgtgcact ggtatcagca gaagccaggc 120
caggcccctg tgctggtcgt gtatgatgat agcgaccggc cctcagggat ccctgagcga 180
ttttctggct ccaagtctgg gaacacggcc accctgatta tcagcagggt cgaagtcggg 240
gatgaggccg actactactg tcaggtgtgg catagtagta gtgatcatta tgtcttcgga 300
actgggacca aggtcaccgt cctaggtgcg gccgcaggcc agcccaaggc cgctcccagc 360
gtgaccctgt tccccccctc ctccgaggag ctgcaggcca acaaggccac cctggtgtgc 420
ctcatcagcg acttctaccc tggcgccgtg accgtggcct ggaaggccga cagcagcccc 480
gtgaaggccg gcgtggagac caccaccccc agcaagcaga gcaacaacaa gtacgccgcc 540
agcagctacc tgagcctcac ccccgagcag tggaagagcc accggagcta cagctgccag 600
gtgacccacg agggcagcac cgtggagaag accgtggccc ccaccgagtg cagc 654
配列番号351
S Y V L T Q P P S E S V A P G Q T A R I T C G G N N I G R N S V H W Y Q Q K P G Q A P V L V V Y D D S D R P S G I P E R F S G S K S G N T A T L I I S R V E V G D E A D Y Y C Q V W H S S S D H Y V F G T G T K V T V L G A A A G Q P K A A P S V T L F P P S S E E L Q A N K A T L V C L I S D F Y P G A V T V A W K A D S S P V K A G V E T T T P S K Q S N N K Y A A S S Y L S L T P E Q W K S H R S Y S C Q V T H E G S T V E K T V A P T E C S
配列番号352
cagatgcagc tggtacaatc tggagctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcttcggta tgtttgggac agcaaactac 180
gcgcagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aattcacgag cgcggcctac 240
atggagctga gcagcctggg atctgaggac acggccatgt attactgtgc gaggtctagt 300
ggttattacc cccaatactt ccaggactgg ggccagggca ccctggtcac cgtctcgagt 360
gctagcacca agggccccag cgtgttcccc ctggccccca gcagcaagag caccagcggc 420
ggcacagccg ccctgggctg cctggtgaag gactacttcc ccgagcccgt gaccgtgagc 480
tggaacagcg gcgccttgac cagcggcgtg cacaccttcc ccgccgtgct gcagagcagc 540
ggcctgtaca gcctgagcag cgtggtgacc gtgcccagca gcagcctggg cacccagacc 600
tacatctgca acgtgaacca caagcccagc aacaccaagg tggacaaacg cgtggagccc 660
aagagctgcg acaagaccca cacctgcccc ccctgccctg cccccgagct gctgggcgga 720
ccctccgtgt tcctgttccc ccccaagccc aaggacaccc tcatgatcag ccggaccccc 780
gaggtgacct gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaggacc ccgaggtgaa gttcaactgg 840
tacgtggacg gcgtggaggt gcacaacgcc aagaccaagc cccgggagga gcagtacaac 900
agcacctacc gggtggtgag cgtgctcacc gtgctgcacc aggactggct gaacggcaag 960
gagtacaagt gcaaggtgag caacaaggcc ctgcctgccc ccatcgagaa gaccatcagc 1020
aaggccaagg gccagccccg ggagccccag gtgtacaccc tgccccccag ccgggaggag 1080
atgaccaaga accaggtgtc cctcacctgt ctggtgaagg gcttctaccc cagcgacatc 1140
gccgtggagt gggagagcaa cggccagccc gagaacaact acaagaccac cccccctgtg 1200
ctggacagcg acggcagctt cttcctgtac agcaagctca ccgtggacaa gagccggtgg 1260
cagcagggca acgtgttcag ctgcagcgtg atgcacgagg ccctgcacaa ccactacacc 1320
cagaagagcc tgagcctgag ccccggcaag 1350
配列番号353
Q M Q L V Q S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G G T F S S Y A I S W V R Q A P G Q G L E W M G G I F G M F G T A N Y A Q K F Q G R V T I T A D E F T S A A Y M E L S S L G S E D T A M Y Y C A R S S G Y Y P Q Y F Q D W G Q G T L V T V S S A S T K G P S V F P L A P S S K S T S G G T A A L G C L V K D Y F P E P V T V S W N S G A L T S G V H T F P A V L Q S S G L Y S L S S V V T V P S S S L G T Q T Y I C N V N H K P S N T K V D K R V E P K S C D K T H T C P P C P A P E L L G G P S V F L F P P K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V K F N W Y V D G V E V H N A K T K P R E E Q Y N S T Y R
V V S V L T V L H Q D W L N G K E Y K C K V S N K A L P A P I E K T I S K A K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P V L D S D G S F F L Y S K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K
配列番号354
gaaattgtga tgacacagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggca aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120
cctggccagg ctcccagact cctcatgtat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180
gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240
cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcatcgct cactttcggc 300
ggagggacca agctggagat caaacgtgcg gccgcaccca gcgtgttcat cttccccccc 360
tccgacgagc agctgaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420
ccccgggagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480
gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac tccacctaca gcctgagcag caccctcacc 540
ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600
ctgagcagcc ccgtgaccaa gagcttcaac cggggcgagt gt 642
配列番号355
E I V M T Q S P G T L S L S P G Q R A T L S C R A S Q S V S S S Y L A W Y Q Q K P G Q A P R L L M Y G A S S R A T G I P D R F S G S G S G T D F T L T I S R L E P E D F A V Y Y C Q Q Y G S S S L T F G G G T K L E I K R A A A P S V F I F P P S D E Q L K S G T A S V V C L L N N F Y P R E A K V Q W K V D N A L Q S G N S Q E S V T E Q D S K D S T Y S L S S T L T L S K A D Y E K H K V Y A C E V T H Q G L S S P V T K S F N R G E C
配列番号356
gaggtgcagc tggtggagtc cggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg catcttcaac agttatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggc atcatcgcta tctttcatac accaaagtac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgaa cacagcctac 240
atggaactga gaagcctgaa atctgaggac acggccctgt attactgtgc gagagggtcc 300
acttacgatt tttcgagtgg ccttgactac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcg 360
agtgctagca ccaagggccc cagcgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420
ggcggcacag ccgccctggg ctgcctggtg aaggactact tccccgagcc cgtgaccgtg 480
agctggaaca gcggcgcctt gaccagcggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540
agcggcctgt acagcctgag cagcgtggtg accgtgccca gcagcagcct gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa acgcgtggag 660
cccaagagct gcgacaagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctgctgggc 720
ggaccctccg tgttcctgtt cccccccaag cccaaggaca ccctcatgat cagccggacc 780
cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg agccacgagg accccgaggt gaagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac gccaagacca agccccggga ggagcagtac 900
aacagcacct accgggtggt gagcgtgctc accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt gagcaacaag gccctgcctg cccccatcga gaagaccatc 1020
agcaaggcca agggccagcc ccgggagccc caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag 1080
gagatgacca agaaccaggt gtccctcacc tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200
gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tacagcaagc tcaccgtgga caagagccgg 1260
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320
acccagaaga gcctgagcct gagccccggc aag 1353
配列番号357
E V Q L V E S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G G I F N S Y A I S W V R Q A P G Q G L E W M G G I I A I F H T P K Y A Q K F Q G R V T I T A D E S T N T A Y M E L R S L K S E D T A L Y Y C A R G S T Y D F S S G L D Y W G Q G T L V T V S S A S T K G P S V F P L A P S S K S T S G G T A A L G C L V K D Y F P E P V T V S W N S G A L T S G V H T F P A V L Q S S G L Y S L S S V V T V P S S S L G T Q T Y I C N V N H K P S N T K V D K R V E P K S C D K T H T C P P C P A P E L L G G P S V F L F P P K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V K F N W Y V D G V E V H N A K T K P R E E Q Y N S T Y
R V V S V L T V L H Q D W L N G K E Y K C K V S N K A L P A P I E K T I S K A K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P V L D S D G S F F L Y S K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K
配列番号358
caggcagggc tgactcagcc accctcggtg tcagtggccc caggacagac ggccaggatt 60
acctgtgggg gaaacaacat tggaagtaaa agtgtgcact ggtaccagca gaagccaggc 120
caggcccctg tcctagtcgt ctatgatgat agcgaccggc cctcagggat ccctgagcga 180
ttctctggct ccaactctgg gaacacggcc accctgacca tcagcagggt cgaagccggg 240
gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg gatagtagta gtgatcatgt ggtattcggc 300
ggagggacca agctgaccgt cctaggtgcg gccgcaggcc agcccaaggc cgctcccagc 360
gtgaccctgt tccccccctc ctccgaggag ctgcaggcca acaaggccac cctggtgtgc 420
ctcatcagcg acttctaccc tggcgccgtg accgtggcct ggaaggccga cagcagcccc 480
gtgaaggccg gcgtggagac caccaccccc agcaagcaga gcaacaacaa gtacgccgcc 540
agcagctacc tgagcctcac ccccgagcag tggaagagcc accggagcta cagctgccag 600
gtgacccacg agggcagcac cgtggagaag accgtggccc ccaccgagtg cagc 654
配列番号359
Q A G L T Q P P S V S V A P G Q T A R I T C G G N N I G S K S V H W Y Q Q K P G Q A P V L V V Y D D S D R P S G I P E R F S G S N S G N T A T L T I S R V E A G D E A D Y Y C Q V W D S S S D H V V F G G G T K L T V L G A A A G Q P K A A P S V T L F P P S S E E L Q A N K A T L V C L I S D F Y P G A V T V A W K A D S S P V K A G V E T T T P S K Q S N N K Y A A S S Y L S L T P E Q W K S H R S Y S C Q V T H E G S T V E K T V A P T E C S
配列番号360
caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg cttcttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgccaggcc 120
cctggacaag gacttgagtg gatggggggg gtcatcccta tctttcgtac agcaaactac 180
gcacagaact tccagggcag agtcaccatt accgcggacg aattcacatc gtatatggag 240
ctgagcagcc tgagatctga cgacacggcc gtgtattact gtgcgaggtt gaattaccat 300
gattcgggga cttattataa cgccccccgg ggctggttcg acccctgggg ccagggaacc 360
ctggtcaccg tctcgagtgc tagcaccaag ggccccagcg tgttccccct ggcccccagc 420
agcaagagca ccagcggcgg cacagccgcc ctgggctgcc tggtgaagga ctacttcccc 480
gagcccgtga ccgtgagctg gaacagcggc gccttgacca gcggcgtgca caccttcccc 540
gccgtgctgc agagcagcgg cctgtacagc ctgagcagcg tggtgaccgt gcccagcagc 600
agcctgggca cccagaccta catctgcaac gtgaaccaca agcccagcaa caccaaggtg 660
gacaaacgcg tggagcccaa gagctgcgac aagacccaca cctgcccccc ctgccctgcc 720
cccgagctgc tgggcggacc ctccgtgttc ctgttccccc ccaagcccaa ggacaccctc 780
atgatcagcc ggacccccga ggtgacctgc gtggtggtgg acgtgagcca cgaggacccc 840
gaggtgaagt tcaactggta cgtggacggc gtggaggtgc acaacgccaa gaccaagccc 900
cgggaggagc agtacaacag cacctaccgg gtggtgagcg tgctcaccgt gctgcaccag 960
gactggctga acggcaagga gtacaagtgc aaggtgagca acaaggccct gcctgccccc 1020
atcgagaaga ccatcagcaa ggccaagggc cagccccggg agccccaggt gtacaccctg 1080
ccccccagcc gggaggagat gaccaagaac caggtgtccc tcacctgtct ggtgaagggc 1140
ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg gagagcaacg gccagcccga gaacaactac 1200
aagaccaccc cccctgtgct ggacagcgac ggcagcttct tcctgtacag caagctcacc 1260
gtggacaaga gccggtggca gcagggcaac gtgttcagct gcagcgtgat gcacgaggcc 1320
ctgcacaacc actacaccca gaagagcctg agcctgagcc ccggcaag 1368
配列番号361
Q V Q L V Q S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G G F F S S Y A I S W V R Q A P G Q G L E W M G G V I P I F R T A N Y A Q N F Q G R V T I T A D E F T S Y M E L S S L R S D D T A V Y Y C A R L N Y H D S G T Y Y N A P R G W F D P W G Q G T L V T V S S A S T K G P S V F P L A P S S K S T S G G T A A L G C L V K D Y F P E P V T V S W N S G A L T S G V H T F P A V L Q S S G L Y S L S S V V T V P S S S L G T Q T Y I C N V N H K P S N T K V D K R V E P K S C D K T H T C P P C P A P E L L G G P S V F L F P P K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V K F N W Y V D G V E V H N A K T K P R E E Q
Y N S T Y R V V S V L T V L H Q D W L N G K E Y K C K V S N K A L P A P I E K T I S K A K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P V L D S D G S F F L Y S K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K
配列番号362
gacatccaga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gaaggccacc 60
atcaactgca agtccagcca gagtatttta aacagctcca acaataagaa ctacttagct 120
tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atctacccgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaata ttatagtagt 300
ccgccgacgt tcggccaagg gaccaaggtg gaaatcaaac gtgcggccgc acccagcgtg 360
ttcatcttcc ccccctccga cgagcagctg aagagcggca ccgccagcgt ggtgtgcctg 420
ctgaacaact tctacccccg ggaggccaag gtgcagtgga aggtggacaa cgccctgcag 480
agcggcaaca gccaggagag cgtgaccgag caggacagca aggactccac ctacagcctg 540
agcagcaccc tcaccctgag caaggccgac tacgagaagc acaaggtgta cgcctgcgag 600
gtgacccacc agggcctgag cagccccgtg accaagagct tcaaccgggg cgagtgt 657
配列番号363
D I Q M T Q S P D S L A V S L G E K A T I N C K S S Q S I L N S S N N K N Y L A W Y Q Q K P G Q P P K L L I Y W A S T R E S G V P D R F S G S G S G T D F T L T I S S L Q A E D V A V Y Y C Q Q Y Y S S P P T F G Q G T K V E I K R A A A P S V F I F P P S D E Q L K S G T A S V V C L L N N F Y P R E A K V Q W K V D N A L Q S G N S Q E S V T E Q D S K D S T Y S L S S T L T L S K A D Y E K H K V Y A C E V T H Q G L S S P V T K S F N R G E C
配列番号364
caggtccagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagt caccttcagt tactatgcta tgagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggagga atcagcccta tgtttgggac aacaacctac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt actgcggacg actccacgag tacagcctac 240
atggaggtga ggagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagatcttcg 300
aattactatg atagtgtata tgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcgagt 360
gctagcacca agggccccag cgtgttcccc ctggccccca gcagcaagag caccagcggc 420
ggcacagccg ccctgggctg cctggtgaag gactacttcc ccgagcccgt gaccgtgagc 480
tggaacagcg gcgccttgac cagcggcgtg cacaccttcc ccgccgtgct gcagagcagc 540
ggcctgtaca gcctgagcag cgtggtgacc gtgcccagca gcagcctggg cacccagacc 600
tacatctgca acgtgaacca caagcccagc aacaccaagg tggacaaacg cgtggagccc 660
aagagctgcg acaagaccca cacctgcccc ccctgccctg cccccgagct gctgggcgga 720
ccctccgtgt tcctgttccc ccccaagccc aaggacaccc tcatgatcag ccggaccccc 780
gaggtgacct gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaggacc ccgaggtgaa gttcaactgg 840
tacgtggacg gcgtggaggt gcacaacgcc aagaccaagc cccgggagga gcagtacaac 900
agcacctacc gggtggtgag cgtgctcacc gtgctgcacc aggactggct gaacggcaag 960
gagtacaagt gcaaggtgag caacaaggcc ctgcctgccc ccatcgagaa gaccatcagc 1020
aaggccaagg gccagccccg ggagccccag gtgtacaccc tgccccccag ccgggaggag 1080
atgaccaaga accaggtgtc cctcacctgt ctggtgaagg gcttctaccc cagcgacatc 1140
gccgtggagt gggagagcaa cggccagccc gagaacaact acaagaccac cccccctgtg 1200
ctggacagcg acggcagctt cttcctgtac agcaagctca ccgtggacaa gagccggtgg 1260
cagcagggca acgtgttcag ctgcagcgtg atgcacgagg ccctgcacaa ccactacacc 1320
cagaagagcc tgagcctgag ccccggcaag 1350
配列番号365
Q V Q L V Q S G A E V K K P G S S V K V S C K A S G V T F S Y Y A M S W V R Q A P G Q G L E W M G G I S P M F G T T T Y A Q K F Q G R V T I T A D D S T S T A Y M E V R S L R S E D T A V Y Y C A R S S N Y Y D S V Y D Y W G Q G T L V T V S S A S T K G P S V F P L A P S S K S T S G G T A A L G C L V K D Y F P E P V T V S W N S G A L T S G V H T F P A V L Q S S G L Y S L S S V V T V P S S S L G T Q T Y I C N V N H K P S N T K V D K R V E P K S C D K T H T C P P C P A P E L L G G P S V F L F P P K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V K F N W Y V D G V E V H N A K T K P R E E Q Y N S T Y R
V V S V L T V L H Q D W L N G K E Y K C K V S N K A L P A P I E K T I S K A K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P V L D S D G S F F L Y S K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K
配列番号366
cagtctgtcg tgacgcagcc gccctcggag tcagtggccc caggacagac ggccaggatt 60
acctgtgggg gacataacat tggaagtaat agtgtgcact ggtaccagca gaagccaggc 120
caggcccctg tgctggtcgt gtatgataat agcgaccggc cctcagggat ccctgagcga 180
ttctctggct ccaactctgg gaacacggcc accctgacca tcagcagggt cgaagccggg 240
gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg ggtagtagta gtgaccatta tgtcttcgga 300
actgggacca aggtcaccgt cctaggtgcg gccgcaggcc agcccaaggc cgctcccagc 360
gtgaccctgt tccccccctc ctccgaggag ctgcaggcca acaaggccac cctggtgtgc 420
ctcatcagcg acttctaccc tggcgccgtg accgtggcct ggaaggccga cagcagcccc 480
gtgaaggccg gcgtggagac caccaccccc agcaagcaga gcaacaacaa gtacgccgcc 540
agcagctacc tgagcctcac ccccgagcag tggaagagcc accggagcta cagctgccag 600
gtgacccacg agggcagcac cgtggagaag accgtggccc ccaccgagtg cagc 654
配列番号367
Q S V V T Q P P S E S V A P G Q T A R I T C G G H N I G S N S V H W Y Q Q K P G Q A P V L V V Y D N S D R P S G I P E R F S G S N S G N T A T L T I S R V E A G D E A D Y Y C Q V W G S S S D H Y V F G T G T K V T V L G A A A G Q P K A A P S V T L F P P S S E E L Q A N K A T L V C L I S D F Y P G A V T V A W K A D S S P V K A G V E T T T P S K Q S N N K Y A A S S Y L S L T P E Q W K S H R S Y S C Q V T H E G S T V E K T V A P T E C S
（参考文献）
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（２）Burton(バートン) DR およびBarbas(バルバス) CF (1994年), Human antibodies from combinatorial libraries.(コンビナトリアルライブラリーからのヒト抗体) Adv. Immunol.(アドバンシーズ・イン・イムノロジー) 57:191-280
（３）Chou(シュー) TCおよびP Talalay(タラレイ) (1984年) Quantitative analysis of dose-effect relationships: the combined effects of multiple drugs or enzyme inhibitors(用量効果関連の定量分析：多重薬物または酵素インヒビターの組合せ効果). Adv Enzyme Regul(アドバンシーズ・イン・エンザイム・レギュレーション) 22:27-55
（４）De Kruif(ド・クライフ) J et al. (1995a), Rapid selection of cell subpopulation-specific human monoclonal antibodies from a synthetic phage antibody library(合成ファージ抗体ライブラリーからの細胞部分母集団特異的ヒト単クローン性抗体の迅速選定). Proc Natl Acad Sci USA(プロセーディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシーズ・オブ・ザ・ユナイテッド・ステイツ・オブ・アメリカ) 92:3938
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Claims (11)

  1. インフルエンザ血球凝集素タンパク質（ＨＡ）のＨＡ２サブユニットにおいてエピトープを認識し、かつ結合することが可能な分離された結合性分子であって、ヒト由来のものであり、Ｈ５サブタイプのインフルエンザウイルスに対する中和活性を有し、かつ配列番号１のＣＤＲ１領域、配列番号２のＣＤＲ２領域、および配列番号３のＣＤＲ３領域が含まれる重鎖、ならびに生殖系列遺伝子ＶＨ１−６９によってコードされるアミノ酸のフレームワーク領域を含む、結合性分子。
  2. 前記結合性分子はまた、Ｈ１サブタイプのＨＡを含むインフルエンザウイルスに対する中和活性を有する、請求項１に記載の結合性分子。
  3. ａ）配列番号１のＣＤＲ１領域、配列番号２のＣＤＲ２領域、および配列番号３のＣＤＲ３領域が含まれる重鎖、ならびに配列番号４のＣＤＲ１領域、配列番号５のＣＤＲ２領域、および配列番号６のＣＤＲ３領域が含まれる軽鎖を含む結合性分子、
    ｂ）配列番号１のＣＤＲ１領域、配列番号２のＣＤＲ２領域、および配列番号３のＣＤＲ３領域が含まれる重鎖、ならびに配列番号７のＣＤＲ１領域、配列番号８のＣＤＲ２領域、および配列番号９のＣＤＲ３領域が含まれる軽鎖を含む結合性分子、
    ｃ）配列番号１のＣＤＲ１領域、配列番号２のＣＤＲ２領域、および配列番号３のＣＤＲ３領域が含まれる重鎖、ならびに配列番号１０のＣＤＲ１領域、配列番号１１のＣＤＲ２領域、および配列番号１２のＣＤＲ３領域が含まれる軽鎖を含む結合性分子、
    ｄ）配列番号１のＣＤＲ１領域、配列番号２のＣＤＲ２領域、および配列番号３のＣＤＲ３領域が含まれる重鎖、ならびに配列番号１３のＣＤＲ１領域、配列番号１４のＣＤＲ２領域、および配列番号１５のＣＤＲ３領域が含まれる軽鎖を含む結合性分子、
    ｅ）配列番号１のＣＤＲ１領域、配列番号２のＣＤＲ２領域、および配列番号３のＣＤＲ３領域が含まれる重鎖、ならびに配列番号３３のＣＤＲ１領域、配列番号３４のＣＤＲ２領域、および配列番号３５のＣＤＲ３領域が含まれる軽鎖を含む結合性分子、および
    ｆ）配列番号１のＣＤＲ１領域、配列番号２のＣＤＲ２領域、および配列番号３のＣＤＲ３領域が含まれる重鎖、ならびに配列番号３６のＣＤＲ１領域、配列番号３７のＣＤＲ２領域、および配列番号３８のＣＤＲ３領域が含まれる軽鎖を含む結合性分子
    からなる群より選ばれる、インフルエンザＨＡのＨＡ２サブユニットに結合可能な分離された結合性分子。
  4. 配列番号１のＣＤＲ１領域、配列番号２のＣＤＲ２領域、および配列番号３のＣＤＲ３領域が含まれる重鎖、ならびに配列番号１３のＣＤＲ１領域、配列番号１４のＣＤＲ２領域、および配列番号１５のＣＤＲ３領域が含まれる軽鎖を含む、請求項３に記載の結合性分子。
  5. 前記結合性分子はヒトモノクローナル抗体である、請求項１に記載の結合性分子。
  6. 請求項１に記載の分離された結合性分子が生産されるように適切な宿主細胞において前記結合性分子をコードする分離された核酸分子を発現させることを含む、結合性分子を生産する方法。
  7. 請求項１に記載の結合性分子、および製薬上許容可能な賦形剤を含む、製薬組成物。
  8. 結合性分子はまた、サブタイプＨ２、Ｈ６、および／またはＨ９のインフルエンザウイルスに対する中和活性を有する、請求項２に記載の結合性分子。
  9. 対象体からのサンプルにおいてモノクローナル抗体がインフルエンザウイルスに結合する種類のインフルエンザ感染を判断する方法であって、改善には、方法において請求項５に記載のモノクローナル抗体を役立たせることが含まれる、方法。
  10. インフルエンザウイルスに結合するモノクローナル抗体を対象体に投与する種類のインフルエンザ感染を処置するための薬の調製における請求項５に記載のモノクローナル抗体の使用。
  11. インフルエンザ血球凝集素タンパク質のＨＡ２サブユニットにおいてエピトープを認識し、かつ結合することが可能な分離された結合性分子であって、配列番号１のＣＤＲ１領域、配列番号２のＣＤＲ２領域、および配列番号３のＣＤＲ３領域が含まれる重鎖、ならびに配列番号１３のＣＤＲ１領域、配列番号１４のＣＤＲ２領域、および配列番号１５のＣＤＲ３領域が含まれる軽鎖を含み、重鎖および軽鎖は生殖系列遺伝子ＶＨ１−６９によってコードされるフレームワークを有し、かつＨ５サブタイプのインフルエンザウイルスに対する中和活性を有する、結合性分子。
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