JP4920797B2 - Ｈｃｖｎｓ３プロテアーゼ阻害剤としてのマクロ環式キノキサリン化合物 - Google Patents

Description

本発明は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＮＳ３プロテアーゼの阻害剤として有用であるマクロ環式化合物、かかる化合物の合成、及び、ＨＣＶ感染症を治療するため及び／又はＨＣＶ感染症の可能性若しくは重篤性を低減するためのかかる化合物の使用に関する。

Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症は、かなりの数の感染個体において、肝硬変及び肝細胞癌のような慢性肝疾患をもたらす、健康上の重要な問題である。ＨＣＶ感染症の現在の治療法は、組換えインターフェロン−αを、単独で又はヌクレオシド類似体リバビリンと組合せて用いる免疫療法を包含する。

メタロプロテアーゼ（ＮＳ２−３）、セリンプロテアーゼ（ＮＳ３）、ヘリカーゼ（ＮＳ３）、及びＲＮＡ依存ＲＮＡポリメラーゼ（ＮＳ５Ｂ）を含む、いくつかのウイルスにコードされた酵素は、治療的介入のための、推定される標的である。ＮＳ３プロテアーゼは、ＮＳ３タンパク質のＮ−末端ドメインに局在する。ＮＳ４Ａは、ＮＳ３活性のコファクターを供給する。

ＨＣＶ感染症のための可能性のある治療法は、バルサノ、「Ｍｉｎｉ Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．」、２００８年、第８巻、第４号、ｐ．３０７−３１８、ローン（Ｒｏｎｎ）ら、「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、２００８年、第８巻、ｐ．５３３−５６２、シェルドン（Ｓｈｅｌｄｏｎ）ら、「Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ，Ｄｒｕｇｓ」、２００７年、第１６巻、第８号、ｐ．１１７１−１１８１、及びデフランチェスコ（Ｄｅ Ｆｒａｎｃｅｓｃｏ）ら、「Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ」、２００３年、第５８巻、ｐ．１−１６を含む、様々な参考文献において議論されてきた。

発明の要旨
本発明は、式（Ｉ）のマクロ環式化合物、及びその薬学的に許容される塩に関する。当該化合物及びその塩は、ＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼ阻害剤である。当該化合物及びその塩は、治療用及び研究用に適用することができる。

したがって、本発明の第１の態様は、式（Ｉ）：

の化合物、又はその薬学的に許容される塩と記載される。

本発明はまた、本発明の化合物を含有する医薬組成物、及びかかる医薬組成物を調製する方法も包含する。本発明はさらに、ＨＣＶ感染症の可能性又は重篤性を、治療又は低減する方法を包含する。

本発明の別の実施態様、態様、及び特徴は、続く記載、実施例、及び添付のクレームにおいてさらに記載されるか、又は、明らかとなるであろう。

発明の詳細な記載
本発明は、式（Ｉ）の化合物、及びその薬学的に許容される塩を包含する。当該化合物及びその薬学的に許容される塩は、ＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼの阻害、ＨＣＶ感染症の治療、及び／又は、ＨＣＶ感染症の可能性若しくは重篤性を低減することにおいて有用である。予防的使用は、例えば、輸血、体液の交換、咬傷、事故穿刺、又は外科手術の間の患者血液への暴露（ｅｘｐｏｓｕｒｅ）といった手段により、ＨＣＶに対する過去の暴露が疑われた後の治療を包含する。

医薬組成物の成分として、当該化合物及び塩は、主要な活性治療剤であってよい。適宜、当該化合物を、他のＨＣＶ抗ウイルス剤、抗感染剤、免疫調節剤、抗生物質、又はワクチンを包含するがこれに限定されない、別の治療剤と組合せてもよい。

ＮＳ３阻害剤はまた、抗ウイルス化合物のスクリーニングアッセイの、調製及び実施においても有用である。例えば、かかる化合物を使用して、より強力な抗ウイルス化合物のための優れたスクリーニングツールである、酵素変異体（ｅｎｚｙｍｅ ｍｕｔａｎｔ）を単離し得る。さらに、当該化合物を使用して、他の抗ウイルス剤のＨＣＶプロテアーゼに対する結合部位を、例えば、競合的阻害により確定又は測定してもよい。

実施例２においてさらに記載されるように、式（Ｉ）の化合物を、ＷＯ２００８／０５７２０９の実施例１１０及び１１８の化合物に比較した場合、いくつかの利点がある。ＷＯ２００８／０５７２０９は、クレームされた本発明に対し、先行技術として認められるものではない。

Ｉ．組成物及び方法
種々の実施態様は、以下を包含する：
（ａ） 有効量の式（Ｉ）の化合物と、薬学的に許容される担体とを含んでなる医薬組成物。

（ｂ） ＨＣＶ抗ウイルス剤、免疫調節剤、及び抗感染剤からなる群より選択される、第２の治療剤をさらに含んでなる、（ａ）の医薬組成物。

（ｃ） ＨＣＶ抗ウイルス剤が、ＨＣＶプロテアーゼ阻害剤及びＨＣＶ ＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害剤からなる群より選択される抗ウイルス剤である、（ｂ）の医薬組成物。

（ｄ） （ｉ）式（Ｉ）の化合物と、（ｉｉ）ＨＣＶ抗ウイルス剤、免疫調節剤、及び抗感染剤からなる群より選択される、第２の治療剤とである、薬学的組合せであり；ここで、式（Ｉ）の化合物及び第２の治療剤は、各々、ＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼを阻害するため、又は、ＨＣＶ感染症を治療するため及び／又はＨＣＶ感染症の可能性若しくは重篤性を低減するために、この組合せを有効にする量で使用される。

（ｅ） ＨＣＶ抗ウイルス剤が、ＨＣＶプロテアーゼ阻害剤及びＨＣＶ ＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害剤からなる群より選択される抗ウイルス剤である、（ｄ）の組合せ。

（ｆ） 式（Ｉ）の化合物の有効量を患者に投与することを含んでなる、ＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼを、そのことを必要とする患者において阻害する方法。

（ｇ） 式（Ｉ）の化合物の有効量を患者に投与することを含んでなる、そのことを必要とする患者において、ＨＣＶ感染症を治療する、及び／又は、ＨＣＶ感染症の可能性若しくは重篤性を低減する方法。

（ｈ） 式（Ｉ）の化合物が、ＨＣＶ抗ウイルス剤、免疫調節剤、及び抗感染剤からなる群より選択される、少なくとも１つの第２の治療剤の有効量と組合せて投与される、（ｇ）の方法。

（ｉ） ＨＣＶ抗ウイルス剤が、ＨＣＶプロテアーゼ阻害剤及びＨＣＶ ＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害剤からなる群より選択される抗ウイルス剤である、（ｈ）の方法。

（ｊ） （ａ）、（ｂ）、若しくは（ｃ）の医薬組成物か、又は、（ｄ）若しくは（ｅ）の組合せを、患者に投与することを含んでなる、ＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼを、このことを必要とする患者において阻害する方法。

（ｋ） （ａ）、（ｂ）、若しくは（ｃ）の医薬組成物か、又は、（ｄ）若しくは（ｅ）の組合せを患者に投与することを含んでなる、このことを必要とする患者において、ＨＣＶ感染症を治療し、及び／又は、ＨＣＶ感染症の可能性若しくは重篤性を低減する方法。

（ｌ） 医薬における使用のため、ＨＣＶ感染症の予防又は治療における使用のため、又は、（ｉ）（ａ）ＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼの阻害、又は（ｂ）ＨＣＶ感染症の治療及び／又はＨＣＶ感染症の可能性若しくは重篤性の低減における使用、（ｉｉ）（ａ）ＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼの阻害、又は（ｂ）ＨＣＶ感染症の治療及び／又はＨＣＶ感染症の可能性若しくは重篤性の低減用の医薬としての使用、又は（ｉｉｉ）（ａ）ＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼの阻害、又は（ｂ）ＨＣＶ感染症の治療及び／又はＨＣＶ感染症の可能性若しくは重篤性の低減用の医薬の調製における使用のための、式（Ｉ）の化合物。これらの使用においては、本発明の化合物を、ＨＣＶ抗ウイルス剤、抗感染剤、及び免疫調節剤から選択される、１種以上の第２の治療剤と組合せて使用してもよい。

これらの実施態様の全てにおいて、当該化合物は、薬学的に許容される塩の形態で使用してもよい。

用語「又は」は、本明細書で用いるとき、適宜に組合せてもよい選択肢を示す。したがって、用語「又は」は、列記された個々の選択肢を、個別に、並びに、それらの組合せが互いに排反でない限りそれらの組合せも包含する。

１つの化合物に対する言及はまた、安定な水和物のような、該化合物の安定な複合体も包含する。「安定な」化合物は、調製及び単離が可能であり、かつその構造及び特性が、本明細書に記載の目的（例えば、患者への治療的又は予防的投与）のために該化合物を使用させておくのに充分な期間に渡り、本質的に変化しないで残るか又は残らせるようにすることができる化合物である。

ＩＩ．投与及び組成物
用語「投与」及びその変形（例えば、化合物を「投与すること」）は、化合物又は該化合物のプロドラッグを、治療を必要とする個体に与えることを意味する。本発明の化合物
又はそのプロドラッグが、１種以上の他の活性薬剤（例えば、ＨＣＶ感染症の治療に有用な抗ウイルス剤）と組合せて投与される場合、「投与」及びその変形は、各々、当該化合物又は塩と他の薬剤との、同時の、及び連続した供給を包含するものと理解される。

本発明の化合物は、薬学的に許容される塩の形態で投与してもよい。用語「薬学的に許容される塩」は、活性をもつ親化合物の塩を指し、かつ生物学的に又は別の意味で、望ましくないものではない（例えば、その受容者にとり、毒性でもなければ有害でもない）。適当な塩は、酸付加塩を包含し、これは、例えば、化合物の溶液を、塩酸、硫酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、又は安息香酸のような、薬学的に許容される酸の溶液と混合することにより生成してもよい。酸性の基をもつ化合物は、適当な薬学的に許容される塩と混合されて、例えば、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム又はカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム又はマグネシウム塩）、及び、第四級アンモニウム塩のような適当な有機リガンドを用いて生成される塩を生じてもよい。また、酸（−ＣＯＯＨ）又はアルコール基が存在する場合には、薬学的に許容されるエステルを使用して、化合物の溶解性又は加水分解特性を修飾してもよい。

本明細書で用いる場合、用語「プロドラッグ」は、それが投与される個体の体内で、酵素、化学物質、又は代謝プロセスの作用により、活性薬剤型又は化合物へ変換される不活性な薬剤型、又は化合物を包含することが意図される。

本明細書で用いる場合、用語「組成物」は、特定の成分を含んでなる生成物、並びに、特定の成分の組合せから、結果として直接又は間接的に生じる任意の生成物を包含することが意図される。

「薬学的に許容される」により、医薬組成物の成分が、互いに適合性であり、かつその受容者に対し有害であってはならないことが意味される。

用語「患者」（ｓｕｂｊｅｃｔ）（代替え的に本明細書では「ｐａｔｉｅｎｔ」と称する）は、本明細書で用いるとき、治療、観察、又は実験の対象となってきた、動物、好ましくは哺乳類、最も好ましくはヒトを指す。

用語「有効量」は、治療的又は予防的効果を及ぼすのに充分な量を示す。ＨＣＶに感染した患者では、有効量は、以下の効果の１つ以上を達成するのに充分な量である：ＨＣＶの複製能を低減する、ＨＣＶ負荷を低減する、及びウイルスクリアランスを増大する。ＨＣＶに感染していない患者では、有効量は、以下の効果の１つ以上を達成するのに充分な量である：ＨＣＶ感染症の罹病性の低減、及び感染性のウイルスが慢性疾患に向けて持続感染を確立する能力の低減。

ＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼを阻害すること、及びＨＣＶ感染症を治療すること及び／又はＨＣＶ感染症の可能性又は症状の重篤性を低減するという目的のためには、本発明の化合物は、塩の形態であってもよいが、活性薬剤と該薬剤の作用部位との接触をもたらす手段によって投与してもよい。それらは、医薬品に関する使用のために利用し得る通常の手段により、個別の治療剤として、又は治療剤の組合せとして投与してもよい。それらは単独で投与し得るが、典型的には、選択された投与経路及び標準的薬学のプラクティスに基づき選択された、薬学的担体とともに投与される。

化合物は、例えば、１つ以上の以下の経路；経口的、非経口的（皮下注射、静脈内、筋肉内、胸骨内注射、又は輸液法を包含する）、吸入により（例えば、スプレー型）、又は経直腸により、当該化合物の有効量と、通常の非毒性の薬学的に許容される担体、アジュバント、及びビヒクルとを含有する、医薬組成物の単位剤形の形態で投与してもよい。経口投与に適した液体製剤（例えば、懸濁液、シロップ、エリキシルなど）は、当該技術分野において既知の技術に従って調製してよく、水、グリコール、油、アルコールなどといった任意の通常の媒体を使用してもよい。経口投与に適した固形製剤（例えば、粉末、ピル、カプセル、及び錠剤）は、当該技術分野において既知の技術に従って調製してよく、デンプン、糖、カオリン、潤滑剤、結合剤、崩壊剤などといった、固形の賦形剤を使用してもよい。非経口用組成物は、当該技術分野において既知の技術に従って調製してよく、典型的には無菌水を担体として、また任意で他の成分、例えば溶解補助剤を使用する。注射用の溶液は、当該技術分野において既知の技術に従って調製してよく、ここで、担体は、生理食塩水、グルコース溶液、又は生理食塩水とグルコースとの混合物を含有する溶液を含んでなる。本発明の医薬組成物の調製における使用に適した方法についての、また前記組成物における使用に適した成分についてのさらなる手引きは、「レミントンの薬剤化学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）」、第２０版、（ジェナーロ（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ）編、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、２０００年）に提示されている。

本発明の化合物は、経口的に、１日当たり、哺乳類（例えば、ヒト）の体重当たり、０．００１ないし１０００ｍｇ／ｋｇの用量範囲で、１回量又は分割量で投与してもよい。１回の用量範囲は、経口的に、１回量又は分割量で、１日当たり、体重当たり、０．０１ないし５００ｍｇ／ｋｇである。別の用量範囲は、経口的に、１回量又は分割量で、１日当たり、体重当たり、０．１ないし１００ｍｇ／ｋｇである。経口投与用には、当該組成物を、１．０ないし５００ｍｇの活性成分、特に、治療されるべき患者への投与量の対症調節のため、１、５、１０、１５、２０、２５、５０、７５、１００、１５０、２００、２５０、３００、４００、５００、及び７５０ｍｇの活性成分を含有する、錠剤又はカプセルの形態で提供してもよい。任意の特定の患者のための、具体的な用量レベル及び投薬頻度は異なってもよく、使用する特定の化合物の活性、代謝安定性、及び該化合物の活性の長さ、年齢、体重、全身の健康、性別、食事、投与の様式及び時間、排出速度、薬剤の組合せ、特定の症状の重篤性、及び受容者の受けている療法を包含する、多様な因子に依存するであろう。

ＩＩＩ．併用療法
本明細書に記載したキノキサリンマクロ環式化合物は、１種以上の追加の治療剤を含む、併用療法において使用してもよい。追加の治療剤は、また、ＨＣＶを標的とするもの、様々な疾患誘発因子を標的とするもの、又は免疫系を強化するものを包含する。免疫系を強化する薬剤は、免役系の機能を全般的に増強するもの、及びＨＣＶに対する特異的な免疫応答を発生させるものを包含する。ＨＣＶを標的とする追加の治療剤は、ＮＳ３を標的とする薬剤、ＮＳ５Ａ及びＮＳ５Ｂのような別のＨＣＶ活性を標的とする薬剤、及びＨＣＶ複製に関与する宿主細胞の活性を標的とする薬剤を包含する。

様々なＨＣＶ阻害剤が、種々の刊行物において記載されている。阻害剤として有用な、マクロ環式化合物、ＨＣＶプロテアーゼ阻害剤は、ＷＯ０６／１１９０６１、ＷＯ７／０１５７８５、ＷＯ７／０１６４４１、ＷＯ０７／１４８１３５、ＷＯ０８／０５１４７５、ＷＯ０８／０５１４７７、ＷＯ０８／０５１５１４、ＷＯ０８／０５７２０９に記載されている。追加のＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼ阻害剤は、国際特許出願公開 ＷＯ９８／２２４９６、ＷＯ９８／４６６３０、ＷＯ９９／０７７３３、ＷＯ９９／０７７３４、ＷＯ９９／３８８８８、ＷＯ９９／５０２３０、ＷＯ９９／６４４４２、ＷＯ００／０９５４３、ＷＯ００／５９９２９、ＷＯ０２／４８１１６、ＷＯ０２／４８１７２、英国特許第ＧＢ２ ３３７ ２６２号、及び米国特許第６，３２３，１８０号に開示されている。

組合せて存在してもよい治療剤の追加の例は、リバビリン、レボビリン、ビラミジン、チモシンアルファ−１、インターフェロン−β、インターフェロン−α、ペグ化インターフェロン−α（ペグインターフェロン−α）、インターフェロン−αとリバビリンとの組合せ、ペグインターフェロン−αとリバビリンとの組合せ、インターフェロン−αとレボビリンとの組合せ、及び、ペグインターフェロン−αとレボビリンとの組合せを包含する。インターフェロン−αは、組換えインターフェロン−α２ａ（ホフマン・ラロシュ（Ｈｏｆｆｍａｎ−ＬａＲｏｃｈｅ）、ナットレー、ＮＪから市販されているロフェロン（ＲＯＦＥＲＯＮ）インターフェロン）、ペグ化インターフェロン−α２ａ（ペガシス（ＰＥＧＡＳＹＳ））、インターフェロン−α２ｂ（例えば、シェリング社（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ Ｃｏｒｐ．）、ケニルワース、ＮＪから市販されているイントロン（ＩＮＴＲＯＮ）−Ａインターフェロン）、ペグ化インターフェロン−α２ｂ（ペグイントロン（ＰＥＧＩＮＴＲＯＮ））、組換えコンセンサスインターフェロン（例えば、インターフェロン−アルファコン−１）、及び精製されたインターフェロン−α製品を包含する。アムジェン（Ａｍｇｅｎ）の組換えコンセンサスインターフェロンは、商品名インフェルゲン（ＩＮＦＥＲＧＥＮ）を有する。レボビリンは、リバビリンのＬ−エナンチオマーであり、リバビリンと同様の免疫調節活性を示すことが示されてきた。ビラミジンは、ＷＯ０１／６０３７９に開示されたリバビリンの類似体に相当する。組合せの個々の成分は、治療のコースの間の異なる時間に別々に、又は分割して若しくは一度に組合せた形態で、同時に投与してもよい。

リバビリン、レボビリン、及びビラミジンは、細胞内酵素であるイノシン一リン酸脱水素酵素（ＩＭＰＤＨ）の阻害を介して、グアニンヌクレオチドの細胞内プールを調節することにより、その抗ＨＣＶ効果を及ぼしてもよい。ＩＭＰＤＨは、ドゥノボ（ｄｅ ｎｏｖｏ）のグアニンヌクレオチド生合成における、生合成経路の律速酵素である。リバビリンは、細胞内で容易にリン酸化され、かつその一リン酸誘導体がＩＭＰＤＨの阻害剤である。したがって、ＩＭＰＤＨの阻害は、ＨＣＶ複製の阻害剤発見のための、別の有用な標的を意味する。それ故、本発明の化合物はまた、ＩＭＰＤＨの阻害剤、例えば、国際特許出願公開 ＷＯ９７／４１２１１及びＷＯ０１／００６２２に開示されているＶＸ−４９７；別のＩＭＰＤＨ阻害剤、例えばＷＯ００／２５７８０に開示されたもの；又は、ミコフェノール酸モフェチルと組合せて投与してもよい。アリソン（Ａ．Ｃ．Ａｌｌｉｓｏｎ）及びユーギ（Ｅ．Ｍ．Ｅｕｇｕｉ）、「Ａｇｅｎｔｓ Ａｃｔｉｏｎ」、１９９３年、第４４巻（付録）、ｐ．１６５参照。

ＨＣＶ感染症の治療用には、本発明の化合物はまた、抗ウイルス剤であるアマンタジン（１−アミノアダマンタン）と組合せて投与してもよい。この薬剤についての包括的な記載は、キルシュバウム（Ｊ．Ｋｉｒｓｃｈｂａｕｍ）、「Ａｎａｌ．Ｐｒｏｆｉｌｅｓ Ｄｒｕｇ Ｓｕｂｓ．」、１９８３年、第１２巻、ｐ．１−３６を参照。

ＨＣＶ感染症の治療用には、本発明の化合物はまた、抗ウイルス剤 ポリメラーゼ阻害Ｒ７１２８（ロシュ（Ｒｏｃｈｅ））と組合せて投与してもよい。

本発明の化合物はまた、ＨＣＶ感染症の治療のため、ハリー・オウクル（Ｒ．Ｅ．Ｈａｒｒｙ−Ｏ‘Ｋｕｒｕ）ら、「Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．」、１９９７年、第６２巻、ｐ．１７５４−５９；ウォルフェ（Ｍ．Ｓ．Ｗｏｌｆｅ）ら、「Ｔｅｔ．Ｌｅｔｔ．」、１９９５年、第３６巻、ｐ．７６１１−１４；米国特許第３，４８０，６１３号；及び、国際特許出願公開 ＷＯ０１／９０１２１、ＷＯ０１／９２２８２、ＷＯ０２／３２９２０、ＷＯ０４／００２９９９、ＷＯ０４／００３０００、及びＷＯ０４／００２４２２（これらの各々の内容は、その全てが参考として本明細書に含まれる）に開示された、抗ウイルス剤 ２’−Ｃ−分枝リボヌクレオシドと併用してもよい。かかる２’−Ｃ−分枝リボヌクレオシドは、これに限定されないが、２’−Ｃ−メチル−シチジン、２’−Ｃ−メチルウリジン、２’−Ｃ−メチルアデノシン、２’−Ｃ−メチルグアノシン、及び９−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−２，６−ジアミノプリン、及び、リボースＣ−２’、Ｃ−３’、及びＣ−５’ヒドロキシルの、対応するアミノ酸エステル、及び、５’−ホスファート誘導体の、対応する任意に置換された環式１，３−プロパンジオールエステルを包含する。

本発明の化合物はまた、ＨＣＶ感染症の治療用に、抗ＨＣＶ特性をもつ別のヌクレシド、例えば、国際特許出願公開 ＷＯ０２／５１４２５、ＷＯ０１／７９２４６、ＷＯ０２／３２９２０、ＷＯ０２／４８１６５、及びＷＯ２００５／００３１４７（Ｒ１６５６、（２’Ｒ）−２’−デオキシ−２’−フルオロ−２’−Ｃ−メチルシチジン（第７７頁に化合物３−６として示された）を包含する）；ＷＯ０１／６８６６３；ＷＯ９９／４３６９１；ＷＯ０２／１８４０４、及びＷＯ２００６／０２１３４１、及び米国特許出願公開 ＵＳ２００５／００３８２４０（４’−アジドヌクレオシド、例えばＲ１６２６、４’−アジドシチジンを包含する）；米国特許出願公開 ＵＳ２００２／００１９３６３、ＵＳ２００３／０２３６２１６、ＵＳ２００４／０００６００７、及びＵＳ２００４／００６３６５８；及び国際特許出願公開 ＷＯ０２／１００４１５、ＷＯ０３／０２６５８９、ＷＯ０３／０２６６７５、ＷＯ０３／０９３２９０、ＷＯ０４／０１１４７８、ＷＯ０４／０１３３００、及びＷＯ０４／０２８４８１（これらの各々の内容は、その全てが参考として本明細書に含まれる）に、開示されたものと併用してもよい。

ＨＣＶ感染の治療用には、本発明の化合物はまた、ＨＣＶ ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤である薬剤と組合せて投与してもよい。そのような、併用療法として使用してもよいＨＣＶ ＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害剤は、これに限定されないが、国際特許出願公開 ＷＯ０２／０５７２８７、ＷＯ０２／０５７４２５、ＷＯ０３／０６８２４４、ＷＯ２００４／０００８５８、ＷＯ０４／００３１３８、及びＷＯ２００４／００７５１２；米国特許第６，７７７，３９２号、及び米国特許出願公開 ＵＳ２００４／００６７９０１（これらの各々の内容は、その全てが参考として本明細書に含まれる）に開示されたものを包含する。別の、かかるＨＣＶポリメラーゼ阻害剤は、これに限定されないが、バロピシタビン（ＮＭ−２８３；イデニクス（Ｉｄｅｎｉｘ）、及び２’−Ｆ−２’−ベータ−メチルシチジンを包含する（ＷＯ２００５／００３１４７も参照）。

１つの実施態様においては、本ＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼ阻害剤と併用して使用される、ヌクレオシドＨＣＶ ＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害剤は、以下の化合物から選択される：４−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；４−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；４−メチルアミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；４−ジメチルアミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；４−シクロプロピルアミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；４−アミノ−７−（２−Ｃ−ビニル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；４−アミノ−７−（２−Ｃ−ヒドロキシメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；４−アミノ−７−（２−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；４−アミノ−５−メチル−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；４−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−カルボン酸；４−アミノ−５−ブロモ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；４−アミノ−５−クロロ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；４−アミノ−５−フルオロ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；２，４−ジアミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；２−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；２−アミノ−４−シクロプロピルアミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；２−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン；４−アミノ−７−（２−Ｃ−エチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；４−アミノ−７−（２−Ｃ，２−Ｏ−ジメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン；２−アミノ−５−メチル−７−（２−Ｃ，２−Ｏ−ジメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン；４−アミノ−７−（３−デオキシ−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；４−アミノ−７−（３−デオキシ−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；４−アミノ−２−フルオロ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；４−アミノ−７−（３−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；４−アミノ−７−（３−Ｃ−メチル−β−Ｄ−キシロフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；４−アミノ−７−（２，４−ジ−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；４−アミノ−７−（３−デオキシ−３−フルオロ−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；及び対応する５’−トリホスファート；又はその薬学的に許容される塩。

本発明の化合物はまた、ＨＣＶ感染症の治療用に、ＨＣＶポリメラーゼの非ヌクレオシド阻害剤、例えば、国際特許出願公開 ＷＯ０１／７７０９１；ＷＯ０１／４７８８３、ＷＯ０２／０４４２５；ＷＯ０２／０６２４６；ＷＯ０２／２０４９７；ＷＯ２００５／０１６９２７（特に、ＪＴＫ００３）（これらの各々の内容は、その全てが参考として本明細書に含まれる）に開示されたもの；及びＨＣＶ−７９６（ビロファーマ社（Ｖｉｒｏｐｈａｒｍａ Ｉｎｃ））と組合せてもよい。

１つの実施態様においては、本発明のＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼ阻害剤と組合せて使用される非ヌクレオチドＨＣＶ ＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害剤は、以下の化合物から選択される：１４−シクロヘキシル−６−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸；１４−シクロヘキシル−６−（２−モルホリン−４−イルエチル）−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸；１４−シクロヘキシル−６−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−３−メトキシ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸；１４−シクロヘキシル−３−メトキシ−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸；メチル（｛［（１４−シクロヘキシル−３−メトキシ−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−イル）カルボニル］アミノ｝スルホニル）アセテート；（｛［（１４−シクロヘキシル−３−メトキシ−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−イル）カルボニル］アミノ｝スルホニル）酢酸；１４−シクロヘキシル−Ｎ−［（ジメチルアミノ）スルホニル］−３−メトキシ−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボキサミド；３−クロロ−１４−シクロヘキシル−６−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン１１−カルボン酸；Ｎ’−（１１−カルボキシル−１４−シクロヘキシル−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−インドロ［１，２−ｅ］［１，５］ベンゾオキサゾシン−７−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタン−１，２−ジアミニウムビス（トリフルオロアセテート）；１４−シクロヘキシル−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−インドロ［１，２−ｅ］［１，５］ベンゾオキサゾシン−１１−カルボン酸；１４−シクロヘキシル−６−メチル−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸；１４−シクロヘキシル−３−メトキシ−６−メチル−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸；１４−シクロヘキシル−６−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−３−メトキシ−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸；１４−シクロヘキシル−６−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸；１４−シクロヘキシル−７−オキソ−６−（２−ピペリジン−１−イルエチル）−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸；１４−シクロヘキシル−６−（２−モルホリン−４−イルエチル）−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸；１４−シクロヘキシル−６−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸；１４−シクロヘキシル−６−（１−メチルピペリジン−４−イル）−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸；１４−シクロヘキシル−Ｎ−［（ジメチルアミノ）スルホニル］−７−オキソ−６−（２−ピペリジン−１−イルエチル）−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボキサミド；１４−シクロヘキシル−６−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−Ｎ−［（ジメチルアミノ）スルホニル］−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボキサミド；１４−シクロペンチル−６−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸；１４−シクロヘキシル−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸；６−アリル−１４−シクロヘキシル−３−メトキシ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸；１４−シクロペンチル−６−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸；１４−シクロヘキシル−６−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸；１３−シクロヘキシル−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロフロ［３’，２’：６，７］［１，４］ジアゾシノ［１，８−ａ］インドール−１０−カルボン酸；１５−シクロヘキシル−６−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−７−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−インドロ［２，１−ａ］［２，６］ベンゾジアゾニン−１２−カルボン酸；１５−シクロヘキシル−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−インドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾニン−１２−カルボン酸；１３−シクロヘキシル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−インドロ［１，２−ｄ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１０−カルボン酸；及びその薬学的に許容される塩。

ＩＶ．化合物の評価
本明細書に記載の化合物を、種々の活性、例えば、ＨＣＶ ＮＳ３活性、ＨＣＶレプリコン活性、及びＨＣＶ複製活性、の阻害能について、当該技術分野において周知の技術（例えば、キャロル（Ｃａｒｒｏｌｌ）ら、「Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．」、２００３年、第２７８巻、ｐ．１１９７９−１１９８４参照）を使用して評価してもよい。

かかるアッセイの１つは、以下に、またマオ（Ｍａｏ）ら、「Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．」、２００８年、第３７３巻、ｐ．１−８、及び国際特許出願公開 ＷＯ２００６／１０２０８７に記載されたような、ＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼ時間分解蛍光（ＴＲＦ）アッセイである。ＮＳ３プロテアーゼアッセイは、例えば、５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１５％グリセロール、０．１５％トリトンＸ−１００，１０ｍＭ ＤＴＴ、及び０．１％ ＰＥＧ８０００を含有する、アッセイ緩衝液中の最終体積１００μｌ中で行なってよい。ＮＳ３及びＮＳ４Ａプロテアーゼを、ＤＭＳＯ中の種々の濃度の阻害剤と、３０分間プレインキュベートする。反応は、ＴＲＦペプチド基質（最終濃度１００ｎＭ）を添加することにより開始する。ＮＳ３に媒介される基質の加水分解を、室温で１時間後に、５００ｍＭ ＭＥＳ（ｐＨ５．５）１００μｌでクエンチする。生成物の蛍光を、ＶＩＣＴＯＲ Ｖ２又はＦＵＳＩＯＮ蛍光光度計（パーキン・エルマー・ライフ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｌｉｆｅ）及びアナリティカル・サイエンシズ（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ））のいずれかを使用して、３４０ｎｍでの励起、及び６１５ｎｍでの発光により、４００μｓのディレイで検出する。種々の酵素型の試験濃度を、１０ないし３０のシグナル対バックグラウンド比（Ｓ／Ｂ）を得るべく選択する。ＩＣ_５０値は、標準的な４パラメータフィットをデータに使用して導き出す。Ｋ_ｉ値は、ＩＣ_５０値から、以下の式、

［式中、［Ｓ］は、反応における基質ペプチドの濃度であり、Ｋ_Ｍは、ミカエリス定数である］を使用して導き出す。ガリナリ（Ｐ．Ｇａｌｌｉｎａｒｉ）ら、「ＢＩＯＣＨＥＭ．」、１９９９年、第３８巻、ｐ．５６２０−３２；ガリナリ（Ｐ．Ｇａｌｌｉｎａｒｉ）ら、「Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．」、１９９８年、第７２巻、ｐ．６７５８−６９；タリアニ（Ｍ．Ｔａｌｉａｎｉ）ら、「ＡＮＡＬ．ＢＩＯＣＨＥＭ．」、１９９６年、第２４０巻、ｐ．６０−６７；マオ（Ｍａｏ）ら、「Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、２００８年、第３７３巻、ｐ．１−８参照。

Ｖ．全般的な化合物製造
本発明はまた、式（Ｉ）の化合物を製造するプロセスも包含する。本発明の化合物は、以下の反応スキーム及び実施例、又はそれらの変法に従い、容易に入手可能な出発物質、試薬、及び通常の合成法を使用して、容易に調製することができる。これらの反応においては、それ自体が当業者には公知の変形を利用することも可能である。本発明の化合物を調製するための別の方法は、以下の反応スキーム及び実施例を鑑みれば、当業者には容易に明らかであろう。別に示さない限り、全ての変数は、上記に定義した通りである。以下の反応スキーム及び実施例は、本発明及びその実施を例示するためのものにすぎない。

オレフィンメタセシス触媒は、以下のルテニウムベース種を包含する：ミラー（Ｆ．Ｍｉｌｌｅｒ）ら、「Ｊ．ＡＭ．ＣＨＥＭ．ＳＯＣ．」、１９９６年、第１１８巻、ｐ．９６０６；キングスバリー（Ｇ．Ｋｉｎｇｓｂｕｒｙ）ら、「Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．」、１９９９年、第１２１巻、ｐ．７９１；スコール（Ｈ．Ｓｃｈｏｌｌ）ら、「ＯＲＧ．ＬＥＴＴ．」、１９９９年、第１巻、ｐ．９５３；米国特許出願公開 ＵＳ２００２／０１０７１３８；フルストナー（Ｋ．Ｆｕｒｓｔｎｅｒ）ら、「Ｊ．ＯＲＧ．ＣＨＥＭ．」、１９９９年、第６４巻、ｐ．８２７５。閉環メタセシスにおけるこれらの触媒の有用性は、文献において周知である（例えば、トゥルンカ（Ｔｒｎｋａ）及びグラブス（Ｇｒｕｂｂｓ）、「ＡＣＣ．ＣＨＥＭ．ＲＥＳ．」、２００１年、第３４巻、ｐ．１８。

以下の実施例は、本発明及びその実施を例示するためのものにすぎない。実施例は、本発明の範囲及び趣旨を限定するものと理解されるべきではない。

中間体の合成
中間体Ａ

中間体Ｂ１：３−メチル−Ｎ−（｛［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ペンタ−４−エン−１−イルシクロプロピル］オキシ｝カルボニル）−Ｌ−バリン

工程１：［（１Ｅ）−ヘプタ−１，６−ジエン−１−イルオキシ］（トリメチル）シラン

ＴＨＦ（１．４当量）中のブテニルマグネシウムブロミドの溶液（０．５Ｍ）を、−７８℃で、Ｃｕ（Ｉ）Ｂｒ．ＳＭｅ_２（０．０５当量）及びＨＭＰＡ（２．４当量）で処理した。混合物を１０分間攪拌し、次いでＴＨＦ中の、アクロレイン（１当量）及びＴＭＳＣｌ（２当量）の溶液（１Ｍ）を、１時間にわたり添加して、内部温度が−６８℃未満のままであるようにした。得られた混合物を、−７８℃で２時間攪拌し、次いで過剰のＥｔ_３Ｎで処理し、そしてヘキサンで希釈した。室温に達した後、混合物を少量のＨ_２Ｏで処理し、そしてセライトを通して濾過した。濾液をＨ_２Ｏで１０回、そして次に食塩水で洗浄した。有機層を乾燥し、揮発性物質を除去して、残渣を減圧下で蒸留した（２０ミリバール）。８０ないし８６℃で収集された分画は、標題化合物（５８％）を、無色の液体として含有していた。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ６．１９（ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，１Ｈ）、５．８５−５．７５（ｍ，１Ｈ）、５．０２−４．９２（ｍ，３Ｈ）、２．０８−２．０２（ｍ，２Ｈ）、１．９４−１．８８（ｍ，２Ｈ）、１．４６−１．３８（ｍ，２Ｈ）、０．１８（ｓ，９Ｈ）。

工程２：トランス−２−ペンタ−４−エン−１−イルシクロプロパノール

ヘキサン中の上記の化合物の溶液（０．４５Ｍ）を、トルエン中のＥｔ_２Ｚｎ（１．２当量）の溶液（１５％）で処理し、得られた溶液を氷浴中で冷却した。ジヨードメタン（１．２当量）を滴下添加し、次に溶液を１時間攪拌した後、２０℃に温めた。ピリジン（６当量）を添加し、スラリーを１５分間攪拌し、次いで石油エーテルに注入した。混合物を、セライトを通して、透明な溶液を得るまで繰り返し濾過した。この混合物を、１００ミリバールに濃縮し、残留した溶液（これは、トリメチル｛［（トランス）−２−ペンタ−４−エン−１−イルシクロプロピル］オキシ｝シラン、トルエン、及びピリジンを含有した）を、ＴＨＦでさらに希釈した。混合物を０℃に冷却し、次に、ＴＨＦ中のＴＢＡＦ（１．２当量）の溶液（１Ｍ）を滴下添加して処理した。１０分後、混合物を２０℃に温め、そしてさらに１時間後、Ｈ_２Ｏに注入した。水相をＥｔＯＡｃで抽出し、合わせた有機抽出物を食塩水で洗浄し、次いで乾燥した。揮発性物質を除去して、残渣を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー（溶出液０−６６％ Ｅｔ_２Ｏ／石油エーテル）により精製して、標題化合物（７１％）を無色の液体として得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ５．８５−５．７５（ｍ，１Ｈ）、５．００（ｄｄ，Ｊ＝１７．１，１．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．９４（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，１Ｈ）、３．２０（見かけ上ｄｔ，Ｊ＝６．４，２．５Ｈｚ，１Ｈ）、２．１０−２．０４（ｍ，２Ｈ）、１．５２−１．４４（ｍ，２Ｈ）、１．２９−１．１９（ｍ，１Ｈ）、１．１５−１．０７（ｍ，１Ｈ）、０．９５−０．８７（ｍ，１Ｈ）、０．７１−０．６６（ｍ，１Ｈ）、０．３１（見かけ上ｑ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）。

工程３：メチル３−メチル−Ｎ−（オキソメチレン）−Ｌ−バリナート

飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液及びＣＨ_２Ｃｌ_２の２：１混合物中のメチル３−メチル−Ｌ−バリナートの溶液（０．３９Ｍ）を、氷浴中で冷却し、迅速に攪拌した。混合物をトリホスゲン（０．４５当量）で一度に処理し、得られた混合物を０．５時間攪拌した。反応をＣＨ_２Ｃｌ_２で希釈し、そして層を分離した。水相をＣＨ_２Ｃｌ_２で抽出し、次いで、合わせた有機物質を食塩水で洗浄し、そして乾燥した。溶媒を除去して、標題化合物を透明な油として得て、これを真空下（０．１ミリバール）で１２時間保持し、そして次の工程に直接使用した。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ３．７９（ｓ，３Ｈ）、３．７５（ｓ，１Ｈ）、１．００（ｓ，９Ｈ）。

工程４：メチル３−メチル−Ｎ−（｛［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ペンタ−４−エン−１−イルシクロプロピル］オキシ｝カルボニル）−Ｌ−バリナート及びメチル３−メチル−Ｎ−（｛［（１Ｓ，２Ｓ）−２−ペンタ−４−エン−１−イルシクロプロピル］オキシ｝カルボニル）−Ｌ−バリナート

トルエン中のトランス−２−ペンタ−４−エン−１−イルシクロプロパノールの溶液（０．４５Ｍ）を、メチル３−メチル−Ｎ−（オキソメチレン）−Ｌ−バリナート（１．１当量）で、そして次にＤＭＡＰ（１当量）で処理した。得られた混合物を、還流下で１２時間加熱し、次に２０℃に冷却した。Ｈ_２Ｏ及びＥｔＯＡｃを添加し、有機層を分離し、１Ｎ ＨＣｌ、食塩水で洗浄し、そして乾燥した。揮発性物質を除去して、残渣を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー（溶出液０−３０％ Ｅｔ_２Ｏ／石油エーテル）により２回精製した。最初の分画は、メチル３−メチル−Ｎ−（｛［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ペンタ−４−エン−１−イルシクロプロピル］オキシ｝カルボニル）−Ｌ−バリナート（３８％）を、油として含有した。
ＭＳ（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ２９８（Ｍ＋Ｈ）^＋

後の分画は、メチル３−メチル−Ｎ−（｛［（１Ｓ，２Ｓ）−２−ペンタ−４−エン−１−イルシクロプロピル］オキシ｝カルボニル）−Ｌ−バリナート（２８％）を、油として含有した。
ＭＳ（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ２９８（Ｍ＋Ｈ）^＋

工程５：３−メチル−Ｎ−（｛［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ペンタ−４−エン−１−イルシクロプロピル］オキシ｝カルボニル）−Ｌ−バリン

ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏの２：１混合物中のメチル３−メチル−Ｎ−（｛［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ペンタ−４−エン−１−イルシクロプロピル］オキシ｝カルボニル）−Ｌ−バリナートの溶液（０．１Ｍ）を、ＬｉＯＨ．Ｈ_２Ｏ（４当量）で処理し、次いで６０℃で４時間加熱した。混合物を冷却し、半分の体積に濃縮し、次にＥｔＯＡｃで希釈し、そしてＨＣｌ水溶液（１Ｎ）で酸性化した。有機層を分離し、食塩水で洗浄し、そして乾燥した。揮発性物質を除去して、標題化合物（９８％）を油として得た。
ＭＳ（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ２８４（Ｍ＋Ｈ）^＋

中間体Ｃ
中間体Ｃ１：メチル（４Ｒ）−４−［（３−クロロ−７−メトキシキノキサリン−２−イル）オキシ］−Ｌ−プロリナート塩酸塩

工程１：６−メトキシキノキサリン−２，３−ジオール

シュウ酸ジエチル（８当量）中の４−メトキシベンゼン−１，２−ジアミン二塩酸塩の懸濁液を、Ｅｔ_３Ｎ（２当量）で処理し、次に１５０℃で２時間加熱した。混合物を冷却し、濾過し、そして次に収集された固体をＨ_２Ｏ及びＥｔＯＨで洗浄した。残渣を乾燥させて、標題化合物（６９％）を得た。
ＭＳ（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ１９３（Ｍ＋Ｈ）^＋

工程２：３−クロロ−６−メトキシキノキサリン−２−オール

ＤＭＦ中の６−メトキシキノキサリン−２，３−ジオールの溶液（１．５３Ｍ）を、ＳＯＣｌ_２（１当量）で処理し、そして１１０℃で加熱した。１．５時間後、反応混合物を冷却し、そしてＨＣｌ水溶液（１Ｎ）に注入した。得られた沈殿を濾過し、Ｈ_２Ｏ及びＥｔ_２Ｏで洗浄した。乾燥した固体は、主として標題化合物を、６−メトキシキノキサリン−２，３−ジオールと２，３−ジクロロ−６−メトキシキノキサリンとの混合物として含有した。この物質を、次の工程に直接使用した。
ＭＳ（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ２１１（Ｍ＋Ｈ）^＋

工程３：１−ｔｅｒｔ−ブチル２−メチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−［（３−クロロ−７−メトキシキノキサリン−２−イル）オキシ］ピロリジン−１，２−ジカルボキシラート

ＮＭＰ中の３−クロロ−６−メトキシキノキサリン−２−オールの溶液（０．３５Ｍ）を、Ｃｓ_２ＣＯ_３（１．５当量）及び１−ｔｅｒｔ−ブチル２−メチル（２Ｓ，４Ｓ）−４−｛［（４−ブロモフェニル）スルホニル］オキシ｝ピロリジン−１，２−ジカルボキシラート（１．１当量）で処理した。得られた混合物を、５０℃で１８時間攪拌し、次に追加分（０．１当量）の１−ｔｅｒｔ−ブチル２−メチル（２Ｓ，４Ｓ）−４−｛［（４−ブロモフェニル）スルホニル］オキシ｝ピロリジン−１，２−ジカルボキシラートを添加した。２時間攪拌した後、混合物を冷却し、そしてＨ_２Ｏ及びＥｔＯＡｃで希釈した。有機相を、ＨＣｌ水溶液（１Ｎ）、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液、及び食塩水で洗浄した。乾燥した有機相を濃縮して残渣とし、これをフラッシュクロマトグラフィー（０−６０％ ＥｔＯＡｃ／石油エーテル）により精製して、標題化合物（２工程で３５％）を固体として得た。
ＭＳ（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ４３８（Ｍ＋Ｈ）^＋

工程４：メチル（４Ｒ）−４−［（３−クロロ−７−メトキシキノキサリン−２−イル）オキシ］−Ｌ−プロリナート塩酸塩

ＣＨ_２Ｃｌ_２中の１−ｔｅｒｔ−ブチル２−メチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−［（３−クロロ−７−メトキシキノキサリン−２−イル）オキシ］ピロリジン−１，２−ジカルボキシラートの溶液（０．６２Ｍ）を、ジオキサン（５当量）中のＨＣｌ溶液（４Ｍ）で処理した。混合物を２０℃で２時間攪拌し、次いでジオキサン（２当量）中のＨＣｌ溶液（４Ｍ）で処理した。５時間後、反応の完了を判定し、そして混合物を減圧下で濃縮した。残渣をＥｔ_２Ｏで粉砕して、標題化合物（９５％）を固体として得た。
ＭＳ（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ３３８（Ｍ＋Ｈ）^＋

実施例１：カリウム｛［（１Ｒ，２Ｓ）−１−（｛［（１ａＲ，５Ｓ，８Ｓ，１０Ｒ，２２ａＲ）−５−ｔｅｒｔ−ブチル−１４−メトキシ−３，６−ジオキソ−１，１ａ，３，４，５，６，９，１０，１８，１９，２０，２１，２２，２２ａ−テトラデカヒドロ−８Ｈ−７，１０−メタノシクロプロパ［１８，１９］［１，１０，３，６］ジオキサジアザシクロノナデシノ［１１，１２−ｂ］キノキサリン−８−イル］カルボニル｝アミノ）−２−ビニルシクロプロピル］カルボニル｝（シクロプロピルスルホニル）アザニド

工程１：メチル３−メチル−Ｎ−（｛［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ペンタ−４−エン−１−イルシクロプロピル］オキシ｝カルボニル）−Ｌ−バリル−（４Ｒ）−４−［（３−クロロ−７−メトキシキノキサリン−２−イル）オキシ］−Ｌ−プロリナート

ＤＭＦ中のメチル（４Ｒ）−４−［（３−クロロ−７−メトキシキノキサリン−２−イル）オキシ］−Ｌ−プロリナート塩酸塩の溶液（０．２Ｍ）を、３−メチル−Ｎ−（｛［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ペンタ−４−エン−１−イルシクロプロピル］オキシ｝カルボニル）−Ｌ−バリン（１．１当量）、ＤＩＥＡ（５当量）、及びＨＡＴＵ（１．２当量）で処理した。得られた混合物を２０℃で５時間攪拌し、次いでＥｔＯＡｃで希釈した。有機層を分離し、ＨＣｌ水溶液（１Ｎ）、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液、及び食塩水で洗浄した。乾燥した有機相を、減圧下で濃縮して、残渣を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー（溶出液１０−３０％ ＥｔＯＡｃ／石油エーテル）により精製して、標題化合物（９６％）を油として得た。
ＭＳ（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ６０４（Ｍ＋Ｈ）^＋

工程２：メチル３−メチル−Ｎ−（｛［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ペンタ−４−エン−１−イルシクロプロピル］オキシ｝カルボニル）−Ｌ−バリル−（４Ｒ）−４−［（７−メトキシ−３−ビニルキノキサリン−２−イル）オキシ］−Ｌ−プロリナート

ＥｔＯＨ中のメチル３−メチル−Ｎ−（｛［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ペンタ−４−エン−１−イルシクロプロピル］オキシ｝カルボニル）−Ｌ−バリル−（４Ｒ）−４−［（３−クロロ−７−メトキシキノキサリン−２−イル）オキシ］−Ｌ−プロリナートの溶液（０．１Ｍ）を、カリウムトリフルオロ（ビニル）ボラート（１．５当量）及びトリエチルアミン（１．５当量）で処理した。得られた混合物を、脱気し、次いでＰｄＣｌ_２（ｄｐｐｆ）−ＣＨ_２Ｃｌ_２付加物（０．１当量）を添加した。混合物を還流下で１時間加熱し、次に室温に冷却し、そしてＨ_２Ｏ及びＥｔＯＡｃで希釈した。有機相を分離し、Ｈ_２Ｏ及び食塩水で洗浄し、そして乾燥した。揮発性物質を除去し、残渣を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー（２０−３０％ ＥｔＯＡｃ／石油エーテル）により精製して、標題化合物を黄色の泡沫として得て、これを次の工程で直接使用した。
ＭＳ（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ５９５（Ｍ＋Ｈ）^＋

工程３：メチル（１ａＲ，５Ｓ，８Ｓ，１０Ｒ，１８Ｅ，２２ａＲ）−５−ｔｅｒｔ−ブチル−１４−メトキシ−３，６−ジオキソ−１，１ａ，３，４，５，６，９，１０，２０，２１，２２，２２ａ−ドデカヒドロ−８Ｈ−７，１０−メタノシクロプロパ［１８，１９］［１，１０，３，６］ジオキサジアザシクロノナデシノ［１１，１２−ｂ］キノキサリン−８−カルボキシラート

ＤＣＥ中のメチル３−メチル−Ｎ−（｛［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ペンタ−４−エン−１−イルシクロプロピル］オキシ｝カルボニル）−Ｌ−バリル−（４Ｒ）−４−［（７−メトキシ−３−ビニルキノキサリン−２−イル）オキシ］−Ｌ−プロリナートの溶液（０．０２Ｍ）を、８０℃に加熱し、次にチャン（Ｚｈａｎ）１触媒（０．１５当量）で処理した。得られた混合物を、８０℃で１時間攪拌し、次いで室温に冷却し、そして減圧下で濃縮した。残渣を、フラッシュクロマトグラフィー（２０−５０％ ＥｔＯＡｃ／石油エーテル）により精製して、標題化合物（２工程で２５％）を泡沫として得た。
ＭＳ（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ５６７（Ｍ＋Ｈ）^＋

工程４：メチル（１ａＲ，５Ｓ，８Ｓ，１０Ｒ，２２ａＲ）−５−ｔｅｒｔ−ブチル−１４−メトキシ−３，６−ジオキソ−１，１ａ，３，４，５，６，９，１０，１８，１９，２０，２１，２２，２２ａ−テトラデカヒドロ−８Ｈ−７，１０−メタノシクロプロパ［１８，１９］［１，１０，３，６］ジオキサジアザシクロノナデシノ［１１，１２−ｂ］キノキサリン−８−カルボキシラート

ＭｅＯＨ／ジオキサン（１：１の比）中のメチル（１ａＲ，５Ｓ，８Ｓ，１０Ｒ，１８Ｅ，２２ａＲ）−５−ｔｅｒｔ−ブチル−１４−メトキシ−３，６−ジオキソ−１，１ａ，３，４，５，６，９，１０，２０，２１，２２，２２ａ−ドデカヒドロ−８Ｈ−７，１０−メタノシクロプロパ［１８，１９］［１，１０，３，６］ジオキサジアザシクロノナデシノ［１１，１２−ｂ］キノキサリン−８−カルボキシラートの溶液（０．０５Ｍ）を、Ｐｄ／Ｃ（８重量％）で処理した。得られた混合物を、水素の雰囲気下で４時間攪拌した。触媒を濾去し、濾液を減圧下で濃縮して、標題化合物（９８％）を固体として得た。
ＭＳ（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ５６９（Ｍ＋Ｈ）^＋

工程５：（１ａＲ，５Ｓ，８Ｓ，１０Ｒ，２２ａＲ）−５−ｔｅｒｔ−ブチル−１４−メトキシ−３，６−ジオキソ−１，１ａ，３，４，５，６，９，１０，１８，１９，２０，２１，２２，２２ａ−テトラデカヒドロ−８Ｈ−７，１０−メタノシクロプロパ［１８，１９］［１，１０，３，６］ジオキサジアザシクロノナデシノ［１１，１２−ｂ］キノキサリン−８−カルボン酸

Ｈ_２Ｏ／ＴＨＦの１：１混合物中のメチル（１ａＲ，５Ｓ，８Ｓ，１０Ｒ，２２ａＲ）−５−ｔｅｒｔ−ブチル−１４−メトキシ−３，６−ジオキソ−１，１ａ，３，４，５，６，９，１０，１８，１９，２０，２１，２２，２２ａ−テトラデカヒドロ−８Ｈ−７，１０−メタノシクロプロパ［１８，１９］［１，１０，３，６］ジオキサジアザシクロノナデシノ［１１，１２−ｂ］キノキサリン−８−カルボキシラートの溶液（０．１Ｍ）を、ＬｉＯＨ．Ｈ_２Ｏ（３当量）で処理した。得られた混合物を、２０℃で１８時間攪拌し、ＨＣｌ水溶液（０．２Ｍ）で酸性化し、そしてＥｔＯＡｃで希釈した。有機相を分離し、ＨＣｌ水溶液（０．２Ｍ）及び食塩水で洗浄し、次いで乾燥した。揮発性物質を除去して、標題化合物（９８％）を、固体として得た。
ＭＳ（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ５５５（Ｍ＋Ｈ）^＋

工程６：（１ａＲ，５Ｓ，８Ｓ，１０Ｒ，２２ａＲ）−５−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−（（１Ｒ、２Ｓ）−１−｛［（シクロプロピルスルホニル）アミノ］カルボニル｝−２−ビニルシクロプロピル）−１４−メトキシ−３，６−ジオキソ−１，１ａ，３，４，５，６，９，１０，１８，１９，２０，２１，２２，２２ａ−テトラデカヒドロ−８Ｈ−７，１０−メタノシクロプロパ［１８，１９］［１，１０，３，６］ジオキサジアザシクロノナデシノ［１１，１２−ｂ］キノキサリン−８−カルボキサミド

ＣＨ_２Ｃｌ_２中の（１ａＲ，５Ｓ，８Ｓ，１０Ｒ，２２ａＲ）−５−ｔｅｒｔ−ブチル−１４−メトキシ−３，６−ジオキソ−１，１ａ，３，４，５，６，９，１０，１８，１９，２０，２１，２２，２２ａ−テトラデカヒドロ−８Ｈ−７，１０−メタノシクロプロパ［１８，１９］［１，１０，３，６］ジオキサジアザシクロノナデシノ［１１，１２−ｂ］キノキサリン−８−カルボン酸の溶液（０．１Ｍ）を、（１Ｒ，２Ｓ）−１−｛［（シクロプロピルスルホニル）アミノ］カルボニル｝−２−ビニルシクロプロパンアミニウムクロリド（１．３当量）、ＤＩＥＡ（３当量）、ＤＭＡＰ（１．５当量）、及びＴＢＴＵ（１．４５当量）で処理した。得られた混合物を、２０℃で１８時間攪拌し、そして次にＥｔＯＡｃで希釈した。溶液をＨＣｌ水溶液（０．２Ｍ）、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液、及び食塩水で洗浄した。有機相を乾燥し、濃縮して残渣を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー（溶出液２．５％ ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２）により精製して、標題化合物（８９％）を固体として得た。
^１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ １７２．３２、１７０．６３、１６９．０４、１５９．８６、１５６．９５、１５４．７４、１４８．１０、１４０．４１、１３３．５５（２シグナル）、１２８．９４、１１８．２１、１１７．５８、１０５．８９、７４．８８、５９．７５、５８．７１、５５．６８、５４．１３、５４．０１、４０．１３、３４．４９、３４．０４、３３．７６、３２．６８、３０．７１、３０．４３、２８．５５、２７．６９、２７．２８、２６．３８、２１．９８、１８．４９、１０．６７、５．６９、５．４６；ＭＳ（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ７６７（Ｍ＋Ｈ）^＋

工程７：カリウム｛［（１Ｒ，２Ｓ）−１−（｛［（１ａＲ，５Ｓ，８Ｓ，１０Ｒ，２２ａＲ）−５−ｔｅｒｔ−ブチル−１４−メトキシ−３，６−ジオキソ−１，１ａ，３，４，５，６，９，１０，１８，１９，２０，２１，２２，２２ａ−テトラデカヒドロ−８Ｈ−７，１０−メタノシクロプロパ［１８，１９］［１，１０，３，６］ジオキサジアザシクロノナデシノ［１１，１２−ｂ］キノキサリン−８−イル］カルボニル｝アミノ）−２−ビニルシクロプロピル］カルボニル｝（シクロプロピルスルホニル）アザニド

上記の物質を、ＥｔＯＨ中に取り、得られた溶液（０．０２５Ｍ）を、０℃に冷却した。ＥｔＯＨ中のｔｅｒｔ−ＢｕＯＫ（１．５当量）の溶液（０．０２Ｍ）を添加して、沈殿の生成を導いた。混合物を２０℃で１８時間攪拌し、次に固体を濾過により収集した。この物質を、ＥｔＯＨで洗浄し、乾燥させて、標題化合物（９３％）を、白色の結晶性固体として得た。
ＭＳ（ＥＳ^＋）ｍ／ｚ７６７（Ｍ＋Ｈ）^＋

実施例２：種々の化合物の比較
実施例１の化合物を、ＷＯ２００８／０５７２０９の実施例１１０及び１１８の化合物と比較した。結果を、以下の表１及び２に示す。表及び結果の議論に例示したように、式（Ｉ）の化合物は、ＷＯ２００８／０５７２０９実施例１１８化合物及びＷＯ２００８／０５７２０９実施例１１０化合物の双方に比較して、いくつかの有利な特性をもつ。

ＷＯ２００８／０５７２０９実施例１１０に比較した式（Ｉ）の化合物
ＷＯ２００８／０５７２０９実施例１１０化合物に対する式（Ｉ）の化合物の有利な特性は、以下の通りである：
１）物理的性質（式（Ｉ）の化合物については、塩の不均化なし）；
２）カリウム塩の投与後の、ラットにおける薬物動態プロファイル；及び
３）肝臓（標的臓器）暴露。

特性における差異は、ＷＯ２００８／０５７２０９実施例１１０化合物に比較して、式（Ｉ）の化合物の製剤及び投与に関し、特に有利である。式（Ｉ）の化合物に塩の不均化がないことで、実施例１の化合物のＫ＋塩型 １．８ｍｇ／ｍｌを、水中に溶解することが可能となる。ＷＯ２００８／０５７２０９実施例１１０化合物のＫ＋塩型は、改善された水溶性をもつが（９．７ｍｇ／ｍＬ）、そのように溶解された該化合物は、不均化して、低い水溶性（＜０．００９ｍｇ／ｍｌ）をもつ結晶性の両性イオン型を生じる。実施例１の化合物について、この挙動がないことは、その薬剤投与用の製剤に予想外の利点を与え、かつ結果として、表１に報告されたような改善した薬物動態特性（ラット及びイヌについての、血漿ＡＵＣ及び肝臓暴露）をもたらす。前臨床化学種（ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｐｅｃｉｅｓ）における、高い血漿及び肝臓暴露は、患者の治療において使用するための、安全かつ有効な用量の選択に有利である。

ＷＯ２００８／０５７２０９実施例１１８に比較した式（Ｉ）の化合物
ＷＯ２００８／０５７２０９実施例１１８に比較して観察された、式（Ｉ）の化合物の利点は、種々の変異型酵素に対するその抵抗性のプロファイルである。類縁クラス由来の抗ウイルス剤（例えば、ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤）を用いた臨床研究からの、またＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼ阻害剤（例えば、ＶＸ−９５０、テラプレビル）を用いた研究からのデータに一致して、本化合物による治療に応答して、ウイルス抵抗性が発生してもよいことが予想される。実施例１の化合物は、ＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼ阻害剤に対する抵抗性を与えることが知られている種々の変異型酵素に対し、改善された酵素親和性（Ｋｉ）を示した。表２は、様々な変異型酵素に対する活性を要約したものである。したがって、化合物１の利点は、患者に投与された場合に、抵抗性ウイルスの発生に対するバリアを増大することであってよい。それはまた、化合物１がこの抵抗性ウイルスを阻害し得ることから、抵抗性の発生が原因で他の療法に失敗した患者を治療するという、潜在的な利点も提供する。

ＷＯ２００８／０５７２０９実施例１１０化合物に対する式（Ｉ）の化合物の、さらに期待される有利な特性は、以下を包含する：
１）低いインビボでの共有結合；及び
２）高い血漿及び肝臓暴露。

式（Ｉ）の化合物は、非常に良好な共有結合性のインビボ特性と、薬物動態特性とを有することが判明した。実施例１の化合物、及びＷＯ２００８／０５７２０９実施例１１８化合物について、観察されたインビボでの共有結合及び薬物動態特性に基づけば、式（Ｉ）の化合物は、著しく良好なインビボの共有結合特性及び薬物動態特性を有する。

タンパク質に共有結合する化合物、又は、後にタンパク質に共有結合することになる代謝産物を生成する化合物は、患者において、薬物−タンパク質コンジュゲートに対する抗体応答により媒介される免疫毒性、及び他の特異体質性毒性といった、副作用を生じる可能性がある（「Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．」、２００４年、第１７巻、ｐ．３−１６参照）。

実施例１の化合物は、ラットに対する２０ｍｇ／ｋｇの１回量の経口投与の後、血漿タンパク質に対しては、検出不能な結合を示した（表１参照）。類似の条件下で、ＷＯ２００８／０５７２０９実施例１１８化合物は、ラット肝タンパク質に対し検出可能な結合を示しており（表１参照）、それ故、ヒト患者への投与には、式（Ｉ）の化合物よりも不利化合物であると考えてよい。

表３は、実施例１１８に取入れられた、（Ｒ，Ｒ）−トランス−２−アルキルシクロペンタノール基を含有する、ＷＯ２００８／０５７２０９からの関連化合物について観察された、いくつかの追加のインビボ共有結合データを提供する。

潜在的な薬物候補は、望ましくない毒性を誘発しないことを効果的に証明するために、前臨床化学種では、高い血漿及び肝臓暴露をもつことが有利である。また、動物において高い肝臓及び血漿暴露をもつ化合物は、そうではないものに比べて、同一の挙動を人において示すことがより確実だろう。かかる化合物については、ヒトにおける所望の有効な暴露を、薬物製造のコスト及び容易さの双方に有利な、低い用量で達成し得るが、また副作用の恐れを低下させる可能性もある。多数の前臨床化学種における標的臓器暴露は、高い標的臓器暴露が、当該化合物について患者において達成し得ることの根拠を提供しており、かつラット及びイヌの双方における高い肝臓暴露が、前臨床毒性についての確信ある評価を可能にしている。高い肝臓暴露は、ＨＣＶについては、これが当該薬剤の標的臓器であることから、特に有利である。

実施例１の化合物は、非常に良好なラット血漿及び肝臓暴露を示した。観察されたラット肝臓の暴露は、ＷＯ２００８／０５７２０９化合物１１８及び化合物１１０についてのものよりも、高いレベルにあった（表１参照）。これらの結果と、ラット（２５ｍｐｋ）及びイヌ（５ｍｐｋ）の双方への経口投与による、ＷＯ２００８／０５７２０９からのいくつかの異なる化合物の試験とに基づき、式（Ｉ）の化合物はまた、ＷＯ２００８／０５７２０９化合物１１８及び化合物１１０よりも高いイヌ肝臓暴露を有することも期待される。
方法

ＮＳ ３／４Ａ 阻害活性 ^１ （Ｋｉ）：ＮＳ ３／４Ａ 阻害活性は、セクションＩＶ．化合物の評価（上記）、及びマオ（Ｍａｏ）ら、「Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．」、２００８年、第３７３巻、ｐ．１−８に記載のように測定した。

レプリコン活性 ^２ ＥＣ _５０ ：レプリコン活性は、キャロル（Ｃａｒｒｏｌｌ）ら、「Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．」、２００３年、第２７８巻、ｐ．１１９７９−１１９８４及びオルセン（Ｏｌｓｅｎ）ら、「Ａｎｔｉ Ｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ」、２００４年、第４８巻、ｐ．３９４４−３９５３に記載の方法を使用して測定した。

ラット血漿ＡＵＣ＠２５ｍｐｋ経口（ｐｅｒ ｏｓ） ^３ ：試験化合物を、静脈内投与用（例えば、２０％：６０％：２０％ ＤＭＳＯ：ＰＥＧ４００：水）又は経口投与用（例えば、１０％ ポリソルベート８０（ＰＯＬＹＳＯＲＢＡＴＥ）：９０％ 水、又は１００％ ＰＥＧ４００）の、適当な投薬ビヒクル中に溶解した。動物には、非げっ歯類用の交差試験デザインを使用して投与した（ｎ＝３）。血漿試料は、２分ないし２４時間の間のタイムポイントにおいて収集し、化合物レベルは、ＲＰ−ＨＰＬＣにより測定した。肝臓試料は、ラットでは死後に、そしてイヌでは麻酔後（生検の０．５時間前）に収集した。肝臓試料は、秤量し、ホモジナイズし、当業者に既知の技術を使用して希釈し、そして化合物レベルをＲＰ−ＨＰＬＣにより測定した。

薬物動態パラメーターは、非区画分析（例えば、ＷＡＴＳＯＮ（登録商標）、ＷＩＮＮＯＬＩＮ（登録商標）を使用）に基づき計算した。定量の限界未満（ＢＬＱ）であった投与前濃度に、０値を割り当てた。経口用のＡＵＣ推定用には、末端相における最初のＢＬＱ値に、最低定量限界の１／２に等しい値を与え、末端相での後続の値には、０値を割り当てた。標準的な薬物動態パラメーターＣＬｐ、Ｖｄｓｓ、半減期（ＩＶについてのみ）、％Ｆ、Ｃ_ｍａｘ、Ｔ_ｍａｘ、ＡＵＣ_０−最後、ＡＵＣ_０−無限を計算した。ＡＵＣ値は、上昇濃度については線形台形法を、下降濃度については対数台形法を使用して計算した。

インビボの共有結合 ^４ ：試験化合物を、適宜放射標識し（３Ｈ）、２５ないし７５ｍＣｉ／ラット（純度＞９８．５％）の放射能を含有する２０ｍｇ／ｋｇの１回量を、未標識化合物と、濃縮された放射性トレーサーのストック溶液とを組合せることにより調製した。この混合物を、経口投与に適した投薬ビヒクル（上記参照）中に溶解し、次いで経口的にラットに投与した（２時間、６時間、２４時間のタイムポイントにつき、ｎ＝３）。血漿及び肝臓を収集し、急速冷凍／−８０℃で貯蔵の後に分析した。

血漿試料のカウンティング：アリコート２００μＬを、２０ｍＬのシンチレーションバイアルに入れる。ソルバブル（ＳＯＬＶＡＢＬＥ）（登録商標）５００μＬを添加して、５５℃で振盪しながら１時間インキュベートする。取り出し、冷ましてから、シンチレーションカクテル１５ｍＬを添加し、そしてカウントする。血漿試料（２００μＬアリコート）を、次に、肝臓タンパク質について以下に記載したように加工した。

組織ホモジナイゼーション：秤量した肝臓試料を、２体積の１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）で希釈し、そして氷上でホモジナイズした。

肝臓ホモジェネートのカウンティング：アリコートを、２０ｍＬのシンチレーションバイアルに入れ、ＳＯＬＶＡＢＬＥ（登録商標）１ｍＬで希釈し、そして５５℃で振盪しながら１時間インキュベートした。インキュベーターから取り出して冷却した後、シンチレーションカクテル１５ｍＬ及び３０％ Ｈ_２Ｏ_２を添加し、そして放射能をカウントした。

タンパク質沈殿法：アリコート５００μＬを取り、１：８ ホモジェネート：アセトニトリルを添加し（化合物が、アセトニトリル中では溶解性が低いことが疑われる場合、別の溶媒を選択してもよい）、ボルテックス処理し、そして遠心分離する（３５００ｒｃｆで２０分間）。上清を捨てる。

タンパク質沈殿の再懸濁：ペレットが、８０％ＭｅＯＨ：２０％水中で崩壊するまで、超音波処理（最小強度、＜５秒間）及びボルテックス処理する。

タンパク質ペレットの洗浄：２ないし５ｍＬの、８０：２０ ＭｅＯＨ：水。必要であれば、上清１．０ｍＬを除去し、シンチレーションカクテル１５ｍＬを添加し、そしてカウントする。上清の放射能が＜２００ＤＰＭとなるまで、又は、ＤＰＭが連続的な洗浄において２００より多く減少するのが止まるまで、タンパク質ペレットの洗浄を継続する。

最終ペレットの溶解：１Ｎ ＮａＯＨ又はＳＯＬＶＡＢＬＥ（登録商標） １ｍＬ、５０℃で一晩、又は完全に溶解するまでインキュベートする。

最終ペレットのカウンティング：溶解したペレット１ｍＬ、シンチレーションカクテル１５ｍＬ（ＵＬＴＲＡ ＧＯＬＤ（登録商標）以外の別のシンチレーションカクテルを使用する場合、１Ｎ ＨＣｌを使用してペレットを中和することが必要な場合がある）、そしてカウントする。

最終ペレットのタンパク質濃度：ＢＣＡ又はＢＩＯ−ＲＡＤキット、ＢＳＡを標準として使用。

ブランク試料のカウンティング：シンチレーションカクテル１５ｍＬ、デュプリケートで。

投薬溶液のカウンティング：既知の体積の投薬溶液を、トリプリケートにカウントする。

データ分析：投薬溶液の放射能カウント（ＤＰＭ）を平均し、投薬溶液の比活性を、μＣｉ／ｍｏｌで計算する。ブランク試料の放射能カウントを平均する。肝臓及び血漿の各ペレットから得たカウントから、平均ブランク試料のカウントを引く。肝臓及び血漿の各ペレットについて、単位体積（Ｌ）当たりの放射能の量（μＣｉ）を計算する。得られた上記の値（μＣｉ／Ｌ）を、比活性（μＣｉ／ｍｏｌ）で割ることにより、血漿及び肝臓の各ペレットにおける放射能の濃度を計算する。タンパク質に共有結合した放射能の量を、ｐｍｏｌ／ｍｇタンパク質で計算する。

ブランク試料のカウンティング：シンチレーションカクテル１５ｍＬ、デュプリケートで。

投薬溶液のカウンティング：既知の体積の投薬溶液を、トリプリケートにカウントする。

物理的特性 ^５ ：結晶性の試験化合物（カリウム塩、約５ｍｇ）を、ガラスバイアル中に秤量し、水又は水性緩衝液（１００μＬ）を添加した。得られたスラリーを、室温で２４時間攪拌した。遠心分離後、上清を逆相ＨＰＬＣにより分析し、検量線との比較により、平衡溶解度を測定した。固形物質は、一部をＸＲＰＤプレート上に移し、乾燥させ、次にＸ線粉末回折により分析した。ＸＲＰＤパターンを、結晶性Ｋ＋塩のポジティブコントロール、試験化合物の、結晶性両性イオン（又は酸性）型、及びアモルファス型と比較した。塩型についてのさらなる測定は、固形物質の第二の部分から得られ、これは、ＤＭＳＯ−ｄ_６中での溶解後に、４００ＭＨｚ ＮＭＲ（ブルカー（Ｂｒｕｋｅｒ））により分析した。１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを、上記記載のポジティブコントロールに比較した。

本出願全体を通して記載された参考文献は、いずれも、クレームされた本発明に対する先行技術として認められない。

他の実施態様は、以下のクレームの範囲内である。いくつかの実施態様を示しかつ記載してきたが、本発明の精神及び範囲から離れることなく、様々な変更が行なわれてもよい。

Claims (8)

1. 式（Ｉ）：
   

   

   の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
2. 請求項１に記載の化合物の有効量と、薬学的に許容される担体とを含んでなる医薬組成物。
3. ＨＣＶプロテアーゼ阻害剤及びＨＣＶ ＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害剤からなる群より選択される、第２の治療剤をさらに含んでなる、請求項２に記載の医薬組成物。
4. 医薬における使用のための、請求項１に記載の化合物。
5. ＨＣＶ感染症の予防又は治療における使用のための、請求項１に記載の化合物。
6. ＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼ活性を、そのことを必要とする患者において阻害するための、医薬の調製における、請求項１ないし３のいずれか１項に記載の化合物又は組成物の使用。
7. ＨＣＶによる感染症を、そのことを必要とする患者において予防又は治療するための、医薬の調製における、請求項１ないし３のいずれか１項に記載の化合物又は組成物の使用。
8. ＨＣＶ感染症を予防又は治療するための医薬組成物であって、請求項１ないし３のいずれか１項に記載の化合物の有効量と、薬学的に許容される担体を含んでなる、該医薬組成物。