JP3025346B2 - ヘパリンカルシウムの製造方法 - Google Patents
ヘパリンカルシウムの製造方法Info
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- JP3025346B2 JP3025346B2 JP3187309A JP18730991A JP3025346B2 JP 3025346 B2 JP3025346 B2 JP 3025346B2 JP 3187309 A JP3187309 A JP 3187309A JP 18730991 A JP18730991 A JP 18730991A JP 3025346 B2 JP3025346 B2 JP 3025346B2
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0075—Heparin; Heparan sulfate; Derivatives thereof, e.g. heparosan; Purification or extraction methods thereof
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ヘパリンのカルシウム
塩またはそのフラクションまたはフラグメントの製造方
法に関する。
塩またはそのフラクションまたはフラグメントの製造方
法に関する。
【０００２】
【従来の技術】カルシウム塩とヘパリンナトリウムとの
静的透析は大変遅いので工業的には適用できない方法で
ある。血液透析型装置の使用はアメリカ特許第４,４０
９,１０３号に記載されている。陽イオン交換樹脂の使
用は、急速に自己加水分解をするため極端に不安定なヘ
パリン酸の形でのヘパリンの使用を必要とする点で不利
である（アメリカ特許第４,１６８,３７７号）。カルシ
ウム塩溶液を使用する透析濾過はアメリカ特許第４,４
０９,１０３号に記載されている。それは限外濾過膜を
使用している（非イオン交換膜）。塩は圧力勾配の作用
下膜を通過する水流により運ばれる。ヘパリンは、濾過
作用を通して維持することができ、その大きさは膜の孔
より大きい。この方法の不利は、充分速く行なうために
は、使用する膜が高い水透析率を有し、それ故（孔径
が）大きくなり膜を通ってヘパリンが失われてしまうこ
とである。
静的透析は大変遅いので工業的には適用できない方法で
ある。血液透析型装置の使用はアメリカ特許第４,４０
９,１０３号に記載されている。陽イオン交換樹脂の使
用は、急速に自己加水分解をするため極端に不安定なヘ
パリン酸の形でのヘパリンの使用を必要とする点で不利
である（アメリカ特許第４,１６８,３７７号）。カルシ
ウム塩溶液を使用する透析濾過はアメリカ特許第４,４
０９,１０３号に記載されている。それは限外濾過膜を
使用している（非イオン交換膜）。塩は圧力勾配の作用
下膜を通過する水流により運ばれる。ヘパリンは、濾過
作用を通して維持することができ、その大きさは膜の孔
より大きい。この方法の不利は、充分速く行なうために
は、使用する膜が高い水透析率を有し、それ故（孔径
が）大きくなり膜を通ってヘパリンが失われてしまうこ
とである。
【０００３】様々なヘパリンおよびコンドロイチン硫酸
塩の溶解性についての研究で、これらの生成物がパーチ
メント膜を使用して電気透析された（イー・ジョープ
ス、バイオケミカル・ジャーナル（Biochem.J.)、第２
９巻、第１８１７−１８３０頁（１９３５年））。検定
の方法は十分に正確ではないが、著者は電気透析前後の
活性損失を検出しなかった。それにもかかわらず、陽極
部で失なわれた初期活性を１％発見した。さらに、イー
・ジョープスにより記載された方法は酸の不安定形での
ヘパリンの使用を必要としている。日本特許公開第０１
−１４９８０１号（ケミカル・アブストラクツ（Chemic
alAbstracts）、第１１２巻、２２６０７ｍ）は、修飾
セルロースエーテル、特にカルボキシメチルセルロース
塩の製造方法を記載し、それによるとナトリウム塩がイ
オン交換膜または限外濾過膜を通って電気透析に付さ
れ、酸形を得、得られた酸は所望の塩を得るために、陽
イオン水酸化物または陽イオンの塩で処置することが記
載されている。本方法は酸形の使用を必要とし、ヘパリ
ンナトリウムに適用する場合は、酸形でのヘパリンの低
下による損失を含む。
塩の溶解性についての研究で、これらの生成物がパーチ
メント膜を使用して電気透析された（イー・ジョープ
ス、バイオケミカル・ジャーナル（Biochem.J.)、第２
９巻、第１８１７−１８３０頁（１９３５年））。検定
の方法は十分に正確ではないが、著者は電気透析前後の
活性損失を検出しなかった。それにもかかわらず、陽極
部で失なわれた初期活性を１％発見した。さらに、イー
・ジョープスにより記載された方法は酸の不安定形での
ヘパリンの使用を必要としている。日本特許公開第０１
−１４９８０１号（ケミカル・アブストラクツ（Chemic
alAbstracts）、第１１２巻、２２６０７ｍ）は、修飾
セルロースエーテル、特にカルボキシメチルセルロース
塩の製造方法を記載し、それによるとナトリウム塩がイ
オン交換膜または限外濾過膜を通って電気透析に付さ
れ、酸形を得、得られた酸は所望の塩を得るために、陽
イオン水酸化物または陽イオンの塩で処置することが記
載されている。本方法は酸形の使用を必要とし、ヘパリ
ンナトリウムに適用する場合は、酸形でのヘパリンの低
下による損失を含む。
【０００４】ＥＤＴＡのようなキレート剤で複合体を形
成し、その後得られた複合体を電気透析（パテント・ア
ブストラクツ・オブ・ジャパン（PatentAbstracts of J
apan）、第１３巻、第２８６頁（ｃ−６１３）、第３６
３４頁、１９８９年６月２９日、日本特許第１０８０４
０８号）に付すことにより様々な金属イオン、特にナト
リウム、カリウムまたは鉄（第二鉄）イオンを溶液から
分離することができることは知られている。電気透析
は、低分子量の様々な無機塩、特に亜硫酸カルシウムか
らの硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウムまたは硫酸マグ
ネシウムを含む溶液の連続製造に利用されてきた（アメ
リカ特許第４,００９,０８８号）。
成し、その後得られた複合体を電気透析（パテント・ア
ブストラクツ・オブ・ジャパン（PatentAbstracts of J
apan）、第１３巻、第２８６頁（ｃ−６１３）、第３６
３４頁、１９８９年６月２９日、日本特許第１０８０４
０８号）に付すことにより様々な金属イオン、特にナト
リウム、カリウムまたは鉄（第二鉄）イオンを溶液から
分離することができることは知られている。電気透析
は、低分子量の様々な無機塩、特に亜硫酸カルシウムか
らの硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウムまたは硫酸マグ
ネシウムを含む溶液の連続製造に利用されてきた（アメ
リカ特許第４,００９,０８８号）。
【０００５】
【発明の構成】通常の電気透析装置中に陰イオン透過性
膜（ＡＰＭ）および陽イオン透過性膜（ＣＰＭ）を交互
配列したもので、これらの膜は２つの隣接する膜間の液
体の循環が可能なように配置されたものを使用し、ヘパ
リンのナトリウム塩またはヘパリンフラグメントまたは
フラクションの溶液およびイオン交換に使用するカルシ
ウム塩の溶液を循環させることにより、相当するカルシ
ウム塩が酸形でのヘパリンの使用を必要としないで直接
得られることを見い出した。反応は実質的に定量的であ
り、初期のヘパリン（またはそのフラクションまたはフ
ラグメント）が以下に定義されるような塩の溶液および
電極リンス溶液中で０．１％未満しか検出されないこと
も見い出した。それ故、本発明は、ヘパリンのナトリウ
ム塩またはそのフラクションまたはフラグメントの溶液
および水溶性カルシウム塩の溶液を、液体循環が可能な
ように交互に配列した陰イオン透過性膜および陽イオン
透過性膜を含む電気透析装置を通って循環させることを
特徴とする、ヘパリンのカルシウム塩またはそのフラク
ションまたはフラグメントの製造方法に関する。出発物
として、分画化または解重合により得られたヘパリンナ
トリウムまたはそのフラクションの１つ（特に、ＣＹ２
１６の名で知られており、アメリカ特許第４,６８６,２
８８号に記載されているナドロパリン）のナトリウム形
を使用するのが好ましい。後者の場合、本発明の方法
は、ナドロパリンの分子量が約２,０００−約８,０００
ダルトンで、そのピークが約４,５００ダルトンであ
り、ヘパリンよりも実質的に小さいため、特に有利であ
る。限外濾過または透析方法中のＮａ−Ｃａ交換での損
失は大きい。
膜（ＡＰＭ）および陽イオン透過性膜（ＣＰＭ）を交互
配列したもので、これらの膜は２つの隣接する膜間の液
体の循環が可能なように配置されたものを使用し、ヘパ
リンのナトリウム塩またはヘパリンフラグメントまたは
フラクションの溶液およびイオン交換に使用するカルシ
ウム塩の溶液を循環させることにより、相当するカルシ
ウム塩が酸形でのヘパリンの使用を必要としないで直接
得られることを見い出した。反応は実質的に定量的であ
り、初期のヘパリン（またはそのフラクションまたはフ
ラグメント）が以下に定義されるような塩の溶液および
電極リンス溶液中で０．１％未満しか検出されないこと
も見い出した。それ故、本発明は、ヘパリンのナトリウ
ム塩またはそのフラクションまたはフラグメントの溶液
および水溶性カルシウム塩の溶液を、液体循環が可能な
ように交互に配列した陰イオン透過性膜および陽イオン
透過性膜を含む電気透析装置を通って循環させることを
特徴とする、ヘパリンのカルシウム塩またはそのフラク
ションまたはフラグメントの製造方法に関する。出発物
として、分画化または解重合により得られたヘパリンナ
トリウムまたはそのフラクションの１つ（特に、ＣＹ２
１６の名で知られており、アメリカ特許第４,６８６,２
８８号に記載されているナドロパリン）のナトリウム形
を使用するのが好ましい。後者の場合、本発明の方法
は、ナドロパリンの分子量が約２,０００−約８,０００
ダルトンで、そのピークが約４,５００ダルトンであ
り、ヘパリンよりも実質的に小さいため、特に有利であ
る。限外濾過または透析方法中のＮａ−Ｃａ交換での損
失は大きい。
【０００６】例えばナドロパリンナトリウムのようなヘ
パリンナトリウムまたはヘパリンフラグメントは出発物
として使用することができ、精製するかまたは最終精製
に付さないで、所望により少量のエタノール、硫酸ナト
リウムまたは塩化ナトリウムを含むことができる。比較
試験では、出発物中少量存在する上記物質は本発明の方
法により得られるヘパリンカルシウムまたはカルシウム
塩形のヘパリンのフラグメントの品質（純度）に影響を
与えるものではないことが判明した。全てのこれらの出
発物は以下、「ヘパリン類」と称し、それに対して最終
生成物を「ヘパリンカルシウム」と称する。カルシウム
の水溶性塩は塩化物を使用するのが好ましい。本発明の
方法は特に通常の電気透析装置中に設けた陰イオン透過
性膜（ＡＰＭ）および陽イオン透過性膜（ＣＰＭ）の使
用を含む。これらのイオン交換膜は２つの隣接する膜間
に液体を循環することが可能なように交互に配置され
る。本方法は膜の配列を通ってヘパリンまたはそのフラ
クションまたはフラグメントの１種のナトリウム塩を含
む溶液およびナトリウムと交換することができるカルシ
ウム陽イオンを含む水溶性塩（ＣａＣｌ2）を循環させ
ることからなる。
パリンナトリウムまたはヘパリンフラグメントは出発物
として使用することができ、精製するかまたは最終精製
に付さないで、所望により少量のエタノール、硫酸ナト
リウムまたは塩化ナトリウムを含むことができる。比較
試験では、出発物中少量存在する上記物質は本発明の方
法により得られるヘパリンカルシウムまたはカルシウム
塩形のヘパリンのフラグメントの品質（純度）に影響を
与えるものではないことが判明した。全てのこれらの出
発物は以下、「ヘパリン類」と称し、それに対して最終
生成物を「ヘパリンカルシウム」と称する。カルシウム
の水溶性塩は塩化物を使用するのが好ましい。本発明の
方法は特に通常の電気透析装置中に設けた陰イオン透過
性膜（ＡＰＭ）および陽イオン透過性膜（ＣＰＭ）の使
用を含む。これらのイオン交換膜は２つの隣接する膜間
に液体を循環することが可能なように交互に配置され
る。本方法は膜の配列を通ってヘパリンまたはそのフラ
クションまたはフラグメントの１種のナトリウム塩を含
む溶液およびナトリウムと交換することができるカルシ
ウム陽イオンを含む水溶性塩（ＣａＣｌ2）を循環させ
ることからなる。
【０００７】膜は、分子量が約５００ダルトン未満を有
する分子だけが通過できるような透過性を有するのが好
ましい。例示として、アサヒグラス（ASAHI GLASS）
（商標）ＡＭＶ／ＣＳＶ膜またはネオ−セプタ（Neo-Se
pta）（商標）ＣＭ１およびＡＭ１膜（トカヤマ・ソー
ダ（Tokayama Soda）製造）を挙げることができるが、
これらに限定されるものではない。
する分子だけが通過できるような透過性を有するのが好
ましい。例示として、アサヒグラス（ASAHI GLASS）
（商標）ＡＭＶ／ＣＳＶ膜またはネオ−セプタ（Neo-Se
pta）（商標）ＣＭ１およびＡＭ１膜（トカヤマ・ソー
ダ（Tokayama Soda）製造）を挙げることができるが、
これらに限定されるものではない。
【０００８】本発明による製造を、添付の図面を用いて
説明すると次の通りである。これらの図面で、図１は、
本発明による方法での電気透析装置の機能を図式的に示
したものである。図２は、ヘパリン酸カルシウム塩（ヘ
パリンカルシウム）を製造する場合の電気透析装置のイ
オンの遊走を図式的に示したものである。電気透析装置
Ｅ（図１）に、ヘパリンナトリウム（Ｈn-,ｎＮａ+）お
よび例えば塩化カルシウムのような水溶性カルシウム塩
を含む溶液１（以下、「物質溶液」と称する）を導入し
かつ循環させる。溶液２（以下、「ブライン」と称す
る）を循環させるが、これは、当初は伝導率を確保する
ために塩（例えばＣａＣｌ2）を少量のみ含み、続いて
塩（例えばＮａＣｌおよびＣａＣｌ2）を濃厚にし、カ
ルシウムの水溶性塩（例えばＣａＣｌ2）を物質溶液１
に添加して、電気透析中に置きかえられる。電気透析装
置Ｅはセルの組合わせを含み、それぞれはＡＰＭおよび
ＣＰＭからなる。使用する膜Ｍの数は３０−６０であ
り、４０−５０が好ましく、それは約５００ダルトン未
満の分子を通過させる。電極は例えばＨＣｌ（０.５
％）またはＫＣｌ（１％）溶液で常法によりリンスす
る。物質溶液１は２つのコンパートメントの一方で循環
し、それに対してブライン２は他方のコンパートメント
で循環する（図２参照）。
説明すると次の通りである。これらの図面で、図１は、
本発明による方法での電気透析装置の機能を図式的に示
したものである。図２は、ヘパリン酸カルシウム塩（ヘ
パリンカルシウム）を製造する場合の電気透析装置のイ
オンの遊走を図式的に示したものである。電気透析装置
Ｅ（図１）に、ヘパリンナトリウム（Ｈn-,ｎＮａ+）お
よび例えば塩化カルシウムのような水溶性カルシウム塩
を含む溶液１（以下、「物質溶液」と称する）を導入し
かつ循環させる。溶液２（以下、「ブライン」と称す
る）を循環させるが、これは、当初は伝導率を確保する
ために塩（例えばＣａＣｌ2）を少量のみ含み、続いて
塩（例えばＮａＣｌおよびＣａＣｌ2）を濃厚にし、カ
ルシウムの水溶性塩（例えばＣａＣｌ2）を物質溶液１
に添加して、電気透析中に置きかえられる。電気透析装
置Ｅはセルの組合わせを含み、それぞれはＡＰＭおよび
ＣＰＭからなる。使用する膜Ｍの数は３０−６０であ
り、４０−５０が好ましく、それは約５００ダルトン未
満の分子を通過させる。電極は例えばＨＣｌ（０.５
％）またはＫＣｌ（１％）溶液で常法によりリンスす
る。物質溶液１は２つのコンパートメントの一方で循環
し、それに対してブライン２は他方のコンパートメント
で循環する（図２参照）。
【０００９】膜に直角である連続電気電場の作用の下で
（Ｖ源により連続供給される）、−ＮａイオンはＣＭＰ
類を通り陰極に向かい、その中でＡＰＭと遭遇するため
隣接したブライン区画にとじ込められる。−Ｎａ+で交
換されるべきイオン、この場合Ｃａ2+は、ＣＰＭ類を通
り陰極に向かい、それらの遊走がＡＰＭとの遭遇で遮断
されるためブライン区画にとじ込められる。−ナトリウ
ムに代えるために加えたカルシウム塩の陰イオンはＡＭ
Ｐ類を通り陰極に向かい、その中でＣＰＭ類に遭遇する
ためにブライン区画にとじ込められる。−ヘパリンイオ
ン（Ｈn-）はＡＭＰ類に向かって遊走するが、それらの
分子量が高いのでそれらを通ることができない。電気透
析膜は実際には約５００未満の分子量の化学種しか透過
しない。それ故、ヘパリンイオンは物質溶液１に残る。
過剰のナトリウム陽イオンおよびカルシウム陽イオンが
ナトリウムに代わるために使用される陰イオンの塩形、
好ましくは塩化物の形で、ブラインに移送されるので、
所望の陽イオン、この場合はカルシウムを、ナトリウム
に完全に置き代わるために物質溶液に加える。その後は
生成物回路を排液することにより物質溶液を回収し、ヘ
パリンまたはそのフラクションの１つのカルシウム塩を
沈殿させるためにこの溶液にエタノール（または別のヘ
パリン沈殿剤）を加えることで充分である。
（Ｖ源により連続供給される）、−ＮａイオンはＣＭＰ
類を通り陰極に向かい、その中でＡＰＭと遭遇するため
隣接したブライン区画にとじ込められる。−Ｎａ+で交
換されるべきイオン、この場合Ｃａ2+は、ＣＰＭ類を通
り陰極に向かい、それらの遊走がＡＰＭとの遭遇で遮断
されるためブライン区画にとじ込められる。−ナトリウ
ムに代えるために加えたカルシウム塩の陰イオンはＡＭ
Ｐ類を通り陰極に向かい、その中でＣＰＭ類に遭遇する
ためにブライン区画にとじ込められる。−ヘパリンイオ
ン（Ｈn-）はＡＭＰ類に向かって遊走するが、それらの
分子量が高いのでそれらを通ることができない。電気透
析膜は実際には約５００未満の分子量の化学種しか透過
しない。それ故、ヘパリンイオンは物質溶液１に残る。
過剰のナトリウム陽イオンおよびカルシウム陽イオンが
ナトリウムに代わるために使用される陰イオンの塩形、
好ましくは塩化物の形で、ブラインに移送されるので、
所望の陽イオン、この場合はカルシウムを、ナトリウム
に完全に置き代わるために物質溶液に加える。その後は
生成物回路を排液することにより物質溶液を回収し、ヘ
パリンまたはそのフラクションの１つのカルシウム塩を
沈殿させるためにこの溶液にエタノール（または別のヘ
パリン沈殿剤）を加えることで充分である。
【００１０】電極に適用される電位は、２−３８ボルト
／ｃｍ、好ましくは５−３０ボルト／ｃｍの範囲である
ことができる。本方法は０−８０℃、好ましくは室温で
行われる。本発明の方法は非常に簡単な方法で、大変速
く、０.１％未満の含量のナトリウムしか含まない非常
に純粋なカルシウム塩を生成し、生物学的活性上で大変
良い収率をもたらす。さらに、脱塩方法である簡単な電
気透析に比較して、本発明の方法は陰イオン巨大分子上
の陽イオンの直接交換をもたらす。さらに、巨大陰イオ
ンは電気透析膜を汚すことが知られている。驚くべきこ
とに、２つの試験間で水で簡単にリンスした後、開始時
に予測されるような膜の性能の減少は、観察されなかっ
た。
／ｃｍ、好ましくは５−３０ボルト／ｃｍの範囲である
ことができる。本方法は０−８０℃、好ましくは室温で
行われる。本発明の方法は非常に簡単な方法で、大変速
く、０.１％未満の含量のナトリウムしか含まない非常
に純粋なカルシウム塩を生成し、生物学的活性上で大変
良い収率をもたらす。さらに、脱塩方法である簡単な電
気透析に比較して、本発明の方法は陰イオン巨大分子上
の陽イオンの直接交換をもたらす。さらに、巨大陰イオ
ンは電気透析膜を汚すことが知られている。驚くべきこ
とに、２つの試験間で水で簡単にリンスした後、開始時
に予測されるような膜の性能の減少は、観察されなかっ
た。
【００１１】既知方法に比較して、本発明の方法は特に −限外濾過または透析に較べて、本発明の方法は、スピ
ードおよび無損失の結合が得られ、２種の上記記載方法
では調和がむつかしかった −連続沈殿に較べて、処理の時間、操作の数および沈殿
剤の消費はかなり減少される 点で著しく改良される。以下、本発明の実施例を示す。
これらの実施例に使用される原料は、次のとおりであ
る。 −ＳＲＴＩ電気透析装置モデルＰ１ −アサヒグラスＡＭＶ／ＣＳＶ膜（６９ｃｍ2に２セ
ル）（セルは１種のＡＰＭおよび１種のＣＰＭからな
る）。電気透析装置は総数４１個の膜から構成される。
操作条件は次のとおりである。 −電極に適用される電位：実施例１では２５ボルト、実
施例２では３０ボルト −温度：室温
ードおよび無損失の結合が得られ、２種の上記記載方法
では調和がむつかしかった −連続沈殿に較べて、処理の時間、操作の数および沈殿
剤の消費はかなり減少される 点で著しく改良される。以下、本発明の実施例を示す。
これらの実施例に使用される原料は、次のとおりであ
る。 −ＳＲＴＩ電気透析装置モデルＰ１ −アサヒグラスＡＭＶ／ＣＳＶ膜（６９ｃｍ2に２セ
ル）（セルは１種のＡＰＭおよび１種のＣＰＭからな
る）。電気透析装置は総数４１個の膜から構成される。
操作条件は次のとおりである。 −電極に適用される電位：実施例１では２５ボルト、実
施例２では３０ボルト −温度：室温
【００１２】実施例１：ヘパリンカルシウムの製造 不純物存在下での製造例Ａ ヘパリンナトリウム１１５ｇ（またはヨーロッパ薬局方
（European Pharmacopoeia）、１９９０版、第３３３
頁、ヘパリンナトリウムモノグラフ−検定：Ｖ.２.２.
６.による２０.６×１０6ユニット）を水９００ｇに溶
解した。エタノール１５ｇ、Ｎａ2ＳＯ4１.２ｇおよび
ＮａＣｌ１７０ｍｇを加えた。この溶液を電気透析に付
し、イオンを徐々に次の初期組成：ＣａＣｌ2：５ｇ／
Ｈ2Ｏ：１ｋｇのブラインに移した。装置の電極を連続
再循環する１％ＫＣｌ１.２リットルでリンスした。Ｃ
ａＣｌ2の３８.５％溶液１００ｇを生成物に０、３０お
よび９０分に加えた。塩が豊富になったブラインを３０
および９０分に０.５％ＣａＣｌ2１ｋｇで置き換えた。
１５０分後、生成溶液を排液により回収した。ヘパリン
をその後エタノールで沈殿させ、粉砕し、アルコールで
洗浄し、その後真空下オーブンで乾燥させた。次の特性
をもつ粉末生成物１２０ｇが回収された。 −生物学的活性：２０.６×１０6ユニット（収率１００
％） −ナトリウム含量：０.０３％ −カルシウム含量：９.２％ 出発ヘパリンの僅か０.６％がトルイジンブルー検定に
よりブラインおよび電極リンス溶液で検出した（Ｊ.Ｐ.
ダクロス、ヘパリン（HEPARIN）、マッソン著、第２８
５頁）。このことはヘパリンがほとんど膜不透過性であ
ることを示す。
（European Pharmacopoeia）、１９９０版、第３３３
頁、ヘパリンナトリウムモノグラフ−検定：Ｖ.２.２.
６.による２０.６×１０6ユニット）を水９００ｇに溶
解した。エタノール１５ｇ、Ｎａ2ＳＯ4１.２ｇおよび
ＮａＣｌ１７０ｍｇを加えた。この溶液を電気透析に付
し、イオンを徐々に次の初期組成：ＣａＣｌ2：５ｇ／
Ｈ2Ｏ：１ｋｇのブラインに移した。装置の電極を連続
再循環する１％ＫＣｌ１.２リットルでリンスした。Ｃ
ａＣｌ2の３８.５％溶液１００ｇを生成物に０、３０お
よび９０分に加えた。塩が豊富になったブラインを３０
および９０分に０.５％ＣａＣｌ2１ｋｇで置き換えた。
１５０分後、生成溶液を排液により回収した。ヘパリン
をその後エタノールで沈殿させ、粉砕し、アルコールで
洗浄し、その後真空下オーブンで乾燥させた。次の特性
をもつ粉末生成物１２０ｇが回収された。 −生物学的活性：２０.６×１０6ユニット（収率１００
％） −ナトリウム含量：０.０３％ −カルシウム含量：９.２％ 出発ヘパリンの僅か０.６％がトルイジンブルー検定に
よりブラインおよび電極リンス溶液で検出した（Ｊ.Ｐ.
ダクロス、ヘパリン（HEPARIN）、マッソン著、第２８
５頁）。このことはヘパリンがほとんど膜不透過性であ
ることを示す。
【００１３】純ヘパリンナトリウムを使用した製造例Ｂ ヘパリンナトリウム１１５ｇ（またはヨーロピッパ薬局
方（EuropeanPharmacopoeia）、１９９０版、第３３３
頁、ヘパリンナトリウムモノグラフ−検定：Ｖ.２.２.
６.による２０.６×１０6ユニット）を水９００ｇに溶
解した。この溶液を電気透析に付し、イオンを徐々に次
の初期組成：ＣａＣｌ2：５ｇ／Ｈ2Ｏ：１ｋｇのブライ
ンに移した。装置の電極を連続再循環する１％ＫＣｌ
１.２リットルでリンスした。ＣａＣｌ2の３８.５％溶
液１００ｇを生成物に０、３０および９０分に加えた。
塩が豊富になったブラインを３０および９０分に０.５
％ＣａＣｌ2１ｋｇで置き換えた。１５０分後、生成溶
液を排液により回収した。ヘパリンをエタノールで沈殿
させ、粉砕し、アルコールで洗浄し、その後真空下オー
ブンで乾燥させた。次の特性をもつ粉末生成物１２０ｇ
を回収した。 −生物学的活性：２０.６×１０6ユニット（収率１００
％） −ナトリウム含量：０.０３％ −カルシウム含量：９.２％
方（EuropeanPharmacopoeia）、１９９０版、第３３３
頁、ヘパリンナトリウムモノグラフ−検定：Ｖ.２.２.
６.による２０.６×１０6ユニット）を水９００ｇに溶
解した。この溶液を電気透析に付し、イオンを徐々に次
の初期組成：ＣａＣｌ2：５ｇ／Ｈ2Ｏ：１ｋｇのブライ
ンに移した。装置の電極を連続再循環する１％ＫＣｌ
１.２リットルでリンスした。ＣａＣｌ2の３８.５％溶
液１００ｇを生成物に０、３０および９０分に加えた。
塩が豊富になったブラインを３０および９０分に０.５
％ＣａＣｌ2１ｋｇで置き換えた。１５０分後、生成溶
液を排液により回収した。ヘパリンをエタノールで沈殿
させ、粉砕し、アルコールで洗浄し、その後真空下オー
ブンで乾燥させた。次の特性をもつ粉末生成物１２０ｇ
を回収した。 −生物学的活性：２０.６×１０6ユニット（収率１００
％） −ナトリウム含量：０.０３％ −カルシウム含量：９.２％
【００１４】実施例２：ナドロパリンのカルシウム塩の
製造 アメリカ特許第４,６８６,２８８号に記載されたように
得られたナドロパリン２２０ｇ（またはパトロジー・エ
・ビオロジー（Path.Biol.）、第３６巻、第３３５−３
３７頁（１９８８年）による６２.０×１０6アンチ−Ｘ
ａユニット）を水１８６０ｇに溶解した。この溶液を２
等分して、各々を電気透析に付し（装置は１回あたり１
リットルを処理することができる）、イオンを徐々に次
の初期組成：ＣａＣｌ2：５ｇ／Ｈ2Ｏ：１ｋｇのブライ
ンに移した。装置の電極を連続再循環する０.５％ＨＣ
ｌ １.２リットルでリンスした。ＣａＣｌ2の３８.３％
溶液１００ｇを１回目の仕込みに０、２６および４７分
に加え、２回目の仕込みの電気透析で０、３７および７
７分に加えた。ブラインはＣａＣｌ2を溶液にそれぞれ
添加する際０．５％ＣａＣｌ2１リットルで置き換え
た。溶液のｐＨはＣａ（ＯＨ）2の添加により６および
７に維持した。第１電気透析で８３分後および第２電気
透析で１２７分後、生成物を生成物回路の排液および蒸
留水でリンスすることにより回収した。ナドロパリンカ
ルシウムをエタノールで沈殿させ、粉砕し、真空下オー
ブンで乾燥した。次の特性をもつ粉末生成物２２０ｇが
回収された。 −生物学的活性：６２.７×１０6アンチ−Ｘａユニット
(収率およそ１００％) −ナトリウム含量：０.０８％ −カルシウム含量：９.８％ 膜を通り損失するナドロパリンの量は０.０１％未満で
あることがエタノール沈殿法により計測された。
製造 アメリカ特許第４,６８６,２８８号に記載されたように
得られたナドロパリン２２０ｇ（またはパトロジー・エ
・ビオロジー（Path.Biol.）、第３６巻、第３３５−３
３７頁（１９８８年）による６２.０×１０6アンチ−Ｘ
ａユニット）を水１８６０ｇに溶解した。この溶液を２
等分して、各々を電気透析に付し（装置は１回あたり１
リットルを処理することができる）、イオンを徐々に次
の初期組成：ＣａＣｌ2：５ｇ／Ｈ2Ｏ：１ｋｇのブライ
ンに移した。装置の電極を連続再循環する０.５％ＨＣ
ｌ １.２リットルでリンスした。ＣａＣｌ2の３８.３％
溶液１００ｇを１回目の仕込みに０、２６および４７分
に加え、２回目の仕込みの電気透析で０、３７および７
７分に加えた。ブラインはＣａＣｌ2を溶液にそれぞれ
添加する際０．５％ＣａＣｌ2１リットルで置き換え
た。溶液のｐＨはＣａ（ＯＨ）2の添加により６および
７に維持した。第１電気透析で８３分後および第２電気
透析で１２７分後、生成物を生成物回路の排液および蒸
留水でリンスすることにより回収した。ナドロパリンカ
ルシウムをエタノールで沈殿させ、粉砕し、真空下オー
ブンで乾燥した。次の特性をもつ粉末生成物２２０ｇが
回収された。 −生物学的活性：６２.７×１０6アンチ−Ｘａユニット
(収率およそ１００％) −ナトリウム含量：０.０８％ −カルシウム含量：９.８％ 膜を通り損失するナドロパリンの量は０.０１％未満で
あることがエタノール沈殿法により計測された。
【図１】 本発明の方法による電気透析を示す工程図で
ある。
ある。
【図２】 カルシウムヘパリン塩（ヘパリンカルシウ
ム）を製造する場合の電気透析におけるイオン遊走を示
す工程図である。
ム）を製造する場合の電気透析におけるイオン遊走を示
す工程図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ジャン−フランソワ・ブラネレク フランス76130モン・サン・テニャン、 リュ・ドゥ・ラ・ソーヌ７番 (72)発明者 クロード・ラングロワ フランス92120モンルージュ、アブニュ ー・ドゥ・ベルダン36番 (72)発明者 フィリップ・コルネ フランス94370ノワゾー、リュ・モーリ ス・ラベル16番 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C08B 37/10
Claims (7)
- 【請求項１】 ヘパリンのナトリウム塩またはそのフラ
クションまたはフラグメントの溶液および水溶性カルシ
ウム塩の溶液を、液体循環が可能なように交互に配列し
た陰イオン透過性膜および陽イオン透過性膜を含む電気
透析装置を通って循環させることを特徴とする、ヘパリ
ンのカルシウム塩またはそのフラクションまたはフラグ
メントの製造方法。 - 【請求項２】 電気透析が２−３８ボルト／ｃｍの電位
で行われる、請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 電気透析が５−３０ボルト／ｃｍの電位
で行われる、請求項１記載の方法。 - 【請求項４】 使用する膜が約５００ダルトン未満の分
子量を有する分子だけを通過させる、請求項１−３の何
れか１項記載の方法。 - 【請求項５】 カルシウム塩として塩化物が使用され
る、請求項１−４の何れか１項記載の方法。 - 【請求項６】 電気透析が０−８０℃の温度で行われ
る、請求項１−５の何れか１項記載の方法。 - 【請求項７】 電気透析が室温で行われる、請求項６記
載の方法。
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| FR9009653A FR2665163B1 (fr) | 1990-07-27 | 1990-07-27 | Procede pour la preparation d'heparines calciques. |
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- 1991-07-24 ES ES91402067T patent/ES2057812T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1991-07-25 PL PL91291244A patent/PL166250B1/pl unknown
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- 1991-07-26 FI FI913596A patent/FI101383B1/fi not_active IP Right Cessation
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