CZ280167B6 - Způsob výroby heparinů vápenatých - Google Patents
Způsob výroby heparinů vápenatých Download PDFInfo
- Publication number
- CZ280167B6 CZ280167B6 CS912306A CS230691A CZ280167B6 CZ 280167 B6 CZ280167 B6 CZ 280167B6 CS 912306 A CS912306 A CS 912306A CS 230691 A CS230691 A CS 230691A CZ 280167 B6 CZ280167 B6 CZ 280167B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- heparin
- calcium
- sodium
- solution
- electrodialysis
- Prior art date
Links
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 title claims abstract description 55
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 31
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 7
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 title abstract description 31
- 239000011575 calcium Substances 0.000 title description 22
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 title description 18
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 title description 14
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 claims abstract description 17
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 42
- 238000000909 electrodialysis Methods 0.000 claims description 24
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 claims description 11
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 6
- 229940095529 heparin calcium Drugs 0.000 claims description 4
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 claims description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 claims description 3
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 claims 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 39
- 239000011734 sodium Substances 0.000 abstract description 21
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 abstract description 20
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 abstract description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 7
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 abstract description 3
- 239000003014 ion exchange membrane Substances 0.000 abstract description 3
- 230000005684 electric field Effects 0.000 abstract description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 30
- 239000000047 product Substances 0.000 description 19
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 14
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 14
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 13
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 12
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 12
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 12
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 6
- -1 calcium salt anions Chemical class 0.000 description 6
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 6
- 229960000899 nadroparin Drugs 0.000 description 5
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 5
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 229960001008 heparin sodium Drugs 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 4
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000002634 heparin fragment Substances 0.000 description 3
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 3
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001858 anti-Xa Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hydrogen chloride Substances Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 229950003543 nadroparin calcium Drugs 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-2-(trifluoromethoxy)pyridine Chemical class FC(F)(F)OC1=CC=C(Br)C=N1 SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229920001287 Chondroitin sulfate Chemical class 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 description 1
- OHJKXVLJWUPWQG-PNRHKHKDSA-N Heparinsodiumsalt Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](NS(O)(=O)=O)[C@@H](O)O[C@H](COS(O)(=O)=O)[C@H]1O[C@H]1[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](C(O)=O)O1 OHJKXVLJWUPWQG-PNRHKHKDSA-N 0.000 description 1
- 241000047703 Nonion Species 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- VEUACKUBDLVUAC-UHFFFAOYSA-N [Na].[Ca] Chemical group [Na].[Ca] VEUACKUBDLVUAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001557 animal structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000001455 anti-clotting effect Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- GBAOBIBJACZTNA-UHFFFAOYSA-L calcium sulfite Chemical compound [Ca+2].[O-]S([O-])=O GBAOBIBJACZTNA-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000010261 calcium sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 239000004295 calcium sulphite Substances 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229940023913 cation exchange resins Drugs 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 229920003086 cellulose ether Polymers 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229940059329 chondroitin sulfate Drugs 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 1
- 238000007485 conventional hemodialysis Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000005868 electrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000001631 haemodialysis Methods 0.000 description 1
- 230000000322 hemodialysis Effects 0.000 description 1
- 239000002565 heparin fraction Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- JESHZQPNPCJVNG-UHFFFAOYSA-L magnesium;sulfite Chemical compound [Mg+2].[O-]S([O-])=O JESHZQPNPCJVNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229950003937 tolonium Drugs 0.000 description 1
- HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M tolonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=C(C)C(N)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0075—Heparin; Heparan sulfate; Derivatives thereof, e.g. heparosan; Purification or extraction methods thereof
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Separation Using Semi-Permeable Membranes (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Seasonings (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Abstract
Řešení se týká přípravy vápenaté soli heparinu nebo produktů odvozených z heparinu, jako nízkomolekulární frakcí získaných extrakcí nebo částečnou depolymerizací. Způsob se vyznačuje tím, že se připraví vápenatá sůl heparinu nebo jeho derivátů použitím membrán s výměnou iontů, které při vystavení elektrickému poli dovolují realizovat v jediné etapě výměnu kationtů na heparinu sodném.ŕ
Description
Oblast techniky
Vynález se týká přípravy heparinových solí a výrobků odvozených od heparinů, jako jsou frakce s nízkou molekulovou hmotností získanou extrakcí nebo částečnou depolymerizací. Způsob podle vynálezu je zejména určen pro přípravu vápenaté soli heparinu nebo jeho derivátů.
Dosavadní stav techniky
Heparin, známý svým protisrážlivým účinkem na krev, se extrahuje ve formě sodné soli (heparin sodný) z různých zvířecích orgánů, jako jsou plíce nebo ledvinky hovězího dobytka nebo vepře. Terapeutické použití heparinu sodného se provádí intravenózním podáváním. Francouzský patentový spis č. FR-2 225 149 popisuje heparin vápenatý, který dovoluje provádět snadnější heparinizaci.subkutáním podáváním.
Způsob výroby vápenaté soli, používané nejčastěji v průmyslovém měřítku, spočívá v realizování sodno-vápenaté výměny v roztoku při rozpuštění heparinu sodného v roztoku vápenaté soli. I když vápník vykazuje větší afinitu na heparin než sodík, jediná výměna, i v přebytku vápníku, nestačí vyloučit zcela sodík, který podle některých lékopisů smí být přítomen v množství menším než 0,01 % ve finálním výrobku. Je tedy třeba vysrážet v alkoholu směs heparinátu sodného a vápenatého získanou při první výměně, a potom znovu rozpustit získanou sraženinu v novém roztoku bohatém na vápník. Tento pochod musí být obnovován několikrát, než obsah sodíku bude dostatečné nízký. Vysrážení v alkoholovém prostředí je pomalý pochod, trvající jeden až dva dny, což má nedostatek v tom, že je dlouhý, náročný na spotřebu alkoholu a na pracovní sílu. Kromě toho není výtěžek vysrážení 100%, ale část heparinu, znovu získaná ve formě druhotných frakcí v látkách vyplouvajících na povrch, musí podstoupit další čisticí pochody.
Byly navrženy další metody pro realizaci výměny kationtů na heparinu. První metodou je statická dialýza heparinu sodného s vápenatými solemi, která je postupem příliš pomalým, aby mohl být průmyslově využit. Použitím přístroje hemodialyzačniho typu je popsáno v patentovém spisu USA č. 4 409 103.
Jinou metodou je použití pryskyřic pro výměnu kationtů, která však má nevýhodu v tom, že přechází přes heparin ve formě kyseliny heparinové, notoricky nestabilní, protože samočinně rychle hydrolyzuje (viz patentový spis USA č. 4 168 377). Další metodou je diafiltrace roztokem vápenaté soli, popsaná v patentovém spisu USA č. 4 409 103. Používá ultrafiltračních membrán (neměnících ionty). Soli jsou unášeny proudem vody, která prochází membránami působením tlakového spádu. Heparin je zadržován filtračním účinkem, protože velikost jeho částic je větší, než je velikost pórů membrány. Nedostatkem tohoto postupu je, že pro to, aby byl dostatečně rychlý, musí použité membrány vykazovat značné propustnosti pro vodu, tedy póry velkého průměru, což s sebou nese ztráty heparinu přes membrány.
-1CZ 280167 B6
Při pokusech ohledně rozpustnosti různých solí heparinu a chondroitinsulfátu byly tyto výrobky elektrodialyzovány při použití pergamenových membrán (E.Jorpes, Biochem. J. 1935, 29. 1917 až 1830). Způsob dávkování není dostatečně přesný a proto autor nezjišťuje ztráty aktivity před a po elektrodialýze. Zjišťuje však 1 procentní ztrátu počáteční aktivity v anodickém oddělení. Kromě toho se při metodě popisované E. Jorpesem přechází přes heparin ve formě kyseliny, tedy nestabilní látku.
Japonská patentová přihláška zveřejněná pod číslem JP-01-149801 (Chemical Abstract 112, 22607 m) popisuje způsob přípravy etheru modifikované celulózy, zejména solí karboxymethylcelulózy, podle kterého se podrobuje sodná sůl elektrodialýze přes membránu s výměnou iontů nebo ultrafiltrační membránu pro získání kyselinové formy pro zpracování takto získané kyseliny hydroxidem nebo solí kationtu pro získání požadované soli. Tento způsob také přechází přes kyselinovou formu a když je aplikován na heparin sodný, vykazuje ztrátu vyplývající z degradace heparinu ve formě kyseliny.
Je také známo, že je možné oddělovat z roztoku různé kovové ionty a zejména ionty sodíku, vápníku nebo železa (železité), při vytváření komplexů s činidly pro tvorbu chelátů, jako je EDTA, potom se takto získané komplexy podrobí elektrodialýze (Patent Abstracts of Japan Vol 13 N° [c-613] /3634/, 29.06.89, JP-1080408).
Elektrodialýza byla také použita pro kontinuální přípravu roztoků obsahujících různé minerální soli malé molekulové hmotnosti a zejména siřičitan sodný, amonný nebo hořečnatý na základě siřičitanu vápenatého (patentový spis USA č. 4 009 088).
Podstata vynálezu
Nyní bylo zjištěno, že při použiti střídavého sledu membrán propustných pro anionty (MPA) a membrán propustných pro kationty (MPC) v klasickém hemodialyzačním zařízení, přičemž tyto membrány jsou sestaveny tak, že dovolují cirkulaci kapalin mezi dvěma vedle sebe ležícími membránami, přičemž se nechá cirkulovat roztok sodné soli heparinu nebo fragmentů nebo frakcí heparinu a roztok soli vápníku použité pro výměnu iontů, se získá přímo odpovídající vápenatá sůl, aniž by bylo nutno přecházet přes heparin ve formě kyseliny.
Bylo také zjištěno, že reakce je prakticky kvantitativní a že v roztocích solanky tak, jak jsou definovány níže, a z oplachování elektrod se zjišťuje méně než 0,1 % počátečního heparinu (nebo jeho frakcí nebo fragmentů).
Vynález se tedy vztahuje na způsob výroby vápenaté soli heparinu nebo jeho fragmentů nebo frakci, jehož podstatou je, že se nechá cirkulovat roztok sodné soli heparinu nebo jeho frakci nebo fragmentů a roztok ve vodě rozpustné soli vápníku v elektrodialyzním přístroji, obsahujícím membrány propustné pro anionty a membrány propustné pro kationty v prostřídaném sledu, přičemž elektrodialýza se provádí pod napětím od 2 do 38 V/cm, a přičemž použité membrány dovolují průchod pouze molekulám majícím molekulovou hmotnost pod 500 daltonů.
-2CZ 280167 B6
S výhodou se elektrodialýza provádí pod napětím od 5 do 30 V/cm. Jako vápenaté soli se s výhodou použije chloridu. Elektrodialýza se s výhodou provádí při teplotě 0 až 80 ’C, nejlépe při teplotě místnosti.
Jako výchozích produktů se používá s výhodou heparinu sodného nebo jeho frakcí získaných dělením na frakce nebo depolymerizací, zejména nadroparinu známého také pod jménem CY 216 a popsaného v patentovém spisu USA č. 4 686 288 ve formě sodné soli. V tomto posledním případě je způsob podle vynálezu obzvláště výhodný, protože molekulová hmotnost nadroparinu, od okolo 2 000 do okolo 8 000 daltonů s vrcholem ležícím okolo 4 500 daltonů, je výrazně nižší, než je molekulová hmotnost heparinu. Výměna Na-Ca při ultrafiltraci nebo dialýze by vyvolala značné ztráty.
Jako výchozích produktů je možno použít heparinu sodného nebo vyčištěných fragmentů heparinu, jako je nadroparin sodný, které nebyly podrobeny konečnému čištění a obsahují eventuálně malá množství ethanolu, síranu sodného nebo chloridu sodného. Srovnávací pokusy ukázaly, že takové produkty, když jsou obsaženy v malých množstvích ve výchozích produktech, neovlivňují kvalitu (čistotu) heparinu vápenatého nebo fragmentů heparinu ve formě vápenatých solí získaných způsobem podle vynálezu.
Všechny výchozí produkty se zde nazývají hepariny, zatímco konečné produkty se nazývají hepariny vápenaté.
Způsob podle vynálezu spočívá zejména v používání membrán propustných pro anionty (MPA) a membrán propustných pro kationty (MPC) v klasickém elektrodialyzačním přístroji. Tyto membrány pro výměnu iontů jsou sestaveny v prostřídaném sledu, dovolujícím cirkulaci kapalin mezi dvěma vedle sebe ležícími membránami. Způsob spočívá v tom, že se nechá cirkulovat ve sledu membrán roztok obsahující sodnou sůl heparinu nebo jednu z jeho frakcí nebo fragmentů a sůl rozpustnou ve vodě, obsahující kation vápníku, který se má vyměnit se sodíkem (například chlorid vápenatý CaC12)·
Jako neomezující příklady je možno uvést membrány ASAHI GLASSrCM 1 a AM1 (Toyama Soda, dodavatel).
Přehled obrázků na výkresech
Vynález je blíže vysvětlen v následujícím popisu na příkladech provedení s odvoláním na připojené výkresy, kde na obr. 1 je schematicky funkce elektrodialyzátoru ve způsobu podle vynálezu a na obr. 2 je schematicky migrace iontů v elektrodialyzátoru v případě přípravy heparinátu vápníku (heparinu vápenatého).
Příklady provedení vynálezu
Do elektrodialyzátoru E se zavádí a nechává cirkulovat jednak roztok X, dále označovaný jako roztokový produkt, obsahující heparin sodný (Hn“, nNa+) a sůl vápníku rozpustnou ve vodě, například chlorid vápenatý, a jednak cirkuluje roztok 2, dále nazývaný solanka, který na začátku obsahuje pouze malé množství soli (například chlorid vápenatý CaCl2), pro zajištění vodivosti
-3CZ 280167 B6 a která se po té obohacuje solemi (například chloridem sodným NaCl a chloridem vápenatým CaCl2) a která je během elektrodialýzy nahrazována přidáváním soli vápníku, rozpustné ve vodě (například chlorid vápenatý CaCl2) v roztokovém produktu 1. Elektrodialyzátor E obsahuje sestavu buněk, tvořených každá jednou membránou MPA a jednou membránou MPC. Počet membrán M, jaký se použije, je od 30 do 60 as výhodou od 40 do 50, a membrány jsou použitelné pro molekuly menší než okolo 500 daltonů. Elektrody se opláchnou známým způsobem, například roztokem 3. chlorovodíku HC1 /0,5 %/ nebo chloridu draselného KC1 /1 %/. Roztokový produkt £ cirkuluje v jednom ze dvou oddělení, zatímco solanka 2 cirkuluje v ostatních odděleních.
Účinkem stejnosměrného elektrického pole kolmého na membrány, poskytovaného zdrojem V stejnosměrného proudu, prostupují ionty Na+ membránami MPC ve směru ke katodě a jsou vymezovány v sousedním oddělení se solankou, protože se zde setkávají s membránou MPA. Ionty, které se mají vyměňovat s ionty Na+, například Ca2+, také prostupují membránami MPC směrem ke katodě a jsou vymezovány v přilehlém oddělení se solankou, protože jejich migrace je blokována tím že se setkají s membránou MPA. Připojené anionty vápenaté soli pro přemístění sodíku prostupují membránou MPA směrem k anodě a jsou vymezovány v oddělení se solankou, protože se zde setkávají s membránou MPC. Heparinátové ionty /Hn”/ migrují k membránám MPA, ale nemohou jimi projít, protože jejich molekulová hmotnost je příliš značná. Elektrodialyzní membrány jsou skutečně propustné pouze pro látky molekulové hmotnosti menší než okolo 500. Heparinátové ionty tedy zůstávají v roztokovém produktu.
Postupně jak jsou kationty sodíku a kationty vápníku přenášeny do solanky ve formě soli aniontu použitého pro přemístění sodíku, s výhodou ve formě chloridu, přidává se do roztokového produktu požadovaný kationt, například vápník, tak aby byl zcela vytlačen sodík.
Stačí tedy rekuperovat roztokový produkt vyprázdněním okruhu a přidat etanol /nebo jiné srážedlo heparinu/ do tohoto roztoku aby se vysrážela vápenatá sůl heparinu nebo jedné z jeho frakcí.
Napětí, které je na elektrodách, se může pohybovat od 2 do 38 V/cm, s výhodou od 5 do 30 V/cm. Postup se provádí při teplotě 0 až 80 C, s výhodou při teplotě místnosti.
Způsob podle vynálezu se dá velmi snadno provádět, je velmi rychlý a poskytuje velmi čisté vápenaté soli s obsahem sodíku nižším než 0,1 % a s velmi dobrými vlastnostmi z hlediska biologické aktivity. Kromě toho realizuje způsob podle vynálezu vzhledem k jednoduché elektrodialýze, která je odsolovacím postupem, přímou výměnu kationtů na iontové makromolekule. Kromě toho je známo, že makro-anionty utěsňují povrch elektrodialyzních membrán. Překvapivě se však ukazuje, že při pouhém oplachu mezi dvěma pokusy nebyl konstatován žádný pokles výkonů membrán, jak by se dalo očekávat podle poznatků známého stavu techniky.
-4CZ 280167 B6
Vzhledem ke známým postupům se vynález vyznačuje výraznými zlepšeními, zejména ve vztahu k ultrafiltraci nebo dialýze spojuje způsob podle vynálezu rychlost a malé ztráty, což je obtížné slučitelné při použití obou shora uvedených metod. Vzhledem k po sobě následujícím srážením se značně zmenšuje trvání zpracování, počet manipulací a spotřeba srážecího činidla.
Vynález je blíže vysvětlen na následujících dvou příkladech.
Použité materiály v těchto příkladech jsou následující:
Elektrodialyzátor SRTI, model PÍ
Membrány ASAHI GLASS AMV/CSV/20 buněk na 69 cm2/. Jedna buňka je tvořena jednou membránou MPA a jednou membránou MPC. Elektrodialyzátor je tedy celkem tvořen 41 membránami.
Pracovní podmínky jsou následující:
Napětí na elektrodách: 25 V pro příklad I a 30 V pro příklad II. Teplota: teplota místnosti.
Příklad 1: Výroba heparinu vápenatého
PŘÍPRAVA A 3 x alfM V PŘÍTOMNOSTI NEČISTOT
115 g heparinátu sodného (20,6 χ 106 jednotek podle lékopisu Pharmacopée Européenne, Ed. 1990, str. 333, monografie Heparinát sodný - titrace: V.2.2.6/ se uvede do roztoku v 900 g vody. Přidá se 15 g etanolu, 1,2 g síranu sodného Na2SO4 a 170 mg chloridu sodného NaCl. Tento roztok se podrobí elektrolýze, přičemž ionty jsou postupně předávány do roztoku solanky majícího následující počáteční složení: CaCl2 : 5 g/H2O : 1 kg. Elektrody přístroje se oplachují 1,2 litry jednoprocentního chloridu draselného KCL, který plynule recirkuluje. Provede se přidání 100 g 38,5 procentního roztoku chloridu vápenatého CaCl2 po 0, 30 a 90 minutách. Nahradí se solanka obohacená solemi 1 kg 0,5 procentního chloridu vápenatého CaCl2 po 30 a 90 minutách. Po 150 minutách se získá roztokový produkt vyprázdněním. Heparin se nyní vysráží v etanolu, mele se, promývá v alkoholu, potom se suší v peci pod vakuem. Získá se 120 g práškového produktu, majícího následující vlastnosti :
- biologická aktivita: 20,6 χ 106 jednotek /lOOprocentní efekt/
- obsah sodíku: 0,03 %
- obsah vápníku: 9,2 %
Dávkováním do toluidinové modře /J.P. DUCLOS, HEPARINE, Ed. Masson, stro. 285/ se zjistí, že roztoky solanky a pro oplach elektrod obsahuji pouze 0,6 % výchozího heparinu. To potvrzuje dobře téměř úplnou nepropustnost membrán vůči heparinu.
-5CZ 280167 B6
PŘÍPRAVA B 3 X alfM PŘI POUŽITÍ ČISTÉHO HEPARINU SODNÉHO
115 g heparinátu sodného /o 20,6 χ 106 jednotek podle lékopisu Pharmacopée Européenne, Ed. 1990, str. 333, monografie Heparinát sodný-titrace: V.2.2.6/ se uvede do roztoku v 900 g vody. Tento roztok se podrobí elektrodialýze, přičemž ionty jsou postupně přenášeny do roztoku solanky majícího následující počáteční složení: CaCl2: 5 g, H2O : 1 kg. Elektrody zařízení se opláchnou
1,2 litry lprocentního chloridu draselného, který plynule recirkuluje. přidávání 100 g 38,5procentního roztoku chloridu vápenatého CaCl2 do produktu se provádí po 0, 30 a 90 minutách. Solanka obohacená solemi se nahradí 1 kg 0,Sprocentního chloridu vápenatého CaCl2 po 30 a 90 minutách. Po 150 minutách se vyprázdněním odebere roztokový produkt. Heparin se nyní vysráží etanolem, rozemele se, promyje v alkoholu a potom se suší v peci pod vakuem. Získá se 120 g práškového produktu, majícího následující charakteristické vlastnosti:
- biologická aktivita: 20,6 χ 106 jednotek /lOOprocentní efekt/
- obsah sodíku 0,03 %
- obsah vápníku 9,2 %
Příklad 2: Výroba vápenaté soli nadroparinu
220 g nadroparinu sodného /o 62,1 χ 106 jednotek anti-Xa podle Path.Biol. 1988, 36, str. 335 až 337/, získaného jak je popsáno v příkladě 1 patentového spisu USA č. 4 686 288, se uvede do roztoku v 1 860 g vody. Tento roztok se dělí na dvě stejné části a každá část se podrobí elektrodialýze /přístroj může zpracovávat najednou pouze jeden litr/, přičemž ionty jsou postupně přesouvány do roztoku solanky majícího následující počáteční složení: CaCl2 : 5 g, H20 : 1 kg. Elektrody přístroje se plynule oplachují 1,2 litry 0,5 % chlorovodíku, které plynule recirkulují. Přidávání 100 g roztoku 38,3procentniho chloridu vápenatého CaCl2 se provádí do produktu po 0, 26 a 47 minutách pro elektrodialýzu první dávky a po 0, 37 a 77 minutách pro elektrodialýzu druhé dávky. Solanka se nahradí 1 litrem 0,Sprocentního chloridu vápenatého CaCl2 při každém přidávání chloridu vápenatého do roztoku. Hodnota pH roztoku se udržuje mezi 6 a 7 přidáváním Ca/0H/2. po 83 minutách pro první elektrodialýzu a po 127 minutách pro druhou elektrodialýzu se získá produkt vyprázdněním a oplachem okruhu destilovanou vodou. Nadroparin vápenatý se nyní vysráží v etanolu, mele se, promývá v etanolu a suší se v peci pod vakuem. Získá se 220 g prášku majícího následující vlastnosti: 6
- biologická aktivita: 62,7 x 10° jednotek anti-XA /přibližně lOOprocentní efekt/
- obsah sodíku: 0,08 %
- obsah vápníku: 9,8 %
Pokusem vysrážení v etanolu se odhaduje na méně než 0,01 % množství nadroparinu ztracené prostupem přes membrány.
Claims (5)
1. Způsob výroby vápenaté soli heparinu nebo jeho fragmentů nebo frakcí, vyznačený tím, že se nechá cirkulovat roztok sodné soli heparinu nebo jeho frakcí nebo fragmentů ve formě sodné soli a roztok ve vodě rozpustné soli vápníku v elektrodialyzním přístroji, obsahujícím v prostřídaném sledu membrány propustné pro anionty a membrány propustné pro kationty, propustné pro molekuly s molekulovou hmotností pod 500 Da, přičemž elektrodialýza se provádí pod napětím od 2 do 38 v/cm.
2. Způsob výroby podle nároku 1, vyznačený tím, že se elektrodialýza provádí pod napětím od 5 do 30 V/cm.
3. Způsob podle nároků 1 nebo 2, vyznačený tím, že jako vápenaté soli se použije chloridu.
4. Způsob podle kteréhokoli z nároků 1 až 3, vyznačený tím, že se elektrodialýza provádí při teplotě od 0 do 80 ’C.
5. Způsob podle nároku 4, vyznačený tím, že se elektrodialýza provádí při teplotě místnosti.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9009653A FR2665163B1 (fr) | 1990-07-27 | 1990-07-27 | Procede pour la preparation d'heparines calciques. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS230691A3 CS230691A3 (en) | 1992-02-19 |
| CZ280167B6 true CZ280167B6 (cs) | 1995-11-15 |
Family
ID=9399192
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS912306A CZ280167B6 (cs) | 1990-07-27 | 1991-07-23 | Způsob výroby heparinů vápenatých |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0469965B1 (cs) |
| JP (1) | JP3025346B2 (cs) |
| AT (1) | ATE90691T1 (cs) |
| CA (1) | CA2047978C (cs) |
| CZ (1) | CZ280167B6 (cs) |
| DE (1) | DE69100130D1 (cs) |
| ES (1) | ES2057812T3 (cs) |
| FI (1) | FI101383B (cs) |
| FR (1) | FR2665163B1 (cs) |
| HU (1) | HU214027B (cs) |
| IE (1) | IE66120B1 (cs) |
| PL (1) | PL166250B1 (cs) |
| PT (1) | PT98430B (cs) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103408676A (zh) * | 2013-07-15 | 2013-11-27 | 河北常山生化药业股份有限公司 | 一种那屈肝素钙制备工艺 |
| CN103601820A (zh) * | 2013-10-31 | 2014-02-26 | 安徽工贸职业技术学院 | 一种肝素锂的制备方法 |
| CN104072637B (zh) * | 2014-07-07 | 2017-02-08 | 兆科药业（合肥）有限公司 | 一种低分子量肝素钙的制备方法 |
| CN104072638B (zh) * | 2014-07-07 | 2016-08-31 | 兆科药业（合肥）有限公司 | 一种那屈肝素钙的制备方法 |
| CN107286271A (zh) * | 2017-08-10 | 2017-10-24 | 盐城盛大肠衣食品有限公司 | 一种树脂吸附提取肝素钠装置 |
| CN110894246A (zh) * | 2019-12-31 | 2020-03-20 | 湖北亿诺瑞生物制药有限公司 | 一种提高低分子量肝素钙中钙含量的方法 |
| CN113960246A (zh) * | 2021-09-08 | 2022-01-21 | 南京南大药业有限责任公司 | 一种无有机溶剂残留的低分子量肝素钠生产方法及设备 |
| CN117224486B (zh) * | 2023-09-26 | 2024-12-13 | 烟台东诚北方制药有限公司 | 一种稳定型那屈肝素钙注射剂及其制备方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CH586059A5 (cs) * | 1974-11-29 | 1977-03-31 | Yeda Res & Dev | |
| US4009088A (en) * | 1975-03-10 | 1977-02-22 | Rauma-Repola Oy | Process for producing aqueous solutions of sodium, ammonium and magnesium sulphite |
| IT1141263B (it) * | 1980-02-29 | 1986-10-01 | Italfarmaco Spa | Metodo per la preparazione di eparinato di calcio |
| JPS6480408A (en) * | 1987-09-24 | 1989-03-27 | Tosoh Corp | Separation of metal ion by electrodialysis |
-
1990
- 1990-07-27 FR FR9009653A patent/FR2665163B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
1991
- 1991-07-12 HU HU912352A patent/HU214027B/hu unknown
- 1991-07-16 IE IE248791A patent/IE66120B1/en not_active IP Right Cessation
- 1991-07-23 CZ CS912306A patent/CZ280167B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1991-07-24 PT PT98430A patent/PT98430B/pt not_active IP Right Cessation
- 1991-07-24 ES ES91402067T patent/ES2057812T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1991-07-24 DE DE9191402067T patent/DE69100130D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1991-07-24 AT AT91402067T patent/ATE90691T1/de active
- 1991-07-24 EP EP91402067A patent/EP0469965B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1991-07-25 PL PL91291244A patent/PL166250B1/pl unknown
- 1991-07-26 JP JP3187309A patent/JP3025346B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1991-07-26 FI FI913596A patent/FI101383B/fi not_active IP Right Cessation
- 1991-07-26 CA CA002047978A patent/CA2047978C/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE69100130D1 (de) | 1993-07-22 |
| CA2047978C (en) | 2001-02-27 |
| FI913596L (fi) | 1992-01-28 |
| EP0469965B1 (fr) | 1993-06-16 |
| CS230691A3 (en) | 1992-02-19 |
| EP0469965A3 (en) | 1992-04-08 |
| FI101383B1 (fi) | 1998-06-15 |
| HU912352D0 (en) | 1991-12-30 |
| JPH04233902A (ja) | 1992-08-21 |
| FI913596A0 (fi) | 1991-07-26 |
| HU214027B (en) | 1997-12-29 |
| JP3025346B2 (ja) | 2000-03-27 |
| IE912487A1 (en) | 1992-01-29 |
| FI101383B (fi) | 1998-06-15 |
| FR2665163B1 (fr) | 1992-10-16 |
| PL166250B1 (pl) | 1995-04-28 |
| PL291244A1 (en) | 1992-04-06 |
| EP0469965A2 (fr) | 1992-02-05 |
| FR2665163A1 (fr) | 1992-01-31 |
| ATE90691T1 (de) | 1993-07-15 |
| PT98430A (pt) | 1992-05-29 |
| ES2057812T3 (es) | 1994-10-16 |
| IE66120B1 (en) | 1995-12-13 |
| HUT58769A (en) | 1992-03-30 |
| CA2047978A1 (en) | 1992-01-28 |
| PT98430B (pt) | 1999-01-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR940004062B1 (ko) | 화학적으로 명명되고 재생이 가능한 폴리디옥시리보뉴클레오티드의 제조방법 | |
| Kapp et al. | Removal of sodium dodecyl sulfate from proteins | |
| CZ280167B6 (cs) | Způsob výroby heparinů vápenatých | |
| CA2470665C (en) | Process for the preparation of glucosamine salts | |
| DE60208528T2 (de) | Hochsulfatierte derivate von k5-polysacchariden und ihre herstellung | |
| NZ202996A (en) | Production of low molecular weight heparin | |
| CA1272982A (en) | Method for the recovery of lithium from solutions by electrodialysis | |
| EP0386053A1 (en) | NON-ANTICOAGULATING HEPARANESULFATE, METHOD FOR ITS EXTRACTION FROM ORGANS AND PHARMACEUTICAL PREPARATIONS THEREOF. | |
| DE3244214A1 (de) | Verfahren zur reinigung und fraktionierung von heparin | |
| US4409103A (en) | Method for the preparation of calcium heparinate | |
| CA1155112A (en) | Process for the purification of glucosaminoglucans | |
| DE3922278C2 (de) | Verfahren zur herstellung von freiem (epsilon)-polylysin | |
| DE2424118B2 (de) | Verfahren zur herstellung von hochreinem kallikrein | |
| DE2652272B1 (de) | Verfahren zur Herstellung von Heparin | |
| AT397250B (de) | Verfahren zur herstellung von heparinsalzen | |
| JPH0827181A (ja) | シアル酸含有糖蛋白質の精製法 | |
| JP2024038771A (ja) | プロテオグリカンの精製法 | |
| DE1492047C (de) | Verfahren zur Gewinnung eines Poly peptids mit immunisierender Wirkung | |
| KR900007953B1 (ko) | 엘라스타제의 정제방법(Elastase의 精製 方法) | |
| PL117279B3 (en) | Process for preparing heparin of high purity | |
| DE2903131A1 (de) | Verfahren zur herstellung eines antihaemophilen globulin a enthaltenden konzentrats neben einem prothrombin-komplex und einer loesung von lagerstabilen serumproteinen | |
| JPH05285345A (ja) | 海水の処理方法 | |
| JPS62112602A (ja) | エ−テル化シクロデキストリンの精製法 | |
| CN109929059A (zh) | 制备高纯度伊诺肝素方法 | |
| JPH01249108A (ja) | 生体物質の脱塩方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| IF00 | In force as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MK4A | Patent expired |
Effective date: 20110723 |