JPH07330789A

JPH07330789A - 硫酸化糖の精製方法

Info

Publication number: JPH07330789A
Application number: JP13180594A
Authority: JP
Inventors: Naoya Ikushima; 直也生島; Shinobu Yamaguchi; 忍山口; Tadao Shoji; 忠生東海林; Naoko Takahashi; 菜穂子高橋
Original assignee: Dainippon Ink and Chemicals Co Ltd
Current assignee: DIC Corp
Priority date: 1994-06-14
Filing date: 1994-06-14
Publication date: 1995-12-19

Abstract

(57)【要約】【構成】逆浸透膜を用いて硫酸化糖の脱塩精製を行う
ことを特徴とする硫酸化糖の精製方法。【効果】硫酸化糖を製造する際の脱塩工程の効率化が
図れ、高純度品の製造が容易になる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、硫酸化糖と無機塩の混
合物から無機塩を短時間で除去し、高純度の硫酸化糖を
得ることの出来る、硫酸化糖の精製方法に関するもので
ある。

【０００２】

【従来の技術】近年、硫酸化糖は抗凝血作用や抗エイズ
ウイルス活性を持つ化合物として注目されている。硫酸
化糖は取扱い易さの点から、主としてナトリウム塩やカ
リウム塩として用いられることが多く、硫酸化糖を製造
する際には、副生成物として無機塩が混入し、純度の高
い硫酸化糖を得るためには無機塩と硫酸化糖との分離精
製が必要である。これまで硫酸化オリゴ糖の精製方法と
しては、特開平５ー７８３８２号公報や特開平５−２１
３９８２号公報に記載のように、水酸化バリウム水溶液
を添加することにより不溶性の硫酸バリウムとして硫酸
イオンを除いた後に最終的に必要な金属イオン型の陽イ
オン交換樹脂によりイオン交換する方法や、水酸化ナト
リウムを加えて濃縮乾固した後、再度水溶液にして限外
ろ過膜、半透膜、イオン交換膜、イオン交換樹等を用い
て分離する方法が知られている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】しかし、半透膜法や限
外ろ過法による硫酸化糖の精製方法では、低分子量の硫
酸化糖の場合は製造工程で混入してくる無機塩類との分
子量の差が小さいために、目的とする硫酸化糖も半透膜
法や限外ろ過膜を透過してしまい、精製効率が悪かっ
た。

【０００４】一般に、硫酸化されていない糖はイオン交
換樹脂には吸着しにくい。このために、硫酸化されてい
ない糖は、Ｈ⁺型の陽イオン交換樹脂で陽イオンを除去
後ＯＨ^-型の陰イオン交換樹脂で陰イオンを除去するこ
とにより無機塩類は脱塩することが可能である。また、
イオン交換膜を用いる方法でも容易に脱塩することがで
きる。これに対して、硫酸化糖は糖の水酸基が硫酸エス
テルとなっているためにイオン性を有する化合物であ
る。このため、イオン交換膜を用いた硫酸化糖の脱塩精
製では効率が低かった。結果的に、硫酸化糖の脱塩に用
いた場合には非常に長時間を要し、さらに回収率も低く
なった。さらに、Ｈ⁺型の陽イオン交換樹脂で陽イオン
を除去後ＯＨ^-型の陰イオン交換樹脂で陰イオンを除去
することにより脱塩精製する方法では目的とする硫酸化
糖そのものが樹脂に吸着してしまい脱塩を行うことがで
きないなどの問題点があった。

【０００５】さらに、水酸化バリウム水溶液を添加する
方法では、所望する硫酸化糖の塩が水不溶性のバリウム
塩であれば容易に分離することが出来るが、最終的に所
望される硫酸化糖の塩が水溶性である場合は、最終的に
必要な金属イオン型の陽イオン交換樹脂を用いて塩交換
をおこなう必要がある。しかしこのイオン交換には、非
常に交換容量の大きなイオン交換カラムでの処理が必要
であり（例えば硫酸化糖のナトリウム塩を２０ｇ得るた
めには、イオン交換樹脂５〜１０Ｌ必要）効率が悪く、
硫酸化糖が硫酸エステルであるために、硫酸に対する不
溶性の塩を形成した際に当該硫酸化糖の塩も溶解性が低
下してしまい回収率が低くなった。

【０００６】従って、本発明が解決しようとする課題
は、短時間で効率よく、純度の高い硫酸化糖を高収率で
得ることにある。

【０００７】

【問題点を解決するための手段】本発明者らは、硫酸化
糖の脱塩精製方法の効率向上について鋭意研究を続けた
結果、濃縮や純水の製造に用いられる逆浸透膜に着目
し、従来の限外ろ過法や透析法では脱塩が困難であり、
またイオン交換膜法では長時間を要していた硫酸化糖の
脱塩精製が、逆浸透膜を用いることで、効率良く、高純
度の硫酸化糖が得られることを見い出した。

【０００８】即ち本発明は、硫酸化糖と無機塩との分離
において、逆浸透膜を用いる事を特徴とする硫酸化糖の
精製方法に関する。本発明の硫酸化糖とは、糖の水酸基
の一部又は全部が硫酸エステル化した糖であれば良く、
硫酸エステル基がナトリウム塩、カリウム塩等の生理学
的に許容される塩となっていても良い。

【０００９】本発明は、単糖から分子量の大きないわゆ
る硫酸化多糖の精製にも用いることが出来るが、特に、
従来の透析法や限外ろ過法では精製が困難であった、低
分子量の硫酸化糖いわゆる硫酸化オリゴ糖の精製に好適
である。好ましい硫酸化糖としては、例えば、構成単糖
数が１〜３０のものが好ましく、３〜１０のものがより
好ましい。また硫酸化糖の分子量、即ち置換基も含めた
糖全体の分子量が５００〜２００００であるものが好ま
しく、分子量１０００〜１００００が更に好ましく、１
５００〜３５００が特に好ましい。

【００１０】脱塩に用いられる硫酸化糖の硫酸エステル
基の割合としてしは、任意の割合の化合物を用いること
ができるが、イオン交換樹脂やイオン交換膜での脱塩が
困難であった、糖の水酸基の１０％以上、特に好ましく
は５０〜１００％が硫酸エステル化された硫酸化糖が良
い。

【００１１】本発明における硫酸化糖の構造は、基本骨
格として５炭糖、６炭糖、７炭糖の単糖や、これら単糖
単位がグリコシド結合して成るオリゴ糖、多糖などが挙
げられる。また糖の水酸基、ヒドロキシメチル基、水素
原子等の一部が、アシル基、アミノ基、アセトキシ基、
アルキル基、アリール基、ハロゲン基、トコフェリル基
等で置換されたものでも、未置換のものでも良い。

【００１２】アルキル基としてはヘキシル基、ヘプチル
基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ドデシル基、ヘ
キサデシル基、オクタデシル基、エイコサニル基、ドコ
サニル基、２−エチルヘキシル基、３−メチルペンチル
基などが挙げられる。また、アシル基としてはベンゾイ
ル基、２−フルオロベンゾイル基、２，４−ジフルオロ
ベンゾイル基などが挙げられる。アリール基としてはｐ
−ｎ−オクチルフェニル基、ｐ−ｎ−ヘキシルフェニル
基、ｐ−ｎ−オクチルオキシフェニル基、ｐ−ｔ−オク
チルフェニル基等が挙げられる。

【００１３】また、硫酸化糖は配糖体構造をとっていて
も良く、例えば特開平５−７８３８２号公報、特開平５
−２１３９８２号公報、特開平５−２７９３８１号公報
に記載されている糖、即ちアグリコンとしてアルキル
基、アルキルフェニル基、アルコキシフェニル基、トコ
フェリル基を有する糖が好ましく用いられる。また、こ
れらアグリコンを有し、かつその他の水酸基の一部にベ
ンゾイル基等のアシル基を有する硫酸化糖も好ましい。

【００１４】例えば以下のような硫酸化糖が挙げられ
る。硫酸化 β−Ｄ−グルコピラノシル（１→３）｛−
β−Ｄ−グルコピラノシル（１→３）｝₃−β−Ｄ−グ
ルコピラノース：（以下硫酸化ラミナリペンタオースと
称する）、硫酸化ｎ−ドデシル β−Ｄ−グルコピラ
ノシル（１→３）｛−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→
３）｝₃−β−Ｄ−グルコピラシド硫酸化ｎ−オクチル β−Ｄ−グルコピラノシル（１
→３）−α−Ｄ−グルコピラノシド、硫酸化ｐ−ｎ−
ヘキシルフェニル β−Ｄ−ガラクトピラノシル（１→
４）｛−β−Ｄ−ガラクトピラノシル（１→４）｝₈−
α−Ｄ−グルコピラノシド、硫酸化ｐ−ｎ−ヘプチル
オキシフェニル β−Ｄ−ガラクトピラノシル（１→
４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル（１→４）−β−Ｄ
−グルコピラノシド、硫酸化ｄｌ−α−トコフェリル
Ｏ−ｎ−ブチリル−β−D−ラミナリペンタオシド、
硫酸化２−エチルヘキシル α−Ｄ−グルコピラノシ
ル（１→４）｛−α−Ｄ−グルコピラノシル（１→
３）｝₃−β−Ｄ−グルコピラノシド、硫酸化ｐ−ｎ
−ヘプチルフェニル α−Ｄ−グルコピラノシル（１→
６）｛−α−Ｄ−グルコピラノシル（１→６）｝₂₈−β
−Ｄ−グルコピラノシド等。

【００１５】本発明で用いられる逆浸透膜は、１０００
mg／lの食塩水をマーカーとして評価した場合に１〜８
０％、好ましくは１０〜５０％の阻止率を持つ膜であ
る。もしくは糖質を用いて評価したおおよその分画分子
量が１００〜５０００、好ましくは３００〜３０００の
膜である。逆浸透膜は上記の性質を有する膜であればど
のようなものでも良く、市販の膜として例えば日本ミリ
ポア・リミテッド製Ｎａｎｏｍａｘ５０、同社製Ｒ７
５、デザリネーションシステムズ社製ＤＥＳＡＬ−Ｇ５
０、同社製ＤＢＳＡＬ−Ｇ２０等を用いることが出来
る。

【００１６】この様な膜を用いる精製操作としては、こ
れらの逆浸透膜を平膜としてバッチ式で使用する方法、
平膜を複数枚重ねた多段式のカートリッジとして使用す
る方法、さらには逆浸透膜をスパイラル型のカートリッ
ジとしたクロスフロー方式（流通式）の装置を用いる方
法などが例示できるが、他の方法で実施しても良い。ま
た、逆浸透の操作圧力については、使用する膜の耐圧限
界内であれば問題なく脱塩精製することが可能である。
より好ましくは１〜４５kg／cm²の操作圧力で脱塩精製
を行う方がよく、さらに好ましくは３〜３５kg／cm²の
操作圧で行うのが良い。また、膜面積は、精製の度合い
の点では小さくても問題はないが、大きい方が多くの糖
を短時間で精製出来るので効率的であり、処理量、処理
時間に合わせて適当な大きさの膜を選択すれば良い。精
製操作は硫酸化糖中の無機塩が目的の含量に達するまで
水を供給しながら行えば良く、無機塩含量が好ましくは
５重量％以下、更に好ましくは１重量％以下まで、最も
好ましくは０．１重量％以下まで精製を行えば良い。

【００１７】本発明の精製において除かれる無機塩とし
ては、水に溶解する無機塩であれば良く、例えば水酸イ
オン、硫酸イオン、硫酸水素イオン、塩素イオン、硝酸
イオンから選ばれた少なくとも一種の陰イオンからなる
アニオン部と、水素イオン、リチウムイオン、ナトリウ
ムイオン、カリウムイオン、カルシウムイオンから選ば
れた少なくとも一種の陽イオンからなるカチオン部の組
み合わせからなる塩であるか、又はどちらか一方のイオ
ンが酢酸イオン、ピリジニウムイオン４級アンモニウム
イオンなどの有機酸や有機塩基であり他方が上記の無機
イオンであってもよい。特に本発明では無機塩アニオン
部が水酸イオン、硫酸イオン、硫酸水素イオン又は塩素
イオンであり、カチオン部がリチウムイオン、ナトリウ
ムイオン、カリウムイオン、ピリジニウムイオンである
塩の場合に有効な手段であり、更に好ましくは硫酸ナト
リウム、硫酸カリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウ
ム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等の脱塩に有効
である。

【００１８】即ち、硫酸化糖を製造するに当たり、糖を
硫酸化する際に使用される硫酸化剤の残りや、硫酸化糖
の取扱いを容易にするために添加した各種塩類、硫酸化
剤と反応し生成した硫酸塩等の無機塩と、硫酸化糖、特
に低分子量の硫酸化オリゴ糖を分離するのに、本発明は
非常に有効な手段である。

【００１９】次に、本発明の精製方法に付いて具体的に
説明するために、平膜を用いたバッチ式の場合について
説明する。まず、硫酸化糖と無機塩の混合物（通常は糖
を硫酸化させた後の反応液の濃縮物又は精製しようとす
る硫酸化糖そのものである）を水に溶解し水溶液とす
る。この時の溶液の濃度は任意であるがより好ましくは
０．１重量％以上５０重量％以下である。この溶液を逆
浸透膜に通液することにより、無機塩を除去する。例え
ばこの溶液を逆浸透装置にチャージし窒素ガスや圧縮空
気などの圧力源を用いて圧力を印加する。逆浸透の操作
圧力は前述の通りである。圧力を印加すると、逆浸膜か
ら水が流出し糖が濃縮されると共に無機塩が膜を透過す
る。装置内の溶液量が、初期量の５０％以下、好ましく
は９５％以下になるまで逆浸透を実施したところで、加
圧を解き水を加えて再度逆浸透を継続する。装置内の溶
液の無機イオン含量が目的の含量に達するまで、この操
作を繰り返し、硫酸化糖を精製する。

【００２０】また、流通式の逆浸透装置を用いた精製例
について第１図に基づいて説明する。具体的には、例え
ばＭＩＬＬＩＰＯＲＥ社製のＢＥＮＣＨＴＯＰＲＥＶ
ＥＲＳＥＯＳＭＯＳＩＳＦＩＬＴＲＡＴＩＯＮＳ
ＹＳＹＴＥＭ等により簡単に精製を行える。

【００２１】図面中、リザーバータンク１は内部の液面
計によりＢから水を供給し一定量の液量を保てるような
構造であり、逆浸透膜モジュール４内の逆浸透膜として
は無機塩が透過し、精製目的とする硫酸化糖の透過が阻
止されるものである。矢印は溶液の流れる方向を示して
いる。

【００２２】硫酸化糖を精製するには、リザーバータン
ク１内に硫酸化糖と無機塩の混合水溶液を硫酸化糖がお
およそ０．１から５０重量％の濃度になるように調整す
る。上記混合溶液をポンプ２で逆浸透膜モジュール４に
送り込み、クロスフロー方式により水とともに無機塩を
逆浸透膜に透過させて除去する。除去した水と無機塩は
出口Ａから排出される。一方、硫酸化糖は再度リザーバ
ータンク１に戻す。結果として、タンク内の硫酸化糖の
純度が高くなり、上記の操作を連続して繰り返すことで
硫酸化糖が精製され高純度の硫酸化糖が得られる。得ら
れた硫酸化糖はサンプル取り出し口Ｂから取り出され
る。尚、クロスフロー方式で逆浸透を行う際の操作圧力
は前述の通りであり、リテンテートバルブ５により行
う。

【００２３】また、装置には必ずしもリザーバータンク
１内の溶液量を常時一定になるように水を供給する構造
を有する必要はないが、タンク内の溶液量の減少による
効率の低下を防ぐとともに、より高純度の硫酸化糖を得
るための運転を継続することが可能であるため好まし
い。

【００２４】

【実施例】以下に、本発明に係る実施例を掲げて、本発
明を更に詳しく説明する。

【００２５】実施例１ｎ−ドデシルラミナリペンタオシド３．５８gを脱水ピ
リジン１００mlに溶解しピリジンを留去した。同じ操作
を再度行った後、これを脱水ピリジン１００mlに溶解し
８７℃に加熱した。ここに三酸化硫黄ピリジン錯体を１
９．３０g添加し２時間反応させた。反応後、２層に分
離した反応溶液のピリジン層を分離しシッロプ状の反応
混合物を水１００mlに溶解した。この水溶液を、４Ｎの
水酸化ナトリウム水溶液で水素イオン濃度７．００に調
整し、溶媒留去及び凍結乾燥することにより、１２．６
６gの硫酸化ｎ−ドデシルラミナリペンタオシド（平均
分子量２４５０）と無機塩の混合物を得た。これはイオ
ンクロマト法による硫酸イオン分析と元素分析により２
６．６重量％の硫酸ナトリウムを含んでいる混合物であ
った。

【００２６】次いで、上記のようにして得られた混合物
を１０００mlの水溶液とし、１０００mg／lの食塩水を
評価液としたときの阻止率が１０％である逆浸透膜（Ｄ
ＥＳＡＬ−Ｇ５０，デザリネーションシステムズ社製、
膜面積約０．４ｍ²）を取り付けた逆浸透装置（ＭＩＬ
ＬＩＰＯＲＥ社製、ＢＥＮＣＨＴＯＰＲＥＶＥＲＳＥ
ＯＳＭＯＳＩＳＦＩＬＴＲＡＴＩＯＮＳＹＳＹＴ
ＥＭ：第１図）に入れた。これを、１０kg／cm²の圧力
となるように流量を調節し６０分間逆浸透を行った。こ
の時、操作中は原液タンク中に常に４００から５００ml
の水量があるように、液面計を用いて水を供給した。こ
のようにして得られた濾過残渣を、凍結乾燥し精製した
硫酸化ｎ−ドデシルラミナリペンタオシド８．３９gを
得た。得られた精製物をイオンクロマト法による硫酸イ
オン分析と元素分析により分析した結果、硫酸化ｎ−ド
デシルラミナリペンタオシド中に含まれる硫酸ナトリウ
ムは１．２重量％であった。また全水酸基中の硫酸エス
テル導入量を示す硫酸化度は８９％で、硫酸化糖の収率
は９２％であった。

【００２７】実施例２水酸化ナトリウム水溶液の代わりに水酸化カリウム水溶
液を用いたこと以外は、実施例１と同様の方法にて、１
１．９２ｇの硫酸化ｎ−ドデシルラミナリペンタオシド
（平均分子量２６４２）と無機塩の混合物をを得た。こ
れは、実施例１と同様の分析により２５．２重量％の硫
酸カリウムを含んでいた。次いで実施例１と同様の方法
で逆浸透を行い、得られた濾過残渣を凍結乾燥し、精製
した硫酸化ｎ−ドデシルラミナリペンタオシド８．９５
gを得た。得られた精製物を分析した結果、硫酸化糖中
に含まれる硫酸カリウムは０．３重量％であった。また
全水酸基中の硫酸エステル導入量を示す硫酸化度は８７
％で、硫酸化糖の収率は９４％であった。

【００２８】実施例３糖水酸基のうち９３％が硫酸エステル化された硫酸化ｎ
−ドデシルラミナリペンタオシド（平均分子量２５１
５）を６７重量％と硫酸ナトリウムを３７重量％含む混
合物８．００gを２００mlの水に溶解し４％のサンプル
溶液とした。これを、サッカロースをマーカーとした分
画分子量が４００、１０００mg／lの食塩水を評価液と
したときの阻止率が５０％、膜面積３４cm²である逆浸
透膜（Ｒ７５，ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ社製）を取り付けた
バッチ型の逆浸透装置（ＲＥＭＯＬＩＮＯ，ＭＩＬＬＩ
ＰＯＲＥ社製）で逆浸透による精製を行った。逆浸透
は、３５kg／cm²の圧力で行い、逆浸透装置中の水を９
５％以上透過させ、さらに装置中の液量が２００mlとな
るように水を加えて逆浸透を続けた。この操作を２５回
行い、最終的に得られた濾過残渣を凍結乾燥することに
より精製した硫酸化糖３．１２９g得た。得られた精製
物を分析した結果、硫酸化ｎ−ドデシルラミナリペンタ
オシド中に含まれる硫酸ナトリウムは３．８重量％であ
った。

【００２９】実施例４糖水酸基のうち９３％が硫酸エステル化された硫酸化ｎ
−ドデシルラミナリペンタオシド（平均分子量２５１
５）を７６重量％と硫酸ナトリウムを２３重量％含む混
合物１．００gを２５mlの水に溶解し４％のサンプル溶
液とした。これを、実施例３と同様の装置を用いて、２
０kg／cm²の圧力で逆浸透を行い、逆浸透装置中の水を
９８％以上透過させ、さらに装置中の液量が２５mlとな
るように水を加えて逆浸透を続けた。この操作を１８回
行い、最終的に得られた濾過残渣を凍結乾燥することに
より精製した硫酸化糖０．５４０g得た。得られた精製
物を分析した結果、硫酸化ｎ−ドデシルラミナリペンタ
オシド中に含まれる硫酸ナトリウムは０．４重量％であ
った。

【００３０】実施例５糖水酸基のうち９３％が硫酸エステル化されたｐ−ｎ−
オクチルオキシフェニル β−Ｄ−ガラクトピラノシル
−（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→
４）−Ｂ−Ｄ−グルコピラノシド（平均分子量１６５
８）を７６重量％と硫酸ナトリウムを２３重量％含む混
合物１．００gを２５mlの水に溶解し４％のサンプル溶
液とした。これを、実施例３と同様の装置を用いて、１
０kg／cm²の圧力で逆浸透を行い、逆浸透装置中の水を
９８％以上透過させ、さらに装置中の液量が２５mlとな
るように水を加えて逆浸透を続けた。この操作を４回行
い、最終的に得られた濾過残渣を凍結乾燥することによ
り精製硫酸化糖０．４４０g得た。得られた精製物を分
析した結果、硫酸化ｐ−ｎ−オクチルオキシフェニルβ
−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−ガラ
クトピラノシル−（１→４）−Ｂ−Ｄ−グルコピラノシ
ド中に含まれる硫酸ナトリウムは０．５重量％であっ
た。

【００３１】実施例６糖水酸基のうち９４％が硫酸エステル化された硫酸化ｎ
−ドデシルラミナリペンタオシド（平均分子量２５３
０）を５８重量％と硫酸ナトリウムを４２重量％含む混
合物２４．２５gを１０００mlの水に溶解し２．５％の
サンプル溶液とした。この溶液を、実施例１と同様の装
置で５kg／cm²の圧力で１２０分間逆浸透を行った。逆
浸透の際には、リザーバータンクにつねに４００から５
００mlの水量があるように、液面計により水を供給し
た。このようにして得られた濾過残渣を、凍結乾燥し精
製した硫酸化糖８．３９gを得た。得られた精製物を分
析した結果、硫酸化ｎ−ドデシルラミナリペンタオシド
中に含まれる硫酸ナトリウムは０．１重量％であった。

【００３２】実施例７糖水酸基のうち８７％が硫酸エステル化された硫酸化ｐ
−ｎ−オクチルフェニルラミナリペンタオシド（平均分
子量２４３７）を５３重量％と硫酸ナトリウムを４７重
量％含む混合物４０．１２gを１０００mlの水に溶解し
４％のサンプル溶液とした。この溶液を、実施例１と同
様の装置で５kg／cm²の圧力となるように流量を調節し
１２０分間逆浸透を行い硫酸ナトリウムを透過させた。
逆浸透の際には、リザーバータンクにつねに４００から
５００mlの水量があるように、液面計により水を供給し
た。このようにして得られた濾過残渣を、凍結乾燥し精
製した硫酸化糖１８．７３gのを得た。得られた精製物
を分析した結果、硫酸化ｐ−ｎ−オクチルフェニルラミ
ナリペンタオシド中に含まれる硫酸ナトリウムは０．１
重量％であった。

【００３３】実施例８糖水酸基のうち８７％が硫酸エステル化された硫酸化ｎ
−ドデシルラミナリペンタオシド（平均分子量２４１
７）を５３重量％と硫酸ナトリウムを４７重量％含む混
合物１８．９５gを１０００mlの水に溶解し１．９％の
サンプル溶液とした。この溶液を、実施例１と同様の装
置で３kg／cm²の圧力となるように流量を調節し３００
分間逆浸透を行った。逆浸透の際には、リザーバータン
クにつねに４００から５００mlの水量があるように、液
面計により水を供給した。このようにして得られた濾過
残渣を、凍結乾燥し精製した硫酸化ｎ−ドデシルラミナ
リペンタオシド９．０５gを得た。得られた精製物を分
析した結果、硫酸化ｎ−ドデシルラミナリペンタオシド
中に含まれる硫酸ナトリウムは検出限界の０．１重量％
未満であった。

【００３４】実施例９糖水酸基のうち９１％が硫酸エステル化された硫酸化ト
コフェリルラミナリペンタオシド（平均分子量２７７
０）を６０重量％と硫酸ナトリウムを４０重量％含む混
合物２０．００gを１０００mlの水に溶解し２％のサン
プル溶液とした。この溶液を、実施例１と同様の装置で
５kg／cm²の圧力となるように流量を調節し１２０分間
逆浸透を行い硫酸ナトリウムを透過させた。逆浸透の際
には、リザーバータンクにつねに４００から５００mlの
水量があるように、液面計により水を供給した。このよ
うにして得られた濾過残渣を、凍結乾燥し精製した硫酸
化トコフェリルラミナリペンタオシド１１．４１gを得
た。得られた精製物を分析した結果、硫酸化トコフェリ
ルラミナリペンタオシド中に含まれる硫酸ナトリウムは
０．４重量％であった。

【００３５】実施例１０糖水酸基のうち８９％が硫酸エステル化された硫酸化ｎ
−ドデシルラミナリオクタオシド（平均分子量２４５
０）を６０重量％と硫酸ナトリウムを４０重量％含む混
合物１．００gを２５mlの水に溶解し４％のサンプル溶
液とした。これを、実施例３と同様の装置を用いて、１
０kg／cm²の圧力で逆浸透を行い、逆浸透装置中の水を
９８％以上透過させ、さらに装置中の液量が２５mlとな
るように水を加えて逆浸透を続けた。この操作を５回行
い、最終的に得られた濾過残渣を凍結乾燥することによ
り精製した硫酸化糖を０．５５g得た。得られた精製物
を分析した結果、硫酸化ｎ−ドデシルラミナリオクタオ
シド中に含まれる硫酸ナトリウムは０．３重量％であっ
た。

【００３６】実施例１１糖水酸基のうち６４％が硫酸エステル化された硫酸化マ
ルトペンタオース（平均分子量１９３９）を５０重量％
と硫酸ナトリウムを５０重量％含む混合物０．５０gを
２５mlの水に溶解し２％のサンプル溶液とした。これ
を、実施例３と同様の装置を用いて、１０kg／cm²の圧
力で逆浸透を行い、逆浸透装置中の水を９８％以上透過
させ、さらに装置中の液量が２５mlとなるように水を加
えて逆浸透を続けた。この操作を４回行い、最終的に得
られた濾過残渣を凍結乾燥することにより精製した硫酸
化糖０．２０gを得た。得られた精製物を分析した結
果、硫酸化マルトペンタオース中に含まれる硫酸ナトリ
ウムは０．３重量％であった。

【００３７】実施例１２ｎ−ドデシルラミナリペンタオシドの水酸基が平均３１
％がベンゾイル基で置換され残りの水酸基の９１％が硫
酸エステルである硫酸化糖（平均分子量２５３９）を４
０重量％と硫酸ナトリウムを６０重量％含む混合物１．
００gを２５mlの水に溶解し４％のサンプル溶液とし
た。これを、実施例３と同様の装置で、５kg／cm²の圧
力で逆浸透を行い、逆浸透装置中の水を９８％以上透過
させ、さらに装置中の液量が２５mlとなるように水を加
えて逆浸透を続けた。この操作を５回行い、最終的に得
られた濾過残渣を凍結乾燥することにより精製硫酸化糖
０．３５gを得た。得られた精製物を分析した結果、硫
酸化糖中に含まれる硫酸ナトリウムは０．５重量％であ
った。

【００３８】実施例１３１０gのカードラン（和光純薬製）を２００mlの無水ジ
メチルスルホキシドに懸濁させ加熱し溶解させた。これ
を、８５℃の温度で安定となった後にピペリジン硫酸を
６１g添加し２時間攪拌し反応させたた。反応後、反応
溶液を室温まで冷却し蒸留水５００mlに溶解した。この
水溶液を、４Ｎの水酸化ナトリウム水溶液で水素イオン
濃度７．００に調整し、溶媒留去及び凍結乾燥すること
により、４９．００gのカードラン硫酸を得た。これ
は、分析により７１．２重量％の硫酸ナトリウムを含ん
でいた。

【００３９】次いで、上記のようにして得られた混合物
を１０００mlの水溶液とし、実施例１と同様の装置で、
１０kg／cm²の圧力となるように流量を調節し２時間逆
浸透を行った。この時、操作中は原液タンク中に常に４
００から５００mlの水量があるように、液面計を用いて
水を供給した。このようにして得られた濾過残渣を、凍
結乾燥し精製したカードラン硫酸１３．９１gを得た。
得られた精製物を分析した結果、カードラン硫酸中に含
まれる硫酸ナトリウムは０．１重量％であり、全水酸基
中の硫酸エステル導入量を示す硫酸化度は６９％であ
り、カードラン硫酸の収率は９７％であった。また、ゲ
ルパーミネーションクロマトグラフィーにより測定した
カードラン硫酸のデキストラン基準の平均分子量は５８
０００であった。

【００４０】実施例１４平均分子量８０００のデキストラン硫酸を７５重量％と
硫酸ナトリウムを２５重量％含む混合物１．００gを２
５mlの水に溶解し４％のサンプル溶液とした。これを、
実施例３と同様の装置を用いて、１０kg／cm²の圧力で
逆浸透を行い、逆浸透装置中の水を９８％以上透過さ
せ、さらに装置中の液量が２５mlとなるように水を加え
て逆浸透を続けた。この操作を４回行い、最終的に得ら
れた濾過残渣を凍結乾燥することにより精製した硫酸化
糖０．６８７gを得た。得られた精製物を分析した結
果、デキストラン硫酸中に含まれる硫酸ナトリウムは
０．２重量％であった。

【００４１】比較例１糖水酸基のうち９４％が硫酸エステル化された硫酸化ｎ
−ドデシルラミナリペンタオシド（平均分子量２５３
２）７５重量％と硫酸ナトリウム２５重量％を含む混合
物を０．２００gを１０mlの水溶液とし、ＦＩＬＴＲＯ
Ｎ社製の排除限界分子量５０００、膜面積７cm²のＮＯ
ＶＡＣＥＬＬを取り付けたＦＩＬＴＲＯＮ社製スターラ
ーセルキットを用いて３Kg/cm2の圧力で３時間限外ろ過
を行った。得られた濃縮液０．５mlを凍結乾燥し、０．
００８gの精製した硫酸化糖を得た。精製物を分析した
結果、硫酸化ｎ−ドデシルラミナリペンタオシド中に含
まれる硫酸ナトリウムは０．１％であったが、限外ろ過
での硫酸化糖の阻止率は１．２％であり、硫酸ナトリウ
ムと共にほとんどの硫酸化糖も膜を透過してしまった。

【００４２】比較例２ｎ−ドデシルラミナリペンタオシド１００mgを脱水ピリ
ジン１０mlに溶解させ、三酸化硫黄ピリジン錯体５１１
mgを加え、８５℃で１時間反応させた。反応後、２層に
分離した反応溶液のピリジン層を分離しシロップ状の反
応混合物を水溶解し、２．５Ｎの水酸化ナトリウム水溶
液で水素イオン濃度を７．００に調整し、溶媒留去及び
凍結乾燥することにより、糖硫酸基のうち９４％が硫酸
エステル化された硫酸化糖を７５重量％と硫酸ナトリウ
ムを２５重量％含む混合物を得た。この混合物を１０ml
の水溶液とし、マイクロアシライザー（旭化成工業
（株）社製、イオン交換分離装置：ＡＣ１１０−１０イ
オン交換膜使用、膜面積２０cm ²、通電面積１０cm²）に
より１２０分脱塩を行い精製した。精製物を分析した結
果、硫酸ナトリウム含量は１８．７％であった。これ
を、さらに合計１６時間脱塩を行い分析した結果、硫酸
ナトリウム含量は１．１％であり、硫酸化糖の収率は８
３％であった。

【００４３】

【発明の効果】逆浸透膜を用いることにより、短時間で
効率よく、純度の高い硫酸化糖を高収率で得ることが出
来る。特に水溶性の無機塩と硫酸化オリゴ糖のように、
分子量が同程度であり、通常の限外ろ過では分離できな
いものの分離の際でも、純度の高い硫酸化糖を収率良く
得ることが出来る。

【図面の簡単な説明】

【図１】第１図は、本発明の実施に用いる装置の概略図
である。

【符号の説明】

１リザーバータンク２ポンプ３圧力計４逆浸透膜モジュール５リテンテートバルブ６回収バルブ

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】硫酸化糖と無機塩との分離において、逆
浸透膜を用いる事を特徴とする硫酸化糖の精製方法。
【請求項２】硫酸化糖の分子量が５００〜２００００
である請求項１記載の精製方法。
【請求項３】硫酸化糖の構成単糖数が１〜３０である
請求項１記載の精製方法。
【請求項４】硫酸化糖の構成単糖数が３〜１０である
請求項３記載の精製方法。
【請求項５】硫酸化糖が、糖の水酸基の１０％以上が
硫酸エステル化されたものである請求項１、２又は３記
載の精製方法。
【請求項６】硫酸化糖が糖の水酸基の５０％以上が硫
酸エステル化されものである請求項５記載の精製方法。
【請求項７】逆浸透膜の阻止率が１０００mg／lの食
塩水を評価液としたときに１％以上８０％以下である請
求項１〜６のいずれか１項記載の精製方法。
【請求項８】逆浸透膜の分画分子量が１００以上５０
００以下である請求項１〜６のいずれか１項記載の精製
方法。
【請求項９】逆浸透膜の操作圧力が１kg／cm²以上４
５kg／cm²以下である請求項７又は８記載の精製方法。
【請求項１０】無機塩が、水酸イオン、硫酸イオン、
硫酸水素イオン、塩素イオン、硝酸イオンから選ばれた
少なくとも一種の陰イオンからなるアニオン部と、水素
イオン、リチウムイオン、ナトリウムイオン、カリウム
イオン、カルシウムイオンの少なくとも一種の陽イオン
から選ばれた陽イオンからなるカチオン部との組み合わ
せからなる塩である請求項９記載の精製方法。
【請求項１１】無機塩が、水酸イオン、硫酸イオン、
硫酸水素イオン又は塩素イオンからなるアニオン部と、
リチウムイオン、ナトリウムイオン又はカリウムイオン
からなるカチオン部との組み合わせからなる塩である請
求項１０記載の精製方法。
【請求項１２】無機塩が硫酸ナトリウム、硫酸カリウ
ム、硫酸水素ナトリウム又は硫酸水素カリウムである請
求項１１記載の精製方法。
【請求項１３】硫酸化糖が水酸基の一部をアシル基で
置換した糖である請求項１０記載の精製方法。
【請求項１４】硫酸化糖が配糖体構造を有する化合物
である請求項１０又は１３記載の精製方法。
【請求項１５】硫酸化糖が、アグリコンとしてアルキ
ル基、アルキルフェニル基、アルコキシフェニル基、又
はトコフェリル基を有する配糖体である請求項１４記載
の精製方法。
【請求項１６】硫酸化糖が硫酸エステル基以外では置
換されていない未置換の糖である請求項１０記載の精製
方法。
【請求項１７】硫酸化オリゴ糖と無機塩を含む溶液を
逆浸透膜に通液することにより、無機塩を除去すること
を特徴とする硫酸化糖の精製方法。