JPS60156697A - フラクトース‐１，６‐ジホスフエート酸溶液の製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ′　［産業上の利用分野コ 本発明□はプラクドース−１，６−ジホスフェート酸溶
液の製法、特にフラクトース−１，６−ジホスフェート
’（Ｆ　Ｄ　Ｐ　）およびその異性体を製造するために
有用な試剤であるフラクトース−１，６−ジ永スフエー
ト酸（ＦＤＰＨ４）を工業的規模で製造する方法に関す
る。

［従来の技術］ フラクトース−１，６−ジポスフエー、ト（ＦＤＰ）は
医薬の分野で広く用いられている、高い糖代謝作用を有
する物質であする。特に、その２種類の異□性体、すな
わちフラクトース−２，６−ジホスフェートＦ２，６Ｐ
２およびフラクトース−１，２−サイクリックホスフェ
ート−６−ホスフェート（ＦＩＩ）ＰＣ）は好んで使用
される。

これら２種類の異性体を工業的規模で生産するには、基
本的試剤であるフラクトース−１，６−ジホスフェート
酸（ＦＤＰＨ，）の極めて純度の高い、濃厚溶液を必要
とする。

［発明が解決しようとする問題点］ 従って、本発明が解決せんとする課題は、凍結乾燥粉末
としてＦＤＰ塩およびその異性体を製造するのに適した
溶液を得るのに役立つＦＤＰＨ。

の極めて純粋な溶液を得る点にある。

ＦＤＰおよびその塩を」−集的に生産するために現在採
用されている方法は、 ａ）酵母を使用した生物学的発酵液を酸で停止させた後
、ＦＤＰを不溶性塩として沈澱けじめ、ｂ）イオレ交換
クロマトグラフィー、次いでアルカリ中和により沈澱物
を塩に変換させることから成る。

しかしながら、ここに得られた溶液は多くの不純物を含
んでいるため、他の精製工程を必要とするが、かかる精
製工程は塩沈澱法（大量の溶媒を使用し、強く水和され
た塩類を分離しなければならない不便さがある。）や凍
結乾燥法によって実施され、他方、不純物含量の高いｒ
；”′Ｄｐ塩が生産“される。

特に、ＦＤＰの工業的生産のために現在採用されている
系では、ｉ；”Ｄｐ　ｃやＦ２，６Ｐ２生産の基礎的試
剤である尻り純度と一度、を待ったＦＤＰＨ４溶液を直
、接に得ることが出来ない。現在まで、これらの物質は
、ＦＤＰＨ，溶液製造のために、ＦＤＰナトリウム塩結
晶を２回蒸留した水に溶解させ、次いでこの溶液をカチ
オン交換樹脂で処□理　−し、その後この樹脂を遠心分
離すると言う複雑かつ高価な方法を使用して実験質的規
模でのみ製造されて来た。

［問題点を解決するための手段］ 本発明者は鋭意研究を進めた結果、高純度かつ２愕濃度
でＦ　Ｄ　Ｐ　１−ＩＬを工業的に生産する方法を確Ｊ
するに至った。この方法は生物学的発酵法により製造さ
れたＦＤＰを不溶性塩の形で沈澱させる必要もなく、Ｆ
、、１）ＰＨ，またはその塩をそれらの溶液にｎ機溶媒
を加えることによって結晶として沈澱させる精製手段を
適用６−る必要もない。

１−作用と効果］ 以下に本発明方法の典型的な実施態様の一例を説明する
が、これによって本発明の技術的範囲が限定４゛るもの
と理解されてはならない。

酵母を使用する生物学的発酵法によって得られたグルコ
ースの溶液に無機リン酸塩を加えたものを出発原料とし
た。発酵液は８５℃において２分間殺、菌し、次いでろ
過することにより酵母細胞および熱にｊ；って変性した
不溶性蛋白質を除去し、脱蛋白した。殺菌の代わりに塩
酸処理により脱蛋白を行ってもよい。

得られた溶液に次の操作を施した： ａ）該溶液を強力チオン性樹脂を使用するクロマトグラ
フィーに付して叶ＩＩ以下とし、ｂ）ここに得られた酸
性溶液を強アニオン性樹脂を使用するクロマトグラフィ
ーにイτ１してＦＤＰＨ４および他のリン酸アニオンを
固定し、クロマト塔を水で洗って非固定物質を除去し、
Ｃ）イオン強度を上昇させた２種の溶出溶媒を使用して
３段階で溶出を行い、一部のホスホリル化炭水化物（第
１の溶出溶媒を使用した第１層）と残りのホスホリル化
炭水化物（第２の溶出溶媒２５％を使用した第２層）か
ら成る無機ホスフェートを除去する一方、ＦＤ１〕Ｈ４
（第２の溶出溶媒の残部を使用した第３層）を集め、 ｄ）ここに集めノこＦＤＰＨ，を含む溶出液をＮａＯＨ
で部分中和してｐＨ３とし、 ｅ）これを分子ろ過してＮａＣＱと水の一部を除去し、 ｆ）これを強力チオン性樹脂を使用するクロマトゲラフ
イーに付してｐＨ１以下に至らしめる。

ここに得られた溶液は高純度、高濃度の１”　Ｄ　Ｐｌ
、を含んでいる（２０％まで）。

上記の溶液を適当に中和して凍結乾燥に付し、得られた
塩を分析したところ、次表の結果が得られた。ただし、
この表の結果は−・例に過ぎないものであり、Ｎｏ、ｌ
は本発明の実施例、Ｎｏ、ＩＩは従来法による比較例を
示す。

１ Ｆ　Ｄ　ＩンＨ４％　６　２．４　７　５．２　５＋３
０４−一％　５，１５　０．１８　、Ｆ６ｆ”　−％　
０．８６　０．８７ Ｇ　６　Ｐ−一％　０．９１　−、− ０１０％　７．７”ｌ　７．８８ Ｎａ・　％　１４．５３　Ｎ　５．３１従って、本発明
方法は分子ろ過にカチオン性クロマＩ・グラフィーとア
ニオン性クロマトグラフィー処理を結合さゼたものであ
る。

［実施例］ 以下に本発明方法を実施例によって説明する。

実施例 発酵液２Ｑを８５℃で２分間殺菌し、ろ過土適量を加え
、ガラスシートを使用してろ過し、不溶性残渣を除去す
る。ここに得られた澄明ろ成約１゜５ｐを強力チオン性
樹脂の塔を通過させ、次いで強アニオン性樹脂の塔を通
過させた。この際の処理条件は以下の通りである： 強力チオン性樹脂：２００ｚ（７アンバーライトＩＲＧ
１２０Ｈ−型またはシュオライドｃ２６４Ｈ−型；カラ
ム、ベッド高さ５００ｙｔｘ、内径２５Ｒ屑；供給速度
、５屑Ｑ／分。

強アニオン性樹脂：３５０ｚρシュオライド３７４　Ｃ
’ｌ−型：カラム、ベッド高さ５７ｏＩＲ１内径２５ｘ
ｉ；溶出速度２０ｄ７分。

前記ろ液全量をカチオン塔に供給し、流下液をアニオン
塔に通ず。両塔を蒸留水４００１（！で洗う。

次いで両塔の接合を切り放し、アニオン塔のみの溶出を
行う。供給液およびアニオン塔溶出液のＦＤｒ’Ｈ，濃
度は予め次のように決定された：供給液中のＦ１月］１
１い６５ｇ、アニオン塔溶出液中のＦｌ）　Ｉ）　ＩＩ
い２８ｇ（洗浄水を含む）。溶出を３段階で行う・第１
段階ではＮＨ，Ｃ１２１，４ｇを含む溶液２．５（Ｌｌ
−Ｎｌｌ、２５％／（１２ｘ（ｌを流４゛、第２および
第３段階では２１２の溶出溶媒１３（ＮａＣσ０．２Ｎ
−１１Ｃｌ２Ｏ、０５Ｎ）を通過ｕしめる。２５０ａ＋
＋２２回、５００１ρ残りの５フラクシヨンを集める。

モノホスフェート炭水化物および無機ホスフェート（第
２段階）を含んでいるので、第１段階および必要とあれ
ば第２段階の溶出液を除去する。他の溶出液は合して１
５００〜１７５０の容量とし、Ｆ　Ｄ　Ｐ　Ｈ、濃度は
約２２５〜２．５％である（第３段階）、、この溶出液
を中和してｐＨ４、３とし、逆浸透にかけて有機アニオ
ンおよび存在する場合には金属塩を除去し、高純度のＦ
ＤＰ溶液を得る。

操作条件 操作圧力；２４気圧 分子ふるいろ過膜：セルローズアセテート製００ ろ過膜＋ｍｑ１．５ ＮａＯＨで適宜に中和された溶液を凍結乾燥して、先の
表に示した分析特性を有４°る塩を得る。

ただし、上記操作に対し必要に応し多少の変更が行なわ
れてもよい。たとえば溶出液を中和するためピリジンを
使用することが出来るが、これは次のＦ段階（強力チオ
ン性樹脂によるクロマトグラフィー）を除くことを可能
にするしのであり、２種の前記異性体を製造リーるのに
直接使用することが出来るＦＤＰピリジン塩を得る。

また、Ｂ段階の中和のためにＫ　ＯＨを使用してもよく
、これによって常にＦ段階を除くことが可能であり、更
にＫ　Ｏ１，１で中和するときはＦ　Ｄ　Ｐカリウム塩
の調製に使用されうるか、凍結乾燥粉末の形で使用され
うるカリウム塩を得ることが出来る。

これに反し、Ｅ段階の終わりで発明方法を中止すること
ｊこより得られた溶液は、ＮａＯＨて予め中和すること
により、Ｆ　Ｄ　Ｉ）塩を溶液または凍結乾燥粉末の形
で得るために使用することが出来る。

すなわち、本発明の方法はフラクトース−１，６−シボ
スフエートを従来法では決して達成されないような優れ
た収率と純度でもって工業的に製造することか出来るも
のである。

以」−１本発明方法を説明したが、本発明の技術的精神
を逸脱しない範囲において、種々の改変が当業者にとっ
て可能であることは言うまでもない。

特許出願人　ビオメゾイカ・フォスカマ・インドコスリ
ア・キミコーファルマチェウティ 力・エッセ・ピ・ア 代理人弁理士　青　山　葆　はか１名

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ■　フラクトース−１，６−ジホスフェート溶液精製の
   ため、重複クロマトグラフィー（カチオン性およびアニ
   オン性）および分子ろ過を適用することを特徴とするフ
   ラクトース−１，６−ジホスフエート酸溶液の製法。 ２、酵母を使用する生物学的発酵法によって得られたグ
   ルコース含有溶液に無機ホスフェートを添加して調製さ
   れた溶液を下記の操作に付することを特徴とする特許請
   求の範囲第１項に記載の製法：　１ ａ）前記溶液を強力チオン性樹脂を使用するクロマトグ
   ラフィーに付すこと、 ｂ）この溶液を強アニオン性樹脂を使用するクロマトグ
   ラフィーに付し、クロマト塔を水で洗うこと、 Ｃ）こ、の塔の溶出を行うこと、 ｄ）この溶出液を部分中和してｐＨ３とすること、ｅ）
   これを分子ろ過すること、 ｆ）これを強力チオン性樹脂を使用するクロマトグラフ
   ィーに付して１）Ｈ１以下に至らしめること。　′ ３．０における溶出がイオン強度を増大させた２種の溶
   出溶媒を使用して３段階で行なわれる特許請求の範囲第
   ２項に記載の製法。 ４、ｄ）における中和がピリジンの使用で行なわれる特
   許請求の範囲第２項に記載の製法。 ５、ｄ）における中和がＫ　ＯＨの使用で行なわれる特
   許請求の範囲第２項に記載の製法。