JP2022531356A - ｈＰＬ含有培地で培養された中間葉幹細胞の培養液を含む化粧料組成物 - Google Patents
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Abstract
本発明は、ヒト血小板溶解物（ｈｕｍａｎ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｌｙｓａｔｅ；ｈＰＬ）含有培地で培養された中間葉幹細胞を無血清培地で培養して得た成長因子（ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ）及びサイトカインを含有する幹細胞培養液の製造方法及び前記幹細胞培養液を利用した化粧料組成物に関する。本発明のｈＰＬ含有培地に中間葉幹細胞を培養した中間葉幹細胞培養液の製造方法を利用すると、ＦＢＳ含有培地に中間葉幹細胞を培養した中間葉幹細胞培養液よりサイトカイン及び成長因子の含量が高く、ヒト真皮線維芽細胞増殖促進能、コラーゲン合成能、エラスチン合成能、メラニン合成抑制能及び発毛効能に優れた中間葉幹細胞培養液を収得でき、前記中間葉幹細胞培養液を利用して皮膚再生、シワ改善、皮膚弾力増進、皮膚美白及び発毛効果のある化粧料を作製でき、化粧品の分野及び医薬業界で広く使用することができる。
Description
本発明は、ヒト血小板溶解物（ｈｕｍａｎ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｌｙｓａｔｅ；ｈＰＬ）含有培地で培養された中間葉幹細胞を無血清培地で培養して得た成長因子（ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ）及びサイトカインを含有する幹細胞培養液の製造方法及び前記幹細胞培養液を利用した化粧料組成物に関する。
皮膚の老化は、大きく２種類に分けられて研究されているが、一つは「内的老化」であって、年齢の増加による老化現象であり、もう一つは「外的老化」であって、外部環境、即ち、紫外線や公害等による老化現象をいう。皮膚の老化に関しては、今まで様々な理論が提示されているが、その中で皮膚の老化に最も科学的に接近した理論は、酸化による皮膚老化理論である。ヒトの皮膚は、角質層を含む表皮と真皮、そして結合組織で構成されているが、その中で角質層は、表皮（ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ）の基底細胞であるケラチノサイト（ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ）の分化過程を通して形成される死んだ細胞層で構成されており、人体を外部環境の影響から保護する役割を担当している。また、皮膚の内部に存在する真皮層は、コラーゲン（ｃｏｌｌａｇｅｎ）とエラスチン（ｅｌａｓｔｉｎ）で構成されており、皮膚の弾力を与えて皮膚がたるまないように守る役割を担当している。抗酸化理論は、コラーゲンとエラスチンが外部の紫外線等の因子により生成されたフリーラジカル（ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌ）により損傷を受けるようになり、これによって皮膚の弾力が減少してシワが生成されるという理論である。
今までは、このような皮膚の老化、特にシワを防止するためにレチノールのような物質や植物抽出物等を使用してきた。しかし、この物質は、その効果が低いか、または皮膚刺激、発赤、炎症を誘発して皮膚に対する副作用が深刻であるという短所を有している。
ヒトの肌色は、皮膚内部のメラニン（ｍｅｌａｎｉｎ）の濃度と分布によって決定されるが、遺伝的な要因の他にも、太陽紫外線や疲労、ストレス等の環境的または生理的な条件によっても影響を受ける。メラニンは、アミノ酸の一種であるチロシン（ｔｙｒｏｓｉｎｅ）にチロシナーゼ（ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ）という酵素が作用してドーパ（ＤＯＰＡ）、ドーパキノン（ｄｏｐａｑｕｉｎｏｎｅ）に変わった後、非酵素的な酸化反応を経て合成される。このようなメラニンの合成が皮膚内で過度に起こると、皮膚のトーンを暗くし、しみ、そばかす等を発生させることもある。従って、皮膚内のメラニン色素の合成を阻害すると、皮膚のトーンを明るくして皮膚美白を実現できるだけではなく、紫外線、ホルモン及び遺伝的な原因に起因して発生するしみ、そばかす等の皮膚の過色素沈着症を改善させることができる。従来は、ヒドロキノン（ｈｙｄｒｏｑｕｉｎｏｎｅ）やアスコルビン酸（ａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ）、コウジ酸（ｋｏｊｉｃ ａｃｉｄ）、グルタチオン（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ）のようなチロシナーゼに阻害活性を有する物質を軟膏や化粧料に配合して、皮膚美白やしみ、そばかすを改善する目的で使用してきた。その中でヒドロキノンが色素沈着に対して数十年間最も効果的な成分として使用されてきたが、長期間の使用に対してアレルギー反応等の副作用（白い斑点、黒い斑点）が発生し得るという報告があり、多くの国で使用の制約を受ける傾向にある。グルタチオン、システイン等のチオール（ｔｈｉｏｌ）系化合物は、特有の不快な臭いと経皮吸収に問題があり、使用するには問題がある。また、これらの配糖体及び誘導体は極性が高く、化粧料の配合成分として使用するには問題がある。
また、チロシナーゼ酵素の活性を阻害して美白効果を示すアスコルビン酸は酸化しやすく、これを配合した化粧料は、変色、変臭する等の問題を引き起こし、その不安定性を克服するために、アスコルビルパルミテート（Ａｓｃｏｒｂｙｌｐａｌｍｉｔａｔｅ）、アスコルビルジパルミテート（Ａｓｃｏｒｂｙｌ－ｄｉｐａｌｍｉｔａｔｅ）、アスコルビルステアレート（Ａｓｃｏｒｂｙｌ ｓｔｅａｒａｔｅ）、アスコルビルマグネシウムホスフェート（Ａｓｃｏｒｂｙｌ ｍａｇｎｅｓｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）等の誘導体が開発されて使用されているが、特殊な技術を使用しなければ皮膚の中に浸透させにくく、チロシナーゼ阻害活性が低いという短所を有している。従って、少量でもチロシナーゼ阻害活性を示し、メラニン生合成を阻害できる阻害剤の開発が要求されている。
そこで、本発明者は、シワ改善効果、美白効果及び発毛効果に優れた化粧料を開発するために鋭意努力した結果、ｈＰＬを含む培地に幹細胞を培養して収得した幹細胞培養液が、ＦＢＳを含む培地に幹細胞を培養して収得した幹細胞培養液より、サイトカイン及び成長因子が豊富で、ヒト真皮線維芽細胞増殖促進能、コラーゲン合成能、エラスチン合成能、メラニン合成抑制能及び発毛促進能に優れることを確認して、機能性化粧料として卓越した効果があることを明らかにし、本発明を完成するに至った。
従って、本発明の目的は、成長因子及びサイトカインが豊富な中間葉幹細胞培養液の製造方法、前記方法で製造した中間葉幹細胞培養液、及び前記中間葉幹細胞培養液を含む皮膚再生用化粧料組成物、前記中間葉幹細胞培養液を含むシワ改善及び皮膚弾力増進用化粧料組成物、前記中間葉幹細胞培養液を含む皮膚美白用化粧料組成物、及び前記中間葉幹細胞培養液を含む発毛または育毛促進用化粧料組成物を提供することである。
前記目的を達成するために、本発明は、１）中間葉幹細胞をヒト血小板溶解物（ｈｕｍａｎ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｌｙｓａｔｅ、ｈＰＬ）が含まれた培地で培養するステップ；２）培養された幹細胞を収得して無血清培地で培養するステップ；及び３）中間葉幹細胞由来培養液を収去し、ろ過して幹細胞培養液を収得するステップ；を含む成長因子及びサイトカインが豊富な中間葉幹細胞培養液の製造方法を提供する。
また、本発明は、１）中間葉幹細胞をヒト血小板溶解物（ｈｕｍａｎ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｌｙｓａｔｅ、ｈＰＬ）が含まれた培地で培養するステップ；２）培養された幹細胞を収得して無血清培地で培養するステップ；及び３）中間葉幹細胞由来培養液を収去し、ろ過して幹細胞培養液を収得するステップ；を含む成長因子及びサイトカインが豊富な皮膚再生、シワ改善、皮膚美白、発毛用化粧料組成物製造用中間葉幹細胞培養液の製造方法を提供する。
また、本発明は、前記製造方法で製造された成長因子及びサイトカインが豊富な中間葉幹細胞培養液を提供する。
また、本発明は、前記中間葉幹細胞培養液を含む皮膚再生用化粧料組成物を提供する。
また、本発明は、前記中間葉幹細胞培養液を含むシワ改善及び皮膚弾力増進用化粧料組成物を提供する。
また、本発明は、前記中間葉幹細胞培養液を含む皮膚美白用化粧料組成物を提供する。
また、本発明は、前記中間葉幹細胞培養液を含む発毛または育毛促進用化粧料組成物を提供する。
本発明のｈＰＬ含有培地に中間葉幹細胞を培養した中間葉幹細胞培養液の製造方法を利用すると、ＦＢＳ含有培地に中間葉幹細胞を培養した中間葉幹細胞培養液よりサイトカイン及び成長因子の含量が高く、ヒト真皮線維芽細胞増殖促進能、コラーゲン合成能、エラスチン合成能、メラニン合成抑制能及び発毛効能に優れた中間葉幹細胞培養液を収得でき、前記中間葉幹細胞培養液を利用して皮膚再生、シワ改善、皮膚弾力増進、皮膚美白及び発毛効果のある化粧料を作製でき、化粧品の分野及び医薬業界で広く使用することができる。
本発明は、１）中間葉幹細胞をヒト血小板溶解物（ｈｕｍａｎ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｌｙｓａｔｅ、ｈＰＬ）が含まれた培地で培養するステップ；２）培養された幹細胞を収得して無血清培地で培養するステップ；及び３）中間葉幹細胞由来培養液を収去し、ろ過して幹細胞培養液を収得するステップ；を含む成長因子及びサイトカインが豊富な中間葉幹細胞培養液の製造方法を提供する。
本発明における「ヒト血小板溶解物（ｈｕｍａｎ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｌｙｓａｔｅ、ｈＰＬ）」は、ヒトの血小板凍結（ｆｒｅｅｚｅ）／解凍（ｔｈａｗ）後に得られる濁った淡黄色の液体である。血小板凍結／解凍は、血小板を溶解して細胞拡張に必要な多くの量の成長因子を放出する。
本発明における「ヒト血小板溶解物（ｈｕｍａｎ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｌｙｓａｔｅ、ｈＰＬ）」は、ヒトの血小板凍結（ｆｒｅｅｚｅ）／解凍（ｔｈａｗ）後に得られる濁った淡黄色の液体である。血小板凍結／解凍は、血小板を溶解して細胞拡張に必要な多くの量の成長因子を放出する。
本発明において、「幹細胞培養液」とは、幹細胞を培養して得た培地に含まれた構成成分を含む物質であって、前記培養液を製造するための中間葉幹細胞は、その種類に制限を受けない。軟骨、骨組織、脂肪組織及び骨髄由来の幹細胞であってよく、好ましくは骨髄由来の中間葉幹細胞である。
本発明の前記中間葉幹細胞培養液の製造方法においては、前記「１）ステップ」の培養時、ｈＰＬが含まれた培地で培養し、前記「２）ステップ」の培養時、無血清培地で培養し、この後、収得された幹細胞培養液を使用することを特徴とし得る。
前記２）ステップの工程を経ることで、収得された幹細胞培養液内に血清と抗生剤が含まれず、化粧料組成物に適した幹細胞培養液を収得することができる。
本発明において、幹細胞培養のための培地は、当業界に知られた基本培地を制限なく使用することができる。基本培地は、人為的に合成して製造でき、商業的に製造された培地を使用することもできる。商業的に製造される培地の例を挙げると、ＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ）、ＭＥＭ（Ｍｉｎｉｍａｌ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ）、ＢＭＥ（Ｂａｓａｌ Ｍｅｄｉｕｍ Ｅａｇｌｅ）、ＲＰＭＩ １６４０、Ｆ－１０、Ｆ－１２、α－ＭＥＭ（α－Ｍｉｎｉｍａｌ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ）、Ｇ－ＭＥＭ（Ｇｌａｓｇｏｗ’ｓ Ｍｉｎｉｍａｌ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ）及びＩｓｏｃｏｖｅ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ等があり、これに限定されるものではない。
本発明において、幹細胞培養のための培地は、当業界に知られた基本培地を制限なく使用することができる。基本培地は、人為的に合成して製造でき、商業的に製造された培地を使用することもできる。商業的に製造される培地の例を挙げると、ＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ）、ＭＥＭ（Ｍｉｎｉｍａｌ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ）、ＢＭＥ（Ｂａｓａｌ Ｍｅｄｉｕｍ Ｅａｇｌｅ）、ＲＰＭＩ １６４０、Ｆ－１０、Ｆ－１２、α－ＭＥＭ（α－Ｍｉｎｉｍａｌ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ）、Ｇ－ＭＥＭ（Ｇｌａｓｇｏｗ’ｓ Ｍｉｎｉｍａｌ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ）及びＩｓｏｃｏｖｅ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ等があり、これに限定されるものではない。
本発明に使用される培地は、抗酸化剤を含まない培地、前記培地に抗酸化剤が加えられた培地または抗酸化剤を含む培地をいずれも含むことができる。
抗酸化剤を含まない培地としては、これに制限されるものではないが、ＤＭＥＭ培地を使用することができ、必要に応じて前記培地に抗酸化剤をさらに加えて培養を遂行することができる。また、必要に応じて抗酸化剤が含まれたα－ＭＥＭ培地を利用して培養を遂行することができる。
抗酸化剤を含まない培地としては、これに制限されるものではないが、ＤＭＥＭ培地を使用することができ、必要に応じて前記培地に抗酸化剤をさらに加えて培養を遂行することができる。また、必要に応じて抗酸化剤が含まれたα－ＭＥＭ培地を利用して培養を遂行することができる。
本発明の抗酸化剤は、細胞培養に使用され得る抗酸化剤を制限なく含むことができ、グルタリオン、システイン、システアミン、ユビキノール、β－メルカプトエタノール及びアスコルビン酸からなる群から選択された１種以上であってよい。抗酸化剤が培地に加えられる場合、前記抗酸化剤は、１０～５０、好ましくは１０～３０、さらに好ましくは２５μｇ／ｍｌの濃度で加えられ得る。
本発明の一例においては、抗酸化剤を含まない培地としてＤＭＥＭ、さらに好ましくはＬＧ－ＤＭＥＭ培地を使用し、抗酸化剤としてアスコルビン酸を含む培地としてα－ＭＥＭ培地を使用する。
本発明において、前記「１）ステップの中間葉幹細胞」は、濃度勾配遠心分離法（Ｇｒａｄｉｅｎｔ ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ、ＧＣＭ）の分離方法で分離された中間葉幹細胞または層分離培養方法（大韓民国出願番号１０－２００６－００７５６７６、ｓｕｂｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ、ＳＣＭ）で分離された中間葉幹細胞であってよい。
本発明において、前記「１）ステップの中間葉幹細胞」を、層分離培養方法で分離した中間葉幹細胞として製造した中間葉幹細胞培養液は、前記「１）ステップの中間葉幹細胞」を濃度勾配遠心分離法（Ｇｒａｄｉｅｎｔ ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ、ＧＣＭ）で分離した中間葉幹細胞として製造した中間葉幹細胞培養液より成長因子及びサイトカインの含量が高く、皮膚再生、シワ改善、皮膚美白、発毛または育毛効果に優れる。
前記「層分離培養方法」は、幹細胞を比重によって分離する方法を意味し、まず、個体から骨髄を抽出して細胞培養液に培養した後、上層液だけを収得して、これをコーティング剤が処理されたか処理されなかった培養容器に移して培養した後、同一過程を数回繰り返す工程であってよく、好ましくは１）個体から分離された骨髄を培養するステップ；２）前記１）ステップの上層液だけを新たな容器に移動させて培養するステップ；３）前記２）ステップの上層液だけを分離して培養容器で３５℃～３９℃で１時間～３時間培養後、３５℃～３９℃で１２～３６時間培養を２～３回繰り返し、次いで３５℃～３９℃で２４～７２時間培養し、毎回上層液を新たな培養容器に移動させて繰り返し培養するステップ；４）最終培養容器で単一クローナル幹細胞を得るステップ；を含む方法であってよい。
本発明において、前記「１）ステップ」の培養は、中間葉幹細胞を１０～１００００細胞／ｃｍ２（ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２）の細胞密度でｈＰＬが含まれた培地に接種して培養するステップ；を含む方法であってよく、好ましくは中間葉幹細胞を５０～１０００細胞／ｃｍ２（ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２）の細胞密度で培地に接種して培養するステップ；を含む方法であってよい。
本発明において、前記「１）ステップ」の培地には、０．１％～２０％（ｗ／ｗ）のヒト血小板溶解物（ｈｕｍａｎ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｌｙｓａｔｅ、ｈＰＬ）を含有することができ、好ましくは１％～１０％（ｗ／ｗ）のｈＰＬを含有することができる。
本発明において、前記「１）ステップ」の培地を、ｈＰＬを含有した培地として製造した中間葉幹細胞培養液は、前記「１）ステップ」の培地を、ＦＢＳを含有した培地として製造した中間葉幹細胞培養液より成長因子及びサイトカインの含量が高く、皮膚再生、シワ改善、皮膚美白、発毛または育毛効果に優れる。
本発明において、前記「成長因子及びサイトカイン」は、中間葉幹細胞が発現する任意の成長因子、サイトカインまたはタンパク質であってよく、好ましくは、アポリポプロテイン－Ａ－１（ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ－Ａ－１）、ケモカイン（Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフ）リガンド－４（ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ（Ｃ－Ｘ－Ｃ ｍｏｔｉｆ）ｌｉｇａｎｄ－４、ＣＸＣＬ－４）、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド－５（ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ（Ｃ－Ｃ ｍｏｔｉｆ）ｌｉｇａｎｄ－５、ＣＣＬ－５）、レチノール結合タンパク質－４（Ｒｅｔｉｎｏｌ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ－４、ＲＢＰ－４）、ウロキナーゼ受容体（Ｕｒｏｋｉｎａｓｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ｕＰＡＲ）、ビタミンＤ－ＢＰ（Ｖｉｔａｍｉｎ Ｄ－ＢＰ）、血管内皮成長因子（Ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ、ＶＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子２（Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ２、ＦＧＦ２）、肝細胞成長因子（Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ、ＨＧＦ）、線維芽細胞成長因子７（Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ７、ＦＧＦ７）、線維芽細胞成長因子１９（Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ １９、ＦＧＦ１９）、アンギオゲニン（Ａｎｇｉｏｇｅｎｉｎ）、アンジオポエチン－１（Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ－１）、アンジオポエチン－２（Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ－２）、ディックコプフ関連タンパク質１（Ｄｉｃｋｋｏｐｆ ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ １、ＤＫＫ－１）、インスリン様増殖因子結合タンパク質－２（ｉｎｓｕｌｉｎ ｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ－２、ＩＧＦＢＰ－２）、インターロイキン－６（ＩＬ－６）、インターロイキン－８（ＩＬ－８）、血小板由来成長因子－ＡＡ（ｐｌａｔｅｌｅｔ ｄｅｒｉｖｅｄ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ－ＡＡ、ＰＤＧＦ－ＡＡ）、マクロファージコロニー刺激因子（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｃｏｌｏｎｙ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ、Ｍ－ＣＳＦ）、インスリン様増殖因子結合タンパク質－３（ｉｎｓｕｌｉｎ ｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ－３、ＩＧＦＢＰ－３）、血管細胞接着分子－１（Ｖａｓｃｕｌａｒ ｃｅｌｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅ－１、ＶＣＡＭ－１）、白血病阻止因子（Ｌｅｕｋｅｍｉａ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｆａｃｔｏｒ、ＬＩＦ）、ケモカイン（Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフ）リガンド－１２（ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ（Ｃ－Ｘ－Ｃ ｍｏｔｉｆ）ｌｉｇａｎｄ－１２、ＣＸＣＬ－１２）、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド－２（ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ（Ｃ－Ｃ ｍｏｔｉｆ）ｌｉｇａｎｄ－２、ＣＣＬ－２）、ペントラキシン－３（Ｐｅｎｔｒａｘｉｎ－３）、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド－７（ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ（Ｃ－Ｃ ｍｏｔｉｆ）ｌｉｇａｎｄ－７、ＣＣＬ－７）、アディポネクチン（Ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ）、Ｆａｓリガンド（ＴＮＦ ＳＦ６）（Ｆａｓ ｌｉｇａｎｄ（ＴＮＦ ＳＦ６））、マクロファージ遊走阻止因子（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｆａｃｔｏｒ、ＭＩＦ）、インターロイキン－２２（ＩＬ－２２）、インターロイキン－４（ＩＬ－４）、インターロイキン－１７Ａ（ＩＬ－１７Ａ）、補体成分５／補体成分５ａ（Ｃ５／Ｃ５ａ）、分化クラスター１４（Ｃｌｕｓｔｅｒ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ １４、ＣＤ１４）、キチナーゼ３－ｌｉｋｅ １（Ｃｈｉｔｉｎａｓｅ ３－ｌｉｋｅ １）、アジプシン（ａｄｉｐｓｉｎ）、Ｃ－反応性タンパク（Ｃ－ｒｅａｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ）、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（Ｄｉｐｅｐｔｉｄｙｌ ｐｅｐｔｉｄａｓｅ ＩＶ、ＤＰＰ ＩＶ）、シスタチンＣ（Ｃｙｓｔａｔｉｎ Ｃ）、エンプリン（Ｅｍｍｐｒｉｎ）、成長／分化因子１５（Ｇｒｏｗｔｈ／ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ １５、ＧＤＦ１５）、オステオポンチン（Ｏｓｔｅｏｐｏｎｔｉｎ）、セルピン（Ｓｅｒｐｉｎ）Ｅ１（ｎｅｘｉｎ）、トロンボスポンジン（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ）－１（ＴＳＰ－１）、レジスチン（Ｒｅｓｉｓｔｉｎ）、脳由来神経栄養因子（Ｂｒａｉｎ ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ、ＢＤＮＦ）及びエンドグリン（Ｅｎｄｏｇｌｉｎ）からなる群から選択されたいずれか一つ以上、２以上、３以上、４以上、５以上、６以上、７以上、８以上、９以上、１０以上、１１以上、１２以上、１３以上、１４以上、１５以上、１６以上、１７以上、１８以上、１９以上、２０以上、２１以上、２２以上、２３以上、２４以上、２５以上、２６以上、２７以上、２８以上、２９以上、３０以上、３１以上、３２以上、３３以上、３４以上、３５以上、３６以上、３７以上、３８以上、３９以上、４０以上、４１以上、４２以上、４３以上、４４以上、４５以上、４６以上、４７以上または４８以上であってよい。さらに好ましくは、中間葉幹細胞をｈＰＬを含む培地で培養後に収得し、収得した幹細胞を無血清培地にまた培養して収得した中間葉幹細胞培養液内に特異的に存在するアポリポプロテイン－Ａ－１（ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ－Ａ－１）、ケモカイン（Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフ）リガンド－４（ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ（Ｃ－Ｘ－Ｃ ｍｏｔｉｆ）ｌｉｇａｎｄ－４、ＣＸＣＬ－４）、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド－５（ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ（Ｃ－Ｃ ｍｏｔｉｆ）ｌｉｇａｎｄ－５、ＣＣＬ－５）、レチノール結合タンパク質－４（Ｒｅｔｉｎｏｌ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ－４、ＲＢＰ－４）、ビタミンＤ－ＢＰ（Ｖｉｔａｍｉｎ Ｄ－ＢＰ）、アディポネクチン（Ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ）、脳由来神経栄養因子（Ｂｒａｉｎ ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ、ＢＤＮＦ）、補体成分５／補体成分５ａ（Ｃ５／Ｃ５ａ）、分化クラスター１４（Ｃｌｕｓｔｅｒ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ １４、ＣＤ１４）、Ｆａｓリガンド（ＴＮＦ ＳＦ６）（Ｆａｓ ｌｉｇａｎｄ（ＴＮＦ ＳＦ６））、成長／分化因子１５（Ｇｒｏｗｔｈ／ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ １５、ＧＤＦ１５）、インターロイキン－６（ＩＬ－６）、インターロイキン－８（ＩＬ－８）、血小板由来成長因子－ＡＡ（ｐｌａｔｅｌｅｔ ｄｅｒｉｖｅｄ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ－ＡＡ、ＰＤＧＦ－ＡＡ）、マクロファージコロニー刺激因子（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｃｏｌｏｎｙ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ、Ｍ－ＣＳＦ）及び白血病阻止因子（Ｌｅｕｋｅｍｉａ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｆａｃｔｏｒ、ＬＩＦ）からなる群から選択されたいずれか一つ以上、２以上、３以上、４以上、５以上、６以上、７以上、８以上、９以上、１０以上、１１以上、１２以上、１３以上、１４以上、１５以上または１６以上を含むことができ、さらに好ましくは、中間葉幹細胞をＦＢＳを含む培地で培養後に収得し、収得した幹細胞を無血清培地にまた培養して収得した中間葉幹細胞培養液と比較して中間葉幹細胞をｈＰＬを含む培地で培養後に収得し、収得した幹細胞を無血清培地にまた培養して収得した中間葉幹細胞培養液内に顕著に含量が増大した血管内皮成長因子（Ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ、ＶＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子２（Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ２、ＦＧＦ２）、肝細胞成長因子（Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ、ＨＧＦ）、線維芽細胞成長因子７（Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ７、ＦＧＦ７）、線維芽細胞成長因子１９（Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ １９、ＦＧＦ１９）、アンギオゲニン（Ａｎｇｉｏｇｅｎｉｎ）、アンジオポエチン－１（Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ－１）、アンジオポエチン－２（Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ－２）、ディックコプフ関連タンパク質１（Ｄｉｃｋｋｏｐｆ ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ １、ＤＫＫ－１）、インスリン様増殖因子結合タンパク質－２（ｉｎｓｕｌｉｎ ｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ－２、ＩＧＦＢＰ－２）、インスリン様増殖因子結合タンパク質－３（ｉｎｓｕｌｉｎ ｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ－３、ＩＧＦＢＰ－３）、血管細胞接着分子－１（Ｖａｓｃｕｌａｒ ｃｅｌｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅ－１、ＶＣＡＭ－１）、ケモカイン（Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフ）リガンド－１２（ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ（Ｃ－Ｘ－Ｃ ｍｏｔｉｆ）ｌｉｇａｎｄ－１２、ＣＸＣＬ－１２）、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド－２（ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ（Ｃ－Ｃ ｍｏｔｉｆ）ｌｉｇａｎｄ－２、ＣＣＬ－２）、ペントラキシン－３（Ｐｅｎｔｒａｘｉｎ－３）、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド－７（ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ（Ｃ－Ｃ ｍｏｔｉｆ）ｌｉｇａｎｄ－７、ＣＣＬ－７）、マクロファージ遊走阻止因子（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｆａｃｔｏｒ、ＭＩＦ）、インターロイキン－２２（ＩＬ－２２）、インターロイキン－４（ＩＬ－４）、インターロイキン－１７Ａ（ＩＬ－１７Ａ）、キチナーゼ３－ｌｉｋｅ １（Ｃｈｉｔｉｎａｓｅ ３－ｌｉｋｅ １）、アジプシン（ａｄｉｐｓｉｎ）、Ｃ－反応性タンパク（Ｃ－ｒｅａｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ）、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（Ｄｉｐｅｐｔｉｄｙｌ ｐｅｐｔｉｄａｓｅ ＩＶ、ＤＰＰ ＩＶ）、シスタチンＣ（Ｃｙｓｔａｔｉｎ Ｃ）、エンプリン（Ｅｍｍｐｒｉｎ）、オステオポンチン（Ｏｓｔｅｏｐｏｎｔｉｎ）、セルピン（Ｓｅｒｐｉｎ）Ｅ１（ｎｅｘｉｎ）、トロンボスポンジン（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ）－１（ＴＳＰ－１）、レジスチン（Ｒｅｓｉｓｔｉｎ）、ウロキナーゼ受容体（Ｕｒｏｋｉｎａｓｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ｕＰＡＲ）及びエンドグリン（Ｅｎｄｏｇｌｉｎ）からなる群から選択される、いずれか１以上、２以上、３以上、４以上、５以上、６以上、７以上、８以上、９以上、１０以上、１１以上、１２以上、１３以上、１４以上、１５以上、１６以上、１７以上、１８以上、１９以上、２０以上、２１以上、２２以上、２３以上、２４以上、２５以上、２６以上、２７以上、２８以上、２９以上、３０以上、３１以上または３２以上をさらに含むものであってよい。
また、本発明は、１）中間葉幹細胞をヒト血小板溶解物（ｈｕｍａｎ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｌｙｓａｔｅ、ｈＰＬ）が含まれた培地で培養するステップ；２）培養された幹細胞を収得して無血清培地で培養するステップ；及び３）中間葉幹細胞由来培養液を収去し、ろ過して幹細胞培養液を収得するステップ；を含む成長因子及びサイトカインが豊富な皮膚再生、シワ改善、皮膚美白、発毛または育毛用化粧料組成物製造用中間葉幹細胞培養液の製造方法を提供する。
本発明において、前記「皮膚再生」は、皮膚の一部分が消失された場合、その部分を補充するか皮膚細胞の増殖を増進させる全ての作用を意味し得、真皮線維芽細胞の増殖が促進される場合、皮膚再生効果が奏され得る。本発明の前記化粧料組成物製造用中間葉幹細胞培養液は、ヒト真皮線維芽細胞に対する増殖促進効果に優れ、皮膚再生効果に優れる。
本発明において、前記「シワ改善」は、皮膚のシワ及び弾力と関連した能力を維持または強化させることを意味する。皮膚の構造の中で真皮層に存在する膠原線維（ｃｏｌｌａｇｅｎ：コラーゲン）と弾力繊維（ｅｌａｓｔｉｎ：エラスチン）がその役割を果たす主要タンパク質として皮膚弾力を主管するが、コラーゲンの生合成は、皮膚の内・外的影響を受けるようになる。本発明の前記化粧料組成物製造用中間葉幹細胞培養液は、コラーゲン合成能力とエラスチン合成能力に優れ、シワ改善効果に優れる。
本発明において、前記「美白」は、皮膚の色を明るくする効果を意味する。皮膚の色は、メラノサイト（ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅ）で合成されるメラニン色素の量により決定される。本発明の前記化粧料組成物製造用中間葉幹細胞培養液は、メラニン色素の合成を減少させて皮膚美白効果に優れる。
本発明において、「発毛」は、頭皮で毛髪が生えることを意味し、「育毛」は、毛髪の長さが長くなること（即ち、毛髪成長）を意味し、当業界において利用するまた他の用語である「養毛」と同じ意味で使用される。発毛または育毛効果は、真皮毛乳頭細胞の生成または増殖により促進され、本発明の前記化粧料組成物製造用中間葉幹細胞培養液は、真皮毛乳頭細胞の増殖を促進して発毛及び育毛効果に優れる。
また、本発明は、前記製造方法で製造された成長因子及びサイトカインが豊富な中間葉幹細胞培養液を提供する。
本発明の中間葉幹細胞培養液は、真皮線維芽細胞の増殖を促進させて皮膚再生効果があり、コラーゲンとエラスチンの合成を促進させてシワ改善効果があり、メラノサイトでメラニン色素の合成を抑制して美白効果があり、真皮毛乳頭細胞の増殖を促進して発毛または育毛効果がある。
また、本発明は、前記中間葉幹細胞培養液を含む皮膚再生用化粧料組成物を提供する。
本発明において、前記「化粧料組成物」は、前記幹細胞培養液を含む組成物であって、その剤形は、いかなる形態でも可能である。このような剤形の例を挙げると、前記化粧料組成物を利用して製造された化粧料は、クリーム類、パック類、ローション類、エッセンス類、化粧水類、ファンデーション類及びメーキャップベース類等であり、本発明の目的を達成するために、このような剤形のうちいかなる形態にも製造されて商用化され得、前記例に限定されない。
本発明において、前記化粧料組成物は、精製水、多価アルコール、界面活性剤、粘度調節剤、キレート剤、乳化剤、ｐＨ調節剤、酸アルカリ剤、酸化防止剤、保湿剤、光沢剤、防腐剤、着香剤、香料、ゲル化剤、安定化剤、着色剤及び色素からなる群から選択される１種以上の添加物をさらに含むことができる。
また、本発明は、前記中間葉幹細胞培養液を含むシワ改善及び皮膚弾力増進用化粧料組成物を提供する。
また、本発明は、前記中間葉幹細胞培養液を含む皮膚美白用化粧料組成物を提供する。
また、本発明は、前記中間葉幹細胞培養液を含む発毛または育毛促進用化粧料組成物を提供する。
また、本発明は、前記中間葉幹細胞培養液を個体に処理するステップを含む皮膚再生方法を提供する。
また、本発明は、前記中間葉幹細胞培養液を個体に処理するステップを含むシワ改善及び皮膚弾力増進方法を提供する。
また、本発明は、前記中間葉幹細胞培養液を個体に処理するステップを含む皮膚美白方法を提供する。
また、本発明は、前記中間葉幹細胞培養液を個体に処理するステップを含む発毛または育毛促進方法を提供する。
本明細書において、別に定義されていない用語は、本発明の属する技術の分野において通常使用される意味を有するものである。
以下、本発明を実施例により詳細に説明する。但し、下記実施例は、本発明を例示するだけで、本発明の内容が下記実施例により限定されるものではない。
実施例１．ＦＢＳまたはｈＰＬ含有培地で中間葉幹細胞の細胞培養及び培養液の収集
１．１ 層分離培養方法（ｓｕｂｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ、ＳＣＭ）により分離された骨髄由来単一クローナル中間葉幹細胞の収得
３５歳の男性骨髄提供者の臀部を局所麻酔剤で麻酔させた後、骨盤に注射針を刺して骨髄を採取した。１００ｍｍ培養容器に２０％ＦＢＳ、１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含む１０ｍｌ ＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ，ＧＩＢＣＯ－ＢＲＬ，Ｌｉｆｅ－ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＭＤ，ＵＳＡ）、ヒト骨髄３ｍｌを入れて３７℃、５％ＣＯ２細胞培養器で２時間培養した。培養後、培養容器を一方に軽く傾けて底面に付いた細胞ができるだけ取れないように最大限に培養容器の上層培養液だけを新たな容器に移した。同一の過程をもう一度繰り返した後、収得した培養液を底面に膠原質（ｃｏｌｌａｇｅｎ）がコーティングされた培養容器（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）に移した後、３７℃で２時間培養した。培養液をまた新たな膠原質がコーティングされた容器に移し、２４時間後、また新たな容器に移し、２４時間後、また新たな容器に移した。最後に、４８時間後、新たな容器に移した後、残っている細胞が培養容器底面に付いて育つことを目視で確認した。約３～５日の時間が過ぎると細胞が単一性細胞群（ｓｉｎｇｌｅ ｃｌｏｎｅ）を形成するが、この単一性細胞群にトリプシンを処理して分離し、層分離培養方法（大韓民国出願番号１０－２００６－００７５６７６、ｓｕｂｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ、ＳＣＭ）により分離された骨髄由来単一クローナル中間葉幹細胞を収得した。
１．１ 層分離培養方法（ｓｕｂｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ、ＳＣＭ）により分離された骨髄由来単一クローナル中間葉幹細胞の収得
３５歳の男性骨髄提供者の臀部を局所麻酔剤で麻酔させた後、骨盤に注射針を刺して骨髄を採取した。１００ｍｍ培養容器に２０％ＦＢＳ、１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含む１０ｍｌ ＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ，ＧＩＢＣＯ－ＢＲＬ，Ｌｉｆｅ－ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＭＤ，ＵＳＡ）、ヒト骨髄３ｍｌを入れて３７℃、５％ＣＯ２細胞培養器で２時間培養した。培養後、培養容器を一方に軽く傾けて底面に付いた細胞ができるだけ取れないように最大限に培養容器の上層培養液だけを新たな容器に移した。同一の過程をもう一度繰り返した後、収得した培養液を底面に膠原質（ｃｏｌｌａｇｅｎ）がコーティングされた培養容器（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）に移した後、３７℃で２時間培養した。培養液をまた新たな膠原質がコーティングされた容器に移し、２４時間後、また新たな容器に移し、２４時間後、また新たな容器に移した。最後に、４８時間後、新たな容器に移した後、残っている細胞が培養容器底面に付いて育つことを目視で確認した。約３～５日の時間が過ぎると細胞が単一性細胞群（ｓｉｎｇｌｅ ｃｌｏｎｅ）を形成するが、この単一性細胞群にトリプシンを処理して分離し、層分離培養方法（大韓民国出願番号１０－２００６－００７５６７６、ｓｕｂｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ、ＳＣＭ）により分離された骨髄由来単一クローナル中間葉幹細胞を収得した。
１．２ ＦＢＳまたはｈＰＬ含有培地で中間葉幹細胞の細胞培養及び培養液の収集
実施例１．１のように層分離培養方法により分離された骨髄由来単一クローナル中間葉幹細胞を１０００ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２の細胞密度でＬｏｗ ｇｌｕｃｏｓｅ ＤＭＥＭ培地に接種して３７℃及び５％ＣＯ２培養器で培養した。このとき、１０％（ｗ／ｗ）ウシ胎児血清（Ｆｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ；ＦＢＳ）または４％（ｗ／ｗ）ヒト血小板溶解物（ｈｕｍａｎ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｌｙｓａｔｅ；ｈＰＬ）を含有する培地で細胞の増殖程度（ｃｏｎｆｌｕｅｎｃｙ）が８０％になるまで３７℃及び５％ＣＯ２細胞培養器でそれぞれ培養した。ヒト血小板溶解物（ｈＰＬ）は、Ｍｉｌｌ Ｃｒｅｅｋ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＬＣから購入した。
その後、ＰＢＳ（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ）で３回洗浄し、抗生剤（ゲンタマイシンまたはペニシリン）、フェノールレッド（ｐｈｅｎｏｌ ｒｅｄ）が添加されていない無血清培地（ｓｅｒｕｍ ｆｒｅｅ ｍｅｄｉａ）に培養された幹細胞を移して７２時間培養した後、幹細胞由来培養液を収去し、収去した培養液は、３０００ｒｐｍで遠心分離後、フィルタリング（Ｔｏｐ ｆｉｌｔｅｒ ｓｙｓｔｅｍ，Ｎｕｎｃ）して、ＦＢＳ－ＣＭ（ＦＢＳ－ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ ｍｅｄｉｕｍ）及びｈＰＬ－ＣＭ（ｈＰＬ－ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ ｍｅｄｉｕｍ）を完成し、冷蔵及び冷凍保管して使用した。対照群としては、細胞なしに同じ条件で培養された無血清培地を使用した。
実施例１．１のように層分離培養方法により分離された骨髄由来単一クローナル中間葉幹細胞を１０００ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２の細胞密度でＬｏｗ ｇｌｕｃｏｓｅ ＤＭＥＭ培地に接種して３７℃及び５％ＣＯ２培養器で培養した。このとき、１０％（ｗ／ｗ）ウシ胎児血清（Ｆｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ；ＦＢＳ）または４％（ｗ／ｗ）ヒト血小板溶解物（ｈｕｍａｎ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｌｙｓａｔｅ；ｈＰＬ）を含有する培地で細胞の増殖程度（ｃｏｎｆｌｕｅｎｃｙ）が８０％になるまで３７℃及び５％ＣＯ２細胞培養器でそれぞれ培養した。ヒト血小板溶解物（ｈＰＬ）は、Ｍｉｌｌ Ｃｒｅｅｋ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＬＬＣから購入した。
その後、ＰＢＳ（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ）で３回洗浄し、抗生剤（ゲンタマイシンまたはペニシリン）、フェノールレッド（ｐｈｅｎｏｌ ｒｅｄ）が添加されていない無血清培地（ｓｅｒｕｍ ｆｒｅｅ ｍｅｄｉａ）に培養された幹細胞を移して７２時間培養した後、幹細胞由来培養液を収去し、収去した培養液は、３０００ｒｐｍで遠心分離後、フィルタリング（Ｔｏｐ ｆｉｌｔｅｒ ｓｙｓｔｅｍ，Ｎｕｎｃ）して、ＦＢＳ－ＣＭ（ＦＢＳ－ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ ｍｅｄｉｕｍ）及びｈＰＬ－ＣＭ（ｈＰＬ－ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ ｍｅｄｉｕｍ）を完成し、冷蔵及び冷凍保管して使用した。対照群としては、細胞なしに同じ条件で培養された無血清培地を使用した。
実施例２．タンパク質アレイ方法を通したＦＢＳ－ＣＭまたはｈＰＬ－ＣＭに存在する成長因子の分析
実施例１のように製造したＦＢＳ－ＣＭ及びｈＰＬ－ＣＭ内に存在するサイトカインを分析した。分析方法は、商業的に入手可能な分析キット（ｐｒｏｔｅｏｍｅ ｐｒｏｆｉｌｅｒ ｈｕｍａｎ ＸＬ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ａｒｒａｙ ｋｉｔ，Ｒ＆Ｄ）を利用してキットと共に提供されるマニュアルに従い、発色後の観察は、ＬＡＳ４０００（富士、日本）を利用した。
実施例１のように製造したＦＢＳ－ＣＭ及びｈＰＬ－ＣＭ内に存在するサイトカインを分析した。分析方法は、商業的に入手可能な分析キット（ｐｒｏｔｅｏｍｅ ｐｒｏｆｉｌｅｒ ｈｕｍａｎ ＸＬ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ａｒｒａｙ ｋｉｔ，Ｒ＆Ｄ）を利用してキットと共に提供されるマニュアルに従い、発色後の観察は、ＬＡＳ４０００（富士、日本）を利用した。
細胞なしに同じ条件で培養された無血清培地（ｓｅｒｕｍ－ｆｒｅｅ ＤＭＥＭ Ｍｅｄｉａ）を対照群とし、実施例１のように製造したＦＢＳ－ＣＭ及びｈＰＬ－ＣＭを実験群として比較した。それぞれの幹細胞培養液内の含有成分を確認できるアレイマップ（ＡＲＲＡＹ ＭＡＰ）を図１と表１に示した。イメージＪ機器（Ｉｍａｇｅ Ｊ）を通してスポット（ｓｐｏｔ）を比較分析して各成長因子の相対的な含有量を確認し、実験によって得られたアレイ結果は、図２に示した。
図２ａに示したように、幹細胞由来無血清培養液内に様々なサイトカイン及び成長因子が存在していることを確認した。ＦＢＳ－ＣＭとｈＰＬ－ＣＭを比較してみると、ＦＢＳ－ＣＭで３２種、ｈＰＬ－ＣＭで４８種のタンパク質が検出されることを確認することができた。ｈＰＬ－ＣＭで検出される４８種のタンパク質は、アポリポプロテイン－Ａ－１（ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ－Ａ－１）、ケモカイン（Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフ）リガンド－４（ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ（Ｃ－Ｘ－Ｃ ｍｏｔｉｆ）ｌｉｇａｎｄ－４、ＣＸＣＬ－４）、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド－５（ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ（Ｃ－Ｃ ｍｏｔｉｆ）ｌｉｇａｎｄ－５、ＣＣＬ－５）、レチノール結合タンパク質－４（Ｒｅｔｉｎｏｌ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ－４、ＲＢＰ－４）、ウロキナーゼ受容体（Ｕｒｏｋｉｎａｓｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ｕＰＡＲ）、ビタミンＤ－ＢＰ（Ｖｉｔａｍｉｎ Ｄ－ＢＰ）、血管内皮成長因子（Ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ、ＶＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子２（Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ２、ＦＧＦ２）、肝細胞成長因子（Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ、ＨＧＦ）、線維芽細胞成長因子７（Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ７、ＦＧＦ７）、線維芽細胞成長因子１９（Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ １９、ＦＧＦ１９）、アンギオゲニン（Ａｎｇｉｏｇｅｎｉｎ）、アンジオポエチン－１（Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ－１）、アンジオポエチン－２（Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ－２）、ディックコプフ関連タンパク質１（Ｄｉｃｋｋｏｐｆ ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ １、ＤＫＫ－１）、インスリン様増殖因子結合タンパク質－２（ｉｎｓｕｌｉｎ ｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ－２、ＩＧＦＢＰ－２）、インターロイキン－６（ＩＬ－６）、インターロイキン－８（ＩＬ－８）、血小板由来成長因子－ＡＡ（ｐｌａｔｅｌｅｔ ｄｅｒｉｖｅｄ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ－ＡＡ、ＰＤＧＦ－ＡＡ）、マクロファージコロニー刺激因子（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｃｏｌｏｎｙ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ、Ｍ－ＣＳＦ）、インスリン様増殖因子結合タンパク質－３（ｉｎｓｕｌｉｎ ｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ－３、ＩＧＦＢＰ－３）、血管細胞接着分子－１（Ｖａｓｃｕｌａｒ ｃｅｌｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅ－１、ＶＣＡＭ－１）、白血病阻止因子（Ｌｅｕｋｅｍｉａ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｆａｃｔｏｒ、ＬＩＦ）、ケモカイン（Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフ）リガンド－１２（ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ（Ｃ－Ｘ－Ｃ ｍｏｔｉｆ）ｌｉｇａｎｄ－１２、ＣＸＣＬ－１２）、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド－２（ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ（Ｃ－Ｃ ｍｏｔｉｆ）ｌｉｇａｎｄ－２、ＣＣＬ－２）、ペントラキシン－３（Ｐｅｎｔｒａｘｉｎ－３）、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド－７（ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ（Ｃ－Ｃ ｍｏｔｉｆ）ｌｉｇａｎｄ－７、ＣＣＬ－７）、アディポネクチン（Ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ）、Ｆａｓリガンド（ＴＮＦ ＳＦ６）（Ｆａｓ ｌｉｇａｎｄ（ＴＮＦ ＳＦ６））、マクロファージ遊走阻止因子（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｆａｃｔｏｒ、ＭＩＦ）、インターロイキン－２２（ＩＬ－２２）、インターロイキン－４（ＩＬ－４）、インターロイキン－１７Ａ（ＩＬ－１７Ａ）、補体成分５／補体成分５ａ（Ｃ５／Ｃ５ａ）、分化クラスター１４（Ｃｌｕｓｔｅｒ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ １４、ＣＤ１４）、キチナーゼ３－ｌｉｋｅ １（Ｃｈｉｔｉｎａｓｅ ３－ｌｉｋｅ １）、アジプシン（ａｄｉｐｓｉｎ）、Ｃ－反応性タンパク（Ｃ－ｒｅａｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ）、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（Ｄｉｐｅｐｔｉｄｙｌ ｐｅｐｔｉｄａｓｅ ＩＶ、ＤＰＰ ＩＶ）、シスタチンＣ（Ｃｙｓｔａｔｉｎ Ｃ）、エンプリン（Ｅｍｍｐｒｉｎ）、成長／分化因子１５（Ｇｒｏｗｔｈ／ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ １５、ＧＤＦ１５）、オステオポンチン（Ｏｓｔｅｏｐｏｎｔｉｎ）、セルピン（Ｓｅｒｐｉｎ）Ｅ１（ｎｅｘｉｎ）、トロンボスポンジン（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ）－１（ＴＳＰ－１）、レジスチン（Ｒｅｓｉｓｔｉｎ）、脳由来神経栄養因子（Ｂｒａｉｎ ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ、ＢＤＮＦ）及びエンドグリン（Ｅｎｄｏｇｌｉｎ）であるものと確認した。前記４８種のタンパク質のうちＦＢＳ－ＣＭに対比してｈＰＬ－ＣＭにのみ発現される代表的なタンパク質は図２ｂに、成長因子関連タンパク質は図２ｃに、皮膚回春（皮膚若返り、ｒｅｊｕｖｅｎａｔｉｏｎ）関連タンパク質は図２ｄに、幹細胞効能マーカー、移動または再生関連タンパク質は図２ｅに示し、これ以外に発現されるタンパク質は図２ｆに示した。
実施例３．ＦＢＳ－ＣＭまたはｈＰＬ－ＣＭの成長因子の含量の比較
前記実施例２を通して、本発明のｈＰＬ－ＣＭでさらに多くの種類の成長因子及びタンパク質を含むことを確認したので、もう少し正確な比較のために前記実施例１のような方法で製造したＦＢＳ－ＣＭまたはｈＰＬ－ＣＭ内に存在する代表的な成長因子の含量を比較し、その結果を図３に示した。
前記実施例２を通して、本発明のｈＰＬ－ＣＭでさらに多くの種類の成長因子及びタンパク質を含むことを確認したので、もう少し正確な比較のために前記実施例１のような方法で製造したＦＢＳ－ＣＭまたはｈＰＬ－ＣＭ内に存在する代表的な成長因子の含量を比較し、その結果を図３に示した。
図３に示したように、ＦＢＳ－ＣＭよりｈＰＬ－ＣＭでＶＥＧＦ、ＴＧＦ－ｂｅｔａ１、ＨＧＦ、ＦＧＦの含有量が増加することを確認した。具体的に、ＶＥＧＦの場合、ｈＰＬ－ＣＭでＦＢＳ－ＣＭより３．５倍以上含有されており、ＴＧＦ－ｂｅｔａ１の場合、ｈＰＬ－ＣＭでＦＢＳ－ＣＭより２．２倍以上含有されており、ＨＧＦの場合、ｈＰＬ－ＣＭでＦＢＳ－ＣＭより１．７倍以上含有されており、ＦＧＦの場合、ｈＰＬ－ＣＭでＦＢＳ－ＣＭより１．６倍以上含有されていることを確認した。即ち、ｈＰＬを含有する培地で中間葉幹細胞を培養することで幹細胞培養液内に存在する成長因子の含量を増加させることができることをもう一度確認した。
実施例４．ＦＢＳ－ＣＭまたはｈＰＬ－ＣＭのヒト真皮線維芽細胞増殖効果の比較
前記実施例２、３を通して、本発明のｈＰＬ－ＣＭがさらに多くの種類と高濃度の成長因子及びタンパク質を含むことを確認し、これによって皮膚改善効能にも差があるかを確認しようとした。具体的に、ヒト真皮線維芽細胞（ｈｕｍａｎ ｄｅｒｍａｌ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ、ＨＤＦ、Ｌｏｎｚａ社購入）に無血清培地を２４時間の間処理した群を対照群とした。実施例１のような方法で製造した１００％ＦＢＳ－ＣＭ原液、前記ＦＢＳ－ＣＭ原液を無血清培地で５０％希釈した５０％ＦＢＳ－ＣＭ希釈液、実施例１のような方法で製造した１００％ｈＰＬ－ＣＭ原液、及び前記ｈＰＬ－ＣＭ原液を無血清培地で５０％希釈した５０％ｈＰＬ－ＣＭ希釈液をヒト真皮線維芽細胞に２４時間の間処理した群をそれぞれ実験群とし、各対照群と実験群のヒト真皮芽細胞の増殖促進効果をＣＣＫ－８を通して確認し、その結果を図４に示した。
前記実施例２、３を通して、本発明のｈＰＬ－ＣＭがさらに多くの種類と高濃度の成長因子及びタンパク質を含むことを確認し、これによって皮膚改善効能にも差があるかを確認しようとした。具体的に、ヒト真皮線維芽細胞（ｈｕｍａｎ ｄｅｒｍａｌ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ、ＨＤＦ、Ｌｏｎｚａ社購入）に無血清培地を２４時間の間処理した群を対照群とした。実施例１のような方法で製造した１００％ＦＢＳ－ＣＭ原液、前記ＦＢＳ－ＣＭ原液を無血清培地で５０％希釈した５０％ＦＢＳ－ＣＭ希釈液、実施例１のような方法で製造した１００％ｈＰＬ－ＣＭ原液、及び前記ｈＰＬ－ＣＭ原液を無血清培地で５０％希釈した５０％ｈＰＬ－ＣＭ希釈液をヒト真皮線維芽細胞に２４時間の間処理した群をそれぞれ実験群とし、各対照群と実験群のヒト真皮芽細胞の増殖促進効果をＣＣＫ－８を通して確認し、その結果を図４に示した。
図４に示したように、ｈＰＬ－ＣＭ処理群で対照群に対比してヒト真皮線維芽細胞の増殖促進効果が１００％以上増加することを確認し、ｈＰＬ－ＣＭ処理群でＦＢＳ－ＣＭ処理群よりヒト真皮線維芽細胞の増殖促進効果が高く奏される傾向を確認してｈＰＬ－ＣＭの皮膚再生効果を確認した。
実施例５．ＦＢＳ－ＣＭまたはｈＰＬ－ＣＭのコラーゲン合成の効果
本実施例においては、幹細胞培養液の皮膚老化抑制剤としての有効性を確認するために、コラーゲン合成率をヒト由来の皮膚線維芽細胞を利用して確認した。具体的に、ヒト真皮線維芽細胞を６－ウェルプレートに２４時間培養した後、前記実施例１のような方法で製造したＦＢＳ－ＣＭ、ｈＰＬ－ＣＭまたは対照群培養液（細胞なしに同じ条件で培養されたｓｅｒｕｍ－ｆｒｅｅ ＤＭＥＭ ｍｅｄｉａ）を１０００μｌ処理した後、７２時間の間培養した。ヒト真皮線維芽細胞が新たに合成分泌したコラーゲンの量をコラーゲンキット（Ｓｉｒｃｏｌ ＴＭ ｃｏｌｌａｇｅｎ ａｓｓａｙ ｋｉｔ）を利用して測定し、結果を図５に示した。
本実施例においては、幹細胞培養液の皮膚老化抑制剤としての有効性を確認するために、コラーゲン合成率をヒト由来の皮膚線維芽細胞を利用して確認した。具体的に、ヒト真皮線維芽細胞を６－ウェルプレートに２４時間培養した後、前記実施例１のような方法で製造したＦＢＳ－ＣＭ、ｈＰＬ－ＣＭまたは対照群培養液（細胞なしに同じ条件で培養されたｓｅｒｕｍ－ｆｒｅｅ ＤＭＥＭ ｍｅｄｉａ）を１０００μｌ処理した後、７２時間の間培養した。ヒト真皮線維芽細胞が新たに合成分泌したコラーゲンの量をコラーゲンキット（Ｓｉｒｃｏｌ ＴＭ ｃｏｌｌａｇｅｎ ａｓｓａｙ ｋｉｔ）を利用して測定し、結果を図５に示した。
図５に示したように、ＦＢＳ－ＣＭ処理群で１４３．６ｕｇ／ｍｌ、そしてｈＰＬ－ＣＭ処理群で１７０．０ｕｇ／ｍｌと、ｈＰＬ－ＣＭ処理群で約１８％程度コラーゲンの合成量がさらに高く測定されることを確認した。即ち、皮膚弾力、皮膚再生及び皮膚シワ改善に役立つコラーゲン合成にＦＢＳ－ＣＭよりｈＰＬ－ＣＭが優れることを確認することができた。
実施例６．ＦＢＳ－ＣＭまたはｈＰＬ－ＣＭのエラスチン合成の効果
皮膚弾力は、真皮層に存在するエラスチンで構成された弾力繊維により現れるが、このような弾力繊維は、コラーゲンと共に存在し、エラスチンとコラーゲンが十分に存在する状態で皮膚の弾力維持が可能である。ＦＢＳ－ＣＭまたはｈＰＬ－ＣＭのエラスチン合成促進効果を確認するための実験を実施した。具体的に、２４ウェルプレートにヒト真皮線維芽細胞を播種（ｓｅｅｄｉｎｇ）した後、２４時間後、細胞が全て付くと、全ての培養培地を除去した後、前記実施例１のような方法で製造したＦＢＳ－ＣＭ、ｈＰＬ－ＣＭまたは無血清培地（対照群）を５００μｌずつ各ウェルに入れた後、７２時間の間培養し、エラスチンの量を測定し、結果を図６に示した。
皮膚弾力は、真皮層に存在するエラスチンで構成された弾力繊維により現れるが、このような弾力繊維は、コラーゲンと共に存在し、エラスチンとコラーゲンが十分に存在する状態で皮膚の弾力維持が可能である。ＦＢＳ－ＣＭまたはｈＰＬ－ＣＭのエラスチン合成促進効果を確認するための実験を実施した。具体的に、２４ウェルプレートにヒト真皮線維芽細胞を播種（ｓｅｅｄｉｎｇ）した後、２４時間後、細胞が全て付くと、全ての培養培地を除去した後、前記実施例１のような方法で製造したＦＢＳ－ＣＭ、ｈＰＬ－ＣＭまたは無血清培地（対照群）を５００μｌずつ各ウェルに入れた後、７２時間の間培養し、エラスチンの量を測定し、結果を図６に示した。
図６に示したように、エラスチン合成量を比較してみた結果、ＦＢＳ－ＣＭ処理群及びｈＰＬ－ＣＭ処理群でそれぞれ３８．３ｕｇ／ｍｌ及び４６．０ｕｇ／ｍｌのエラスチンが合成されたものと測定され、ｈＰＬ－ＣＭ処理群で約２０％程度エラスチンの合成量がさらに高く測定されることを確認した。即ち、皮膚弾力、皮膚再生及び皮膚シワ改善に役立つエラスチン合成にｈＰＬ－ＣＭがさらに効果的であることを確認することができた。
実施例７．３Ｄ人工皮膚を利用した皮膚美白効果
幹細胞培養液の皮膚美白効果を確認するために、人工皮膚を利用してメラニン量の減少を確認した。３Ｄ人工皮膚は、ＭＥＬ－３００－Ｍｅｌａｎｏｄｅｒｍ ｔｉｓｓｕｅｓ（ＭａｒＴｅｋ Ｃｏ．Ｋｒ）を使用し、３７℃及び５％ＣＯ２インキュベーターの条件で培養してその結果を観察した。具体的に、対照群として無血清培養液処理群、実験群として１０００μｇ／ｍｌ濃度のアルブチン２００μｌ処理群、実施例１で製造したＦＢＳ－ＣＭ ２００μｌ処理群、１０００μｇ／ｍｌ濃度のアルブチン１００μｌ及び実施例１で製造したＦＢＳ－ＣＭ １００μｌ混合処理群、実施例１で製造したｈＰＬ－ＣＭ ２００μｌ処理群、１０００μｇ／ｍｌ濃度のアルブチン１００μｌ及び実施例１で製造したｈＰＬ－ＣＭ １００μｌ混合処理群を設定した。トランスウェル上に載せられた人工皮膚に２日に１回ずつ前記設定したように、ＦＢＳ－ＣＭ、ｈＰＬ－ＣＭまたはアルブチンを繰り返し処理して２１日間培養した後、メラニン合成量を測定し、測定結果を図７に示した。
幹細胞培養液の皮膚美白効果を確認するために、人工皮膚を利用してメラニン量の減少を確認した。３Ｄ人工皮膚は、ＭＥＬ－３００－Ｍｅｌａｎｏｄｅｒｍ ｔｉｓｓｕｅｓ（ＭａｒＴｅｋ Ｃｏ．Ｋｒ）を使用し、３７℃及び５％ＣＯ２インキュベーターの条件で培養してその結果を観察した。具体的に、対照群として無血清培養液処理群、実験群として１０００μｇ／ｍｌ濃度のアルブチン２００μｌ処理群、実施例１で製造したＦＢＳ－ＣＭ ２００μｌ処理群、１０００μｇ／ｍｌ濃度のアルブチン１００μｌ及び実施例１で製造したＦＢＳ－ＣＭ １００μｌ混合処理群、実施例１で製造したｈＰＬ－ＣＭ ２００μｌ処理群、１０００μｇ／ｍｌ濃度のアルブチン１００μｌ及び実施例１で製造したｈＰＬ－ＣＭ １００μｌ混合処理群を設定した。トランスウェル上に載せられた人工皮膚に２日に１回ずつ前記設定したように、ＦＢＳ－ＣＭ、ｈＰＬ－ＣＭまたはアルブチンを繰り返し処理して２１日間培養した後、メラニン合成量を測定し、測定結果を図７に示した。
図７に示したように、対照群のメラニン合成量を１００％と基準したとき、陽性対照群であるアルブチン（Ａｒｂｕｔｉｎ）では７４．１％とメラニン合成量が減少し、ＦＢＳ－ＣＭ処理群及びｈＰＬ－ＣＭ処理群は、それぞれ９４．６％及び８５．６％と減少した。陽性対照群であるアルブチン（Ａｒｂｕｔｉｎ）とＦＢＳ－ＣＭ及びｈＰＬ－ＣＭを混合（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）処理した場合、アルブチン／ＦＢＳ－ＣＭは８２．５％、アルブチン／ｈＰＬ－ＣＭは７６．７％とメラニン合成量がさらに減少することを確認した。即ち、皮膚美白効果を示す３Ｄ人工皮膚のメラニン合成量を通してＦＢＳ－ＣＭに比してｈＰＬ－ＣＭがさらに高い美白効果を示すことを確認した。
実施例８．ＦＢＳ－ＣＭまたはｈＰＬ－ＣＭの発毛効能の確認
発毛は、真皮毛乳頭細胞（ｄｅｒｍａｌ ｐａｐｉｌｌａ）の生成及び増殖を通して可能である。従って、培養条件による幹細胞培養液の発毛効能を確認するために、ヒト毛乳頭細胞（ｐｒｉｍａｒｙ ｈｕｍａｎ ｄｅｒｍａｌ ｐａｐｉｌｌａ ｃｅｌｌ）を利用して、成長、即ち、増殖に影響を与えるかを確認した。具体的に、実施例１のような方法で製造したＦＢＳ－ＣＭ処理群または実施例１のような方法で製造したｈＰＬ－ＣＭ処理群を実験群とし、無血清培地処理群を対照群に設定した。９６ウェルプレートにヒト毛乳頭細胞（ＰｒｏｍｏＣｅｌｌ社購入）を播種（ｓｅｅｄｉｎｇ）し、２４時間後、細胞が全て付くと、各ウェルにＦＢＳ－ＣＭ、ｈＰＬ－ＣＭまたは無血清培地を２００μｌずつ入れた後、４８時間の間培養し、ヒト毛乳頭細胞に対する増殖促進効果をＣＣＫ－８を通して確認し、その結果を図８に示した。
発毛は、真皮毛乳頭細胞（ｄｅｒｍａｌ ｐａｐｉｌｌａ）の生成及び増殖を通して可能である。従って、培養条件による幹細胞培養液の発毛効能を確認するために、ヒト毛乳頭細胞（ｐｒｉｍａｒｙ ｈｕｍａｎ ｄｅｒｍａｌ ｐａｐｉｌｌａ ｃｅｌｌ）を利用して、成長、即ち、増殖に影響を与えるかを確認した。具体的に、実施例１のような方法で製造したＦＢＳ－ＣＭ処理群または実施例１のような方法で製造したｈＰＬ－ＣＭ処理群を実験群とし、無血清培地処理群を対照群に設定した。９６ウェルプレートにヒト毛乳頭細胞（ＰｒｏｍｏＣｅｌｌ社購入）を播種（ｓｅｅｄｉｎｇ）し、２４時間後、細胞が全て付くと、各ウェルにＦＢＳ－ＣＭ、ｈＰＬ－ＣＭまたは無血清培地を２００μｌずつ入れた後、４８時間の間培養し、ヒト毛乳頭細胞に対する増殖促進効果をＣＣＫ－８を通して確認し、その結果を図８に示した。
図８に示したように、幹細胞培養液を処理したとき、ｈＰＬ－ＣＭ処理群が対照群に対比して増殖促進効果が２．６倍以上増加することを確認し、ｈＰＬ－ＣＭ処理群がＦＢＳ－ＣＭ処理群より増殖促進効果が約２０％程度高く奏されることを確認してｈＰＬ－ＣＭの発毛効果を確認した。
実施例９．培養条件と分離方法によるヒト真皮線維芽細胞増殖効果の比較
濃度勾配遠心分離法（Ｇｒａｄｉｅｎｔ ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ、ＧＣＭ）の分離方法で分離された骨髄由来単一クローナル中間葉幹細胞を実施例１．２で実施した方法と同じ方法で作製した中間葉幹細胞培養液（以下、ＧＣＭ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ ｍｅｄｉｕｍ、ＧＣＭ－ＣＭ）と実施例１の層分離培養方法で分離された幹細胞培養液（以下、ＳＣＭ－ＣＭ）の効能比較を実施した。
濃度勾配遠心分離法（Ｇｒａｄｉｅｎｔ ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ、ＧＣＭ）の分離方法で分離された骨髄由来単一クローナル中間葉幹細胞を実施例１．２で実施した方法と同じ方法で作製した中間葉幹細胞培養液（以下、ＧＣＭ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ ｍｅｄｉｕｍ、ＧＣＭ－ＣＭ）と実施例１の層分離培養方法で分離された幹細胞培養液（以下、ＳＣＭ－ＣＭ）の効能比較を実施した。
９．１ 実験群及び対照群の設定
実験群としてＧＣＭ分離方法で分離された中間葉幹細胞を実施例１．２のような方法でＦＢＳまたはｈＰＬ包含培地で培養後、無血清培地に移して培養して収得した中間葉幹細胞培養液（以下、ＧＣＭ－ＦＢＳ－ＣＭまたはＧＣＭ－ｈＰＬ－ＣＭと命名）を処理した、ＧＣＭ－ＦＢＳ－ＣＭ処理群及びＧＣＭ－ｈＰＬ－ＣＭ処理群を設定し、実施例１のように層分離培養方法で分離した骨髄由来単一クローナル中間葉幹細胞をＦＢＳまたはｈＰＬ包含培地で培養後、無血清培地に移して培養して収得した中間葉幹細胞培養液（以下、ＳＣＭ－ＦＢＳ－ＣＭまたはＳＣＭ－ｈＰＬ－ＣＭと命名）を処理したＳＣＭ－ＦＢＳ－ＣＭ処理群及びＳＣＭ－ｈＰＬ－ＣＭ処理群を設定した。対照群として無血清培地処理群を設定した。
実験群としてＧＣＭ分離方法で分離された中間葉幹細胞を実施例１．２のような方法でＦＢＳまたはｈＰＬ包含培地で培養後、無血清培地に移して培養して収得した中間葉幹細胞培養液（以下、ＧＣＭ－ＦＢＳ－ＣＭまたはＧＣＭ－ｈＰＬ－ＣＭと命名）を処理した、ＧＣＭ－ＦＢＳ－ＣＭ処理群及びＧＣＭ－ｈＰＬ－ＣＭ処理群を設定し、実施例１のように層分離培養方法で分離した骨髄由来単一クローナル中間葉幹細胞をＦＢＳまたはｈＰＬ包含培地で培養後、無血清培地に移して培養して収得した中間葉幹細胞培養液（以下、ＳＣＭ－ＦＢＳ－ＣＭまたはＳＣＭ－ｈＰＬ－ＣＭと命名）を処理したＳＣＭ－ＦＢＳ－ＣＭ処理群及びＳＣＭ－ｈＰＬ－ＣＭ処理群を設定した。対照群として無血清培地処理群を設定した。
９．２ ヒト真皮線維芽細胞増殖効果の測定
９６ウェルプレートにヒト真皮線維芽細胞を播種（ｓｅｅｄｉｎｇ）した後、２４時間後、細胞が全て付くと、全ての培養培地を除去した後、前記実施例９．１で設定したように幹細胞培養液または無血清培地を２００μｌずつ各ウェルに入れた後、４８時間の間培養し、ヒト真皮線維芽細胞の増殖促進効果をＣＣＫ－８を通して確認し、その結果を図９に示した。
９６ウェルプレートにヒト真皮線維芽細胞を播種（ｓｅｅｄｉｎｇ）した後、２４時間後、細胞が全て付くと、全ての培養培地を除去した後、前記実施例９．１で設定したように幹細胞培養液または無血清培地を２００μｌずつ各ウェルに入れた後、４８時間の間培養し、ヒト真皮線維芽細胞の増殖促進効果をＣＣＫ－８を通して確認し、その結果を図９に示した。
図９に示したように、同じ細胞株でＦＢＳ培養条件よりｈＰＬ培養条件の場合にヒト真皮線維芽細胞の増殖効果が高いことを確認し、ＧＣＭ分離方法で培養された場合よりＳＣＭ分離方法で培養された二つの細胞株で増殖率がさらに高いことを確認した。
実施例１０．培養条件と分離方法によるＶＥＧＦの含量比較
ＧＣＭ分離方法で分離された中間葉幹細胞の培養液と実施例１の層分離培養方法で分離された幹細胞培養液の効能比較をさらに実施した。具体的に、実施例９．１で作製した対照群と実験群であるＧＣＭ－ＦＢＳ－ＣＭ群、ＧＣＭ－ｈＰＬ－ＣＭ群、ＳＣＭ－ＦＢＳ－ＣＭ群及びＳＣＭ－ｈＰＬ－ＣＭ群を対象に実施例２と同じ方法で代表的な成長因子であるＶＥＧＦの含量を比較し、その結果を図１０に示した。
ＧＣＭ分離方法で分離された中間葉幹細胞の培養液と実施例１の層分離培養方法で分離された幹細胞培養液の効能比較をさらに実施した。具体的に、実施例９．１で作製した対照群と実験群であるＧＣＭ－ＦＢＳ－ＣＭ群、ＧＣＭ－ｈＰＬ－ＣＭ群、ＳＣＭ－ＦＢＳ－ＣＭ群及びＳＣＭ－ｈＰＬ－ＣＭ群を対象に実施例２と同じ方法で代表的な成長因子であるＶＥＧＦの含量を比較し、その結果を図１０に示した。
図１０に示したように、幹細胞培養液内のＶＥＧＦの含量を比較した結果、同じ方式で分離した中間葉幹細胞細胞株でＦＢＳを添加した培地で培養した中間葉幹細胞培養液よりｈＰＬを添加した培地で培養した中間葉幹細胞培養液でＶＥＧＦの含量が高いことを確認でき、ＧＣＭ分離方法で培養された場合よりＳＣＭ分離方法で培養された二つの細胞株で含量が高いことを確認した。
以上、本発明内容の特定の部分を詳細に記述したが、当業界における通常の知識を有する者にとって、このような具体的な記述は単に好ましい実施様態であるだけで、これによって本発明の範囲が制限されるものではない点は明らかであるだろう。従って、本発明の実質的な範囲は、添付の請求項とそれらの等価物により定義されるといえるだろう。
本発明に係る組成物は、目的によって様々な形態に製剤化が可能である。下記は、本発明に係る組成物を活性成分として含有させたいくつかの剤形化方法を例示したものであり、本発明は、これに限定されるものではない。
剤形例１：化粧水
本発明の中間葉幹細胞培養液を含有した化粧料のうち化粧水の剤形例は、下記のとおりである。
成分（含量、単位：重量％）
本発明の中間葉幹細胞培養液 ２．０
グリセリン ５．０
１，３－ブチレングリコール ３．０
ＰＥＧ１５００ １．０
アラントイン ０．１
ＤＬ－パンテノール ０．３
ＥＤＴＡ－２Ｎａ ０．０２
ベンゾフェノン－９ ０．０４
ヒアルロン酸ナトリウム ５．０
エタノール １０．０
オクチルドデセス－１６ ０．２
ポリソルベート２０ ０．２
防腐剤、香り、色素 微量
蒸留水 残量
合計 １００
本発明の中間葉幹細胞培養液を含有した化粧料のうち化粧水の剤形例は、下記のとおりである。
成分（含量、単位：重量％）
本発明の中間葉幹細胞培養液 ２．０
グリセリン ５．０
１，３－ブチレングリコール ３．０
ＰＥＧ１５００ １．０
アラントイン ０．１
ＤＬ－パンテノール ０．３
ＥＤＴＡ－２Ｎａ ０．０２
ベンゾフェノン－９ ０．０４
ヒアルロン酸ナトリウム ５．０
エタノール １０．０
オクチルドデセス－１６ ０．２
ポリソルベート２０ ０．２
防腐剤、香り、色素 微量
蒸留水 残量
合計 １００
剤形例２：クリーム
本発明の中間葉幹細胞培養液を含有した化粧料のうちクリームの処方例は、下記のとおりである。
成分（含量、単位：重量％）
本発明の中間葉幹細胞培養液 ２．０
親油型モノステアリン酸グリセリン ２．０
セテアリルアルコール ２．２
ステアリン酸 １．５
蜜蝋 １．０
ポリソルベート６０ １．６
ソルビタンステアレート ０．６
硬化植物油 １．０
スクアラン ３．０
鉱物油 ５．０
トリオクタノイン ５．０
ジメチコン １．０
ナトリウムマグネシウムシリケート ０．１
グリセリン ５．０
ベタイン ３．０
トリエタノールアミン １．０
ヒアルロン酸ナトリウム ４．０
防腐剤、香り、色素 微量
蒸留水 残量
合計 １００
本発明の中間葉幹細胞培養液を含有した化粧料のうちクリームの処方例は、下記のとおりである。
成分（含量、単位：重量％）
本発明の中間葉幹細胞培養液 ２．０
親油型モノステアリン酸グリセリン ２．０
セテアリルアルコール ２．２
ステアリン酸 １．５
蜜蝋 １．０
ポリソルベート６０ １．６
ソルビタンステアレート ０．６
硬化植物油 １．０
スクアラン ３．０
鉱物油 ５．０
トリオクタノイン ５．０
ジメチコン １．０
ナトリウムマグネシウムシリケート ０．１
グリセリン ５．０
ベタイン ３．０
トリエタノールアミン １．０
ヒアルロン酸ナトリウム ４．０
防腐剤、香り、色素 微量
蒸留水 残量
合計 １００
剤形例３：エッセンス
本発明の中間葉幹細胞培養液を含有した化粧料のうちエッセンスの処方例は、下記のとおりである。
成分（含量、単位：重量％）
本発明の中間葉幹細胞培養液 ２．０
グリセリン １０．０
ベタイン ５．０
ＰＥＧ１５００ ２．０
アラントイン ０．１
ＤＬ－パンテノール ０．３
ＥＤＴＡ－２Ｎａ ０．０２
ベンゾフェノン－９ ０．０４
ヒドロキシエチルセルロース ０．１
ヒアルロン酸ナトリウム ８．０
カルボキシビニルポリマー ０．２
トリエタノールアミン ０．１８
オクチルドデカノール ０．３
オクチルドデセス－１６ ０．４
エタノール ６．０
防腐剤、香り、色素 微量
蒸留水 残量
合計 １００
本発明の中間葉幹細胞培養液を含有した化粧料のうちエッセンスの処方例は、下記のとおりである。
成分（含量、単位：重量％）
本発明の中間葉幹細胞培養液 ２．０
グリセリン １０．０
ベタイン ５．０
ＰＥＧ１５００ ２．０
アラントイン ０．１
ＤＬ－パンテノール ０．３
ＥＤＴＡ－２Ｎａ ０．０２
ベンゾフェノン－９ ０．０４
ヒドロキシエチルセルロース ０．１
ヒアルロン酸ナトリウム ８．０
カルボキシビニルポリマー ０．２
トリエタノールアミン ０．１８
オクチルドデカノール ０．３
オクチルドデセス－１６ ０．４
エタノール ６．０
防腐剤、香り、色素 微量
蒸留水 残量
合計 １００
以上、本発明内容の特定の部分を詳細に記述したが、当業界における通常の知識を有する者にとって、このような具体的な記述は単に好ましい実施様態であるだけで、これによって本発明の範囲が制限されるものではない点は明らかであるだろう。従って、本発明の実質的な範囲は、添付の請求項とそれらの等価物により定義されるといえるだろう。
Claims (13)
- １）中間葉幹細胞をヒト血小板溶解物（ｈｕｍａｎ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｌｙｓａｔｅ、ｈＰＬ）が含まれた培地で培養するステップ；
２）培養された幹細胞を収得して無血清培地で培養するステップ；及び
３）中間葉幹細胞由来培養液を収去し、ろ過して幹細胞培養液を収得するステップ；を含む
成長因子及びサイトカインが豊富な中間葉幹細胞培養液の製造方法。 - 前記ｈＰＬが含まれた培地は、１％～１０％（ｗ／ｗ）のｈＰＬが含まれた培地であることを特徴とする、請求項１に記載の中間葉幹細胞培養液の製造方法。
- 前記中間葉幹細胞は、
１）個体から分離された骨髄を培養するステップ；
２）前記１）ステップの上層液だけを新たな容器に移動させて培養するステップ；
３）前記２）ステップの上層液だけを分離して培養容器で３５℃～３９℃で１時間～３時間培養後、３５℃～３９℃で１２～３６時間培養を２～３回繰り返し、次いで３５℃～３９℃で２４～７２時間培養し、毎回上層液を新たな培養容器に移動させて繰り返し培養するステップ；及び
４）最終培養容器で単一クローナル幹細胞を得るステップ；を含む幹細胞の層分離培養方法（ｓｕｂｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ、ＳＣＭ）により分離された骨髄由来単一クローナル中間葉幹細胞であることを特徴とする、請求項１に記載の中間葉幹細胞培養液の製造方法。 - 前記１）ステップの中間葉幹細胞は、５０細胞／ｃｍ２～１０００細胞／ｃｍ２の密度で接種することを特徴とする、請求項１に記載の中間葉幹細胞培養液の製造方法。
- 前記成長因子及びサイトカインは、アポリポプロテイン－Ａ－１（ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ－Ａ－１）、ケモカイン（Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフ）リガンド－４（ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ（Ｃ－Ｘ－Ｃ ｍｏｔｉｆ）ｌｉｇａｎｄ－４、ＣＸＣＬ－４）、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド－５（ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ（Ｃ－Ｃ ｍｏｔｉｆ）ｌｉｇａｎｄ－５、ＣＣＬ－５）、レチノール結合タンパク質－４（Ｒｅｔｉｎｏｌ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ－４、ＲＢＰ－４）、ビタミンＤ－ＢＰ（Ｖｉｔａｍｉｎ Ｄ－ＢＰ）、アディポネクチン（Ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ）、脳由来神経栄養因子（Ｂｒａｉｎ ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ、ＢＤＮＦ）、補体成分５／補体成分５ａ（Ｃ５／Ｃ５ａ）、分化クラスター１４（Ｃｌｕｓｔｅｒ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ １４、ＣＤ１４）、Ｆａｓリガンド（ＴＮＦ ＳＦ６）（Ｆａｓ ｌｉｇａｎｄ（ＴＮＦ ＳＦ６））、成長／分化因子１５（Ｇｒｏｗｔｈ／ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ １５、ＧＤＦ１５）、インターロイキン－６（ＩＬ－６）、インターロイキン－８（ＩＬ－８）、血小板由来成長因子－ＡＡ（ｐｌａｔｅｌｅｔ ｄｅｒｉｖｅｄ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ－ＡＡ、ＰＤＧＦ－ＡＡ）、マクロファージコロニー刺激因子（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｃｏｌｏｎｙ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ、Ｍ－ＣＳＦ）及び白血病阻止因子（Ｌｅｕｋｅｍｉａ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｆａｃｔｏｒ、ＬＩＦ）からなる群から選択される、いずれか１以上を含むことを特徴とする、請求項１に記載の中間葉幹細胞培養液の製造方法。
- 前記成長因子及びサイトカインは、血管内皮成長因子（Ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ、ＶＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子２（Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ２、ＦＧＦ２）、肝細胞成長因子（Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ、ＨＧＦ）、線維芽細胞成長因子７（Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ７、ＦＧＦ７）、線維芽細胞成長因子１９（Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ １９、ＦＧＦ１９）、アンギオゲニン（Ａｎｇｉｏｇｅｎｉｎ）、アンジオポエチン－１（Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ－１）、アンジオポエチン－２（Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ－２）、ディックコプフ関連タンパク質１（Ｄｉｃｋｋｏｐｆ ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ １、ＤＫＫ－１）、インスリン様増殖因子結合タンパク質－２（ｉｎｓｕｌｉｎ ｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ－２、ＩＧＦＢＰ－２）、インスリン様増殖因子結合タンパク質－３（ｉｎｓｕｌｉｎ ｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ－３、ＩＧＦＢＰ－３）、血管細胞接着分子－１（Ｖａｓｃｕｌａｒ ｃｅｌｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅ－１、ＶＣＡＭ－１）、ケモカイン（Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフ）リガンド－１２（ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ（Ｃ－Ｘ－Ｃ ｍｏｔｉｆ）ｌｉｇａｎｄ－１２、ＣＸＣＬ－１２）、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド－２（ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ（Ｃ－Ｃ ｍｏｔｉｆ）ｌｉｇａｎｄ－２、ＣＣＬ－２）、ペントラキシン－３（Ｐｅｎｔｒａｘｉｎ－３）、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド－７（ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ（Ｃ－Ｃ ｍｏｔｉｆ）ｌｉｇａｎｄ－７、ＣＣＬ－７）、マクロファージ遊走阻止因子（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｆａｃｔｏｒ、ＭＩＦ）、インターロイキン－２２（ＩＬ－２２）、インターロイキン－４（ＩＬ－４）、インターロイキン－１７Ａ（ＩＬ－１７Ａ）、キチナーゼ３－ｌｉｋｅ １（Ｃｈｉｔｉｎａｓｅ ３－ｌｉｋｅ １）、アジプシン（ａｄｉｐｓｉｎ）、Ｃ－反応性タンパク（Ｃ－ｒｅａｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ）、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（Ｄｉｐｅｐｔｉｄｙｌ ｐｅｐｔｉｄａｓｅ ＩＶ、ＤＰＰ ＩＶ）、シスタチンＣ（Ｃｙｓｔａｔｉｎ Ｃ）、エンプリン（Ｅｍｍｐｒｉｎ）、オステオポンチン（Ｏｓｔｅｏｐｏｎｔｉｎ）、セルピン（Ｓｅｒｐｉｎ）Ｅ１（ｎｅｘｉｎ）、トロンボスポンジン（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ）－１（ＴＳＰ－１）、レジスチン（Ｒｅｓｉｓｔｉｎ）、ウロキナーゼ受容体（Ｕｒｏｋｉｎａｓｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ｕＰＡＲ）及びエンドグリン（Ｅｎｄｏｇｌｉｎ）からなる群から選択される、いずれか１以上をさらに含むことを特徴とする、請求項５に記載の中間葉幹細胞培養液の製造方法。
- １）中間葉幹細胞をヒト血小板溶解物（ｈｕｍａｎ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｌｙｓａｔｅ、ｈＰＬ）が含まれた培地で培養するステップ；
２）培養された幹細胞を収得して無血清培地で培養するステップ；及び
３）中間葉幹細胞由来培養液を収去し、ろ過して幹細胞培養液を収得するステップ；を含む
成長因子及びサイトカインが豊富な皮膚再生、シワ改善、皮膚美白、発毛または育毛用化粧料組成物製造用中間葉幹細胞培養液の製造方法。 - 請求項１乃至７のいずれか一項に記載の方法で製造された成長因子及びサイトカインが豊富な中間葉幹細胞培養液。
- 請求項８に記載の中間葉幹細胞培養液を含む皮膚再生用化粧料組成物。
- 請求項８に記載の中間葉幹細胞培養液を含むシワ改善及び皮膚弾力増進用化粧料組成物。
- 請求項８に記載の中間葉幹細胞培養液を含む皮膚美白用化粧料組成物。
- 請求項８に記載の中間葉幹細胞培養液を含む発毛または育毛促進用化粧料組成物。
- 請求項８に記載の中間葉幹細胞培養液を個体に処理するステップを含む、皮膚再生；シワ改善及び皮膚弾力増進；皮膚美白；並びに発毛または育毛促進からなる群から選択されるいずれか一つの方法。
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Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20120126284A (ko) * | 2011-05-11 | 2012-11-21 | (주)안트로젠 | 고농도의 세포성장인자를 포함하는 중간엽 줄기세포 배양액의 제조방법 및 이로부터 얻어진 조성물 |
| JP2015507921A (ja) * | 2012-02-13 | 2015-03-16 | ガミダ セル リミテッド | 間葉系幹細胞の培養 |
| KR20150065147A (ko) * | 2013-11-29 | 2015-06-12 | 인하대학교 산학협력단 | 클로날 중간엽 줄기세포를 포함하는, 아토피성 피부염 예방 또는 치료용 약학적 조성물 |
| JP2018512176A (ja) * | 2015-04-03 | 2018-05-17 | ステムメディケア・カンパニー・リミテッド | 間葉幹細胞でのタンパク質量産方法 |
| JP2021503286A (ja) * | 2017-11-16 | 2021-02-12 | ボード・オブ・リージエンツ，ザ・ユニバーシテイ・オブ・テキサス・システム | Ｍｓｃ由来エキソソームの製造方法 |
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Family Cites Families (6)
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| KR100802011B1 (ko) * | 2005-08-10 | 2008-02-12 | 인하대학교 산학협력단 | 층분리배양법을 이용한 골수에서의 중간엽 줄기세포분리방법 |
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Patent Citations (6)
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|---|---|---|---|---|
| KR20120126284A (ko) * | 2011-05-11 | 2012-11-21 | (주)안트로젠 | 고농도의 세포성장인자를 포함하는 중간엽 줄기세포 배양액의 제조방법 및 이로부터 얻어진 조성물 |
| JP2015507921A (ja) * | 2012-02-13 | 2015-03-16 | ガミダ セル リミテッド | 間葉系幹細胞の培養 |
| KR20150065147A (ko) * | 2013-11-29 | 2015-06-12 | 인하대학교 산학협력단 | 클로날 중간엽 줄기세포를 포함하는, 아토피성 피부염 예방 또는 치료용 약학적 조성물 |
| JP2018512176A (ja) * | 2015-04-03 | 2018-05-17 | ステムメディケア・カンパニー・リミテッド | 間葉幹細胞でのタンパク質量産方法 |
| JP2021503286A (ja) * | 2017-11-16 | 2021-02-12 | ボード・オブ・リージエンツ，ザ・ユニバーシテイ・オブ・テキサス・システム | Ｍｓｃ由来エキソソームの製造方法 |
| JP2021520790A (ja) * | 2018-04-10 | 2021-08-26 | ブレインストーム セル セラペウティクス リミテッド | 細胞型特異的エキソソームおよびそれらの使用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| BLANDE, IVAN SOUZA ET AL.: "Adipose tissue mesenchymal stem cell expansion in animal serum-free medium supplemented with autolog", TRANSFUSION, vol. 49, no. 12, JPN6023017675, 2009, pages 2680 - 2685, ISSN: 0005054266 * |
| CAPELLI, C. ET AL.: "Human platelet lysate allows expansion and clinical grade production of mesenchymal stromal cells fr", BONE MARROW TRANSPLANT., vol. 40, JPN6022045109, 2007, pages 785 - 791, XP037760681, ISSN: 0004907759, DOI: 10.1038/sj.bmt.1705798 * |
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