KR101627562B1 - 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 함유하는 화장료 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명의 목적은 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 함유하는 화장료 조성물을 제공하는 것으로, 구체적으로 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 함유하는 주름개선용, 미백용, 보습용 및 피부탄력 증진용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

Description

인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 함유하는 화장료 조성물{Cosmetic Composition containing Human Adipocyte Conditioned Media Extract and Hyaluronic acid}
본 발명은 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 함유하는 주름개선용, 미백용, 보습용 또는 탄력증진용 화장료 조성물에 관한 것이다.
화장료의 가장 큰 관심 분야 중 하나는 노화와 관련된 주름, 색소침착, 탄력감소, 피부건조화 및 탈모 또는 모발의 윤기 부족 등이다. 피부는 노화를 통해 다양한 변화를 맞게 된다. 먼저 피부의 구성 성분인 표피, 진피 및 피하조직의 두께가 얇아지고 피부에 탄력을 주는 ECM(Extracellular matrix) 성분이 변화하게 되는데 그 중 ECM의 70~80%를 차지하는 콜라겐은 나이가 들면서 그 생성이 급격하게 저하되어 주름생성과 밀접한 관계를 가지게 되고, 피부결합조직을 이루고 있는 콜라겐(collagen), 엘라스틴(elastin), 프로티오글리칸(proteoglycans), 글루코스아미노글리칸(glucosaminoglycan), 라미닌(laminin), 파이브로넥틴(fibronectin) 등은 산화되어 그 기능을 잃어버림으로써 피부가 탄력을 잃고 주름이 과도하게 형성되면서 노인성 피부로 변화되어 간다. ECM(Extracellular matrix)의 결합조직섬유에는 아교섬유(교원섬유, collagen fiber), 세망섬유(reticular fiber), 탄력섬유(탄성섬유, elastic fiber)가 있으며, 이 중 피부결합조직의 70% 정도를 차지하고 있는 콜라겐은 피부의 섬유아세포(fibroblast)에서 대부분 형성된다. 나이가 들면서 피부 결합조직 내의 콜라겐 함량이 줄어드는데 이는 콜라겐 합성의 저하와 분해의 촉진에 의한 것이다. 따라서 콜라겐 생합성의 저하와 콜라겐 분해 촉진은 피부 주름 형성의 가장 큰 원인이라 할 수 있다. 콜라겐 생합성 과정은 Transcription level과 Post-translation level에 관여하는 많은 Factor들에 의해 조절을 받아 변화를 일으키며, 콜라겐 분해는 자외선 등에 의해 콜라겐을 분해하는 콜라겐네이즈(Collagenase)와 같은 Matrix metalloproteases(MMP)의 발현의 촉진으로 콜라겐 분해가 촉진되어 콜라겐 함량이 줄어든다. 아울러 외부 환경에 의해 콜라겐의 변형이 가속화되면서 피부는 주름이 많아지고 깊어지게 된다. 결과적으로 피부노화 현상은 세포의 비균질화, 엘라스틴의 소실, 콜라겐의 파괴, 콜라겐 합성의 감소 및 지연 등에 의해 나타난다. 따라서 피부노화 현상은 피부 표피에서도 일어나지만 이보다는 진피에서 일어나는 현상이라고 볼 수 있다.
피부는 노화가 진행되기 전에는 피부세포의 생리활성이 활발하여 진피(Dermis)에 있는 섬유아세포(fibroblast)에서는 피부의 탄력 및 주름형성 억제에 중요한 콜라겐(collagen)의 합성과 신진대사가 왕성하며 또한 피부수분 유지에 필수적인 히아루론산(Hyaluronic acid)을 포함한 당단백질류인 GAGS(Glucosaminoglycans) 합성도 활발하여 피부에 탄력성, 부드러움, 유연성 및 보습성을 부여한다. 또한 표피에서는 기저세포(basal layer cell)의 증식(proliferation)이 활발하고, 피부세포간의 결합을 강화시키는 라미닌, 인테그린, 데스모좀과 같은 결합단백질(Adhesion protein)의 생성이 균형적으로 이루어져 피부 세포조직을 강화시켜 건강한 피부를 유지해 준다. 그러나 현대인의 피부는 외부의 각종 유해 환경 및 스트레스에 노출되어 다양한 손상을 받고 있고, 나이가 들면서 피부의 생리활성이 저하되고 손상된 피부의 회복속도가 느려지면서 피부는 탄력저하, 건조, 주름형성, 색소침착, 검버섯, 칙칙함 등의 다양한 피부노화 현상이 나타난다. 따라서 화장료의 가장 큰 목표는 이런 노화증세를 개선하는데 있고, 이를 위한 다양한 화장료가 개발되고 있다.
일반적으로, 피부탄력 감소, 피부주름, 색소침착 등의 피부노화현상은 콜라겐의 파괴, 콜라겐 합성의 감소, 엘라스틴의 소실 및 피부생리 저하에 따른 멜라닌 색소침착 등에 의해서 나타나는 것으로서, 피부 표피와 진피에서 일어나는 현상이라고 볼 수 있다. 최근, 피부 노화방지에 대한 피부 생리학적 연구가 많이 행해지고 있으며, 실제로 화장료에 있어서 피부주름방지를 위해 자외선 차단제, 항산화제, 세포활성촉진제 등이 사용되고 있고, 또한 콜라겐 합성에 따른 피부 주름개선 방법들이 제시되고 있다. 한편, 생화학 및 분자생물학의 발전을 기반으로 하여 우리 생체 내에 존재하는 성장인자와 같은 소량의 신호물질들이 발견되었으며, 이를 기반으로 한 생체의 노화이론이 재정립되고 있는 중이다. 또한 이 신호물질은 나이가 증가함에 따라 생체 내에서 감소하게 되는데 바로 이 성장인자의 감소가 우리의 노화와 밀접한 관계가 있다는 것이 밝혀지고 있다. 이러한 성장인자들은 각 조직의 기저에 존재하고 있는 줄기세포에서 다량 생산되고 있다.
일광 중 자외선과 같은 유해요소로부터 피부를 효과적으로 방어하지만 연령이 높아짐에 따라 피부조직이 점차 변화하면서 일광에 대한 방어 능력이 저하되어 이로 인해 주름, 색소침착, 피부의 처짐, 피부 탄력의 상실, 피부의 거칠어짐, 피부의 건조함, 탈모 및 모발윤기 감소 등이 생기게 된다. 일광에 의한 이러한 영향이 축적되어 생긴 결과를 광노화라 부르기도 한다.
이러한 피부노화에 대한 문제점을 해결하기 위한 다양한 화장료 조성물이 연구되어지고 있는데 피부의 주름개선 효과는 일부에서 가시적인 성과를 보이고 있다. 현재 피부주름 및 기미, 색소침착 개선을 위해 널리 사용되고 있는 레티노이드류, 그중에서도 레티놀(retinol)에 대한 피부 주름제거 임상 결과들이 다양하게 보고되어지고 있는데, 레티놀을 함유한 화장료는 일광에 의해 형성된 피부주름살이나 피부처짐, 탄력감소 등을 효과적으로 개선하였다. 미국 특허 4,603,146 및 4,877,805 등에 콜라겐 합성과 콜라겐나아제 활성억제에 의한 콜라겐 분해억제에 효과적인 레티놀(비타민 A)을 이용한 주름개선 사례가 있다.
또한, 콜라겐 합성 과정에 필수적인 L-아스코르브산(비타민 C)을 함유하는 화장료 조성물이 피부주름개선, 자외선차단, 기미/주근깨/검버섯 등의 색소침착 등에 효과적이다 라는 보고가 있다(USP4,938,969/USP4,772,591/EP0533667).
뿐만아니라, 각질제거에 효과가 있는 아하(α-Hydroxy acid : AHA) 함유 화장료 조성물 역시 과각질 제거와 함께 세포의 활성을 촉진하여 피부를 개선하는데 널리 사용되어지고 있다.
우리 몸은 약 210여 가지의 세포들로 구성되어 있고 각각의 세포는 고유의 특성을 유지하면서 생명활동을 담당하고 있다. 모든 생명체가 생명이 있듯이 우리 몸의 각각의 세포는 수명이 있고 끊임없이 죽고 대신 새로운 세포로 채워지게 된다. 바로 이러한 과정을 가능하게 하는 것이 줄기세포이다. 줄기세포는 조직이나 기관의 분화된 세포들 사이에 존재하는 미분화 세포로써, 끊임없이 스스로 증식하는 자가 재생능력(Self Renewal)과 신체내의 모든 조직세포로 분화할 수 있는 능력(Differentiation to specific tissue)을 가진 만능세포이다. 성체줄기세포는 조혈모세포, 중간엽줄기세포, 신경모세포, 상피모세포 등이 존재하며 조혈모세포의 경우 혈구 및 임파구를 생산할 수 있는 모세포로서 혈액암을 포함한 면역계 질환 치료에 도움이 되고, 중간엽줄기세포의 경우 뼈, 연골, 지방 및 섬유조직으로 분화되며 각 조직이 손상되었을 때 이들의 회복에 관여한다. 그러나 이러한 성체 줄기세포는 각각의 조직에 소량 존재하며 수년간 분열 혹은 증식을 하지 않고 잠잠하게 지내기도 한다. 즉, 줄기세포라 함은 이러한 분화능력은 가지고 있으나, 아직 분화는 일어나지 않은 미분화 세포이다. 이러한 미분화 상태에서 적절한 조건을 맞춰주면 줄기세포는 다양한 조직 세포로 분화할 수 있다. 따라서 줄기세포의 이러한 분화능력을 이용하여, 손상된 조직을 재생하는 등의 치료에 응용하기 위한 연구가 진행되고 있다. 줄기세포는 또 크게 배아줄기세포, 성체줄기세포로 나누어진다. 줄기세포는 출생 후부터 우리 몸에 있는 여러 종류의 조직에 존재하는 성체줄기세포 (Adult Stem Cell)와 인체 생명의 시초가 되는 수정란에서 유래하는 배아줄기세포 (Embryonic Stem Cell)의 두 종류로 구분될 수 있다. 성체줄기세포는 특정한 조직을 구성하는 세포로 즉, 골수세포는 혈구세포로, 피부줄기세포는 피부로, 신경세포는 후각신경세포로만 분화되도록 운명이 정해져 있는 세포이다. 줄기세포가 어떤 세포로 분화되느냐 하는 것은 그 줄기세포를 어떠한 환경에서 배양하느냐에 따라 좌우된다. 따라서 신경세포로 분화할 환경을 만들어 주면 신경세포가 되고, 피부세포로 분화할 환경을 만들어 주면 피부세포가 될 수 있는 것이다. 본 발명에서는 이러한 특성을 이용하여 화장품 조성물에 줄기세포배양 추출물을 응용하고자 하는 것이다.
인체 유래 지방줄기세포 배양액 추출물(Human adipocyte conditioned media extracts)을 생산하기 위한 줄기세포의 배양방법으로는 지방조직에서 지방을 제거한 세포를 여러 세대 배양해 줄기세포를 분리해 낸 후, 줄기세포 배양액으로부터 줄기세포가 만들어낸 단백질을 얻을 수 있다. 이 단백질 혼합물에는 EGF(표피세포성장인자), vEGF(혈관내피성장인자), TGF(형질전환성장인자), HGF(간세포증식인자), FGF(섬유아세포성장인자), IGF(인슐린유사성장인자) 등 150여 가지의 성장인자(growth factor) 단백질 성분을 포함하고 있는 것으로 보고되고 있다. 지방줄기세포는 성체줄기세포의 한 종류로써 골수줄기세포나 제대혈 줄기세포보다 채취하기가 쉽고 대량배양이 가능하면서도 줄기세포 함유량이 많기 때문에 지방줄기세포가 가장 많이 활용되고 있다. 하나의 세포가 증식하고 다른 종류로 분화하는데 있어서 가장 중요한 역할을 하는 것이 바로 성장 인자(growth factor)다. 이 성장 인자는 세포가 증식 또는 분화를 일으키는 신호를 세포 내부로 전달하는 역할을 하며, 이러한 신호를 바탕으로 세포는 분열, 분화를 하게 되어 피부를 생생하고 생기롭게 가꾸어주며 언제나 피부의 컨디션을 신선하고, 최상으로 만들어주는 상태를 유지할 수 있다. 줄기세포로부터 만들어낸 단백질들을 피부의 섬유아세포(fibroblast)에 처리하자 섬유아세포에서 생성되는 결합조직인 '콜라겐'의 양이 5배 이상 증가했으며 섬유아세포 자체의 증식도 30% 이상 증가했다. 섬유아세포는 피부의 진피층을 형성하는 콜라겐을 생산하는 세포이며 콜라겐의 양이 줄어들면 피부 탄력이 줄고 주름이 늘어나는 특징을 가지고 있다. 줄기세포는 다 분화능을 지닌 세포로서 in vitro 뿐만 아니라 in vivo 조건에서 뼈, 연골, 인대, 지방, 심근, 근육 등의 세포로의 분화 능력을 지니고 있는 다분화능 세포이다. 이러한 다분화능 세포인 줄기세포는 각 조직 세포로의 분화기전 연구에 있어 좋은 모델로 이용되고 있을 뿐만 아니라, 현재 다양한 세포 치료법 개발에 이용되고 있다. 세포 치료 대상 세포로서의 응용적 측면에서 볼 때, 중간엽 줄기세포는 세포의 채취가 상대적으로 쉽고 안전하며 자가 이식이 가능하다는 점에서 배아줄기세포에 비해 많은 장점을 가지고 있다. 앞에서 언급한 장점들로 인하여 줄기세포를 이용한 심근경색, 골절, 연골 손상, 뇌졸중 등 다양한 질병의 치료법이 연구되고 있다. 그러나 줄기세포는 배아줄기 세포와는 달리 생체외에서 배양 시 활용할 수 있는 줄기세포는 그 수명이 매우 짧고 분화능 또한 짧은 기간 동안만 보유된다. 이러한 줄기세포의 제한된 수명은 해당 세포의 활용에 있어 큰 제약이 되고 있다.
화장품 분야에서의 줄기세포의 이용은 그 대사산물로서의 성장인자를 이용하는 것이다. 성장인자들은 세포의 표면에 있는 수용체와 결합하여 세포의 증식과 분화를 자극하는 작용을 하는 단백질이다. 성장인자들의 기능은 매우 다양하여 여러 가지 세포에 분열을 자극하는 작용을 하기도 하는 반면, 어떤 경우에는 특이한 세포형에만 작용하기도 한다. 성장인자는 세포 증식의 자극을 위해서 필수적인 성분으로서 세포 분화, 이주, 증식과정을 조절한다는 것이 밝혀졌다. 특이적 수용체에 성장인자가 결합하게 되면 신호 전달 사슬을 활성화하여 세포의 외부로부터 내부의 핵으로 신호가 전달된다. 신호 전달이 계속되면 다량의 다른 전달자와 같이 작용하여 최종적으로 새로운 단백질이 합성된다. 그러므로 성장인자는 세포간 상호작용의 전달, 기능 제어에 있어서 중요한 신호 전달 네트워크를 형성하게 된다. 또한 생쥐를 대상으로 한 피부 상처 재생 실험 결과에서도 줄기세포 유래 단백질을 적용했을 때 적용하지 않은 경우보다 상처 크기가 40%이상 줄어드는 것을 확인할 수 있다. 아울러 색소침착 현상을 나타내는 피검자를 대상으로 한 미백효과에서도 좋은 결과를 보여 화장품 원료로서 강한 효능효과 및 안전성을 확보하고 있다.
본 발명자들은 인체 지방줄기세포의 배양액 추출물과 히아루론산을 유효성분으로 하는 화장료 조성물이 주름개선 효과, 미백효과, 보습 효과 및 피부탄력 증진효과가 있음을 발견하고 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 함유하는 화장료 조성물을 제공하는 것으로, 구체적으로 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 함유하는 주름개선용, 미백용, 보습용 또는 피부탄력 증진용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명은 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 함유하는 주름개선용 화장료 조성물로서, 상기 화장료 조성물은 화장료의 총 중량에 대하여 0.5 내지 20 중량%의 인체 지방줄기세포 배양액 추출물 및 0.1 내지 2.0 중량%의 히아루론산을 포함하고, 상기 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산의 중량비는 5:1 내지 30:1이다.
본 발명은 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 함유하는 미백용 화장료 조성물로서, 상기 화장료 조성물은 화장료의 총 중량에 대하여 0.5 내지 20 중량%의 인체 지방줄기세포 배양액 추출물 및 0.1 내지 2.0 중량%의 히아루론산을 포함하고, 상기 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산의 중량비는 5:1 내지 30:1이다.
본 발명은 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 함유하는 보습용 화장료 조성물로서, 상기 화장료 조성물은 화장료의 총 중량에 대하여 0.5 내지 20 중량%의 인체 지방줄기세포 배양액 추출물 및 0.1 내지 2.0 중량%의 히아루론산을 포함하고, 상기 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산의 중량비는 5:1 내지 30:1이다.
본 발명은 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 함유하는 피부탄력 증진용 화장료 조성물로서, 상기 화장료 조성물은 화장료의 총 중량에 대하여 0.5 내지 20 중량%의 인체 지방줄기세포 배양액 추출물 및 0.1 내지 2.0 중량%의 히아루론산을 포함하고, 상기 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산의 중량비는 5:1 내지 30:1이다.
바람직하게는, 상기 화장료 조성물의 인체 지방줄기세포는 골수, 제대혈, 말초혈액 및 지방조직의 기저로 이루어진 군에서 선택된 1종에서 유래된다.
본 발명은 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 함유하는 화장료 조성물을 사용함으로써, 기존 인체 지방줄기세포 배양액 추출물 또는 히아루론산만 함유한 화장료보다 우수한 피부의 주름개선효과, 미백 효과, 보습효과 및 피부탄력 증진효과를 얻을 수 있다.
인체 지방줄기세포 배양액 추출물은 지방줄기세포를 배양하여 얻을 수 있는 배양액 및 배양한 지방줄기세포를 파쇄하여 얻을 수 있는 모든 추출물을 포함한다.
상기 인체 지방줄기세포는 배아줄기세포를 제외한 성체로부터 얻어지는 줄기세포를 의미하며, 골수, 제대혈 및 말초혈액을 포함하는 혈액 및 지방조직의 기저에서 기원되는 줄기세포를 모두 포함하며, 반드시 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 인체 지방줄기세포 배양액 추출물의 유효 성분은 주로 세포의 성장을 조절하는 펩타이드와 단백질로서, 예를 들면 PDGF(혈소판 유래 성장인자), Basic FGF(염기성 섬유아세포 성장인자), KGF(각질세포 성장인자), TGF-β1(형질변환성장인자), HGF(간세포 성장인자), VEGF(혈관내피 성장인자), 콜라겐, 파이브로넥틴, SOD(항산화 효소) 등을 포함하며, 이에 제한되지 않는다. 상기 인체 줄기세포 배양액 추출물은 상기한 성장인자를 함유하고 있기 때문에 피부 구성세포인 섬유아세포 이동 촉진, 활성화 효과, 피부 재생 및 항노화 효과, 콜라겐합성 증가, 티로시나제의 활성 억제 효과, 멜라닌 합성 억제, 모발 성장 및 축소된 모낭 복원 효과를 기대할 수 있다.
본 발명의 인체 지방줄기세포 배양액 추출물은 미국특허 제6,153,432호(2000.11.28)에서 명시된 방법으로 얻을 수 있다. 먼저, 지방 흡입술을 통해 얻어진 지방조직으로부터 지방줄기세포를 분리한다. 이를 기질 배지에 현탁시켜 배양 용기에 접종한 후 37℃, CO2 인큐베이터에서 24시간 동안 배양하여 지방줄기세포가 배양용기 바닥에 붙으면 기질 배지를 제거하고 분화배지(DIFFERENTIATION MEDIA)를 넣는다. 이를 3일 동안 배양한 후 지방세포 배지(adipocyte media)를 넣고 지방세포로 분화시킨다. 지방줄기세포의 분화 단계는 분화 초기에 세포질 내 작은 지질 방울의 형성이 시작되는 단계, 작은 지질 방울의 수가 점차 증가하는 단계, 그리고 작은 지질 방울들이 점점 합쳐져 큰 지질 방울을 형성하는 단계를 거치면서 성숙하고, 완전히 성숙하면 한 개의 지질 방울이 세포질 전체를 차지하게 되며 성숙과정 동안 세포의 크기도 점차 증가하게 된다. 이와 같은 지방유래 세포를 얻는 단계에서, 배양 배지를 무혈청 DMEM 배지로, 염기성 섬유아세포 성장인자(bFGF; basic Fibroblast Growth Factor) 및/또는 표피세포 성장 인자(EGF; Epidermal Growth Factor)를 각각 0.1∼100 ng/㎖ 농도로 더욱 포함하는 DMEM 배지로 배양하여 얻어진 배양액을 분리 정제하여 본 발명의 지방줄기세포 배양액 추출물로 사용하였다.
상기 본 발명의 히아루론산은 1934년 Meyer 등에 의해 소의 초자체막으로부터 처음으로 얻었고, 초자체막(hyaloid)의 우론산이라는 뜻으로 명명된 O-β-D-글루클로노실(1→3)-N -아세틸-β-D-글루코사미닐(1→4) 단위의 2당만이 반복하는 구조를 갖는 대펴적인 글리코사미노글리칸의 일종이다. 히아루론산은 포유동물의 결합조직 중에 널리 그리고 대량으로 분포되어 있고 닭벼슬, 건, 피부, 대동맥, 관절액 등에 많이 들어있다. 그 외 연쇄상구균 등의 미생물도 생산한다고 보고되어 있다. 아미노산과 우론산으로 이루어지는 복잡한 다당류의 하나로, N-아세틸글루코사민과 글루쿠론산으로 이루어진 고분자 화합물이다. 눈의 초자체나 탯줄 등에 존재하는데, 세균의 침입이나 독물의 침투를 막는 역할을 한다. 황산콘드로이틴 등과 함께 주요한 뮤코다당류로 알려져 있다. 안구유리체액, 제대, 진피표층 등의 결합조직, 라우스육종 등 어떤 종의 종양에서 발견되는 것 외에 A형, C형 용성연쇄구균(Streptococcus)을 비롯하여 몇 가지 종류의 세균에서는 협막 성분으로 되어 있다. 동물조직, 예를 들면 소의 비연골 등에서는 대형 콘드로이틴황산프로테오글리칸(aggrecan)이나 결합 단백질과 합해져 거대한 분자집합체를 형성한다. 당 사슬의 길이는 분자량이 105~106로 매우 긴 것이 많지만 재료에 따라 다르고, 또한 동일 재료라도 결코 균일하지 않다. 다량의 물과 결합하여 겔을 만드는 성질이 있어 이것이 관절의 윤활작용, 피부의 유연성 등, 생체 내에서의 기능과 결부되어 있다. 또한 결합조직이 손상을 받으면 급속한 회복을 위해 히알루론산의 합성이 일시적으로 활발해지는 경우가 있으며 조직 재구축에서 세포활동의 일환을 형성하고 있는 것으로 여겨진다. 세포표면의 히알루론산 결합단백질로서 CD44가 발견되었다. 정소, 피부, 간 등의 동물조직이나 뱀독, 거머리, 세균, 방선균으로부터 각각 히알루론산의 글루코사미니드 또는 글루쿠로니드결합을 가수분해 또는 탈리 절단하는 효소가 발견되고 있다. 이것은 식물의 펙틴질과 비슷하며, 히알루로니다아제에 의하여 가수분해된다.
현재 공업생산에 이용되고 있는 히아루론산의 추출원료는 닭벼슬이지만, 최근 미생물(연쇄상구균)의 발효생산으로 대량생산이 가능하게 되었다. 닭벼슬에서의 히아루론산 조제에 있어서는 여러 단백질, 그 외 뮤코다당, 핵산 등을 제거하기 위해 효소처리로 단백질분해 및 세틸피리지니움클로라이드법으로 뮤코다당의 분리 등 복잡한 공정을 거쳐서 정제된다. 한편, 연쇄상구균(St. zooepidemicus)에서의 발효생산은 글루코스를 탄소원으로 해서 효모추출물과 펩톤을 질소원으로 하는 배지에서 약 48시간 배양해서 히아루론산을 생성한다. 배양종료 후 균체와 불순물을 여과해서 제거한 뒤, 알코올침전법 등의 간단한 조작으로 고순도의 히아루론산(단백질함량 0.1% 이하)이 얻어진다. 본 발명에 사용된 히아루론산은 미생물 발효 생산으로부터 얻어진 분자량이 103~106 D(Molecular weight)이다.
정제된 히아루론산의 안전성은 LD50, 아급성 독성, 변이원성시험, 눈점막 자극시험, 피부 1차 자극시험, 누적피부자극시험, 사람의 패치테스트 등 모두 negative여서 매우 안전성이 높다. 히아루론산의 약리 작용으로는 임파구와 마크로파지의 유주 저해, 각종 세포의 adhesion, aggregation, detachment에 관여, 열상과 창상에 대한 치유 등이 보고되어 있다.
본 발명의 히아루론산은 화장품과 의약품에 광범위하게 사용되며 화장품에 사용하여 저습도, 고습도조건 하에서 거의 같은 정도의 높은 흡습성과 독특한 사용감촉이 있기 때문에, 크림, 유액, 화장수, 미용액, 팩, 세안료 등의 기초화장품, 유화타입의 립스틱과 파운데이션 등의 메이크업류 그리고 기능성 헤어 제품에까지 여러 화장품에 배합되고 있다.
의약품에는 히아루론산은 국내외에서 의약품으로서 개발이 진행되고 있다. 정형외과에서는 변형성 관절증, 피부과에서는 열상, 진창, 창상 등, 안과에서는 백내장용 안내 주사제, 수의과에서는 경주용 말의 비화농성 관절염 치료약 등으로 사용되고 있다. 대량생산이 가능하게 된 히아루론산의 응용연구는 앞으로 보다 폭넓게 될 것이다.
본 발명의 화장료 조성물은 화장료의 총 중량에 대하여 0.5 내지 20 중량%의 인체 지방줄기세포 배양액 추출물 및 0.1 내지 2.0 중량%의 히아루론산을 포함할 수 있다. 또한, 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산의 중량비는 5:1 내지 30:1일 수 있고, 바람직하게는 5:1 내지 10:1일 수 있다.
본 발명의 구체적인 예시에 따르면, 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 유효성분으로 함유하는 본 발명의 화장료 조성물은 피부주름 개선 효과, 미백 효과, 보습 및 피부탄력 등과 같은 피부 노화방지 효과를 갖는다.
이하에서 실시예와 실험예를 들어서 본 발명을 상세하게 설명하지만, 이러한 실시예와 실험예에 의하여 본 발명의 권리범위가 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 화장료 조성물을 위해 아래 실시예와 같이 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 함유하는 화장료를 제조하였다.
실시예 1. 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 함유하는 화장료의 제조
하기 표 1과 같이 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 함유한 조성물(실시예)과 인체 지방줄기세포 배양액 추출물만을 함유한 조성물(비교실시예 1) 및 히아루론산만을 함유한 조성물(비교실시예 2)을 제조하였다.
단위:중량%
성분 실시예 비교실시예 1 비교실시예 2
인체 지방줄기세포 배양액 추출물 10.0 10.0 -
히아루론산 2.0 - 2.0
A 아라키딜알콜 3.0 3.0 3.0
글리세릴스테아레이트 1.5 1.5 1.5
스쿠알란 5.0 5.0 5.0
하이드록시폴리데신 2.0 2.0 2.0
트리옥타노인 5.0 5.0 5.0
폴리솔베이트 80 1.0 1.0 1.0
솔비탄스테아레이트 0.5 0.5 0.5
사이클로펜타실록산 3.0 3.0 3.0
토코페릴아세테이트 0.2 0.2 0.2
BHT 0.05 0.05 0.05
B 정제수 잔량 잔량 잔량
농글리세린 4.0 4.0 4.0
1,3-부틸렌글리콜 2.0 2.0 2.0
디메치콘/비닐디메치콘크로스폴리머 0.4 0.4 0.4
EDTA-2Na 0.05 0.05 0.05
향,방부제 적량 적량 적량
계 100 100 100
실험예 1. 피부주름개선효과
1. 기기적 평가
상기 본 발명에 따른 실시예에 의해 제조된 화장료 조성물에 대한 피부주름 개선 효과(기기적 평가)를 측정하기 위하여 20세 이상의 여성 30명(평균연령 28.5세)을 각각 A, B, C 세 그룹으로 나누어, 본 발명에 따른 상기 표1의 실시예에 의해 제조된 화장료 조성물을 A그룹에는 실시예를 B그룹에는 비교실시예 1를 C그룹에는 비교실시예 2를 각각 적용하였다.
A, B, C 그룹 각각의 대상에게 팔의 상박 2X2 ㎠의 면적에(2회/일, 0.2g/회) 6주간 도포하면서, 투명한 실리콘 재질의 용액을 이용하여 피부주름의 레플리카(Replica)를 떠서 피부주름측정기(SKIN VISIOMETER SV400, C+K Electronics GmbH. Germany)로 피부주름변화를 측정하였다. 레플리카의 상을 CCD 카메라로 3차원적 분석하고, 각각의 주름의 거칠기(Rm: m은 1이상의 정수)의 합을 주름의 개수로 나눈 값인 하기 식 1의 평균주름거칠기(Rz)로 주름개선 효과를 분석하였다. 시험결과는 하기 표 2에 나타내었다.
피부주름개선효과(6주)
평균주름거칠기(Rz , ㎛)
실시예 비교실시예 1 비교실시예 2
T0 T6 △Rz T0 T6 △Rz T0 T6 △Rz
피검자 1 120 60 -60 125 88 -37 122 108 -14
피검자 2 122 91 -87 116 47 -69 120 89 -31
피검자 3 99 22 -77 130 60 -70 115 95 -20
피검자 4 118 45 -73 112 63 -49 125 120 -5
피검자 5 120 25 -95 125 52 -73 116 53 -63
피검자 6 145 22 -123 135 35 -100 123 77 -46
피검자 7 135 35 -100 128 45 -83 127 83 -44
피검자 8 137 31 -106 137 116 -21 129 72 -57
피검자 9 114 24 -90 107 26 -81 118 56 -62
피검자 10 126 50 -76 120 57 -63 111 67 -44
평균 -88.7 -64.6 -38.6
상기 표 2에서 알 수 있는 바와 같이, 6주 후 본 발명에 따른 실시예는 평균주름거칠기(Rz)는 88.7㎛(p<0.01)이며, 비교실시예 1는 64.6㎛(p<0.05), 비교실시예 2는 38.6㎛(p<0.1)으로서, 본 발명에 따른 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 함유하는 화장료는 인체지방줄기세포배양액만을 함유하는 비교실시예 1 보다 약 37.3%, 비교실시예 2보다는 129.8% 주름이 더 개선되었다.
따라서 본 발명에 따른 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 함유하는 화장료는 인체 지방줄기세포 배양액 추출물이나 히아루론산을 단독으로 함유하는 화장료보다 주름개선효과가 매우 효과적으로 상승되었음을 알 수 있다.
2. 육안평가
상기 본 발명에 따른 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 함유하는 실시예에 의해 제조된 화장료 조성물에 대한 피부주름 개선 효과(육안 평가)를 측정하기 위하여 20세 이상의 여성 30명(평균연령 28.5세)을 각각 A, B, C 세 그룹으로 나누어, 본 발명에 따른 상기 표1의 실시예에 의해 제조된 화장료 조성물을 A그룹에는 실시예를 B그룹에는 비교실시예 1를 C그룹에는 비교실시예 2를 각각 적용하였다.
A, B, C 그룹 각각의 대상에게 주름이 있는 눈가를 중심으로 6주간 도포(2회/일)한 후, 숙련자의 객관적 평가와 피검자의 주관적 평가를 다음의 6등급으로 분류하여 평가함으로써 피부주름의 개선정도(ΔW)를 측정하였다. 결과는 하기 표 3 및 표 4에 나타내었다.
<피부주름개선 평가기준>
-3: 극히 심하게 악화 -2: 악화 -1: 약간 악화
0: 변화없음 1: 약간 개선 2: 개선 3: 매우 개선
피부주름개선 임상효과(숙련자의 객관적 평가)
피부주름 개선정도(△W)
실시예 비교실시예 1 비교실시예 2
T0 T6 T0 T6 T0 T6
피검자 1 0 3 0 2 0 1
피검자 2 0 3 0 2 0 1
피검자 3 0 3 0 2 0 0
피검자 4 0 2 0 2 0 2
피검자 5 0 3 0 1 0 1
피검자 6 0 2 0 2 0 1
피검자 7 0 3 0 2 0 2
피검자 8 0 2 0 2 0 0
피검자 9 0 2 0 3 0 1
피검자 10 0 2 0 2 0 3
△W(T6-T0) 2.5 2.0 1.2
피부주름개선 임상효과(피검자의 주관적 평가)
피부주름 개선정도(△W)
실시예 비교실시예 1 비교실시예 2
T0 T6 T0 T6 T0 T6
피검자 1 0 3 0 2 0 2
피검자 2 0 2 0 2 0 2
피검자 3 0 3 0 1 0 1
피검자 4 0 2 0 2 0 1
피검자 5 0 3 0 2 0 1
피검자 6 0 3 0 1 0 1
피검자 7 0 3 0 3 0 2
피검자 8 0 3 0 3 0 2
피검자 9 0 2 0 3 0 1
피검자 10 0 2 0 2 0 1
△W(T6-T0) 2.6 2.1 1.4
상기 표 3 및 표 4에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따른 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 함유하는 실시예에서는 숙련자의 객관적 평가와 피검자의 주관적 평가가 각각 2.5, 2.6으로 숙련자의 객관적 평가에서는 비교실시예 1보다는25.0%, 비교실시예 2보다 108.3% 증가하였고 피검자의 주관적 평가에서는 비교실시예 1보다는 23.8%, 비교실시예 2보다는 85.7% 증가한 것으로 나타나 본 발명의 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 함유한 화장료가 인체 지방줄기세포 배양액 추출물이나 히아루론산 만을 함유한 화장료보다 매우 효과적으로 주름을 개선시킴을 알 수 있다.
실험예 2. 피부미백효과( 멜라노사이트에서 멜라닌 생성에 대한 저해효과)
멜라노사이트는 마우스 유래 B-16 멜라노마(ATCC CRL 6323) 세포주를 구입하여 사용하였다. 멜라노마 세포주를 포도당 4.5 g/L, 10% 혈청, 1% 항생제가 함유된 DMEM 배지에 접종하여 50㎖ T-플라스크에 37℃에서 배양한다. 5% CO2 조건하에서 24시간 배양한 후, 0.02% EDTA가 함유된 0.05% 트립신(Trypsin)을 처리하여 세포를 분리한 후 50㎖ T-플라스크에 접종하여 48시간 배양한다. 이 때 세포수는 5.76 × 106 세포/플라스크이다. 여기에 5:1의 중량비로 혼합된 본 발명의 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 각각 1, 2, 5, 10, 20, 50, 100㎍/㎖로 DMEM 배지에 희석시켜 배양된 멜라노마 세포에 처리하여 37℃에서 5일간 배양한다. 배양 후 배지를 모두 제거하고, 0.02% EDTA와 0.05%트립신을 함유한 살린-포스페이트 완충용액(PBS)을 1㎖ 처리하여 세포를 분리시킨 후 5분간 원심 분리하여 세포만을 수집한다. 5% 트리클로로아세테이트(TCA)를 처리하여 교반하고, 원심 분리하여 침전된 멜라닌을 살린-포스페이트 완충용액으로 세척한다. 침전된 멜라닌에 1N NaOH를 처리하여 용해시킨 후, 475nm에서 흡광도를 측정한다. 멜라닌 농도는 합성 멜라닌(시그마사)의 표준 농도 곡선으로부터 결정하였다. 실험 결과는 표 5에 나타내었다
멜라노사이트에서 멜라닌 합성 저해 효과
농도
(㎍/㎖)		 멜라닌 생성 억제율(%)
인체 지방줄기세포 배양액 추출물 + 히아루론산 인체 지방줄기세포 배양액 추출물 히아루론산
무처리 - - -
1 6.0 4.1 0.2
2 12.8 12.3 2.5
5 27.0 20.2 9.2
10 29.9 23.9 8.7
20 31.9 25.4 9.8
50 42.5 28.3 11.1
100 57.2 33.6 15.9
표 5에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따른 실시예의 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 각각 동일 농도로 처리했을 때, 비교실시예 1의 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 비교실시예 2의 히아루론산만을 처리했을 때 보다 멜라닌 합성 억제효과가 높게 나타나 본 발명의 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 함께 사용했을 때 인체 지방줄기세포 배양액 추출물이나 히아루론산을 단독으로 사용하였을 때 보다 멜라노사이트의 멜라닌 생성을 더 효과적으로 억제하여 피부 미백효과를 보임을 알 수 있다.
실험예 3. 피부탄력 개선효과
상기 본 발명의 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 함유하는 화장료 실시예와 인체 지방줄기세포 배양액 추출물만을 함유하는 화장료 비교실시예 1, 히아루론산만을 함유하는 화장료 비교실시예 2에 대한 피부탄력개선효과를 측정하였다.
온도 24-26℃, 습도 45% 조건에서 20세 이상의 여성 30명(평균연령 28.5세)을 각각 A, B, C 세 그룹으로 나누어, 본 발명에 따른 상기 표1의 실시예에 의해 제조된 화장료 조성물은 A그룹에 비교실시예 1는 B그룹에 비교실시예 2는 C그룹에 각각 눈가를 중심으로 6주간 도포(2회/일)한 후, 피부탄력측정기(Cutometer SEM 575, C+K Electronic Co., Germany)를 이용하여 피부탄력을 측정하였다. 시험 결과는 하기 표 6에 Cutometer SEM 575의 △R(R(사용 전)-R8(사용 후)) 값으로 기재하였다. R 값은 피부 점탄성(viscoelasticity)의 성질을 나타낸다.
피부탄력(6주 후)
피부 점탄성 개선정도(△R)
실시예 비교실시예 1 비교실시예 2
피검자 1 0.48 0.42 0.45
피검자 2 0.39 0.40 0.42
피검자 3 0.48 0.34 0.38
피검자 4 0.54 0.41 0.5
피검자 5 0.26 0.31 0.37
피검자 6 0.47 0.22 0.24
피검자 7 0.42 0.24 0.31
피검자 8 0.58 0.30 0.34
피검자 9 0.28 0.21 0.33
피검자 10 0.47 0.33 0.41
△R 0.44 0.32 0.38
표 6의 결과에서 알 수 있듯이 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 함유한 화장료 실시예는 인체 지방줄기세포 배양액 추출물만을 함유하는 비교실시예 1에 비해 피부 탄력이 37.5%, 히아루론산만을 함유하는 비교실시예 2에 비해서는 15.8% 증가하여 인체지방줄기세포 배양액 추출물 및 히아루론산만을 함유하는 화장료에 비해 매우 효과적으로 피부탄력을 증진 시켰다.
실험예 4. 보습효과
상기 본 발명의 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 함유하는 화장료 실시예와 인체 지방줄기세포 배양액 추출물만을 함유하는 화장료 비교실시예에 대한 피부 보습효과를 측정하였다. 측정 시에는 온도 24-26℃, 상대습도 45%, 공기의 흐름이 없는 실내에서 20~30분간 피부를 안정화시킨 뒤 측정하였다. 20세 이상의 여성 30명(평균연령 28.5세)을 각각 A, B, C 그룹으로 나누어 본 발명에 따른 실시예에 의해 제조된 화장료 조성물은 A그룹에, 비교실시예 1에 의해 제조된 화장료 조성물은 B그룹에, 비교실시예 2에 의해 제조된 화장료 조성물은 C그룹에 눈가를 중심으로 6주간 도포(2회/일)한 후, TEWAMETER TM210(C+K electronic GmbH. Germany)를 이용하여 경피수분손실량 즉, TEWL(Transepidermal Water Loss)값을 시간 변화에 따른 TEWL 값 변화량 △TEWL로 측정하고, CORNEOMETER CM 820 PC(C+K electronic GmbH. Germany)를 이용하여 표피 수분량에 따른 전기전도도의 변화로 0에서 150까지 피부의 수분량을 수치화하여 보습효과를 측정하였다. 시험결과는 하기 표 7에 나타내었다.
피부보습효과
시험제품 △TEWL Corneometer Value
실시예 5.5 121
비교실시예 1 3.6 98
비교실시예 2 4.5 108
시험 결과, 실시예의 △TEWL 값은 5.5g/hm2로 비교실시예 1 및 비교실시예 2에 비해 경피수분손실량이 6주 후 매우 효과적으로 개선되었음을 알 수 있다.
아울러 피부의 수분량을 측정한 Corneometer value에서도 실시예가 비교실시예 1에 비해 23.3%, 비교실시예 2에 비해 12.0% 증가하여 피부가 매우 촉촉해짐을 알 수 있다.
실험예 5. 제형의 안정성 시험
상기 본 발명의 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 함유한 화장료에 대한 제형의 안정성 시험을 실시하였다. 화장료의 안정성을 실험하기위해 상기 표 1의 실시예, 비교실시예 1, 비교실시예 2를 4℃와 45℃로 일정하게 유지되는 항온조에 투명 초자 용기에 담아 각각 4주 동안 보관한 후 분리, 변색 및 변취(특이취) 정도를 비교 측정하였다. 그 결과를 하기 표 8에 나타내었다. 이때 제품 분리, 변색, 변취 정도를 다음의 6등급으로 분류하여 평가하였다.
제품 변색 평가 기준 :
0: 변화 없음 1: 극히 조금 분리(변색, 변취)
2: 조금 분리(변색, 변취) 3: 조금 심하게 분리(변색, 변취)
4: 심하게 분리(변색, 변취) 5: 극히 심하게 분리(변색, 변취)
분리정도
온도 분리 변색 변취(특이취)
실시예 비교
실시예1		 비교
실시예2		 실시예 비교
실시예1 		비교
실시예2		 실시예 비교
실시예1		 비교
실시예2
45℃ 0 0 0 0 0 0 0 0 0
4℃ 0 0 0 0 0 0 0 0 0
상기 표 8에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 함유한 실시예와 인체 지방줄기세포 배양액 추출물만을 함유한 비교실시예 1 및 히아루론산만을 함유한 비교실시예는 모두 분리, 변색 및 변취(특이취) 현상이 전혀 없어 안정한 기제임을 알 수 있다.
실험예 6. 제형의 안전성 시험
상기 본 발명의 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 함유한 화장료에 대한 피부 안전성 시험을 실시하였다.
피검자 20명(평균연령 26.7세, 연령분포 18세-30세)을 본 발명의 실시예 및 비교실시예를 표 1에 따라 제형하여 Haye's Test Chamber를 이용 상박에 피부 첩포시험(Patch Test)을 실시하였다. 단 건선(Psoriasis), 습진(Eczema), 기타 피부병변 보유자나 임신, 수유부 또는 피임제, 항히스타민제 등을 복용하고 있는 사람은 본 실험에서 제외 하였다. 시험부위를 70% 에탄올로 닦아낸 뒤 건조시키고, 실시예와 비교실시예 1, 비교실시예 2를 각각 15μg씩 챔버에 적하 시킨 후, 시험 부위인 상박 부위에 얹어 고정시킨다. 첩포는 24시간 동안 도포하고 첩포를 제거한 후에는 마킹 펜으로 시험부위를 표시하여 각각 24시간, 48시간 후에 시험부위를 관찰한다. 판정은 첩포 제거 24시간, 48시간 후에 행하며 피부반응은 하기 표 9의 국제접촉피부염연구회(International Contact Dermatitis Research Group:ICDRG)의 규정에 따라 판정하였다. 시험결과는 하기 표 10에서 피부 안정성으로 나타내었다.
기호 판 정 기 준 평 가 Mean Score
±
+
++
+++
-		 Doubtful or slight reaction and erythema
Erythema + Induration
Erythema + Induration + Vesicle
Erythema + Induration + Bullae
Negative 		미소자극
경자극
중자극
강자극
무자극		 0~0.9
1.0~2.9
3.0~4.9
5.0이상
0
경과시간 실시예 비교실시예 1 비교실시예 2
24시간 0 0.0 0.0
48시간 0 0.0 0.0
표 10에서 본 바와 같이 피부안전성 시험 결과, 실시예와 비교실시예 1, 비교실시예 2 모두 평균 자극정도가 0으로 피부에 자극이 없는 안전한 화장료임을 알 수 있다.
이하 상기한 실험예들의 결과를 근거로 하여 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 함유하는 화장료를 조성하여 제시한다. 그러나 본 발명의 조성물을 하기의 제형예들로 한정하고자 하는 것은 아니다.
제형예 1. 유연화장수(스킨로션)
배합성분 중량부
인체 지방줄기세포 배양액 추출물 3.0
히아루론산 0.1
1,3-부틸렌글리콜 6.0
글리세린 4.0
올레일알코올 0.1
폴리솔베이트 20 0.5
에탄올 15.0
벤조페놀-9 0.05
향, 방부제 미량
정제수 to 100
제형예 2. 영양화장수( 밀크로션 )
배합성분 중량부
인체 지방줄기세포 배앵액 추출물 5.0
히아루론산 0.5
프로필렌글리콜 6.0
글리세린 4.0
트리에탄올아민 1.2
토코페릴아세테이트 3.0
유동 파라핀 5.0
스쿠알란 3.0
마카다미아너트오일 2.0
폴리솔베이트 60 1.5
솔비탄세스퀴올레이트 1.0
카르복시비닐 폴리머 1.0
비에치티이 0.01
이디티에이-2엔에이 0.01
향, 방부제 미량
정제수 to 100
제형예 3. 영양크림
배합성분 중량부
인체 지방줄기세포 배양액 추출물 10.0
히아루론산 2.0
세토스테아릴알콜 2.0
글리세릴스테아레이트 1.5
트리옥타노인 5.0
폴리솔베이트 60 1.2
솔비탄스테아레이트 0.5
스쿠알란 5.0
유동파라핀 3.0
싸이클로메치콘 3.0
비에치티이 0.05
델타-토코페롤 0.2
농글리세린 4.0
1,3-부틸렌글리콜 2.0
산탄검 0.1
이디티에이-2엔에이 0.05
향, 방부제 미량
정제수 to 100
제형예 4. 마사지크림
배합성분 중량부
인체 지방줄기세포 배양액 추출물 3.0
히아루론산 0.3
프로필렌글리콜 6.0
글리세린 4.0
트리에탄올아민 0.5
밀납 2.0
토코페릴아세테이트 0.1
폴리솔베이트 60 3.0
솔비탄세스퀴올레이트 2.5
세테아릴알코올 2.0
유동파라핀 30.0
카르복시비닐폴리머 0.5
향, 방부제 미량
정제수 to 100
제형예 5. 팩
배합성분 중량부
인체 지방줄기세포 배양액 추출물 5.0
히아루론산 0.5
프로필렌글리콜 2.0
글리세린 4.0
카르복시비닐 폴리머 0.3
에탄올 7.0
피이지-40 히드로게비이티드 캐스터 오일 0.8
트리에탄올아민 0.3
비에치티이 0.01
이디티에이-2엔에이 0.01
향, 방부제 미량
정제수 to 100

Claims (5)

  1. 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 함유하는 주름개선용 화장료 조성물로서,
    상기 화장료 조성물은 화장료의 총 중량에 대하여 0.5 내지 20 중량%의 인체 지방줄기세포 배양액 추출물 및 0.1 내지 2.0 중량%의 히아루론산을 포함하고,
    상기 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산의 중량비는 5:1 내지 30:1이고,
    상기 히아루론산은 미생물 발효 생산으로부터 얻어지고 103 ~ 106 D의 분자량을 갖는, 주름개선용 화장료 조성물.
  2. 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 함유하는 미백용 화장료 조성물로서,
    상기 화장료 조성물은 화장료의 총 중량에 대하여 0.5 내지 20 중량%의 인체 지방줄기세포 배양액 추출물 및 0.1 내지 2.0 중량%의 히아루론산을 포함하고,
    상기 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산의 중량비는 5:1 내지 30:1이고,
    상기 히아루론산은 미생물 발효 생산으로부터 얻어지고 103 ~ 106 D의 분자량을 갖는, 미백용 화장료 조성물.
  3. 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 함유하는 보습용 화장료 조성물로서,
    상기 화장료 조성물은 화장료의 총 중량에 대하여 0.5 내지 20 중량%의 인체 지방줄기세포 배양액 추출물 및 0.1 내지 2.0 중량%의 히아루론산을 포함하고,
    상기 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산의 중량비는 5:1 내지 30:1이고,
    상기 히아루론산은 미생물 발효 생산으로부터 얻어지고 103 ~ 106 D의 분자량을 갖는, 보습용 화장료 조성물.
  4. 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산을 함유하는 피부탄력 증진용 화장료 조성물로서,
    상기 화장료 조성물은 화장료의 총 중량에 대하여 0.5 내지 20 중량%의 인체 지방줄기세포 배양액 추출물 및 0.1 내지 2.0 중량%의 히아루론산을 포함하고,
    상기 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 히아루론산의 중량비는 5:1 내지 30:1이고,
    상기 히아루론산은 미생물 발효 생산으로부터 얻어지고 103 ~ 106 D의 분자량을 갖는, 피부탄력 증진용 화장료 조성물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 인체 지방줄기세포는 골수, 제대혈, 말초혈액 및 지방조직의 기저로 이루어진 군에서 선택된 1종에서 유래된, 화장료 조성물.
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