KR20150011454A - 인체골수줄기세포배양액이 포함된 폐쇄이중층의 지질복합체를 함유하는 피부노화방지용 화장료 조성물 - Google Patents

인체골수줄기세포배양액이 포함된 폐쇄이중층의 지질복합체를 함유하는 피부노화방지용 화장료 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 피부 노화현상을 개선시키는 인체골수줄기세포배양액을 포함하는 비엠좀(BMSOME)을 함유하는 피부노화 방지 화장료 조성물에 관한 것이다.
더욱 상세하게는 세포막을 구성하는 주요 지질 성분인 포스포리피드(Phospholipid), 피토스핑고신(Phytosphingosine), 세라마이드 3 (Ceramide 3), 콜레스테롤(Cholesterol), 피토스테롤(Phytosterol), 베타-시토스테롤(β-sitosterol), 스쿠알렌(Squalene)을 고압으로 용해하여 비엠좀을 형성하는 지질복합체를 만든 뒤, 상온에서 이 지질복합체 적당량을 인체골수줄기세포배양액에 넣고 섞어주면, 폐쇄된 이중층 구조를 가진 본 발명의 인체 골수줄기세포배양액을 포함하는 비엠좀을 얻어 인체골수줄기세포배양액을 안정화시킴으로써 피부노화 방지효과를 극대화하는 화장료 조성물을 얻는 것이다.
본 발명의 화장료는 일반적으로 폐쇄된 이중층 구조를 가진 리포좀 제조 시 고온에서 리포좀이 형성되어 열에 약한 유효성분이 불안정화 되거나 파괴되는 것과는 달리, 비엠좀은 폐쇄된 이중층 구조를 형성하는 지질복합체를 먼저 제조한 뒤, 상온에서 본 발명의 인체골수줄기세포배양액을 리포좀하고자 하는 적정 농도로 희석한 수용액에 본 발명의 지질복합체를 혼합해줌으로써 리포좀이 형성되어 유효성분의 활성을 유지할 수 있어 효과가 매우 우수하다.
본 발명의 화장료 조성물은 인체골수줄기세포배양액을 포함한 비엠좀을 배합시켜 얻어지며, 그 양은 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.001-100.0 중량% 함유하고, 바람직하게는 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.1-100.0 중량% 함유한다.

Description

인체골수줄기세포배양액이 포함된 비엠좀을 함유하는 피부노화방지용 화장료 조성물{AN ANTI-AGING COSMETIC COMPOSITION COMPRISING HUMAN BONE MARROW STEM CELL CONDITIONED MEDIA IN BMSOME AS ACTIVE INGREDIENT}
본 발명은 피부 노화현상을 개선시키는 인체골수줄기세포배양액이 유효성분으로 포함된 비엠좀을 함유하는 피부노화방지용 화장료 조성물에 관한 것이다.
더욱 상세하게는 세포막을 구성하는 주요 지질 성분인 포스포리피드(Phospholipid), 피토스핑고신(Phytosphingosine), 세라마이드 3 (Ceramide 3), 콜레스테롤(Cholesterol), 피토스테롤(Phytosterol), 베타-시토스테롤(β-sitosterol), 스쿠알렌(Squalene)을 고압으로 용해하여 비엠좀을 형성하는 지질복합체를 만든 뒤, 상온에서 이 지질복합체 적당량을 인체골수줄기세포배양액에 넣고 섞어주면, 폐쇄된 이중층 구조를 가진 인체 골수줄기세포배양액을 포함하는 비엠좀을 얻어 인체골수줄기세포배양액을 안정화시킴으로써 피부노화 방지효과를 극대화할 수 있는 인체골수줄기세포배양액이 유효성분으로 포함된 비엠좀을 함유하는 피부노화방지용 화장료 조성물에 관한 것이다.
피부는 노화가 진행되기 전에는 피부세포의 생리활성이 활발하여 진피(Dermis)에 있는 섬유아세포(fibroblast)의 경우 피부의 탄력 및 주름형성 억제에 중요한 콜라겐(collagen)의 합성과 신진대사가 왕성하며, 피부수분유지에 필수적인 히아루론산(Hyaluronic acid)을 포함한 당단백질류인 GAGS(Glucosaminoglycans) 합성도 활발하여 피부에 탄력성, 부드러움, 유연성 및 보습성을 부여한다.
그리고, 표피(Epidermis)에서는 기저세포(basal layer cell)의 증식(proliferation)이 활발하고, 피부세포간의 결합을 강화시키는 라미닌, 인테그린, 데스모좀과 같은 결합단백질(Adhesion protein)의 생성이 균형적으로 이루어져 피부 세포조직을 강화시켜 건강한 피부를 유지해 준다.
그러나, 현대인의 피부는 외부의 각종 유해 환경 및 스트레스에 노출되어 다양한 손상을 받고 있고, 나이가 들면서 피부의 생리활성이 저하되고 손상된 피부의 회복속도가 느려지면서 피부는 탄력저하, 건조, 주름형성, 색소침착, 검버섯, 칙칙함 등의 다양한 피부노화 현상이 나타난다.
따라서, 화장료의 가장 큰 목표는 이런 노화증세를 개선하는 데 있고, 이를 위한 다양한 화장료가 개발되어지고 있다.
본 발명의 인체골수줄기세포배양액을 포함하는 비엠좀은 제약 분야에서 생리활성 성분을 안정화하여 약물전달시스템(Drug Delivery System)에 이용되고 있는 리포좀의 특별한 한 종류이다.
리포좀은 현재 제약분야뿐만 아니라 화장품, 식품 등에도 널리 이용되는 있는데, 이는 생리활성성분을 안정하게 전달할 수 있다는 장점을 갖고 있다.
이때, 리포좀은 크게 다막리포좀(MLV:Multilamella vesicle)과 단막리포좀(ULV:Unilamella vesicle)로 구분되고, 다시 단막리포좀은 다사 대단막리포좀(Large Unilamella vesicle)과 소단막리포좀(Small Unilamella vesicle)으로 나눌 수 있다.
그리고, 단막리포좀은 그 크기가 400~3,500nm이면서 리포좀 내에 내포시킬 수 있는 량은 5~15%이고, 대단막리포좀은 그 크기가 100~1,000nm이면서 리포좀 내에 내포시킬 수 있는 량은 36~65%이며, 소단막리포좀은 그 크기가 20~50nm이면서 리포좀 내에 내포시킬 수 있는 량은 0.5~1.0%이다.
여기서, 생리활성물질을 내포시킬 수 있는 양은 대단막리포좀이 가장 많으나 불안정하고, 소단막리포좀은 가장 안정하나 내포시킬 수 있는 양이 적다.
또한, 사람의 피부의 구조는 다막(Multilamella)의 구조를 갖고 있어 다막리포좀은 피부와 친화력이 있으나 크기가 너무 커 피부 침투가 어려운 단점이 있다.
본 발명에서는 이러한 단점들을 보완하고 피부의 세포막을 구성하는 지질 성분들을 사용하여 피부 친화적이며, 상온에서 본 발명의 골수줄기세포배양을 리포좀화하여 생리활성 성분들의 활성을 최대한 확보함은 물론 제조가 용이한 비엠좀을 완성하여 사용하였다.
이때, 비엠좀은 그 크기가 50~250nm로 피부 침투가 용이하고 리포좀에 비해 수용성의 성분을 과량 내포할 수 있고 안정하다.
아울러, 구성 성분의 경우 일반적인 리포좀은 인지질에 의해 형성되는 반면, 비엠좀은 세포막을 구성하는 주요 지질 성분인 포스포리피드(Phospholipid), 피토스핑고신(Phytosphingosine), 세라마이드 3 (Ceramide 3), 콜레스테롤(Cholesterol), 피토스테롤(Phytosterol), 베타-시토스테롤(β-sitosterol), 스쿠알렌(Squalene)을 사용하여 베시클(Vesicle)을 형성하고, 이 베시클 내에 인체골수줄기세포배양액 성분을 내포함으로써 기존 리포좀들에 비해 좀 더 피부 친화적이며 안정적이다.
세포막(Cell Membrane)은 모든 세포가 가지고 있는 구성요소이며, 세포의 내부와 외부를 서로 구분해주고, 인지질 및 단백질 분자로 구성된 얇고 구조적인 인지질 이중층으로 되어 있으며, 선택적인 투과성을 가진다.
세포막의 기본 구성 및 구조는 다른 세포소기관을 감싸는 막과 동일하고, 세포막은 인지질 이중층이라는 두 겹의 인지질로 구성되어 있으면서 유동 모자이크 구조로 설명될 수 있다.
이때, 유동 모자이크란 지질이 자유롭게 떠다니는 2차원적인 흐름을 의미하며, 내부에는 세포막을 가로지르는 통로 혹은 수용체로 작용하는 단백질을 가지고 있다.
이러한 세포막 모형은 1971년 S.J. Singer가 지질 단백질 모형을 제안하고, 1972년 G.L. Nicolson과 함께 유동 특성을 제시해 탄수화물이 붙어있다.
세포는 세포막의 유동성을 유지하기 위해서 지질의 종류 및 양을 다양하게 변화시키고, 이중층 내부에 있는 콜레스테롤 분자(진핵세포의 경우) 또는 hopanoids(원핵세포의 경우)는 유동성을 유지시켜주는 데 도움을 준다.
사실 세포막 내부의 모든 지방 분자는 자유롭게 확산할 수 있다는 의미에서의 유체가 아니며, 카베올라 등은 세포막 영역에 상대적으로 고정되어 있고, 많은 단백질의 경우는 확산하지 않는다.
세포골격은 세포막을 지지하면서 세포막 내부 단백질을 고정시키고, 특정한 면으로 향하게 해주며, 또한 단백질이 세포막 내부에서 움직일 수 있는 범위를 제한해주고, 세포막 표면은 항상 형태 없이 움직이는 유체가 아니라, 어느 정도의 구조를 보여준다.
새로운 물질은 다음과 같은 여러 가지 방식에 의해 세포막에 포함되거나 혹은 제거되는데, 첫째, 세포 간 소포의 융합은 소포 내부 물질을 분비할 뿐만 아니라 소포막의 물질을 세포막에 포함시키고, 세포막은 훗날 소포가 되는 수포를 형성하기도 한다.
둘째, 세포막이 관상 구조를 가지고 있다면, 관으로부터의 물질은 세포막 속으로 흡수될 수 있다.
셋째, 비록 세포막 내부에 수성물질의 농도가 낮다고 하더라도(안정된 세포막 구성물은 물에 잘 녹지 않는다), 이러한 수성물질에서 분자 교환이 가능하다.
위 모든 경우에서, 세포막의 장력은 물질의 교환 비율에 영향을 미치고, 일부 세포에서, 특히 매끈한 형태를 가지는 세포에서, 세포막의 장력 및 면적은 각각 탄력성 및 유동성과 관련이 있고, 시간에 대한 연관성은 항상성이라고 하며, 이는 시간에 대해 면적이나 장력이 얼마나 일정한가를 의미하는 것이다.
일반적으로, 피부탄력 감소, 피부주름, 색소침착 등의 피부노화현상은 콜라겐의 파괴, 콜라겐 합성의 감소, 엘라스틴의 소실 및 피부생리 저하에 따른 멜라닌 색소침착 등에 의해서 나타나는 것으로서, 피부 표피와 진피에서 일어나는 현상이라고 볼 수 있다.
최근, 피부 노화방지에 대한 피부 생리학적 연구가 많이 행해지고 있으며, 실제로 화장료에 있어서 피부주름방지를 위해 자외선 차단제, 항산화제, 세포활성촉진제 등이 사용되고 있고, 또한 콜라겐 합성에 따른 피부 주름개선 방법들이 제시되고 있다.
한편, 생화학 및 분자생물학의 발전을 기반으로 하여 우리 생체 내에 존재하는 성장인자와 같은 소량의 신호물질들이 발견되었으며, 이를 기반으로 한 생체의 노화이론이 재정립되고 있는 중이다.
또한, 상기 신호물질은 나이가 증가함에 따라 생체 내에서 감소하게 되는데, 바로 이 성장인자의 감소가 우리의 노화와 밀접한 관계가 있다는 것이 밝혀지고 있고, 이러한 성장인자들은 각 조직의 기저에 존재하고 있는 줄기세포에서 다량 생산되고 있다.
우리 몸은 약 210여 가지의 세포들로 구성되어 있고 각각의 세포는 고유의 특성을 유지하면서 생명활동을 담당하고 있고, 모든 생명체가 생명이 있듯이 우리 몸의 각각의 세포는 수명이 있고 끊임없이 죽고 대신 새로운 세포로 채워지게 되는데, 바로 이러한 과정을 가능하게 하는 것이 줄기세포이다.
이때, 줄기세포는 조직이나 기관의 분화된 세포들 사이에 존재하는 미분화 세포로써, 끊임없이 스스로 증식하는 자가 재생능력(Self Renewal)과 신체내의 모든 조직세포로 분화할 수 있는 능력(Differentiation to specific tissue)을 가진 만능세포이다.
성체줄기세포는 조혈모세포, 중간엽줄기세포, 신경모세포, 상피모세포 등이 존재하며 조혈모세포의 경우 혈구 및 임파구를 생산할 수 있는 모세포로서 혈액암을 포함한 면역계 질환 치료에 도움이 되고, 중간엽줄기세포의 경우 뼈, 연골, 지방 및 섬유조직으로 분화되며 각 조직이 손상되었을 때 이들의 회복에 관여한다.
그러나, 이러한 성체줄기세포는 각각의 조직에 소량 존재하며 수년간 분열 혹은 증식을 하지 않고 잠잠하게 지내기도 하는데, 줄기세포라 함은 이러한 분화능력은 가지고 있으나, 아직 분화는 일어나지 않은 미분화 세포이다.
이러한 미분화 상태에서 적절한 조건을 맞춰주면 줄기세포는 다양한 조직 세포로 분화할 수 있고, 따라서 줄기세포의 이러한 분화능력을 이용하여 손상된 조직을 재생하는 등의 치료에 응용하기 위한 연구가 진행되고 있다.
줄기세포는 또 크게 배아줄기세포, 성체줄기세포로 나누어지는데, 줄기세포는 출생 후부터 우리 몸에 있는 여러 종류의 조직에 존재하는 성체줄기세포(Adult Stem Cell)와 인체 생명의 시초가 되는 수정란에서 유래하는 배아줄기세포 (Embryonic Stem Cell)의 두 종류로 구분될 수 있다.
성체줄기세포는 특정한 조직을 구성하는 세포로 즉, 골수세포는 혈구세포로, 피부줄기세포는 피부로, 신경세포는 후각신경세포로만 분화되도록 운명이 정해져 있는 세포이다.
줄기세포가 어떤 세포로 분화되느냐 하는 것은 그 줄기세포를 어떠한 환경에서 배양하느냐에 따라 좌우되고, 따라서 신경세포로 분화할 환경을 만들어 주면 신경세포가 되고, 피부세포로 분화할 환경을 만들어 주면 피부세포가 될 수 있는 것이며, 이러한 특성을 이용하여 화장품 조성물에 줄기세포배양액을 응용하고자 하는 것이다.
본 발명에 사용된 인체골수줄기세포배양액(Human Bone Marrow Stem Cell Conditioned Media)을 생산하기 위한 줄기세포의 배양방법으로는 골수조직에서 세포를 여러 세대 배양해 골수줄기세포를 분리해 낸 후, 혈청을 함유하지 않은 배양액에 골수줄기세포를 배양하여 골수줄기세포가 만들어낸 다양한 단백질을 함유한 배양액을 얻을 수 있다.
이 단백질 혼합물에는 EGF(표피세포성장인자), vEGF(혈관내피성장인자), TGF(형질전환성장인자), HGF(간세포증식인자), FGF(섬유아세포성장인자), IGF(인슐린유사성장인자) 등 150여 가지의 성장인자(growth factor) 단백질 성분을 포함하고 있는 것으로 보고되고 있다.
하나의 세포가 증식하고 다른 종류로 분화하는데 있어서 가장 중요한 역할을 하는 것이 바로 성장인자(growth factor)인데, 이 성장인자는 세포가 증식 또는 분화를 일으키는 신호를 세포 내부로 전달하는 역할을 하며, 이러한 신호를 바탕으로 세포는 분열, 분화를 하게 되어 피부를 생생하고 생기롭게 가꾸어주며 언제나 피부의 컨디션을 신선하고, 최상으로 만들어주는 상태를 유지할 수 있다.
줄기세포로부터 만들어낸 단백질들을 피부의 섬유아세포(fibroblast)에 처리하자 섬유아세포에서 생성되는 결합조직인 '콜라겐'의 양이 5배 이상 증가했으며 섬유아세포 자체의 증식도 30% 이상 증가했다.
섬유아세포는 피부의 진피층을 형성하는 콜라겐을 생산하는 세포이며 콜라겐의 양이 줄어들면 피부 탄력이 줄고 주름이 늘어나는 특징을 가지고 있다.
줄기세포는 다 분화능을 지닌 세포로서 in vitro 뿐만 아니라 in vivo 조건에서 뼈, 연골, 인대, 지방, 심근, 근육 등의 세포로의 분화 능력을 지니고 있는 다분화능 세포이다.
이러한 다분화능 세포인 줄기세포는 각 조직 세포로의 분화기전 연구에 있어 좋은 모델로 이용되고 있을 뿐만 아니라, 현재 다양한 세포 치료법 개발에 이용되고 있다.
세포 치료 대상 세포로서의 응용적 측면에서 볼 때, 중간엽 줄기세포는 세포의 채취가 상대적으로 쉽고 안전하며 자가 이식이 가능하다는 점에서 배아줄기세포에 비해 많은 장점을 가지고 있다.
앞에서 언급한 장점들로 인하여 줄기세포를 이용한 심근경색, 골절, 연골 손상, 뇌졸중 등 다양한 질병의 치료법이 연구되고 있으나, 줄기세포는 배아줄기 세포와는 달리 생체외에서 배양 시 활용할 수 있는 줄기세포는 그 수명이 매우 짧고 분화능 또한 짧은 기간 동안만 보유된다.
이러한 줄기세포의 제한된 수명은 해당세포의 활용에 있어 큰 제약이 되고 있고, 화장품 분야에서의 줄기세포의 이용은 그 대사산물로서의 성장인자를 이용하는 것이다.
성장인자들은 세포의 표면에 있는 수용체와 결합하여 세포의 증식과 분화를 자극하는 작용을 하는 단백질이고, 성장인자들의 기능은 매우 다양하여 여러 가지 세포에 분열을 자극하는 작용을 하기도 하는 반면, 어떤 경우에는 특이한 세포형에 만 작용하기도 한다.
성장인자는 세포 증식의 자극을 위해서 필수적인 성분으로서 세포 분화, 이주, 증식과정을 조절한다는 것이 밝혀졌고, 특이적 수용체에 성장인자가 결합하게 되면 신호 전달 사슬을 활성화하여 세포의 외부로부터 내부의 핵으로 신호가 전달된다.
신호 전달이 계속되면 다량의 다른 전달자와 같이 작용하여 최종적으로 새로운 단백질이 합성되므로, 성장인자는 세포 간 상호작용의 전달, 기능 제어에 있어서 중요한 신호 전달 네트워크를 형성하게 된다.
또한, 생쥐를 대상으로 한 피부 상처 재생 실험 결과에서도 줄기세포 유래 단백질을 적용했을 때 적용하지 않은 경우보다 상처 크기가 40%이상 줄어드는 것을 확인할 수 있다.
아울러, 색소침착 현상을 갖고 있는 피검자를 대상으로 한 미백효과에서도 좋은 결과를 보여 화장품 원료로서 강한 효능효과 및 안전성을 확보하고 있다.
본 발명의 인체골수줄기세포배양액은 골수조직으로부터 골수줄기세포를 분리하고, 이를 기질 배지에 현탁시켜 배양 용기에 접종한 후 37℃, CO2 인큐베이터에서 24시간 동안 배양하여 골수줄기세포가 배양용기 바닥에 붙으면 기질 배지를 제거하고 분화배지(DIFFERENTIATION MEDIA)를 넣어 3일 동안 배양한 후, 골수줄기세포 배지(Bone Marrow Stem Cell Media)를 넣고 골수세포로 분화시킨다.
이와 같은 골수세포를 얻는 단계에서, 배양 배지를 무혈청 DMEM 배지로, 염기성 섬유아세포 성장인자(bFGF; basic Fibroblast Growth Factor) 및/또는 표피세포 성장 인자(EGF; Epidermal Growth Factor)를 각각 0.1∼100 ng/㎖ 농도로 더욱 포함하는 DMEM 배지로 배양하여 얻어진 배양액을 분리 정제하여 본 발명의 인체골수줄기세포배양액으로 사용하였다.
이에 본 발명자들은 피부 노화방지를 개선하는 물질을 찾고자 예의 노력하던 중 인체골수줄기세포의 배양액이 이러한 목적에 부합되어 피부 노화방지 화장료 조성물의 유효성분으로 효과적으로 사용될 수 있음을 발견하고 이 발명을 완성하였다.
본 발명은 기존 리포좀의 제조과정이 60℃ 이상의 열이 발생하는 고압유화장치(microflidizer)를 활용함으로써 인체골수줄기세포배양액 내에 있는 단백질인 성장인자(growth factor)와 같은 여러 생리활성 물질들이 열에 불안정한 문제점을 안고 있다는 것에 착안하여, 상온에서 인체골수줄기세포배양액을 리포좀화 할 수 있는 기술을 개발하여 인체골수줄기세포배양액을 상온에서 안정하게 리포좀화함으로서 골수줄기세포배양액이 갖고 있는 피부에 대한 생리활성 효과를 극대화하였다.
본 발명은 이러한 골수줄기세포배양액이 유효성분으로 포함된 비엠좀을 함유하여 피부 노화방지 효과가 탁월한 화장료 조성물을 제공하는 데에 그 목적이 있으며, 본 발명의 구체적인 양태나 기타의 목적은 아래에서 제시될 것이다.
따라서, 본 발명의 목적은 인체골수줄기세배양액을 포함한 비엠좀을 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 실시예 및 청구범위에 의해 보다 명확하게 된다.
상기한 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 유효성분으로 인체골수줄기세포배양액이 포함된 비엠좀을 함유하는 것을 특징으로 하는 피부노화방지용 화장료 조성물을 제공하게 된다.
본 발명은 기존 리포좀의 제조과정에서 발생되는 열에 의해 불안정해질 수 있는 활성성분을 상온에서 리포좀의 제조가 가능하게 함으로서 안정한 리포좀을 제조할 수 있어 열에 불안정한 활성성분의 활성을 유지할 수 있다.
따라서, 본 발명에 따른 인체골수줄기세포배양액이 유효성분으로 포함된 비엠좀을 함유한 화장료 조성물은 인체골수줄기세포배양액을 포함한 기존의 리포좀을 함유한 화장료 조성물보다 좀 더 우수한 피부 주름개선이나 미백효과와 같은 피부 노화방지의 효과를 가져올 수 있다.
도1은 인체골수줄기세포배양액을 포함한 비엠좀의 입자분포도이다.
본 발명은 피부 노화현상을 개선시키는 인체골수줄기세포배양액이 유효성분으로 포함되는 비엠좀(BMSOME)을 함유하는 피부노화 방지 화장료 조성물에 관한 것이다.
상기 골수줄기세포는 배아줄기세포를 제외한 성체로부터 얻어지는 줄기세포를 의미하며, 인체골수줄기세포배양액의 유효 성분은 주로 세포의 성장을 조절하는 펩타이드와 단백질로서, 예를 들면 PDGF(혈소판 유래 성장인자), Basic FGF(염기성 섬유아세포 성장인자), KGF(각질세포 성장인자), TGF-β1(형질변환성장인자), HGF(간세포 성장인자), VEGF(혈관내피 성장인자), 콜라겐, 파이브로넥틴, SOD(항산화 효소) 등을 포함하며, 이에 제한되지 않는다.
또한, 상기 골수줄기세포배양액은 각종 성장인자를 함유하고 있어 피부 구성세포인 섬유아세포 이동 촉진, 활성화 효과, 피부 재생 및 항노화 효과, 콜라겐합성 증가, 티로시나제의 활성 억제 효과, 멜라닌 합성 억제, 모발 성장 및 축소된 모낭 복원 효과를 기대할 수 있다.
본 발명의 화장료는 열에 불안정한 유효성분인 인체골수줄기세포배양액을 안정화시키고 경피 흡수를 용이하게 하기 위해서 세포막을 구성하는 지질복합체를 제조한 뒤 상온에서 인체골수줄기세포배양액을 포함하여 화장료에 함유시키는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 비엠좀(BMSOME)은 기존의 리포좀이 레시틴 또는 레시틴 유사 유화제, 유성성분 및 수성성분을 포함하는 것과는 달리, 피부 세포막을 구성하는 지질 성분만으로 구성되며, 상기 비엠좀에 인체골수줄기세포배양액이 포함 되어 있다.
본 발명에서의 비엠좀(BMSOME)은 통상적인 리포좀의 형태를 갖는 것으로 평균 소적 크기가 20 내지 500 nm이며, 바람직하게는 50 내지 250 nm이며, 가장 바람직하게는 100 내지 200nm인 나노화된 리포좀을 의미한다.
상기 비엠좀의 평균 소적 크기가 500nm를 초과하는 경우에는 본 발명에서 달성하고자 하는 기술적 효과 중 피부 침투 및 제형 안정성이 매우 미약하다.
본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서 인체골수줄기세포배양액 이외에 생체성분의 활성을 유지시켜 주는 다양한 성분들, 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들, 예컨대 항산화제, 보습제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체등을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 구체적인 예시에 따르면, 인체골수줄기세포배양액이 유효성분으로 포함된 비엠좀을 함유하는 본 발명의 화장료 조성물은 피부주름 개선 효과 및 미백 효과 등과 같은 피부 노화방지 효과를 갖는다.
본 발명의 화장료 조성물을 위해 아래 제조예 1과 같이 인체골수줄기세포배양액을 포함하는 비엠좀을 제조하였다.
제조예 1. 인체골수줄기세포배양액을 포함하는 비엠좀의 제조
비엠좀은 세포막을 구성하는 주요 지질 성분인 포스포리피드(Phospholipid), 피토스핑고신(Phytosphingosine), 세라마이드 3 (Ceramide 3), 콜레스테롤(Cholesterol), 피토스테롤(Phytosterol), 베타-시토스테롤(β-sitosterol), 스쿠알렌(Squalene)과 글리세린(Glycerine)을 고압유화장치(Microfludizer)를 활용하여 고압에서 용해하여 반투명 젤 형태의 지질복합체(Lipid Complex)를 만든 뒤, 상온에서 이 지질복합체를 비엠좀 총 중량에대하여 0.001~30.0 중량% 바람직하게는 총 중량에 대하여 0.05~3.0 중량%를 인체골수줄기세포배양액 비엠좀 총 중량에 대하여 0.0001~99.999 중량 % 바람직하게는 총 중량에 대하여 0.005~30.0 중량%를 함유하는 수용액에 넣고 섞어주면, 폐쇄된 이중층 구조를 가진 본 발명의 인체골수줄기세포배양액을 포함하는 비엠좀을 얻을 수 있다.
이때, 반응 공정의 온도는 상온에서 진행되며, 인체골수줄기세포배양액은 (주)파미셀로부터 공급받아 사용하였다.
비엠좀을 구성하는 포스포리피드(phospholipid) 함량은 비엠좀 총 중량에 대하여 0.001-50.0 중량% 함유되며, 바람직하게는 총 중량에 대하여 0.01-20.0 중량% 함유하고, 피토스핑고신(Phytosphingosine) 함량은 비엠좀 총 중량에 대하여 0.001-20.0 중량% 함유되며, 바람직하게는 총 중량에 대하여 0.01-10.0 중량% 함유하고, 세라마이드 3 (Ceramide 3) 함량은 비엠좀 총 중량에 대하여 0.001-50.0 중량% 함유되며, 바람직하게는 총 중량에 대하여 0.01-10.0 중량% 함유하고, 콜레스테롤(Cholesterol) 함량은 비엠좀 총 중량에 대하여 0.01-30.0 중량% 함유되며, 바람직하게는 총 중량에 대하여 0.05-10.0 중량% 함유하고, 피토스테롤(Phytosterol) 함량은 비엠좀 총 중량에 대하여 0.01-30.0 중량% 함유되며, 바람직하게는 총 중량에 대하여 0.05-10.0 중량% 함유하고, 베타-시토스테롤(β-sitosterol) 함량은 비엠좀 총 중량에 대하여 0.01-30.0 중량% 함유되며, 바람직하게는 총 중량에 대하여 0.05-10.0 중량% 함유하고, 스쿠알렌(Squalene) 함량은 비엠좀 총 중량에 대하여 0.001-50.0 중량% 함유되며, 바람직하게는 총 중량에 대하여 0.1-30.0 중량% 함유하고, 글리세린(Glycerine) 함량은 비엠좀 총 중량에 대하여 0.01-50.0 중량% 함유되며, 바람직하게는 총 중량에 대하여 1.0-30.0 중량%를 함유한다.
비엠좀(BMSOME)은 아래 표1의 함량으로 세포막을 구성하는 지질인 포스포리피드(Phospholipid), 피토스핑고신(Phytosphingosine), 세라마이드 3 (Ceramide 3), 콜레스테롤(Cholesterol), 피토스테롤(Phytosterol), 베타-시토스테롤(β-sitosterol), 스쿠알렌(Squalene)과 글리세린(Glycerine)을 1,000bar의 압력으로 고압유화장치(microfludizer)를 3회 통과시켜 반투명 젤 형태의 지질복합체를 만들어, 이 지질복합체를 상온에서 인체골수줄기세포 배양액에 첨가하여 비엠좀을 제조함으로써 기존의 고압유화장치(microfludizer)를 이용한 리포좀 제조공정이 고온(60℃이상)에서 리포좀이 형성됨으로 인해 온도에 민감한 성분들의 열 안정성을 확보할 수 없는 단점을 보완할 수 있다.
비엠좀의 지질복합체 성분
성 분 중량%
포스포리피드(Phospholipid
피토스핑고신(Phytosphingosine)
세라마이드 3 (Ceramide 3)
콜레스테롤(Cholesterol)
피토스테롤(Phytosterol)
베타-시토스테롤(β-sitosterol)
스쿠알렌(Squalene)
글리세린(Glycerine)		 20.0
5.0
10.0
2.5
10.0
2.5
20.0
30.0
계 100
본 발명에 사용된 인체골수줄기세포 배양액을 포함하는 비엠좀 입자의 입도 분포를 알아보기 위해 아래와 같이 실험예 1을 실시하였다.
실험예 1. 비엠좀 입자의 입도 분포
본 발명에 사용된 비엠좀 입자의 입도 분포를 분석하기 위하여 상기 제조예 1에서 얻은 비엠좀을 10%-Microplasma Hyopnemoniae OD410=0.1 완충용액에 적당한 농도로 희석한 후 비엠좀 입자의 입도를 측정하였다.
상기 비엠좀 입자의 입도는 제타사이저 엔에스(Zetasizer NS) 장비를 이용하여 빛 산란방식을 분석하고 그 결과를 도 1의 그래프에 나타내었다.
이렇게 얻어진 비엠좀의 입자크기는 평균 120nm로서, 기존 microfluidizer를 이용하여 제조된 리포좀에 비하여 입도 균질성이 향상되어 안정성을 향상시킬 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없는데, 예를 들면, 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 아이크림, 영양크림, 맛사지크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 파우더, 에센스, 팩 등의 제형을 가질 수 있다.
또한, 각 제형의 화장료 조성물에 있어서, 피부개선 원료로써 상기한 인체골수줄기세포배양액을 포함하여 이외의 성분들을 화장료의 제형 또는 사용목적 등에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 인체골수줄기세포배양액을 포함한 비엠좀을 배합시켜 얻어지며, 그 양은 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.001-100.0 중량% 함유하고, 바람직하게는 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.01-10.0 중량% 양으로 함유한다.
이하, 실험예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 상세히 설명하고자 하나, 본 발명을 이들 실험예에 한정하고자 하는 것은 아니다.
실험예를 위하여 하기 표 2과 같이 본 발명에 따라 인체골수줄기세포배양액 을 포함한 비엠좀을 함유한 조성물(실시예)과 인체골수줄기세포배양액을 포함한 일반적인 기존의 리포좀을 함유한 조성물(비교 실시예)이 제조되었다.
(실시예 및 비교실시예)
실시예 및 비교실시예
단위:중량%
성분 실시예 비교실시예
델타-토코페롤 0.2 0.2
비엠좀 5.0 -
리포좀 - 5.0
A 세토스테아릴알콜 2.0 2.0
글리세릴스테아레이트 1.5 1.5
마이크로크리스탈린 0.7 0.7
스쿠알란 5.0 5.0
유동파라핀 3.0 3.0
트리옥타노인 5.0 5.0
폴리솔베이트 60 1.2 1.2
솔비탄스테아레이트 0.5 0.5
싸이크로메치콘 3.0 3.0
토코페릴아세테이트 0.2 0.2
BHT 0.05 0.05
B 정제수 잔량 잔량
농글리세린 4.0 4.0
1,3-부틸렌글리콜 2.0 2.0
산탄검 0.1 0.1
EDTA-2Na 0.05 0.05
향,방부제 적량 적량
계 100 100
실험예 2. 피부주름개선효과 - 기기적 평가
상기 본 발명의 인체골수줄기세포배양액을 포함한 비엠좀을 함유하는 화장료에 대한 피부주름 개선 효과를 측정하였다.
20세 이상의 여성 20명(평균연령 43.5세)을 2그룹(A,B)으로 나누어 A그룹 10명을 대상으로는 실시예를, B그룹 10명을 대상으로는 비교실시예를 각각 상기 표2에 따라 제형하여 눈가 crows feet 부위에 2X2 ㎠의 면적에(2회/일, 0.2g/회) 8주간 도포하면서, 투명한 실리콘 재질의 용액을 이용하여 피부주름의 레플리카(Replica)를 떠서 피부주름측정기(SKIN VISIOMETER SV400, C+K Electronics GmbH. Germany)로 피부주름변화를 측정하였다. 레플리카의 상을 CCD 카메라로 3차원적 분석하고, 각각의 주름의 거칠기(Rm: m은 1이상의 정수)의 합을 주름의 개수로 나눈 값인 하기 식 1의 평균주름거칠기(Rz)로 주름개선 효과를 분석하였고, 그 시험결과는 하기 표3에 나타내었다.
Figure pat00001

피부주름개선효과(6주)
평균주름거칠기(Rz , ㎛)
실시예 비교실시예
T0 T8 △Rz T0 T8 △Rz
피검자 1 120 60 -60 122 82 -40
피검자 2 125 33 -92 129 85 -44
피검자 3 115 39 -76 121 80 -41
피검자 4 120 42 -78 130 92 -38
피검자 5 130 31 -99 122 48 -74
피검자 6 132 39 -93 125 78 -47
피검자 7 118 33 -85 127 78 -49
피검자 8 119 41 -78 120 63 -57
피검자 9 122 40 -82 118 95 -23
피검자 10 121 37 -84 115 72 -43
평균 -82.7 -45.6
시험 결과, 8주 후 평균주름거칠기(Rz)는 인체골수줄기세포배양액을 포함한 비엠좀을 함유한 실시예는 82.7㎛ 낮아져(p<0.01) 인체골수줄기세포배양액을 포함한 일반 리포좀을 함유한 비교실시예 보다 약 81.4% 정도 주름이 더 개선되었다.
따라서, 위의 결과로부터 인체골수줄기세포배양액을 비엠좀에 포함한 실시예가 일반 리포좀에 포함한 비교실시예 보다 주름개선효과가 매우 효과적으로 상승되었음을 알 수 있다.
실험예 3. 피부주름개선효과 - 육안평가
상기 본 발명의 인체골수줄기세포배양액을 포함한 비엠좀을 함유하는 화장료에 대한 피부주름 개선에 대한 육안평가를 실시하였다.
20세 이상의 여성 20명(평균연령 43.5세)을 2그룹(A,B)으로 나누어 A그룹을 대상으로는 실시예를, B그룹을 대상으로는 비교실시예를 각각 상기 표 2에 따라 제형하여 주름이 있는 눈가를 중심으로 8주간 도포(2회/일)한 후, 숙련자의 객관적 평가와 피검자의 주관적 평가를 다음의 6등급으로 분류하여 평가함으로써 피부주름의 개선정도(ΔW)를 측정하였다. 결과는 하기 표4와 표5에 나타내었다.
피부주름개선 평가 기준:
-3: 극히 심하게 악화 -2: 악화 -1: 약간 악화
0: 변화없음 1: 약간 개선 2: 개선 3: 매우 개선
피부주름개선 임상효과(숙련자의 객관적 평가)
피부주름 개선정도(△W)
실시예 비교실시예
T0 T8 T0 T8
피검자 1 0 3 0 1
피검자 2 0 3 0 1
피검자 3 0 3 0 2
피검자 4 0 2 0 1
피검자 5 0 2 0 1
피검자 6 0 2 0 2
피검자 7 0 3 0 1
피검자 8 0 2 0 3
피검자 9 0 2 0 2
피검자 10 0 3 0 2
△W(T8-T0) 2.5 1.6
피부주름개선 임상효과(피검자의 주관적 평가)
피부주름 개선정도(△W)
실시예 비교실시예
T0 T8 T0 T8
피검자 1 0 3 0 2
피검자 2 0 2 0 3
피검자 3 0 3 0 2
피검자 4 0 2 0 2
피검자 5 0 3 0 2
피검자 6 0 3 0 1
피검자 7 0 3 0 2
피검자 8 0 3 0 2
피검자 9 0 2 0 3
피검자 10 0 3 0 2
△W(T8-T0) 2.7 2.1
육안평가결과에서 실시예의 경우, 숙련자의 객관적 평가와 피검자의 주관적 평가가 각각 2.5, 2.7로 주름개선 효과가 매우 우수함을 알 수 있다.
이는 리포좀에 인체골수줄기세포배양액을 포함한 비교실시예에 비해 숙련자의 객관적 평가에서는 56.3%, 피검자의 주관적 평가에서는 28.6% 증가한 것으로 나타나 본 발명의 비엠좀에 인체골수줄기세포배양액을 포함한 화장료가 기존 리포좀에 인체골수줄기세포배양액을 포함한 화장료보다 매우 효과적으로 주름을 개선시킴을 알 수 있다.
실험예 4. 피부미백효과 - 멜라노사이트(Melanocyte)에서 멜라닌 생성에 대한 인체골수줄기세포배양액을 포함한 비엠좀의 저해 효과
멜라노 사이트는 마우스 유래 B-16 멜라노마(ATCC CRL 6323) 세포주를 구입하여 사용하였다.
멜라노마 세포주를 포도당 4.5 g/L, 10% 혈청, 1% 항생제가 함유된 DMEM 배지에 접종하여 50㎖ T-플라스크에 37℃에서 배양한다.
5% CO2 조건하에서 24시간 배양한 후, 0.02% EDTA가 함유된 0.05% 트립신(Trypsin)을 처리하여 세포를 분리한 후 50㎖ T-플라스크에 접종하여 48시간 배양한다.
이때 세포수는 5.76 × 106 세포/플라스크이다. 여기에 적당 농도의 인체골수줄기세포배양액을 함유한 비엠좀과 인체골수줄기세포배양액을 함유한 일반 리포좀에 DMEM 배지에 희석시켜 배양된 멜라노마 세포에 처리하여 37℃에서 5일간 배양한다.
비엠좀과 일반 리포좀에 포접하기 위해 사용한 인체골수줄기세포배양액의 량은 동일하게 5% 사용하여 본 실험에 적용할 비엠좀과 일반 리포좀을 얻었다.
배양 후, 배지를 모두 제거하고, 0.02% EDTA와 0.05%트립신을 함유한 살린-포스페이트 완충용액(PBS)을 1㎖ 처리하여 세포를 분리시킨 후, 5분간 원심 분리하여 세포만을 수집한다.
5% 트리클로로아세테이트(TCA)를 처리하여 교반하고, 원심 분리하여 침전된 멜라닌을 살린-포스페이트 완충용액으로 세척한다.
침전된 멜라닌에 1N NaOH를 처리하여 용해시킨 후, 475nm에서 흡광도를 측정한다. 멜라닌 농도는 합성 멜라닌(시그마사)의 표준 농도 곡선으로부터 결정하였으며, 그 실험 결과는 하기의 표 6에 나타낸 바와 같다.
멜라노사이트에서 멜라닌 합성에 대한 비엠좀의 저해 효과
농도
(㎍/㎖)		 멜라닌 생성 억제율(%)
비엠좀 일반 리포좀
무처리 - -
1 1.5 1.8
5 15.0 10.5
10 28.5 17.7
50 76.9 28.3
100 91.3 45.9
250 93.5 66.1
500 97.1 78.5
이상의 결과에서 인체골수줄기세포배양액이 포함된 비엠좀은 인체골수줄기세포배양액이 포함된 일반 리포좀 보다 멜라닌 합성 억제효과가 높게 나타나는 것을 알 수 있다.
이는 인체골수줄기세포배양액을 포함하는 비엠좀 제조 공정이 상온에서 진행되는데 비해, 기존의 일반 리포좀은 제조공정에 고압유화장치(microfludizer)를 통과 시 고온(60℃이상) 공정을 거치면서 성장인자와 같은 온도에 민감한 성분들이 발생한 열에 의해 활성이 떨어지거나 변성되어 멜라닌 합성 저해 효과가 떨어진다고 볼 수 있다.
본 시험예를 통해 인체골수줄기세포배양액은 멜라노사이트의 멜라닌 생성을 억제하여 피부 미백효과를 보임을 알 수 있다.
실험예 5. 피부탄력증진효과
상기 본 발명의 인체골수줄기세포배양액을 포함한 비엠좀을 함유하는 화장료에 대한 피부탄력 증진 효과를 측정하였다.
온도 24-26℃, 습도 75% 조건에서 20세 이상의 여성 20명(평균연령 43.5세)을 2그룹(A,B)으로 나누어 A그룹을 대상으로는 실시예를, B그룹을 대상으로는 비교실시예를 각각 상기 표 2에 따라 제형하여 눈가를 중심으로 8주간 도포(2회/일)한 후, 피부탄력측정기(Cutometer SEM 575, C+K Electronic Co., Germany)를 이용하여 피부탄력을 측정하였다.
시험 결과는 하기 표 7에 Cutometer SEM 575의 △R8(R8(8주)-R8(0주))값으로 나타내었고, R8의 값은 피부 점탄성(viscoelasticity)의 성질을 나타낸다.
피부탄력
실험제품 피부탄력효과
실시예 0.57
비교실시예 1 0.33
이상의 결과에서 인체골수줄기세포배양액이 포함된 비엠좀을 함유한 실시예가 인체골수줄기세포배양액이 포함된 일반 리포좀을 함유한 비교실시예보다 피부탄력이 72.7% 증가하여, 비엠좀에 포함된 인체골수줄기세포배양액이 매우 높은 피부탄력 증진 효과를 갖고 있음을 알 수 있다.
실험예 6. 피부침투효과
상기 본 발명의 인체골수줄기세포배양액을 포함한 비엠좀을 함유하는 화장료에 대한 피부침투효과를 측정하였다.
인체 정상 섬유아세포(Human normal fibroblast) 1x105 cells/ml 세포를 인체의 결합조직을 이루는 섬유조직과 유사한 콜라겐 젤 구조에 콜라겐 수용액 3mg/ml : 5X DMEM : 2.2% 소듐바이카보네이트(Sodium bicarbonate)와 200mM Hepes 완충액이 포함된 0.05N 수산화나트륨이 7:2:1로 혼합된 배지에 접종하여 5% CO2, 37℃에서 7일 동안 배양하여 얻은 Dermal Equivalent(DE) 를 3μm 다공성 폴리카보네이트(Porous polycarbonate) 재질로 된 막(Membrane)에 의해 안쪽과 바깥쪽이 구분된 플레이트(Plates)의 안쪽에 넣고 섬유아세포가 배양된 Dermal Equivalent(DE) 표면위에 표피 각질형성세포(Epidermal Keratinocyte) 1x105 cells/ml 세포를 접종하여 EGF와 BPE가 함유된 K-SFM 배지를 안쪽과 바깥쪽에 넣고 7일 동안 배양한다.
그 후 플레이트 안쪽의 배지를 버려 공기가 배양세포의 표면에 접촉 되도록 하고 바깥쪽에 10% FBS가 함유된 K-SFM과 EGF가 들어있지 않은 DMEM이 동량으로 혼합된 배지를 넣어 2주간 배양하여 다층의 표피와 진피가 형성된 인공피부를 얻는다.
여기에 본 발명의 실시예 및 비교실시예 1를 표2에 따라 제형하여 맨 위층의 인공피부 조직에 적용하여 4시간 배양한 후 EGF가 들어있지 않은 DMEM 배지에서 인공피부의 표피와 진피를 침투하여 통과된 실시예의 비엠좀과 비교실시예의 리포좀에 함유되어 있는 인체골수줄기세포배양액 내의 EGF 양을 HPLC로 분석하였다.
이때, 인체골수줄기세포배양액 내의 EGF 함량은 50μg/1㎖ 되도록 EGF를 배지에 첨가하고, 인체골수줄기세포배양액은 총 중량의 10.0% 함유하도록 실시예의 비엠좀과 비교실시예의 리포좀을 제조하였다.
피부침투효과에 대한 시험결과는 하기 표 8에 나타내었다.
피부침투효과
배지중의 EGF의 양(μg/1㎖)
실시예 15.9
비교실시예 7.3
이상의 결과에서 인체골수줄기세포배양액이 포함된 비엠좀은 일반 리포좀에 인체골수줄기세포배양액을 포함했을 때보다 높은 피부침투효과가 있음을 알 수 있다.
이는 인체골수줄기세포배양액을 포함하는 비엠좀이 좀 더 피부 친화력이 있을 뿐만 아니라, 비엠좀을 상온에서 제조하여 열에 민감한 EGF의 안정성이 확보됨으로서 높은 활성을 유지하여 피부침투량이 높게 나왔으리라 본다.
실험예 7. 제형 안정성 실험
상기 본 발명의 인체골수줄기세포배양액을 포함한 비엠좀을 함유하는 화장료에 대한 안정성를 측정하였다.
화장료의 안정성을 시험하기 위해 본 발명의 실시예 및 비교실시예 1를 표2에 따라 제형하여 45℃로 일정하게 유지되는 항온조에서 불투명 초자 용기에 담아 12주 동안 보관하고, 또한 4℃로 일정하게 유지되는 완전히 차광된 냉장고 내에서 불투명 초자 용기에 담아 12주 동안 보관한 후, 분리 정도 및 변색 정도를 비교 측정하였고, 그 결과를 하기 표 9에 나타내었다.
이때, 제품 분리 및 변색 정도를 다음의 6등급으로 분류하여 평가하였다.
제품 변색 평가 기준 :
0: 변화 없음 1: 극히 조금 분리(변색)
2: 조금 분리(변색) 3: 조금 심하게 분리(변색)
4: 심하게 분리(변색) 5: 극히 심하게 분리(변색)
분리 및 변색정도
온도 시험물질의 분리 정도 시험물질 변색 정도
실시예 비교실시예 실시예 비교실시예
45℃ 0 2.8 0 1.6
4℃ 0 0.5 0 0
상기 표 9에서 알 수 있는 바와 같이, 비엠좀을 함유한 실시예는 4℃와 45℃에서 모두 변색이나 분리 증상이 없이 안정하였으나, 일반 리포좀을 함유한 비교실시예는 4℃는 변색이나 분리 증상이 거의 없었으나 45℃에서는 조금은 심한 분리 증상과 미세한 변색이 나타나 불안정함을 알 수 있다.
실험예 8. 피부 안전성 시험
상기 본 발명의 인체골수줄기세포배양액을 포함한 비엠좀을 함유하는 화장료에 대한 피부 안전성 시험을 실시하였다.
피검자 20명(평균연령 28.5세, 연령분포 18세-40세)을 본 발명의 실시예 및 비교실시예 1를 표 2에 따라 제형하여 Haye's Test Chamber를 이용 상박에 피부 첩포시험(Patch Test)을 실시하였다.
단, 건선(Psoriasis), 습진(Eczema), 기타 피부병변 보유자나 임신, 수유부 또는 피임제, 항히스타민제 등을 복용하고 있는 사람은 본 실험에서 제외하였다.
시험부위를 70% 에탄올로 닦아낸 뒤 건조시키고, 실시예와 비교실시예를 각각 15μg씩 Chamber에 적하 시킨 후, 시험 부위인 상박 부위에 얹어 고정시킨다. 첩포는 24시간 동안 도포하고 첩포를 제거한 후에는 Marking Pen으로 시험부위를 표시하여 각각 24시간, 48시간 후에 시험부위를 관찰한다.
판정은 첩포 제거 24시간, 48시간 후에 행하며 피부반응은 하기 표 10의 국제접촉피부염연구회(International Contact Dermatitis Research Group:ICDRG)의 규정에 따라 판정하였고, 그 시험결과는 하기 표 11에 나타내었다.
국제접촉피부염연구회의 판정기준
기호 판 정 기 준 평 가 Mean Score
±
+
++
+++
-		 Doubtful or slight reaction and erythema
Erythema + Induration
Erythema + Induration + Vesicle
Erythema + Induration + Bullae
Negative 		미소자극
경자극
중자극
강자극
무자극
0~0.9
1.0~2.9
3.0~4.9
5.0이상
0
피부 안전성
경과시간 실시예 비교실시예
24시간 0 0.0
48시간 0 0.0
피부안전성 시험 결과, 실시예와 비교실시예 모두 평균 자극정도가 0으로 피부에 자극이 없는 안전한 화장료임을 알 수 있다.
이하 상기한 실험예들의 결과를 근거로 하여 인체골수줄기세포배양액을 포함한 비엠좀을 함유하는 화장료를 조성하여 제시하고 있으나, 본 발명의 조성물을 하기의 제형 예(표12~표16)들로 한정하고자 하는 것은 아니다.
유연화장수(스킨로션)
배합성분 중량부
비엠좀 1.0
1,3-부틸렌글리콜 6.0
글리세린 4.0
올레일알코올 0.1
폴리솔베이트 20 0.5
에탄올 15.0
벤조페논-9 0.05
향, 방부제 미량
정제수 to 100
영양화장수(밀크로션)
배합성분 중량부
비엠좀 3.0
프로필렌글리콜 6.0
글리세린 4.0
트리에탄올아민 1.2
토코페릴아세테이트 3.0
유동 파라핀 5.0
스쿠알란 3.0
마카다미아너트오일 2.0
폴리솔베이트 60 1.5
솔비탄세스퀴올레이트 1.0
카르복시비닐 폴리머 1.0
비에치티이 0.01
이디티에이-2엔에이 0.01
향, 방부제 미량
정제수 to 100
영양크림
배합성분 중량부
비엠좀 10.0
세토스테아릴알콜 2.0
글리세릴스테아레이트 1.5
트리옥타노인 5.0
폴리솔베이트 60 1.2
솔비탄스테아레이트 0.5
스쿠알란 5.0
유동파라핀 3.0
싸이클로메치콘 3.0
비에치티이 0.05
델타-토코페롤 0.2
농글리세린 4.0
1,3-부틸렌글리콜 2.0
산탄검 0.1
이디티에이-2엔에이 0.05
향, 방부제 미량
정제수 to 100
마사지크림
배합성분 중량부
비엠좀 3.0
프로필렌글리콜 6.0
글리세린 4.0
트리에탄올아민 0.5
밀납 2.0
토코페릴아세테이트 0.1
폴리솔베이트 60 3.0
솔비탄세스퀴올레이트 2.5
세테아릴알코올 2.0
유동파라핀 30.0
카르복시비닐폴리머 0.5
향, 방부제 미량
정제수 to 100
팩
배합성분 중량부
비엠좀 2.0
프로필렌글리콜 2.0
글리세린 4.0
카르복시비닐 폴리머 0.3
에탄올 7.0
피이지-40 히드로게비이티드 캐스터 오일 0.8
트리에탄올아민 0.3
비에치티이 0.01
이디티에이-2엔에이 0.01
향, 방부제 미량
정제수 to 100
없음.

Claims (3)

  1. 유효성분으로 인체골수줄기세포배양액이 포함된 비엠좀을 함유하는 것을 특징으로 하는 피부노화방지용 화장료 조성물.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 비엠좀은 폐쇄된 이중층 구조의 지질복합체를 상온에서 인체골수줄기세포배양액에 혼합하여 형성하는 것을 특징으로 하는 피부노화방지용 화장료 조성물.
  3. 제 1 항에 있어서,
    상기 인체골수줄기세포배양액이 포함된 비엠좀은 조성물 총중량에 대하여 0.01~10.0중량%를 함유하는 것을 특징으로 하는 피부노화방지용 화장료 조성물.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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WO2019139214A1 (ko) * 2018-01-11 2019-07-18 (주)알렌바이오 미세조류 추출물을 내포하는 알게좀을 함유하는 화장료 조성물
KR102341002B1 (ko) * 2021-04-22 2021-12-20 (주)루카스앤에스 더블 리포좀 내부에 포집된 지방줄기세포 배양액 추출물을 포함하는 화장료 조성물

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