KR101323487B1 - 항주름제 - Google Patents

Abstract

물냉이, 주니퍼, 백출 및 머위의 추출물 중 어느 하나 이상을 유효 성분으로 포함하여 이루어지는 신규 항주름제를 제공한다.

Description

항주름제{ANTIWRINKLE AGENT}

본 발명은 신규 항주름제에 관한 것이다. 더 구체적으로는, 본 발명은 물냉이, 주니퍼, 백출 및/또는 머위 유래 추출물을 유효 성분으로 하는 항주름제에 관한 것이다. 또한 본 발명은, 상기 추출물을 유효 성분으로 하는 기저막 안정화제, 세포외 매트릭스 생산 촉진제 및 피부의 처짐, 당김 개선제 및 상기 추출물을 이용한 인공 피부의 제조 방법, 주름의 경감 방법, 피부의 처짐, 당김 개선 방법에 관한 것이다.

인류를 비롯한 여러 동물의 신체 전체를 덮는 피부는, 일광, 건조, 산화, 환경에 의한 스트레스, 정신적 스트레스 등의 외적 인자 및 가령(加齡)에 의한 주름의 형성, 경화, 기미, 그을음, 탄력성의 저하 등의 변화에 노출되어 있다. 여기서, 피부는 크게 나눠, 표피와 진피의 두개의 층으로 구성되어 있다. 표피와 진피 사이에는 기저막이라고 불리는 얇고 섬세한 막이 존재한다. 표피의 대사는, 이 기저막을 통해서 진피의 세포가 생산하는 인자나 혈액 공급에 의존하고 있다. 피부에 있어서의 표피의 증식과 분화는, 기저막과 진피에 의해서 조절되고 있다. 따라서, 기저막을 통한 표피·진피간의 커뮤니케이션은 피부 표피의 기능 조절에 있어서 중요한 역할을 담당하고 있다.

피부 기저막에는 앵커링 복합체라고 불리는 특수한 구조가 있고, 표피와 진피라고 하는 2개의 조직의 접착이나 커뮤니케이션을 안정시키는 역할을 하고 있다. 앵커링 복합체의 단백질은 케라티노사이트의 세포 골격인 케라틴과 진피 유두층의 결합 조직 단백질의 쌍방에 링크되어 있다. 앵커링 복합체의 중요한 구성 요소의 하나가 라미닌 5이다(Rousselle et al., J Cell Biol. 1991 Aug; 114(3): 567-76). 지금까지의 연구로부터, 라미닌 5의 3본쇄를 코드하는 유전자의 유전학적 변이는, Herlitz 접합부형 표피 수포증이라고 하는 중요한 수포를 형성하는 선천성 유전질환의 원인인 것으로 밝혀졌다(Aberdam et al., Nat Genet. 1994 Mar; 6(3): 299-304). 이것은 라미닌 5가 표피의 접착에 불가결한 물질인 것을 나타내고 있다. 또한 라미닌 5는 앵커링·필라멘트를 형성하고, 또한 라미닌 5의 수용체로서 알려져 있는 인테그린 α6β4(반교소체에 존재하는 세포막 관통형의 인테그린)과 결합하는 것이 해명되어 있다[Niessen et al., Exp Cell Res. 1994 Apr; 211(2): 360-7].

라미닌 5는, 진피 유두층에 접속되어 있는 앵커링 선유를 형성하는 VII형 콜라겐과 직접 결합할 뿐만 아니라, 그리고 다른 라미닌 6이나 7과 복합체를 더 형성하고, 이 복합체가 니도젠을 통해 기저막의 골격인 IV형 콜라겐과 결합하는 것이 보고 되어 있다.

상기 복합체를 구성하는 IV형 콜라겐의 발현 레벨은, 가령과 함께 저하되는 것이 관찰되고 있고(Vazquez F et al., Maturitas 1996, 25: 209-215), 라미닌 5가 결합하는 VII형 콜라겐에 관해서도, 고령자 유래의 피부 선유아 세포는 젊은 사람 유래의 피부 선유아 세포에 비해, 단백질 레벨 및 mRNA 레벨에서 생산능이 저하된 다는 보고(Chen et al., J. Invest. Dermatol., 102: 205-209, 1994)가 있다. 또한, VII형 콜라겐에 의해 구성되는 앵커링 선유는, 정상 피부에 있어서 생리적 노화 및 광노화에 따라 감소한다는 보고(츠지타쿠오, 히카와회지 105: 963-975, 1995, Tidman et al., J. Invest Dermatol., 83: 448-453, 1984)도 있다. 이들 개개의 구성 성분의 특징에 추가로, 기저막 자체도 피부 노화에 따라 다중화, 단열 등의 구조 이상을 나타내는 것이 알려져 있고(Lavker et al., J. Invest. Dermatol. 1979 73: 59-66), 이 구조 변화의 결과, 주름, 처짐 등의 노화 특징의 발현, 노화에 따르는 피부 기능 저하가 발생하는 것으로 생각된다. 따라서, 기저막 골격을 구성하는 라미닌 5, IV형 및 VII형 콜라겐의 생산을 촉진하는 것은, 기저막의 구조를 양호한 상태로 유지하고, 피부 노화를 막는 데에 있어서 매우 중요하다고 생각된다. 사실, 피부 기저막 구조를 상세히 관찰한 경우, 20대 후반부터 30대 전반에 걸쳐서 기저막 손상이 높은 빈도로 관찰됨으로써, 기저막의 구조 변화가 피부 노화의 유도에 있어서 중요한 역할을 나타내는 것이 보고되고 있다[IFSCC Magazine, 2000 4(4): 15-23].

피부 노화의 방지 중에서도 항주름은 주요한 문제 중 하나이다. 여기서, 주름을 크게 나누면 홈이 얕은 「표피 주름」(작은 주름)과 홈이 깊은 「진피 주름」(큰 주름)으로 분류되지만, 특히 진피 주름은 기저막의 변화에 의하는 동시에, 진피층이 변성·함몰하여 발생하기 때문에, 이 이유로부터도 기저막의 유지는 중요하다고 생각된다.

또한, 상기한 기저막의 구성 성분에 추가로, 진피중에 많이 존재하는 I형 및 III형 콜라겐(각각 약 80%, 약 15%)은, 가령에 따라 진피중의 절대량이 감소하기 때문에, 이들의 변화가 진피의 탄력성 및 당김의 감소, 주름, 또는 진피 위축과 관계되어 있을 가능성이 높다고 생각되고 있다. III형 콜라겐에 착안하면, 태아로부터 유아 조직은 성인 조직에 비해 III형 콜라겐의 비율이 높은 것이나, 주름이 눈에 띄는 엘러스 단로스 증후군 IV형에서는 조직중에 III형 콜라겐이 존재하지 않기 때문에, 정상적으로 부드러운 피부를 구축할 때에 중요한 성분일 가능성이 높다고 생각되고 있다.

여기서, 진피중의 I형 및 III형 콜라겐은 선유아 세포에 의해 합성된다. 이 선유아 세포를 콜라겐 겔 내에서 배양하면, 콜라겐 겔은 수축한다. 수축한 콜라겐 겔의 선유 밀도는 진피에서의 선유 밀도에 가까운 값이 된다. 이것은, 선유아 세포가 콜라겐 선유를 끌어 당기기 때문에 일어나는 현상이다. 실제 피부중에 있어서도, 선유아 세포가 충분히 콜라겐 선유를 끌어당김으로써 피부의 당김이 유지되고 있다고 생각된다. 이와 같이, 항주름, 피부의 처짐, 당김의 개선 등, 피부의 항상성 유지를 위해서는 기저막에 추가로, 진피의 유지도 중요하다.

지금까지, 피부의 항상성 유지의 관점으로부터, 기저막의 주요 성분인 라미닌 5의 생산능을 증강하는 것을 목적으로 하는 대두 유래의 조제물이나 리소포스파티딜콜린, 리소포스파티드산 및 보코니아(Bacconia)속, 프소포카퍼스(Psophocarpus)속, 카시아(Cassia)속 및 엘리스레어(Erythraea)속에 속하는 식물의 추출물 등이 제안되어 있다(일본 특허 공개 평11-343226호, 일본 특허 공개 제2000-226308호, 및 일본 특허 공개 제2003-313135호 공보). 마찬가지로, III형, IV 형, VII형 콜라겐의 생산 촉진제에 대해서는, 콩, 너도밤나무의 싹, 갈근, 송악, 너도밤나무과 너도밤나무속 식물의 추출물 등, 여러 가지 식물 유래의 추출물이 알려져 있다(일본 특허 공개 제2001-39849호, 일본 특허 공개 제2004-18471호, 일본 특허 공개 제2004-75661호 등). 그러나 기저막의 중요한 구성 성분인 라미닌 5, IV형, VII형 콜라겐, 그리고 진피의 중요한 구성 성분인 III형 콜라겐의 생산을 모두 촉진시키는 물질은, 갈근 추출물 이외는 알려져 있지 않다(일본 특허 공개 제2001-39849호, 일본 특허 공개 제2003-137767호 및 일본 특허 공개 제2004-18471호).

본 발명은, 신규 항주름제의 제공에 관한 것이다.

본원 발명자는, 특히 진피 주름에 대한 항주름 작용을 얻는 목적으로, 여러 가지의 식물 추출 물질에 대해서 예의 검토한 결과, 물냉이, 주니퍼, 백출, 머위가, 기저막의 중요한 구성 요소인 라미닌 5, IV형 콜라겐, VII형 콜라겐, 그리고 진피의 중요한 구성 성분인 III형 콜라겐의 생산을 현저히 촉진시키고, 또한 피부에 적용한 경우에, 피부 노화 방지 작용, 특히 항주름 작용 및 피부의 처짐, 당김 개선 작용을 발휘하는 것이 명백해졌다. 동시에, 상기 추출물 중, 주니퍼, 백출, 머위가 항염증 작용, 창상 치유 작용을 갖는 것에 대해서도 발견하였다. 지금까지, 상기 식물 추출물에 관해서는, 라미닌 5를 비롯한 세포외 매트릭스의 생산 촉진 작용을 비롯하여, 피부 노화 중에서도 항주름 작용에 대해서는 보고되어 있지 않았다.

물냉이(학명 Nasturtium officinalis R. Brown): 십자화과의 일종인 물냉이의 추출물은, 혈행 촉진 작용(일본 특허 공개 2001-181120), 혈관 내피 세포 증식 인자 생산 촉진에 의한 육모제로서의 이용(일본 특허 공개 2003-313113)이 알려져 있다. 그러나 피부 노화에 관한 작용은 알려져 있지 않다.

주니퍼(학명 Juniperus oxycedrus Linne): 편백과의 일종인 주니퍼의 추출물은, 피부 거칠음 등의 피부 배리어 기능 개선 효과(일본 특허 공개 2001-288066)가 알려져 있지만, 피부 노화, 항주름, 피부의 처짐, 당김 개선에 관한 작용은 알려져 있지 않다. 또한, 여기서 말하는 피부 배리어 기능 개선 효과란, 각질층에 대한 것으로서, 각질층 이하의 진피 등에 대한 효과는 전혀 언급되어 있지 않다.

백출(학명 Atractylodes macrocephale): 국화과의 일종인 백출의 추출물은, 피부 거칠음 방지 작용(일본 특허 공개 2003-194809), 백발 방지 작용(일본 특허 공개 2004-161639)이 알려져 있지만, 피부 노화, 항주름, 피부의 처짐, 당김 개선에 관한 작용은 알려져 있지 않는다.

머위(학명 Tussilago farfara Linne): 국화과의 일종인 머위의 추출물은, 광독성 억제 효과, 예컨대 대기 오염 물질에의 UVA 조사에 의해 생성된 산물에 의한 노화를 방지하는 작용(일본 특허 공개 2002-12548)이 알려져 있지만, 주로 UVB 조사에 의해 야기되는 주름에 대한 예방/개선 작용 및 피부의 처짐, 당김 개선 작용은 알려져 있지 않는다.

따라서, 본 발명은 물냉이, 주니퍼, 백출 및 머위의 추출물 중 어느 하나 이상을 유효 성분으로서 포함하여 이루어지는 항주름제, 기저막 안정화제, 세포외 매트릭스 생산 촉진제 및 피부의 처짐, 당김 개선제, 및 상기 추출물을 사용하는 인공 피부의 제조 방법, 주름의 경감 및 피부의 처짐, 당김 개선을 위한 미용 방법을 제공한다.

본 발명에 따른 항주름제는, 물냉이, 주니퍼, 백출, 머위의 추출물을 포함함으로써, 기저막의 중요한 구성 성분인 라미닌 5, IV형 콜라겐, VII형 콜라겐, 그리고 진피의 중요한 구성 성분인 III형 콜라겐 등의 세포외 매트릭스의 생산을 촉진한다. 또한, 세포외 매트릭스의 생산이 촉진됨으로써, 기저막 및 진피가 수복되고, 창상 치유가 초래되며, 경피 수분 증산량의 감소, 피부 점탄성 증가 등, 피부 상태의 정상화, 또는 주름의 수 및 길이의 감소라고 하는 항주름 작용이 달성된다. 정확한 기구는 분명하지 않지만, 이들의 작용은 모두, 라미닌 등의 생산이 촉진된 결과, 기저막 및 진피가 수복되고, 그리고 안정화된 것에 기인하는 것으로 생각된다. 따라서 상기 추출물은 또한, 기저막 세포의 융해, 기저막의 표피로부터의 박리, VII형 콜라겐의 이상 등, 기저막의 불안정화를 원인으로 하는 표피 수포증에 대해서도, 그 증상의 개선에 기여할 수 있다. 또한, 본원 발명의 효과에 관해서 특히 주목되어야 하는 것은, 상기 추출물 모두가 라미닌 5, III형, IV형 콜라겐 및 VII형 콜라겐을 단독으로가 아닌, 이들 모두를 생산 촉진시키는 것이다.

항주름제

본 발명의 항주름제는, 물냉이, 주니퍼, 백출 및/또는 머위의 추출물을 유효 성분으로 하는 것이다. 본 명세서에 있어서 사용하는 「항주름」이란, 후술하는 「피부 노화 방지 작용」 중, 피부의 주름을 방지 및/또는 개선하는 작용, 특히 피부 주름의 수 및 길이의 경감을 의미하지만, 「피부 노화 방지 작용」과 같은 의미로 사용되는 경우도 있다. 또한, 본 발명에 의해 개선/방지되는 「주름」은, 특히 기저막의 변화에 의해서 진피층이 함몰하여 생기는 홈의 깊은 진피 주름을 의미한다. 이들 작용은, 예컨대 시각 판정에 의한 각질의 개선, 피부의 수분량 증가, 피부 탄력성 증가 등의 요인을 고려하여 판단되는 것이다. 본 발명에 있어서 달성되는 상기 작용은 물냉이, 주니퍼, 백출 및 머위 유래 추출물이 라미닌 5, III형, IV형 또는 VII형 콜라겐 등의 세포외 매트릭스의 생산량을 증대시킴으로써, 기저막 및 진피가 안정화되고, 피부의 항상성이 개선되는 것에 의하는 것으로 생각되지만, 정확한 기구는 분명하지 않다. 따라서, 본 발명의 항주름제에 의해서 얻어지는 항주름 작용은, 세포외 매트릭스 생산량의 증대에 기인하는 것에 한정되지 않는 것은 분명하다. 또한, 머위 추출물에 대해서는, UVA 조사에 의해서 생기는 피부 노화 또는 주름 생성의 예방/개선 작용은 알려져 있지만(일본 특허 공개 2002-12548), 주로 UVB에 의해 야기되는 주름에 대한 예방/개선 작용은 알려져 있지 않다.

본 명세서에 있어서 사용하는 「피부 노화 방지 작용」이란, 가령이나 광노화에 의한 기저막의 구조 변화의 축적에 따르는 피부의 기능 저하, 구체적으로는 피부의 주름, 처짐, 경화 등을 방지, 개선하고, 탄력이 있는 건강한 피부의 상태를 유지하는 것을 의미한다.

기저막 안정화제

본 발명은, 물냉이, 주니퍼, 백출 및 머위 유래 추출물 중 어느 하나 이상을 유효 성분으로 하는 기저막 안정화제를 제공한다. 여기서, 본 명세서에 있어서 사 용하는 「기저막 안정화」란, 표피와 진피 사이에 존재한는 피부의 항상성 유지에 깊게 관여하는 기저막에 있어서, 그 골격이 안정화되고, 그리고 더 나아가서는 수복되는 것을 의미하는 것이다. 더 구체적으로는, 기저막을 구성하는 중요한 성분, 특히 세포외 매트릭스의 생산이 촉진됨으로써 생기는 기저막에의 작용 전반을 의미하는 것이 의도이다.

세포외 매트릭스 생산 촉진제

본 발명은 또한, 상기 추출물 중 어느 하나 이상을 유효 성분으로 하는 세포외 매트릭스 생산 촉진제를 제공한다. 여기서, 본 명세서에 있어서 사용하는 「세포외 매트릭스」란, 당업계에서 일반적으로 인식되어 있는 것을 의미하고, 특히 라미닌 5, IV형 또는 VII형 콜라겐을 비롯한 기저막에 있어서 중요한 구성 성분, 그리고 III형 콜라겐 등의 진피의 중요한 구성 성분을 의미한다.

피부의 처짐, 당김 개선제

본 발명은 또한, 상기 추출물 중 어느 하나 이상을 유효 성분으로 하는 피부의 처짐, 당김 개선제를 제공한다. 여기서, 본 명세서에 있어서 사용하는 「피부의 처짐, 당김 개선」이란, 건조, 자외선 등의 외계의 자극, 노화에 의한 처짐, 당김을 피부의 탄력성의 향상이나 조임에 의해 개선하는 것을 의미하고, 예컨대 in vitro에서는 콜라겐 겔의 수축 촉진 작용 등에 의해 평가할 수 있으며, in vivo에서는 피부 점탄성 등에 의해 평가할 수 있다.

또한, 상기 추출물은, 항주름 작용, 기저막 안정화 작용, 세포외 매트릭스 생산 촉진 작용, 피부의 처짐, 당김 개선 작용 및 콜라겐 겔 수축 촉진 작용에 추 가로, 항염증 작용 및 창상 치유 촉진 작용도 갖는다. 그러나, 전술한 바와 같이 이들 작용의 정확한 기구는 분명하지 않다. 본 명세서에 있어서 사용하는 「항염증 작용」 및 「창상 치유 촉진 작용」은, 본 발명의 식물 추출물을 각각 염증 부위 및 창상 부위에 적용한 경우에, 비적용 부위와 비교하여 상대적으로 결정되는 것이다. 본 발명에 의해 얻어지는 창상 치유 촉진 작용은, 세포외 매트릭스의 생산이 촉진된 결과, 기저막이 안정화되고, 그리고 수복된 것에 의한 것이라고 생각된다. 그러나, 이 작용은 반드시 세포외 매트릭스 생산의 증대에 기인하는 것에 한정되지 않는 것은 명백하다. 또한, 본 발명에 있어서 사용하는 추출물 중에서, 물냉이 추출물에 대해서는, 이미 창상 치유 효과가 보고되어 있다(일본 특허 공개 2003-313134).

상기 항염증 작용 및 창상 치유 촉진 작용 외, 본 발명에서 사용하는 식물 추출물은 표피 수포증 개선 작용도 갖는다. 여기서, 본 명세서에 있어서 사용하는 「표피 수포증 개선 작용」이란, 단순형 표피 수포증, 접합부형 표피 수포증 및 영양 장해형 표피 수포증으로 분류되는 일반적인 표피 수포증의 완화, 치유뿐만 아니라, 이 증상의 예방을 의도한다. 이 작용은, 기저막의 중요한 구성 성분인 콜라겐 등의 생산이 촉진되고, 기저막의 구조가 안정화됨으로써 초래된다.

본 발명에 있어서 사용되는 식물 추출물은, 물냉이, 주니퍼, 백출 및 머위에 유래되는 것이다. 초본 식물인 물냉이, 주니퍼, 백출 및 머위에 대해서는 각 식물의 뿌리, 잎, 줄기, 꽃 등으로부터, 목본 식물인 주니퍼에 대해서는 그 뿌리, 싹, 수피, 과실, 잎, 꽃 등으로부터 추출된다.

추출 방법은 용매 추출로 행하여도 좋고, 용매 추출의 경우에는, 식물 재료를 필요에 따라 건조시키며, 추가로 필요에 따라서 세단 또는 분쇄한 후, 수성 추출제, 예컨대 냉수, 온수, 및 비점 또는 그 보다 저온의 열수, 또는 유기 용매, 예컨대 메탄올, 에탄올, 1, 3-부탄디올, 에테르 등을 상온으로 또는 가열하여 이용함으로써 추출된다. 그러나, 추출 방법은 용매 추출에 한정되지 않고, 당업계에서 알려져 있는 상용 방법에 의해서도 좋다. 상기 추출물의 형태에는, 추출액 자체뿐만 아니라, 상용 방법에 의해 적절하게 희석 또는 농축, 또는 건조시킨 것도 포함될 수 있다.

본 발명의 항주름제, 기저막 안정화제, 세포외 매트릭스 생산 촉진제 또는 피부의 처짐, 당김 개선제는, 각 추출물을 단독으로, 또는 복수의 추출물을 조합시켜 포함하여도 좋다. 또 다른 형태로서, 본 발명의 항주름제, 기저막 안정화제, 세포외 매트릭스 생산 촉진제 또는 피부의 처짐, 당김 개선제는, 세린 프로테아제 저해제를 더 포함하여 이루어지는 경우도 있다. 후술의 실시예에 기재한 바와 같이, 본 발명의 항주름제, 기저막 안정화제, 세포외 매트릭스 생산 촉진제 또는 피부의 처짐, 당김 개선제는 세린 프로테아제 저해제를 포함하는 것에 의해, 콜라겐의 분해를 저해하여 기저막 및 진피를 더 양호한 상태로 유지한다. 이 결과, 본 발명에 의해 얻어지는 항주름 작용, 피부의 처짐, 당김 개선 작용, 창상 치유 촉진 작용, 표피 수포증 개선 작용 등이 더 양호한 것이 되는 것이 예상된다. 이 세린 프로테아제 저해제로서는, 한정하지 않지만, 박하, 홀꽃노루발, 고추나물, 어성초, 아르니카, 모과, 산사나무, 꼬리조팝나무, 서양 장미, 들장미, 포도, 모란, 홉, 나무딸 기, 로만캐모마일의 추출물을 들 수 있고, 이들은 전술의 물냉이 등의 추출 방법과 마찬가지로 용매 추출 등에 의해 추출될 수 있다. 또한, 상기 세린 프로테아제 저해제에는 아프로티닌, 트라넥사믹산, ε-아미노카프론산 등도 포함된다.

본 발명에서 사용하는 상기 추출물은, 피부 노화 방지 작용, 특히 항주름 작용 및 피부의 처짐, 당김 개선 작용을 달성하는 데 필요한 양, 또는 기저막 및 진피의 안정화 또는 라미닌 5, III형, IV형 또는 VII형 콜라겐 등의 세포외 매트릭스의 생산량 증가를 달성하는 데 필요한 양이 배합된다. 또한 각질층 또는 경피의 수분량 증가(피부 거칠음의 개선), 피부 탄력성 증가, 피부 조직의 개선 등의 목적에 따라서 필요한 양이 배합되고, 그리고 이 배합량은 배합되는 제형 등의 여러 가지의 요인에 의해서도 변동한다. 한정하지 않지만, 상기 추출물은, 항주름제, 기저막 안정화, 세포외 매트릭스 생산 촉진제 또는 피부의 처짐, 당김 개선제 전체의 질량에 대하여 0.0001 내지 10 질량%의 농도로, 바람직하게는 0.001 내지 1 질량%의 농도로 배합될 수 있다.

본 발명의 항주름제, 기저막 안정화제, 세포외 매트릭스 생산 촉진제 또는 피부의 처짐, 당김 개선제에는, 상기 추출물 외, 항주름 작용 등을 손상하지 않는 범위 내에서, 통상 화장품이나 의약품에 배합 가능한 성분, 예컨대 액체 유지, 고체 유지, 납, 탄화수소, 고급 지방산, 고급 알코올, 에스테르류, 실리콘류, 음이온 계면활성제, 양이온 계면활성제, 양성 계면활성제, 비이온성 계면활성제, 보습제, 수용성 고분자 화합물, 증점제, 피막제, 자외선 흡수제, 금속 이온 봉쇄제, 저급 알코올, 다가 알코올, 당류, 아미노산류, 유기아민류, pH 조정제, 피부 영양제, 비 타민류, 산화방지제, 향료, 분말, 색재, 물 등을 필요에 따라서 적절하게 배합할 수 있다. 또한, L-아스코르빈산 및 그의 염, L-아스코르빈산인산에스테르, L-아스코르빈산황산에스테르 등의 L-아스코르빈산의 에스테르 유도체 및 그의 염, L-아스코르빈산 글루코시드 등의 L-아스코르빈산의 배당체 및 그의 염, 4-메톡시살리실산 등의 알콕시살리실산 및 그의 염, 히드로퀴논 β-D-글루코오스, 히드로퀴논 α-D-글루코오스 등의 히드로퀴논의 배당체 및 그의 염, 트라넥사믹산, 트라넥사믹산메틸아미드 염산염 등의 트라넥사믹산 유도체, 4-n-부틸레조르시놀 등의 레조르시놀 유도체, 코직산, 엘라그산, 리놀레산, 캐모마일 추출물, 레티노산, 레티놀, 레티놀초산, 레티놀 팔미테이트, 글리실리진산 및 그 유도체 등, 리소포스파티딜콜린이나 리소포스파티드산, 대두 조제물 등의 라미닌 5 생산 촉진제, 글루코오스, 과당, 만노오스, 자당, 트레할로스 등의 당류, 니코틴산벤질에스테르, 니코틴산 β-부톡시에틸에스테르, 캅사이신, 진저론, 칸타리스 팅크, 이크타몰, 카페인, 탄닌산, α-보르네올, 니코틴산토코페롤, 이노시톨헥사니코티네이트, 시클란델레이트, 신나리진, 톨라졸린, 아세틸콜린, 베라파밀, 세파란틴, γ-오리자놀 등의 혈행 촉진제, 유황, 티안톨 등의 항지루제, 다양한 목적으로부터, 히노키티올, 아이리스 추출물, 아센야크 추출물, 알란토인, 알로에 추출물, 홀꽃노루발 추출물, 백리향 추출물, 심황 추출물, 황백 추출물, 황련 추출물, 고추나물 추출물, 오노니스 추출물, 가수분해 카제인, 가수분해 효모 추출액, 갈근 추출물, 크실리톨, 고삼 추출물, 쌀 추출물 가수분해액, 시호 추출물, 사프란 추출물, 산화아연, 날개콩 추출물, 지치 추출물, 작약 추출물, 생강 추출물, 실리카 피복 산화아연, 세이지 추출물, 당아욱 추출물, 천궁 추출물, 센브리 추출물, 진피 추출물, 고추 추출물, 안젤리카 추출물, 복숭아나무 추출물, 티오타우린, 당근 추출물, 마늘 추출물, 범부채 추출물, 하이포타우린, 박달 추출물, 비파나무 추출물, 포도 추출물, 너도밤나무의 싹 추출물, 수세미 추출물, 마조람 추출물, 백합 추출물, 요크이닌 추출물, 로즈메리 추출물, 아르기닌 및 그의 염산염, 세린 및 그의 염산염 등 아미노산 및 그 유도체, 판토텐산칼슘, D-판토테닐알코올, 판토테닐에틸에테르, 아세틸판토테닐에틸에테르 등의 판토텐산류, 에르고칼시페롤, 콜레칼시페롤 등의 비타민 D류, 니코틴산, 니코틴산아미드, 니코틴산벤질 등의 니코틴산류, α-토코페롤, 초산토코페롤, 니코틴산 DL-α-토코페롤, 호박산 DL-α-토코페롤 등의 비타민 E류, 비타민 K, 비타민 P, 비오틴 등의 비타민류, 유비퀴논 등의 보효소 등도 적절하게 배합할 수 있다.

본 발명의 항주름제, 기저막 안정화제, 세포외 매트릭스 생산 촉진제 또는 피부의 처짐, 당김 개선제의 제형은 특별히 한정되는 것이 아니라, 예컨대 용액계, 가용화계, 유화계, 분말분산계, 물-기름 이층계, 물-기름-분말 삼층계, 연고, 겔, 에어졸 등의 임의의 제형을 취할 수 있다. 또한, 사용 형태도 특별히 한정되는 것이 아니라, 예컨대 화장수, 유액, 크림, 엣센스, 젤리, 젤, 연고, 팩, 파운데이션 등의 임의의 형태를 취할 수 있다.

피부 외용제

또한, 본 발명은 상기 추출물을 포함하여 이루어지는 피부 외용제를 제공한다. 여기서, 본 발명의 피부 외용제는, 항주름 작용 및 피부의 처짐, 당김 개선 작용을 제외하는 피부 노화 방지 작용, 항염증 작용, 창상 치유 촉진 작용, 표피 수 포증 개선 작용 등을 목적으로서 사용된다. 그러나, 본 발명의 피부 외용제는 이들의 목적에 한정되지 않고, 상기 추출물의 세포외 매트릭스 생산 촉진 작용에 의해 초래되는 피부의 여러 가지 증상의 개선을 의도한 사용이 생각된다.

본 발명의 피부 외용제에 배합되는 물질은, 항주름제 등에 대해서 전술한 것과 유사하지만, 이것은 당업자에 의해 원하는 목적에 따라서 적절히 그 종류, 양, 농도 등이 결정될 수 있다. 예컨대 항염증 작용, 창상 치유 촉진 작용을 목적으로 하는 경우, 상기 추출물은, 피부 외용제 전체의 질량에 대하여 0.0001 내지 10 질량%의 농도로, 바람직하게는 0.001 내지 1 질량%의 농도로 배합될 수 있다.

항주름제, 기저막 안정화제, 세포외 매트릭스 생산 촉진제 또는 피부의 처짐, 당김 개선제의 제조 방법

다른의 형태에 있어서, 본 발명은 물냉이, 주니퍼, 백출 및 머위 유래 추출물을 수상 또는 유상에 첨가하는 공정을 포함하여 이루어진다, 항주름제, 기저막 안정화제, 세포외 매트릭스 생산 촉진제 또는 피부의 처짐, 당김 개선제의 제조 방법을 제공한다. 이 방법은, 상기 피부 외용제에도 적용 가능하다.

인공 피부의 제조 방법

또한, 본 발명은 물냉이, 주니퍼, 백출 및 머위의 추출물 중 어느 하나 이상을 인공 피부 형성 배지중에 첨가하는 것을 특징으로 하는 인공 피부의 제조 방법을 제공한다.

본 발명에 있어서의 인공 피부의 제조에 이용하는 기초 배지로서는, 인공 피부의 제조에 종래부터 사용되고 있는 임의의 배지를 이용할 수 있고, 이들의 배지 로서는 10%의 소 태아 혈청을 포함하는 둘베코 변성 이글 배지(DMEM); 10%의 소 태아 혈청, 트랜스페린 5 μg/ml, 인슐린 5 μg/ml, tri-요오드티로닌 2 nM, 콜레라톡신 0.1 nM, 히드로 코르티손 0.4 μg/ml를 포함하는 DMEM-Ham' sF12(3:1); 케라티노사이트 증식 배지(KGM)와 10% 소 태아 혈청을 포함하는 DMEM을 1:1로 혼합한 배지, 등을 들 수 있다. 이들 기초 배지에 첨가되는 상기 추출물은, 그 종류에 의해 다르지만, 대개 0.001 질량% 내지 1 질량% 정도이다. 이 추출물 이외에도, 항주름제의 형태에 있어서 이용되는 여러 가지의 물질이 함께 첨가되어도 좋고, 특히 전술한 세린 프로테아제 저해제는, 콜라겐의 분해를 저해하여 기저막을 안정화시키기 때문에 바람직한 것으로 생각된다.

본 발명의 인공 피부의 제조에 있어서는 우선, 철망 위에 사람 선유아 세포를 포함하는 수축 I형 콜라겐 겔을 정치(精置)한다. 사람 선유아 세포를 포함하는 수축 I형 콜라겐 겔은 예컨대 다음과 같이 하여 조제할 수 있다. 선유아 세포 현탁 콜라겐 용액을 빙상에서 제작 후, 페트리 접시 내로써 콜라겐을 겔화시켜 조제한다. 그 후, 페트리 접시 벽면으로부터 겔을 박리하고, 콜라겐 겔을 CO₂ 인큐베이터 내에서 수축시킨다.

다음에, 상기 콜라겐 겔 위에, 표피 세포, 예컨대 사람 정상 표피 케라티노사이트를 배양하고, 표피를 형성한다. 피부 세포의 배양에 의한 표피층의 형성은 다음과 같이 하여 행할 수 있다. 수축 콜라겐 겔을 철망 위에 얹고, 유리링을 이 겔의 위에 더 얹는다. 이 유리링 내에 액이 새지 않도록 사람 포피 유래의 표피 케 라티노사이트 현탁액을 넣는다. CO₂ 인큐베이터 내에서 케라티노사이트를 접착시키고, 링을 떼어낸다. 상기 배지를 표피층의 경계까지 채우고, 표피층을 공기에 노출하면서, 배양을 계속하여 각질층을 형성시킨다.

이 방법에 의하면, 선유아 세포를 포함하는 수축 I형 콜라겐 겔로 이루어지는 진피층과, 표피층 사이에 충분히 기저막 성분이 침착한 천연 피부에 가까운 인공 피부를 얻을 수 있다. 본 발명에서 사용하는 상기 추출물은, 표피 세포의 파종 후 수일째의 배지 교환 때에 신규 배지중에 함유시킬 뿐만 아니라, 이 단계에 한정되지 않고, 필요에 따라 적절하게 첨가할 수 있다.

주름 경감 방법 및 피부의 처짐, 당김 개선방법

다른 형태에 있어서, 본 발명은 물냉이, 주니퍼, 백출 및 머위의 추출물 중 어느 하나 이상을 피부에 적용함으로써 주름을 경감하고, 피부의 처짐, 당김을 개선하는 것을 특징으로 하는 미용 방법을 제공한다. 또한, 이 방법은 주름의 경감, 피부의 처짐, 당김 개선뿐만 아니라, 전술한 바와 같이 세포외 매트릭스의 생산 촉진, 나아가서는 기저막 및 진피의 안정화를 요구하는 피부의 여러 가지 증상, 예컨대 표피 수포증을 개선하기 위한 사용이 의도된다. 이 방법에 있어서, 상기 추출물이 적용되는 대상자는 대체로 포유류이며, 특히 사람에 대한 적용을 생각할 수 있다.

실시예

다음에, 본원 발명을 이하의 실시예에 의해 더 구체적으로 설명한다.

(실험 방법-1)

라미닌 5 생산 촉진 효과에 관한 시험 방법

(1) 표피 각질 세포의 배양

표피 각질 세포는 사람 포피로부터 단리하고, 칼슘 농도가 낮은 표피 세포 증식 배지(KGM)에서 배양하였다. 이 배지에는 소 뇌하수체 추출액과 EGF를 첨가하였다. 세포는 제4대까지 KGM에서 배양 후, 트립신-EDTA 처리에 의해 접착 세포를 부유시키고, 여과에 의해서 세포의 어그리게이트를 제외하며, 균일한 세포 현탁액을 얻었다. 원심 분리에 의해서 세포를 모으고, DMEM-F12(2:1)-0.1% BSA에 8×10⁴/ml가 되도록 재현탁시켰다. 이 세포 현탁액을 0.5 ml, 2배 농도의 약제를 포함하는 동 배지 0.5 ml에 가하였다. 배양은 24 구멍 플레이트를 이용하여, 37℃로써 24 시간 행하였다. 배양 종료시에, 배양 상청을 에펜도르프 튜브에 옮기고, 10000 rpm으로 5분간 원심 분리하며, 상청을 새로운 튜브에 옮기고, 라미닌 5의 측정일까지 -20℃에서 보존하였다. 또한 세포 내와 배양 플라스틱상에 결합한 라미닌 5를 가용화하기 위해, 각종 계면활성제를 포함하는 트리스 염산 완충액(pH 7.4)을 각 구멍에 첨가하고, 밤새 -20℃에서 보존하였다. 다음날 초음파 처리를 행하고, 재차 동결하였다. 다음날, 재차 용해 후, 10000 rpm으로 5 분간 원심 분리하고, 상청을 튜브에 옮겨 라미닌 5의 측정일까지 -20℃에서 보존하였다.

(2) 샌드위치 ELISA법에 의한 라미닌 5의 측정

배양상청, 세포층에 존재하는 라미닌 5는 샌드위치 ELISA법으로써 측정하였 다. 96 구멍 ELISA 플레이트의 고체층에 라미닌 5의 라미닌α3쇄에 대한 모노클로널 항체, BM165를 결합시켰다. 라미닌 5를 샌드위치하여 측정하기 위해서, 다른 1종의 항체로서 라미닌β3쇄에 대한 모노클로널 항체인 6F12를 미리 비오틴화(b-6F 12)하여 이용하였다. 본 방법으로는, 기능을 발휘할 수 있는 헤테로트리머체(α3β3γ2)만을 측정하고, 헤테로다이머(β3γ2)를 검출하지 않는다. b-6F12를 포함하는 3% 젤라틴·인산 완충 용액을 미리 넣어 둔 각 구멍에 시료를 첨가한다. 시료의 구멍 내에서의 최종 희석율은 배양액이 1/4, 세포층이 1/10으로 하였다. 항원 항체 반응은 37℃에서 2 시간 행하고, 플레이트를 세정한 후 아비딘 HRP(호스래디쉬페록시다아제) 용액을 첨가하며, 30분 내지 1시간 더 반응시켰다. 세정 후, HRP의 기질인 ABTS 용액을 첨가하고, 405 nm의 흡광도를 ELISA 플레이트 리더로써 측정하였다. 검량선은 0 내지 40 ng/ml의 범위에서 작성하였다.

라미닌 5의 생산량은, 배지중에 유리된 양과 세포층에 남은 양의 총합을 산출하고, 식물 추출물을 첨가하지 않은 시료(컨트롤)에 대한 상대적인 값으로 나타내었다. 이하의 표 1에, 각 추출물 마다의 라미닌 5 생산량의 상승율을 요약한다.

(결과-1)

시료	농도 (%)	무첨가 시료와 대조한 상대적인 라미닌 5의 생산량 (%)
물냉이(일본산)	0.001	125
	0.01	135
주니퍼	0.001	117
	0.01	120
백출	0.001	115
	0.01	129
머위 (일본산)	0.001	107
	0.01	110

(실험 방법-2)

IV형 콜라겐, VII형 콜라겐 생산 촉진 효과에 관한 시험 방법

(1) 사람 선유아 세포의 배양

10% FBS 함유 DMEM 배지로 배양한 사람 선유아 세포를 24 구멍 플레이트에 파종하고, 세포가 접착한 후, 0.25% FBS 및 250 μM 아스코르빈산글루코시드 함유 DMEM 배지로 치환하며, 약제를 첨가하였다. 하루 후, 배지상청을 회수, 원심 분리하고, 얻어진 상청중의 IV형, VII형 콜라겐 측정 및, 세포에 대해서 DNA량을 측정하며, 세포수의 지표로 하였다.

(2) DNA 정량

DNA량의 측정은 Hoechst사의 H33342를 이용한 형광 측정법으로 실시하였다.

(3) 샌드위치 ELISA법에 의한 IV형, VII형 콜라겐의 측정

IV형, VII형 콜라겐은, 샌드위치 ELISA법에 의해서 측정하였다. 본 실시예에 있어서 사용한 항체는 이하와 같다.

·IV형 콜라겐 특이적 항체; 모노클로널 항체 JK-199 및 폴리클로널 항체 MO-S-CLIV

·VII형 콜라겐 특이적 항체; 모노클로널 항체 NP-185 및 모노클로널 항체 NP-32

약제를 첨가하지 않는 시료(컨트롤)의 DNA당 IV형, VII형 콜라겐량을 100으로 했을 때의, 약제 첨가 시료의 DNA당 IV형, VII형 콜라겐량을 IV형, VII형 콜라겐 생산 촉진율로 하였다. 이하의 표 2에, 이 콜라겐의 생산 촉진율을 요약한다.

(결과-2)

		0.005%	0.05%	0.5%
물냉이	IV 형	144	176	159
	VII 형	109	127	132
주니퍼	IV 형	107	114	120
	VII 형	101	105	107
백출	IV 형	124	135	140
	VII 형	107	110	114
머위	IV 형	113	117	130
	VII 형	107	125	129

(실험 방법-3)

III형 콜라겐 생산 촉진 효과에 관한 시험 방법

(1) 사람 피부 선유아 세포의 배양

10% FBS 함유 DMEM 배지로 배양한 사람 피부 선유아 세포를 24 구멍 플레이트에 파종하고, 세포가 접착한 후, 0.25% FBS 및 250 μM 아스코르빈산인산마그네슘 함유 DMEM 배지로 치환하며, 약제를 첨가하였다. 3일 후, 배지상청을 회수, 원심 분리하였다. 얻어진 상청중의 III형 콜라겐 및 세포의 DNA량을 측정하고, 세포수의 지표로 하였다.

(2) DNA 정량

DNA량의 측정은 Hoechst사의 H 33342를 이용한 형광 측정법으로 실시하였다.

(3) III형 콜라겐의 측정

세포의 III형 콜라겐 생합성능은, 배양상청중에 분비되는 III형 콜라겐의 말단 펩티드(Procollagen type III-peptide: PIIIP로 생략함.)량을 측정함으로써 평가하였다. 구체적으로는, 「리아그노스트 PIIIP(PIIIP) 측정 키트(시아이디스 다이아그노스틱 주식회사)」를 이용하여 측정하였다. III형 생산량은, DNA량으로 나누고, 식물 추출물을 첨가하지 않는 시료(콘트롤)에 대한 상대적인 값을 갖고 나타내었다.(표 3을 참조할 것).

(결과-3)

시료	농도 (%)	무첨가 시료와 대조한 상대적 DNA 당 III형 콜라겐 생산량 (%)
물냉이 추출물	0.001	117
	0.01	124

이상의 결과로부터, 물냉이 추출물에는 유의한 III형 콜라겐의 생산 촉진 작용이 발견되었다.

(실험 방법-4)

사람 피부 선유아 세포에 의한 I형 콜라겐 겔 수축능에 대한 작용의 평가 방법

선유아 세포(5x10⁴ cell/ml) 현탁 콜라겐 용액(고켄 주식회사제 I형 콜라겐을 사용)을 빙상에서 조제 후, 37℃에서 콜라겐을 겔화하였다. 그 후, 피검물질(컨트롤로서 DMSO를 사용) 및 0.25% FBS 함유 DMEM 배지를 첨가하고, 샤알레 벽면으로부터 겔을 박리하며, 콜라겐 수축을 행하였다(각 군 n=3). 1, 2일 후, 콜라겐 겔의 직경을 3방면으로부터 측정하고, 평균값을 구하였다. 수축 전의 직경을 수축률 0%로 하고, 피검물 첨가 후의 수축률을 구하였다(표 4를 참조할 것).

(결과-4)

컨트롤 (DMSO)	1일후	12%
	2일후	21%
물냉이 추출물 (0.001%)	1일후	18%
	2일후	27%
물냉이 추출물 (0,003%)	1일후	25%
	2일후	34%

이상의 결과로부터, 물냉이 추출물에는 유의한 콜라겐 겔 수축 촉진 작용이 발견되었다.

(실험 방법-5)

인공 피부의 제조 방법

콜라겐 겔은, 사람 진피 유래의 선유아 세포(1×10⁵cells/ml) 현탁 콜라겐 용액을 빙상에서 제작 후, 60 mm의 페트리 접시 내에서 37℃에서 콜라겐을 겔화하였다. 그 후 샤알레 벽면으로부터 겔을 박리하고, 콜라겐 겔을 금속 위에 얹으며, 유리링(내경 12 mm)을 겔 위에 추가로 얹었다. 이 유리링 내에 액이 새지 않도록 사람 포피 유래 표피 케라티노사이트 현탁액을 포함하는 KGM-DMEM(1:1) 혼합 배지를 첨가하였다. 밤새 인큐베이트하여 표피 세포를 접착시키고, 다음날 링을 떼었다. 상기 배지를 표피층의 경계까지 채우고, 표피층을 공기에 노출시키면서, 각질층 형성을 나타내는 중층화한 표피를 갖는 피부 모델을 제작하였다.

표피 세포를 파종 후 4일째부터, (1) 약제 무첨가, (2) 물냉이 추출물 0.3%, (3) 물냉이 추출물 0.3%+박하 추출물 0.5%, (4) 주니퍼 오일 0.3%, (5) 주니퍼 오일 0.3%+홀꽃노루발 추출물 0.5%, (6) 백출 추출물 0.3%, (7) 백출 추출물 0.3%+고추나물 추출물 0.5%, (8) 머위 추출물 0.3%, (9) 머위 추출물 0.3%+어성초 추출물 0.5%를 포함하는 배지로 바꾸고, 그 후 2 내지 3일 간격으로 동종·동농도의 약제를 함유하는 배지와 교환하여 2 주간 더 배양하였다.

형성된 인공 피부는, 헤마톡실린-에오딘 염색, 및 면역 염색(항IV형 콜라겐 항체 및 항VII형 콜라겐 항체)에 의해 염색하였다. IV형 및 VII형 콜라겐의 염색도를 낮은 쪽부터 높은 쪽 순으로 1 내지 5의 5 단계로 스코어화하였다. 이하의 표 5에 콜라겐의 염색도의 스코어를 요약한다.

(결과-5)

	IV형 콜라겐의 염색도	VII형 콜라겐의 염색도
(1)	2	1
(2)	5	4
(3)	5	5
(4)	3	3
(5)	4	5
(6)	4	3
(7)	5	5
(8)	3	3
(9)	4	4

상기한 바와 같이, 대조(1)에 있어서, IV형 콜라겐은 약하게 염색되었지만, VII형 콜라겐은 거의 관찰되지 않았다. 이에 대하여, 라미닌 5·IV형 콜라겐·VII형 콜라겐 생산 촉진 작용을 갖는 물냉이, 주니퍼, 백출, 머위는 모두 IV형·VII형 콜라겐의 염색성을 같이 높이는 것이 인공 피부에 있어서 확인되었다. 또한 세린 프로테아제 저해제의 박하, 홀꽃노루발, 고추나물, 어성초의 각 추출물은 이들의 염색성을 더 높이는 것이 명백해졌다.

(실험 방법-6)

30-45세의 건강한 남성 3명의 피부에 물냉이, 주니퍼, 백출, 머위의 각 추출물을 각각 도포했을 때의 각질층 수분량을 측정하고, 대조 부위와 비교하였다. 대조에는 이온 교환수를 이용하였다. 각각의 검체를 전완 내측 2.5 cm 사방의 정사각형 내에 도포하고, 도포 직전, 1 시간 후의 각질층 수분량을 Corneometer CM825C(Courage+Khazaka사제)를 이용하여 측정하고 수분량 증가율을 구하였다. 이하의 표 6에, 각 식물 추출물을 도포한 경우의 각질층 수분량의 증가율을 요약한다.

(결과-6)

피검물질 도포 1시간 후의 각질층 수분량의 증가율

대조부위	약제 도포 부위
	물냉이	주니퍼	백출	머위
1%	40%	35%	38%	30%

상기로부터, 피검물질 도포에 의해서, 각질층중 수분량이 상승하고, 피부 개선 효과가 있는 것이 나타났다.

(실험 방법-7)

40 내지 55세의 건강한 여성 패널에 의해 하기 처방의 크림의 연용 시험을 행하였다. 패널 48명을 4군으로 나누고, 각 군의 안면의 반에 크림(본 발명품 1-4)을, 나머지 반에는 비교품 1을 각각 4 주간, 하루 2회씩 매일 도포하였다. 각질층 수분량을 Corneometer CM825C, 경피 수분 증발 비산량을 Tewameter TM 210, 피부의 점탄성을 cutemeter(모두 courage+Khazaka사제)로써 측정하고, 각각 수분량의 증가도, 피부 거칠음 개선도, 당김의 개선도의 지표로 하였다. cutemeter에 관해서는, 통상법에 의해 2초간 흡인과 1초간 개방을 3회 반복하고, 1회째와 3회째의 피부의 신장(Uf값, maximal amplitude)과 점성/탄성 비율(Uv/Ue값)을 연용 전과 비교하였다. 또한 실리콘 복제(Silflo, FLEXICO DEVELOPMENTS사제)로 눈가의 레플리카를 채취하고, 주름의 수, 길이를 측정하여 연용 전후의 값을 비교하였다. 또한 테이프에 의해 채취한 각질층의 제거 상태로부터, 피부 조직의 정리 상태와, 각질층의 균일한 제거 상태를 전문 패널이 시각 판정하였다.

결과(연용 전과의 비교값)를 이하의 표 7 내지 11에 나타낸다. 또한 괄호 내의 수치는 Paired Student t-test에 의한 검정값을 나타낸다.

(결과-7)

레플리카에 의한 해석 결과

	본 발명품 1회 사용군	본 발명품 2회 사용군	본 발명품 3회 사용군	본 발명품 4회 사용군
주름 수	-9% (p=0.003)	-6% (p=0.004)	-7% (p=0.009)	-6% (p=0.003)
주름 길이	-12% (p=0.010)	-10% (p=0.009)	-11% (p=0.015)	-9% (p=0.008)

이상의 결과로부터, 본 발명품의 항주름 작용이 통계학적으로 유의하게 확인되었다.

각질 수분량
본 발명품 1회 사용군	본 발명품 2회 사용군	본 발명품 3회 사용군	본 발명품 4회 사용군
+22% (p=0.0001)	+24% (p=0.0001)	+20% (p=0.0001)	+15% (p=0.0008)

이상의 결과로부터, 본 발명품의 보습 효과가 통계학적으로 유의하게 확인되었다.

경피의 수분 증산(蒸散)량
본 발명품 1회 사용군	본 발명품 2회 사용군	본 발명품 3회 사용군	본 발명품 4회 사용군
-40% (p=0.0001)	-34% (p=0.0009)	-33% (p=0.0009)	-27% (p=0.0012)

이상의 결과로부터, 본 발명품의 피부 거칠음 개선 효과가 통계학적으로 유의하게 확인되었다.

피부 점탄성
	본 발명품 1회 사용군	본 발명품 2회 사용군	본 발명품 3회 사용군	본 발명품 4회 사용군
Uf (1회)	-20% (p=0.0052)	-21% (p=0.0049)	-19% (p=0.0073)	-23% (p=0.0051)
Uf (3회)	-21% (p=0.0007)	-29% (p=0.0033)	-25% (p=0.0019)	-24% (p=0.0088)
Uv/Ve	-25% (p=0.0030)	-22% (p=0.0002)	-30% (p=0.0007)	-18% (p=0.0001)

이상의 결과로부터, 본 발명품의 피부 탄력성 증가가 유의하게 확인되었다.

조직
	본 발명품 1회 사용군	본 발명품 2회 사용군	본 발명품 3회 사용군	본 발명품 4회 사용군
조직의 정리상태	+23% (p=0.0021)	+20% (p=0.0088)	+33% (p=0.0071)	+18% (p=0.0009)
각질층의 균일한 제거상태	+33% (p=0.0001)	+34% (p=0.0022)	+40% (p=0.0005)	+29% (p=0.0002)

이상의 결과로부터, 본 발명품의 조직 개선 효과가 유의하게 확인되었다.

상기 발명품 1 내지 4 및 비교품의 조성을 이하의 표 12에 기록한다. 또한 수치는 전체에 대한 중량%로 나타낸다.

시료	본 발명품				비교품
	1	2	3	4	1
물냉이 추출물	1.0	-	-	-	-
주니퍼 오일	-	1.0	-	-	-
백출 추출물	-	-	1.0	-	-
머위 추출물	-	-	-	1.0	-
글리세린	10.0	10.0	10.0	10.0	10.0
1,3-부틸렌글리콜	4.0	4.0	4.0	4.0	4.0
에탄올	7.0	7.0	7.0	7.0	7.0
폴리옥시에틸렌(20몰) 올레일알콜	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
정제수	나머지	나머지	나머지	나머지	나머지

(실험 방법-8)

항염증, 창상 치유 촉진 시험

8주령의 HR-1 마우스에게 염증 또는 창상을 인공적으로 형성하고, 각 군(n=5)에 (1) 약제 무첨가, (2) 주니퍼 오일 5%, (3)백출 추출물 5%, (4) 머위 추출물 5%를 함유하는 1, 3-부틸렌글리콜을 각각 0.5 g씩 하루 2회, 5일간 도포하고, 5일째에 염증 부위 또는 창상 부위의 상태를 관찰하였다. 항염증 작용, 창상 치유 촉진 작용을 각각 낮은 쪽부터 높은 쪽 순으로 1 내지 5의 5단계로 스코어화하였다. 그 결과를 표 13에 요약한다.

(결과-8)

	항염증 작용	창상 치유 촉진 작용
(1)	1	2
(2)	3	4
(3)	4	4
(4)	5	4

표 13에 나타낸 바와 같이, 대조 (1)에 있어서, 염증, 창상의 개선도는 낮았다. 이에 대하여, 주니퍼, 백출, 머위 추출물은 모두 항염증 작용, 창상 치유 촉진 작용을 갖는 것이 invivo에 있어서 확인되었다.

(실시예 1-크림)

(1) 처방

(A상)

스테아르산 10.0 중량%

스테아릴알코올 4.0

스테아르산부틸 8.0

스테아르산모노글리세린에스테르 2.0

비타민 E 아세테이트 0.5

비타민 A 팔미테이트 0.1

마카다미아 너트 오일 1.0

방부제 적량

향료 적량

(B상)

글리세린 4.0

1, 2-펜탄디올 3.0

수산화칼륨 0.4

아스코르빈산인산마그네슘 0.1

L-아르기닌염산염 0.01

에디트산3나트륨 0.05

물냉이

1, 3-부틸렌글리콜 추출물 0.5

이온 교환수 나머지

(2) 제법

A의 유상부와 B의 수상부를 각각 70℃로 가열하여 완전 용해한다. A상을 B상에 첨가하여 유화기로 유화한다. 유화물을 열교환기를 이용하여 냉각한다.

(실시예 2-크림)

(1) 처방

스테아르산 5.0 중량%

스테아릴 알코올 4.0

이소프로필 미리스테이트 18.0

글리세린모노스테아르산에스테르 3.0

프로필렌글리콜 10.0

주니퍼 메탄올 추출물 0.01

가성칼리 0.2

아황산수소나트륨 0.01

방부제 적량

향료 적량

이온 교환수 나머지

(2) 제법

이온 교환수에 프로필렌글리콜과 주니퍼 메탄올 추출물과 가성칼리를 첨가하여 용해하고, 가열하여 70℃로 유지한다(수상). 다른 성분을 혼합하고 가열 용해하여 70℃로 유지한다(유상). 수상에 유상을 서서히 첨가하고, 전부 첨가한 후 잠시 그 온도로 유지하여 반응을 일으키게 한다. 그 후, 호모믹서로 균일하게 유화하고, 잘 섞으면서 30℃까지 냉각한다.

(실시예 3-주름 예방 크림)

(1) 처방

스테아르산 2.0 중량%

스테아릴알코올 7.0

수소첨가라놀린 2.0

스쿠알란 5.0

2-옥틸도데실알코올 6.0

폴리옥시에틸렌(25몰)세틸알코올에테르 3.0

글리세린모노스테아르산에스테르 2.0

프로필렌글리콜 5.0

백출에탄올 추출물 0.05

심황에탄올 추출물 0.05

아황산수소나트륨 0.03

에틸파라벤 0.3

향료 적량

이온 교환수 나머지

(2) 제법

이온 교환수에 프로필렌 글리콜을 첨가하고, 가열하여 70℃로 유지한다(수상). 다른 성분을 혼합하고 가열 용해하여 70℃로 유지한다(유상). 수상에 유상을 가하여 예비 유화를 행하고, 호모믹서로 균일하게 유화한 후, 잘 섞으면서 30℃까지 냉각한다.

(실시예 4-노화 방지용 크림)

(1) 처방

고형 파라핀 5.0 중량%

밀납 10.0

바셀린 15.0

유동 파라핀 41.0

글리세린모노스테아르산에스테르 2.0

폴리옥시에틸렌(20몰)

소르비탄모노라우린산에스테르 2.0

비누 분말 0.1

붕사 0.2

머위 아세톤 추출물 0.05

시호에탄올 추출물 0.05

아황산수소나트륨 0.03

에틸파라벤 0.3

향료 적량

이온 교환수 나머지

(2) 제법

이온 교환수에 비누 분말과 붕사를 첨가하고, 가열 용해하여 70℃로 유지한다(수상). 다른 성분을 혼합하고 가열 융해하여 70℃로 유지한다(유상). 수상에 유상을 섞으면서 서서히 가하여 반응을 행한다. 반응 종료 후, 호모믹서로 균일하게 유화하고, 유화 후 잘 섞으면서 30℃까지 냉각한다.

(실시예 5-유액)

(1) 처방

스테아르산 1.0 중량%

바셀린 5.0

유동 파라핀 10.0

폴리옥시에틸렌(10몰)모노올레인산에스테르 2.0

폴리에틸렌글리콜 1500 3.0

트리에탄올아민 1.0

카르복시비닐폴리머 0.2

(상품명: 카보폴 94l, B. F. Goodrich chemical company)

물냉이 초산에틸 추출물 0.01

아황산수소나트륨 0.01

에틸파라벤 0.3

향료 적량

이온 교환수 나머지

(2) 제법

소량의 이온 교환수에 카르복시비닐폴리머를 용해한다(A상). 나머지의 이온 교환수에 폴리에틸렌글리콜 1500과 트리에탄올아민을 첨가하고, 가열 용해하여 70℃로 유지한다(수상). 다른 성분을 혼합하고 가열 융해하여 70℃로 유지한다(유상). 수상에 유상을 가하여 예비 유화를 행하고, A상을 첨가하여 호모믹서로 균일 유화하며, 유화 후 잘 섞으면서 30℃까지 냉각한다.

(실시예 6-유액)

(1) 처방

마이크로크리스탈린왁스 1.0 중량%

밀납 2.0

라놀린 2.0

유동 파라핀 10.0

스쿠알란 5.0

소르비탄세스퀴올레인산에스테르 4.0

폴리옥시에틸렌(20몰)소르비탄모노올레인산에스테르 1.0

프로필렌글리콜 7.0

주니퍼 1, 3-부틸렌글리콜 추출물 10.0

아황산수소나트륨 0.01

에틸파라벤 0.3

향료 적량

이온 교환수 나머지

(2) 제법 이온 교환수에 프로필렌글리콜을 첨가하고, 가열하여 70℃로 유지한다(수상). 다른 성분을 혼합하고, 가열 융해하여 70℃로 유지한다(유상). 유상을 섞으면서 이것에 수상을 서서히 첨가하고, 호모믹서로 균일하게 유화한다. 유화 후 잘 섞으면서 30℃까지 냉각한다.

(실시예 7-유액)

(1) 처방

(A상)

스쿠알란 5.0 중량%

올레인올레이트 3.0

바세린 2.0

소르비탄세스퀴올레인산에스테르 0.8

폴리옥시에틸렌올레일에테르(2OEO) 1.2

월견초유 0.5

방부제 적량

향료

(B상)

1, 3-부틸렌글리콜 4.5

백출 에탄올 추출액 1.5

에탄올 3.0

카르복시비닐폴리머 0.2

수산화칼륨 0.1

L-아르기닌 L-아스파라긴산염 0.01

갈근 에탄올 추출액 1.5

에리스리톨 0.5

헥사메타인산나트륨 0.05

이온 교환수 나머지

(2) 제법

A의 유상부와 B의 수상부를 각각 70℃로 가열하여 완전 용해한다. A상을 B상에 첨가하여 유화기로 유화한다. 유화물을 열교환기를 이용하여 냉각한다.

(실시예 8-젤리)

(1) 처방

95% 에틸 알코올 10.0 중량%

디프로필렌글리콜 15.0

폴리옥시에틸렌(50몰)올레일알코올에테르 2.0

카르복시비닐폴리머 1.0

(상품명: 카보폴 940, B. F. Goodrich Chemical company)

가성소다 0.15

L-아르기닌 0.1

머위 에탄올 추출물 7.0

2-히드록시-4-메톡시 벤조페논술폰산나트륨 0.05

에틸렌디아민테트라아세테이트·3나트륨·2수 0.05

메틸파라벤 0.2

향료 적량

이온 교환수 나머지

(2) 제법

이온 교환수에 카보폴 940을 균일하게 용해하고, 한편 95% 에탄올에 머위 에탄올 추출물, 폴리옥시에틸렌(50몰)올레일알코올에테르를 용해하며, 수상에 첨가한다. 계속해서 그 외의 성분을 첨가한 후 가성소다, L-아르기닌으로 중화시켜 증점한다.

(실시예 9-미용액)

(1) 처방

(A상)

에틸 알코올(95%) 10.0 중량%

폴리옥시에틸렌(20몰)옥틸도데칸올 1.0

판토테닐에틸에테르 0.1

물냉이 메탄올 추출물 1.5

메틸파라벤 0.15

(B상)

수산화칼륨 0.1

(C상)

글리세린 5.0

디프로필렌글리콜 10.0

아황산수소나트륨 0.03

카르복시비닐폴리머 0.2

(상품명: 카보폴 940, B. F. Goodrich Chemical company)

이온 교환수 나머지

(2) 제법

A상, C상을 각각 균일하게 용해하고, C상에 A상을 첨가하여 가용화한다. 계속해서 B상을 첨가한 후 충전을 행한다.

(실시예 10-팩)

(1) 처방

(A상)

디프로필렌글리콜 5.0 중량%

폴리옥시에틸렌(60몰)경화피마자유 5.0

(B상)

주니퍼 추출물 0.01

올리브유 5.0

초산토코페롤 0.2

에틸파라벤 0.2

향료 0.2

(C상)

아황산수소나트륨 0.03

폴리비닐알코올(비누화도 90, 중합도 2, 000) 13.0

에탄올 7.0

이온 교환수 나머지

(2) 제법

A상, B상, C상을 각각 균일하게 용해하고, A상에 B상을 첨가하여 가용화한다. 계속해서 이것을 C상에 첨가한 후 충전을 행한다.

(실시예 11-화장수)

(1) 처방

(A상)

에탄올 5.0 중량%

POE 올레일알코올에테르 2.0

올레일알코올 0.1

2-에틸헥실-P-디메틸아미노벤조에이트 0.18

향료 적량

(B상)

1, 3-부틸렌글리콜 9.5

글리세린 2.0

피롤리돈카르복실산나트륨 0.5

니코틴산아미드 0.3

백출 1, 3-부틸렌글리콜 추출물 0.1

β-시클로덱스트린 1.0

에리스리톨 0.05

이온 교환수 나머지

(2) 제법

A의 알코올상을 B의 수상에 첨가하고, 가용화하여 화장수를 얻는다.

(실시예 12-고체형 파운데이션)

(1) 처방

탈크 43.1 중량%

카올린 15.0

세리사이트 10.0

아연화 7.0

이산화티탄 3.8

황색 산화철 2.9

흑색 산화철 0.2

스쿠알란 8.0

이소스테아린산 4.0

모노올레인산 POE 소르비탄 3.0

옥탄산이소세틸 2.0

머위 에탄올 추출물 0.5

방부제 적량

향료 적량

(2) 제법

탈크 내지 흑색 산화철의 분말 성분을 블랜더로 충분히 혼합하고, 이에 스쿠알란 내지 옥탄산이소세틸의 유성 성분, 머위 에탄올 추출물, 방부제, 향료를 첨가하여 잘 혼련한 후, 용기에 충전, 성형한다.

[실시예 13-유화형 파운데이션(크림 타입)]

(1) 처방

(분체부)

이산화티탄 10.3 중량%

세리사이트 5.4

카올린 3.0

황색 산화철 0.8

철단 0.3

흑색 산화철 0.2

(유상)

데카메틸시클로펜타실록산 11.5

유동 파라핀 4.5

폴리옥시에틸렌 변성 디메틸폴리실록산 4.0

(수상)

이온 교환수 50.0

1, 3-부틸렌글리콜 4.5

물냉이 에탄올 추출물 1.5

소르비탄세스퀴올레인산에스테르 3.0

방부제 적량

향료 적량

(2) 제법

수상을 가열 교반 후, 충분히 혼합 분쇄한 분체부를 첨가하여 호모믹서 처리한다. 가열 혼합한 유상을 더 첨가하여 호모믹서 처리한 후, 교반하면서 향료를 첨가하여 실온까지 냉각한다.

Claims (8)

1. 물냉이 유래 추출물을 유효 성분으로 포함하는 항주름제.
2. 물냉이 유래 추출물을 유효 성분으로 포함하고, 기저막 안정화에 의해 피부 주름을 방지하고 개선하기 위한 화장료 조성물.
3. 물냉이 유래 추출물을 유효 성분으로 포함하고, 세포외 매트릭스 생산 촉진에 의해 피부 주름을 방지하고 개선하기 위한 화장료 조성물.
4. 제3항에 있어서, 생산 촉진되는 세포외 매트릭스의 구성 성분이 라미닌 5, III형 콜라겐, IV형 콜라겐 및 VII형 콜라겐으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 또는 2종 이상인 피부 주름을 방지하고 개선하기 위한 화장료 조성물.
5. 제3항 또는 제4항에 있어서, 라미닌 5, III형 콜라겐, IV형 콜라겐 및 VII형 콜라겐 모두의 생산을 촉진시키는 것을 특징으로 하는 피부 주름을 방지하고 개선하기 위한 화장료 조성물.
6. 물냉이 유래 추출물을 유효 성분으로 포함하는 피부의 처짐, 당김 개선제.
7. 물냉이 유래 추출물을 인공 피부 형성 배지중에 첨가하는 공정을 포함하는 인공 피부의 제조 방법.
8. 물냉이 유래 추출물을 피부에 적용하여 주름을 경감하고, 피부의 처짐, 당김을 개선하는 것을 특징으로 하는 미용 방법.