KR101813124B1 - 세포신호전달 물질인 시그날로좀을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 털마삭줄 추출물, 회화나무 추출물 및 황련 추출물로 구성된 군에서 선택된 1종 이상의 식물 추출물, 테트라아세틸피토스핑고신 및 바이탈 콤플렉스의 혼합물을 포함하는 시그날로좀을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 화장료 조성물은 피부 노화 방지 효과, 구체적으로는 세포재생효과, 항산화효과, MMP-1 생성억제효과, 콜라겐 생합성 효과, 히아루론산 생합성 촉진효과, 아쿠아포린 생합성 촉진효과, 피부 각질형성세포 분화 촉진효과, 멜라닌 생성억제효과, miR-378b 발현억제효과, miR-181a 발현 촉진효과, miR-340 발현 촉진효과, FGFR1 및 FGFR2 발현 촉진효과, 보습효과, 미백효과, 피부 장벽 기능 개선 효과, 염증성 사이토카인 발현 억제 효과, 피부 주름개선 효과, 피부 탄력 개선효과, 진피치밀도 개선효과가 우수하다.

Description

세포신호전달 물질인 시그날로좀을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물{COSMETIC COMPOSITION COMPRISING SIGNALOSOME AS CELL SIGNALING MOLECULE}

본 발명은 털마삭줄 추출물, 회화나무 추출물 및 황련 추출물로 구성된 군에서 선택된 1종 이상의 식물 추출물, 테트라아세틸피토스핑고신 및 바이탈 콤플렉스의 혼합물을 포함하는 시그날로좀을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

사람의 피부는 노화 과정에서 다양한 물리화학적인 변화가 일어난다. 그 원인에 따라 크게 내적인 노화(intrinsic aging)와 광노화(photo-aging)로 구분되며 이에 관한 연구가 활발히 이루어져 왔다. 자외선, 스트레스, 질병 상태, 환경 인자, 상처, 나이 등의 이유로 자유라디칼이 활성화되어 야기될 수 있으며, 이런 상태가 심화될 경우 생체 내에 존재하는 항산화 방어망을 파괴하고, 세포 및 조직을 손상시켜 성인병 및 노화를 촉진하게 된다.

좀 더 구체적으로 말하자면, 피부의 주요 구성 물질인 지질, 단백질, 다당류 및 핵산 등이 산화되어 피부 세포 및 조직이 파괴되고, 결국 피부 노화 현상이 생겨나는 것이다. 특히, 단백질의 산화는 피부의 결합 조직인 콜라겐(collagen), 히아루론산(hyaluronic acid), 엘라스틴(elastin), 프로테오글리칸(proteoglycan), 피브로넥틴(fibronectin) 등이 절단되어 심한 과다 염증 반응과 피부의 탄력에 지장을 주고 이것이 더 심해질 경우 DNA의 변이에 의해 돌연변이, 암의 유발, 면역 기능 저하에 이르게 된다.

그러므로 신체의 대사 과정 중 발생하는 자유라디칼이나 자외선 조사, 염증 반응에 의해 매개되어 발생하는 자유라디칼을 소거하여 세포막을 보호하고, 또 이미 손상 받은 세포는 활발한 신진 대사에 의해 재생 및 세포를 증식시켜야 피부가 빠르게 회복되고 건강한 피부를 유지할 수 있다.

노화에는 이러한 자유라디칼뿐만 아니라 콜라겐 분해효소인 기질 금속 단백질 분해 효소(Matrix Metalloproteinase; MMP)라는 효소도 관여한다. 즉, 생체 내에서 콜라겐과 같은 세포외기질의 합성과 분해는 적절하게 조절되나, 노화가 진행되면서 콜라겐 합성이 감소하고, 콜라겐을 분해하는 효소인 기질 금속 단백질 분해 효소(MMP)의 발현이 촉진되어 피부의 탄력이 저하되고 주름이 형성된다. 또한, 자외선 조사에 의해 이러한 분해 효소가 활성화되기도 한다.

그러므로, 세포 내에서 활성화가 유도되는 MMP 발현을 조절하거나 그 활성을 억제할 수 있는 물질의 개발이 요구되고 있다. 이제까지 화장품의 소재로서 사용된 원료들은 단순히 효소 활성만을 억제하는 것이 대부분이었다. 이에 세포내 자연노화와 광노화에 의해 그 발현이 유도되는 MMP 발현량 및 활성을 조절하고자 하였다.

이러한 여러 가지 문제점을 해결하기 위하여, 최근 여러 화학 물질 등에 의한 피부 자극을 줄이기 위해 천연물을 사용한 화장품이 많이 개발되고 있다. 천연 재료는 피부에 부작용이 적을 뿐만 아니라, 최근 천연 재료를 이용한 화장품에 대한 소비자들의 호응이 높아짐에 따라 화장품 원료로서 개발 가치가 한층 늘어나고 있다.

한국공개특허 제2001-0018657호는 괴화 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다. 한국공개특허 제2016-0084900호는 황련, 오수유 및 백작약 추출물로 구성된 무기환을 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물에 관한 것이다.

한국등록특허 제10-0404072호는 테트라아세틸 파이토스핑고신 등의 스핑고리피드 장쇄염기를 포함하는 광범위 피부질환 치료용 조성물에 관하여 기재되어 있고, 한국공개특허 제2001-0027942호는 테트라아세틸피토스핑고신 등을 포함하는 입술용 화장품 조성물에 대하여 기재되어 있다. 또한, 한국등록특허 제10-1117562호는 나노 리포좀에 포접하여 안정화시킨 올리고 펩타이드 혼합물을 포함하는 피부노화 방지용 화장료에 대하여 기재되어 있다.

본 발명의 목적은 털마삭줄 추출물, 회화나무 추출물 및 황련 추출물로 구성된 군에서 선택된 1종 이상의 식물 추출물, 테트라아세틸피토스핑고신 및 바이탈 콤플렉스의 혼합물로 구성된 시그날로좀을 함유하여 세포재생효과, 항산화효과, MMP-1 생성억제효과, 콜라겐 생합성 효과, 히아루론산 생합성 촉진효과, 아쿠아포린 생합성 촉진효과, 피부 각질형성세포 분화 촉진효과, 멜라닌 생성억제효과, miR-378b 발현억제효과, miR-181a 발현 촉진효과, miR-340 발현 촉진효과, FGFR1 및 FGFR2 발현 촉진효과, 보습효과, 미백효과, 피부 장벽 기능 개선 효과, 염증성 사이토카인 발현 억제 효과, 피부 주름개선 효과, 피부 탄력 개선효과, 진피치밀도 개선효과, 피부 항노화 효과를 나타내는 화장료 조성물을 제공하는데 있다.

본 발명은 털마삭줄 추출물, 회화나무 추출물 및 황련 추출물로 구성된 군에서 선택된 1종 이상의 식물 추출물, 테트라아세틸피토스핑고신 및 바이탈 콤플렉스의 혼합물을 포함하는 시그날로좀을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

바람직하게는 상기 바이탈 콤플렉스는 아미노산 및 비타민 B군을 포함한다.

바람직하게는 상기 화장료 조성물은 피부 주름 개선 효과를 갖는다.

바람직하게는 상기 화장료 조성물은 피부 탄력 개선 효과를 갖는다.

바람직하게는 상기 화장료 조성물은 피부 장벽 기능 개선 효과를 갖는다.

바람직하게는 상기 화장료 조성물은 항산화 효과를 갖는다.

바람직하게는 상기 화장료 조성물은 피부 보습 효과를 갖는다.

바람직하게는 상기 화장료 조성물은 피부 미백 효과를 갖는다.

바람직하게는 상기 화장료 조성물은 항염 효과를 갖는다.

바람직하게는 상기 화장료 조성물은 세포신호 전달 촉진을 통해 피부 재생 및 상처 치유 개선 효과를 갖는다.

바람직하게는 상기 화장료 조성물의 세포신호 전달은 인간 정상 상피세포인 각질형성세포의 FGF receptor2의 발현 증가를 통해 피부 재생 및 상처 치유 개선 효과를 갖는다.

바람직하게는 상기 바이탈 컴플렉스는 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.0001 내지 95.0 중량% 함유된다.

바람직하게는 상기 테트라아세틸피토스핑고신은 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.00001 내지 10.0 중량%로 함유된다.

바람직하게는 상기 식물 추출물은 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.001 내지 30.0 중량%로 함유된다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 세포재생 효과(실험예 1), FGFR-1 및 FGFR-2 발현 촉진효과(실험예 2), 항산화 효과(실험예 3), 아쿠아포린 생합성 촉진 효과(실험예 4), 피부 각질형성세포 분화촉진 효과(실험예 5), 멜라닌 생성 억제효과(실험예 6), 히아루론산 발현 촉진효과(실험예 7), MMP-1 생성 억제 효과 (실험예 8), 콜라겐 생합성 효과(실험예 9), 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제 효과(실험예 10), miR-378b 발현 억제효과(실험예 11), miR-181a 발현 촉진효과(실험예 12), miR-340 발현 촉진효과(실험예 13), 피부장벽기능 개선효과(실험예 14), 보습효과(실험예 15), 미백효과(실험예 16), 피부 탄력 개선효과(실험예 17), 피부 주름 개선 효과(실험예 18), 진피치밀도 개선효과(실험예 19), 피부 재생 및 상처 치유 개선 효과(실험예 20)를 갖는다.

도 1은 섬유아세포에서의 히아루론산 생합성 촉진 효과를 나타내는 그래프이다.

본 발명은 a) 털마삭줄 추출물, 회화나무 추출물 및 황련 추출물로 구성된 군에서 선택된 1종 이상의 식물 추출물; b) 테트라아세틸피토스핑고신; 및 c) 바이탈 콤플렉스의 혼합물을 주성분으로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

본 발명에서 사용된 용어 "시그날로좀"은 a) 털마삭줄 추출물, 회화나무 추출물 및 황련 추출물로 구성된 군에서 선택된 1종 이상의 식물 추출물; b) 테트라아세틸피토스핑고신; 및 c) 바이탈 콤플렉스를 포함하는 혼합물을 의미한다.

본 발명의 화장료 조성물은 털마삭줄 추출물, 회화나무 추출물 및 황련 추출물로 구성된 군에서 선택된 1종 이상의 식물 추출물을 포함할 수 있고, 바람직하게는 2종 이상의 식물 추출물을 포함할 수 있고, 보다 바람직하게는 3종의 식물 추출물을 포함할 수 있다. 본 발명에 따른 식물 추출물은 miRNA를 조절하는 데 특히 유용할 수 있다. 본 발명에 따른 식물 추출물은 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.001 내지 30.0 중량% 포함될 수 있으며, 바람직하게는 식물 추출물은 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.01 내지 10.0 중량% 포함될 수 있고, 더욱 바람직하게는 식물추출물은 0.1 내지 5.0 중량%으로 포함될 수 있다. 0.001 중량% 미만으로 포함되는 경우에는 피부 개선 효과가 미미하며, 30.0 중량%를 초과하여 포함되는 경우에는 함유량 증가 대비 피부 개선 효과가 미미하여 경제적이지 못하다.

본 발명의 화장료 조성물에 유효성분으로 사용되는 "테트라아세틸피토스핑고신"은 (2S,3S,4R)-1, 2, 3, 4-Tetraacetylphytosphingosine으로 표기되는 하기 화학식 1의 구조를 가지는 분자량이 485.67인 화합물이며, 피토스핑고신의 유도체로, 상업적으로 판매되고 있다.

본 발명에 따른 테트라아세틸피토스핑고신은 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.00001 내지 10.0 중량% 포함될 수 있고, 바람직하게는 0.001 내지 1 중량% 포함될 수 있고, 바람직하게는 0.01 내지 0.1 중량% 포함될 수 있다. 테트라아세틸피토스핑고신을 0.00001 중량% 미만으로 포함하는 경우에는 피부 개선 효과가 나타나지 않으며, 10.0 중량%를 초과하여 포함하는 경우에는 함유량 증가에 대한 피부 개선 효과 증대 정도가 미미하다.

본 발명의 화장료 조성물에 유효성분으로 사용되는 바이탈 콤플렉스는 아미노산 및 비타민 B군을 포함하는 복합체를 의미하고, 구체적으로 아미노산은 글라이신, 세린, 글루타민, 아스파틱애씨드, 류신, 라이신, 알지닌, 타이로신, 프롤린, 이소류신, 히스티딘, 시스틴, 메치오닌, 트립토판, 트레오닌, 발린 및 페닐알리닌을 포함하고, 비타민 B군으로는 티아민에이치씨엘(B1), 리보플라빈(B2), 나이아신아마이드(B3), 판토테닉애씨드(B5), 피리독살5-포스페이트(B6), 폴릭애씨드(B9)을 포함한다. 보다 바람직하게, 상기 바이탈 콤플렉스는 아미노산은 글라이신, 세린, 글루타민, 아스파틱애씨드, 류신, 라이신, 알지닌, 타이로신, 프롤린, 이소류신, 히스티딘, 시스틴, 메치오닌, 트립토판, 트레오닌, 발린 및 페닐알리닌을 포함하고, 비타민 B군으로는 티아민에이치씨엘(B1), 리보플라빈(B2), 나이아신아마이드(B3), 판토테닉애씨드(B5), 피리독살5-포스페이트(B6), 폴릭애씨드(B9)을 포함하고 그 외 피루빅애씨드, 이노시톨, 페녹시에탄올, 소듐설페이트, 마그네슘설페이트, 포타슘설페이트, 글루코오스, 정제수를 포함하는 복합체일 수 있다.

본 발명에 화장료 조성물에 유효성분으로 사용되는 바이탈 콤플렉스는 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.001 내지 95.0 중량% 포함될 수 있고, 바람직하게는 1 내지 95 중량%, 보다 바람직하게는 50 내지 90 중량% 포함될 수 있다. 각각의 아미노산과 비타민 B군의 함량은 동일하거나 상이할 수 있다. 또한, 바람직하게는 포함되는 임의의 1종의 성분이 다른 임의의 1종의 성분의 함량에 대하여 최대 1600배, 바람직하게는 100배로 포함될 수 있다. 또한 바람직하게는 포함되는 임의의 1종의 아미노산이 임의의 1종의 비타민 B군의 함량에 대하여 최대 900배, 바람직하게는 100배로 포함될 수 있다. 다른 실시형태로서, 바이탈 콤플렉스에 포함되는 성분들의 각각의 함량은 모두 동일하게 포함될 수 있다.

시그날로좀에 포함되는 a) 식물 추출물과 b) 테트라아세틸피토스핑고신은 1 내지 5 : 0.01 내지 0.1의 중량비로 혼합될 수 있다. 또 다른 실시형태로서, a) 식물 추출물, b) 테트라아세틸피토스핑고신 및 c) 바이탈 콤플렉스는 0.001 내지 30 : 0.00001 내지 10 : 0.001 내지 95 중량비로 혼합될 수 있다. 바람직한 실시형태로서, a) 식물 추출물, b) 테트라아세틸피토스핑고신 및 c) 바이탈 콤플렉스는 0.01 내지 10 : 0.001 내지 1 : 1 내지 90 중량비로 혼합될 수 있으며, 보다 바람직한 실시형태로서, a) 식물 추출물, b) 테트라아세틸피토스핑고신 및 c) 바이탈 콤플렉스는 0.1 내지 5 : 0.01 내지 0.1 : 50 내지 90 중량비로 혼합될 수 있다.

따라서, 이러한 다양한 기능을 가진 a) 털마삭줄 추출물, 회화나무 추출물 및 황련 추출물로 구성된 군에서 선택된 1종 이상의 식물 추출물 b) 테트라아세틸피토스핑고신 및 c) 아미노산과 비타민 B군을 포함하는 바이탈 콤플렉스의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 본 발명의 화장료 조성물은 피부 노화 방지 효과가 우수하다. 구체적으로 피부 노화 방지 효과는 우수한 세포재생효과, 항산화효과, MMP-1 생성억제효과, 콜라겐 생합성 효과, 히아루론산 생합성 촉진효과, 아쿠아포린 생합성 촉진효과, 피부 각질형성세포 분화 촉진효과, 멜라닌 생성억제효과, miR-378b 발현억제효과, miR-181a 발현 촉진효과, miR-340 발현 촉진효과, FGFR1 및 FGFR2 발현 촉진효과, 보습효과, 미백효과, 피부 장벽 기능 개선 효과, 염증성 사이토카인 발현 억제 효과, 피부 주름 개선 효과, 피부 탄력 개선효과, 진피치밀도 개선효과 등의 효과를 포괄하는 개념으로 사용되었다.

또한, 본 발명은 a) 털마삭줄 추출물, 회화나무 추출물 및 황련 추출물로 구성된 군에서 선택된 1종 이상의 식물 추출물 b) 테트라아세틸피토스핑고신 및 c) 아미노산과 비타민 B군을 포함하는 바이탈 콤플렉스의 혼합물을 주성분으로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 상기 유효성분 이외에 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수(스킨), 영양 화장수(밀크로션), 영양 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

제조예 1: 털마삭줄 추출물 제조

세절하여 음건한 털마삭줄 줄기 100g을 70% (V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압 농축 및 동결 건조하여 17.4g의 털마삭줄 추출물을 얻었다.

제조예 2: 황련 추출물 제조

세절하여 음건한 황련 뿌리 100g을 70% (V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압 농축 및 동결 건조하여 19.7g의 황련 추출물을 얻었다.

제조예 3: 회화나무 추출물 제조

세절하여 음건한 회화나무 꽃 100g을 70% (V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압 농축 및 동결 건조하여 18.1g의 회화나무 추출물을 얻었다.

제조예 4 내지 5

제조예 4는 테트라아세틸피토스핑고신이고, 제조예 5는 바이탈 콤플렉스이다. 아래의 제조예에 기재된 혼합비는 모두 중량비이다.

본 발명에서 사용된 테트라아세틸피토스핑고신(이하 TAPS)은 ㈜두산 구입하여 사용하였고, 바이탈 콤플렉스는 다미화학에서 구입하여 사용하였으며, 바이탈 콤플렉스는 SK바이오랜드(제품명 :바이탈 콤플렉스)에서 구입하여 사용하였으며, 바이탈 콤플렉스는 구체적으로 글라이신, 세린, 글루타민, 아스파틱애씨드, 류신, 라이신, 알지닌, 타이로신, 프롤린, 이소류신, 히스티딘, 시스틴, 메치오닌, 트립토판, 트레오닌, 발린 및 페닐알리닌을 포함하고, 비타민 B군으로는 티아민에이치씨엘(B1), 리보플라빈(B2), 나이아신아마이드(B3), 판토테닉애씨드(B5), 피리독살5-포스페이트(B6), 폴릭애씨드(B9)을 포함하고 그 외 피루빅애씨드, 이노시톨, 페녹시에탄올, 소듐설페이트, 마그네슘설페이트, 포타슘설페이트, 글루코오스, 정제수를 포함하는 복합체이다.

제조예 6 내지 89

제조예 6 내지 89의 혼합비는 중량비를 나타낸다.

제조예 6은 털마삭줄 추출물:황련 추출물의 1:1 혼합물이고, 제조예 7은 회화나무 추출물:황련 추출물의 1:1 혼합물이고, 제조예 8은 털마삭줄 추출물:회화나무 추출물의 1:1 혼합물이고, 제조예 9는 털마삭줄 추출물:황련 추출물:회화나무 추출물의 1:1:1 혼합물이고, 제조예 10은 털마삭줄 추출물:황련 추출물:회화나무 추출물의 3:1:1 혼합물이고, 제조예 11은 털마삭줄 추출물:황련 추출물:회화나무 추출물의 1:1:3 혼합물이고, 제조예 12는 털마삭줄 추출물:테트라아세틸피토스핑고신의 1:0.1 혼합물이고, 제조예 13은 황련 추출물:테트라아세틸피토스핑고신의 1:0.1 혼합물이고, 제조예 14는 회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신의 1:0.1 혼합물이고, 제조예 15는 털마삭줄 추출물:황련 추출물:테트라아세틸피토스핑고신 의 1:1:0.1 혼합물이고, 제조예 16은 황련 추출물:회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신 의 1:1:0.1 혼합물이고, 제조예 17은 회화나무 추출물:털마삭줄 추출물:테트라아세틸피토스핑고신의 1:1:0.1 혼합물이고, 제조예 18은 털마삭줄 추출물:황련 추출물:회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신의 1:1:1:0.1 혼합물이고, 제조예 19는 털마삭줄 추출물:황련 추출물:회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신의 3:1:1:0.1 혼합물이고, 제조예 20은 털마삭줄 추출물:황련 추출물:회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신의 1:1:3:0.1 혼합물이다.

제조예 21은 털마삭줄 추출물:바이탈 컴플렉스의 1:90 혼합물이고, 제조예 22는 황련 추출물:바이탈 컴플렉스의 1:90 혼합물이고, 제조예 23은 회화나무 추출물:바이탈 컴플렉스의 1:90 혼합물이고, 제조예 24는 털마삭줄 추출물:황련 추출물:바이탈 컴플렉스의 1:1:90 혼합물이고, 제조예 25는 황련 추출물:회화나무 추출물:바이탈 컴플렉스의 1:1:90 혼합물이고, 제조예 26은 털마삭줄 추출물:회화나무 추출물:바이탈 컴플렉스의 1:1:90 혼합물이고, 제조예 27은 털마삭줄 추출물:황련 추출물:회화나무 추출물:바이탈 컴플렉스의 1:1:1:90 혼합물이고, 제조예 28은 털마삭줄 추출물:황련 추출물:회화나무 추출물:바이탈 컴플렉스의 3:1:1:90혼합물이고, 제조예 29는 털마삭줄 추출물:황련 추출물:회화나무 추출물:바이탈 컴플렉스의 1:1:3:90 혼합물이다.

제조예 30은 테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 0.01:10 혼합물이고, 제조예 31은 테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 0.01:50 혼합물이고, 제조예 32는 테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 0.01:90 혼합물이고, 제조예 33은 테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 0.1:10 혼합물이고, 제조예 34는 테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 0.1:50 혼합물이고, 제조예 35는 테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 0.1:90 혼합물이다.

제조예 36은 털마삭줄 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:0.01:10 혼합물이고, 제조예 37은 황련 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:0.01:10 혼합물이고, 제조예 38은 회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:0.01:10 혼합물이고, 제조예 39는 털마삭줄 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:0.01:50 혼합물이고, 제조예 40은 황련 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:0.01:50 혼합물이고, 제조예 41은 회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:0.01:50 혼합물이고, 제조예 42는 털마삭줄 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:0.01:90 혼합물이고, 제조예 43은 황련 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:0.01:90 혼합물이고, 제조예 44는 회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:0.01:90 혼합물이다.

제조예 45는 털마삭줄 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:0.1:10 혼합물이고, 제조예 46은 황련 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:0.1:10 혼합물이고, 제조예 47은 회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:0.1:10 혼합물이고, 제조예 48은 털마삭줄 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:0.1:50 혼합물이고, 제조예 49는 황련 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:0.1:50 혼합물이고, 제조예 50은 회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:0.1:50 혼합물이고, 제조예 51은 털마삭줄 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:0.1:90 혼합물이고, 제조예 52는 황련 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:0.1:90 혼합물이고, 제조예 53은 회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:0.1:90 혼합물이다.

제조예 54는 털마삭줄 추출물:황련 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:1:0.01:10 혼합물이고, 제조예 55는 황련 추출물:회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:1:0.01:10 혼합물이고, 제조예 56은 털마삭줄 추출물:회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:1:0.01:10 혼합물이고, 제조예 57은 털마삭줄 추출물:황련 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:1:0.01:50 혼합물이고, 제조예 58은 황련 추출물:회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:1:0.01:50 혼합물이고, 제조예 59는 털마삭줄 추출물:회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:1:0.01:50 혼합물이고, 제조예 60은 털마삭줄 추출물:황련 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:1:0.01:90 혼합물이고, 제조예 61은 황련 추출물:회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:1:0.01:90 혼합물이고, 제조예 62는 털마삭줄 추출물:회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:1:0.01:90 혼합물이다. 제조예 63은 털마삭줄 추출물:황련 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:1:0.1:10 혼합물이고, 제조예 64는 황련 추출물:회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:1:0.1:10 혼합물이고, 제조예 65는 털마삭줄 추출물:회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:1:0.1:10 혼합물이고, 제조예 66은 털마삭줄 추출물:황련 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:1:0.1:50 혼합물이고, 제조예 67은 황련 추출물:회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:1:0.1:50 혼합물이고, 제조예 68은 털마삭줄 추출물:회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:1:0.1:50 혼합물이고, 제조예 69는 털마삭줄 추출물:황련 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:1:0.1:90 혼합물이고, 제조예 70은 황련 추출물:회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:1:0.1:90 혼합물이고, 제조예 71은 털마삭줄 추출물:회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:1:0.1:90 혼합물이다.

제조예 72는 털마삭줄 추출물:황련 추출물:회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:1:1:0.01:10 혼합물이고, 제조예 73은 털마삭줄 추출물:황련 추출물:회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 3:1:1:0.01:10 혼합물이고, 제조예 74는 털마삭줄 추출물:황련 추출물:회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:1:3:0.01:10 혼합물이고, 제조예 75는 털마삭줄 추출물:황련 추출물:회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:1:1:0.01:50 혼합물이고, 제조예 76은 털마삭줄 추출물:황련 추출물:회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 3:1:1:0.01:50 혼합물이고, 제조예 77은 털마삭줄 추출물:황련 추출물:회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:1:3:0.01:50 혼합물이고, 제조예 78은 털마삭줄 추출물:황련 추출물:회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:1:1:0.01:90 혼합물이고, 제조예 79는 털마삭줄 추출물:황련 추출물:회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 3:1:1:0.01:90 혼합물이고, 제조예 80은 털마삭줄 추출물:황련 추출물:회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:1:3:0.01:90 혼합물이다.

제조예 81은 털마삭줄 추출물:황련 추출물:회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:1:1:0.1:10 혼합물이고, 제조예 82는 털마삭줄 추출물:황련 추출물:회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 3:1:1:0.1:10 혼합물이고, 제조예 83은 털마삭줄 추출물:황련 추출물:회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:1:3:0.1:10 혼합물이고, 제조예 84는 털마삭줄 추출물:황련 추출물:회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:1:1:0.1:50 혼합물이고, 제조예 85는 털마삭줄 추출물:황련 추출물:회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 3:1:1:0.1:50 혼합물이고, 제조예 86은 털마삭줄 추출물:황련 추출물:회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:1:3:0.1:50 혼합물이고, 제조예 87은 털마삭줄 추출물:황련 추출물:회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:1:1:0.1:90 혼합물이고, 제조예 88은 털마삭줄 추출물:황련 추출물:회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 3:1:1:0.1:90 혼합물이고, 제조예 89는 털마삭줄 추출물:황련 추출물:회화나무 추출물:테트라아세틸피토스핑고신:바이탈 컴플렉스의 1:1:3:0.1:90 혼합물이다.

실험예 1: 시그날로좀의 세포 상처 회복 효과(피부 재생 효과) 실험- 세포 이동 분석(cell migration assay)

사람 섬유아세포를 12 웰 플레이트에 well당 10⁵개씩 씨딩(seeding)하여 90% 정도 자랄 때까지 1% 소태아혈청(FBS)을 함유한 DMEM(Dubelcco's Modified Eagle Medium; BRL, USA) 배지에서 배양하였다. 가는 팁을 이용해 일정 넓이로 바닥을 긁어 세포를 제거하고 제조예 1 내지 89를 각각 100ppm씩 첨가해 16시간 후에 세포가 자란 모습을 현미경으로 관찰하였다. 손상 1시간 경과 후와 제조예 1 내지 89의 처리 후 16시간 후 세포가 비어있는 넓이(세포 손상 면적)를 측정하고 하기 수학식 1를 이용하여 상대적인 상처 회복능력(%)을 계산하여 표 1에 나타내었다.

시료명	손상회복률(%)	시료명	손상회복률(%)	시료명	손상회복률(%)
제조예1	24.5	제조예31	36.1	제조예61	90
제조예2	22.7	제조예32	37.3	제조예62	90.7
제조예3	23.1	제조예33	38.3	제조예63	88.1
제조예4	26.8	제조예34	40	제조예64	88.3
제조예5	26.5	제조예35	41.9	제조예65	89.1
제조예6	31.7	제조예36	81.1	제조예66	90.1
제조예7	32.4	제조예37	81.7	제조예67	90.3
제조예8	31.6	제조예38	81.5	제조예68	90.4
제조예9	36.4	제조예39	83.7	제조예69	92.4
제조예10	37.1	제조예40	83.1	제조예70	92.7
제조예11	36.8	제조예41	82.9	제조예71	92.6
제조예12	28.1	제조예42	84.7	제조예72	91.1
제조예13	27	제조예43	84.1	제조예73	90
제조예14	26.9	제조예44	85	제조예74	90.5
제조예15	37.4	제조예45	83.8	제조예75	93.8
제조예16	36	제조예46	83	제조예76	93.7
제조예17	36.8	제조예47	82.9	제조예77	92.6
제조예18	41.1	제조예48	85.8	제조예78	95.7
제조예19	42	제조예49	86	제조예79	96.1
제조예20	41.7	제조예50	85.8	제조예80	95.4
제조예21	28.3	제조예51	88.4	제조예81	92.9
제조예22	28.4	제조예52	87.7	제조예82	93.4
제조예23	28	제조예53	88.3	제조예83	92.7
제조예24	36.4	제조예54	85.4	제조예84	95.8
제조예25	37.6	제조예55	85.6	제조예85	96.2
제조예26	37.7	제조예56	85	제조예86	96.4
제조예27	43	제조예57	87.8	제조예87	98.7
제조예28	43.1	제조예58	87.9	제조예88	98.4
제조예29	42.9	제조예59	88	제조예89	98.7
제조예30	35.5	제조예60	90.1	무처치	24.3

표 1에서 알 수 있듯이, DMEM 배지로만 처리한 대조군과 비교하여 상기 제조예 36 내지 89를 사용한 실험군에서는 세포 손상 면적이 감소하였으며, 특히 제조예 72 내지 89의 상처회복능이 우수함을 확인할 수 있었다. 따라서, 본 발명의 화장료 조성물은 세포 재생을 촉진시킬 수 있으며 피부 손상을 빠르게 회복시킬 수 있다.

실험예 2: 시그날로좀의 FGFR -1 및 FGFR -2 발현 촉진효과

사람의 각질형성세포를 6웰 플레이트에 접종하였다. 24시간 후 70-80%로 자란 세포의 배지를 Serum-free DMEM로 교체하고 5시간 배양하였다. 5시간 배양 후 제조예 1 내지 89를 0.1% 처리하였다. 비교예로 제조예 대신 용매(DMSO)를 처리하였다. 이후 16시간 추가배양한 뒤 PBS로 워싱하고 RNA prep kit(Qiagen, 독일)으로 total RNA를 추출한 후 UV 흡광도를 통해 RNA의 양을 표준화하고 FGFR1(FRF receptor1)과 FGFR2(FRF receptor2) 유전자의 발현량을 qRT-PCR을 이용하여 상대 정량하였다. 위 유전자의 발현량은 GAPDH를 통해 보정해주었다. 그 결과를 표 2에 나타냈다.

시료/ 유전자명	FGFR1 발현률(%)			시료/ 유전자명	FGFR2 발현률(%)
	0.01%	0.05%	0.10%		0.01%	0.05%	0.10%
제조예1	113.2	116.8	117.9	제조예1	104.1	105.7	106.1
제조예2	114.7	117.1	118.2	제조예2	104.8	105.9	106.8
제조예3	113.9	117.2	118.5	제조예3	105	106.1	107.1
제조예4	112.3	116.7	117.8	제조예4	104.8	105.1	106.2
제조예5	115.3	116.3	118	제조예5	105.6	105.4	106.7
제조예6	119.2	123	126.7	제조예6	107.9	109.8	112.3
제조예7	120.1	124.3	127.6	제조예7	108.1	110	114.1
제조예8	121.5	124.7	127.5	제조예8	108.3	110.4	113.8
제조예9	125.7	128.3	131	제조예9	112.3	115.7	121.2
제조예10	127.1	130.5	134.5	제조예10	113.1	115.4	121
제조예11	127.4	131.6	134.7	제조예11	113	116.1	120.4
제조예12	118.9	120	123.7	제조예12	105.7	108.7	112.4
제조예13	119.2	121.1	123.8	제조예13	106.1	109	111.8
제조예14	119.1	120.5	124.1	제조예14	107.4	109.2	112.7
제조예15	128.4	130.9	134.8	제조예15	111.4	114.3	118.2
제조예16	129.2	132.3	135.1	제조예16	112.1	114.8	118.1
제조예17	128.7	131.5	134.9	제조예17	112.3	115	118.4
제조예18	136.9	140.5	144.3	제조예18	117.1	120.1	123.7
제조예19	137.1	142	148.5	제조예19	116.5	120.4	123.3
제조예20	137.3	142.3	148.6	제조예20	117.3	120	124.1
제조예21	120.3	124.5	126.8	제조예21	108.4	112.8	119.7
제조예22	120	124.9	127	제조예22	109	113.4	120.3
제조예23	120.7	124.6	127.2	제조예23	109.1	113.1	120.7
제조예24	137.5	143.2	147.5	제조예24	117.4	123.4	128.4
제조예25	138.1	144	148.8	제조예25	118.1	123.3	128.9
제조예26	137.9	143.8	147.9	제조예26	117.8	124	128.3
제조예27	141.4	151.1	165.1	제조예27	123.5	130.1	144.2
제조예28	143.2	150.9	165.3	제조예28	123.7	130	144.1
제조예29	142.5	152.2	166	제조예29	124	121.4	148.8
제조예30	127.7	130.2	138.5	제조예30	106.4	110.5	118.4
제조예31	129.1	132.4	139.6	제조예31	107	111.2	122.6
제조예32	130.2	133.8	140.4	제조예32	108.1	110.8	127.7
제조예33	130.7	133.5	140.6	제조예33	107.5	112	124.9
제조예34	132.1	135.2	141.7	제조예34	109.4	114.6	127.8
제조예35	134.5	137.9	142.8	제조예35	110.1	118.3	132
제조예36	163.5	189.4	232.1	제조예36	140.1	171.4	215.5
제조예37	164.1	188.7	233.4	제조예37	142.3	170	215
제조예38	164.7	190.2	232.2	제조예38	141.6	170.6	214.8
제조예39	173.1	201.3	245.5	제조예39	155.4	183.5	226.4
제조예40	173.5	200.5	245.1	제조예40	155.3	183	226.1
제조예41	172.9	200.7	244.9	제조예41	154	183.7	227.1
제조예42	178.1	205.1	251.3	제조예42	162.7	190.4	238.4
제조예43	177.8	206.7	251.6	제조예43	162.1	191	238.1
제조예44	178.3	206.5	252	제조예44	161	190.7	238.7
제조예45	173.2	200.2	246.2	제조예45	150.2	187.5	235.4
제조예46	172.8	199.8	246.7	제조예46	150.4	188.4	235
제조예47	173.5	200.6	245.8	제조예47	151.7	188	234.8
제조예48	179.2	207.5	253.1	제조예48	160.4	194.7	243.1
제조예49	180.5	208	253.5	제조예49	162	193.7	243.3
제조예50	180.6	208.6	254	제조예50	161.7	193.4	244.1
제조예51	186.6	213.7	261.1	제조예51	170.4	199.7	255.4
제조예52	186.1	215.1	260	제조예52	169.8	200.7	254.8
제조예53	187.2	214.8	261.3	제조예53	168.9	199.4	255.2
제조예54	183.7	211.1	257.7	제조예54	164.4	194.4	249.4
제조예55	183.5	210	257.3	제조예55	163.2	194	249.2
제조예56	184.1	211.5	257.6	제조예56	163	193.8	249
제조예57	189.9	217.6	263.3	제조예57	171.4	202.7	260.1
제조예58	190.1	218	263.7	제조예58	171.2	203.1	259.4
제조예59	190	217.3	264.1	제조예59	170.6	203.4	259.7
제조예60	196.7	222.4	273.1	제조예60	180.1	215.4	272.3
제조예61	197	223.1	272.9	제조예61	179.4	214.1	272.7
제조예62	197.3	223.3	271.1	제조예62	179	214.2	273
제조예63	192.2	220.5	269.5	제조예63	178.4	211.7	270.3
제조예64	193.1	220.1	270	제조예64	179.2	211	269.7
제조예65	193	220.6	271	제조예65	178.3	211.4	268.8
제조예66	200.1	225.4	276.4	제조예66	188.4	220.1	282
제조예67	201.4	226.1	277.6	제조예67	188.6	219.4	282.3
제조예68	200.6	226.3	278	제조예68	187.1	218.7	281.4
제조예69	204.5	230.5	283.5	제조예69	198.2	233.1	290.3
제조예70	205.7	231	284	제조예70	195.4	223.5	290.4
제조예71	204.6	230.9	284.6	제조예71	196.2	224	291.4
제조예72	205.1	234.1	281.6	제조예72	193.8	221.7	296.5
제조예73	208.1	238.6	287.1	제조예73	197.2	225.6	300.1
제조예74	208.3	237.8	287.4	제조예74	197.6	226.1	301.4
제조예75	211.3	240.3	291.2	제조예75	208.4	235.7	308.7
제조예76	214.5	244.1	295.5	제조예76	211.4	241.2	315.4
제조예77	215.2	244.6	296.1	제조예77	211.6	242	315.6
제조예78	217.1	251.4	302.8	제조예78	215.8	246.8	319.9
제조예79	219.9	251.6	307.4	제조예79	220.4	252.1	324.5
제조예80	220.1	252	308.2	제조예80	219.7	251.9	325.1
제조예81	215.4	253.1	308.8	제조예81	223.7	256.6	329.4
제조예82	218.4	258.1	316.4	제조예82	226.1	260	334.6
제조예83	219	258.6	315.8	제조예83	227.2	261.5	335
제조예84	221.5	261.4	328	제조예84	233.1	267.7	340.1
제조예85	223	264.5	331.1	제조예85	237.8	272.4	345.6
제조예86	225.1	265.7	333.2	제조예86	238	273	346.2
제조예87	235.1	272.8	341.5	제조예87	252.6	280.1	352.4
제조예88	239	279.5	348.1	제조예88	257.8	285.1	358.4
제조예89	238.4	278.6	347.9	제조예89	256.9	286.3	358.6
무첨가	100	100	100	무첨가	100	100	100

표 2에서 알 수 있듯이, DMEM 배지로만 처리한 대조군과 비교하여 상기 제조예 36 내지 89를 사용한 실험군에서는 FGFR1 및 FGFR2의 발현이 증가하였으며, 특히 제조예 72 내지 89의 FGFR1 및 FGFR2 발현 증진효과가 우수함을 확인할 수 있었다. 따라서, 본 발명의 화장료 조성물은 피부장벽기능 유지와 피부의 상처치유과정에 중요한 역할을 하는 것으로 알려진 FGFR1 및 FGFR2 발현을 촉진시킬 수 있음을 확인하였다.

실험예 3: 시그날로좀의 DPPH 라디칼 소거능 분석

본 실험예 3는 제조예 1 내지 89의 항산화 효과를 측정하기 위해 DPPH법을 이용하여 항산화 효과(자유라디칼 소거율)를 측정하였다. DPPH법은 DPPH(2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl) 자유라디칼이라는 유리기를 사용하여 환원력에 의한 항산화 효과를 측정한다. 피검 물질에 의해 DPPH가 환원되어 흡광도가 감소하는 정도를 공시험액의 흡광도와 비교하여 파장 560nm에서 자유라디칼 소거율(%)을 측정한다. 사용한 시약으로서는 2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl 자유라디칼(Aldrich Chem. Co., MW=618.76) 0.1 mM 용액으로서 61.88 mg을 메탄올에 용해하여 100ml로 한다.

측정방법으로서,

① 96-웰 플레이트에 0.1 mM DPPH 용액 0.15 ml에 시료 용액 0.15ml를 가하여 빨리 교반하고 25℃에서 10분간의 배양을 개시한다.

② 그 후 560nm에서의 흡광도 St를 측정한다.

③ 시료 용액의 블랭크 (Blank)는 상기 0.1mM DPPH 용액 대신 메탄올을 사용하는 것을 제외하고는 상기 흡광도 St를 측정하는 때와 동일하게 조작하여 흡광도 So를 측정한다.

④ 공시험은 상기 시료 용액 대신 증류수를 사용하는 것을 제외하고는 상기 흡광도 St를 측정하는 때와 동일하게 조작하여 흡광도 Bt를 측정한다.

⑤ 공시험의 블랭크(Blank)는 상기 0.1mM DPPH 용액 대신 메탄올을 사용하고 상기 시료 용액 대신 증류수를 사용하는 것을 제외하고는 상기 흡광도 St를 측정하는 때와 동일하게 조작하여 흡광도 Bo를 측정한다.

자유라디칼 소거율(%)의 결과는 수학식 2에 의하여 산출하였으며, 결과는 하기의 표 3과 같다.

St : 시료용액의 자유라디칼 소거 후의 514nm에서의 흡광도

Bt : 공시험용액의 자유라디칼 소거 후의 514nm에서의 흡광도

So : 시료용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 514nm에서의 흡광도

Bo : 공시험용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 514nm에서의 흡광도

시료명	SC50(%)	시료명	SC50(%)	시료명	SC50(%)
제조예1	0.64	제조예31	0.52	제조예61	0.12
제조예2	0.62	제조예32	0.5	제조예62	0.12
제조예3	0.64	제조예33	0.5	제조예63	0.12
제조예4	0.64	제조예34	0.48	제조예64	0.14
제조예5	0.62	제조예35	0.44	제조예65	0.12
제조예6	0.6	제조예36	0.18	제조예66	0.1
제조예7	0.62	제조예37	0.16	제조예67	0.1
제조예8	0.6	제조예38	0.18	제조예68	0.1
제조예9	0.56	제조예39	0.14	제조예69	0.08
제조예10	0.54	제조예40	0.14	제조예70	0.08
제조예11	0.56	제조예41	0.12	제조예71	0.06
제조예12	0.58	제조예42	0.1	제조예72	0.1
제조예13	0.58	제조예43	0.1	제조예73	0.1
제조예14	0.56	제조예44	0.1	제조예74	0.08
제조예15	0.54	제조예45	0.18	제조예75	0.06
제조예16	0.52	제조예46	0.18	제조예76	0.06
제조예17	0.54	제조예47	0.18	제조예77	0.06
제조예18	0.52	제조예48	0.16	제조예78	0.04
제조예19	0.5	제조예49	0.14	제조예79	0.02
제조예20	0.5	제조예50	0.16	제조예80	0.02
제조예21	0.56	제조예51	0.14	제조예81	0.04
제조예22	0.56	제조예52	0.12	제조예82	0.04
제조예23	0.54	제조예53	0.12	제조예83	0.02
제조예24	0.5	제조예54	0.18	제조예84	0.01
제조예25	0.5	제조예55	0.16	제조예85	0.01
제조예26	0.52	제조예56	0.18	제조예86	0.01
제조예27	0.5	제조예57	0.16	제조예87	0.005
제조예28	0.48	제조예58	0.14	제조예88	0.005
제조예29	0.48	제조예59	0.14	제조예89	0.0025
제조예30	0.54	제조예60	0.12

DPPH 자유라디칼을 50% 소거하는데 필요한 시료의 농도인 SC₅₀을 확인한 결과, 제조예 36 내지 89가 우수한 항산화 효과를 보였고, 특히 제조예 72 내지 89가 월등히 우수한 항산화 효과를 보였다.

실험예 4: 시그날로좀의 아쿠아포린 3 생합성 촉진 실험

상기 제조예 1 내지 89에서 제조한 시료들의 아쿠아포린 3 생성 촉진 여부를 측정하기 위하여 다음과 같이 실험하였다. 인체 케라티노사이트(keratinocytes)를 24-웰 플레이트(Falcon, 미합중국)에 1× 10⁴ cell/well이 되도록 접종한 후에 하루동안 배양하여 세포를 안정화시킨 다음, 제조예 1 내지 89를 각각 0.01%, 0.05% 0.1%씩 처리하여 2일 동안 무혈청 배지에서 배양하였다. 배양 후 상등액을 취하여 아쿠아포린3 측정용 키트 (Aquaporin 3 ELISA KIT, Gill Blood Group, 미합중국)를 이용하여 460nm에서 흡광도를 비교하여 아쿠아포린 3의 생성 정도를 비교하여 각 시료의 아쿠아포린 생합성에 미치는 영향을 분석하였다. 아쿠아포린3 생성정도를 표 4에 나타내었다.

처리 농도 (중량%)	아쿠아포린3 생성정도 (460nm에서 흡광도)			처리 농도 (중량%)	아쿠아포린3 생성정도 (460nm에서 흡광도)
	0.01%	0.05%	0.10%		0.01%	0.05%	0.10%
제조예1	0.028	0.057	0.121	제조예46	0.291	0.653	1.237
제조예2	0.026	0.053	0.122	제조예47	0.28	0.65	1.235
제조예3	0.024	0.061	0.117	제조예48	0.301	0.748	1.285
제조예4	0.021	0.055	0.127	제조예49	0.307	0.756	1.281
제조예5	0.021	0.062	0.124	제조예50	0.298	0.767	1.273
제조예6	0.029	0.069	0.167	제조예51	0.324	0.876	1.352
제조예7	0.031	0.071	0.178	제조예52	0.311	0.885	1.355
제조예8	0.036	0.073	0.181	제조예53	0.309	0.865	1.361
제조예9	0.052	0.105	0.314	제조예54	0.288	0.672	1.241
제조예10	0.053	0.105	0.311	제조예55	0.279	0.677	1.244
제조예11	0.062	0.108	0.319	제조예56	0.283	0.669	1.238
제조예12	0.034	0.075	0.185	제조예57	0.311	0.682	1.262
제조예13	0.032	0.074	0.186	제조예58	0.307	0.688	1.267
제조예14	0.035	0.073	0.188	제조예59	0.321	0.684	1.271
제조예15	0.057	0.117	0.435	제조예60	0.355	0.702	1.301
제조예16	0.054	0.115	0.401	제조예61	0.346	0.711	1.31
제조예17	0.061	0.116	0.409	제조예62	0.357	0.721	1.308
제조예18	0.069	0.223	0.517	제조예63	0.354	0.808	1.314
제조예19	0.068	0.218	0.504	제조예64	0.361	0.811	1.325
제조예20	0.071	0.224	0.507	제조예65	0.358	0.814	1.311
제조예21	0.039	0.076	0.179	제조예66	0.417	0.927	1.457
제조예22	0.041	0.078	0.186	제조예67	0.421	0.912	1.451
제조예23	0.04	0.075	0.181	제조예68	0.422	0.924	1.443
제조예24	0.062	0.221	0.445	제조예69	0.457	1.05	1.49
제조예25	0.064	0.219	0.449	제조예70	0.458	1.135	1.493
제조예26	0.065	0.218	0.451	제조예71	0.463	1.157	1.51
제조예27	0.109	0.297	0.587	제조예72	0.587	1.207	1.577
제조예28	0.098	0.284	0.574	제조예73	0.588	1.206	1.581
제조예29	0.101	0.287	0.581	제조예74	0.592	1.212	1.585
제조예30	0.056	0.134	0.407	제조예75	0.683	1.311	1.631
제조예31	0.065	0.145	0.451	제조예76	0.672	1.314	1.622
제조예32	0.062	0.144	0.483	제조예77	0.673	1.312	1.627
제조예33	0.071	0.149	0.413	제조예78	0.583	1.142	1.681
제조예34	0.086	0.153	0.459	제조예79	0.591	1.147	1.695
제조예35	0.091	0.168	0.492	제조예80	0.581	1.151	1.684
제조예36	0.225	0.624	1.021	제조예81	0.669	1.323	1.693
제조예37	0.23	0.618	1.027	제조예82	0.675	1.317	1.694
제조예38	0.246	0.619	1.015	제조예83	0.681	1.326	1.687
제조예39	0.258	0.634	1.123	제조예84	0.689	1.289	1.713
제조예40	0.259	0.628	1.107	제조예85	0.695	1.312	1.722
제조예41	0.261	0.639	1.114	제조예86	0.693	1.324	1.718
제조예42	0.295	0.654	1.229	제조예87	0.812	1.458	1.912
제조예43	0.29	0.658	1.227	제조예88	0.798	1.467	1.921
제조예44	0.286	0.649	1.215	제조예89	0.805	1.466	1.917
제조예45	0.292	0.651	1.222	무첨가	0.121

상기 표 4의 결과에서 알 수 있듯이, 본 발명의 제조예 36 내지 89는 피부 각질형성세포에서의 아쿠아포린 3의 생합성을 촉진하는 것을 알 수 있다. 특히 제조예 72 내지 89의 아쿠아포린 3 생합성 촉진효과가 더욱 우수함을 확인하였다.

실험예 5: 시그날로좀의 피부 각질형성세포 분화촉진효과

사람의 각질형성세포를 6웰 플레이트에 접종하였다. 24시간 후 70-80%로 자란 세포의 배지를 Serum-free DMEM로 교체하고 5시간 배양하였다. 5시간 배양 후 제조예 1 내지 89를 0.1% 처리하였다. 비교예로 제조예 대신 용매(DMSO)를 처리하였다. 이후 16시간 추가배양한 뒤 PBS로 워싱하고 RNA prep kit(Qiagen, 독일)으로 total RNA를 추출한 후 UV 흡광도를 통해 RNA의 양을 표준화하고 각질형성 세포 분화의 마커인 필라그린(filaggrin), 인볼루크린(involucrin), 케라틴1, 케라틴10 유전자의 발현량을 qRT-PCR을 이용하여 상대 정량하였다. 위 유전자의 발현량은 GAPDH를 통해 보정해주었다. 그 결과를 표 5에 나타냈다.

시료/ 유전자명	mRNA 발현률(%)				시료/ 유전자명	mRNA 발현률(%)
	필라그린	인볼루크린	케라틴1	케라틴10		필라그린	인볼루크린	케라틴1	케라틴10
제조예1	102	107	104	106	제조예46	233	237	232	240
제조예2	103	105	103	104	제조예47	237	236	231	242
제조예3	102	106	105	103	제조예48	245	246	246	248
제조예4	105	105	107	104	제조예49	247	247	247	247
제조예5	112	113	113	111	제조예50	242	243	245	248
제조예6	109	108	107	110	제조예51	251	251	258	256
제조예7	116	111	110	112	제조예52	250	258	259	257
제조예8	110	109	112	110	제조예53	253	257	260	257
제조예9	115	116	116	118	제조예54	235	236	237	232
제조예10	116	118	118	122	제조예55	236	234	238	234
제조예11	113	120	116	120	제조예56	232	237	235	233
제조예12	123	126	120	122	제조예57	243	246	246	247
제조예13	124	124	122	124	제조예58	244	247	247	245
제조예14	126	128	123	124	제조예59	248	248	245	246
제조예15	134	135	134	137	제조예60	255	256	257	256
제조예16	136	137	136	138	제조예61	256	257	258	257
제조예17	131	133	136	137	제조예62	258	259	255	254
제조예18	145	141	145	142	제조예63	251	256	257	258
제조예19	143	142	143	144	제조예64	252	254	257	257
제조예20	144	141	142	145	제조예65	254	254	256	254
제조예21	123	124	123	124	제조예66	264	262	264	262
제조예22	124	126	127	126	제조예67	262	264	261	263
제조예23	123	127	125	127	제조예68	261	264	263	261
제조예24	131	132	135	136	제조예69	275	271	275	270
제조예25	134	134	136	137	제조예70	276	273	274	271
제조예26	132	135	133	134	제조예71	276	272	271	273
제조예27	146	142	143	144	제조예72	271	275	278	273
제조예28	147	143	142	145	제조예73	270	276	276	274
제조예29	143	142	143	143	제조예74	273	273	281	276
제조예30	125	126	125	123	제조예75	283	288	291	289
제조예31	128	129	129	127	제조예76	288	280	290	285
제조예32	131	132	133	131	제조예77	286	281	294	287
제조예33	132	132	132	131	제조예78	304	301	304	305
제조예34	135	136	138	134	제조예79	306	300	304	307
제조예35	138	140	142	138	제조예80	306	297	305	304
제조예36	212	210	208	211	제조예81	311	295	303	307
제조예37	208	214	216	220	제조예82	312	298	305	305
제조예38	211	216	214	225	제조예83	307	302	304	304
제조예39	220	222	224	232	제조예84	324	315	314	318
제조예40	225	224	220	234	제조예85	320	316	312	317
제조예41	224	223	211	237	제조예86	325	313	313	315
제조예42	234	237	231	243	제조예87	341	331	330	334
제조예43	236	235	230	244	제조예88	343	332	329	335
제조예44	232	234	234	242	제조예89	340	329	327	337
제조예45	232	235	234	241	무첨가	100	100	100	100

상기 표 5에 나타나는 바와 같이, 본 발명의 제조예 36 내지 89는 각질형성세포의 분화유도 단백질의 유전자발현을 촉진효과가 우수함을 확인하였고, 특히 제조예 72 내지 89의 각질형성세포의 분화유도 단백질의 유전자발현을 촉진효과가 더욱 우수함을 확인하였다.

실험예 6: 시그날로좀의 B16F1 멜라닌형성세포를 이용한 멜라닌 생성 억제효과

실험예 6은 상기 제조예 1 내지 89의 미백 효과를 확인하기 위해 B16F1 멜라닌 형성 세포에 대한 멜라닌 생성 억제 정도를 보고 미백 효과를 판단한 것이다. 실험예 6에서 사용된 B16F1 멜라닌 형성 세포는 마우스에서 유래한 세포균주이며, 멜라닌이라는 흑색 색소를 분비하는 세포이다.

이 세포의 인공 배양 중에 시료를 처리하여 멜라닌 흑색 색소가 감소하는 정도를 비교 평가하였다. 본 실험예에 사용된 B16F1 멜라닌 형성 세포는 ATCC(American Type Culture Collection)로부터 분양받아 사용하였다. B16F1 멜라닌 형성 세포의 멜라닌 생합성 억제 효과 측정은 다음과 같이 수행하였다.

B16F1 멜라닌 형성 세포를 6웰 플레이트에 각 웰당 2 X 10⁵ 농도로 분주하고 세포를 부착시킨 후 독성을 유발하지 않는 농도로 제조예 1 내지 89를 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 72시간 배양 후 세포를 트립신-EDTA로 떼어낸 후 세포수를 측정한 다음 원심분리하여 세포를 회수하였다. 세포 내 멜라닌의 정량은 로탄(Lotan: Cancer Res., 40: 3345-3350, 1980)의 방법을 약간 변형하여 실시하였다. 셀 펠릿을 PBS로 1회 세척한 후 균질화 버퍼액(50 mM 소듐 포스페이트, pH 6.8, 1% Triton X-100, 2 mM PMSF) 1ml를 첨가하여 5분간 와류하여 세포를 파쇄하였다. 원심분리(3,000 rpm, 10분)하여 얻은 세포 여액에 1N NaOH(10% DMSO)를 첨가하여 추출된 멜라닌을 용해한 후 마이크로 플레이트 판독기로 405 nm에서 멜라닌의 흡광도를 측정한 다음 멜라닌을 정량하여 시료의 멜라닌 생성 저해율(%)을 측정하였다. B16F1 멜라닌 형성 세포의 멜라닌 생성 저해율(%)은 하기 수학식 3에 의하여 계산하였으며, 그 결과를 표 6에 기재하였다.

A : 시료를 첨가하지 않은 웰의 멜라닌 양

B : 시료를 첨가한 웰의 멜라닌 양

처리 농도 (중량%)	멜라닌생성저해율(%)			처리 농도 (중량%)	멜라닌생성저해율(%)
	0.01	0.05	0.1		0.01	0.05	0.1
제조예1	3.42	5.74	6.22	제조예46	29.84	48.31	81.46
제조예2	5.13	5.31	6.3	제조예47	31.52	48.15	81.57
제조예3	3.75	5.25	5.86	제조예48	30.37	51.88	83.31
제조예4	3.91	5.8	5.93	제조예49	31.95	50.25	82.39
제조예5	3.76	5.83	6.87	제조예50	31.15	49.71	82.24
제조예6	3.8	5.9	6.92	제조예51	33.32	52.25	83.67
제조예7	4.12	6.11	6.71	제조예52	34.12	52.23	84.34
제조예8	4.26	6.26	6.4	제조예53	34.95	51.39	84.14
제조예9	6.76	9.41	12.41	제조예54	34.12	53.2	82.14
제조예10	6.43	9.51	12.57	제조예55	34.01	53.3	82.24
제조예11	6.21	10.15	13.15	제조예56	34.16	53.14	82.06
제조예12	6.86	10.05	14.15	제조예57	36.12	55.15	84.98
제조예13	6.97	9.98	15.29	제조예58	36.1	55.34	84.86
제조예14	6.7	10.21	16.65	제조예59	35.87	55.78	85.1
제조예15	11.12	13.97	19.65	제조예60	38.45	57.15	87.13
제조예16	10.86	14.11	19.16	제조예61	38.75	57.31	86.07
제조예17	10.98	15.69	20.59	제조예62	38.64	57.47	86.11
제조예18	14.65	20.15	27.58	제조예63	40.21	59.14	86.55
제조예19	15.16	19.34	28.15	제조예64	39.82	59.07	86.85
제조예20	14.59	19.17	27.35	제조예65	39.79	59.26	87.01
제조예21	6.9	13.41	16.14	제조예66	41.98	61.04	89.54
제조예22	6.72	13.75	17.13	제조예67	42.21	61.07	88.61
제조예23	6.88	14.15	17.45	제조예68	42.26	65.98	89.14
제조예24	11.08	15.29	20.34	제조예69	44.14	63.15	91.1
제조예25	11.67	16.65	19.16	제조예70	44.13	63.32	91.43
제조예26	11.37	15.16	20.11	제조예71	44.15	63.24	90.51
제조예27	15.29	25.01	30.17	제조예72	42.45	61.54	90.11
제조예28	16.65	25.34	30.89	제조예73	42.4	61.1	90.38
제조예29	15.16	24.98	31.76	제조예74	43.11	60.41	90.24
제조예30	16.11	20.41	29.63	제조예75	45.31	64.85	92.86
제조예31	16.75	22.15	30.15	제조예76	45.39	65.1	92.24
제조예32	17.59	23.87	31.45	제조예77	45.51	65.64	92.27
제조예33	17.45	22.98	31.27	제조예78	48.31	68.1	94.11
제조예34	17.84	23.54	32.41	제조예79	47.15	69.78	94.07
제조예35	18.17	24.85	33.1	제조예80	47.95	69.65	94.86
제조예36	27.35	44.35	78.25	제조예81	48.12	69.1	94.11
제조예37	28.51	45.12	78.65	제조예82	48.65	70.84	93.88
제조예38	28.12	44.58	77.45	제조예83	49.15	71.71	94.24
제조예39	30.14	48.15	81.01	제조예84	56.23	75.78	96.24
제조예40	29.87	48.34	80.89	제조예85	55.95	77.65	96.86
제조예41	29.58	48.27	81.24	제조예86	57.12	75.23	96.34
제조예42	31.27	49.74	82.54	제조예87	59.41	78.1	98.11
제조예43	32.84	49.31	82.46	제조예88	59.37	78.15	97.97
제조예44	31.72	50.15	82.11	제조예89	59.38	78.31	98.01
제조예45	30.27	49.04	81.54	알부틴200ppm	88.25

상기 표 6의 결과에서 알 수 있듯이, 본 발명에 따른 제조예 36 내지 89는 B16F1 멜라닌 형성 세포에서 멜라닌 생성을 저해하는 것을 확인할 수 있었다. 특히 제조예 72 내지 89가 B16F1 멜라닌 형성 세포에서 멜라닌 생성을 크게 저해하는 것을 확인할 수 있었다.

실험예 7: 시그날로좀의 히아루론산 생합성 촉진 효과

사람의 섬유아세포를 10% FBS가 포함된 DMEM에 배양하여 24웰 플레이트에 2x10⁴ cells/웰의 농도로 첨가하여 배양하였다. 24시간 후 70-80%로 자란 세포의 배지를 Serum-free DMEM로 교체하고 5시간 배양하였다. 5시간 배양 후 제조예 1 내지 89를 0.5% 처리하였다. 배양 3일 후 배지 내 총 히아루론산의 양을 Hyaluronan Quantikine ELISA Kit(R&D biosystem)을 이용하여 합성된 히아루론산의 양을 측정하고, 그 결과를 도 1에 나타내었다.

도 1의 결과에서 알 수 있듯이, 본 발명에 따른 제조예 36 내지 89는 섬유아세포에서 히아루론산의 생합성을 촉진하는 것을 확인할 수 있다. 특히 제조예 72 내지 89가 섬유아세포에서 히아루론산의 생합성을 더욱 크게 촉진하는 것을 확인할 수 있다.

실험예 8: 시그날로좀의 MMP -1 생성 억제 효과

본 실험예 8은 제조예 1 내지 89의 콜라겐 분해효소인 MMP-1 생성을 억제하는 효과를 측정한 것이다.

인간 정상 피부 세포인 섬유아세포 (한국 세포주 은행, 대한민국)를 48-웰 마이크로 플레이트(Nunc, 덴마크)에 각 웰당 1× 10⁶ 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지(Sigma, 미합중국) 및 37℃의 조건에서 24시간 동안 배양한 후 상기 제조예 1 내지 89를 첨가한 무혈청 DMEM 배지 및 대조군으로 혼합물이 포함되지 않은 무혈청 DMEM 배지에서 48시간 동안 추가로 배양하였다.

배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 MMP-1 분석 키트(Amersham, 미합중국)를 이용하여 새로 합성된 MMP-1의 양(ng/㎖)을 측정하고, 하기 수학식 4에 따라 MMP-1 생성 억제율(%)을 계산하였으며, 그 결과를 표 7에 나타내었다.

처리 농도 (중량%)	MMP-1 생성 억제율(%)			처리 농도 (중량%)	MMP-1 생성 억제율(%)
	0.10%	0.50%	1%		0.10%	0.50%	1%
제조예1	5.01	8.72	10.65	제조예46	29.71	47.3	82.11
제조예2	5.31	8.89	11.12	제조예47	29.86	47.16	82.47
제조예3	5.69	8.45	10.82	제조예48	31.42	49.54	84.14
제조예4	5.76	8.52	10.74	제조예49	31.26	49.75	84.64
제조예5	5.85	7.27	11.12	제조예50	31.17	49.27	84.71
제조예6	5.34	8.36	15.47	제조예51	33.54	51.34	86.48
제조예7	5.14	8.45	14.35	제조예52	33.67	51.56	86.37
제조예8	5.75	8.97	15.27	제조예53	33.16	51.7	86.98
제조예9	7.54	11.15	20.53	제조예54	28.14	50.35	83.54
제조예10	7.64	12.01	21.35	제조예55	28.34	51.11	83.6
제조예11	7.15	11.37	20.11	제조예56	27.99	51.67	83.74
제조예12	7.34	10.13	17.65	제조예57	29.18	54.15	85.65
제조예13	7.61	11.34	18.05	제조예58	29.57	55.34	85.76
제조예14	7.65	10.51	17.75	제조예59	30.1	55.4	87.67
제조예15	11.8	14.41	22.3	제조예60	32.45	57.37	87.36
제조예16	11.46	15.32	23.1	제조예61	32.67	57.33	87.57
제조예17	12.14	14.8	23.14	제조예62	32.55	58.17	87.74
제조예18	12.5	18.67	30.34	제조예63	32.75	58.34	89.64
제조예19	11.8	18.43	30.21	제조예64	33.57	57.37	89.77
제조예20	11.46	18.92	31.2	제조예65	33.25	57.13	89.37
제조예21	7.94	11.07	16.45	제조예66	36.15	62.54	91.57
제조예22	7.83	10.34	16.73	제조예67	36.75	62.11	91.62
제조예23	8.12	10.51	17.36	제조예68	36.61	62.6	91.1
제조예24	11.86	15.41	23.4	제조예69	40.56	65.75	93.27
제조예25	12.01	15.36	23.36	제조예70	40.61	65.37	93.71
제조예26	12.24	16.14	24.15	제조예71	40.53	65.64	93.11
제조예27	12.14	19.42	32.53	제조예72	48.87	76.48	90.33
제조예28	13.51	20.98	30.64	제조예73	48.43	79.85	90.87
제조예29	12.47	20.57	31.15	제조예74	49.08	76.38	89.47
제조예30	10.37	14.31	22.3	제조예75	54.34	74.58	92.54
제조예31	11.65	15.11	23.7	제조예76	53.13	75.05	92.12
제조예32	12.75	16.42	24.6	제조예77	55.19	75.54	92.44
제조예33	12.34	16.13	24.8	제조예78	58.75	78.21	94.25
제조예34	13.57	17.54	25.7	제조예79	59.11	77.14	94.87
제조예35	15.11	18.64	27.1	제조예80	59.16	78.68	94.69
제조예36	26.31	45.62	81.3	제조예81	59.21	78.18	96.11
제조예37	26.1	44.37	81.61	제조예82	58.57	78.65	96.15
제조예38	25.98	44.98	80.87	제조예83	59.38	78.54	96.07
제조예39	27.54	45.87	82.4	제조예84	62.57	82.65	96.87
제조예40	27.68	45.93	82.75	제조예85	62.48	82.56	96.94
제조예41	28.13	46.3	82.65	제조예86	61.35	81.21	96.85
제조예42	30.45	48.34	84.15	제조예87	65.42	82.33	98.14
제조예43	30.57	48.73	84.65	제조예88	65.11	82.4	98.64
제조예44	31.3	48.68	84.37	제조예89	65.71	82.71	98.7
제조예45	29.45	47.11	82.65	TGF-β 200nM	83.8

상기 표 7의 결과에서 보는 바와 같이, 본 발명에 따른 제조예 36 내지 89는 섬유아세포에서 MMP-1의 생성을 억제하는 것을 확인할 수 있다. 특히 제조예 72 내지 89가 섬유아세포에서 MMP-1의 생성을 더욱 크게 억제하는 것을 확인할 수 있다.

실험예 9. 시그날로좀의 콜라겐 합성 증진 효과

인간 정상 상피 세포인 섬유아세포를 48-웰 마이크로 플레이트에 각 웰당 1 x 10⁶ 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지에서 24시간 동안 배양하였다. 상기 제조예 1 내지 89를 첨가한 무혈청 DMEM 배지 및 대조군으로 혼합물이 포함되지 않은 무혈청 DMEM 배지에서 48시간 동안 추가로 배양하였다.　 배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 콜라겐 키트(Takara, 일본)를 이용하여 프로콜라겐(procollagen) 타입 I C-펩타이드 (PICP) 양을 측정하여 ng/㎖ 환산하였으며, 이에 의해 합성된 콜라겐 양을 측정하였다. 콜라겐 생합성 증가율(%)은 하기 수학식 5에 따라 계산하였으며, 그 결과를 표 8에 나타내었다.

처리 농도 (중량%)	콜라겐 생합성 증가율(%)			처리 농도 (중량%)	콜라겐 생합성 증가율(%)
	0.01%	0.05%	0.10%		0.01%	0.05%	0.10%
제조예1	3.1	4.7	8.9	제조예46	89.1	101.1	138.7
제조예2	4.1	4.9	9.2	제조예47	88.7	101.8	139.1
제조예3	3.2	5.1	8.8	제조예48	92.4	115.3	143.5
제조예4	2.8	4.6	9.4	제조예49	92.1	113.7	144.3
제조예5	2.1	4.3	9.6	제조예50	92.5	114.5	144.5
제조예6	4.2	6.2	11.1	제조예51	95.1	117.6	148.3
제조예7	4.7	6.3	11.4	제조예52	95.6	118.4	148.1
제조예8	4.6	6.2	11.2	제조예53	95.4	118.1	148
제조예9	5.7	8.3	14.4	제조예54	91.4	110.3	145.5
제조예10	5.6	8	14.1	제조예55	91.7	111.7	144.7
제조예11	5.9	7.9	13.7	제조예56	92	110.5	144.8
제조예12	11.7	16.9	22.7	제조예57	95.1	116.6	149.4
제조예13	11.6	16.6	23.3	제조예58	95.6	116.4	149.3
제조예14	12.3	16.8	24.4	제조예59	95.4	117.1	150.1
제조예15	14.8	20.1	31.8	제조예60	98.4	121.4	145.3
제조예16	15.1	21.3	31.5	제조예61	98.6	122.6	145.2
제조예17	15.3	20.6	31.8	제조예62	98.7	122	145.7
제조예18	23.3	32.8	45.5	제조예63	96.1	120.4	149.4
제조예19	24.4	33.7	45.3	제조예64	96.7	121.3	149.3
제조예20	24.4	33.6	46.1	제조예65	96.6	120.7	149.7
제조예21	12.4	17.3	24.4	제조예66	99.4	125.4	152.8
제조예22	13.1	17.4	25.5	제조예67	100.1	125.3	153.1
제조예23	13.4	17.4	24.5	제조예68	99.8	125.7	153.3
제조예24	16.7	23.8	32.2	제조예69	103.5	128.8	156
제조예25	16.9	23.3	32.1	제조예70	104.1	129	156.3
제조예26	17.3	24.3	33.3	제조예71	104.5	129.3	156.5
제조예27	25.5	34.8	46.3	제조예72	106.2	126.2	152.8
제조예28	24.5	35.1	46.4	제조예73	108.1	128.1	152.3
제조예29	25.6	35.3	47.6	제조예74	111.4	131.4	151.7
제조예30	14.3	26.8	34.8	제조예75	114.6	135.2	158.8
제조예31	15.9	29.1	37.1	제조예76	114.3	138.1	158.3
제조예32	16.7	31.4	39.4	제조예77	113.4	137.4	157.7
제조예33	16.1	30.8	38.7	제조예78	109.9	120.2	162.7
제조예34	18.3	32	41.6	제조예79	108.7	119.4	163.6
제조예35	21.4	34.7	43.9	제조예80	108.8	120.2	162.7
제조예36	81.3	90.4	131.7	제조예81	109.4	126.6	165.5
제조예37	80.7	91.2	132.6	제조예82	110.2	125.1	164.4
제조예38	81.5	91.9	131.8	제조예83	113.6	129.1	165.5
제조예39	83.7	94	137.6	제조예84	122.4	141.8	178.1
제조예40	84.1	94.8	137.1	제조예85	121.6	138.7	181.5
제조예41	83.9	95.1	138	제조예86	119.5	145.4	179.6
제조예42	88.3	97.6	141.7	제조예87	127	151.4	186.4
제조예43	88.7	97.9	142.6	제조예88	126.5	150.7	186.7
제조예44	88.5	98	142.3	제조예89	126.7	149.8	187.3
제조예45	88.3	103	138.4	TGF-β (200nM)	178.7

표 8에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따른 제조예 36 내지 89는 섬유아세포에서 콜라겐 생합성을 크게 증진시키는 것을 확인할 수 있다. 특히 제조예 72 내지 89가 섬유아세포에서 콜라겐 생합성을 더욱 크게 증진시키는 것을 확인할 수 있다.

실험예 10. 시그날로좀의 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제 효과

실험예 10는 제조예 1 내지 89의 자외선 조사에 의해 발현되는 염증성 사이토카인 발현 억제 효과를 평가하기 위한 것으로서, 사람의 표피 조직에서 분리한 섬유아세포(fibroblast)를 24-웰 시험 플레이트에 5X10⁴ 개씩 넣고 24시간 동안 부착시켰다. 각 웰을 PBS로 1회 세척하고 각 웰에 500 ㎕의 PBS를 넣었다. 이 섬유아세포에 자외선B(UVB) 램프(Model: F15TB, UV B 15W, Sankyo Dennki사 Japan)을 이용하여 자외선 10mj/cm²를 조사한 후 PBS를 덜어내고 세포 배양 배 (DMEM에 FBS가 첨가되지 않은 배지) 350 ㎕를 첨가하였다. 이에 평가하고자 하는 제조예 1 내지 89를 100ppm씩 처리한 후 5시간 동안 배양하였다. 배양 상층액을 150 ㎕을 취하여 IL-1α을 정량함으로써 염증성 사이토카인 발현 억제 효과를 판단하였다. IL-1α의 양은 효소 면역 분석법(Enzyme-linked immunosorbent assay)을 이용하여 정량화하였으며, 염증성 사이토카인(IL-1α)의 발현 억제율(%)은 하기 수학식 6에 의해 계산하였다.

Bo : 자외선 조사하지 않고 시료 처리하지 않은 웰의 IL-1α 생성량

Bt : 자외선 조사하고 시료 처리하지 않은 웰의 IL-1α 생성량

St : 자외선 조사하고 시료 처리한 웰의 IL-1α 생성량

처리 농도(중량%)	염증성 사이토 카인 발현 억제율 (%)	처리 농도(중량%)	염증성 사이토 카인 발현 억제율 (%)
제조예1	11.3	제조예46	74.3
제조예2	10.5	제조예47	73.9
제조예3	11.5	제조예48	75.6
제조예4	11.9	제조예49	75.4
제조예5	12.1	제조예50	75.9
제조예6	12.2	제조예51	78.3
제조예7	12.6	제조예52	78.6
제조예8	13.5	제조예53	78.7
제조예9	14.8	제조예54	75.1
제조예10	14.6	제조예55	75
제조예11	15.1	제조예56	75.3
제조예12	15.8	제조예57	77.3
제조예13	16.1	제조예58	77.1
제조예14	16.1	제조예59	77.4
제조예15	22.3	제조예60	79.6
제조예16	23.1	제조예61	79.3
제조예17	23	제조예62	79.4
제조예18	29.3	제조예63	78.1
제조예19	28.9	제조예64	78
제조예20	30.1	제조예65	78.3
제조예21	16.7	제조예66	80.5
제조예22	16.6	제조예67	80.1
제조예23	16.3	제조예68	80.4
제조예24	22.3	제조예69	82.1
제조예25	22.1	제조예70	82.4
제조예26	23.7	제조예71	82.7
제조예27	30.4	제조예72	80.3
제조예28	31.8	제조예73	80.7
제조예29	30.5	제조예74	80.4
제조예30	27.5	제조예75	82.6
제조예31	29.3	제조예76	82.4
제조예32	31.4	제조예77	82.3
제조예33	30.3	제조예78	84.2
제조예34	32.4	제조예79	84.5
제조예35	34.8	제조예80	84.7
제조예36	71.3	제조예81	84.3
제조예37	70.8	제조예82	84.1
제조예38	71.1	제조예83	83.9
제조예39	72.9	제조예84	85.9
제조예40	73.1	제조예85	86
제조예41	73.2	제조예86	86.1
제조예42	75.6	제조예87	89.3
제조예43	75.7	제조예88	89.1
제조예44	75.9	제조예89	89.7
제조예45	74.1	인도메타신 (100ppm)	78.35

상기 표 9의 결과에서 보는 바와 같이, 본 발명에 따른 제조예 36 내지 89가, 섬유아세포에서 자외선에 의한 염증성 사이토카인인 IL-1α의 생성을 크게 억제하는 것을 확인할 수 있다. 특히 제조예 72 내지 89가 섬유아세포에서 자외선에 의한 염증성 사이토카인인 IL-1α의 생성을 더욱 크게 억제하는 것을 확인할 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 제조예는 동일 농도에서 염증성사이토카인 발현 억제물질인 인도메타신보다도 우수한 염증성 사이토카인 발현율을 보임을 알 수 있었다.

실험예 11: 시그날로좀의 miR -378b 발현 억제효과

인간 정상 상피 세포인 섬유아세포를 48-웰 마이크로 플레이트에 각 웰당 1 x 10⁶ 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지에서 24시간 동안 배양하였다. 상기 제조예 1 내지 89를 첨가한 무혈청 DMEM 배지 및 대조군으로 제조예가 포함되지 않은 무혈청 DMEM 배지에서 48시간 동안 추가로 배양한 뒤 PBS로 워싱하였다. miRNA prep kit(Qiagen, 독일)으로 total miRNA를 추출한 후 UV 흡광도를 통해 miRNA의 양을 표준화하고 COL1A1의 발현을 조절하는 SIRT6의 발현을 억제하는 miRNA인 miR-378b의 발현량을 qRT-PCR을 이용하여 상대 정량하였다. 위 유전자의 발현량은 SnoRD6를 통해 보정해주었다. 그 결과를 표 10에 나타냈다.

시료/ 유전자명	miR-378b 발현률(%)			시료/ 유전자명	miR-378b 발현률(%)
	0.01%	0.05%	0.10%		0.01%	0.05%	0.10%
제조예1	92.4	80.3	85.4	제조예46	34.8	30	26.5
제조예2	100.4	100.1	97.8	제조예47	35	30.3	26.8
제조예3	100.7	99.7	98.4	제조예48	33.8	31	24.6
제조예4	100.5	100.2	98.1	제조예49	33.5	31.1	24.5
제조예5	98.4	99	97.3	제조예50	33.7	31.4	24.6
제조예6	90.7	82	83.1	제조예51	35.4	29.4	22.4
제조예7	98.4	97.5	95.4	제조예52	35.1	29.2	22
제조예8	91.1	82.4	84.5	제조예53	35.3	29	22.5
제조예9	90.7	81.5	82.1	제조예54	34.4	28.4	21.4
제조예10	88.4	83.5	78	제조예55	34.5	28.6	21.8
제조예11	88.3	80.7	81.3	제조예56	34.7	28.7	22
제조예12	89	82.3	84.1	제조예57	32.4	26.4	19.5
제조예13	98.4	97.4	95.5	제조예58	33	26.5	19.8
제조예14	99.1	97	94.3	제조예59	33.1	26	19.4
제조예15	86.8	81.4	84	제조예60	29	24	17.2
제조예16	98	96.7	94.5	제조예61	29.4	24.2	18
제조예17	97.8	96.5	84.2	제조예62	29.3	24.3	18.4
제조예18	87	83.4	78.9	제조예63	32.4	26.4	19.5
제조예19	81.5	78.7	72.5	제조예64	33	26.5	19.8
제조예20	88.4	83.1	77.4	제조예65	33.1	26	19.4
제조예21	94.2	90.5	84.4	제조예66	29	24	17.2
제조예22	98.4	95.3	93.4	제조예67	29.4	24.2	18
제조예23	96.9	95.7	94	제조예68	29.3	24.3	18.4
제조예24	90.1	86.8	81.5	제조예69	25.7	21.7	15.5
제조예25	97.4	94.4	93.1	제조예70	25	21	15.1
제조예26	89.2	86	82.8	제조예71	25.4	21.4	15.3
제조예27	87.1	85.1	78.4	제조예72	28.3	23.1	16.4
제조예28	82.3	76.7	70.5	제조예73	28.8	23	16.5
제조예29	88.4	84.9	79.7	제조예74	28.4	23.5	16.4
제조예30	93.7	91.2	87.4	제조예75	25.3	21	14.1
제조예31	93.5	90.1	87	제조예76	24.7	20.4	13.8
제조예32	93.4	90	86.4	제조예77	25.6	20.3	14
제조예33	92.8	89.4	86.3	제조예78	22	15.4	11.6
제조예34	92	89.7	86	제조예79	21.8	15.5	11.9
제조예35	92.4	89	85.8	제조예80	21.7	15.7	12.1
제조예36	38.4	35.4	30.2	제조예81	23.1	17.4	14.7
제조예37	38	35.8	30.1	제조예82	22.8	17.6	14
제조예38	38.2	35.7	29.4	제조예83	22.4	17.7	14.3
제조예39	36.8	34	27.5	제조예84	19	15.4	11.5
제조예40	36.5	33.2	27	제조예85	20.8	15.1	12
제조예41	36.7	33.4	27.3	제조예86	20.7	15	11.8
제조예42	34.8	32.1	25.3	제조예87	17.3	12.3	8.7
제조예43	35.2	32	25.4	제조예88	17.5	12.4	8.4
제조예44	34.4	32.2	25	제조예89	16.7	12	8.3
제조예45	34.5	30.4	26.7	무첨가	100	100	100

상기 표 10에 나타나는 바와 같이, 본 발명의 제조예 36 내지 89는 섬유아세포에서 miR-378b의 유전자발현을 억제하는 효과가 우수함을 확인하였고, 특히 제조예 72 내지 89의 섬유아세포에서 miR-378b의 유전자발현을 억제하는 효과가 더욱 우수함을 확인하였다.

실험예 12: 시그날로좀의 miR -181a 발현 촉진효과

인간 정상 상피 세포인 각질형성세포를 48-웰 마이크로 플레이트에 각 웰당 1 x 10⁶ 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지에서 24시간 동안 배양하였다. 상기 제조예 1 내지 89를 첨가한 무혈청 DMEM 배지 및 대조군으로 제조예가 포함되지 않은 무혈청 DMEM 배지에서 48시간 동안 추가로 배양한 뒤 PBS로 워싱하였다. miRNA prep kit(Qiagen, 독일)으로 total miRNA를 추출한 후 UV 흡광도를 통해 miRNA의 양을 표준화하고 필라그린, 인볼루크린, 케라틴 1, 케라틴 10과 같은 각질형성 관련 유전자의 발현 조절에 관여하는 miRNA인 miR-181a의 발현량을 qRT-PCR을 이용하여 상대 정량하였다. 위 유전자의 발현량은 SnoRD6를 통해 보정해주었다. 그 결과를 표 11에 나타냈다.

시료/ 유전자명	miR-181a 발현률(%)			시료/ 유전자명	miR-181a 발현률(%)
	0.01%	0.05%	0.10%		0.01%	0.05%	0.10%
제조예1	102.4	102.9	105.4	제조예46	160.1	185	246
제조예2	103	104.2	105.5	제조예47	162.5	186.1	246.4
제조예3	111.2	121.4	137.5	제조예48	171.6	194.7	258.4
제조예4	102	102.5	104	제조예49	171.5	200	258.9
제조예5	103.3	105.8	107.2	제조예50	170.3	198.3	259.1
제조예6	104.5	108	113.1	제조예51	181.4	201	268.4
제조예7	108	114.5	130.4	제조예52	180	200.7	268
제조예8	110	119.5	130	제조예53	182.2	199.4	267.9
제조예9	116.5	121	132.4	제조예54	183.3	200.4	265.6
제조예10	115.8	120.8	133.1	제조예55	182	198.7	265.9
제조예11	121.3	130.5	142	제조예56	182.6	199.3	266.1
제조예12	104.5	105.8	107.1	제조예57	191.3	212.7	279.4
제조예13	105.3	107.1	108.5	제조예58	191.2	213.3	279.1
제조예14	118	126.1	139.5	제조예59	192	213	280.4
제조예15	98.3	105.4	115.1	제조예60	198.2	229.4	292
제조예16	111.3	118.4	138.2	제조예61	197.3	230	292.7
제조예17	112.1	121.5	138.4	제조예62	197.5	231.1	292.4
제조예18	117.3	127.4	141.5	제조예63	191	211.7	281.3
제조예19	116.2	128.4	141.4	제조예64	191.3	211	281.2
제조예20	124.3	134.7	147.5	제조예65	191.5	211.4	281.3
제조예21	103.2	106.4	110.4	제조예66	200	231	298.1
제조예22	103	106.2	110.7	제조예67	201.3	230.4	298.5
제조예23	114.4	122	138.5	제조예68	201.7	230.3	298.6
제조예24	103	106.1	116.7	제조예69	211	243.3	301
제조예25	113.5	120.4	138.4	제조예70	211.1	243	302.1
제조예26	113.7	121.7	137.6	제조예71	211.5	242.1	301.8
제조예27	113.4	120.1	144.2	제조예72	211.3	252.7	310.4
제조예28	113.5	120	144.1	제조예73	211.2	253.3	308.1
제조예29	113	121.4	148.8	제조예74	209.7	253	309.3
제조예30	105.5	112.4	121.4	제조예75	228.2	261.4	321.3
제조예31	106.7	112.7	125.3	제조예76	227.3	260	322.6
제조예32	106.3	112.7	128.1	제조예77	227.5	261.7	322.2
제조예33	107.1	114.6	127.3	제조예78	231.8	251.7	329.7
제조예34	106.3	114.1	129.4	제조예79	231	251	330.1
제조예35	108.3	114.8	130.4	제조예80	231.4	254.2	328
제조예36	152.4	171.4	230.4	제조예81	241.4	261	325.4
제조예37	152.6	170	230	제조예82	240	260.4	326
제조예38	153.2	170.6	230.7	제조예83	240.3	260.3	325.4
제조예39	165.4	183.5	241.4	제조예84	253.1	283.3	337.2
제조예40	165.3	183	242.6	제조예85	253	283	338.9
제조예41	165	183.7	242.5	제조예86	253.7	282.1	338.5
제조예42	170.4	198.1	254.5	제조예87	273.1	293.3	347.2
제조예43	171.2	197.2	255.7	제조예88	273	293	348.9
제조예44	170.6	195.5	255.6	제조예89	273.7	292.1	348.5
제조예45	162.3	185.5	245.4	무첨가	100	100	100

상기 표 11에 나타나는 바와 같이, 본 발명의 제조예 36 내지 89는 각질형성세포에서 miR-181a의 유전자발현을 촉진하는 효과가 우수함을 확인하였고, 특히 제조예 72 내지 89의 각질형성세포에서 miR-181a의 유전자발현을 촉진하는 효과가 더욱 우수함을 확인하였다.

실험예 13: 시그날로좀의 miR -340 발현 촉진효과

인간 정상 멜라닌 형성세포를 48-웰 마이크로 플레이트에 각 웰당 1 x 10⁶ 세포가 되도록 접종하고, MGM 배지에서 24시간 동안 배양하였다. 상기 제조예 1 내지 89를 첨가한 무혈청 MGM 배지 및 대조군으로 제조예가 포함되지 않은 무혈청 MGM 배지에서 48시간 동안 추가로 배양한 뒤 PBS로 워싱하였다. miRNA prep kit(Qiagen, 독일)으로 total miRNA를 추출한 후 UV 흡광도를 통해 miRNA의 양을 표준화하고 멜라닌 형성에 관여하는 MITF 유전자의 발현 조절에 억제하는 miRNA인 miR-340의 발현량을 qRT-PCR을 이용하여 상대 정량하였다. 위 유전자의 발현량은 SnoRD6를 통해 보정해주었다. 그 결과를 표 12에 나타냈다.

시료/ 유전자명	miR-340 발현률(%)			시료/ 유전자명	miR-340 발현률(%)
	0.01%	0.05%	0.10%		0.01%	0.05%	0.10%
제조예1	102.2	102.8	106.4	제조예46	170.1	201.3	257
제조예2	115.2	123.3	136.5	제조예47	163.7	188.1	248.1
제조예3	103.4	104.4	107	제조예48	171.2	193.7	259.1
제조예4	103.1	103.8	105.4	제조예49	191.5	220	268.9
제조예5	103.4	106.1	107.7	제조예50	173.4	197.3	258.4
제조예6	112	119.8	130.5	제조예51	182.1	203.7	269.4
제조예7	108.8	117.5	131.4	제조예52	194.2	220.7	278
제조예8	104.2	108.1	115.1	제조예53	185.4	201.4	270.5
제조예9	116.1	121.2	133.4	제조예54	185.3	202.4	265.7
제조예10	115.8	120.9	133.1	제조예55	182.5	199.7	268.3
제조예11	116.4	121.8	133.6	제조예56	182.4	200.3	267.1
제조예12	105.5	106.7	108.4	제조예57	192.3	215.7	281.4
제조예13	118.1	126.5	139.1	제조예58	191.8	214.8	280.4
제조예14	105.8	107.3	108.3	제조예59	192.5	215.6	282.4
제조예15	111.9	119.4	138.3	제조예60	199.4	230.4	292.7
제조예16	112.3	121	138.6	제조예61	198.2	230.7	295
제조예17	100.3	105.9	114.1	제조예62	198.5	230.3	293.4
제조예18	117.4	127.5	142.5	제조예63	193	215.7	283.3
제조예19	116.5	127.1	142.1	제조예64	192.8	216	282.8
제조예20	116.1	128.2	142	제조예65	193.1	214.7	283.1
제조예21	104.2	107.4	112.4	제조예66	204.4	241	300.4
제조예22	114.5	122.3	137.5	제조예67	203.3	235.4	301.5
제조예23	103.1	106.5	110.8	제조예68	203.7	238.3	301.6
제조예24	113.6	121.4	138.2	제조예69	212.5	245.6	307.4
제조예25	113.9	122	137.5	제조예70	212.3	245.5	308.1
제조예26	103.5	106.4	116.2	제조예71	212.5	246.1	307.8
제조예27	113.3	121.1	144.7	제조예72	211.4	253.7	312.4
제조예28	113.7	121	144.3	제조예73	211.6	254.3	313.1
제조예29	113.6	120.8	144.5	제조예74	210	255.1	312.3
제조예30	106.5	111.4	122.1	제조예75	228.7	261.3	323.3
제조예31	106.6	112.5	123.5	제조예76	228.5	260.5	322.7
제조예32	107.2	112.9	124.6	제조예77	228.3	261.7	322.2
제조예33	107.3	113.6	126.3	제조예78	231.9	270.7	331.4
제조예34	108.4	114.2	128.4	제조예79	231	270	331.5
제조예35	108.7	114.7	129.4	제조예80	231.4	268.2	330.4
제조예36	151.4	181.4	230.1	제조예81	241.2	261.5	326.1
제조예37	159.6	191	235	제조예82	240.3	261.3	326.7
제조예38	1537	180.6	231.7	제조예83	240.7	262.3	326.3
제조예39	165.6	183.1	241.2	제조예84	253.4	282.3	338
제조예40	170.3	189	248.6	제조예85	252.7	282.4	338.5
제조예41	167	183.3	242.4	제조예86	254.2	282.9	337.8
제조예42	170.6	198.8	255.5	제조예87	273.2	293.5	349
제조예43	191.2	211.2	265.7	제조예88	273.6	298.4	350.1
제조예44	171.6	197.5	254.6	제조예89	272.5	298.6	351.4
제조예45	162.9	185.3	245.5	무첨가	100	100	100

상기 표 12에 나타나는 바와 같이, 본 발명의 제조예 36 내지 89는 멜라닌색소 형성세포에서 miR-340의 유전자발현을 촉진하는 효과가 우수함을 확인하였고, 특히 제조예 72 내지 89의 멜라닌색소 형성세포에서 miR-340의 유전자발현을 촉진하는 효과가 더욱 우수함을 확인하였다.

제형예 : 시그날로좀을 함유하는 화장료 조성물의 제조

제조예 1 내지 5를 아래의 표 13 내지 15와 같이 포함하는 화장료로서 제형예 1 내지 18 및 비교제형예 1 내지 8을 제조하였다. 또한, 혼합물(제조예 1 내지 5) 대신에 보습제로서 글리세린 및 1,3-부틸렌글리콜을 포함하는 화장료 조성물(비교제형예 9), 혼합물 대신에 주름개선 소재로 아데노신을 포함하는 화장료 조성물(비교제형예 10), 혼합물이나 보습제를 모두 포함하지 않는 화장료 조성물(비교제형예 11), 혼합물 대신에 미백소재로서 니아신아마이드를 함유하는 화장료 조성물(비교제형예 12), 혼합물 대신에 피부재생 소재로서 마데카소사이드를 함유하는 화장료 조성물(비교제형예 13)를 하기 표 15의 조성을 갖도록 제조하였다.

구분	성분	제형예1	제형예 2	제형예3	제형예4	제형예5	제형예6	제형예7	제형예8	제형예9	제형예10
A	제조예1	1	1	1	1	1	1	1	1	1	1
	제조예2	-	-	-	-	-	-	1	1	1	1
	제조예3	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
	제조예4	0.01	0.01	0.01	0.1	0.1	0.1	0.01	0.01	0.01	0.1
	제조예5	10	50	90	10	50	90	10	50	90	10
	EDTA-2Na	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02
	정제수	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100
B	세토스테아릴알코올	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7
	글리세릴스테아레이트	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2
	마이크로크리스탈린	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
	스쿠알란	2	2	2	2	2	2	2	2	2	2
	유동파라핀	1	1	1	1	1	1	1	1	1	1
	폴리솔베이트	0.8	0.8	0.8	0.8	0.8	0.8	0.8	0.8	0.8	0.8
	솔비탄스테아레이트	0.4	0.4	0.4	0.4	0.4	0.4	0.4	0.4	0.4	0.4
	BHT	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05
C	향,방부제	적량	적량	적량	적량	적량	적량	적량	적량	적량	적량

구분	성분	제형예11	제형예12	제형예13	제형예14	제형예15	제형예16	제형예17	제형예18	비교제형예1	비교제형예2	비교제형예3
A	제조예1	1	1	1	1	1	1	1	1	1	-	-
	제조예2	1	1	1	1	1	1	1	1	-	-	-
	제조예3	-	-	1	1	1	1	1	1	-	-	-
	제조예4	0.1	0.1	0.01	0.01	0.01	0.1	0.1	0.1	-	1	-
	제조예5	50	90	10	50	90	10	50	90	-	-	90
	EDTA-2Na	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02
	정제수	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100
B	세토스테아릴알코올	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7
	글리세릴스테아레이트	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2
	마이크로크리스탈린	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
	스쿠알란	2	2	2	2	2	2	2	2	2	2	2
	유동파라핀	1	1	1	1	1	1	1	1	1	1	1
	폴리솔베이트	0.8	0.8	0.8	0.8	0.8	0.8	0.8	0.8	0.8	0.8	0.8
	솔비탄스테아레이트	0.4	0.4	0.4	0.4	0.4	0.4	0.4	0.4	0.4	0.4	0.4
	BHT	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05
C	향,방부제	적량	적량	적량	적량	적량	적량	적량	적량	적량	적량	적량

구분	성분	비교제형예4	비교제형예5	비교제형예6	비교제형예7	비교제형예8	비교제형예9	비교제형예10	비교제형예11	비교제형예12	비교제형예13
A	제조예1	1	1	1	1	-	-	-	-	-	-
	제조예2	-	1	1	1	-	-	-	-	-	-
	제조예3	-	-	1	1	-	-	-	-	-	-
	제조예4	0.1	0.1	0.1	-	0.1	-	-	-	-	-
	제조예5	-	-	-	90	90	-	-	-	-	-
	글리세린	-	-	-	-	-	20	-	-	-	-
	1,3-부틸렌글리콜	-	-	-	-	-	20	-	-	-	-
	아데노신	-	-	-	-	-	-	0.04	-	-	-
	니아신아마이드	-	-	-	-	-	-	-	-	2	-
	마데카소사이드	-	-	-	-	-	-	-	-	-	5
	EDTA-2Na	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02
	정제수	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100
B	세토스테아릴알코올	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7
	글리세릴스테아레이트	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2
	마이크로크리스탈린	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
	스쿠알란	2	2	2	2	2	2	2	2	2	2
	유동파라핀	1	1	1	1	1	1	1	1	1	1
	폴리솔베이트	0.8	0.8	0.8	0.8	0.8	0.8	0.8	0.8	0.8	0.8
	솔비탄스테아레이트	0.4	0.4	0.4	0.4	0.4	0.4	0.4	0.4	0.4	0.4
	BHT	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05
C	향,방부제	적량	적량	적량	적량	적량	적량	적량	적량	적량	적량

실험예 14: 시그날로좀의 피부장벽기능 개선효과

상기 제형예 1 내지 18 및 비교제형예의 피부장벽기능 개선효과를 평가하였다. 20세 이상 성인 남녀 280명을 무작위로 10 명씩 28개 그룹 (1 내지 28그룹)으로 나눈 후, 280명의 전박에 1.0% SLS 수용액 20ul를 finn-chamber 적용하여 16시간 첩포함으로써 피부장벽기능을 일시적으로 손상시켰다. 그 후 1 내지 18 그룹에는 제형예 1 내지 18의 화장료 조성물을, 19 내지 26그룹에는 비교제형예 1 내지 8의 화장료 조성물을, 27그룹에는 보습제로서 글리세린 및 1,3-부틸렌글리콜을 포함하는 화장료 조성물(비교제형예 9), 28그룹에는 혼합물 및 보습제를 포함하지 않는 화장료 조성물(비교제형예 11)을 각각 1일 2회씩 1주간 도포하게 하였다. 피부장벽기능 개선효과는 SLS 첩포전, 첩포후, 제형도포후 7일간 매일 경피수분손실량(Transepidermal Water Loss; TEWL)을 측정하였으며 결과를 표 16에 나타내었다.

	시험전	SLS 첩포후	Day1	Day2	Day3	Day4	Day5	Day6	Day7
제형예 1	6.7	22.4	18.6	16.5	13.3	10.5	9.1	7.6	6.5
제형예 2	6.6	22.3	18.4	16.3	12.9	10.1	9.2	7.6	6.4
제형예 3	6.6	22.4	18.3	16	12.1	9.6	8.6	7.2	6.4
제형예 4	6.7	22.4	18.2	16.1	12.2	9.4	8.5	7.3	6.5
제형예 5	6.5	22.3	17.3	15.8	11.6	9	8.1	7.1	6.4
제형예 6	6.7	22.1	17.1	15.6	10.8	8.8	7.8	6.9	6.5
제형예 7	6.7	22.1	17.5	15.4	11.3	8.8	8.2	6.8	6.6
제형예 8	6.7	22.2	17.4	15.4	10.7	8.4	8	6.8	6.6
제형예 9	6.5	22.3	17.4	15	10.4	8.9	7.5	6.7	6.7
제형예 10	6.8	22.4	17.5	15.1	10.5	8.5	7.8	6.7	6.6
제형예 11	6.8	22.3	17.3	14.6	10.2	8.6	7.1	6.6	6.5
제형예 12	6.7	22.3	16.5	14.3	9.2	8	6.9	6.5	6.6
제형예 13	6.7	22.4	16.3	12.9	8.9	6.7	6.8	6.6	6.5
제형예 14	6.5	22.1	16.1	12.3	8.5	6.7	6.7	6.7	6.5
제형예 15	6.5	22.1	16	11.8	8.3	6.6	6.7	6.5	6.5
제형예 16	6.5	22.4	16.2	12.1	8.4	6.6	6.6	6.5	6.5
제형예 17	6.5	22.4	16.1	11.7	8.2	6.6	6.5	6.7	6.4
제형예 18	6.8	22.3	15.8	11.2	7.5	6.4	6.5	6.6	6.4
비교제형예1	6.7	22.3	20.5	19.1	15.4	13.7	12.1	11.3	7.9
비교제형예2	6.8	22.1	20.3	19	15.5	13.4	12	11.1	8
비교제형예3	6.7	22.4	19.8	18.3	16.5	12.9	11.3	10.1	7.4
비교제형예4	6.5	22.1	19.5	18.1	16.2	12.4	11	9.8	7.3
비교제형예5	6.7	22.3	18.5	17.2	15.4	11.4	10.3	8.1	7
비교제형예6	6.7	22.3	18.1	16.7	14.6	10.9	9.7	7.2	6.7
비교제형예7	6.7	22.4	17.2	15.1	12.8	10.1	8.6	7	6.4
비교제형예8	6.7	22.3	17.3	15.3	12.4	10.3	8.4	6.9	6.4
비교제형예9	6.5	22.1	18.6	13.2	9.3	6.9	6.5	6.4	6.6
비교제형예11	6.5	22.1	20.7	19.3	18.5	17.3	15.7	12.6	10.4

상기 표 16에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따른 제형예 1 내지 18을 도포한 부위가 비교제형예 1 내지 8에 비해 더 빠르게 장벽기능을 회복시키는 것을 확인할 수 있었다.

실험예 15: 시그날로좀의 보습 효과

상기 제형예 1 내지 18의 화장료 조성물에 대한 임상 보습 효과를 다음과 같이 측정하였다. 설문 조사를 통하여 피부가 건조하다고 느끼는 건강한 성인 남녀 280명을 무작위로 10 명씩 28개 그룹(1 내지 28그룹)으로 나눈 후, 1 내지 18그룹에는 제형예 1 내지 18의 화장료 조성물을, 19 내지 26그룹에는 비교제형예 1 내지 8의 화장료 조성물을, 27그룹에는 보습제로서 글리세린 및 1,3-부틸렌글리콜을 포함하는 화장료 조성물(비교제형예 9), 28그룹에는 혼합물 및 보습제를 포함하지 않는 화장료 조성물(비교제형예 11)을 각각 1일 2회씩 1주간 도포하게 하였다. 보습 효과는 실사용 시험 시작 후부터 매 2주간, 그리고 종료 후의 개선 효과를 Corneometer CM 820 (Corage +Khazaka, Germany)를 이용하여 평가하였다. 실험 결과는 하기 표 17에 나타내었다.

구분	사용 전	사용 2주 후	사용 4주 후	구분	사용 전	사용 2주 후	사용 4주 후
제형예 1	21.4	31.9	43.1	제형예 15	21.7	41.8	54.7
제형예 2	23.5	32.5	43.3	제형예 16	22.5	41.3	55.9
제형예 3	22.9	32.3	44.6	제형예 17	21.8	42.3	57.5
제형예 4	22.4	32.7	45.1	제형예 18	21.7	43.5	59.8
제형예 5	22.3	34.1	46	비교제형예 1	23.5	25.3	29.2
제형예 6	21.6	36	47.2	비교제형예 2	22.1	25.4	29.4
제형예 7	21.8	36.2	47.0	비교제형예 3	23.3	25.2	30.2
제형예 8	22	36.3	47.8	비교제형예 4	22.2	25.6	30.5
제형예 9	23.1	36.7	48.7	비교제형예 5	23.5	26.7	31.3
제형예 10	22.5	36	48.1	비교제형예 6	21.4	27.9	32.1
제형예 11	22	36.9	49.3	비교제형예 7	23.3	28.5	33.5
제형예 12	23.1	37.1	51.2	비교제형예 8	22.2	28.3	33.4
제형예 13	22.5	39.1	52.5	비교제형예 9	23.3	40.1	52.1
제형예 14	21.8	40.5	53.6	비교제형예 11	22.2	24.8	23.8

상기 표 17에서 알 수 있는 바와 같이, 일반 다른 보습제를 함유한 화장료(비교제형예 9)와 비교하여도 본 발명에 따른 제형예 1 내지 18가 보습효과가 우수함을 확인할 수 있었다.

실험예 16: 시그날로좀의 미백효과

본 발명의 혼합물을 함유하는 화장료의 피부 미백효과에 대한 임상실험을 실시하였다. 임상시험은 각 화장료의 실제 사용 테스트를 통하여 평가하였다.

280명의 여성(30세 - 50세)을 대상으로 무작위로 10 명씩 28개 그룹(1 내지 28그룹)으로 나눈 후, 1 내지 18 그룹에는 제형예 1 내지 18의 화장료 조성물을, 19 내지 26 그룹에는 비교제형예 1 내지 8의 화장료 조성물을, 27 그룹에는 혼합물 대신에 보습제로서 글리세린 및 1,3-부틸렌글리콜을 포함하는 제형(비교제형예 9), 28그룹에는 혼합물 대신에 니아신아마이드 2중량%로 대체한 제형(비교제형예 12)을 각각 1일 2회씩 4주간 안면에 도포하게 하였다. 얼굴 양쪽면을 사용하여 Chromameter (Minolta CR300)로 밝기(L*)를 측정한 뒤 4주 후의 미백 효과를 확인하였다.　미백 효과 결과는 하기의 표 18에 나타내었다.

구분	측정값(L*)			구분	측정값(L*)
	사용 전	사용 2주 후	사용 4주 후		사용 전	사용 2주 후	사용 4주 후
제형예 1	55.8	58.7	62.1	제형예 15	55.6	64	68.2
제형예 2	55.6	58.8	62	제형예 16	55.6	64.1	68.6
제형예 3	55.7	59.3	62.5	제형예 17	55.9	64.5	69.2
제형예 4	55.6	59.5	62.7	제형예 18	55.4	65.2	69.9
제형예 5	55.5	60.7	63.5	비교제형예 1	55.6	56.7	57.8
제형예 6	55.4	61.2	64.2	비교제형예 2	55.7	56.5	57.7
제형예 7	55.8	61.4	64.3	비교제형예 3	55.6	56.9	58
제형예 8	55.1	61.6	64.9	비교제형예 4	55.5	57.1	58.2
제형예 9	55.4	61.3	65.6	비교제형예 5	55.6	57.3	58.6
제형예 10	55.6	61.1	65.3	비교제형예 6	55.2	57.7	58.9
제형예 11	55.7	61.7	66.1	비교제형예 7	55.4	57.8	59.1
제형예 12	55.6	62.3	66.5	비교제형예 8	55.4	57.8	59.3
제형예 13	55.7	63.4	67.2	비교제형예 9	55.1	55.4	55.2
제형예 14	55.5	63.5	67.7	비교제형예 12	55.2	60.4	64.1

상기 표 18에 나타낸 바와 같이, 미백성분을 함유한 화장료(비교제형예 12)와 비교하여도 본 발명의 혼합물을 함유한 화장료(제형예 1 내지 18)의 미백 효과가 우수함을 확인할 수 있었다.

실험예 17 : 시그날로좀의 피부 탄력 개선 효과 측정

실험예 17은 본 발명의 혼합물을 포함하는 제형예 1 내지 18과 비교제형예 1 내지 8과, 혼합물 대신에 보습제를 넣은 비교제형예 9에 따른 화장료 조성물의 피부 탄력 개선 효과를 알아보기 위하여, 30~40대의 탄력이 감소한 여성 270명을 대상으로 측정하였다. 10명씩 27개 그룹으로 나눈 뒤, 1 내지 18그룹에는 제형예 1 내지 18을, 19 내지 26그룹에는 비교제형예 1 내지 8을 그리고 27그룹에는 비교제형예 9를 안면에 매일 아침, 저녁으로 2회씩 12주간 도포하게 한 후, 8주 후 피부 탄력을 측정하였다. 얼굴 부위의 탄력을 cutometer SEM575 (MPA 580, Courage+Khazaka GmbH, Germany)를 이용하여 측정하였으며, 피부 탄력을 나타내는 R2(biological elasticity)를 도포 전과 도포 후를 측정한 뒤 개선도(%)로 평가하였다. 그 결과는 하기 표 19에 나타내었으며, 결과는 각 군에 대한 개선도의 평균치이다.

실험제품	피부 탄력 개선도(%)	실험제품	피부 탄력 개선도(%)	실험제품	피부 탄력 개선도(%)
제형예 1	29.8	제형예 10	33.5	비교제형예 1	11.4
제형예 2	29.9	제형예 11	34.2	비교제형예 2	11.7
제형예 3	30.2	제형예 12	34.9	비교제형예 3	11.1
제형예 4	30.4	제형예 13	34.6	비교제형예 4	12.1
제형예 5	31.1	제형예 14	35.1	비교제형예 5	12.5
제형예 6	31.8	제형예 15	35.7	비교제형예 6	12.8
제형예 7	31.7	제형예 16	35.4	비교제형예 7	11.2
제형예 8	32.6	제형예 17	36.2	비교제형예 8	11.8
제형예 9	33.4	제형예 18	37.6	비교제형예 9	6.3

상기 표 19에 나타난 바와 같이, 혼합물이 함유된 제형예 1 내지 18은 비교제형예 9에 비하여 피부 탄력이 매우 향상됨을 알 수 있었다.

실험예 18: 시그날로좀의 피부 주름 개선효과

본 발명의 혼합물을 함유하는 화장료의 피부 주름 개선효과에 대한 임상실험을 실시하였다. 임상시험은 각 화장료의 실제 사용 테스트를 통하여 평가하였다.

280 의 여성(30세 - 50세)을 대상으로 실험군을 각각 10명씩 28개의 그룹으로 무작위로 나눈 뒤, 1 내지 18 룹에는 제형예 1 내지 18을, 19 내지 26그룹에는 비교제형예 1 내지 8을, 27그룹에는 혼합물 대신에 보습제로서 글리세린 및 1,3-부틸렌글리콜을 포함하는 제형(비교제형예 9)을, 28그룹에는 혼합물을 아데노신 0.04 중량%로 대체한 제형(비교제형예 10)을 매일 2회 8주간 도포한 뒤, 얼굴 양쪽면을 사용하여 8주 후의 주름 개선 효과를 육안 관찰 및 기기측정(cutometer SEM 575, C+K Electronic Co., Germany)을 통하여 평가하였으며, 실험 결과는 하기의 표 20에 나타낸 바와 같다.

	주름 개선 효과			유효율(%)
	우수	약간	없음
제형예 1	6	6	8	60
제형예 2	6	6	8	60
제형예 3	7	5	8	60
제형예 4	8	5	7	65
제형예 5	10	3	7	65
제형예 6	10	4	6	70
제형예 7	11	3	6	70
제형예 8	12	3	5	75
제형예 9	13	3	4	80
제형예 10	14	2	4	80
제형예 11	14	3	3	85
제형예 12	15	2	3	85
제형예 13	15	3	2	90
제형예 14	16	2	2	90
제형예 15	16	3	1	95
제형예 16	16	3	1	95
제형예 17	17	2	1	95
제형예 18	19	1	0	100
비교제형예 1	2	2	16	20
비교제형예 2	2	3	15	25
비교제형예 3	3	2	16	20
비교제형예 4	4	2	15	25
비교제형예 5	4	3	14	30
비교제형예 6	6	2	14	30
비교제형예 7	6	5	13	35
비교제형예 8	5	6	13	35
비교제형예 9	1	2	17	15
비교제형예 10	10	6	4	80

상기 표 20의 결과에서도 알 수 있듯이, 본 발명의 혼합물을 함유한 제형예 1 내지 18의 화장료 조성물은 보습제를 함유하는 비교제형예 9에 비하여 약 3.0 4.0배 높은 주름개선 효과를 보여주었다. 또한, 주름 개선 효과가 있는 것으로 알려진 아데노신을 함유하는 비교제형예 10의 화장료와 유사한 결과가 나타났다.

실험예 19: 시그날로좀의 진피치밀도 개선 효과 측정

본 발명의 혼합물을 함유하는 화장료의 진피치밀도 개선효과에 대한 임상실험을 실시하였다. 임상시험은 각 화장료의 실제 사용 테스트를 통하여 평가하였다.

280명의 여성(30세 - 50세)을 대상으로 실험군을 각각 10명씩 28개의 그룹으로 나눈 뒤, 1 내지 18그룹에는 제형예 1 내지 18를, 19 내지 26 그룹에는 비교제형예 1 내지 8을, 27그룹에는 혼합물을 아데노신 0.04 중량%로 대체한 제형(비교제형예 10)을, 28그룹에는 혼합물 및 보습제를 포함하지 않는 화장료 조성물(비교제형예 11)을 1일 2회 4주간 얼굴에 도포 후, 얼굴 양쪽면을 사용하여 4주 후의 진피치밀도 개선 효과를 SkinScanner DUBcutis(tpm (terbana pro medicum), Luneburg, Germany)를 이용한 기기평가를 통해 확인하였다. 진피치밀도 증가율은 하기의 수학식 7에 따라 계산하였으며 진피치밀도 개선 효과 결과는 하기의 표 21에 나타내었다.

실험제품	진피치밀도 증가율(%)	실험제품	진피치밀도 증가율(%)
제형예 1	25.7	제형예 15	34.1
제형예 2	26.3	제형예 16	35.2
제형예 3	26.8	제형예 17	36.6
제형예 4	27	제형예 18	38.7
제형예 5	27.6	비교제형예 1	7.6
제형예 6	28.4	비교제형예 2	7.5
제형예 7	28.7	비교제형예 3	8.1
제형예 8	29.2	비교제형예 4	8.3
제형예 9	29.9	비교제형예 5	9.2
제형예 10	29.4	비교제형예 6	10.6
제형예 11	30.1	비교제형예 7	12.1
제형예 12	30.7	비교제형예 8	12.3
제형예 13	32.2	비교제형예 10	27.8
제형예 14	33	비교제형예 11	3.5

상기 표 21에 나타난 바와 같이, 혼합물이 함유된 제형예 1 내지 18은 비교제형예에 비하여 피부 진피치밀도가 매우 개선됨을 알 수 있었다.

실험예 20: 시그날로좀의 피부 재생 및 상처 치유 효과

상기 제형예 1 내지 18의 화장료를 사용한 경우 피부 재생 및 상처 치유 개선 정도의 차이를 비교하였다. 구체적으로 레이저 시술 및 박피 시술을 받은 사람 280명을 대상으로 실험군을 각각 10명씩 28개의 그룹으로 나눈뒤, 1 내지 18그룹에는 제형예 1 내지 18을, 19 내지 26 그룹에는 비교제형예 1 내지 8을, 27그룹에는 혼합물 대신에 보습제로서 글리세린 및 1,3-부틸렌글리콜을 포함하는 제형(비교제형예 9)을, 28그룹에는 혼합물을 마데카소사이드 5중량%로 대체한 제형(비교 제형예 13)을 1일 2회 1주일 간 얼굴에 도포하도록 하였다. 이후 피부 재생 및 상처 치유 개선 정도에 대한 만족도를 조사하였으며, 그 결과를 하기 표 22에 나타내었다.

구분	피부재생 및 상처치유 만족도(%)
	매우만족	만족	보통	약간 불만족	불만족
제형예 1	35	30	35	0	0
제형예 2	35	35	30	0	0
제형예 3	40	35	25	0	0
제형예 4	40	40	20	0	0
제형예 5	45	40	15	0	0
제형예 6	45	45	10	0	0
제형예 7	40	45	15	0	0
제형예 8	45	40	10	0	0
제형예 9	50	35	15	0	0
제형예 10	50	30	20	0	0
제형예 11	50	35	15	0	0
제형예 12	50	40	10	0	0
제형예 13	65	25	10	0	0
제형예 14	70	20	10	0	0
제형예 15	75	20	5	0	0
제형예 16	75	25	0	0	0
제형예 17	80	15	5	0	0
제형예 18	85	15	0	0	0
비교제형예 1	10	25	55	10	5
비교제형예 2	10	25	50	10	5
비교제형예 3	15	25	50	10	0
비교제형예 4	15	25	50	5	5
비교제형예 5	15	30	45	10	0
비교제형예 6	20	25	50	5	0
비교제형예 7	20	30	45	5	0
비교제형예 8	20	30	50	0	0
비교제형예 9	15	10	45	15	15
비교제형예 13	65	20	15	0	0

상기 표 22의 결과에서도 알 수 있듯이, 본 발명의 혼합물을 함유한 제형예 1 내지 18의 화장료 조성물은 보습제를 함유하는 비교제형예 9에 비하여 높은 피부 재생 및 상처 치유 개선 정도에 대한 만족도를 보였다. 또한, 상처치유 효과가 있는 것으로 알려진 마데카소사이드를 함유하는 비교제형예 13의 화장료와 유사한 결과가 나타내었다.

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (14)

1. 털마삭줄 추출물, 회화나무 추출물 및 황련 추출물로 구성된 군에서 선택된 1종 이상의 식물 추출물, 테트라아세틸피토스핑고신 및 바이탈 콤플렉스의 혼합물을 포함하는 시그날로좀을 유효성분으로 함유하고,
   상기 바이탈 콤플렉스는 글라이신, 세린, 글루타민, 아스파틱애씨드, 류신, 라이신, 알지닌, 타이로신, 프롤린, 이소류신, 히스티딘, 시스틴, 메치오닌, 트립토판, 트레오닌, 발린, 페닐알리닌, 티아민에이치씨엘(B1), 리보플라빈(B2), 나이아신아마이드(B3), 판토테닉애씨드(B5), 피리독살5-포스페이트(B6), 폴릭애씨드(B9), 피루빅애씨드, 이노시톨, 페녹시에탄올, 소듐설페이트, 마그네슘설페이트, 포타슘설페이트, 글루코오스 및 정제수를 포함하는 복합체인, 화장료 조성물.
2. 삭제
3. 제1항에 있어서,
   상기 화장료 조성물은 피부 주름 개선 용도인 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
4. 제1항에 있어서,
   상기 화장료 조성물은 피부 탄력 개선 용도인 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
5. 제1항에 있어서,
   상기 화장료 조성물은 피부 장벽 기능 개선 용도인 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
6. 제1항에 있어서,
   상기 화장료 조성물은 항산화 용도인 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
7. 제1항에 있어서,
   상기 화장료 조성물은 피부 보습 용도인 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
8. 제1항에 있어서,
   상기 화장료 조성물은 피부 미백 용도인 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
9. 제1항에 있어서,
   상기 화장료 조성물은 항염 용도인 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
10. 제1항에 있어서,
    상기 화장료 조성물은 세포신호 전달 촉진을 통해 피부 재생 및 상처 치유 개선 용도인 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
11. 제10항에 있어서,
    상기 화장료 조성물의 세포신호 전달은 인간 정상 상피세포인 각질형성세포의 FGF receptor2의 발현 증가를 통해 피부 재생 및 상처 치유 개선 용도인 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
12. 제1항에 있어서,
    상기 바이탈 콤플렉스는 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.0001 내지 95.0 중량% 함유되는, 화장료 조성물.
13. 제1항에 있어서,
    상기 테트라아세틸피토스핑고신은 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.00001 내지 10.0 중량%로 함유되는, 화장료 조성물.
14. 제1항에 있어서,
    상기 식물 추출물은 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.001 내지 30.0 중량%로 함유되는, 화장료 조성물.

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