CN112773730A - 微小rna在美白护肤产品中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及生物医学技术领域，公开了微小RNA在美白护肤产品中的应用，微小RNA包括如下成分中的一种或是两种：miR‑181a‑5p和miR‑199a。本发明首次发现并证实miR‑181a‑5p和miR‑199a可分别抑制黑色素合成和促进黑色素降解，miR‑181a‑5p和miR‑199a作为抑制黑色素沉积的活性成分可应用于制备多种化妆品，对因内分泌失调或化学物质刺激或物理方法刺激如紫外线照射引起的黑色素沉积具有很好的治疗效果，可使皮肤白皙、透亮，可维持肌肤健康、自然、亮白的状态；miR‑181a‑5p和miR‑199a作为美白有效成分，具有稳定性好、特异性强、制备方法简单的特点，具有重要的实际推广价值。

Description

微小RNA在美白护肤产品中的应用
技术领域
本发明涉及生物医学技术领域，具体涉及微小RNA在美白护肤产品中的应用。
背景技术
黑色素沉积是指异常增多的黑色素在皮肤的某些部位过量沉着，皮肤可呈现不同范围、不同深浅的色素变化，进而形成色素斑、老年斑等，黑色素沉积是一个复杂的生物化学过程，在细胞和分子水平上，影响皮肤色素沉积主要包括两方面：黑色素的合成和降解。当皮肤受到紫外线过度照射时，皮肤角质形成细胞分泌α-MSH，激活cAMP级联反应，诱导黑色素细胞中黑色素合成的关键基因如小眼畸形相关转录因子(MITF)等的表达。黑色素的降解也是决定肤色的另一个关键因素，据报道，自噬通过促进皮肤角质形成细胞和黑色素细胞中黑素小体的降解而显著减少皮肤中黑色素含量，特别是色素过度沉积的情况。因此，靶向调控影响黑色素合成的关键因子或通过自噬促进黑色素降解都是治疗色素沉积、美白皮肤的重要途径。目前，市面上有多种美白剂，但是，均存在明显的副作用，如稳定性差、致敏性强、易引起皮肤红斑、脱屑、瘙痒、刺痛，甚至导致皮肤永久性损伤，具有潜在致癌性。正因如此，许多抑制黑色素生成的候选物在实际应用中受到各种限制。开发治疗皮肤黑色素沉积的新成分和新方式已成为化妆品制备和应用领域的长期目标。
微小RNA(microRNA或miRNA)是一类由内源基因编码的长度约为20-24个核苷酸的非编码单链RNA。成熟的miRNA是由较长的初级转录物经过一系列核酸酶的剪切加工而产生的，与靶基因mRNA的3'-非翻译区(3'UTR)完全或不完全互补结合，并通过指导沉默复合体来降解靶基因mRNA或者阻遏其翻译。大量文献报道表明，miRNA在机体发育、代谢、肿瘤等疾病发生发展过程中发挥重要的调控作用，但在皮肤学领域里的研究较少。目前，由于miRNA具有结构稳定、作用靶标明确及特异性高、检测方法简单易行且敏感性高等优点，已成为对多种疾病具有治疗作用的潜在药物或具有诊断价值的生物标记物。因此，发现一种或多种能显著抑制黑色素合成或促进其降解的miRNA将为治疗皮肤色素沉积提供新的治疗药物。
发明内容
基于以上问题，本发明提供微小RNA在美白护肤产品中的应用，本发明的miR-181a-5p和miR-199a可使皮肤白皙、透亮，可维持肌肤健康、自然、亮白的状态；miR-181a-5p和miR-199a作为美白有效成分，具有稳定性好、特异性强、制备方法简单的特点，具有重要的实际推广价值。
为解决以上技术问题，本发明提供了以下技术方案：
微小RNA在美白护肤产品中的应用，微小RNA包括如下成分中的一种或是两种：miR-181a-5p和miR-199a，miR-181a-5p的序列见SEQ ID NO.1，miR-199a的序列见SEQ IDNO.2。
进一步的，所述美白护肤产品中的miR-181a-5p通过抑制黑色素合成相关基因MITF的蛋白水平及转录水平，进而降低其下游基因的表达以达到抑制黑色素合成、减少黑色素含量、美白皮肤的效果；所述美白护肤产品中的miR-199a通过促进细胞自噬作用来降解过量沉积的黑色素，以降低皮肤黑色素含量，进而发挥美白作用。
进一步的，所述美白护肤产品可用于因内分泌失调或化学物质刺激或物理方法刺激引起的过量黑色素沉积及其相关皮肤病变。
进一步的，所述物理方法刺激包含紫外线照射。
进一步的，所述相关皮肤病变包含色素斑和老年斑。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明首次发现并证实miR-181a-5p和miR-199a可分别抑制黑色素合成和促进黑色素降解，miR-181a-5p和miR-199a作为抑制黑色素沉积的活性成分可应用于制备多种化妆品，对因内分泌失调或化学物质刺激或物理方法刺激如紫外线照射引起的黑色素沉积具有很好的治疗效果，可使皮肤白皙、透亮，可维持肌肤健康、自然、亮白的状态；miR-181a-5p和miR-199a作为美白有效成分，具有稳定性好、特异性强、制备方法简单的特点，具有重要的实际推广价值。
附图说明
图1为本发明的实施例加入miR-181a-5p和miR-199a模拟体后黑色素含量的测定值统计图；
图2为本发明的实施例加入miR-181a-5p和miR-199a抑制剂后黑色素含量的测定值统计图；
图3为本发明的实施例的蛋白免疫印迹结果图；
图4为本发明的实施例的miR-181a-5p模拟体对黑色素合成相关基因转录水平的影响结果图；
图5为本发明的实施例的miR-181a-5p抑制剂对黑色素合成相关基因转录水平的影响结果图；
图6为本发明的实施例的miR-199a对自噬的影响结果图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明，本发明的示意性实施方式及其说明仅用于解释本发明，并不作为对本发明的限定。
实施例：
发明人发现miR-181a-5p通过抑制黑色素合成相关基因MITF的蛋白水平及转录水平，进而降低其下游基因(如Tyrosinase、TRP1、TRP2)的表达以达到抑制黑色素合成、减少黑色素含量、美白皮肤的效果；miR-199a通过促进细胞自噬来降解过量沉积的黑色素，以降低皮肤黑色素含量，进而发挥美白作用。发明人还通过后续实验验证了上述两种微小RNA可应用于美白护肤产品中及其发挥功效的机制，所述美白护肤产品可用于因内分泌失调或化学物质刺激或物理方法刺激如紫外线照射等引起的过量黑色素沉着及其相关皮肤病变如色素斑及老年斑等。
miR-181a-5p的核苷酸序列为：5’-AACAUUCAACGCUGUCGGUGAGU-3’，具体见SEQ IDNO.1；miR-199a的核苷酸序列为5’-ACAGUAGUCUGCACAUUGGUUA-3’，具体见SEQ ID NO.2。
发明人发现miR-181a-5p和miR-199a模仿体(mimic)均可明显降低黑色素含量。发明人利用脂质体纳米颗粒(Lipofectamine 3000)分别将miR-181a-5p和miR-199a模仿体(mimic)转染进入小鼠黑色素瘤细胞B16-F10中，并加入α-促黑色素细胞激素(α-MSH)刺激诱导黑色素合成、分泌，同时，使用与miR-181a-5p或miR-199a模仿体(mimic)无关序列的寡核苷酸作为对照组。48小时后，检测加入miR-181a-5p或miR-199a模仿体(mimic)组的小鼠黑色素瘤细胞B16-F10中黑色素的含量变化。结果见附图1，图中Control为对照组，α-MSH为α-促黑素细胞激素，*代表具有显著性，在α-促黑素细胞激素(α-MSH)刺激的病理条件下，黑色素含量明显增加，而加入miR-181a-5p和miR-199a模拟体则可使黑色素瘤细胞B16-F10中的黑色素含量分别减少51％和40％，表明上述微小RNA模仿体在黑色素瘤细胞B16-F10中可显著抑制α-MSH刺激产生的过量黑色素。
发明人还验证了miR-181a-5p和miR-199a抑制剂(inhibitor)对黑色素含量的影响，方法同上，将miR-181a-5p或miR-199a抑制剂(inhibitor)转染进入小鼠黑色素瘤细胞B16-F10中，并加入α-促黑色素细胞激素(α-MSH)刺激诱导黑色素分泌，同时，使用与miR-181a-5p或miR-199a抑制剂(inhibitors)无关序列的寡核苷酸作为对照组，48小时后，检测其对小鼠黑色素瘤细胞B16-F10中黑色素含量的影响。结果见附图2，图中Control为对照组，α-MSH为α-促黑素细胞激素，*代表具有显著性，在α-MSH刺激下，分别加入miR-181a-5p和miR-199a抑制剂后，小鼠黑色素瘤细胞B16-F10中的黑色素含量没有明显增加，表明miR-181a-5p或miR-199a抑制剂对α-MSH诱导的黑色素含量增加没有影响，提示上述微小RNA介导的黑色素抑制作用具有显著的特异性。
发明人继续利用上述方法，分别将miR-181a-5p模拟体和抑制剂转染进入小鼠黑色素瘤细胞B16-F10中，48小时后，用RIPA缓冲液裂解蛋白，通过蛋白免疫印迹实验检测MITF和TRP2表达。结果见附图3，结果显示miR-181a-5p模拟体能够明显抑制其蛋白水平，而miR-181a-5p抑制剂能够促进其蛋白表达。
本部分的转染方法同上，转染48小时后，用Trizol试剂提取RNA，通过逆转录过程制备cDNA，利用实时荧光定量PCR实验检测MITF、Tyrosinase、TRP1、TRP2的转录水平。见附图4和附图5，与对照组相比，miR-181a-5p模拟体降低MITF、Tyrosinase、TRP1、TRP2的转录水平，miR-181a-5p抑制剂升高MITF、Tyrosinase、TRP1、TRP2的转录水平。以上实验数据充分表明，miR-181a-5p通过抑制黑色素合成相关基因的蛋白水平及转录水平来降低黑色素含量，具有很好的美白效果。
发明人继续利用上述转染方法，分别将miR-199a模拟体和抑制剂转染进入小鼠黑色素瘤细胞B16-F10中，48小时后，用RIPA缓冲液裂解蛋白，通过蛋白免疫印迹实验检测自噬标志物LC3B和P62的蛋白表达水平。结果见附图6，结果显示miR-199a模拟体能够促进细胞自噬，而miR-199a抑制剂则得到相反结果。因此，miR-199a可能通过调节自噬来促进黑色素降解过程，降低黑色素含量，发挥皮肤美白作用。
如上即为本发明的实施例。上述实施例以及实施例中的具体参数仅是为了清楚表述发明验证过程，并非用以限制本发明的专利保护范围，本发明的专利保护范围仍然以其权利要求书为准，凡是运用本发明的说明书及附图内容所作的等同结构变化，同理均应包含在本发明的保护范围内。
序列表
<110> 南昌大学
<120> 微小RNA在美白护肤产品中的应用
<130> 2021.1.14
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 23
<212> RNA
<213> miR-181a-5p
<400> 1
aacauucaac gcugucggug agu 23
<210> 2
<211> 22
<212> RNA
<213> miR-199a
<400> 2
acaguagucu gcacauuggu ua 22

Claims (5)

1.微小RNA在美白护肤产品中的应用，其特征在于，微小RNA包括如下成分中的一种或是两种：miR-181a-5p和miR-199a，miR-181a-5p的序列见SEQ ID NO.1，miR-199a的序列见SEQ ID NO.2。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述美白护肤产品中的miR-181a-5p通过抑制黑色素合成相关基因MITF的蛋白水平及转录水平，进而降低其下游基因的表达以达到抑制黑色素合成、减少黑色素含量、美白皮肤的效果；所述美白护肤产品中的miR-199a通过促进细胞自噬作用来降解过量沉积的黑色素，以降低皮肤黑色素含量，进而发挥美白作用。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述美白护肤产品可用于因内分泌失调或化学物质刺激或物理方法刺激引起的过量黑色素沉积及其相关皮肤病变。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述物理方法刺激包含紫外线照射。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述相关皮肤病变包含色素斑和老年斑。
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