JP2022530542A - キメラ受容体及びその使用方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2019年4月30日に出願された米国仮出願第62/841,128号、2019年5月29日に出願された米国仮出願第62/854,151号、及び2019年8月28日に出願された米国仮出願第62/893,106号の利益を主張するものであり、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本出願には、EFS-Webを介して提出され、その全体が参照により本明細書に援用される配列表が含まれる。20XX年、XX月に作成された該ASCIIコピーは、XXXXXUS_sequencelisting.txtと称され、サイズがX,XXX,XXXバイトである。
T細胞などの免疫応答性細胞の特異性及び機能をリダイレクトするために使用されるキメラ抗原受容体(CAR)系養子細胞療法は、リンパ系悪性腫瘍を有する患者において有効性を示している(Pule et al.,Nat.Med.(14):1264-1270(2008)、Maude et al.,N Engl J Med.(371):1507-17(2014)、Brentjens et al.,Sci Transl Med.(5):177ra38(2013)(非特許文献1~3))。CAR T細胞は、化学療法によって薬剤耐性及び腫瘍進行がもたらされたCD19発現悪性腫瘍を有する患者において完全寛解を誘導することが示されている。CD19 CAR療法の成功は、急性骨髄性白血病(AML)などの他の血液悪性腫瘍を治療するための楽観論を提供する。急性骨髄性白血病は、成人で最も一般的な急性白血病である。AMLは、骨髄系の血液細胞のがんであり、骨髄及び血液中に蓄積し、正常な血液細胞を妨害する異常な細胞の急速な増殖を特徴とする。時にはAMLは、脳、皮膚、または歯茎に拡散され得る。AMLに対する標準的な化学療法治療は、過去40年間にわたって実質的に変化せず(Pulte et al.,2008)、全体的な生存率は依然として非常に低い。
一態様では、本明細書で提供されるのは、単離免疫応答性細胞であって、(a)第1の抗原と結合する細胞外抗原結合ドメインを含む第1のキメラ受容体と、(b)第2の抗原と結合する細胞外抗原結合ドメインを含む第2のキメラ受容体と、を含み、各抗原が、FLT3、CD33、CLEC12A、MS4A3、VSTM1、LAT2、MLC1、CD131、GAPT、PRAM1、SLC22A16、SLC17A9、SPNS3、ADGRE2、IL3RA、CD117、CD93、IL1RAP、CD244、CCR1、LILRB2、PIEZO1、CD38、EMB、MYADM、LILRA2、CD300LF、及びCD70から選択され、第1の抗原が、第2の抗原とは異なる、単離免疫応答性細胞である。
任意に、免疫応答性細胞が、同種異系である。
本開示の実践は、別段の指示がない限り、当該技術分野の範囲内で、分子生物学、化学、生化学、ウイルス学、及び免疫学の従来の方法を採用する。かかる技法は、文献で完全に記載される。例えば、Hepatitis C Viruses:Genomes and Molecular Biology(S.L.Tan ed.,Taylor & Francis,2006)、Fundamental Virology,3rd Edition,vol.I & II(B.N.Fields and D.M.Knipe,eds.)、Handbook of Experimental Immunology,Vols.I-IV(D.M.Weir and C.C.Blackwell eds.,Blackwell Scientific Publications)、A.L.Lehninger,Biochemistry(Worth Publishers,Inc.,current addition)、Sambrook,et al.,Molecular Cloning:A Laboratory Manual(3rd Edition,2001)、Methods In Enzymology(S.Colowick and N.Kaplan eds.,Academic Press,Inc.)を参照されたい。
別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての用語、表記及び他の科学用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有することが意図される。いくつかの事例では、一般的に理解される意味を有する用語は、明確に及び/またはすぐに参照するために本明細書で定義され、そのような定義を本明細書に含めることは、必ずしも、当該技術分野において一般的に理解されるものに対する差異を表すものと解釈されるべきではない。本明細書に記載または参照される技法及び手順は、一般的に周知であり、例えば、Sambrook et al.,Molecular Cloning:A Laboratory Manual 4th ed.(2012)Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NYに記載される広く利用されている分子クローニング方法論などの当業者による従来の方法論を使用して一般的に使用されている。必要に応じて、市販のキット及び試薬の使用を伴う手順は、別段の記載がない限り、概して、製造業者が定義したプロトコル及び条件に従って実施される。
本明細書に列挙される範囲は、列挙される端点を含む範囲内の値の全ての省略表現であると理解される。例えば、1~50の範囲は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、及び50からの任意の数、数字の組み合わせ、またはサブ範囲を含むと理解される。
本開示の特定の態様は、目的の抗原と結合するかかるキメラ受容体のうちの1つ以上を発現するように遺伝子修飾されたキメラ受容体及び免疫応答性細胞などの細胞、ならびにかかる受容体及び細胞を使用して、AMLなどの骨髄性悪性腫瘍、及び抗原特異的免疫応答が望まれる他の病状を治療及び/または予防する方法に関する。悪性細胞は、免疫認識及び排除から自身を保護するための一連のメカニズムを開発している。本開示は、かかる悪性細胞を治療するための腫瘍微小環境内の免疫原性を提供する。
本開示のある特定の態様は、目的の抗原と結合するキメラ受容体及びかかるキメラ受容体をコードする核酸に関する。
いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、表A1または表A2に列挙されるアミノ酸配列のうちの1つ以上を含む。表A1は、抗体重鎖または軽鎖の可変ドメインを提供する。CDRは、Kabat法を使用して決定し、可変重鎖または可変軽鎖ごとに表A1に下線を引いて表A2に示す。いくつかの実施形態では、本開示のキメラ受容体のうちのいずれかをコードする核酸は、表Bに列挙される核酸配列のうちの1つ以上を含む。
本開示の特定の態様は、AML細胞などの骨髄細胞上に発現される抗原と特異的に結合するキメラ受容体に関する。いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、キメラT細胞受容体(TCR)である。本開示のTCRは、インバリアントCD3鎖分子との複合体の一部として発現される2つの可変鎖を含むジスルフィド結合ヘテロ二量体タンパク質である。TCRは、T細胞の表面に見出され、主要組織適合遺伝子複合体(MHC)分子と結合したペプチドとして抗原を認識する役割を担う。特定の実施形態では、本開示のTCRは、TRAによってコードされるアルファ鎖及びTRBによってコードされるベータ鎖を含む。特定の実施形態では、TCRは、ガンマ鎖及びデルタ鎖(それぞれ、TRG及びTRDによってコードされる)を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のTCRは、本開示の標的抗原(例えば、AML抗原)と特異的に結合するキメラTCRを作製するために、TCR鎖の1つ以上の定常ドメイン、例えば、TCRアルファ鎖またはTCRベータ鎖に移植され得る1つ以上の抗原結合ドメインを含む。理論に束縛されることを望まないが、キメラTCRは、抗原結合時にTCR複合体を通してシグナル伝達し得ると考えられている。例えば、抗体または抗体断片(例えば、scFv)は、TCRアルファ鎖及び/またはTCRベータ鎖などのTCR鎖の定常ドメイン、例えば、細胞外定常ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞質ドメインの少なくとも一部に移植することができる。別の例として、抗体または抗体断片のCDRを、TCRアルファ鎖及び/またはベータ鎖に移植して、本開示の抗原(例えば、AML抗原)と特異的に結合するキメラTCRを作製することができる。かかるキメラTCRは、当該技術分野において既知の方法によって作製することができる(例えば、Willemsen RA et al.,Gene Therapy 2000;7:1369-1377、Zhang T et al.,Cancer Gene Ther 2004 11:487-496、及びAggen et al.,Gene Ther.2012 Apr;19(4):365-74を参照されたい)。
本開示の特定の態様は、AML細胞などの骨髄細胞上に発現される抗原と特異的に結合するキメラ受容体に関する。いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、キメラ抗原受容体(CAR)である。
いくつかの実施形態では、本開示のCARの細胞外抗原結合ドメインは、AML細胞などの骨髄細胞上に発現される1つ以上の抗原と特異的に結合する。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、AML細胞上に発現される1つ以上の抗原(AML抗原)と結合する。いくつかの実施形態では、1つ以上のAML抗原は、ヒトポリペプチドである。
いくつかの実施形態では、本開示のCARの膜貫通ドメインは、細胞膜の少なくとも一部にまたがる疎水性アルファヘリックスを含む。異なる膜貫通ドメインが異なる受容体の安定性をもたらし得ることが示されている。抗原認識後、受容体はクラスター化し、シグナルが細胞に伝達される。いくつかの実施形態では、本開示のCARの膜貫通ドメインは、CD8ポリペプチド、CD28ポリペプチド、CD3-ゼータポリペプチド、CD4ポリペプチド、4-1BBポリペプチド、OX40ポリペプチド、ICOSポリペプチド、CTLA-4ポリペプチド、PD-1ポリペプチド、LAG-3ポリペプチド、2B4ポリペプチド、BTLAポリペプチド、LIR-1(LILRB1)ポリペプチドの膜貫通ドメインを含み得るか、または合成ペプチド、もしくはその任意の組み合わせであり得る。
いくつかの実施形態では、本開示のCARは、細胞外抗原結合ドメインを膜貫通ドメインに連結するスペーサー領域も含むことができる。スペーサー領域は、抗原認識を容易にするために、抗原結合ドメインが異なる方向に配向することを可能にするのに十分に柔軟であり得る。いくつかの実施形態では、スペーサー領域は、ヒトタンパク質由来のヒンジであり得る。例えば、ヒンジは、IgG4ヒンジ、IgG2ヒンジ、CD8aヒンジ、またはIgDヒンジを含むがこれらに限定されないヒトIg(免疫グロブリン)ヒンジであり得る。いくつかの実施形態では、スペーサー領域は、IgG4ヒンジ、IgG2ヒンジ、IgDヒンジ、CD28ヒンジ、KIR2DS2ヒンジ、LNGFRヒンジ、またはPDGFR-ベータ細胞外リンカーを含み得る。いくつかの態様では、スペーサー領域は、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に局在化される。いくつかの実施形態では、スペーサー領域は、表Cに列挙されるアミノ酸配列のうちのいずれか、または表Cに列挙されるアミノ酸配列のうちのいずれかと少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、もしくは少なくとも99%同一であるアミノ酸配列のうちのいずれかを含み得る。いくつかの実施形態では、本開示のスペーサー領域のうちのいずれかをコードする核酸は、表Dに列挙される核酸配列、または表Dに列挙される核酸配列のうちのいずれかと少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、もしくは少なくとも99%同一である核酸配列のうちのいずれかを含み得る。
いくつかの実施形態では、本開示のCARは、1つ以上の細胞質ドメインまたは領域を含む。CARの細胞質ドメインまたは領域は、細胞内シグナル伝達ドメインを含み得る。細胞内シグナル伝達ドメインは、典型的には、本開示のCARを発現するように操作された免疫細胞(例えば、T細胞またはNK細胞)の1つ以上のエフェクター機能の活性化に関与する。例えば、T細胞のエフェクター機能は、サイトカインの分泌などの細胞溶解活性またはヘルパー活性であり得る。したがって、いくつかの実施形態では、「細胞内シグナル伝達ドメイン」という用語は、エフェクター機能シグナルを伝達し、細胞に特殊な機能を実行するように指示するタンパク質の一部を指す。通常、全細胞内シグナル伝達ドメインが用いられ得るが、多くの場合、全鎖を使用する必要はない。細胞内シグナル伝達ドメインの短縮部分が使用される実施形態では、かかる切断部分は、切断部分がエフェクター機能シグナルを伝達する限り、対応する無傷鎖の代わりに使用され得る。
いくつかの実施形態では、本開示のCARは、ナチュラルキラー細胞受容体(NKR)の1つ以上の成分を含み、それによってNKR-CARを形成する。NKR成分は、KIR2DL1、KIR2DL2/L3、KIR2DL4、KIR2DL5A、KIR2DL5B、KIR2DS1、KIR2DS2、KIR2DS3、KIR2DS4、DIR2DS5、KIR3DL1/S1、KIR3DL2、KIR3DL3、KIR2DP1、及びKIRS DPIなどのキラー細胞免疫グロブリン様受容体(KIR);NKp30、NKp44、NKp46などの天然細胞傷害性受容体(NCR);CD48、CD229、2B4、CD84、NTB-A、CRACC、BLAME、CD2F-10などの免疫細胞受容体のシグナル伝達リンパ球活性化分子(SLAM)ファミリー;CD16及びCD64などのFc受容体(FcR);ならびにLY49A及びLY49CなどのLy49受容体を含むが、これらに限定されない、任意の好適なナチュラルキラー細胞受容体からの膜貫通ドメイン、ヒンジドメイン、または細胞質ドメインであり得る。いくつかの実施形態では、NKR-CARは、アダプタ分子またはDAP12などの細胞内シグナル伝達ドメインと相互作用し得る。NKR成分を含むCARの例示的な構成及び配列は、2014年9月18日に公開された国際特許公開WO2014/145252に記載される。
本開示の特定の態様は、キメラ阻害性受容体に関する。キメラ阻害性受容体は、例えば、免疫細胞活性などの細胞活性を制御するための論理ゲートとしては有用ではない。いくつかの実施形態では、本開示のキメラ阻害性受容体は、正常細胞上で発現されるが、腫瘍細胞上では発現されない1つ以上の抗原と特異的に結合する。
本開示の特定の態様は、本開示の1つ以上のキメラ受容体またはかかるキメラ受容体をコードする1つ以上の核酸を含むように遺伝子操作された細胞、例えば、免疫応答性細胞、及び骨髄性悪性腫瘍(例えば、AML)を治療するためにかかる細胞を使用する方法に関する。
いくつかの実施形態では、本開示の細胞(例えば、免疫応答性細胞)は、本開示の2つ以上のキメラ受容体を含む。いくつかの実施形態では、細胞は、2つ以上のキメラ受容体を含み、2つ以上のキメラ受容体のうちの1つは、キメラ阻害性受容体である。いくつかの実施形態では、細胞は、3つ以上のキメラ受容体を含み、3つ以上のキメラ受容体のうちの少なくとも1つは、キメラ阻害性受容体である。いくつかの実施形態では、細胞は、4つ以上のキメラ受容体を含み、4つ以上のキメラ受容体の少なくとも1つは、キメラ阻害性受容体である。いくつかの実施形態では、細胞は、5つ以上のキメラ受容体を含み、5つ以上のキメラ受容体のうちの少なくとも1つは、キメラ阻害性受容体である。
いくつかの実施形態では、本開示の細胞(例えば、免疫応答性細胞)は、本開示の1つ以上のキメラ阻害受容体を含む。いくつかの実施形態では、1つ以上のキメラ阻害受容体の各々は、正常な細胞上で発現されるが、AML細胞などの腫瘍細胞上では発現されない抗原と結合する抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、1つ以上のキメラ阻害性受容体は、脳、神経組織、内分泌、骨、骨髄、免疫系、内皮組織、筋肉、肺、肝臓、胆嚢、膵臓、消化管、腎臓、膀胱、雄性生殖器、雌性生殖器、脂肪、軟組織、及び皮膚から選択される組織に由来する非腫瘍細胞上で発現される抗原と結合する。
いくつかの実施形態では、本開示の細胞(例えば、免疫応答性細胞)は、1つ以上の組換えまたは外因性共刺激リガンドをさらに含むことができる。例えば、細胞が、本開示の1つ以上のキメラ受容体及び1つ以上の共刺激リガンドを共発現するか、または共発現するように誘導されるように、細胞を1つ以上の共刺激リガンドでさらに形質導入することができる。理論に拘束されることを望まないが、1つ以上のキメラ受容体と1つ以上の共刺激リガンドとの間の相互作用は、細胞の完全な活性化に重要な非抗原特異的シグナルを提供し得ると考えられる。好適な共刺激リガンドの例には、腫瘍壊死因子(TNF)スーパーファミリーのメンバー、及び免疫グロブリン(Ig)スーパーファミリーリガンドが含まれるが、これらに限定されない。TNFは、全身炎症に関与するサイトカインであり、急性期反応を刺激する。その主な役割は、免疫細胞の制御である。TNFスーパーファミリーのメンバーは、いくつかの共通の特徴を共有している。TNFスーパーファミリーメンバーの大部分は、短い細胞質セグメント及び比較的長い細胞外領域を含むII型膜貫通タンパク質(細胞外C末端)として合成される。好適なTNFスーパーファミリーメンバーの例には、神経成長因子(NGF)、CD40L(CD40L)/CD154、CD137L/4-1BBL、TNF-a、CD134L/OX40L/CD252、CD27L/CD70、Fasリガンド(FasL)、CD30L/CD153、腫瘍壊死因子ベータ(TNFP)/リンホトキシン-アルファ(LTa)、リンホトキシン-ベータ(LTP)、CD257/B細胞活性化因子(B AFF)/Bly s/THANK/Tall-1、糖質コルチコイド誘導性TNF受容体リガンド(GITRL)、及びTNF関連アポトーシス誘導性リガンド(TRAIL)、LIGHT(TNFSF 14)が含まれるが、これらに限定されない。免疫グロブリン(Ig)スーパーファミリーは、細胞の認識、結合、または接着プロセスに関与する細胞表面及び可溶性タンパク質の大きなグループである。これらのタンパク質は、免疫グロブリンと構造的特徴を共有し、免疫グロブリンドメイン(折り畳み)を有する。好適な免疫グロブリンスーパーファミリーリガンドの例には、CD80及びCD86、両方のCD28のリガンド、PD-1のリガンドであるPD-L1/(B7-H1)が含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、1つ以上の共刺激リガンドは、4-1BBL、CD80、CD86、CD70、OX40L、CD48、TNFRSF14、PD-L1、及びその組み合わせから選択される。
いくつかの実施形態では、本開示の細胞(例えば、免疫応答性細胞)は、1つ以上のキメラ受容体を含み、1つ以上のケモカイン受容体をさらに含み得る。例えば、T細胞などの細胞におけるケモカイン受容体CCR2bまたはCXCR2のトランスジェニック発現は、CCL2分泌性またはCXCL1分泌性固形腫瘍への輸送を増強する(Craddock et al,J Immunother.2010 Oct;33(8):780-8、及びKershaw et al.Hum Gene Ther.2002 Nov 1;13(16):1971-80)。理論に拘束されることを望まないが、本開示のキメラ受容体発現細胞上に発現されるケモカイン受容体は、腫瘍によって分泌されるケモカインを認識し、細胞の腫瘍への標的化を改善し得、これは、細胞の腫瘍への浸潤を促進し、細胞の抗腫瘍効果を増強し得ると考えられる。本開示のケモカイン受容体は、天然起源ケモカイン受容体、組換えケモカイン受容体、またはそのケモカイン結合断片を含み得る。本開示の細胞上に発現し得る好適なケモカイン受容体には、CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4、CXCR5、CXCR6、またはCXCR7などのCXCケモカイン受容体、CCR1、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CCR10、またはCCR11などのCCケモカイン受容体、CX3CR1などのCX3Cケモカイン受容体、XCR1などのXCケモカイン受容体、及びこれらのケモカイン結合断片が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、細胞上で発現されるケモカイン受容体は、腫瘍によって分泌されるケモカインに基づいて選択される。
本開示のいくつかの実施形態は、本開示のキメラ受容体発現細胞の1つ以上のキメラ受容体活性を制御することに関する。キメラ受容体活性を制御するいくつかの方法が存在する。いくつかの実施形態では、1つ以上のキメラ受容体活性を制御することができる制御可能なキメラ受容体は、キメラ受容体療法の安全性及び/または有効性を最適化するために望ましい場合がある。例えば、二量体化ドメインに融合されたカスパーゼを使用してアポトーシスを誘導すること(例えば、Di et al.,N Engl.J.Med.2011 Nov.3;365(18):1673-1683)は、キメラ受容体療法における安全性スイッチとして使用することができる。いくつかの実施形態では、本開示のキメラ受容体発現細胞はまた、リミドゥシド(IUPAC名称:[(1R)-3-(3,4-ジメトキシフェニル)-1-[3-[2-[2-[[2-[3-[(1R)-3-(3,4-ジメトキシフェニル)-1-[(2S)-1-[(2S)-2-(3,4,5-トリメトキシフェニル)ブタノイル]ピペリジン-2-カルボニル]オキシプロピル]フェノキシ]アセチル]アミノ]エチルアミノ]-2-オキソエトキシ]フェニル]プロピル](2S)-1-[(2S)-2-(3,4,5-トリメトキシフェニル)ブタノイル]ピペリジン-2-カルボキシレート)などの二量体化剤の投与時に、カスパーゼ-9の活性化を誘導し、細胞のアポトーシスをもたらす、誘導性カスパーゼ-9(iカスパーゼ-9)を発現することができる。いくつかの実施形態では、iカスパーゼ-9は、CIDの存在下で二量体化を媒介する二量体化の化学的誘導物質(CID)を含む結合ドメインを含み、これは、キメラ受容体発現細胞の誘導性かつ選択的な枯渇をもたらす。
本開示のある特定の態様は、本開示の1つ以上のキメラ受容体をコードする核酸(例えば、単離核酸)に関する。いくつかの実施形態では、核酸は、メッセンジャーRNA(mRNA)転写物または修飾RNAなどのRNA構築物である。いくつかの実施形態では、核酸は、DNA構築物である。
本開示の特定の態様は、本開示の1つ以上のキメラ受容体またはかかる1つ以上のキメラ受容体を発現する本開示の免疫応答性細胞を含む組成物(例えば、薬学的組成物)に関する。いくつかの実施形態では、キメラ受容体またはかかるキメラ受容体を発現する遺伝子修飾免疫応答性細胞を含む組成物は、骨髄障害などの増殖性障害の治療のために対象に全身的または直接的に提供され得る。特定の実施形態では、組成物は、目的の臓器(例えば、障害によって影響を受ける臓器)に直接的に注入される。代替的に、組成物は、例えば、循環系(例えば、腫瘍脈管系)への投与によって、目的の臓器に間接的に提供され得る。増殖剤及び分化剤は、組成物の投与前、投与中、または投与後に提供されて、インビトロまたはインビボでのT細胞、NK細胞、もしくはCTL細胞の産生を増加させることができる。
本開示のある特定の態様は、本開示のキメラ受容体またはかかるキメラ受容体を発現する遺伝子修飾細胞(例えば、本開示の免疫応答性細胞)を含む組成物の製剤に関する。いくつかの実施形態では、遺伝子修飾細胞を含む本開示の組成物は、選択されたpHに緩衝され得る等張水溶液、懸濁液、乳剤、分散液、及び粘性組成物を含むが、これらに限定されない滅菌液体調製物として提供され得る。液体調製物は、典型的には、ゲル、他の粘性組成物、及び固体組成物よりも調製が容易である。追加的に、液体組成物は、特に注入によって、より便利に投与することができる。いくつかの実施形態では、粘性組成物は、特定の組織とのより長い接触期間を提供するために、適切な粘度範囲内で製剤化され得る。液体または粘性組成物は、例えば、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、ポリオール(例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど)及びそれらの好適な混合物を含む溶媒または分散媒体であり得る担体を含み得る。
本開示のある特定の態様は、キメラ受容体を必要とする対象を治療するために、かかるキメラ受容体を発現する本開示のキメラ受容体及び遺伝子修飾細胞(例えば、免疫応答性細胞)を使用する方法に関する。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、骨髄障害などの対象のがんを治療するために有用である。いくつかの実施形態では、骨髄障害は、骨髄異形成症候群、骨髄増殖性腫瘍、慢性骨髄単球性白血病、急性骨髄性白血病(AML)、急性骨髄芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄単球性白血病、慢性骨髄性白血病、または真性多血症である。いくつかの実施形態では、骨髄障害は、AMLである。本開示の他の態様は、免疫不全のヒト対象などの対象における病原体感染または他の感染性疾患を治療するための方法において、かかるキメラ受容体を発現する本開示のキメラ受容体及び遺伝子修飾細胞(例えば、免疫応答性細胞)の使用に関する。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、既存の状態の緩和、状態の予防、既存の状態の治療、既存の状態の管理、または状態の再発もしくは再発の予防を含むが、これらに限定されない、所望の効果を達成するのに有効な量で、本開示の遺伝子修飾細胞を投与することを含み得る。いくつかの実施形態では、有効量は、本開示の遺伝子修飾細胞(例えば、免疫応答性細胞)の1回または一連の投与において提供され得る。いくつかの実施形態では、有効量は、ボーラスまたは連続灌流によって提供され得る。
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、それを必要とする対象における免疫応答を増加させる。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、対象における骨髄障害を治療及び/または予防するための方法を含む。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。いくつかの実施形態では、治療に好適なヒト対象は、臨床基準によって区別され得る2つの治療群を含み得る。「進行性疾患」または「高い腫瘍負荷」を有する対象は、臨床的に測定可能な腫瘍を有する対象である。臨床的に測定可能な腫瘍は、腫瘍質量に基づいて(例えば、触診、CATスキャン、超音波検査、マンモグラム、またはX線による白血病細胞の割合に基づく;陽性の生化学的または組織病理学的マーカーは、それ自体ではこの集団を特定するには不十分である)検出され得る腫瘍である。いくつかの実施形態では、本開示の薬学的組成物は、それらの状態を緩和する目的で、抗腫瘍応答を誘発するためにこれらの対象に投与される。いくつかの実施形態では、腫瘍量の減少は、薬学的組成物の投与の結果として生じるが、任意の臨床的改善は、利益を構成するであろう。いくつかの実施形態では、臨床的改善には、腫瘍の病理学的結果におけるリスクの減少または進行速度の低減が含まれる。いくつかの実施形態では、好適なヒト対象の第2の群は、「アジュバント群」対象である。これらの対象は、骨髄障害の既往歴があるが、別の治療法に応答している個体である。以前の療法には、外科的切除、放射線療法、及び/または従来の化学療法が含まれ得るが、これらに限定されない。その結果、これらの個体は、臨床的に測定可能な腫瘍を有しない。しかしながら、それらは、元の腫瘍部位の近くで、または転移によって、疾患の進行のリスクにあると疑われる。いくつかの実施形態では、この群は、高リスク及び低リスク個体にさらに細分することができる。細分化は、初期処置の前または後に観察される特徴に基づいて行うことができる。これらの特徴は、臨床技術において既知であり、異なる骨髄疾患ごとに好適に定義される。高リスクサブグループの典型的な特徴は、腫瘍が隣接組織に浸潤した、またはリンパ節の関与を示すものである。
いくつかの実施形態では、本開示の1つ以上のキメラ受容体を発現する本開示の遺伝子修飾細胞(例えば、免疫応答性細胞)は、他の既知の薬剤及び療法と組み合わせて使用され得る。いくつかの実施形態では、本開示の併用療法は、1つ以上の追加の治療薬と組み合わせて投与され得る、本開示の遺伝子修飾細胞を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子組み換え細胞及び1つ以上の追加の治療剤は、同時に、同じもしくは別個の組成物で、または連続的に投与され得る。連続投与について、遺伝子修飾物質が最初に投与され得、1つ以上の追加の薬剤が2回目に投与され得るか、または投与順序を逆にすることができる。いくつかの実施形態では、遺伝子修飾細胞は、1つ以上の追加の治療剤を発現するようにさらに改変される。
本開示のある特定の態様は、骨髄障害(例えば、AML)の治療及び/または予防のためのキットに関する。特定の実施形態では、キットは、有効量の本開示の1つ以上のキメラ受容体、本開示の単離核酸、本開示のベクター、及び/または本開示の細胞(例えば、免疫応答性細胞)を含む治療組成物または予防組成物を含む。いくつかの実施形態では、キットは、滅菌容器を含む。いくつかの実施形態では、かかる容器は、箱、アンプル、ボトル、バイアル、チューブ、バッグ、ポーチ、ブリスターパック、または当該技術分野において既知の他の好適な容器形態であり得る。容器は、プラスチック、ガラス、積層紙、金属箔、または医薬品を保持するのに好適な他の材料から作製され得る。
以下の段落は、追加の列挙される実施形態を提供する。
1.MS4A3、VSTM1、LAT2、MLC1、CD131、GAPT、PRAM1、SLC22A16、SLC17A9、及びSPNS3からなる群から選択される抗原と結合する細胞外抗原結合ドメインを含む、キメラ受容体である。
2.前記抗原が、MS4A3である、段落1に記載のキメラ受容体。
3.前記抗原が、VSTM1である、段落1に記載のキメラ受容体。
4.前記抗原が、LAT2である、段落1に記載のキメラ受容体。
5.前記抗原が、MLC1である、段落1に記載のキメラ受容体。
6.前記抗原が、CD131である、段落1に記載のキメラ受容体。
7.前記抗原が、GAPTである、段落1に記載のキメラ受容体。
8.前記抗原が、PRAM1である、段落1に記載のキメラ受容体。
9.前記抗原が、SLC22A16である、段落1に記載のキメラ受容体。
10.前記抗原が、SLC17A9である、段落1に記載のキメラ受容体。
11.前記抗原が、SPNS3である、段落1に記載のキメラ受容体。
12.前記キメラ受容体が、キメラT細胞受容体またはキメラ抗原受容体(CAR)である、段落1~11のいずれか1つに記載のキメラ受容体。
13.前記キメラ受容体が、CARである、段落12に記載のキメラ受容体。
14.前記CARが、1つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、前記1つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインが、CD3ゼータ鎖細胞内シグナル伝達ドメイン、CD97細胞内シグナル伝達ドメイン、CD11a-CD18細胞内シグナル伝達ドメイン、CD2細胞内シグナル伝達ドメイン、ICOS細胞内シグナル伝達ドメイン、CD27細胞内シグナル伝達ドメイン、CD154細胞内シグナル伝達ドメイン、CD8細胞内シグナル伝達ドメイン、OX40細胞内シグナル伝達ドメイン、4-1BB細胞内シグナル伝達ドメイン、CD28細胞内シグナル伝達ドメイン、ZAP40細胞内シグナル伝達ドメイン、CD30細胞内シグナル伝達ドメイン、GITR細胞内シグナル伝達ドメイン、HVEM細胞内シグナル伝達ドメイン、DAP10細胞内シグナル伝達ドメイン、DAP12細胞内シグナル伝達ドメイン、及びMyD88細胞内シグナル伝達ドメインからなる群から選択される、段落13に記載のキメラ受容体。
15.前記CARが、膜貫通ドメインを含み、前記膜貫通ドメインが、CD8膜貫通ドメイン、CD28膜貫通ドメイン、CD3ゼータ鎖膜貫通ドメイン、CD4膜貫通ドメイン、4-1BB膜貫通ドメイン、OX40膜貫通ドメイン、ICOS膜貫通ドメイン、CTLA-4膜貫通ドメイン、PD-1膜貫通ドメイン、LAG-3膜貫通ドメイン、2B4膜貫通ドメイン、及びBTLA膜貫通ドメインからなる群から選択される、段落13または段落14に記載のキメラ受容体。
16.前記CARが、前記抗原結合ドメインと前記膜貫通ドメインとの間のスペーサー領域を含み、前記スペーサー領域が、配列番号55~64からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、段落13~15のいずれか1つに記載のキメラ受容体。
17.前記抗原結合ドメインが、1つ以上の抗体、抗体の抗原結合断片、F(ab)断片、F(ab’)断片、一本鎖可変断片(scFv)、または単一ドメイン抗体(sdAb)を含む、段落1~16のいずれか1つに記載のキメラ受容体。
18.前記抗原結合ドメインが、1つ以上の一本鎖可変断片(scFv)を含む、段落1~16のいずれか1つに記載のキメラ受容体。
19.前記1つ以上のscFvの各々が、重鎖可変ドメイン(VH)及び軽鎖可変ドメイン(VL)を含む、段落18に記載のキメラ受容体。
20.前記VH及びVLが、ペプチドリンカーによって分離される、段落19に記載のキメラ受容体。
21.前記ペプチドリンカーが、配列番号27のアミノ酸配列を含む、段落20に記載のキメラ受容体。
22.前記1つ以上のscFvの各々が、構造VH-L-VLまたはVL-L-VHを含み、VHが、前記重鎖可変ドメインであり、Lが、前記ペプチドリンカーであり、VLが、前記軽鎖可変ドメインである、段落19~21のいずれか1つに記載のキメラ受容体。
23.前記抗原結合ドメインが、2つの一本鎖可変断片(scFv)を含む、段落1~22のいずれか1つに記載のキメラ受容体。
24.前記2つのscFvの各々が、同じ抗原上の別個のエピトープと結合する、段落23に記載のキメラ受容体。
25.前記1つ以上のscFvの各々が、ペプチドリンカーによって分離される、段落18~24のいずれか1つに記載のキメラ受容体。
26.前記ペプチドリンカーが、GGGGSGGGGSGGGGS(配列番号27)またはEAAAKEAAAKEAAAKEAAAK(配列番号74)のアミノ酸配列を含む、段落25に記載のキメラ受容体。
27.段落1~26のいずれか1つに記載のキメラ受容体を含む、単離細胞。
28.前記キメラ受容体が、組換え的に発現される、段落27に記載の単離細胞。
29.前記キメラ受容体が、ベクターまたは細胞のゲノムからの選択された遺伝子座から発現される、段落27または段落28に記載の単離細胞。
30.前記細胞が、T細胞、ナチュラルキラー(NK)細胞、細胞傷害性Tリンパ球(CTL)、制御性T細胞、ナチュラルキラーT(NKT)細胞、骨髄細胞、マクロファージ、ヒト胚性幹細胞(ESC)、ESC由来細胞、多能性幹細胞、及び人工多能性幹細胞(iPSC)、ならびにiPSC由来細胞からなる群から選択される、段落27~29のいずれか1つに記載の単離細胞。
31.前記細胞が、自家である、段落27~30のいずれか1つに記載の単離細胞。
32.前記細胞が、同種異系である、段落27~30のいずれか1つに記載の単離細胞。
33.単離細胞であって、
(a)第1の抗原と結合する細胞外抗原結合ドメインを含む第1のキメラ受容体と、
(b)第2の抗原と結合する細胞外抗原結合ドメインを含む第2のキメラ受容体と、を含み、
各抗原が、表1に列挙される抗原からなる群から選択されるか、または前記第1及び第2の抗原が、表3に列挙される抗原対からなる群から選択され、
前記第1の抗原が、前記第2の抗原とは異なる、前記単離細胞。
34.単離細胞であって、
(a)第1の抗原と結合する細胞外抗原結合ドメインを含む第1のキメラ受容体と、
(b)第2の抗原と結合する細胞外抗原結合ドメインを含む第2のキメラ受容体と、を含み、
各抗原が、MS4A3、VSTM1、LAT2、MLC1、CD131、GAPT、PRAM1、SLC22A16、SLC17A9、SPNS3、FLT3、CD33、CLEC12A、ADGRE2、IL3RA、CD117、CD93、IL1RAP、CD244、CCR1、LILRB2、PIEZO1、CD38、EMB、MYADM、LILRA2、CD300LF、及びCD70からなる群から選択され、
前記第1の抗原が、前記第2の抗原とは異なる、前記単離細胞。
35.前記第1の抗原が、MS4A3であり、前記第2の抗原が、VSTM1、LAT2、MLC1、CD131、GAPT、PRAM1、SLC22A16、SLC17A9、SPNS3、FLT3、CD33、CLEC12A、ADGRE2、IL3RA、CD117、CD93、IL1RAP、CD244、CCR1、LILRB2、PIEZO1、CD38、EMB、MYADM、LILRA2、CD300LF、及びCD70からなる群から選択される、段落33または段落34に記載の単離細胞。
36.前記第1の抗原が、VSTM1であり、前記第2の抗原が、MS4A3、LAT2、MLC1、CD131、GAPT、PRAM1、SLC22A16、SLC17A9、SPNS3、FLT3、CD33、CLEC12A、ADGRE2、IL3RA、CD117、CD93、IL1RAP、CD244、CCR1、LILRB2、PIEZO1、CD38、EMB、MYADM、LILRA2、CD300LF、及びCD70からなる群から選択される、段落33または段落34に記載の単離細胞。
37.前記第1の抗原が、LAT2であり、前記第2の抗原が、MS4A3、VSTM1、MLC1、CD131、GAPT、PRAM1、SLC22A16、SLC17A9、SPNS3、FLT3、CD33、CLEC12A、ADGRE2、IL3RA、CD117、CD93、IL1RAP、CD244、CCR1、LILRB2、PIEZO1、CD38、EMB、MYADM、LILRA2、CD300LF、及びCD70からなる群から選択される、段落33または段落34に記載の単離細胞。
38.前記第1の抗原が、MLC1であり、前記第2の抗原が、MS4A3、VSTM1、LAT2、CD131、GAPT、PRAM1、SLC22A16、SLC17A9、SPNS3、FLT3、CD33、CLEC12A、ADGRE2、IL3RA、CD117、CD93、IL1RAP、CD244、CCR1、LILRB2、PIEZO1、CD38、EMB、MYADM、LILRA2、CD300LF、及びCD70からなる群から選択される、段落33または段落34に記載の単離細胞。
39.前記第1の抗原が、CD131であり、前記第2の抗原が、MS4A3、VSTM1、LAT2、MLC1、GAPT、PRAM1、SLC22A16、SLC17A9、SPNS3、FLT3、CD33、CLEC12A、ADGRE2、IL3RA、CD117、CD93、IL1RAP、CD244、CCR1、LILRB2、PIEZO1、CD38、EMB、MYADM、LILRA2、CD300LF、及びCD70からなる群から選択される、段落33または段落34に記載の単離細胞。
40.前記第1の抗原が、GAPTであり、前記第2の抗原が、MS4A3、VSTM1、LAT2、MLC1、CD131、PRAM1、SLC22A16、SLC17A9、SPNS3、FLT3、CD33、CLEC12A、ADGRE2、IL3RA、CD117、CD93、IL1RAP、CD244、CCR1、LILRB2、PIEZO1、CD38、EMB、MYADM、LILRA2、CD300LF、及びCD70からなる群から選択される、段落33または段落34に記載の単離細胞。
41.前記第1の抗原が、PRAM1であり、前記第2の抗原が、MS4A3、VSTM1、LAT2、MLC1、CD131、GAPT、SLC22A16、SLC17A9、SPNS3、FLT3、CD33、CLEC12A、ADGRE2、IL3RA、CD117、CD93、IL1RAP、CD244、CCR1、LILRB2、PIEZO1、CD38、EMB、MYADM、LILRA2、CD300LF、及びCD70からなる群から選択される、段落33または段落34に記載の単離細胞。
42.前記第1の抗原が、SLC22A16であり、前記第2の抗原が、MS4A3、VSTM1、LAT2、MLC1、CD131、GAPT、PRAM1、SLC17A9、SPNS3、FLT3、CD33、CLEC12A、ADGRE2、IL3RA、CD117、CD93、IL1RAP、CD244、CCR1、LILRB2、PIEZO1、CD38、EMB、MYADM、LILRA2、CD300LF、及びCD70からなる群から選択される、段落33または段落34に記載の単離細胞。
43.前記第1の抗原が、SLC17A9であり、前記第2の抗原が、MS4A3、VSTM1、LAT2、MLC1、CD131、GAPT、PRAM1、SLC22A16、SPNS3、FLT3、CD33、CLEC12A、ADGRE2、IL3RA、CD117、CD93、IL1RAP、CD244、CCR1、LILRB2、PIEZO1、CD38、EMB、MYADM、LILRA2、CD300LF、及びCD70からなる群から選択される、段落33または段落34に記載の単離細胞。
44.前記第1の抗原が、SPNS3であり、前記第2の抗原が、MS4A3、VSTM1、LAT2、MLC1、CD131、GAPT、PRAM1、SLC22A16、SLC17A9、FLT3、CD33、CLEC12A、ADGRE2、IL3RA、CD117、CD93、IL1RAP、CD244、CCR1、LILRB2、PIEZO1、CD38、EMB、MYADM、LILRA2、CD300LF、及びCD70からなる群から選択される、段落33または段落34に記載の単離細胞。
45.前記第1の抗原が、FLT3である、段落33または段落34に記載の単離細胞。
46.前記第1の抗原と結合する前記抗原結合ドメインが、
(a)配列番号1のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号2のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(b)配列番号3のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号4のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(c)配列番号5のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号6のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(d)配列番号7のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号8のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(e)配列番号9のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号10のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(f)配列番号11のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号12のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(g)配列番号13のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号14のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、ならびに
(h)配列番号15のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号16のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVLからなる群から選択される重鎖可変ドメイン(VH)及び軽鎖可変ドメイン(VL)を含む、段落45に記載の単離細胞。
47.前記第2の抗原が、CD33である、段落45または段落46に記載の単離細胞。
48.前記第2の抗原と結合する前記抗原結合ドメインが、
(a)配列番号17のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号18のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、ならびに
(b)配列番号19のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号20のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVLからなる群から選択される重鎖可変ドメイン(VH)及び軽鎖可変ドメイン(VL)を含む、段落47に記載の単離細胞。
49.前記第2の抗原が、CLEC12Aである、段落45または段落46に記載の単離細胞。
50.前記第2の抗原と結合する前記抗原結合ドメインが、
(a)配列番号21のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号22のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(b)配列番号23のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号24のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、ならびに
(c)配列番号25のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号26のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVLからなる群から選択される重鎖可変ドメイン(VH)及び軽鎖可変ドメイン(VL)を含む、段落49に記載の単離細胞。
51.前記第1の抗原が、CLEC12Aである、段落33または段落34に記載の単離細胞。
52.前記第1の抗原と結合する前記抗原結合ドメインが、
(a)配列番号21のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号22のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(b)配列番号23のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号24のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、ならびに
(c)配列番号25のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号26のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVLからなる群から選択される重鎖可変ドメイン(VH)及び軽鎖可変ドメイン(VL)を含む、段落51に記載の単離細胞。
53.前記第2の抗原が、CD33である、段落51または段落52に記載の単離細胞。
54.前記第2の抗原と結合する前記抗原結合ドメインが、
(a)配列番号17のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号18のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、ならびに
(b)配列番号19のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号20のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVLからなる群から選択される重鎖可変ドメイン(VH)及び軽鎖可変ドメイン(VL)を含む、段落53に記載の単離細胞。
55.前記細胞が、免疫応答性細胞である、段落33~54のいずれか1つに記載の単離細胞。
56.前記第1のキメラ受容体の前記第1の抗原との結合が、前記免疫応答性細胞を活性化することができる、段落55に記載の単離細胞。
57.前記第2のキメラ受容体の前記第2の抗原との結合が、前記免疫応答性細胞を刺激することができる、段落55に記載の単離細胞。
58.前記第1のキメラ受容体の前記第1の抗原との結合及び前記第2のキメラ受容体の前記第2の抗原との結合が、前記免疫応答性細胞を活性化するために必要とされる、段落55に記載の単離細胞。
59.前記免疫応答性細胞が、前記第1の抗原または前記第2の抗原のみに陽性である標的細胞に対する細胞溶解活性と比較して、前記第1の抗原及び前記第2の抗原の両方に陽性である標的細胞に対してより高い程度の細胞溶解活性を示す、段落55に記載の単離細胞。
60.前記第1のキメラ受容体の前記第1の抗原との結合または前記第2のキメラ受容体の前記第2の抗原との結合が、前記免疫応答性細胞を活性化することができる、段落55に記載の単離細胞。
61.前記第1のキメラ受容体が、低い結合親和性で前記第1の抗原と結合する、段落33~60のいずれか1つに記載の単離細胞。
62.前記第1のキメラ受容体が、前記第2のキメラ受容体が前記第2の抗原と結合する結合親和性よりも低い前記結合親和性で前記第1の抗原と結合する、段落33~61のいずれか1つに記載の単離細胞。
63.前記第1のキメラ受容体が、低い結合活性で第1の抗原と結合する、段落33~62のいずれか1つに記載の単離細胞。
64.前記第1のキメラ受容体及び/または前記第2のキメラ受容体が、キメラT細胞受容体またはキメラ抗原受容体(CAR)である、段落33~63のいずれか1つに記載の単離細胞。
65.前記第1のキメラ受容体及び/または前記第2のキメラ受容体が、CARである、段落64に記載の単離細胞。
66.前記第1のキメラ受容体が、第1のCARであり、前記第2のキメラ受容体が、第2のCARである、段落65に記載の単離細胞。
67.各CARが、1つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、前記1つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインが、CD3ゼータ鎖細胞内シグナル伝達ドメイン、CD97細胞内シグナル伝達ドメイン、CD11a-CD18細胞内シグナル伝達ドメイン、CD2細胞内シグナル伝達ドメイン、ICOS細胞内シグナル伝達ドメイン、CD27細胞内シグナル伝達ドメイン、CD154細胞内シグナル伝達ドメイン、CD8細胞内シグナル伝達ドメイン、OX40細胞内シグナル伝達ドメイン、4-1BB細胞内シグナル伝達ドメイン、CD28細胞内シグナル伝達ドメイン、ZAP40細胞内シグナル伝達ドメイン、CD30細胞内シグナル伝達ドメイン、GITR細胞内シグナル伝達ドメイン、HVEM細胞内シグナル伝達ドメイン、DAP10細胞内シグナル伝達ドメイン、DAP12細胞内シグナル伝達ドメイン、MyD88細胞内シグナル伝達ドメイン、及び2B4細胞内シグナル伝達ドメインからなる群から選択される、段落65または段落66に記載の単離細胞。
68.前記第1のCARの1つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインが、前記第2のCARの1つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインとは異なる、段落67に記載の単離細胞。
69.前記第1のCAR及び前記第2のCARが各々、CD3ゼータ鎖細胞内シグナル伝達ドメインを含む、段落67に記載の単離細胞。
70.前記第1のCAR及び前記第2のCARが各々、CD97細胞内シグナル伝達ドメイン、CD11a-CD18細胞内シグナル伝達ドメイン、CD2細胞内シグナル伝達ドメイン、ICOS細胞内シグナル伝達ドメイン、CD27細胞内シグナル伝達ドメイン、CD154細胞内シグナル伝達ドメイン、CD8細胞内シグナル伝達ドメイン、OX40細胞内シグナル伝達ドメイン、4-1BB細胞内シグナル伝達ドメイン、CD28細胞内シグナル伝達ドメイン、ZAP40細胞内シグナル伝達ドメイン、CD30細胞内シグナル伝達ドメイン、GITR細胞内シグナル伝達ドメイン、HVEM細胞内シグナル伝達ドメイン、DAP10細胞内シグナル伝達ドメイン、DAP12細胞内シグナル伝達ドメイン、MyD88細胞内シグナル伝達ドメイン、及び2B4細胞内シグナル伝達ドメインからなる群から選択される追加の細胞内シグナル伝達ドメインをさらに含む、段落69に記載の単離細胞。
71.前記第1のCARの追加の細胞内シグナル伝達ドメインが、前記第2のCARの追加の細胞内シグナル伝達ドメインとは異なる、段落70に記載の単離細胞。
72.各CARが、膜貫通ドメインを含み、前記膜貫通ドメインが、CD8膜貫通ドメイン、CD28膜貫通ドメイン、CD3ゼータ鎖膜貫通ドメイン、CD4膜貫通ドメイン、4-1BB膜貫通ドメイン、OX40膜貫通ドメイン、ICOS膜貫通ドメイン、CTLA-4膜貫通ドメイン、PD-1膜貫通ドメイン、LAG-3膜貫通ドメイン、2B4膜貫通ドメイン、及びBTLA膜貫通ドメインからなる群から選択される、段落64~71のいずれか1つに記載の単離細胞。
73.前記第1のCARの膜貫通ドメインが、前記第2のCARの膜貫通ドメインとは異なる、段落72に記載の単離細胞。
74.各CARが、前記抗原結合ドメインと前記膜貫通ドメインとの間のスペーサー領域を含み、前記スペーサー領域が、配列番号55~64からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、段落64~73のいずれか1つに記載の単離細胞。
75.前記第1のキメラ受容体及び/または前記第2のキメラ受容体の前記抗原結合ドメインが、1つ以上の抗体、抗体の抗原結合断片、F(ab)断片、F(ab’)断片、一本鎖可変断片(scFv)、または単一ドメイン抗体(sdAb)を含む、段落33~74のいずれか1つに記載の単離細胞。
76.前記第1のキメラ受容体及び前記第2のキメラ受容体の前記抗原結合ドメインが、1つ以上の一本鎖可変断片(scFv)を含む、段落33~75のいずれか1つに記載の単離細胞。
77.前記1つ以上のscFvの各々が、重鎖可変ドメイン(VH)及び軽鎖可変ドメイン(VL)を含む、段落76に記載の単離細胞。
78.前記VH及びVLが、ペプチドリンカーによって分離される、段落77に記載の単離細胞。
79.前記ペプチドリンカーが、配列番号27のアミノ酸配列を含む、段落78に記載の単離細胞。
80.前記1つ以上のscFvの各々が、構造VH-L-VLまたはVL-L-VHを含み、VHが、前記重鎖可変ドメインであり、Lが、前記ペプチドリンカーであり、VLが、前記軽鎖可変ドメインである、段落77~79のいずれか1つに記載の単離細胞。
81.前記第1のキメラ受容体及び/または前記第2のキメラ受容体の前記抗原結合ドメインが、2つの一本鎖可変断片(scFv)を含む、段落33~80のいずれか1つに記載の単離細胞。
82.前記2つのscFvの各々が、同じ抗原上の別個のエピトープと結合する、段落81に記載の単離細胞。
83.前記第1のキメラ受容体が、組換え的に発現される、段落33~80のいずれか1つに記載の単離細胞。
84.前記1つ以上のscFvの各々が、ペプチドリンカーによって分離される、段落76~83のいずれか1つに記載の単離細胞。
85.前記ペプチドリンカーが、GGGGSGGGGSGGGGS(配列番号27)またはEAAAKEAAAKEAAAKEAAAK(配列番号74)のアミノ酸配列を含む、段落84に記載の単離細胞。
86.前記第1のキメラ受容体が、ベクター、または細胞のゲノムから選択された遺伝子座から発現される、段落33~85のいずれか1つに記載の単離細胞。
87.前記第2のキメラ受容体が、組換え的に発現される、段落33~86のいずれか1つに記載の単離細胞。
88.前記第2のキメラ受容体が、ベクター、または細胞のゲノムから選択された遺伝子座から発現される、段落33~87のいずれか1つに記載の単離細胞。
89.前記細胞が、抗原結合ドメインを含む阻害性キメラ受容体をさらに含む、段落33~88のいずれか1つに記載の単離細胞。
90.前記阻害性キメラ受容体が、前記細胞の1つ以上の活性を阻害する、段落89に記載の単離細胞。
91.前記阻害性キメラ受容体が、腫瘍細胞上で発現されない抗原と結合する、段落89または段落90に記載の単離細胞。
92.前記阻害性キメラ受容体が、非腫瘍細胞上で発現される抗原と結合する、段落89または段落90に記載の単離細胞。
93.前記阻害性キメラ受容体が、脳、神経組織、内分泌、骨、骨髄、免疫系、内皮組織、筋肉、肺、肝臓、胆嚢、膵臓、消化管、腎臓、膀胱、雄性生殖器、雌性生殖器、脂肪、軟組織、及び皮膚からなる群から選択される組織に由来する非腫瘍細胞上で発現される抗原と結合する、段落92に記載の単離細胞。
94.前記腫瘍細胞が、急性骨髄性白血病(AML)細胞である、段落91~93のいずれか1つに記載の単離細胞。
95.前記阻害性キメラ受容体が、酵素阻害性ドメインを含む、段落89~94のいずれか1つに記載の単離細胞。
96.前記酵素阻害性ドメインが、免疫受容体に近接している場合、免疫受容体の活性化を阻害する、段落95に記載の単離細胞。
97.前記酵素阻害性ドメインが、酵素触媒ドメインを含む、段落95または段落96に記載の単離細胞。
98.前記酵素触媒ドメインが、CSK、SHP-1、PTEN、CD45、CD148、PTP-MEG1、PTP-PEST、c-CBL、CBL-b、PTPN22、LAR、PTPH1、SHIP-1、及びRasGAPからなる群から選択される酵素に由来する、段落97に記載の単離細胞。
99.前記阻害性キメラ受容体が、1つ以上の細胞内阻害性共シグナル伝達ドメインをさらに含む、段落89~98のいずれか1つに記載の単離細胞。
100.前記1つ以上の細胞内阻害性共シグナル伝達ドメインが、PD-1、CTLA4、TIGIT、LAIR1、GRB-2、Dok-1、Dok-2、SLAP、LAG3、HAVR、BTLA、GITR、及びPD-L1からなる群から選択される、段落99に記載の単離細胞。
101.前記阻害性キメラ受容体が、EMCN、JAM2、MS4A15、C4BPA、TRPM1、SCTR、SLC2A2、KCNQ2、PERP、WLS、FFAR2、PTPRB、NCKAP1、MPZL2、PLSCR4、TMEM47、ADGRL4、MET、BACE2、ATP8B1、LIFR、ART4、CALCRL、CNTNAP3、PCDH9、IL18R1、SLC8A3、CDH26、TMEM163、ABCA13、CACHD1、CYYR1、ABCB1、ADGRG6、ATP9A、CALN1、CDCP1、IL12RB2、SLC16A14、TMEM136、及びTMEM200Aからなる群から選択される抗原と結合する、段落89~100のいずれか1つに記載の単離細胞。
102.前記阻害性キメラ受容体が、抗EMCN抗体、抗CALN1抗体、抗IL12RB2抗体、抗CDH26抗体、抗IL18R1抗体、抗SLC8A3抗体、抗ABCB1抗体、抗ATP9A抗体、抗CDCP1抗体、抗JAM2抗体、抗PCDH9抗体、抗TMEM200A抗体、抗ADGRL4抗体、抗ART4抗体、抗BACE2抗体、抗CALCRL抗体、抗LIFR抗体、抗MET抗体、抗MPZL2抗体、抗PTPRB抗体、または抗WLS抗体に由来する抗原結合ドメインを含む、段落89~101のいずれか1つに記載の単離細胞。
103.前記抗EMCN抗体が、CBFYE-0213、V.7.C7.1、L6H10、L4B1、L5F12、L10B5、L3F12、L6H3、L9H8、及びL10F12からなる群から選択されるモノクローナル抗体である、段落102に記載の単離細胞。
104.前記細胞が、T細胞、ナチュラルキラー(NK)細胞、細胞傷害性Tリンパ球(CTL)、制御性T細胞、ナチュラルキラーT(NKT)細胞、骨髄細胞、マクロファージ、ヒト胚性幹細胞(ESC)、ESC由来細胞、多能性幹細胞、及び人工多能性幹細胞(iPSC)、ならびにiPSC由来細胞からなる群から選択される、段落33~103のいずれか1つに記載の単離細胞。
105.前記細胞が、自家である、段落33~104のいずれか1つに記載の単離細胞。
106.前記細胞が、同種異系である、段落33~104のいずれか1つに記載の単離細胞。
107.2つ以上の抗原結合ドメインを含むキメラ受容体であって、前記2つ以上の抗原結合ドメインの各々が、表1に列挙される抗原からなる群から選択される抗原と結合するか、または前記2つ以上の抗原結合ドメインの2つの抗原結合ドメインが、表3に列挙される抗原対からなる群から選択される抗原対と結合し、
各抗原結合ドメインが、別個の抗原と結合する、前記キメラ受容体。
108.2つ以上の抗原結合ドメインを含むキメラ受容体であって、前記2つ以上の抗原結合ドメインの各々が、MS4A3、VSTM1、LAT2、MLC1、CD131、GAPT、PRAM1、SLC22A16、SLC17A9、SPNS3、FLT3、CD33、CLEC12A、ADGRE2、IL3RA、CD117、CD93、IL1RAP、CD244、CCR1、LILRB2、PIEZO1、CD38、EMB、MYADM、LILRA2、CD300LF、及びCD70からなる群から選択される抗原と結合し、
各抗原結合ドメインが、別個の抗原と結合する、前記キメラ受容体。
109.1つの抗原結合ドメインが、MS4A3と結合し、第2の抗原結合ドメインが、VSTM1、LAT2、MLC1、CD131、GAPT、PRAM1、SLC22A16、SLC17A9、SPNS3、FLT3、CD33、CLEC12A、ADGRE2、IL3RA、CD117、CD93、IL1RAP、CD244、CCR1、LILRB2、PIEZO1、CD38、EMB、MYADM、LILRA2、CD300LF、及びCD70からなる群から選択される抗原と結合する、段落107または段落108に記載のキメラ受容体。
110.1つの抗原結合ドメインが、VSTM1と結合し、第2の抗原結合ドメインが、MS4A3、LAT2、MLC1、CD131、GAPT、PRAM1、SLC22A16、SLC17A9、SPNS3、FLT3、CD33、CLEC12A、ADGRE2、IL3RA、CD117、CD93、IL1RAP、CD244、CCR1、LILRB2、PIEZO1、CD38、EMB、MYADM、LILRA2、CD300LF、及びCD70からなる群から選択される抗原と結合する、段落107または段落108に記載のキメラ受容体。
111.1つの抗原結合ドメインが、LAT2と結合し、第2の抗原結合ドメインが、MS4A3、VSTM1、MLC1、CD131、GAPT、PRAM1、SLC22A16、SLC17A9、SPNS3、FLT3、CD33、CLEC12A、ADGRE2、IL3RA、CD117、CD93、IL1RAP、CD244、CCR1、LILRB2、PIEZO1、CD38、EMB、MYADM、LILRA2、CD300LF、及びCD70からなる群から選択される抗原と結合する、段落107または段落108に記載のキメラ受容体。
112.1つの抗原結合ドメインが、MLC1と結合し、第2の抗原結合ドメインが、MS4A3、VSTM1、LAT2、CD131、GAPT、PRAM1、SLC22A16、SLC17A9、SPNS3、FLT3、CD33、CLEC12A、ADGRE2、IL3RA、CD117、CD93、IL1RAP、CD244、CCR1、LILRB2、PIEZO1、CD38、EMB、MYADM、LILRA2、CD300LF、及びCD70からなる群から選択される抗原と結合する、段落107または段落108に記載のキメラ受容体。
113.1つの抗原結合ドメインが、CD131と結合し、第2の抗原結合ドメインが、MS4A3、VSTM1、LAT2、MLC1、GAPT、PRAM1、SLC22A16、SLC17A9、SPNS3、FLT3、CD33、CLEC12A、ADGRE2、IL3RA、CD117、CD93、IL1RAP、CD244、CCR1、LILRB2、PIEZO1、CD38、EMB、MYADM、LILRA2、CD300LF、及びCD70からなる群から選択される抗原と結合する、段落107または段落108に記載のキメラ受容体。
114.1つの抗原結合ドメインが、GAPTと結合し、第2の抗原結合ドメインが、MS4A3、VSTM1、LAT2、MLC1、CD131、PRAM1、SLC22A16、SLC17A9、SPNS3、FLT3、CD33、CLEC12A、ADGRE2、IL3RA、CD117、CD93、IL1RAP、CD244、CCR1、LILRB2、PIEZO1、CD38、EMB、MYADM、LILRA2、CD300LF、及びCD70からなる群から選択される抗原と結合する、段落107または段落108に記載のキメラ受容体。
115.1つの抗原結合ドメインが、PRAM1と結合し、第2の抗原結合ドメインが、MS4A3、VSTM1、LAT2、MLC1、CD131、GAPT、SLC22A16、SLC17A9、SPNS3、FLT3、CD33、CLEC12A、ADGRE2、IL3RA、CD117、CD93、IL1RAP、CD244、CCR1、LILRB2、PIEZO1、CD38、EMB、MYADM、LILRA2、CD300LF、及びCD70からなる群から選択される抗原と結合する、段落107または段落108に記載のキメラ受容体。
116.1つの抗原結合ドメインが、SLC22A16と結合し、第2の抗原結合ドメインが、MS4A3、VSTM1、LAT2、MLC1、CD131、GAPT、PRAM1、SLC17A9、SPNS3、FLT3、CD33、CLEC12A、ADGRE2、IL3RA、CD117、CD93、IL1RAP、CD244、CCR1、LILRB2、PIEZO1、CD38、EMB、MYADM、LILRA2、CD300LF、及びCD70からなる群から選択される抗原と結合する、段落107または段落108に記載のキメラ受容体。
117.1つの抗原結合ドメインが、SLC17A9と結合し、第2の抗原結合ドメインが、MS4A3、VSTM1、LAT2、MLC1、CD131、GAPT、PRAM1、SLC22A16、SPNS3、FLT3、CD33、CLEC12A、ADGRE2、IL3RA、CD117、CD93、IL1RAP、CD244、CCR1、LILRB2、PIEZO1、CD38、EMB、MYADM、LILRA2、CD300LF、及びCD70からなる群から選択される抗原と結合する、段落107または段落108に記載のキメラ受容体。
118.1つの抗原結合ドメインが、SPNS3と結合し、第2の抗原結合ドメインが、MS4A3、VSTM1、LAT2、MLC1、CD131、GAPT、PRAM1、SLC22A16、SLC17A9、FLT3、CD33、CLEC12A、ADGRE2、IL3RA、CD117、CD93、IL1RAP、CD244、CCR1、LILRB2、PIEZO1、CD38、EMB、MYADM、LILRA2、CD300LF、及びCD70からなる群から選択される抗原と結合する、段落107または段落108に記載のキメラ受容体。
119.1つの抗原結合ドメインが、FLT3と結合する、段落107または段落108に記載のキメラ受容体。
120.FLT3と結合する前記抗原結合ドメインが、
(a)配列番号1のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号2のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(b)配列番号3のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号4のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(c)配列番号5のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号6のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(d)配列番号7のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号8のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(e)配列番号9のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号10のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(f)配列番号11のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号12のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(g)配列番号13のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号14のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、ならびに
(h)配列番号15のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号16のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVLからなる群から選択される重鎖可変ドメイン(VH)及び軽鎖可変ドメイン(VL)を含む、段落119に記載のキメラ受容体。
121.第2の抗原結合ドメインが、CD33と結合する、段落119または段落120に記載のキメラ受容体。
122.CD33と結合する前記第2の抗原結合ドメインが、
(a)配列番号17のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号18のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、ならびに
(b)配列番号19のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号20のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVLからなる群から選択される重鎖可変ドメイン(VH)及び軽鎖可変ドメイン(VL)を含む、段落121に記載のキメラ受容体。
123.第2の抗原結合ドメインが、CLEC12Aと結合する、段落119または段落120に記載のキメラ受容体。
124.CLEC12Aと結合する前記第2の抗原結合ドメインが、
(a)配列番号21のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号22のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(b)配列番号23のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号24のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、ならびに
(c)配列番号25のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号26のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVLからなる群から選択される重鎖可変ドメイン(VH)及び軽鎖可変ドメイン(VL)を含む、段落123に記載のキメラ受容体。
125.1つの抗原結合ドメインが、CLEC12Aと結合する、段落107または段落108に記載のキメラ受容体。
126.CLEC12Aと結合する前記抗原結合ドメインが、
(a)配列番号21のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号22のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(b)配列番号23のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号24のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、ならびに
(c)配列番号25のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号26のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVLからなる群から選択される重鎖可変ドメイン(VH)及び軽鎖可変ドメイン(VL)を含む、段落125に記載のキメラ受容体。
127.第2の抗原結合ドメインが、CD33と結合する、段落125または段落126に記載のキメラ受容体。
128.CD33と結合する前記第2の抗原結合ドメインが、
(a)配列番号17のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号18のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、ならびに
(b)配列番号19のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号20のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVLからなる群から選択される重鎖可変ドメイン(VH)及び軽鎖可変ドメイン(VL)を含む、段落127に記載のキメラ受容体。
129.前記キメラ受容体が、キメラT細胞受容体またはキメラ抗原受容体(CAR)である、段落107~128のいずれか1つに記載のキメラ受容体。
130.前記キメラ受容体が、CARである、段落129に記載のキメラ受容体。
131.前記CARが、二重特異性CARである、段落130に記載のキメラ受容体。
132.前記CARが、1つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、前記1つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインが、CD3ゼータ鎖細胞内シグナル伝達ドメイン、CD97細胞内シグナル伝達ドメイン、CD11a-CD18細胞内シグナル伝達ドメイン、CD2細胞内シグナル伝達ドメイン、ICOS細胞内シグナル伝達ドメイン、CD27細胞内シグナル伝達ドメイン、CD154細胞内シグナル伝達ドメイン、CD8細胞内シグナル伝達ドメイン、OX40細胞内シグナル伝達ドメイン、4-1BB細胞内シグナル伝達ドメイン、CD28細胞内シグナル伝達ドメイン、ZAP40細胞内シグナル伝達ドメイン、CD30細胞内シグナル伝達ドメイン、GITR細胞内シグナル伝達ドメイン、HVEM細胞内シグナル伝達ドメイン、DAP10細胞内シグナル伝達ドメイン、DAP12細胞内シグナル伝達ドメイン、MyD88細胞内シグナル伝達ドメイン、及び2B4細胞内シグナル伝達ドメインからなる群から選択される、段落130または段落131に記載のキメラ受容体。
133.前記CARが、膜貫通ドメインを含み、前記膜貫通ドメインが、CD8膜貫通ドメイン、CD28膜貫通ドメイン、CD3ゼータ鎖膜貫通ドメイン、CD4膜貫通ドメイン、4-1BB膜貫通ドメイン、OX40膜貫通ドメイン、ICOS膜貫通ドメイン、CTLA-4膜貫通ドメイン、PD-1膜貫通ドメイン、LAG-3膜貫通ドメイン、2B4膜貫通ドメイン、及びBTLA膜貫通ドメインからなる群から選択される、段落130~132のいずれか1つに記載のキメラ受容体。
134.前記CARが、前記抗原結合ドメインと前記膜貫通ドメインとの間のスペーサー領域を含み、前記スペーサー領域が、配列番号55~64からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、段落120~133のいずれか1つに記載のキメラ受容体。
135.各抗原結合ドメインが、1つ以上の抗体、抗体の抗原結合断片、F(ab)断片、F(ab’)断片、一本鎖可変断片(scFv)、または単一ドメイン抗体(sdAb)を含む、段落107~134のいずれか1つに記載のキメラ受容体。
136.各抗原結合ドメインが、1つ以上の一本鎖可変断片(scFv)を含む、段落107~135のいずれか1つに記載のキメラ受容体。
137.前記1つ以上のscFvの各々が、重鎖可変ドメイン(VH)及び軽鎖可変ドメイン(VL)を含む、段落136に記載のキメラ受容体。
138.前記VH及びVLが、ペプチドリンカーによって分離される、段落137に記載のキメラ受容体。
139.前記ペプチドリンカーが、配列番号27のアミノ酸配列を含む、段落138に記載のキメラ受容体。
140.前記1つ以上のscFvの各々が、構造VH-L-VLまたはVL-L-VHを含み、VHが、前記重鎖可変ドメインであり、Lが、前記ペプチドリンカーであり、VLが、前記軽鎖可変ドメインである、段落137~139のいずれか1つに記載のキメラ受容体。
141.前記抗原結合ドメインのうちの少なくとも1つが、2つの一本鎖可変断片(scFv)を含む、段落107~140のいずれか1つに記載のキメラ受容体。
142.前記2つのscFvの各々が、同じ抗原上の別個のエピトープと結合する、段落141に記載のキメラ受容体。
143.前記1つ以上のscFvの各々が、ペプチドリンカーによって分離される、段落135~142のいずれか1つに記載のキメラ受容体。
144.前記ペプチドリンカーが、GGGGSGGGGSGGGGS(配列番号27)またはEAAAKEAAAKEAAAKEAAAK(配列番号74)のアミノ酸配列を含む、段落143に記載のキメラ受容体。
145.前記抗原結合ドメインのうちの少なくとも1つが、2つの一本鎖可変断片(scFv)を含み、前記2つのscFvの各々が、FLT3と結合し、
(a)配列番号1のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号2のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(b)配列番号3のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号4のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(c)配列番号5のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号6のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(d)配列番号7のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号8のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(e)配列番号9のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号10のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(f)配列番号11のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号12のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(g)配列番号13のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号14のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、ならびに
(h)配列番号15のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号16のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVLからなる群から選択される重鎖可変ドメイン(VH)及び軽鎖可変ドメイン(VL)を含む、段落141~144のいずれか1つに記載のキメラ受容体。
146.前記抗原結合ドメインのうちの少なくとも1つが、2つの一本鎖可変断片(scFv)を含み、前記2つのscFvの各々が、CD33と結合し、
(a)配列番号17のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号18のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、ならびに
(b)配列番号19のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号20のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVLからなる群から選択される重鎖可変ドメイン(VH)及び軽鎖可変ドメイン(VL)を含む、段落141~145のいずれか1つに記載のキメラ受容体。
147.前記抗原結合ドメインのうちの少なくとも1つが、2つの一本鎖可変断片(scFv)を含み、前記2つのscFvの各々が、CLEC12Aと結合し、
(a)配列番号21のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号22のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(b)配列番号23のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号24のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、ならびに
(c)配列番号25のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号26のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVLからなる群から選択される重鎖可変ドメイン(VH)及び軽鎖可変ドメイン(VL)を含む、段落141~146のいずれか1つに記載のキメラ受容体。
148.段落107~147のいずれか1つに記載のキメラ受容体を含む、単離細胞。
149.前記細胞が、抗原結合ドメインを含む追加のキメラ受容体をさらに含む、段落148に記載の単離細胞。
150.前記追加のキメラ受容体が、MS4A3、VSTM1、LAT2、MLC1、CD131、GAPT、PRAM1、SLC22A16、SLC17A9、SPNS3、FLT3、CD33、CLEC12A、ADGRE2、IL3RA、CD117、CD93、IL1RAP、CD244、CCR1、LILRB2、PIEZO1、CD38、EMB、MYADM、LILRA2、CD300LF、及びCD70からなる群から選択される抗原と結合する、段落149に記載の単離細胞。
151.2つのキメラ受容体の各々が、別個の抗原と結合する、段落150に記載の単離細胞。
152.前記細胞が、免疫応答性細胞である、段落148~151のいずれか1つに記載の単離細胞。
153.前記キメラ受容体の2つの抗原のいずれかとの結合が、前記免疫応答性細胞を活性化することができる、段落152に記載の単離細胞。
154.前記追加のキメラ受容体の、その同族抗原との結合が、前記免疫応答性細胞を刺激することができる、段落152に記載の単離細胞。
155.前記キメラ受容体の2つの抗原のいずれかとの結合、及び前記追加のキメラ受容体の、その同族抗原との結合が、前記免疫応答性細胞を活性化するために必要とされる、段落152に記載の単離細胞。
156.前記免疫応答性細胞が、単一の抗原に対してのみ陽性である標的細胞に対する細胞溶解活性と比較して、キメラ受容体によって結合される2つの抗原のいずれかに対して陽性であり、かつ追加のキメラ受容体によって結合される抗原に対して陽性である標的細胞に対して、より高い程度の細胞溶解活性を示す、段落152に記載の単離細胞。
157.前記追加のキメラ受容体が、キメラT細胞受容体またはキメラ抗原受容体(CAR)である、段落149~156のいずれか1つに記載の単離細胞。
158.前記追加のキメラ受容体が、CARである、段落157に記載の単離細胞。
159.前記キメラ受容体が、第1のCARであり、前記追加のキメラ受容体が、第2のCARである、段落157に記載の単離細胞。
160.前記第2のCARが、1つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、前記1つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインが、CD3ゼータ鎖細胞内シグナル伝達ドメイン、CD97細胞内シグナル伝達ドメイン、CD11a-CD18細胞内シグナル伝達ドメイン、CD2細胞内シグナル伝達ドメイン、ICOS細胞内シグナル伝達ドメイン、CD27細胞内シグナル伝達ドメイン、CD154細胞内シグナル伝達ドメイン、CD8細胞内シグナル伝達ドメイン、OX40細胞内シグナル伝達ドメイン、4-1BB細胞内シグナル伝達ドメイン、CD28細胞内シグナル伝達ドメイン、ZAP40細胞内シグナル伝達ドメイン、CD30細胞内シグナル伝達ドメイン、GITR細胞内シグナル伝達ドメイン、HVEM細胞内シグナル伝達ドメイン、DAP10細胞内シグナル伝達ドメイン、DAP12細胞内シグナル伝達ドメイン、MyD88細胞内シグナル伝達ドメイン、及び2B4細胞内シグナル伝達ドメインからなる群から選択される、段落159に記載の単離細胞。
161.前記第1のCARの1つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインが、前記第2のCARの1つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインとは異なる、段落160に記載の単離細胞。
162.前記第1のCAR及び前記第2のCARが各々、CD3ゼータ鎖細胞内シグナル伝達ドメインを含む、段落161に記載の単離細胞。
163.前記第1のCAR及び前記第2のCARが各々、CD97細胞内シグナル伝達ドメイン、CD11a-CD18細胞内シグナル伝達ドメイン、CD2細胞内シグナル伝達ドメイン、ICOS細胞内シグナル伝達ドメイン、CD27細胞内シグナル伝達ドメイン、CD154細胞内シグナル伝達ドメイン、CD8細胞内シグナル伝達ドメイン、OX40細胞内シグナル伝達ドメイン、4-1BB細胞内シグナル伝達ドメイン、CD28細胞内シグナル伝達ドメイン、ZAP40細胞内シグナル伝達ドメイン、CD30細胞内シグナル伝達ドメイン、GITR細胞内シグナル伝達ドメイン、HVEM細胞内シグナル伝達ドメイン、DAP10細胞内シグナル伝達ドメイン、DAP12細胞内シグナル伝達ドメイン、MyD88細胞内シグナル伝達ドメイン、及び2B4細胞内シグナル伝達ドメインからなる群から選択される追加の細胞内シグナル伝達ドメインをさらに含む、段落162に記載の単離細胞。
164.前記第1のCARの追加の細胞内シグナル伝達ドメインが、前記第2のCARの追加の細胞内シグナル伝達ドメインとは異なる、段落163に記載の単離細胞。
165.前記第2のCARが、膜貫通ドメインを含み、前記膜貫通ドメインが、CD8膜貫通ドメイン、CD28膜貫通ドメイン、CD3ゼータ鎖膜貫通ドメイン、CD4膜貫通ドメイン、4-1BB膜貫通ドメイン、OX40膜貫通ドメイン、ICOS膜貫通ドメイン、CTLA-4膜貫通ドメイン、PD-1膜貫通ドメイン、LAG-3膜貫通ドメイン、2B4膜貫通ドメイン、及びBTLA膜貫通ドメインからなる群から選択される、段落160~164のいずれか1つに記載の単離細胞。
166.前記第1のCARの膜貫通ドメインが、前記第2のCARの膜貫通ドメインとは異なる、段落165に記載の単離細胞。
167.前記第2のCARが、前記抗原結合ドメインと前記膜貫通ドメインとの間のスペーサー領域を含み、前記スペーサー領域が、配列番号55~64からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、段落143~166のいずれか1つに記載の単離細胞。
168.前記細胞が、抗原結合ドメインを含む阻害性キメラ受容体をさらに含む、段落146~167のいずれか1つに記載の単離細胞。
169.前記追加のキメラ受容体が、抗原結合ドメインを含む阻害性キメラ受容体である、段落149に記載の単離細胞。
170.前記阻害性キメラ受容体が、前記細胞の1つ以上の活性を阻害する、段落168または段落169に記載の単離細胞。
171.前記阻害性キメラ受容体が、腫瘍細胞上で発現されない抗原と結合する、段落168~170のいずれか1つに記載の単離細胞。
172.前記阻害性キメラ受容体が、非腫瘍細胞上で発現される抗原と結合する、段落168~170のいずれか1つに記載の単離細胞。
173.前記阻害性キメラ受容体が、脳、神経組織、内分泌、骨、骨髄、免疫系、筋肉、肺、肝臓、胆嚢、膵臓、消化管、腎臓、膀胱、雄性生殖器、雌性生殖器、脂肪、軟組織、及び皮膚からなる群から選択される組織に由来する非腫瘍細胞上で発現される抗原と結合する、段落168~170のいずれか1つに記載の単離細胞。
174.前記腫瘍細胞が、急性骨髄性白血病(AML)細胞である、段落171~173のいずれか1つに記載の単離細胞。
175.前記阻害性キメラ受容体が、酵素阻害性ドメインを含む、段落168~174のいずれか1つに記載の単離細胞。
176.前記酵素阻害性ドメインが、免疫受容体に近接している場合、免疫受容体の活性化を阻害する、段落175に記載の単離細胞。
177.前記酵素阻害性ドメインが、酵素触媒ドメインを含む、段落175または段落176に記載の単離細胞。
178.前記酵素触媒ドメインが、CSK、SHP-1、PTEN、CD45、CD148、PTP-MEG1、PTP-PEST、c-CBL、CBL-b、PTPN22、LAR、PTPH1、SHIP-1、及びRasGAPからなる群から選択される酵素に由来する、段落177に記載の単離細胞。
179.前記阻害性キメラ受容体が、1つ以上の細胞内阻害性共シグナル伝達ドメインをさらに含む、段落168~178のいずれか1つに記載の単離細胞。
180.前記1つ以上の細胞内阻害性共シグナル伝達ドメインが、PD-1、CTLA4、TIGIT、LAIR1、GRB-2、Dok-1、Dok-2、SLAP、LAG3、HAVR、BTLA、GITR、及びPD-L1からなる群から選択される、段落179に記載の単離細胞。
181.前記阻害性キメラ受容体が、EMCN、JAM2、MS4A15、C4BPA、TRPM1、SCTR、SLC2A2、KCNQ2、PERP、WLS、FFAR2、PTPRB、NCKAP1、MPZL2、PLSCR4、TMEM47、ADGRL4、MET、BACE2、ATP8B1、LIFR、ART4、CALCRL、CNTNAP3、PCDH9、IL18R1、SLC8A3、CDH26、TMEM163、ABCA13、CACHD1、CYYR1、ABCB1、ADGRG6、ATP9A、CALN1、CDCP1、IL12RB2、SLC16A14、TMEM136、及びTMEM200Aからなる群から選択される抗原と結合する、段落168~180のいずれか1つに記載の単離細胞。
182.前記追加のキメラ受容体及び/または前記阻害性キメラ受容体の前記抗原結合ドメインが、1つ以上の抗体、抗体の抗原結合断片、F(ab)断片、F(ab’)断片、一本鎖可変断片(scFv)、または単一ドメイン抗体(sdAb)を含む、段落149~181のいずれか1つに記載の単離細胞。
183.前記追加のキメラ受容体及び/または前記阻害性キメラ受容体の前記抗原結合ドメインが、1つ以上の一本鎖可変断片(scFv)を含む、段落149~181のいずれか1つに記載の単離細胞。
184.前記阻害性キメラ受容体の前記抗原結合ドメインが、抗EMCN抗体、抗CALN1抗体、抗IL12RB2抗体、抗CDH26抗体、抗IL18R1抗体、抗SLC8A3抗体、抗ABCB1抗体、抗ATP9A抗体、抗CDCP1抗体、抗JAM2抗体、抗PCDH9抗体、抗TMEM200A抗体、抗ADGRL4抗体、抗ART4抗体、抗BACE2抗体、抗CALCRL抗体、抗LIFR抗体、抗MET抗体、抗MPZL2抗体、抗PTPRB抗体、または抗WLS抗体に由来する、段落183に記載の単離細胞。
185.前記抗EMCN抗体が、CBFYE-0213、V.7.C7.1、L6H10、L4B1、L5F12、L10B5、L3F12、L6H3、L9H8、及びL10F12からなる群から選択されるモノクローナル抗体である、段落184に記載の単離細胞。
186.前記1つ以上のscFvの各々が、重鎖可変ドメイン(VH)及び軽鎖可変ドメイン(VL)を含む、段落183~185のいずれか1つに記載の単離細胞。
187.前記VH及びVLが、ペプチドリンカーによって分離される、段落186に記載の単離細胞。
188.前記ペプチドリンカーが、配列番号27のアミノ酸配列を含む、段落187に記載の単離細胞。
189.前記1つ以上のscFvの各々が、構造VH-L-VLまたはVL-L-VHを含み、VHが、前記重鎖可変ドメインであり、Lが、前記ペプチドリンカーであり、VLが、前記軽鎖可変ドメインである、段落186~188のいずれか1つに記載の単離細胞。
190.前記追加のキメラ受容体及び/または前記阻害性キメラ受容体の前記抗原結合ドメインが、2つの一本鎖可変断片(scFv)を含む、段落168~189のいずれか1つに記載の単離細胞。
191.前記2つのscFvの各々が、同じ抗原上の別個のエピトープと結合する、段落190に記載の単離細胞。
192.前記1つ以上のscFvの各々が、ペプチドリンカーによって分離される、段落182~191のいずれか1つに記載の単離細胞。
193.前記ペプチドリンカーが、GGGGSGGGGSGGGGS(配列番号27)またはEAAAKEAAAKEAAAKEAAAK(配列番号74)のアミノ酸配列を含む、段落192に記載の単離細胞。
194.各キメラ受容体が、組換え的に発現される、段落146~189のいずれか1つに記載の単離細胞。
195.各キメラ受容体が、ベクター、または細胞のゲノムから選択された遺伝子座から発現される、段落146~194のいずれか1つに記載の単離細胞。
196.前記細胞が、T細胞、ナチュラルキラー(NK)細胞、細胞傷害性Tリンパ球(CTL)、制御性T細胞、ナチュラルキラーT(NKT)細胞、骨髄細胞、マクロファージ、ヒト胚性幹細胞(ESC)、ESC由来細胞、多能性幹細胞、及び人工多能性幹細胞(iPSC)、ならびにiPSC由来細胞からなる群から選択される、段落146~195のいずれか1つに記載の単離細胞。
197.前記細胞が、自家である、段落146~196のいずれか1つに記載の単離細胞。
198.前記細胞が、同種異系である、段落146~196のいずれか1つに記載の単離細胞。
199.EMCN、JAM2、MS4A15、C4BPA、TRPM1、SCTR、SLC2A2、KCNQ2、PERP、WLS、FFAR2、PTPRB、NCKAP1、MPZL2、PLSCR4、TMEM47、ADGRL4、MET、BACE2、ATP8B1、LIFR、ART4、CALCRL、CNTNAP3、PCDH9、IL18R1、SLC8A3、CDH26、TMEM163、ABCA13、CACHD1、CYYR1、ABCB1、ADGRG6、ATP9A、CALN1、CDCP1、IL12RB2、SLC16A14、TMEM136、及びTMEM200Aからなる群から選択される抗原と結合する細胞外抗原結合ドメインを含む、阻害性キメラ受容体。
200.前記抗原が、EMCNである、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
201.前記抗原が、JAM2である、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
202.前記抗原が、MS4A15である、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
203.前記抗原が、C4BPAである、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
204.前記抗原が、TRPM1である、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
205.前記抗原が、SCTRである、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
206.前記抗原が、SLC2A2である、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
207.前記抗原が、KCNQ2である、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
208.前記抗原が、PERPである、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
209.前記抗原が、WLSである、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
210.前記抗原が、FFAR2である、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
211.前記抗原が、PTPRBである、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
212.前記抗原が、NCKAP1である、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
213.前記抗原が、MPZL2である、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
214.前記抗原が、PLSCR4である、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
215.前記抗原が、TMEM47である、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
216.前記抗原が、ADGRL4である、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
217.前記抗原が、METである、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
218.前記抗原が、BACE2である、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
219.前記抗原が、ATP8B1である、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
220.前記抗原が、LIFRである、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
221.前記抗原が、ART4である、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
222.前記抗原が、CALCRLである、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
223.前記抗原が、CNTNAP3である、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
224.前記抗原が、PCDH9である、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
225.前記抗原が、IL18R1である、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
226.前記抗原が、SLC8A3である、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
227.前記抗原が、CDH26である、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
228.前記抗原が、TMEM163である、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
229.前記抗原が、ABCA13である、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
230.前記抗原が、CACHD1である、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
231.前記抗原が、CYYR1である、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
232.前記抗原が、ABCB1である、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
233.前記抗原が、ADGRG6である、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
234.前記抗原が、ATP9Aである、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
235.前記抗原が、CALN1である、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
236.前記抗原が、CDCP1である、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
237.前記抗原が、IL12RB2である、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
238.前記抗原が、SLC16A14である、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
239.前記抗原が、TMEM136である、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
240.前記抗原が、TMEM200Aである、段落199に記載の阻害性キメラ受容体。
241.細胞上で発現される場合、阻害性キメラ受容体が細胞の1つ以上の活性を阻害する、段落199~240のいずれか1つに記載の阻害性キメラ受容体。
242.前記抗原が、腫瘍細胞上で発現されない、段落199~241のいずれか1つに記載の阻害性キメラ受容体。
243.前記抗原が、非腫瘍細胞上で発現される、段落199~242のいずれか1つに記載の阻害性キメラ受容体。
244.前記抗原が、脳、神経組織、内分泌、骨、骨髄、免疫系、筋肉、肺、肝臓、胆嚢、膵臓、消化管、腎臓、膀胱、雄性生殖器、雌性生殖器、脂肪、軟組織、及び皮膚からなる群から選択される組織に由来する非腫瘍細胞上で発現される、段落243に記載の阻害性キメラ受容体。
245.前記阻害性キメラ受容体が、酵素阻害性ドメインを含む、段落199~244のいずれか1つに記載の阻害性キメラ受容体。
246.前記酵素阻害性ドメインが、免疫受容体に近接している場合、免疫受容体の活性化を阻害する、段落245に記載の阻害性キメラ受容体。
247.前記酵素阻害性ドメインが、酵素触媒ドメインを含む、段落245または段落246に記載の阻害性キメラ受容体。
248.前記酵素触媒ドメインが、CSK、SHP-1、PTEN、CD45、CD148、PTP-MEG1、PTP-PEST、c-CBL、CBL-b、PTPN22、LAR、PTPH1、SHIP-1、及びRasGAPからなる群から選択される酵素に由来する、段落247に記載の阻害性キメラ受容体。
249.前記阻害性キメラ受容体が、1つ以上の細胞内阻害性共シグナル伝達ドメインをさらに含む、段落199~248のいずれか1つに記載の阻害性キメラ受容体。
250.前記1つ以上の細胞内阻害性共シグナル伝達ドメインが、PD-1、CTLA4、TIGIT、LAIR1、GRB-2、Dok-1、Dok-2、SLAP、LAG3、HAVR、BTLA、GITR、及びPD-L1からなる群から選択される、段落249に記載の阻害性キメラ受容体。
251.前記抗原結合ドメインが、1つ以上の抗体、抗体の抗原結合断片、F(ab)断片、F(ab’)断片、一本鎖可変断片(scFv)、または単一ドメイン抗体(sdAb)を含む、段落199~250のいずれか1つに記載の阻害性キメラ受容体。
252.前記抗原結合ドメインが、1つ以上の一本鎖可変断片(scFv)を含む、段落199~251のいずれか1つに記載の阻害性キメラ受容体。
253.前記抗原結合ドメインが、抗EMCN抗体、抗CALN1抗体、抗IL12RB2抗体、抗CDH26抗体、抗IL18R1抗体、抗SLC8A3抗体、抗ABCB1抗体、抗ATP9A抗体、抗CDCP1抗体、抗JAM2抗体、抗PCDH9抗体、抗TMEM200A抗体、抗ADGRL4抗体、抗ART4抗体、抗BACE2抗体、抗CALCRL抗体、抗LIFR抗体、抗MET抗体、抗MPZL2抗体、抗PTPRB抗体、または抗WLS抗体に由来する、段落252に記載の阻害性キメラ受容体。
254.前記抗EMCN抗体が、CBFYE-0213、V.7.C7.1、L6H10、L4B1、L5F12、L10B5、L3F12、L6H3、L9H8、及びL10F12からなる群から選択されるモノクローナル抗体である、段落253に記載の阻害性キメラ受容体。
255.前記1つ以上のscFvの各々が、重鎖可変ドメイン(VH)及び軽鎖可変ドメイン(VL)を含む、段落252~254のいずれか1つに記載の阻害性キメラ受容体。
256.前記VH及びVLが、ペプチドリンカーによって分離される、段落255に記載の阻害性キメラ受容体。
257.前記ペプチドリンカーが、配列番号27のアミノ酸配列を含む、段落256に記載の阻害性キメラ受容体。
258.前記1つ以上のscFvの各々が、構造VH-L-VLまたはVL-L-VHを含み、VHが、前記重鎖可変ドメインであり、Lが、前記ペプチドリンカーであり、VLが、前記軽鎖可変ドメインである、段落255~257のいずれか1つに記載の阻害性キメラ受容体。
259.前記抗原結合ドメインが、2つの一本鎖可変断片(scFv)を含む、段落199~258のいずれか1つに記載の阻害性キメラ受容体。
260.前記2つのscFvの各々が、同じ抗原上の別個のエピトープと結合する、段落259に記載の阻害性キメラ受容体。
261.前記1つ以上のscFvの各々が、ペプチドリンカーによって分離される、段落251~260のいずれか1つに記載の阻害性キメラ受容体。
262.前記ペプチドリンカーが、GGGGSGGGGSGGGGS(配列番号27)またはEAAAKEAAAKEAAAKEAAAK(配列番号74)のアミノ酸配列を含む、段落261に記載の阻害性キメラ受容体。
263.段落199~262のいずれか1つに記載の阻害性キメラ受容体を含む、単離細胞。
264.前記阻害性キメラ受容体が、組換え的に発現される、段落263に記載の単離細胞。
265.前記阻害性キメラ受容体が、ベクターまたは細胞のゲノムからの選択された遺伝子座から発現される、段落263または段落264に記載の単離細胞。
266.前記細胞が、FLT3、CD33、CLEC12A、MS4A3、VSTM1、LAT2、MLC1、CD131、GAPT、PRAM1、SLC22A16、SLC17A9、SPNS3、ADGRE2、IL3RA、CD117、CD93、IL1RAP、CD244、CCR1、LILRB2、PIEZO1、CD38、EMB、MYADM、LILRA2、CD300LF、及びCD70からなる群から選択される抗原と結合する細胞外抗原結合ドメインを含むキメラ受容体をさらに含む、段落263~265のいずれか1つに記載の単離細胞。
267.単離細胞であって、
(a)第1の抗原と結合する細胞外抗原結合ドメインを含む阻害性キメラ受容体であって、前記第1の抗原が、EMCN、JAM2、MS4A15、C4BPA、TRPM1、SCTR、SLC2A2、KCNQ2、PERP、WLS、FFAR2、PTPRB、NCKAP1、MPZL2、PLSCR4、TMEM47、ADGRL4、MET、BACE2、ATP8B1、LIFR、ART4、CALCRL、CNTNAP3、PCDH9、IL18R1、SLC8A3、CDH26、TMEM163、ABCA13、CACHD1、CYYR1、ABCB1、ADGRG6、ATP9A、CALN1、CDCP1、IL12RB2、SLC16A14、TMEM136、及びTMEM200Aからなる群から選択される、前記阻害性キメラ受容体と、
(b)1つ以上の細胞外抗原結合ドメインを含むキメラ受容体であって、各抗原結合ドメインが、表1に列挙される抗原からなる群から選択される前記抗原と結合する、前記キメラ受容体と、を含む、前記単離細胞。
268.単離細胞であって、
(a)第1の抗原と結合する細胞外抗原結合ドメインを含む阻害性キメラ受容体であって、前記第1の抗原が、EMCN、JAM2、MS4A15、C4BPA、TRPM1、SCTR、SLC2A2、KCNQ2、PERP、WLS、FFAR2、PTPRB、NCKAP1、MPZL2、PLSCR4、TMEM47、ADGRL4、MET、BACE2、ATP8B1、LIFR、ART4、CALCRL、CNTNAP3、PCDH9、IL18R1、SLC8A3、CDH26、TMEM163、ABCA13、CACHD1、CYYR1、ABCB1、ADGRG6、ATP9A、CALN1、CDCP1、IL12RB2、SLC16A14、TMEM136、及びTMEM200Aからなる群から選択される、前記阻害性キメラ受容体と、
(b)1つ以上の細胞外抗原結合ドメインを含むキメラ受容体であって、各抗原結合ドメインが、FLT3、CD33、CLEC12A、MS4A3、VSTM1、LAT2、MLC1、CD131、GAPT、PRAM1、SLC22A16、SLC17A9、SPNS3、ADGRE2、IL3RA、CD117、CD93、IL1RAP、CD244、CCR1、LILRB2、PIEZO1、CD38、EMB、MYADM、LILRA2、CD300LF、及びCD70からなる群から選択される抗原に結合する、前記キメラ受容体と、を含む、前記単離細胞。
269.前記キメラ受容体が、キメラT細胞受容体またはキメラ抗原受容体(CAR)である、段落266~268のいずれか1つに記載の単離細胞。
270.前記キメラ受容体が、CARである、段落269に記載の単離細胞。
271.前記CARが、1つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、前記1つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインが、CD3ゼータ鎖細胞内シグナル伝達ドメイン、CD97細胞内シグナル伝達ドメイン、CD11a-CD18細胞内シグナル伝達ドメイン、CD2細胞内シグナル伝達ドメイン、ICOS細胞内シグナル伝達ドメイン、CD27細胞内シグナル伝達ドメイン、CD154細胞内シグナル伝達ドメイン、CD8細胞内シグナル伝達ドメイン、OX40細胞内シグナル伝達ドメイン、4-1BB細胞内シグナル伝達ドメイン、CD28細胞内シグナル伝達ドメイン、ZAP40細胞内シグナル伝達ドメイン、CD30細胞内シグナル伝達ドメイン、GITR細胞内シグナル伝達ドメイン、HVEM細胞内シグナル伝達ドメイン、DAP10細胞内シグナル伝達ドメイン、DAP12細胞内シグナル伝達ドメイン、MyD88細胞内シグナル伝達ドメイン、及び2B4細胞内シグナル伝達ドメインからなる群から選択される、段落270に記載の単離細胞。
272.前記CARが、膜貫通ドメインを含み、前記膜貫通ドメインが、CD8膜貫通ドメイン、CD28膜貫通ドメイン、CD3ゼータ鎖膜貫通ドメイン、CD4膜貫通ドメイン、4-1BB膜貫通ドメイン、OX40膜貫通ドメイン、ICOS膜貫通ドメイン、CTLA-4膜貫通ドメイン、PD-1膜貫通ドメイン、LAG-3膜貫通ドメイン、2B4膜貫通ドメイン、及びBTLA膜貫通ドメインからなる群から選択される、段落270または段落271に記載の単離細胞。
273.前記CARが、前記抗原結合ドメインと前記膜貫通ドメインとの間のスペーサー領域を含み、前記スペーサー領域が、配列番号55~64からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、段落208~272のいずれか1つに記載の単離細胞。
274.前記阻害性キメラ受容体及び/または前記キメラ受容体の前記抗原結合ドメインが、1つ以上の抗体、抗体の抗原結合断片、F(ab)断片、F(ab’)断片、一本鎖可変断片(scFv)、または単一ドメイン抗体(sdAb)を含む、段落266~273のいずれか1つに記載の単離細胞。
275.前記阻害性キメラ受容体及び/または前記キメラ受容体の前記抗原結合ドメインが、1つ以上の一本鎖可変断片(scFv)を含む、段落266~273のいずれか1つに記載の単離細胞。
276.前記阻害性キメラ受容体の前記抗原結合ドメインが、抗EMCN抗体、抗CALN1抗体、抗IL12RB2抗体、抗CDH26抗体、抗IL18R1抗体、抗SLC8A3抗体、抗ABCB1抗体、抗ATP9A抗体、抗CDCP1抗体、抗JAM2抗体、抗PCDH9抗体、抗TMEM200A抗体、抗ADGRL4抗体、抗ART4抗体、抗BACE2抗体、抗CALCRL抗体、抗LIFR抗体、抗MET抗体、抗MPZL2抗体、抗PTPRB抗体、または抗WLS抗体に由来する、段落275に記載の単離細胞。
277.前記抗EMCN抗体が、CBFYE-0213、V.7.C7.1、L6H10、L4B1、L5F12、L10B5、L3F12、L6H3、L9H8、及びL10F12からなる群から選択されるモノクローナル抗体である、段落276に記載の阻害性キメラ受容体。
278.前記1つ以上のscFvの各々が、重鎖可変ドメイン(VH)及び軽鎖可変ドメイン(VL)を含む、段落275~277のいずれか1つに記載の単離細胞。
279.前記VH及びVLが、ペプチドリンカーによって分離される、段落278に記載の単離細胞。
280.前記ペプチドリンカーが、配列番号27のアミノ酸配列を含む、段落279に記載の単離細胞。
281.前記1つ以上のscFvの各々が、構造VH-L-VLまたはVL-L-VHを含み、VHが、前記重鎖可変ドメインであり、Lが、前記ペプチドリンカーであり、VLが、前記軽鎖可変ドメインである、段落278~280のいずれか1つに記載の単離細胞。
282.前記阻害性キメラ受容体及び/または前記キメラ受容体の前記抗原結合ドメインが、2つの一本鎖可変断片(scFv)を含む、段落266~281のいずれか1つに記載の単離細胞。
283.前記2つのscFvの各々が、同じ抗原上の別個のエピトープと結合する、段落282に記載の単離細胞。
284.前記1つ以上のscFvの各々が、ペプチドリンカーによって分離される、段落274~283のいずれか1つに記載の単離細胞。
285.前記ペプチドリンカーが、GGGGSGGGGSGGGGS(配列番号27)またはEAAAKEAAAKEAAAKEAAAK(配列番号74)のアミノ酸配列を含む、段落284に記載の単離細胞。
286.前記細胞が、免疫応答性細胞である、段落267~285のいずれか1つに記載の単離細胞。
287.前記阻害性キメラ受容体の前記第1の抗原との結合が、前記免疫応答性細胞を阻害することができる、段落286に記載の単離細胞。
288.前記キメラ受容体の前記第2の抗原との結合が、前記免疫応答性細胞を活性化することができる、段落286または段落287に記載の単離細胞。
289.前記キメラ受容体が、低い結合親和性で前記第2の抗原と結合する、段落267~288のいずれか1つに記載の単離細胞。
290.前記キメラ受容体が、前記阻害性キメラ受容体が前記第1の抗原と結合する結合親和性よりも低い前記結合親和性で前記第2の抗原と結合する、段落267~289のいずれか1つに記載の単離細胞。
291.前記キメラ受容体が、低い結合活性で第1の抗原と結合する、段落267~290のいずれか1つに記載の単離細胞。
292.前記キメラ受容体が、組換え的に発現される、段落266~291のいずれか1つに記載の単離細胞。
293.前記キメラ受容体が、ベクター、または細胞のゲノムから選択された遺伝子座から発現される、段落266~292のいずれか1つに記載の単離細胞。
294.前記細胞が、T細胞、ナチュラルキラー(NK)細胞、細胞傷害性Tリンパ球(CTL)、制御性T細胞、ナチュラルキラーT(NKT)細胞、骨髄細胞、マクロファージ、ヒト胚性幹細胞(ESC)、ESC由来細胞、多能性幹細胞、及び人工多能性幹細胞(iPSC)、ならびにiPSC由来細胞からなる群から選択される、段落263~293のいずれか1つに記載の単離細胞。
295.前記細胞が、自家である、段落263~294のいずれか1つに記載の単離細胞。
296.前記細胞が、同種異系である、段落263~294のいずれか1つに記載の単離細胞。
297.段落1~22のいずれか1つに記載のキメラ受容体をコードする、単離核酸。
298.段落107~140のいずれか1つに記載のキメラ受容体をコードする、単離核酸。
299.段落199~258のいずれか1つに記載の阻害性キメラ受容体をコードする、単離核酸。
300.段落297に記載の核酸を含む、ベクター。
301.前記ベクターが、段落298に記載の核酸をさらに含む、段落300に記載のベクター。
302.前記ベクターが、段落299に記載の核酸をさらに含む、段落300または段落301に記載のベクター。
303.段落298に記載の核酸を含む、ベクター。
304.前記ベクターが、段落299に記載の核酸をさらに含む、段落303に記載のベクター。
305.段落299に記載の核酸を含む、ベクター。
306.段落297に記載の核酸を含む、遺伝子修飾細胞。
307.前記細胞が、段落298に記載の核酸をさらに含む、段落306に記載の遺伝子修飾細胞。
308.前記細胞が、段落299に記載の核酸をさらに含む、段落306または段落307に記載の遺伝子修飾細胞。
309.段落298に記載の核酸を含む、遺伝子修飾細胞。
310.前記細胞が、段落299に記載の核酸をさらに含む、段落309に記載の遺伝子修飾細胞。
311.段落299に記載の核酸を含む、遺伝子修飾細胞。
312.段落300~305のいずれか1つに記載のベクターを含む、遺伝子修飾細胞。
313.対象を治療する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の段落24~106、146~198、263~296、または306~312のいずれか1つに記載の単離細胞のうちのいずれかを投与することを含む、前記方法。
314.対象において腫瘍細胞に対する細胞媒介免疫応答を刺激する方法であって、腫瘍を有する対象に、治療有効量の段落24~106、146~198、263~296、または306~312のいずれか1つに記載の単離細胞のうちのいずれかを投与することを含む、前記方法。
315.対象において抗腫瘍免疫を提供する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の段落24~106、146~198、263~296、または306~312のいずれか1つに記載の単離細胞のうちのいずれかを投与することを含む、前記方法。
316.対象において腫瘍負荷を減少させる方法であって、有効量の段落24~106、146~198、263~296、または306~312のいずれか1つに記載の単離細胞のうちのいずれかを投与することを含む、前記方法。
317.前記方法が、腫瘍細胞の数を低減させる、段落316に記載の方法。
318.前記方法が、腫瘍サイズを低減させる、段落316に記載の方法。
319.前記方法が、腫瘍体積を低減させる、段落316に記載の方法。
320.前記方法が、前記対象における腫瘍を根絶する、段落316に記載の方法。
321.腫瘍を有する対象を治療する方法であって、治療有効量の段落24~106、146~198、263~296、または306~312のいずれか1つに記載の細胞のうちのいずれかを投与することを含む、前記方法。
322.対象において骨髄障害を治療または予防する方法であって、有効量の段落24~106、146~198、263~296、または306~312のいずれか1つに記載の単離細胞のうちのいずれかを投与することを含む、前記方法。
323.前記骨髄障害が、骨髄異形成症候群、骨髄増殖性腫瘍、慢性骨髄単球性白血病、急性骨髄性白血病(AML)、急性骨髄芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄単球性白血病、慢性骨髄性白血病、及び真性多血症である、段落322に記載の方法。
324.前記骨髄障害が、急性骨髄性白血病(AML)である、段落322に記載の方法。
325.前記方法が、対象における腫瘍負荷を低減または根絶する、段落321~324のいずれか1つに記載の方法。
326.有効量の段落24~106、146~198、263~296、または306~312のいずれか1つに記載の細胞、及び薬学的に許容される担体、薬学的に許容される賦形剤、またはそれらの組み合わせを含む、薬学的組成物。
327.骨髄障害を治療及び/または予防するための、段落326に記載の薬学的組成物。
328.骨髄障害を治療及び/または予防するためのキットであって、段落24~106、146~198、263~296、または306~312のいずれか1つに記載の細胞を含む、前記キット。
329.前記キットが、対象における骨髄障害を治療及び/または予防するための前記細胞を使用するための書面による指示をさらに含む、段落328に記載のキット。
330.骨髄障害を治療及び/または予防するためのキットであって、段落297~299のいずれか1つに記載の単離核酸を含む、前記キット。
331.前記キットが、対象における骨髄障害を治療及び/または予防するための1つ以上の抗原特異的細胞を産生するための前記核酸を使用するための書面による指示をさらに含む、段落330に記載のキット。
332.骨髄障害を治療及び/または予防するためのキットであって、段落300~305のいずれか1つに記載のベクターを含む、前記キット。
333.前記キットが、対象における骨髄障害を治療及び/または予防するための1つ以上の抗原特異的細胞を産生するための前記ベクターを使用するための書面による指示をさらに含む、段落332に記載のキット。
334.骨髄障害を治療及び/または予防する方法であって、抗原と結合する有効量の少なくとも1つの抗体を投与することを含み、前記抗原が、MS4A3、VSTM1、LAT2、MLC1、CD131、GAPT、PRAM1、SLC22A16、SLC17A9、及びSPNS3からなる群から選択される、前記方法。
335.前記骨髄障害が、骨髄異形成症候群、骨髄増殖性腫瘍、慢性骨髄単球性白血病、または急性骨髄性白血病(AML)、急性骨髄芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄単球性白血病、慢性骨髄性白血病、及び真性多血症からなる群から選択される、段落334に記載の方法。
336.前記骨髄障害が、急性骨髄性白血病(AML)である、段落335に記載の方法。
337.前記方法が、対象における腫瘍負荷を低減または根絶する、段落334~336のいずれか1つに記載の方法。
338.キメラ抗原受容体(CAR)であって、前記CARが、細胞外抗原結合ドメイン、1つ以上の細胞内シグナル伝達ドメイン、膜貫通ドメイン、及び前記抗原結合ドメインと前記膜貫通ドメインとの間のスペーサー領域を含み、前記スペーサー領域が、配列番号55~64からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、前記キメラ抗原受容体。
339.細胞外抗原結合ドメインを含むキメラ受容体であって、前記抗原結合ドメインが、2つ以上の抗体、抗体の抗原結合断片、F(ab)断片、F(ab’)断片、一本鎖可変断片(scFv)、または単一ドメイン抗体(sdAb)を含む、前記キメラ受容体。
340.前記2つ以上の抗体、抗体の抗原結合断片、F(ab)断片、F(ab’)断片、一本鎖可変断片(scFv)、または単一ドメイン抗体(sdAb)の各々が、同じ抗原上の別個のエピトープと結合する、段落339に記載のキメラ受容体。
341.前記抗原結合ドメインが、2つ以上の一本鎖可変断片(scFv)を含む、段落339または段落340に記載のキメラ受容体。
342.前記2つ以上のscFvの各々が、重鎖可変ドメイン(VH)及び軽鎖可変ドメイン(VL)を含む、段落341に記載のキメラ受容体。
343.各VH及びVLが、ペプチドリンカーによって分離される、段落342に記載のキメラ受容体。
344.前記ペプチドリンカーが、配列番号27のアミノ酸配列を含む、段落343に記載のキメラ受容体。
345.前記2つ以上のscFvの各々が、構造VH-L-VLまたはVL-L-VHを含み、VHが、前記重鎖可変ドメインであり、Lが、前記ペプチドリンカーであり、VLが、前記軽鎖可変ドメインである、段落341~344のいずれか1つに記載のキメラ受容体。
346.前記2つ以上のscFvの各々が、ペプチドリンカーによって分離される、段落341~345のいずれか1つに記載のキメラ受容体。
347.前記ペプチドリンカーが、GGGGSGGGGSGGGGS(配列番号27)またはEAAAKEAAAKEAAAKEAAAK(配列番号74)のアミノ酸配列を含む、段落346に記載のキメラ受容体。
348.前記キメラ受容体が、キメラT細胞受容体またはキメラ抗原受容体(CAR)である、段落339~347のいずれか1つに記載のキメラ受容体。
349.前記キメラ受容体が、CARである、段落348に記載のキメラ受容体。
350.前記CARが、1つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、前記1つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインが、CD3ゼータ鎖細胞内シグナル伝達ドメイン、CD97細胞内シグナル伝達ドメイン、CD11a-CD18細胞内シグナル伝達ドメイン、CD2細胞内シグナル伝達ドメイン、ICOS細胞内シグナル伝達ドメイン、CD27細胞内シグナル伝達ドメイン、CD154細胞内シグナル伝達ドメイン、CD8細胞内シグナル伝達ドメイン、OX40細胞内シグナル伝達ドメイン、4-1BB細胞内シグナル伝達ドメイン、CD28細胞内シグナル伝達ドメイン、ZAP40細胞内シグナル伝達ドメイン、CD30細胞内シグナル伝達ドメイン、GITR細胞内シグナル伝達ドメイン、HVEM細胞内シグナル伝達ドメイン、DAP10細胞内シグナル伝達ドメイン、DAP12細胞内シグナル伝達ドメイン、及びMyD88細胞内シグナル伝達ドメインからなる群から選択される、段落349に記載のキメラ受容体。
351.前記CARが、膜貫通ドメインを含み、前記膜貫通ドメインが、CD8膜貫通ドメイン、CD28膜貫通ドメイン、CD3ゼータ鎖膜貫通ドメイン、CD4膜貫通ドメイン、4-1BB膜貫通ドメイン、OX40膜貫通ドメイン、ICOS膜貫通ドメイン、CTLA-4膜貫通ドメイン、PD-1膜貫通ドメイン、LAG-3膜貫通ドメイン、2B4膜貫通ドメイン、及びBTLA膜貫通ドメインからなる群から選択される、段落349または段落350に記載のキメラ受容体。
352.前記CARが、前記抗原結合ドメインと前記膜貫通ドメインとの間のスペーサー領域を含み、前記スペーサー領域が、配列番号55~64からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、段落348~351のいずれか1つに記載のキメラ受容体。
353.段落339~352のいずれか1つに記載のキメラ受容体を含む、単離細胞。
354.前記キメラ受容体が、組換え的に発現される、段落353に記載の単離細胞。
355.前記キメラ受容体が、ベクターまたは細胞のゲノムからの選択された遺伝子座から発現される、段落353または段落354に記載の単離細胞。
356.段落353~355のいずれか1つに記載の単離細胞、及び薬学的に許容される担体、薬学的に許容される賦形剤、またはそれらの組み合わせを含む、薬学的組成物。
357.段落339~352のいずれか1つに記載のキメラ受容体をコードする、単離核酸。
358.段落357に記載の核酸を含む、ベクター。
359.段落357に記載の核酸を含む、遺伝子修飾細胞。
バイオインフォマティクススクリーン分析
AML及び正常な造血試料からのマイクロアレイデータ、RNA-seqデータ、ならびにプロテオミクスデータ、ならびにオフターゲット組織からのデータを、AMLに関連する潜在的な標的について分析した。マイクロアレイのデータセットをGEOから取得し、RNA-seqのデータセットをThe Cancer Genome Atlas(TCGA)から取得し、プロテオミクスのデータセットをHuman Protein Atlas及びHuman Proteome Mapから取得した。各データセットを、最初に、AMLと関連する遺伝子及びタンパク質標的について分析した。次いで、AML標的の最初の個々のマイクロアレイ、RNA-seq、及びプロテオミクスバイオインフォマティクス分析からのデータを比較して、AML標的の洗練したリストを提供した。推定AML標的は、抗体染色及びフローサイトメトリーを介してAML細胞株において、ならびに抗体染色及びフローサイトメトリーを介して初代AML試料において検証した。すべてのデータを分析して、AML標的の最終リストを提供した。マイクロアレイ発現、RNA-seq発現、及びHPA傷害性を組み合わせたバイオインフォマティクス分析は、AML抗原標的を特定及び検証するためのより強固なパイプラインが同時に可能となる。
次いで、実施例1で特定した新規のAML抗原を、AND及びNOTゲーティングについて対合させた。
2つの異なるドナーからのT細胞を遺伝子修飾して、6つの異なるFLT3 scFvポリペプチドからなるCARを発現させた。CARはまた、レポーター遺伝子としてYFPタグを含む。各ドナーT細胞株におけるFLT3 CARの発現を、YFPレポータータグの発現によって決定されるように、フローサイトメトリーを介して定量化した。図35Aは、試験した6つのFLT3 scFvの各々について、ドナー1からのYFP及びFLT3 CARを発現する細胞%を示し、図35Bは、試験した6つのFLT3 scFvの各々について、ドナー1からのYFP陽性細胞の平均蛍光強度を示す。図35Cは、試験した6つのFLT3 scFvの各々について、ドナー2からのYFP及びFLT3 CARを発現する細胞%を示し、図35Dは、試験した6つのFLT3 scFvの各々について、ドナー2からのYFP陽性細胞の平均蛍光強度を示す。NVはベクターなしの略であり、陰性対照である。
次に、実施例3で生成されたFLT3 CAR T細胞を、マウスモデルにおいてインビボで特徴付けた。MOLM13及びMV411などのFLT3を発現する患者由来腫瘍細胞をマウスに異種移植した。次いで、FLT3 CAR T細胞を異種移植マウスに注入した。実験の過程で血液を採取し、時間経過の最後に脾臓、骨髄、末梢血を採取した。未治療マウスを対照として使用した。FLT3 CAR T細胞の注入は、未治療マウスと比較して、FLT3 CAR T細胞で治療したマウスにおける異種移植腫瘍細胞負荷及び増殖を低減する。
T細胞は、AML抗原FLT3を認識するCAR及び非AML抗原EMCN(エンドムシン)を認識する阻害性CARを発現するように遺伝子修飾した。二重修飾T細胞が機能的であることを確認するために、T細胞を、同族FLT3抗原を発現する細胞と培養し、T細胞活性化を、実施例3に記載されるように、死滅及びサイトカイン産生アッセイを介して特徴付けした。簡単に述べると、FLT3 CARを、AML細胞株であるMOLM13、FLT3+発現株であるSEM、または対照としてFLT3陰性細胞株であるK562と1:1の比率で混合した。非修飾T細胞を陰性対照として使用した。FLT3 CARを発現する二重修飾T細胞は、FLT3発現細胞に応答して増殖し、エフェクターサイトカインを産生する。
T細胞は、AML抗原FLT3を認識するCAR及び非AML抗原JAM2を認識する阻害性CARを発現するように遺伝子修飾した。二重修飾T細胞が機能的であることを確認するために、T細胞を、同族FLT3抗原を発現する細胞と培養し、T細胞活性化を、実施例3に記載されるように、死滅及びサイトカイン産生アッセイを介して特徴付けした。簡単に述べると、FLT3 CARを、AML細胞株であるMOLM13、FLT3+発現株であるSEM、または対照としてFLT3陰性細胞株であるK562と1:1の比率で混合した。T細胞及び細胞株を18時間共培養し、次いで、生/死染色で染色した。死滅効率は、フローサイトメトリーを介して評価した。非修飾T細胞を陰性対照として使用した。FLT3 CARを発現する二重修飾T細胞は、FLT3抗原単独に応答して増殖し、エフェクターサイトカインを産生する。
T細胞は、AML抗原CLEC12Aを認識するCAR及び非AML抗原MS4A15を認識する阻害性CARを発現するように遺伝子修飾した。二重修飾T細胞が機能的であることを確認するために、T細胞を、同族CLEC12A抗原を発現する細胞と培養し、T細胞活性化を、実施例3に記載したように、死滅及びサイトカイン産生アッセイを介して特徴付けした。簡単に述べると、CLEC12A CARを、CLEC12Aを発現するAML細胞株、MS4A15+発現株、または対照として陰性細胞株と1:1の比率で混合した。T細胞及び細胞株を18時間共培養し、次いで、生/死染色で染色した。死滅効率は、フローサイトメトリーを介して評価した。非修飾T細胞を陰性対照として使用した。CLEC12A CARを発現する二重修飾T細胞は、CLEC12A抗原単独に応答して増殖し、エフェクターサイトカインを産生する。
T細胞は、AML抗原CLEC12Aを認識するCAR及び非AML抗原SLC34A2を認識する阻害性CARを発現するように遺伝子修飾した。二重修飾T細胞が機能的であることを確認するために、T細胞を、同族CLEC12A抗原を発現する細胞と培養し、T細胞活性化を、実施例3に記載したように、死滅及びサイトカイン産生アッセイを介して特徴付けした。簡単に述べると、CLEC12A CARを、CLEC12Aを発現するAML細胞株、SLC34A2+発現株、または対照として陰性細胞株と1:1の比率で混合した。T細胞及び細胞株を18時間共培養し、次いで、生/死染色で染色した。死滅効率は、フローサイトメトリーを介して評価した。非修飾T細胞を陰性対照として使用した。CLEC12A CARを発現する二重修飾T細胞は、CLEC12A抗原単独に応答して増殖し、エフェクターサイトカインを産生する。
T細胞は、AML抗原IL1RAPを認識するCAR及び非AML抗原SLC2A2を認識する阻害性CARを発現するように遺伝子修飾した。二重修飾T細胞が機能的であることを確認するために、T細胞を、同族IL1RAP抗原を発現する細胞と培養し、T細胞活性化を、実施例3に記載したように、死滅及びサイトカイン産生アッセイを介して特徴付けした。簡単に述べると、IL1RAP CARを、IL1RAPを発現するAML細胞株、SLC2A2+発現株、または対照として陰性細胞株と1:1の比率で混合した。T細胞及び細胞株を18時間共培養し、次いで、生/死染色で染色した。死滅効率は、フローサイトメトリーを介して評価した。非修飾T細胞を陰性対照として使用した。IL1RAP CARを発現する二重修飾T細胞は、IL1RAP抗原単独に応答して増殖し、エフェクターサイトカインを産生する。
T細胞は、AML抗原CD33を認識するCAR及び非AML抗原TRPM1を認識する阻害性CARを発現するように遺伝子修飾した。二重修飾T細胞が機能的であることを確認するために、T細胞を、同族CD33抗原を発現する細胞と培養し、T細胞活性化を、実施例3に記載したように、死滅及びサイトカイン産生アッセイを介して特徴付けした。簡単に述べると、CD33 CARを、CD33を発現するAML細胞株、TRPM1+発現株、または対照として陰性細胞株と1:1の比率で混合した。T細胞及び細胞株を18時間共培養し、次いで、生/死染色で染色した。死滅効率は、フローサイトメトリーを介して評価した。非修飾T細胞を陰性対照として使用した。CD33 CARを発現する二重修飾T細胞は、CD33抗原単独に応答して増殖し、エフェクターサイトカインを産生する。
T細胞は、AML抗原SLC22A16を認識するCAR及び非AML抗原SCTRを認識する阻害性CARを発現するように遺伝子修飾した。二重修飾T細胞が機能的であることを確認するために、T細胞を、同族SLC22A16抗原を発現する細胞と培養し、T細胞活性化を、実施例3に記載したように、死滅及びサイトカイン産生アッセイを介して特徴付けした。簡単に述べると、SLC22A16 CARを、CD33を発現するAML細胞株、SCTR+発現株、または対照として陰性細胞株と1:1の比率で混合した。T細胞及び細胞株を18時間共培養し、次いで、生/死染色で染色した。死滅効率は、フローサイトメトリーを介して評価した。非修飾T細胞を陰性対照として使用した。SLC22A16 CARを発現する二重修飾T細胞は、SLC22A16 抗原単独に応答して増殖し、エフェクターサイトカインを産生する。
T細胞は、AML抗原PIEZO1を認識するCAR及び非AML抗原KCNQ2を認識する阻害性CARを発現するように遺伝子修飾した。二重修飾T細胞が機能的であることを確認するために、T細胞を、同族PIEZO16抗原を発現する細胞と培養し、T細胞活性化を、実施例3に記載したように、死滅及びサイトカイン産生アッセイを介して特徴付けした。簡単に述べると、PIEZO1 CARを、PIEZO1を発現するAML細胞株、KCNQ2+発現株、または対照として陰性細胞株と1:1の比率で混合した。T細胞及び細胞株を18時間共培養し、次いで、生/死染色で染色した。死滅効率は、フローサイトメトリーを介して評価した。非修飾T細胞を陰性対照として使用した。PIEZO1 CARを発現する二重修飾T細胞は、PIEZO1抗原単独に応答して増殖し、エフェクターサイトカインを産生する。
T細胞は、AML抗原IL3RAを認識するCAR及び非AML抗原PERPを認識する阻害性CARを発現するように遺伝子修飾した。二重修飾T細胞が機能的であることを確認するために、T細胞を、同族IL3RA抗原を発現する細胞と培養し、T細胞活性化を、実施例3に記載したように、死滅及びサイトカイン産生アッセイを介して特徴付けした。簡単に述べると、IL3RA CARを、IL3RAを発現するAML細胞株、PERP+発現株、または対照として陰性細胞株と1:1の比率で混合した。T細胞及び細胞株を18時間共培養し、次いで、生/死染色で染色した。死滅効率は、フローサイトメトリーを介して評価した。非修飾T細胞を陰性対照として使用した。IL3RA CARを発現する二重修飾T細胞は、IL3RA抗原単独に応答して増殖し、エフェクターサイトカインを産生する。
材料及び方法
バイオインフォマティクス分析は、FLT3、CD33、及びCLEC12AがAMLにおいて高度に発現されることを同定した。NCBI GEOから1100を超えるAML患者由来の健常な造血細胞試料をダウンロードし、正規化することによって、マイクロアレイデータベースを構築した。このデータベースを使用して、健常な造血細胞と比較して、AML細胞において高い転写発現を有する遺伝子を選択的に同定した。
FLT3、CD33、及びCLEC12Aは、健常な造血細胞と比較して、AML患者試料中で高度に発現される。図39は、1100個を超える健常な試料及びAML患者試料を含むマイクロアレイベースの遺伝子発現データベースのヒートマップを示す。上から下の順に、細胞集団は以下の通りである:AML-5/7(q)、AML-9q、AML+8、AML abn(3q)、AML芽球、AML BMMC NK、AML複合体、AML flt3 itd MUT、AML itd(16)、AML inv(16)/t(16;16)、AML LPC(白血病前駆細胞)、AML LSC(白血病幹細胞)、AML MDS-7(q)、AML MDS-Y、AML MDS複合体、AML NK、AML PBMC NK、AML t(11q23)、AML t(15;17)、AML t(6;9)、AML t(8;21)、B細胞、Bナイーブ、帯状核細胞,CD4+T細胞、CD8+T細胞、CD8+Tセントラル細胞、CD8+Tエフェクター細胞、CD8+Tナイーブ細胞、CMP(一般的な骨髄前駆細胞)、初期PM(初期前骨髄球)、赤芽球、GMP(顆粒球マクロファージ前駆細胞)、H UB(健常な臍帯血)、H WBM(健常な全骨髄)、HSC(造血幹細胞)、後期PM(後期前骨髄球)、LMPP(リンパ球刺激多能性前駆細胞)、MEP(巨核球赤血球前駆細胞)、MM(後骨髄球)、単球、MPP(多能性前駆細胞)、MY(骨髄球)、好中球、PM(前骨髄球)、PMN(多形核細胞)、プレB細胞、プロB細胞。
材料及び方法
細胞表面発現
MOLM-13、THP-1、及びSEM細胞におけるFLT3の細胞表面発現を、フローサイトメトリーによって決定した。細胞をヒトFLT3抗体で染色した(PE-Cy7と複合、クローン:BV10A4H2;Biolegend)。アイソタイプ対照を、バックグラウンド抗体染色のための陰性対照として使用した。陰性集団とFLT3+集団との比率を決定し、MOLM-13、THP-1、及びSEMのすべてがFLT3受容体を強固に発現していることを確認した。
1つのドナーからのT細胞を遺伝子修飾して、3つの異なるFLT3 scFvポリペプチドでCARを発現させた。使用したFLT3 scFvは、ml0006、NC7(SB00819)、及びD4-3(SB00816)であった。CARは、CD8シグナル配列、CD8ヒンジ、CD8膜貫通ドメイン、4-1BB共刺激ドメイン、及びCD3ζシグナル伝達ドメインを有した。各々はまた、C末端にYFPタグも有した。
NC7(SB00819)及びD4-3(SB00816)FLT3 CAR T細胞は、ヒト白血病細胞株MOLM-13、THP-1、及びSEMに対して強力な細胞傷害活性を示す。図40Aは、白血病細胞株におけるFLT3タンパク質発現(x軸)の発現を示すフローサイトメトリーヒストグラムプロットを示す。2つのFLT3 CAR T細胞は、MOML-13及びTHP-1ヒト白血病細胞(1:1のE:T比率)、ならびにFLT3を発現するSEM細胞(図40B)を死滅させた。
材料及び方法
細胞表面発現
CD33受容体の発現は、フローサイトメトリーを使用してMOLM-13、MV4-11、及びTHP-1細胞で確認した。アイソタイプ対照を、バックグラウンド抗体染色のための陰性対照として使用し、細胞をヒトCD33抗体で染色し(BV421と複合、クローン:WM53;Biolegend)、陰性集団とCD33+集団との比率を決定した。
1つのドナーからのT細胞を遺伝子修飾して、2つの異なるCD33 scFvポリペプチドでCARを発現させた。使用したCD33 scFvは、hu195(リンツズマブ)及びMylo(ゲムツズマブ)CD33抗体に由来した。CARは、IgKシグナル配列、FLAGタグ、CD28ヒンジ、CD28膜貫通ドメイン、CD28細胞内共刺激ドメイン、及びCD3ζシグナル伝達ドメインを有した。作製したhu195及びMylo CD33 CARのタンパク質ならびにヌクレオチド配列を表6に示す。
CD33 CAR T細胞は、複数のヒト急性骨髄性白血病(AML)細胞株に対してインビトロで強力な細胞傷害活性を示す。図42Aは、AML細胞株MOLM-13、MV4-1、及びTHP-1におけるCD33タンパク質発現の細胞表面発現のフローサイトメトリーヒストグラムプロットを示す。図42Bは、2つの異なるCD33 CAR T細胞が、インビトロ共培養細胞傷害性アッセイにおいてヒトAML細胞を死滅させることを示す。加えて、両方のCD33抗体は、用量依存的様式で細胞傷害性を誘導した(図42C)。インビトロ細胞傷害性アッセイは、より高いエフェクター対標的細胞(E:T)比率でのMOLM-13及びMV4-11 AML細胞株のCD33 CAR T細胞死滅の増加を示す。
材料及び方法
細胞表面発現
種々のAML、白血病、またはリンパ腫細胞株(U937、THP-1、HL-60、MV-14、MOLM-14、MOLM-13、Nalm6、Raji、K562、及びSEM)におけるCLEC12Aの発現を、PE抗ヒトCD371(CLEC12A)抗体(BioLegend、クローン50C1)を使用したフローサイトメトリーによって決定し、比率を陰性とCLEC12A+集団との間で決定した。
1つのドナーからのT細胞を遺伝子修飾して、3つの異なるCLEC12A scFvポリペプチドでCARを発現させた。使用したCLEC12A scFvは、クローン357、378、及び161であった。CARは、CD8シグナル配列(CD8ss)、CD8ヒンジ、CD8膜貫通ドメイン、細胞内CD3ζシグナル伝達ドメイン、及び4-1BB共刺激ドメイン(4-1BB共刺激)を有した。YFPタグをCD3ζシグナル伝達ドメインのC末端と融合させた。作製したCLEC12A CARのタンパク質及びヌクレオチド配列を表7に示す。
CLEC12Aは、AML、ALL、リンパ腫、ならびに白血病細胞株U937、THP-1、HL-60、MV-14、MOLM-14、MOLM-13、Nalm6、Raji、K562、及びSEM上で発現した。図44は、試験したすべての細胞株におけるCLEC12A発現のフローサイトメトリープロットを示す。各細胞集団におけるCLEC12A染色細胞と非染色細胞との比率を各グラフに示す。
材料及び方法
3つのCLEC12A CARを、前述され、表6に示されるように、4-1BB共刺激ドメインの代わりに、CD28共刺激ドメインを用いて作製した。加えて、3つのCLEC12A CARを、CD8シグナル配列ペプチドの代わりに、IgKシグナル配列ペプチドで作製した。種々の共刺激ドメインまたはシグナル配列ペプチドを有する9つのCARの図を図47に示す。CD8シグナル配列を有するCARは、C末端にYFPタグを含む。IgKシグナル配列を有するCARは、シグナル配列とscFvドメインとの間にFLAGタグを含む。
図48Aに示すように、9つすべてのCLEC12A CARを、T細胞に効率的に形質導入した。図48Bは、種々のCARの平均蛍光強度(MFI)を示す。
材料及び方法
CAR構造
FLT3 CAR(SB00819)は、CD8シグナル配列、FLT3 scFv、CD8ヒンジ、CD8膜貫通ドメイン、4-1BB共刺激ドメイン、CD3ζシグナル伝達ドメイン、及びYFPタグを有した。FLT3 scFvは、FLT3抗体NC7に由来した。CD33 CAR(SB01052)は、IgGkシグナル配列、FLAGタグ、CD33 scFv、CD28ヒンジ、CD28膜貫通ドメイン、CD28共刺激ドメイン、及びCD3ζシグナル伝達ドメインを有した。CD33 scFvは、CD33抗体hu195(リンツズマブ;hu195;SGN-33;ヒト化抗CD33抗体)に由来した。
ヒトAML細胞株MOLM-13を、その強固なFLT3及びCD33表面タンパク質発現のために、FLT3及びCD33 CAR T細胞を試験するためのインビボAML細胞標的として選択した。ヒトAML細胞株MOLM-13を、ホタルルシフェラーゼ(fLucまたはLuc)レポーター(MOLM-13-Lucで示される操作細胞)を発現するように操作した。これらの細胞をNSG免疫不全マウスに注入した後、MOLM-13-Lucインビボ腫瘍生着及び成長を、マウスにfLuc基質(例えば、ルシフェリン)を注入し、生物発光イメージングシステム(Amy HT、Spectral Instruments Imaging)を使用してモニターして、MOLM-1 3細胞内のルシフェラーゼ酵素から産生される光の量を定量化した。
インビボ用量漸増実験のために、0日目に、NSGマウスにヒトMOLM-13-Luc AML細胞(上記)を注入した(IV)。5日目に、マウスに、様々な濃度のFLT3 CART細胞もしくはCD33 CAR T細胞を単独または組み合わせて注入(IV)した:9×106個、もしくは18×106個のFLT3 CAR T細胞;0.625×106個、1.25×106個、2.5×106個、5×106個、もしくは10×106個のCD33 CAR T細胞;または4.5×106個のFLT3 CAR T細胞及び2.5×106個のCD33 CAR T細胞、9×106個のFLT3 CAR T細胞及び5×106個のCD33 CAR T細胞、もしくは18×106個のFLT3 CAR T細胞及び10×106個のCD33 CAR T細胞の組み合わせ。fLuc生物発光、体重、及び生存率を、4週間、週に約2回評価した。エンドポイント基準に達したときにマウスを犠牲にした。2つの対照群を使用した:1.MOLM-13-LucまたはT細胞を注入していないマウス、ならびに2.1.0×106個のMOLM-13-Luc細胞及び10.0×106個の非操作T細胞を注入したマウス。
図53A~Jは、5日目、8日目、または5日目及び12日目にFLT3またはCD33 CARで治療した後の各マウス群におけるfLuc生物発光シグナルの定量化を提供する。図53Aは、5日目にCD33 CAR T細胞で治療した非腫瘍マウスにおけるバックグラウンドfLuc生物発光を示す。図53Bは、5日目にFLT3 CAR T細胞で治療した非腫瘍マウスにおけるバックグラウンドfLuc生物発光を示す。図53Cは、未治療MOLM-13-Luc腫瘍保有マウスにおけるfLuc生物発光を示す。14日目にエンドポイント基準に到達し、マウスを犠牲にした。図53Dは、PBSのみで治療した非腫瘍マウスにおけるバックグラウンドfLuc生物発光を示す。図53Eは、5日目に1回、FLT3 CAR T細胞で治療したMOLM-13-Luc腫瘍保有マウスにおけるfLuc生物発光を示す。図53Fは、8日目に1回、FLT3 CAR T細胞で治療したMOLM-13-Luc腫瘍保有マウスにおけるfLuc生物発光を示す。14日目にエンドポイント基準に到達し、マウスを犠牲にした。図53Gは、5日目及び12日目に2回、FLT3 CAR T細胞で治療したMOLM-13-Luc腫瘍保有マウスにおけるfLuc生物発光を示す。図53Hは、5日目に1回、CD33 CAR T細胞で治療したMOLM-13-Luc腫瘍保有マウスにおけるfLuc生物発光を示す。図53Iは、8日目に1回、CD33 CAR T細胞で治療したMOLM-13-Luc腫瘍保有マウスにおけるfLuc生物発光を示す。14日目にエンドポイント基準に到達し、マウスを犠牲にした。図53Jは、5日目及び12日目に2回、CD33 CAR T細胞で治療したMOLM-13-Luc腫瘍保有マウスにおけるfLuc生物発光を示す。各治療群におけるインビボでのfLuc生物発光の画像を図53Kに示す。
材料及び方法
CAR構造
357、378、及び161 CLEC12A抗体に由来する3つのCLEC12A結合因子、ならびにCD28(SB01561、SB01562、SB01563)または4-1BB共刺激ドメイン(SB01261、SB01262、SB01263)のいずれかを使用して、6つのCLEC12A CARを作製した。CARはまた、CD8シグナル配列、CD8ヒンジ、CD8膜貫通ドメイン、CD3ζシグナル伝達ドメイン、及びYFPタグを有した。CLEC12A CARを以下の表5に列挙した。28zは、CD28共刺激ドメインを指し、BBzは、4-1BB共刺激ドメインを指す。NC7 scFvを有するFLT3 CAR T細胞及びhu195 scFvを有するCD33 CAR T細胞を対照として使用した。
ヒトAML細胞株MOLM-14を、その強固なCLEC12A表面発現のために、CLEC12A CAR T細胞を試験するためのインビボAML細胞標的として選択した(図44~45Aを参照されたい)。MOLM-14 AML細胞を、ホタルルシフェラーゼ(fLucまたはLucと称される)レポーター(MOLM-14-LucまたはMOLM-14-fLucを示す操作細胞)を発現するように操作し、これらの細胞をNSG免疫不全マウスに注入した後、MOLM-14-Lucインビボ腫瘍生着及び成長を、マウスにfLuc基質(例えば、ルシフェリン)を注入し、生物発光イメージングシステム(Amy HT、Spectral Instruments Imaging)を使用してモニターして、MOLM-13細胞内のルシフェラーゼ酵素から産生される光の量を定量化した。
インビトロ有効性試験の結果を、図55A、55B、及び55Cに示す。各マウス群の相対的な腫瘍生物発光を、7日目/5日目(図55A)及び11日目/5日目(図55B)の比較として示す。5日目のfLucと比較したMOLM-14腫瘍細胞生物発光シグナル(fLuc)の変化倍率をy軸に示す。したがって、5日目~7日目または11日目までの腫瘍生物発光の増加は、発光シグナルの増加として示され、一方で5日目~7日目または11日目までの腫瘍生物発光の減少は、生物発光シグナルの減少として示される。CD33及びFLT3 CAR T細胞による治療は、7日目及び11日目にCD28共刺激ドメインを有するCLEC12A CAR T細胞と同様に、腫瘍負荷を低減させた(図55A及び55B)。大部分の事例において、CD28共刺激ドメインを有するCARは、4-1BB共刺激ドメインを有するCARよりも、腫瘍負荷の低減またはマウス生存時間の延長においてより有効であった。4-1BB共刺激ドメイン(SB01261)を有する357 CLEC12ACARもまた、5日目と比較して7日目の腫瘍負荷の低減をもたらした(図55A)。各治療群におけるインビボでの生物発光の画像を図55Cに示す。
材料及び方法
インビトロアッセイ
FLT3(D4-3)CAR T細胞活性を最適化及び増加させるために、代替え的なヒンジのインビトロ及びインビボ機能スクリーニングを実施した。CD8ヒンジ(標準的なD4-3ヒンジ)を有するD4-3 FLT3 CAR(SB00816)、CD8ヒンジ(強固なCAR活性のための陽性対照)を有するNC7 FLT3 CAR(SB00819)、LNGFR(低親和性神経成長因子受容体)ヒンジを有するD4-3 FLT3 CAR(SB1076)、切断型LNGFR(tLNGFR)ヒンジを有するD4-3 FLT3 CAR(SB1077)、及びPDGFR(血小板由来成長因子受容体)ヒンジを有するD4-3 FLT3 CAR(SB01078)を含むFLT3(D4-3)ヒンジ領域を最適化するためのものを合成した。異なるヒンジを有するD4-3 FLT3 CARの図を図56Aに示す。
マウス材料及び方法
ホタルルシフェラーゼ(fLucまたはLuc)を発現するMOLM-13細胞株を、実施例19に記載されるようにインビボ実験で使用した。
インビトロアッセイ
FLT3ヒンジの最適化により、LNGFRヒンジ及びPDGFRヒンジ(それぞれSB1077とSB1078)を使用した場合、FLT3 CAR活性の統計的に有意な増加をもたらした。D4-3 CARにおけるLNGFRまたはPDGFRヒンジの使用は、CD8ヒンジと比較して、MOLM-13細胞(図56B)、MOLM-14細胞(図56C)、MV4-11細胞(図56D)、及びSEM細胞(図56E)との培養後の細胞傷害性及びIL-2産生の増加をもたらした。図56B~Eの各々において、上部パネルは、示した細胞株との培養後の各CARの細胞傷害性を示し、下部パネルは、示した細胞株との培養後の各CARのIL-2産生を示す。
LNGFRまたはPDGFRヒンジで構築されたFLT3(D4-3)CARは、増加したマウス生存率によって示されるように、CD8ヒンジを有するD4-3 FLT3 CARと比較して、MOLM-13 AML細胞に対するCAR T細胞のインビボ有効性の増加を示した(図58A)。図58Bは、示したCARでの治療後のインビボでの腫瘍MOLM-13細胞の生物発光を示す。したがって、LNGFRまたはPDGFRヒンジを有するD4-3 FLT3 CARは、CD8ヒンジを有するD4-3 FLT3 CARよりもインビトロ及びインビボの両方のAMLモデルにおいてより有効であった。
材料及び方法
CD33 hu195 scFvならびにFLT3 NC7 scFv、SB01658、SB01659、SB01530、及びSB01266を使用して、4つの異なるバイシストロン性FLT3及びCD33 CARを作製した。
1×106個のK5672標的細胞を、ピューロマイシン耐性遺伝子を有するFLT3またはCD33を発現するレンチウイルスで形質導入した。FLT3またはCD33発現を、形質導入の72時間後にCytoflexフローサイトメーターを使用して評価した。形質導入された細胞を、4ug/mlピューロマイシンで3週間選択した。FLT3及びCD33の発現は、3週間のピューロマイシン選択後にフローサイトメトリーを使用して決定した。操作細胞を、ピューロマイシンを含まない完全培地中で1週間培養した。操作細胞を凍結保存培地中で凍結し、液体窒素中に保存した。
MV4-11、MOLM-13、及びSEM細胞との培養後のT細胞の細胞傷害性ならびにサイトカイン産生は、実施例15~17で前述したように決定した。
SB01659バイシストロン性CARは、SB01266バイシストロン性CARと比較して、T細胞においてより良好な発現を示した(図59A)。SB01659バイシストロン性CARは、CD33モノシストロン性CAR(SB01052)及び他のバイシストロン性CAR(SB01658、SB01266、及びSB01530、図59B、59C、及び59D)と比較して、MOLM-13細胞(図59B)、MV4-11細胞(図59C)、及びSEM細胞(図59D)との培養後に優れた細胞傷害性及びIL-2産生も示した。各事例では、CAR構築物は、短縮した名称によって参照され、例えば、SB01659は、1659として示される。NoTは、T細胞が追加されていない試料を示し、NVは、非形質導入T細胞を有する試料を示す。SB01266H及びSB01266Gは、SB01266 CARの2つの別々の調整物であった。
材料及び方法
NC7及びD4-3 scFvを有するループscFv(SB01861)またはタンデムscFv(SB01862)のいずれかで、2つの二価FLT3 CARを合成した。ループscFvの構造を図63Aに示す。タンデムscFvの構造を図63Bに示す。
新規の二価CAR設計は、低標的抗原密度細胞の死滅を有意に改善した。FLT3二価CAR SB01861及びSB01862は、一価FLT3 CAR SB00819よりも2~2.5倍高い効率でMV4-11細胞(低FLT3発現)を死滅させた(図63C上部パネル)。
材料及び方法
hu195 scFv及びCD8ヒンジ及び膜貫通配列を有するCD33 CARを合成した。CARは、CD28共刺激ドメイン及びCD3ζ刺激ドメインも含む。
CD8ヒンジ及び膜貫通ドメインを、CD28共刺激ドメインを含むCARと組み合わせて試験した。CD8ヒンジ及び膜貫通配列を、以前のCAR構築物で使用したCD28ヒンジ及び膜貫通ドメインの代わりに使用した。CAR構築物SB01364、SB01372、SB01373、及びSB01374は、T細胞において高い発現を示した(データは示さず)。SB01364は、CD8ヒンジ配列1(配列番号206)、CD8膜貫通配列1(配列番号209)、及びGMCSFシグナル配列を有し、SB01372は、CD8ヒンジ配列2(配列番号207)、CD8膜貫通配列2(配列番号210)、及びCD8シグナル配列を有し、SB01373は、CD8ヒンジ配列2(配列番号207)、CD8膜貫通配列2(配列番号210)、及びGMCSFシグナル配列を有し、SB01374は、CD8ヒンジ配列1(配列番号206)、CD8膜貫通配列2(配列番号210)、及びCD8シグナル配列を有する。
造血幹細胞上で発現される追加のNOT標的を、実施例1及び2に記載のバイオインフォマティクススクリーニングを使用して同定した。要するに、7,860個のHSC膜関連遺伝子を、GO及びHuman Protein Atlasに従って、「細胞表面」または「膜」遺伝子としてアノテーションを介して同定した。同定したHSCタンパク質の発現は、マイクロアレイデータを介して健常なHSC及びAML細胞において決定され、115個の遺伝子を同定した。次いで、HSC上で高発現を確認した遺伝子を、RNA-seqを介してAML細胞において低発現であることを確認し、HSC上での高発現及びAML細胞上での低発現を有する15個の遺伝子を得た。得られたヒットを、HSCにおけるタンパク質発現について確認した。膜発現を確認した10個の遺伝子を同定し、表16に示す。
内皮安全性標的を、U133血液試料マイクロアレイデータセットにおいて実施例1及び2に記載のバイオインフォマティクススクリーニングを使用して同定した。U133データセットには、39個の内皮細胞試料(10個の新鮮な試料及び培養した内皮細胞からの29個)及び876個のAML試料が含まれる。簡潔に述べると、GO-アノテーションまたはAffy-アノテーション表面発現(9885)を有する遺伝子を同定した。Human Protein Atlasにおける非表面または膜局在の強力な証拠を有する遺伝子を除去し、7860個の遺伝子を残した。これらの遺伝子を、AML試料と比較して内皮試料におけるより高い発現について評価し、32個の遺伝子を得た。
材料及び方法
NK細胞におけるCAR発現
初代NK細胞をPBMCから単離し、凍結させた。凍結したNK細胞を解凍し、CD335(NKp46)-ビオチン、CD2-ビオチン、及びMACS抗ビオチンMACSiBead粒子で活性化した。活性化したNK細胞を、IL-2を含むNK Macs培地中で拡大し、15日目に凍結させた。準備ができたら、拡大したNK細胞を解凍し、完全培地中で一晩静置した。NK細胞を、選択したCARレンチウイルスで形質導入し、FLT3 CAR(SB00819)NK細胞、CD33 CAR(SB01052)NK細胞、またはバイシストロン性FLT3及びCD33 CAR(SB01659)NK細胞を産生した。CAR発現を、トランスフェクション後6日目に評価した。
NK細胞細胞傷害性アッセイ及びサイトカイン産生アッセイを、実施例15~18に記載したように、SEM細胞及び1:2のET比率を使用して実施した。CAR NK細胞をSEM標的細胞と20時間インキュベートし、細胞上清をサイトカイン産生のために収集した。細胞傷害性及びサイトカイン産生を、前述のようにフローサイトメトリー及びLuminexアッセイによって評価した。細胞傷害性割合を標的細胞のみの対照に対して正規化した。EGFPを発現する非遺伝子操作NK細胞を陰性対照として使用した。
NK細胞は、レンチウイルス形質導入後6日目に最大45%のCAR発現を示す。FLT3 CAR NK細胞は、FLT3 CARに対して28.8%陽性であった(データは示さず)。CD33 CAR NK細胞は、CD33 CARに対して25.8%陽性であった(データは示さず)。バイシストロン性FLT3/CD33 CAR NK細胞は、FLT3 CARに対して3.9%陽性であり、CD33に対して26.9%陽性であった(データは示さず)。
本出願に引用された公開文献、特許、特許出願、及び他の文献は全て、あたかも各個別の公開文献、特許、特許出願、または他の文献があらゆる目的のために参照により援用されるように個別に示されるのと同じ範囲まで、あらゆる目的のために、それらの全体において参照により本明細書に援用される。
様々な特定の実施形態が図示及び記載されてきたが、上記明細書は制限的ではない。本開示の趣旨及び範囲(複数可)から逸脱することなく、様々な変更を行うことができることが理解されるであろう。多くの変型は、本明細書の範囲を考慮すれば当業者に明らかとなるであろう。
[本発明1001]
単離免疫応答性細胞であって、
(a)第1の抗原と結合する細胞外抗原結合ドメインを含む第1のキメラ受容体と、
(b)第2の抗原と結合する細胞外抗原結合ドメインを含む第2のキメラ受容体と
を含み、
各抗原が、FLT3、CD33、CLEC12A、MS4A3、VSTM1、LAT2、MLC1、CD131、GAPT、PRAM1、SLC22A16、SLC17A9、SPNS3、ADGRE2、IL3RA、CD117、CD93、IL1RAP、CD244、CCR1、LILRB2、PIEZO1、CD38、EMB、MYADM、LILRA2、CD300LF、及びCD70からなる群から選択され、
前記第1の抗原が、前記第2の抗原とは異なる、
前記単離免疫応答性細胞。
[本発明1002]
前記第1の抗原が、FLT3であり、前記第1のキメラ受容体の前記細胞外抗原結合ドメインが、
(a)配列番号3のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号4のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(b)配列番号1のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号2のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(c)配列番号5のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号6のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(d)配列番号7のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号8のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(e)配列番号9のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号10のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(f)配列番号11のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号12のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(g)配列番号13のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号14のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、ならびに
(h)配列番号15のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号16のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL
からなる群から選択される重鎖可変ドメイン(VH)及び軽鎖可変ドメイン(VL)を含む、本発明1001の単離免疫応答性細胞。
[本発明1003]
i)前記第2の抗原が、CD33であり、前記第2のキメラ受容体の前記細胞外抗原結合ドメインが、
(a)配列番号17のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号18のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、ならびに
(b)配列番号19のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号20のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL
からなる群から選択される重鎖可変ドメイン(VH)及び軽鎖可変ドメイン(VL)を含むか、あるいは
ii)前記第2の抗原が、CLEC12Aであり、
(a)配列番号21のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号22のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(b)配列番号23のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号24のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、ならびに
(c)配列番号25のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号26のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL
からなる群から選択される重鎖可変ドメイン(VH)及び軽鎖可変ドメイン(VL)を含む、
本発明1002の単離免疫応答性細胞。
[本発明1004]
前記第1の抗原が、CLEC12Aであり、前記第1のキメラ受容体の前記細胞外抗原結合ドメインが、
(a)配列番号21のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号22のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(b)配列番号23のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号24のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、ならびに
(c)配列番号25のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号26のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL
からなる群から選択される重鎖可変ドメイン(VH)及び軽鎖可変ドメイン(VL)を含み、
任意に、前記第2の抗原が、CD33であり、前記第2のキメラ受容体の前記細胞外抗原結合ドメインが、
(a)配列番号17のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号18のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、ならびに
(b)配列番号19のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号20のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL
からなる群から選択される重鎖可変ドメイン(VH)及び軽鎖可変ドメイン(VL)を含む、
本発明1001の単離免疫応答性細胞。
[本発明1005]
i)前記第1のキメラ受容体の前記第1の抗原との結合が、前記免疫応答性細胞を活性化することができ、及び/または前記第2のキメラ受容体の前記第2の抗原との結合が、前記免疫応答性細胞を刺激することができ、かつ/または
ii)前記免疫応答性細胞が、前記第1の抗原または前記第2の抗原のみに陽性である標的細胞に対する細胞溶解活性と比較して、前記第1の抗原及び前記第2の抗原の両方に陽性である標的細胞に対してより高い程度の細胞溶解活性を示し、かつ/または
iii)前記第1のキメラ受容体が、前記第2の抗原に対する前記第2のキメラ受容体の結合親和性よりも低い前記結合親和性で前記第1の抗原と結合し、かつ/または
iv)前記第1のキメラ受容体が、低い結合活性で前記第1の抗原と結合する、
本発明1001~1004のいずれかの単離免疫応答性細胞。
[本発明1006]
前記第1のキメラ受容体が、第1のCARであり、
前記第2のキメラ受容体が、第2のCARであり、
各CARが、
i)CD3ゼータ鎖細胞内シグナル伝達ドメインを含み、任意に、各CARが、1つ以上の追加の細胞内シグナル伝達ドメインをさらに含み、前記1つ以上の追加の細胞内シグナル伝達ドメインが、CD97細胞内シグナル伝達ドメイン、CD11a-CD18細胞内シグナル伝達ドメイン、CD2細胞内シグナル伝達ドメイン、ICOS細胞内シグナル伝達ドメイン、CD27細胞内シグナル伝達ドメイン、CD154細胞内シグナル伝達ドメイン、CD8細胞内シグナル伝達ドメイン、OX40細胞内シグナル伝達ドメイン、4-1BB細胞内シグナル伝達ドメイン、CD28細胞内シグナル伝達ドメイン、ZAP40細胞内シグナル伝達ドメイン、CD30細胞内シグナル伝達ドメイン、GITR細胞内シグナル伝達ドメイン、HVEM細胞内シグナル伝達ドメイン、DAP10細胞内シグナル伝達ドメイン、DAP12細胞内シグナル伝達ドメイン、MyD88細胞内シグナル伝達ドメイン、及び2B4細胞内シグナル伝達ドメインからなる群から選択され、及び/または
ii)膜貫通ドメインを含み、前記膜貫通ドメインが、CD8膜貫通ドメイン、CD28膜貫通ドメイン、CD3ゼータ鎖膜貫通ドメイン、CD4膜貫通ドメイン、4-1BB膜貫通ドメイン、OX40膜貫通ドメイン、ICOS膜貫通ドメイン、CTLA-4膜貫通ドメイン、PD-1膜貫通ドメイン、LAG-3膜貫通ドメイン、2B4膜貫通ドメイン、及びBTLA膜貫通ドメインからなる群から選択され、及び/または
iii)前記抗原結合ドメインと前記膜貫通ドメインとの間のスペーサー領域を含み、前記スペーサー領域が、配列番号55~64からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、
本発明1001~1005のいずれかの単離免疫応答性細胞。
[本発明1007]
前記細胞が、抗原結合ドメインを含む阻害性キメラ受容体をさらに含み、任意に、前記阻害性キメラ受容体が、前記細胞の1つ以上の活性を阻害する、本発明1001~1006のいずれかの単離免疫応答性細胞。
[本発明1008]
前記阻害性キメラ受容体が、非腫瘍細胞上で発現される抗原と結合し、任意に、前記非腫瘍細胞上で発現される抗原が、脳、神経組織、内分泌、骨、骨髄、免疫系、内皮組織、筋肉、肺、肝臓、胆嚢、膵臓、消化管、腎臓、膀胱、雄性生殖器、雌性生殖器、脂肪、軟組織、及び皮膚からなる群から選択される組織に由来する、本発明1007の単離免疫応答性細胞。
[本発明1009]
前記阻害性キメラ受容体が、EMCN、JAM2、MS4A15、C4BPA、TRPM1、SCTR、SLC2A2、KCNQ2、PERP、WLS、FFAR2、PTPRB、NCKAP1、MPZL2、PLSCR4、TMEM47、ADGRL4、MET、BACE2、ATP8B1、LIFR、ART4、CALCRL、CNTNAP3、PCDH9、IL18R1、SLC8A3、CDH26、TMEM163、ABCA13、CACHD1、CYYR1、ABCB1、ADGRG6、ATP9A、CALN1、CDCP1、IL12RB2、SLC16A14、TMEM136、及びTMEM200Aからなる群から選択される抗原と結合する、本発明1007または本発明1008の単離免疫応答性細胞。
[本発明1010]
前記阻害性キメラ受容体が、一本鎖可変断片(scFv)を含む抗原結合ドメインを含み、前記scFvが、抗EMCN抗体に由来する、本発明1007~1009のいずれかの単離免疫応答性細胞。
[本発明1011]
前記第1のキメラ受容体の前記抗原結合ドメイン、前記第2のキメラ受容体の前記抗原結合ドメイン、及び/または前記阻害性キメラ受容体の前記抗原結合ドメインが、1つ以上の一本鎖可変断片(scFv)を含み、前記1つ以上のscFvの各々が、重鎖可変ドメイン(VH)及び軽鎖可変ドメイン(VL)を含み、任意に、前記VH及びVLが、ペプチドリンカーによって分離され、任意に、前記ペプチドリンカーが、配列番号27のアミノ酸配列を含む、本発明1007~1010のいずれかの単離免疫応答性細胞。
[本発明1012]
前記1つ以上のscFvの各々が、構造VH-L-VLまたはVL-L-VHを含み、VHが、重鎖可変ドメインであり、Lが、ペプチドリンカーであり、VLが、軽鎖可変ドメインである、本発明1011の単離免疫応答性細胞。
[本発明1013]
前記1つ以上のscFvの各々が、同じ抗原上の別個のエピトープと結合する、本発明1011または本発明1012の単離免疫応答性細胞。
[本発明1014]
前記1つ以上のscFvの各々が、ペプチドリンカーによって分離され、任意に、前記ペプチドリンカーが、GGGGSGGGGSGGGGS(配列番号27)またはEAAAKEAAAKEAAAKEAAAK(配列番号74)のアミノ酸配列を含む、本発明1011~1013のいずれかの単離免疫応答性細胞。
[本発明1015]
前記細胞が、T細胞、ナチュラルキラー(NK)細胞、細胞傷害性Tリンパ球(CTL)、制御性T細胞、ナチュラルキラーT(NKT)細胞、骨髄細胞、マクロファージ、ヒト胚性幹細胞(ESC)、ESC由来細胞、多能性幹細胞、及び人工多能性幹細胞(iPSC)、ならびにiPSC由来細胞からなる群から選択され、
任意に、前記免疫応答性細胞が、同種異系である、
本発明1001~1014のいずれかの単離免疫応答性細胞。
[本発明1016]
有効量の本発明1001~1015のいずれかの単離免疫応答性細胞、及び薬学的に許容される担体、薬学的に許容される賦形剤、またはそれらの組み合わせを含む、薬学的組成物。
[本発明1017]
対象において抗腫瘍免疫を提供する方法であって、
それを必要とする対象に、治療有効量の本発明1001~1015のいずれかの単離免疫応答性細胞のいずれかまたは本発明1016の薬学的組成物を投与する工程を含む、
前記方法。
[本発明1018]
対象における骨髄障害を治療または予防する方法であって、
前記対象に有効量の本発明1001~1015のいずれかの単離免疫応答性細胞または本発明1016の薬学的組成物を投与する工程を含み、
任意に、前記骨髄障害が、骨髄異形成症候群、骨髄増殖性腫瘍、慢性骨髄単球性白血病、急性骨髄性白血病(AML)、急性骨髄芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄単球性白血病、慢性骨髄性白血病、及び真性多血症である、
前記方法。
[本発明1019]
本発明1001~1015のいずれかの単離免疫応答性細胞または本発明1016の薬学的組成物を含む、骨髄障害を治療及び/または予防するためのキットであって、
任意に、対象における骨髄障害を治療及び/または予防するために前記細胞を使用するための書面による指示をさらに含む、前記キット。
Claims (19)
- 単離免疫応答性細胞であって、
(a)第1の抗原と結合する細胞外抗原結合ドメインを含む第1のキメラ受容体と、
(b)第2の抗原と結合する細胞外抗原結合ドメインを含む第2のキメラ受容体と
を含み、
各抗原が、FLT3、CD33、CLEC12A、MS4A3、VSTM1、LAT2、MLC1、CD131、GAPT、PRAM1、SLC22A16、SLC17A9、SPNS3、ADGRE2、IL3RA、CD117、CD93、IL1RAP、CD244、CCR1、LILRB2、PIEZO1、CD38、EMB、MYADM、LILRA2、CD300LF、及びCD70からなる群から選択され、
前記第1の抗原が、前記第2の抗原とは異なる、
前記単離免疫応答性細胞。 - 前記第1の抗原が、FLT3であり、前記第1のキメラ受容体の前記細胞外抗原結合ドメインが、
(a)配列番号3のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号4のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(b)配列番号1のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号2のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(c)配列番号5のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号6のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(d)配列番号7のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号8のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(e)配列番号9のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号10のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(f)配列番号11のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号12のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(g)配列番号13のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号14のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、ならびに
(h)配列番号15のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号16のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL
からなる群から選択される重鎖可変ドメイン(VH)及び軽鎖可変ドメイン(VL)を含む、請求項1に記載の単離免疫応答性細胞。 - i)前記第2の抗原が、CD33であり、前記第2のキメラ受容体の前記細胞外抗原結合ドメインが、
(a)配列番号17のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号18のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、ならびに
(b)配列番号19のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号20のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL
からなる群から選択される重鎖可変ドメイン(VH)及び軽鎖可変ドメイン(VL)を含むか、あるいは
ii)前記第2の抗原が、CLEC12Aであり、
(a)配列番号21のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号22のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(b)配列番号23のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号24のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、ならびに
(c)配列番号25のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号26のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL
からなる群から選択される重鎖可変ドメイン(VH)及び軽鎖可変ドメイン(VL)を含む、
請求項2に記載の単離免疫応答性細胞。 - 前記第1の抗原が、CLEC12Aであり、前記第1のキメラ受容体の前記細胞外抗原結合ドメインが、
(a)配列番号21のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号22のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、
(b)配列番号23のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号24のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、ならびに
(c)配列番号25のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号26のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL
からなる群から選択される重鎖可変ドメイン(VH)及び軽鎖可変ドメイン(VL)を含み、
任意に、前記第2の抗原が、CD33であり、前記第2のキメラ受容体の前記細胞外抗原結合ドメインが、
(a)配列番号17のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号18のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL、ならびに
(b)配列番号19のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVH、及び配列番号20のアミノ酸配列またはそれと少なくとも90%同一の配列を含むVL
からなる群から選択される重鎖可変ドメイン(VH)及び軽鎖可変ドメイン(VL)を含む、
請求項1に記載の単離免疫応答性細胞。 - i)前記第1のキメラ受容体の前記第1の抗原との結合が、前記免疫応答性細胞を活性化することができ、及び/または前記第2のキメラ受容体の前記第2の抗原との結合が、前記免疫応答性細胞を刺激することができ、かつ/または
ii)前記免疫応答性細胞が、前記第1の抗原または前記第2の抗原のみに陽性である標的細胞に対する細胞溶解活性と比較して、前記第1の抗原及び前記第2の抗原の両方に陽性である標的細胞に対してより高い程度の細胞溶解活性を示し、かつ/または
iii)前記第1のキメラ受容体が、前記第2の抗原に対する前記第2のキメラ受容体の結合親和性よりも低い前記結合親和性で前記第1の抗原と結合し、かつ/または
iv)前記第1のキメラ受容体が、低い結合活性で前記第1の抗原と結合する、
請求項1~4のいずれか1項に記載の単離免疫応答性細胞。 - 前記第1のキメラ受容体が、第1のCARであり、
前記第2のキメラ受容体が、第2のCARであり、
各CARが、
i)CD3ゼータ鎖細胞内シグナル伝達ドメインを含み、任意に、各CARが、1つ以上の追加の細胞内シグナル伝達ドメインをさらに含み、前記1つ以上の追加の細胞内シグナル伝達ドメインが、CD97細胞内シグナル伝達ドメイン、CD11a-CD18細胞内シグナル伝達ドメイン、CD2細胞内シグナル伝達ドメイン、ICOS細胞内シグナル伝達ドメイン、CD27細胞内シグナル伝達ドメイン、CD154細胞内シグナル伝達ドメイン、CD8細胞内シグナル伝達ドメイン、OX40細胞内シグナル伝達ドメイン、4-1BB細胞内シグナル伝達ドメイン、CD28細胞内シグナル伝達ドメイン、ZAP40細胞内シグナル伝達ドメイン、CD30細胞内シグナル伝達ドメイン、GITR細胞内シグナル伝達ドメイン、HVEM細胞内シグナル伝達ドメイン、DAP10細胞内シグナル伝達ドメイン、DAP12細胞内シグナル伝達ドメイン、MyD88細胞内シグナル伝達ドメイン、及び2B4細胞内シグナル伝達ドメインからなる群から選択され、及び/または
ii)膜貫通ドメインを含み、前記膜貫通ドメインが、CD8膜貫通ドメイン、CD28膜貫通ドメイン、CD3ゼータ鎖膜貫通ドメイン、CD4膜貫通ドメイン、4-1BB膜貫通ドメイン、OX40膜貫通ドメイン、ICOS膜貫通ドメイン、CTLA-4膜貫通ドメイン、PD-1膜貫通ドメイン、LAG-3膜貫通ドメイン、2B4膜貫通ドメイン、及びBTLA膜貫通ドメインからなる群から選択され、及び/または
iii)前記抗原結合ドメインと前記膜貫通ドメインとの間のスペーサー領域を含み、前記スペーサー領域が、配列番号55~64からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、
請求項1~5のいずれか1項に記載の単離免疫応答性細胞。 - 前記細胞が、抗原結合ドメインを含む阻害性キメラ受容体をさらに含み、任意に、前記阻害性キメラ受容体が、前記細胞の1つ以上の活性を阻害する、請求項1~6のいずれか1項に記載の単離免疫応答性細胞。
- 前記阻害性キメラ受容体が、非腫瘍細胞上で発現される抗原と結合し、任意に、前記非腫瘍細胞上で発現される抗原が、脳、神経組織、内分泌、骨、骨髄、免疫系、内皮組織、筋肉、肺、肝臓、胆嚢、膵臓、消化管、腎臓、膀胱、雄性生殖器、雌性生殖器、脂肪、軟組織、及び皮膚からなる群から選択される組織に由来する、請求項7に記載の単離免疫応答性細胞。
- 前記阻害性キメラ受容体が、EMCN、JAM2、MS4A15、C4BPA、TRPM1、SCTR、SLC2A2、KCNQ2、PERP、WLS、FFAR2、PTPRB、NCKAP1、MPZL2、PLSCR4、TMEM47、ADGRL4、MET、BACE2、ATP8B1、LIFR、ART4、CALCRL、CNTNAP3、PCDH9、IL18R1、SLC8A3、CDH26、TMEM163、ABCA13、CACHD1、CYYR1、ABCB1、ADGRG6、ATP9A、CALN1、CDCP1、IL12RB2、SLC16A14、TMEM136、及びTMEM200Aからなる群から選択される抗原と結合する、請求項7または請求項8に記載の単離免疫応答性細胞。
- 前記阻害性キメラ受容体が、一本鎖可変断片(scFv)を含む抗原結合ドメインを含み、前記scFvが、抗EMCN抗体に由来する、請求項7~9のいずれか1項に記載の単離免疫応答性細胞。
- 前記第1のキメラ受容体の前記抗原結合ドメイン、前記第2のキメラ受容体の前記抗原結合ドメイン、及び/または前記阻害性キメラ受容体の前記抗原結合ドメインが、1つ以上の一本鎖可変断片(scFv)を含み、前記1つ以上のscFvの各々が、重鎖可変ドメイン(VH)及び軽鎖可変ドメイン(VL)を含み、任意に、前記VH及びVLが、ペプチドリンカーによって分離され、任意に、前記ペプチドリンカーが、配列番号27のアミノ酸配列を含む、請求項7~10のいずれか1項に記載の単離免疫応答性細胞。
- 前記1つ以上のscFvの各々が、構造VH-L-VLまたはVL-L-VHを含み、VHが、重鎖可変ドメインであり、Lが、ペプチドリンカーであり、VLが、軽鎖可変ドメインである、請求項11に記載の単離免疫応答性細胞。
- 前記1つ以上のscFvの各々が、同じ抗原上の別個のエピトープと結合する、請求項11または請求項12に記載の単離免疫応答性細胞。
- 前記1つ以上のscFvの各々が、ペプチドリンカーによって分離され、任意に、前記ペプチドリンカーが、GGGGSGGGGSGGGGS(配列番号27)またはEAAAKEAAAKEAAAKEAAAK(配列番号74)のアミノ酸配列を含む、請求項11~13のいずれか1項に記載の単離免疫応答性細胞。
- 前記細胞が、T細胞、ナチュラルキラー(NK)細胞、細胞傷害性Tリンパ球(CTL)、制御性T細胞、ナチュラルキラーT(NKT)細胞、骨髄細胞、マクロファージ、ヒト胚性幹細胞(ESC)、ESC由来細胞、多能性幹細胞、及び人工多能性幹細胞(iPSC)、ならびにiPSC由来細胞からなる群から選択され、
任意に、前記免疫応答性細胞が、同種異系である、
請求項1~14のいずれか1項に記載の単離免疫応答性細胞。 - 有効量の請求項1~15のいずれか1項に記載の単離免疫応答性細胞、及び薬学的に許容される担体、薬学的に許容される賦形剤、またはそれらの組み合わせを含む、薬学的組成物。
- 対象において抗腫瘍免疫を提供する方法であって、
それを必要とする対象に、治療有効量の請求項1~15のいずれか1項に記載の単離免疫応答性細胞のいずれかまたは請求項16に記載の薬学的組成物を投与する工程を含む、
前記方法。 - 対象における骨髄障害を治療または予防する方法であって、
前記対象に有効量の請求項1~15のいずれか1項に記載の単離免疫応答性細胞または請求項16に記載の薬学的組成物を投与する工程を含み、
任意に、前記骨髄障害が、骨髄異形成症候群、骨髄増殖性腫瘍、慢性骨髄単球性白血病、急性骨髄性白血病(AML)、急性骨髄芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄単球性白血病、慢性骨髄性白血病、及び真性多血症である、
前記方法。 - 請求項1~15のいずれか1項に記載の単離免疫応答性細胞または請求項16に記載の薬学的組成物を含む、骨髄障害を治療及び/または予防するためのキットであって、
任意に、対象における骨髄障害を治療及び/または予防するために前記細胞を使用するための書面による指示をさらに含む、前記キット。
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