JP2022037027A5

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Publication number: JP2022037027A5
Application number: JP2021195840A
Authority: JP
Filing date: 2021-12-02
Publication date: 2022-09-14

Claims

ＡＡＶに結合する抗体を、測定及び定量するための方法において、以下：
（ａ）組換えベクターを包膜する感染性組換えＡＡＶ粒子を用意するステップであって、
（ｉ）前記ベクターが、リポータトランスジーンを含み、（ｉｉ）前記リポータトランスジーンが、一本鎖若しくは自己相補的ゲノムを含むと共に、（ｉｉｉ）前記リポータトランスジーンが、１つ又は複数の発現調節エレメントに作動可能に連結され、かつ１つ又は複数のフランキングエレメントによってフランキングされている、ステップ；
（ｂ）最初の解凍後の継代数が２５継代までのＨＥＫ－２９３細胞を用意するステップ；
（ｃ）（ａ）の感染性組換えＡＡＶ粒子を被験者からの生体サンプルと接触させるか、又はインキュベートし、これによって得られる混合物（Ｍ）を生成するステップ；
（ｄ）得られた混合物（Ｍ）と（ｂ）のＨＥＫ－２９３細胞を、（ａ）の前記感染性組換えＡＡＶ粒子が、前記ＨＥＫ－２９３細胞中の前記リポータトランスジーンに感染して、これを発現させることを可能にする条件下で、接触させるステップ；
（ｅ）前記リポータトランスジーンの発現を測定するステップ；並びに
（ｆ）（ｅ）の前記リポータトランスジーン発現をＡＡＶに結合する抗体が欠失した陰性（－）対照のリポータトランスジーン発現と比較するステップであって、これによって、前記生体サンプル中のＡＡＶに結合する抗体を測定及び定量するステップ
を含む方法。
前記ＨＥＫ－２９３細胞が、ＡＡＶ複製及び／又はゲノム組込みのためのヘルパー機能をコードする核酸配列をもたらす、請求項１に記載の方法。
前記ＨＥＫ－２９３細胞が、ＡＡＶ血清型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、Ｒｈ７４、若しくはＲｈ１０、又はこれらＡＡＶ血清型のいずれかのハイブリッド若しくはキメラのＶＰ１、ＶＰ２若しくはＶＰ３配列と９０％以上同一のＶＰ１、ＶＰ２若しくはＶＰ３配列を含むＡＡＶ粒子に感染し得る、請求項１に記載の方法。
前記ＨＥＫ－２９３細胞が、ＡＡＶＥ４遺伝子を発現する、請求項１に記載の方法。
前記ＨＥＫ－２９３細胞が、２Ｖ６．１１細胞を含む、請求項１に記載の方法。
前記リポータトランスジーンが、酵素、比色、蛍光、発光、化学発光、又は電気化学シグナルを賦与するタンパク質をコードする、請求項１に記載の方法。
前記リポータトランスジーンが、ルシフェラーゼ遺伝子を含む、請求項１に記載の方法。
前記ルシフェラーゼ遺伝子が、ウミシイタケ（ｒｅｎｉｌｌａ）ルシフェラーゼ遺伝子又はホタル（ｆｉｒｅｆｌｙ）ルシフェラーゼ遺伝子を含む、請求項７に記載の方法。
前記リポータトランスジーンが、βガラクトシダーゼ遺伝子、βグルコロニダーゼ遺伝子、又はクロラムフェニコールトランスフェラーゼ遺伝子を含む、請求項１に記載の方法。
前記リポータトランスジーンが、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、赤色蛍光タンパク質（ＲＦＰ）又はアルカリホスファターゼをコードする、請求項１に記載の方法。
前記組換えベクターが、ＡＡＶベクターを含む、請求項１に記載の方法。
前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、Ｒｈ７４、若しくはＲｈ１０ベクター、又はこれらＡＡＶベクターのいずれかのハイブリッド若しくはキメラを含む、請求項１１に記載の方法。
前記発現調節エレメントが、哺乳動物細胞において作動可能なプロモータ及び／又はエンハンサー核酸配列を含む、請求項１に記載の方法。
前記リポータトランスジーンが、一本鎖ゲノムである、請求項１に記載の方法。
前記リポータトランスジーンが、自己相補的ゲノムである、請求項１に記載の方法。
前記フランキングエレメントが、１つ又は複数のＡＡＶ逆方向末端反復配列（ＩＴＲ）を含む、請求項１に記載の方法。
前記リポータトランスジーンが、１つ又は複数の５’及び／又は３’ＡＡＶＩＴＲの間に位置する、請求項１６に記載の方法。
前記組換えベクターが、ＡＡＶの第１の逆方向末端反復配列（ＩＴＲ）；哺乳動物細胞において作動可能なプロモータ；リポータトランスジーン；ポリアデニル化シグナル；及び任意選択でＡＡＶの第２のＩＴＲを含む請求項１に記載の方法。
前記組換えベクターが、哺乳動物細胞において、作動可能なプロモータの下流にリポータトランスジーンの挿入を可能にする制限部位を、また、該制限部位の下流に転写後調節エレメントを含み、ここで、前記プロモータ、前記制限部位及び前記転写後調節エレメントは、５’ＡＡＶＩＴＲの下流に、また任意選択の３’ＡＡＶＩＴＲの上流に位置する、請求項１に記載の方法。
前記感染性組換えＡＡＶ粒子が、霊長類に感染するＡＡＶ血清型を含む、請求項１に記載の方法。
前記感染性組換えＡＡＶ粒子が、ヒト又はアカゲザル（ｒｈｅｓｕｓｍａｃａｑｕｅ）に感染するＡＡＶ血清型を含む、請求項１に記載の方法。
前記感染性組換えＡＡＶ粒子が、ＡＡＶ血清型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、Ｒｈ７４、若しくはＲｈ１０、又はこれらＡＡＶ血清型のいずれかのハイブリッド若しくはキメラのＶＰ１、ＶＰ２又はＶＰ３配列と９０％以上同一であるＶＰ１、ＶＰ２又はＶＰ３配列を含む、請求項１に記載の方法。
前記生体サンプルが、血清を含む、請求項１に記載の方法。
前記生体サンプルが、血漿を含む、請求項１に記載の方法。
前記被験者が、哺乳動物である、請求項１に記載の方法。
前記被験者が、ヒトである、請求項１に記載の方法。
前記被験者が、タンパク質の不十分な発現又は活性に起因する障害に罹患している、請求項１に記載の方法。
前記被験者が、異常、欠陥若しくは望ましくないタンパク質の発現又は活性に起因する疾患に罹患している、請求項１に記載の方法。
前記被験者が、遺伝性疾患に罹患している、請求項１に記載の方法。
（ｈ）（ｅ）の前記リポータトランスジーン発現を陽性対照のリポータトランスジーン発現と比較するステップであって、前記陽性対照が、ＡＡＶに結合する既定量の抗体を有するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
前記生体サンプル中のＡＡＶに結合する抗体の前記量を、前記被験者に関連する報告書に入力又は算入するステップをさらに含む、請求項１又は３０に記載の方法。
前記生体サンプル中のＡＡＶに結合する抗体の前記量をデータベースに入力し、これによって、データベースエントリー、すなわち前記被験者に関連するデータベースエントリーを作成するステップをさらに含む、請求項１又は３０に記載の方法。
測定又は定量される前記抗体が、ＡＡＶキャプシドタンパク質に結合する、請求項１又は３０に記載の方法。
測定又は定量される前記抗体が、ＡＡＶ血清型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、Ｒｈ７４、若しくはＲｈ１０、又は前記ＡＡＶ血清型のいずれかのハイブリッド若しくはキメラに結合する、請求項１又は３０に記載の方法。
前記既定量の抗体が、ＡＡＶ血清型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、Ｒｈ７４、若しくはＲｈ１０、又は前記ＡＡＶ血清型のいずれかのハイブリッド若しくはキメラに結合する、請求項３０に記載の方法。
前記生体サンプルを、（ａ）の感染性組換えＡＡＶ粒子との接触又はインキュベートの前に希釈する、請求項１に記載の方法。
前記生体サンプルの複数の希釈物を定量する、請求項１に記載の方法。
前記リポータトランスジーンの発現を測定する前に、前記ＨＥＫ－２９３細胞を溶解させる、請求項１に記載の方法。