JP2021527702A - ネクチン−４に対して特異的な二環式ペプチドリガンド - Google Patents

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Abstract

本発明は、２つ以上のペプチドループがスキャフォールドに対して付着点の間に張られるように分子スキャフォールドに共有結合しているポリペプチドに関する。特に、本発明は、ネクチン−４の高親和性バインダーであるペプチドを記載する。本発明は、１つもしくは複数のエフェクターおよび／または官能基にコンジュゲートされた前記ペプチドを含む薬物コンジュゲート、前記ペプチドリガンドおよび薬物コンジュゲートを含む医薬組成物、ならびにネクチン−４が介在する疾患または障害の阻止、抑制または処置における前記ペプチドリガンドおよび薬物コンジュゲートの使用も含む。

Description

本発明は、２つ以上のペプチドループがスキャフォールドに対する付着点の間に張られるように分子スキャフォールドに共有結合しているポリペプチドに関する。特に、本発明は、ネクチン−４の高親和性バインダーであるペプチドを記載する。本発明は、１つもしくは複数のエフェクターおよび／または官能基にコンジュゲートされた前記ペプチドを含む薬物コンジュゲート、前記ペプチドリガンドおよび薬物コンジュゲートを含む医薬組成物、ならびにネクチン−４が介在する疾患または障害における阻止、抑制または処置における前記ペプチドリガンドおよび薬物コンジュゲートの使用も含む。
環式ペプチドは、タンパク質標的に高親和性で結合し、特異的に標的とすることができ、したがって、治療法の開発にとって魅力的な分子クラスである。実際、いくつかの環式ペプチドは、例えば、抗菌ペプチドのバンコマイシン、免疫抑制薬のシクロスポリンまたは抗がん薬のオクレチドとして臨床においてすでにうまく使用されている（Ｄｒｉｇｇｅｒｓ ｅｔ ａｌ．（２００８）、Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ７（７）、６０８−２４）。良好な結合特性は、ペプチドと標的との間に形成される比較的大きな相互作用表面、ならびに環式構造の配座的可撓性の低下に起因する。典型的には、例えば、環式ペプチドＣＸＣＲ４アンタゴニストＣＶＸ１５（４００Å２；Ｗｕ ｅｔ ａｌ．（２００７）、Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３０、１０６６−７１）、インテグリンαＶｂ３（３５５Å２）に結合するＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐモチーフを有する環式ペプチド（Ｘｉｏｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００２）、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２９６（５５６５）、１５１−５）またはウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子に結合する環式ペプチド阻害剤ｕｐａｉｎ−１（６０３Å２；Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．（２００７）、Ｊ Ｓｔｒｕｃｔ Ｂｉｏｌ １６０（１）、１−１０）のような大員環は、数百平方オングストロームの表面に結合する。
これらの環式立体配置に起因して、ペプチド大員環は直鎖状ペプチドよりも可撓性が低く、標的に結合する際のエントロピーの損失が少なくなり、高結合親和性が生じる。可撓性が低下すると、標的特異的配座が固定され、直鎖状ペプチドと比較して結合特異性が増加することにもつながる。この効果は、その環が開いた場合にその選択性が他のＭＭＰよりも失われる、マトリックスメタロプロテイナーゼ８（ＭＭＰ−８）の強力で選択的な阻害剤によって例示されている（Ｃｈｅｒｎｅｙ ｅｔ ａｌ．（１９９８）、Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ４１（１１）、１７４９−５１）。大環状化を介して達成された好ましい結合特性は、例えば、バンコマイシン、ナイシンおよびアクチノマイシンのような１つを超えるペプチド環を有する多環式ペプチドにおいて更により顕著である。
異なる複数の研究チームが、すでに、システイン残基を有するポリペプチドを合成分子構造に結合させてきた（Ｋｅｍｐ ａｎｄ ＭｃＮａｍａｒａ（１９８５）、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ；Ｔｉｍｍｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．（２００５）、ＣｈｅｍＢｉｏＣｈｅｍ）。Ｍｅｌｏｅｎおよび共同研究者らは、トリス（ブロモメチル）ベンゼンおよび関連分子を使用して、合成スキャフォールド上に複数のペプチドループを迅速に定量的に環化させて、タンパク質表面を構造上模倣している（Ｔｉｍｍｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．（２００５）、ＣｈｅｍＢｉｏＣｈｅｍ）。候補薬物化合物を生成するための方法であって、前記化合物が、システイン含有ポリペプチドを分子スキャフォールド、例えば、ＴＡＴＡ（１，１’，１’’−（１，３，５−トリアジナン−１，３，５−トリイル）トリプロパ−２−エン−１−オンＨｅｉｎｉｓ ｅｔ ａｌ．Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ、Ｉｎｔ Ｅｄ．２０１４；５３：１６０２−１６０６）に結合することによって生成する方法。
ファージディスプレイベースのコンビナトリアルアプローチが、目的の標的に対する二環式ペプチドの大きなライブラリーを生成し、スクリーニングするために開発されている（Ｈｅｉｎｉｓ ｅｔ ａｌ．（２００９）、Ｎａｔ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ５（７）、５０２−７および国際公開第２００９／０９８４５０号）。簡潔には、３つのシステイン残基および６つのランダムなアミノ酸（Ｃｙｓ−（Ｘａａ）６−Ｃｙｓ−（Ｘａａ）６−Ｃｙｓ）の２つの領域を含む直鎖状ペプチドのコンビナトリアルライブラリーをファージ上に示し、システイン側鎖を小分子スキャフォールドに共有結合させることによって環化した。
本発明の第１の態様によれば、ネクチン−４に対して特異的なペプチドリガンドであって、少なくとも２つのループ配列によって分離された少なくとも３つのシステイン残基を含むポリペプチド、および少なくとも２つのポリペプチドループが分子スキャフォールド上に形成されるようにポリペプチドのシステイン残基と共有結合を形成する分子スキャフォールドを含み、アミノ酸配列：
ＣｉＰ［１Ｎａｌ］［ｄＤ］ＣｉｉＭ［ＨＡｒｇ］ＤＷＳＴＰ［ＨｙＰ］ＷＣｉｉｉ（配列番号１）；
（式中、１ＮａＩは１−ナフチルアラニンを表し、ＨＡｒｇはホモアルギニンを表し、ＨｙＰはヒドロキシプロリンを表し、Ｃｉ、ＣｉｉおよびＣｉｉｉは、それぞれ第１、第２および第３のシステイン残基を表す）を含むペプチドリガンドまたはこれらの薬学的に許容される塩が提供される。
本発明の更なる態様によれば、１つもしくは複数のエフェクターおよび／または官能基にコンジュゲートされた本明細書に記載のペプチドリガンドを含む薬物コンジュゲートが提供される。
本発明の更なる態様によれば、本明細書に記載のペプチドリガンドまたは薬物コンジュゲートを１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤と組み合わせて含む医薬組成物が提供される。
本発明の更なる態様によれば、ネクチン−４が介在する疾患または障害の阻止、抑制または処置において使用するための本明細書に記載のペプチドリガンドまたは薬物コンジュゲートが提供される。
図中、エラーバーが存在する場合、平均の標準誤差（ＳＥＭ）を表す。
ＮＣＩ−Ｈ２９２異種移植片を有する雌ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスにＢＣＹ８２４５を投与した後の腫瘍体積トレースである。 ＮＣＩ−Ｈ２９２異種移植片を有する雌ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスにＢＣＹ８２４５を投与した後の腫瘍体積トレースである。 ＨＴ−１３７６異種移植片を有する雌ＣＢ１７−ＳＣＩＤマウスにＢＣＹ８２４５を投与した後の腫瘍体積トレースである。 ＨＴ−１３７６異種移植片を有する雌ＣＢ１７−ＳＣＩＤマウスにＢＣＹ８２４５を投与した後の腫瘍体積トレースである。 Ｐａｎｃ２．１３異種移植片を有する雌Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスにＢＣＹ８２４５を投与した後の腫瘍体積トレースである。 ＭＤＡ−ＭＢ−４６８異種移植片を有する雌Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスにＢＣＹ８２４５を投与した後の腫瘍体積トレースである。 ＮＣＩ−Ｈ２９２異種移植片を有する雌ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスにＢＣＹ８５４９（および対照としてＢＣＹ８２４５）を投与した後の腫瘍体積トレースである。 乳房（Ｔ−４７ＤおよびＭＤＡ−ＭＢ−４６８）におけるネクチン−４に関するゲーティング戦略である。 ＮＣＩ−Ｈ２９２およびＮＣＩ−Ｈ３２２におけるネクチン−４に関するゲーティング戦略である。 ＮＣＩ−Ｈ５２６およびＨＴ１０８０におけるネクチン−４それぞれに関するゲーティング戦略である。 ＮＣＩ−Ｈ５２６およびＨＴ１０８０におけるネクチン−４それぞれに関するゲーティング戦略である。 膀胱がん（ＨＴ１３７６）におけるネクチン−４に関するゲーティング戦略である。 乳がん（ＭＤＡ−ＭＢ−４６８）におけるネクチン−４に関するゲーティング戦略である。 直腸結腸がん（ＨＴ−２９）におけるネクチン−４に関するゲーティング戦略である。 直腸結腸がん（ＨＣＴ−１１６）におけるネクチン−４に関するゲーティング戦略である。 肺がん（Ａ５４９）におけるネクチン−４に関するゲーティング戦略である。 肺がん（ＮＣＩ−Ｈ２９２）におけるネクチン−４に関するゲーティング戦略である。 肺がん（ＮＣＩ−Ｈ３５８）におけるネクチン−４に関するゲーティング戦略である。 肺がん（ＮＣＩ−５２６）におけるネクチン−４に関するゲーティング戦略である。 膵臓がん（Ｐａｎｃ０２．１３）におけるネクチン−４に関するゲーティング戦略である。 Ａ５４９異種移植片を有する雌Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスにＢＣＹ８２４５を投与した後の腫瘍体積トレースである。 ＨＣＴ１１６異種移植片を有する雌Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスにＢＣＹ８２４５を投与した後の腫瘍体積トレースである。 ＨＴ−１３７６異種移植片を有する雌ＣＢ１７−ＳＣＩＤマウスにＢＣＹ８２４５を投与した後の腫瘍体積トレースである。 ＭＤＡ−ＭＢ−４６８異種移植片を有する雌Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスにＢＣＹ８２４５を投与した後の腫瘍体積トレースである。 ＮＣＩ−Ｈ２９２異種移植片を有する雌ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスにＢＣＹ８２４５を投与した後の腫瘍体積トレースである。 ＮＣＩ−Ｈ５２６異種移植片を有する雌Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスにＢＣＹ８２４５を投与した後の腫瘍体積トレースである。 Ｐａｎｃ２．１３異種移植片を有する雌Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスにＢＣＹ８２４５を投与した後の腫瘍体積トレースである。 ＭＤＡ−ＭＢ−４６８異種移植片を有する雌Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスにＢＣＹ８２４５をまたはＢＣＹ８２４５とＢＣＹ８２３４とを組み合わせて投与した後の腫瘍体積トレースである。 ＭＤＡ−ＭＢ−４６８異種移植片を有する雌Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスにＢＣＹ８２４５単独でまたはＢＣＹ８２４５とＢＣＹ８２３４とを組み合わせて投与した後の腫瘍体積トレースである。 Ｌｕ−０１−０４１２ＰＤＸ異種移植片における腫瘍体積トレースである。 ＬＵ−０１−０００７ＰＤＸ異種移植片における腫瘍体積トレースである。 ＣＴＧ−１７７１ＰＤＸ異種移植片における腫瘍体積トレースである。 ＣＴＧ−１１７１ＰＤＸ異種移植片における腫瘍体積トレースである。 ＣＴＧ−１１０６ＰＤＸ異種移植片における腫瘍体積トレースである。 ＣＴＧ−０８９６ＰＤＸ異種移植片における腫瘍体積トレースである。 ＢＴ８００９（すなわちＢＣＹ８２４５）の有効性は、ＣＤＸ／ＰＤＸ異種移植片の発現と相関する。ネクチン−４の発現がほとんどない／全くない異種移植片は、腫瘍成長速度の低下を示す。ネクチン−４を発現する異種移植片は腫瘍の退縮を示す。ＰＤＸとＣＤＸの両方のモデルがこの分析に含まれ、値はさまざまな報告から照合する。 ＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞はネクチン−４を発現し、腫瘍においてＭＭＡＥの長期の保持を示す。 ＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞株に関するＨＣＳ−データ分析である。
１つの実施形態において、ＣｉＰ［１Ｎａｌ］［ｄＤ］ＣｉｉＭ［ＨＡｒｇ］ＤＷＳＴＰ［ＨｙＰ］ＷＣｉｉｉ（配列番号１）のペプチドリガンドは、
［Ｂ−Ａｌａ］［Ｓａｒ１０］−（配列番号１）（以下ＢＣＹ８２３４と称する）；
Ａｃ−［Ｂ−Ａｌａ］［Ｓａｒ５］−（配列番号１）（以下ＢＣＹ８１２２と称する）；
Ａｃ−（配列番号１）（以下ＢＣＹ８１２６と称する）；
（配列番号１）（以下ＢＣＹ８１１６と称する）；
フルオロセイン−（配列番号１）（以下ＢＣＹ８２０５と称する）；および
［ＰＹＡ］［Ｂ−Ａｌａ］［Ｓａｒ１０］−（配列番号１）（以下ＢＣＹ８８４６と称する）
から選択されるアミノ酸配列を含む。
更なる実施形態において、ＣｉＰ［１Ｎａｌ］［ｄＤ］ＣｉｉＭ［ＨＡｒｇ］ＤＷＳＴＰ［ＨｙＰ］ＷＣｉｉｉ（配列番号１）のペプチドリガンドは、
［Ｂ−Ａｌａ］［Ｓａｒ１０］−（配列番号１）（以下ＢＣＹ８２３４と称する）；
Ａｃ−［Ｂ−Ａｌａ］［Ｓａｒ５］−（配列番号１）（以下ＢＣＹ８１２２と称する）；
Ａｃ−（配列番号１）（以下ＢＣＹ８１２６と称する）；
（配列番号１）（以下ＢＣＹ８１１６と称する）；および
フルオロセイン−（配列番号１）（以下ＢＣＹ８２０５と称する）
から選択されるアミノ酸配列を含む。
更なる実施形態において、ＣｉＰ［１Ｎａｌ］［ｄＤ］ＣｉｉＭ［ＨＡｒｇ］ＤＷＳＴＰ［ＨｙＰ］ＷＣｉｉｉ（配列番号１）のペプチドリガンドは、
Ａｃ−［Ｂ−Ａｌａ］［Ｓａｒ５］−（配列番号１）（以下ＢＣＹ８１２２と称する）；
Ａｃ−（配列番号１）（以下ＢＣＹ８１２６と称する）；および
（配列番号１）（以下ＢＣＹ８１１６と称する）
から選択されるアミノ酸配列を含む。
ＳＰＲ結合データによって証明されるように、この実施形態のペプチドリガンドがヒトネクチン−４への優れたレベルの結合を示したことを実証するデータを、本明細書の表２に示す。
更なる実施形態において、ＣｉＰ［１Ｎａｌ］［ｄＤ］ＣｉｉＭ［ＨＡｒｇ］ＤＷＳＴＰ［ＨｙＰ］ＷＣｉｉｉ（配列番号１）のペプチドリガンドは、
Ａｃ−［Ｂ−Ａｌａ］［Ｓａｒ５］−（配列番号１）（以下ＢＣＹ８１２２と称する）；および
Ａｃ−（配列番号１）（以下ＢＣＹ８１２６と称する）
から選択されるアミノ酸配列を含む。
競合結合データによって証明されるように、この実施形態のペプチドリガンドがヒトネクチン−４への優れたレベルの結合を示したことを実証するデータを、本明細書の表１に示す。
更なる実施形態において、ＣｉＰ［１Ｎａｌ］［ｄＤ］ＣｉｉＭ［ＨＡｒｇ］ＤＷＳＴＰ［ＨｙＰ］ＷＣｉｉｉ（配列番号１）のペプチドリガンドは、
［Ｂ−Ａｌａ］［Ｓａｒ１０］−（配列番号１）（以下ＢＣＹ８２３４と称する）
から選択されるアミノ酸配列を含む。
ＳＰＲ結合データによって証明されるように、この実施形態のペプチドリガンドが、細胞毒性剤にコンジュゲートされた場合に、ヒトネクチン−４への優れたレベルの結合（＜１０ｎＭ）を示したことを実証するデータを、本明細書の表３に示す。
１つの実施形態において、分子スキャフォールドは１，１’，１’’−（１，３，５−トリアジナン−１，３，５−トリイル）トリプロパ−２−エン−１−オン（ＴＡＴＡ）である。
別段の定義がない限り、本明細書において使用する全ての技術および科学用語は当業者、例えば、ペプチド化学、細胞培養およびファージディスプレイ、核酸化学および生化学の技術分野の当業者に通常理解されるものと同じ意味を有する。標準的な技術は、分子生物学、遺伝的および生化学的方法のために使用し（Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ ｅｄ．，２００１，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９９）４ｔｈ ｅｄ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．を参照のこと）、この文献は参照により本明細書の一部をなすものとする。
＜命名法＞
番号付け
本発明のペプチド内のアミノ酸残基の位置について言及する場合、システイン残基（Ｃｉ、ＣｉｉおよびＣｉｉｉ）は、不変であるために番号付けから除外し、その結果、本発明のペプチド内のアミノ酸残基の番号付けは、
Ｃｉ−Ｐ１−［１Ｎａｌ］２−［ｄＤ］３−Ｃｉｉ−Ｍ４−［ＨＡｒｇ］５−Ｄ６−Ｗ７−Ｓ８−Ｔ９−Ｐ１０−［ＨｙＰ］１１−Ｗ１２−Ｃｉｉｉ（配列番号１）
のようにみなす。
この説明のために、全ての二環式ペプチドは、１，１’，１’’−（１，３，５−トリアジナン−１，３，５−トリイル）トリプロパ−２−アン−１−オン（ＴＡＴＡ）を用いて環化されて、３置換構造がもたらされると想定される。ＴＡＴＡを用いた環化は、Ｃｉ、Ｃｉｉ、およびＣｉｉｉにおいて発生する。
分子フォーマット
二環コア配列へのＮまたはＣ末端の伸長は、配列の左または右側に追加され、ハイフンによって分離される。例えば、Ｎ末端βＡｌａ−Ｓａｒ１０−Ａｌａ尾部は、
βＡｌａ−Ｓａｒ１０−Ａ−（配列番号Ｘ）
として示されることになる。
反転ペプチド配列
Ｎａｉｒ ｅｔ ａｌ（２００３）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７０（３）、１３６２−１３７３における開示を考慮すると、本明細書において開示されるペプチド配列は、そのレトロインベルソ形態においても有用性が見出されるであろうことが想定される。例えば、配列が反転されると（すなわちＮ末端がＣ−末端になり、逆もまた同様である）、その立体化学も同様に逆転される（すなわちＤ−アミノ酸がＬ−アミノ酸になり、逆もまた同様である）。
＜ペプチドリガンド＞
本明細書において言及するペプチドリガンドは、分子スキャフォールドに共有結合しているペプチドを指す。典型的には、そのようなペプチドは、スキャフォールドに対して共有結合を形成することができる２つ以上の反応性基（すなわちシステイン残基）、およびペプチドがスキャフォールドに対して結合した場合にループを形成するためのループ配列と称する前記反応性基間で定められる配列を含む。この場合において、ペプチドは、少なくとも３つのシステイン残基（本明細書においてＣｉ、ＣｉｉおよびＣｉｉｉと称する）を含み、スキャフォールド上に少なくとも２つのループを形成する。
＜ペプチドリガンドの利点＞
本発明のある特定の二環式ペプチドは、それらが注射、吸入、経鼻、眼、経口または局所投与のための好適な薬物様分子とみなされることを可能にするいくつかの有利な特性を有する。そのような有利な特性としては、以下が挙げられる：
− 種交差反応性。これは、臨床前の薬力学および薬物動態評価のための典型的な必須要件である；
− プロテアーゼ安定性。二環式ペプチドリガンドは、血漿プロテアーゼ、上皮（「膜アンカー」）プロテアーゼ、胃腸管プロテアーゼ、肺表面プロテアーゼ、細胞内プロテアーゼなどに対する安定性を理想的には実証されるべきである。プロテアーゼ安定性は、二環リード候補が動物モデルにおいて開発され、確信を持ってヒトに投与できるように異なる種間で維持するべきである；
− 望ましい溶解度プロファイル。これは、荷電および親水性対疎水性残基の比率と、分子内／間Ｈ結合との関数であり、これは製剤化および吸収目的のために重要である；
− 循環における最適な血漿半減期。臨床適用および処置レジメンに応じて、急性の病気の管理環境における短期曝露のための二環式ペプチドを開発するか、または循環において保持が強化された二環式ペプチドを開発することが必要な場合があり、したがって、慢性病態の管理により最適である。望ましい血漿半減期を推進する他の要因は、最大限の治療効率のための持続的な曝露の要件と薬剤の持続的な曝露に起因する付随する毒物学とを比較することである；および
− 選択性。本発明のある特定のペプチドリガンドは、他のネクチンよりも良好な選択性を実証する。
＜薬学的に許容される塩＞
塩形態は本発明の範囲内であり、ペプチドリガンドに対する言及が前記リガンドの塩形態を含むことは理解されるであろう。
本発明の塩は、従来の化学的方法、例えば、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓｅ，Ｐ．Ｈｅｉｎｒｉｃｈ Ｓｔａｈｌ（Ｅｄｉｔｏｒ），Ｃａｍｉｌｌｅ Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（Ｅｄｉｔｏｒ），ＩＳＢＮ：３−９０６３９−０２６−８，Ｈａｒｄｃｏｖｅｒ，３８８ ｐａｇｅｓ，Ａｕｇｕｓｔ ２００２に記載の方法によって、塩基性または酸性部分を含む親化合物から合成してもよい。一般的に、そのような塩は、水中または有機溶媒中、または２つの混合物中で、これらの化合物の遊離酸または塩基形態を適切な塩基または酸と反応させることによって調製され得る。
酸付加塩（モノまたはジ塩）は、無機と有機の両方のさまざまな酸で形成されてもよい。酸付加塩の例としては、酢酸、２，２−ジクロロ酢酸、アジピン酸、アルギン酸、アスコルビン酸（例えばＬ−アスコルビン酸）、Ｌ−アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、４−アセトアミド安息香酸、ブタン酸、（＋）ショウノウ酸、ショウノウ−スルホン酸、（＋）−（１Ｓ）−ショウノウ−１０−スルホン酸、カプリン酸、カプロン酸、カプリリック酸、桂皮酸、クエン酸、シクラミン酸、ドデシル硫酸、エタン−１，２−ジスルホン酸、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、ガラクタル酸、ゲンチシン酸、グルコヘプトン酸、Ｄ−グルコン酸、グルクロン酸（例えばＤ−グルクロン酸）、グルタミン酸（例えばＬ−グルタミン酸）、α−オキソグルタル酸、グリコール酸、馬尿酸、ハロゲン化水素酸（例えば臭化水素酸、塩酸、ヨウ化水素酸）、イセチオン酸、乳酸（例えば（＋）−Ｌ−乳酸、（±）−ＤＬ−乳酸）、ラクトビオン酸、マレイン酸、リンゴ酸、（−）−Ｌ−リンゴ酸、マロン酸、（±）−ＤＬ−マンデル酸、メタンスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸、ニコチン酸、硝酸、オレイン酸、オロト酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、リン酸、プロピオン酸、ピルビン酸、Ｌ−ピログルタミン酸、サリチル酸、４−アミノ−サリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、硫酸、タンニン酸、（＋）−Ｌ−酒石酸、チオシアン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ウンデシレン酸、吉草酸からなる群から選択される酸、ならびにアシル化アミノ酸および陽イオン交換樹脂と共に形成されるモノまたはジ塩がある。
塩の１つの特定の群は、酢酸、塩酸、ヨウ化水素酸、リン酸、硝酸、硫酸、クエン酸、乳酸、コハク酸、マレイン酸、リンゴ酸、イセチオン酸、フマル酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、硫酸、メタンスルホン酸（メシル酸塩）、エタンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、吉草酸、プロパン酸、ブタン酸、マロン酸、グルクロン酸およびラクトビオン酸から形成された塩からなる。１つの特定の塩は塩酸塩である。別の特定の塩は酢酸塩である。
化合物が陰イオン性であるか、または陰イオン性であり得る（例えば、−ＣＯＯＨが−ＣＯＯ−であり得る）官能基を有する場合、塩は、好適な陽イオンを生成する有機または無機塩基と共に形成されることがある。好適な無機陽イオンの例としては、これらに限定されるものではないが、アルカリ金属イオン、例えばＬｉ＋、Ｎａ＋およびＫ＋、アルカリ土類金属陽イオン、例えばＣａ２＋およびＭｇ２＋、および他の陽イオン、例えばＡｌ３＋またはＺｎ＋がある。好適な有機陽イオンの例としては、これらに限定されるものではないが、アンモニウムイオン（すなわち、ＮＨ４ ＋）および置換されたアンモニウムイオン（例えば、ＮＨ３Ｒ＋、ＮＨ２Ｒ２ ＋、ＮＨＲ３ ＋、ＮＲ４ ＋）がある。いくつかの好適な置換されたアンモニウムイオンの例は、メチルアミン、エチルアミン、ジエチルアミン、プロピルアミン、ジシクロヘキシルアミン、トリエチルアミン、ブチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン、ベンジルアミン、フェニルベンジルアミン、コリン、メグルミン、およびトロメタミン、ならびにアミノ酸、例えばリシンおよびアルギニン由来のものである。一般的な第四級アンモニウムイオンの例はＮ（ＣＨ３）４ ＋である。
本発明のペプチドがアミン官能基を含む場合、これらは、当業者に周知の方法に従って、例えばアルキル化剤との反応によって、第四級アンモニウム塩を形成する場合がある。そのような第四級アンモニウム化合物は発明の範囲内である。
＜改変誘導体＞
本明細書に記載のペプチドリガンドの改変誘導体は本発明の範囲内であることは理解されるであろう。そのような好適な改変誘導体の例は、Ｎ末端および／またはＣ末端修飾；１つまたは複数のアミノ酸残基の１つまたは複数の非天然アミノ酸残基による置換（例えば、１つまたは複数の極性アミノ酸残基の１つまたは複数の等配電子または等電子アミノ酸による置換；１つまたは複数の非極性アミノ酸残基の他の非天然等配電子または等電子アミノ酸による置換）；スペーサー基の追加；１つまたは複数の酸化感受性アミノ酸残基の１つまたは複数の酸化耐性アミノ酸残基による置換；１つまたは複数のアミノ酸残基のアラニンによる置換、１つまたは複数のＬ−アミノ酸残基の１つまたは複数のＤ−アミノ酸残基による置換；二環式ペプチドリガンド内の１つまたは複数のアミド結合のＮ−アルキル化；１つまたは複数のペプチド結合の代理結合による置換；ペプチド骨格長の改変；１つまたは複数のアミノ酸残基のアルファ−炭素上の水素の別の化学基との置換、アミノ酸、例えばシステイン、リシン、グルタミン酸／アスパルテートおよびチロシンの好適なアミン、チオール、カルボン酸およびフェノール−反応性試薬を用いた前記アミノ酸を官能化するための改変、官能基化するのに好適な直交反応性を導入するアミノ酸、例えば、アルキンまたはアジド含有部分を用いた官能基化を可能にするアジドまたはアルキン基を有するアミノ酸の導入または置換えからそれぞれ選択される１つまたは複数の改変を含む。
１つの実施形態において、改変誘導体は、Ｎ末端および／またはＣ末端修飾を含む。更なる実施形態において、改変誘導体は、好適なアミノ反応性化学を使用したＮ末端修飾、および／または好適なカルボキシ反応性化学を使用したＣ末端修飾を含む。更なる実施形態において、前記Ｎ末端またはＣ末端修飾は、これらに限定されないが、細胞毒性剤、放射性キレート化剤（ｒａｄｉｏｃｈｅｌａｔｏｒ）または発色団を含むエフェクター基の付加を含む。
更なる実施形態において、改変誘導体はＮ末端修飾を含む。更なる実施形態において、Ｎ末端修飾はＮ末端アセチル基を含む。この実施形態において、Ｎ末端システイン基（本明細書においてＣｉと称する基）を、ペプチド合成中に酢酸無水物または他の適切な試薬でキャップし、Ｎ末端がアセチル化された分子が得られる。この実施形態は、アミノペプチダーゼに関する潜在的な認識点を除去することの利点を提供し、二環式ペプチドの分解の可能性を回避する。
代替的な実施形態において、Ｎ末端修飾は、エフェクター基のコンジュゲートおよびその標的に対する二環式ペプチドの潜在力の保持を促進する分子スペーサー基の付加を含む。
更なる実施形態において、改変誘導体はＣ末端修飾を含む。更なる実施形態において、Ｃ末端修飾はアミド基を含む。この実施形態において、Ｃ末端システイン基（本明細書においてＣｉｉｉと称する基）は、ペプチド合成中にアミドとして合成され、Ｃ末端がアミド化された分子が得られる。この実施形態は、カルボキシペプチダーゼに関する潜在的な認識点を除去することの利点を提供し、二環式ペプチドのタンパク質分解の可能性を減少させる。
１つの実施形態において、改変誘導体は、１つまたは複数のアミノ酸残基の１つまたは複数の非天然アミノ酸残基による置換を含む。この実施形態において、分解性プロテアーゼによって認識されず、標的潜在力に有害な影響を一切与えない等配電子／等電子側鎖を有する非天然アミノ酸を選択してもよい。
あるいは、近くのペプチド結合のタンパク質分解性加水分解が配座的にかつ立体的に妨げられるように拘束されたアミノ酸側鎖を有する非天然アミノ酸を使用してもよい。特に、これらはプロリン類似体、嵩高側鎖、Ｃα−二置換誘導体（例えば、アミノイソ酪酸、Ａｉｂ）、およびシクロアミノ酸、アミノシクロプロピルカルボン酸である単純な誘導体に関連する。
１つの実施形態において、改変誘導体はスペーサー基の付加を含む。更なる実施形態において、改変誘導体は、スペーサー基のＮ末端システイン（Ｃｉ）および／またはＣ末端システイン（Ｃｉｉｉ）への付加を含む。
１つの実施形態において、改変誘導体は、１つまたは複数の酸化感受性アミノ酸残基の１つまたは複数の酸化耐性アミノ酸残基による置換を含む。
１つの実施形態において、改変誘導体は、１つまたは複数の荷電アミノ酸残基の１つまたは複数の疎水性アミノ酸残基による置換を含む。代替的な実施形態において、改変誘導体は、１つまたは複数の疎水性アミノ酸残基の１つまたは複数の荷電アミノ酸残基による置換を含む。荷電対疎水性アミノ酸残基の正確なバランスは、二環式ペプチドリガンドの重要な特徴である。例えば、疎水性アミノ酸残基は、血漿タンパク質結合の程度に、したがって血漿中の利用可能な遊離フラクションの濃度に影響を与え、同時に荷電アミノ酸残基（特にアルギニン）は、ペプチドと細胞表面上のリン脂質膜との相互作用に影響を与える場合がある。２つを組み合わせると、半減期、分布体積およびペプチド薬の曝露に影響が与えられる場合があり、臨床的エンドポイントに従って調整することができる。更に、荷電対疎水性アミノ酸残基の正確な組合せおよび数によって、（ペプチド薬物が皮下投与された場合の）注射部位における刺激が減少される場合がある。
１つの実施形態において、改変誘導体は、１つまたは複数のＬ−アミノ酸残基の１つまたは複数のＤ−アミノ酸残基による置換を含む。この実施形態は、立体障害によっておよびβ−ターン配座を安定化させるＤ−アミノ酸の傾向によってタンパク質分解安定性を増加させると考えられる（Ｔｕｇｙｉ ｅｔ ａｌ（２００５）ＰＮＡＳ、１０２（２）、４１３−４１８）。
１つの実施形態において、改変誘導体は、任意のアミノ酸残基の除去およびアラニンによる置換を含む。この実施形態は、潜在的なタンパク質分解攻撃部位を除去することの利点を提供する。
各上述の改変は、ペプチドの潜在力または安定性を意図的に改善するのに役立つ点に留意するべきである。改変に基づく更なる効力の改善は、
− 高い親和性が達成されるように、疎水性効果を利用し、低い解離速度（ｏｆｆ ｒａｔｅｓ）をもたらす疎水性部分を組み込むこと；
− 長期のイオン性相互作用を利用し、速度を高め、高い親和性をもたらす荷電基を組み込むこと（例えば、Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｒａｐｉｄ，ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃａｌｌｙ ａｓｓｉｓｔｅｄ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ（１９９６），Ｎａｔｕｒｅ Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．３，４２７−３１を参照のこと）；および
− エントロピーの損失が、標的が結合する際に最小であるように、例えばアミノ酸の側鎖を正確に拘束することによってペプチド中に追加の拘束を組み込み、エントロピーの損失が、標的が結合する際に最小であるように、骨格のねじれ角を拘束し、同じ理由で分子に追加の環化を導入すること（レビューに関しては、Ｇｅｎｔｉｌｕｃｃｉ ｅｔ ａｌ，Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｅｓｉｇｎ，（２０１０），１６，３１８５−２０３、およびＮｅｓｔｏｒ ｅｔ ａｌ，Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍ（２００９），１６，４３９９−４１８を参照のこと）；
のメカニズムを介して達成してもよい。
＜同位体バリエーション＞
本発明は、本発明の全ての薬学的に許容される（放射性）同位体標識ペプチドリガンドを含み、１つまたは複数の原子が、同じ原子番号であるが、自然界で通常認められる原子質量または質量数と異なる原子質量または質量数を有する原子によって置き換えられており、金属キレート化基が結合している本発明のペプチドリガンド（「エフェクター」と称する）は、適切な（放射性）同位体および本発明のペプチドリガンドを保持していてもよく、ある特定の官能基は、適切な（放射性）同位体または同位体標識された官能基で共有結合的に置き換えられている。
本発明のペプチドリガンドに含めるのに好適な同位体の例は、水素、例えば２Ｈ（Ｄ）および３Ｈ（Ｔ）、炭素、例えば１１Ｃ、１３Ｃおよび１４Ｃ、塩素、例えば３６Ｃｌ、フッ素、例えば１８Ｆ、ヨウ素、例えば１２３Ｉ、１２５Ｉおよび１３１Ｉ、窒素、例えば１３Ｎおよび１５Ｎ、酸素、例えば１５Ｏ、１７Ｏおよび１８Ｏ、リン、例えば３２Ｐ、硫黄、例えば３５Ｓ、銅、例えば６４Ｃｕ、ガリウム、例えば６７Ｇａまたは６８Ｇａ、イットリウム、例えば９０Ｙおよびルテチウム、例えば１７７Ｌｕ、およびビスマス、例えば２１３Ｂｉの同位体を含む。
本発明のある特定の同位体標識ペプチドリガンド、例えば放射性同位体を組み込んでいるものは、薬物および／または基質の組織分布研究において、かつ罹患組織上のネクチン−４標的の存在および／または非存在を臨床的に評価するために有用である。本発明のペプチドリガンドは、それらが標識化合物と他の分子、ペプチド、タンパク質、酵素または受容体との間の複合体の形成を検出または同定するために使用してもよいという点において価値のある診断特性を更に有する場合がある。検出または同定方法は、標識化剤、例えば放射性同位体、酵素、蛍光物質、発光物質（例えば、ルミノール、ルミノール誘導体、ルシフェリン、エクオリンおよびルシフェラーゼ）などで標識された化合物を使用する場合がある。放射性同位体のトリチウム、すなわち３Ｈ（Ｔ）、および炭素−１４、すなわち１４Ｃは、取り込みのその容易性および検出の容易な手段を考慮するとこの目的のために特に有用である。
より重い同位体、例えば重水素、すなわち２Ｈ（Ｄ）で置換すると、代謝安定性の増加、例えばインビボ半減期の増加または必要とされる投薬量の減少に起因するある特定の治療上の利点が得られる場合があり、したがって、状況によっては好ましい場合がある。
陽電子放出同位体、例えば１１Ｃ、１８Ｆ、１５Ｏおよび１３Ｎで置換すると、標的占有率を調べるためのポジトロン断層法（ＰＥＴ）研究において有用な場合がある。
本発明のペプチドリガンドの同位体標識化合物は、当業者に公知の従来技術によってまたは以前に用いた非標識試薬の代わりに適切な同位体標識試薬を使用した添付の実施例に記載のものに類似している方法によって一般的に調製してもよい。
＜分子スキャフォールド＞
１つの実施形態において、分子スキャフォールドは非芳香族分子スキャフォールドを含む。本明細書における「非芳香族分子スキャフォールド」への言及は、芳香族（すなわち不飽和）炭素環式または複素環式環系を含まない本明細書に記載の任意の分子スキャフォールドを指す。
非芳香族分子スキャフォールドの好適な例は、Ｈｅｉｎｉｓ ｅｔ ａｌ（２０１４）Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｄｉｔｉｏｎ ５３（６）１６０２−１６０６に記載されている。
前述の文書に記載の通り、分子スキャフォールドは、小分子、例えば有機小分子であってもよい。
１つの実施形態において、分子スキャフォールドは高分子であってもよい。１つの実施形態において、分子スキャフォールドは、アミノ酸、ヌクレオチドまたは炭水化物から構成される高分子である。
１つの実施形態において、分子スキャフォールドは、ポリペプチドの官能基と反応し、共有結合を形成することができる反応性基を含む。
分子スキャフォールドは、ペプチド、例えば、アミン、チオール、アルコール、ケトン、アルデヒド、ニトリル、カルボン酸、エステル、アルケン、アルキン、アジド、無水物、スクシンイミド、マレイミド、ハロゲン化アルキルおよびハロゲン化アシルとの結合を形成する化学基を含んでいてもよい。
αβ不飽和カルボニル含有化合物の例は、１，１’，１’’−（１，３，５−トリアジナン−１，３，５−トリイル）トリプロパ−２−エン−１−オン（ＴＡＴＡ）である（Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｄｉｔｉｏｎ（２０１４）、５３（６）、１６０２−１６０６）。
＜エフェクターおよび官能基＞
本発明の更なる態様によれば、１つもしくは複数のエフェクターおよび／または官能基にコンジュゲートされた本明細書に記載のペプチドリガンドを含む薬物コンジュゲートが提供される。
エフェクターおよび／または官能基は、例えば、ポリペプチドのＮおよび／またはＣ末端に、ポリペプチド内のアミノ酸に、または分子スキャフォールドに結合していてもよい。
適切なエフェクター基としては、抗体およびその一部またはフラグメントがある。例えば、エフェクター基は、１つまたは複数の定常領域ドメインに加えて、抗体軽鎖定常領域（ＣＬ）、抗体ＣＨ１重鎖ドメイン、抗体ＣＨ２重鎖ドメイン、抗体ＣＨ３重鎖ドメイン、または任意の組合せを含む場合がある。エフェクター基は、抗体のヒンジ領域も含んでいてもよい（そのような領域は通常は、ＩｇＧ分子のＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとの間に認められる）。
本発明のこの態様の更なる実施形態において、本発明によるエフェクター基は、ＩｇＧ分子のＦｃ領域である。有利には、本発明によるペプチドリガンド−エフェクター基は、１日以上、２日以上、３日以上、４日以上、５日以上、６日以上または７日以上のｔβ半減期を有するペプチドリガンドＦｃ融合物を含むかまたはこれらからなる。最も有利には、本発明によるペプチドリガンドは、１日以上のｔβ半減期を有するペプチドリガンドＦｃ融合物を含むかまたはこれらからなる。
官能基としては、一般的に、結合基、薬物、他の実体に付着するための反応性基、大環状ペプチドの細胞への取り込みの助けとなる官能基などがある。
細胞に侵入するためのペプチドの能力によって、ペプチドが細胞内標的に対して効果的になることを可能にするであろう。細胞に侵入するための能力を有するペプチドによってアクセスすることができる標的としては、転写因子、細胞内シグナル伝達分子、例えばチロシンキナーゼおよびアポトーシス経路に関与する分子がある。細胞の侵入を可能にする官能基としては、ペプチド、またはペプチドもしくは分子スキャフォールドのいずれかが付加された化学基、ペプチド、例えばＣｈｅｎ ａｎｄ Ｈａｒｒｉｓｏｎ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ（２００７）Ｖｏｌｕｍｅ ３５，ｐａｒｔ ４，ｐ８２１；Ｇｕｐｔａ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ（２００４）Ｖｏｌｕｍｅ ５７ ９６３７に記載されているような、例えばＶＰ２２、ＨＩＶ−Ｔａｔ、キイロショウジョウバエ属（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）（アンテナペディア）のホメオボックスタンパク質由来のものがある。血漿膜を介した転座に効率的であることが示されている短いペプチドの例は、キイロショウジョウバエ属アンテナペディアタンパク質からの１６個のアミノ酸ペネトラチンペプチド（Ｄｅｒｏｓｓｉ ｅｔ ａｌ（１９９４）Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｖｏｌｕｍｅ ２６９ ｐ１０４４４）、１８個のアミノ酸「モデル両親媒性ペプチド」（Ｏｅｈｌｋｅ ｅｔ ａｌ（１９９８）Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ ＡｃｔｓＶｏｌｕｍｅ １４１４ ｐ１２７）およびＨＩＶＴＡＴタンパク質のアルギニンリッチ領域を含む。非ペプチド的アプローチは、生体分子に容易に付着することができる小分子模倣体またはＳＭＯＣの使用を含む（Ｏｋｕｙａｍａ ｅｔ ａｌ（２００７）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｖｏｌｕｍｅ ４ ｐ１５３）。グアニジニウム基を分子に付加するための他の化学的戦略も、細胞の侵入を強化する（Ｅｌｓｏｎ−Ｓｃｗａｂ ｅｔ ａｌ（２００７）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ Ｖｏｌｕｍｅ ２８２ ｐ１３５８５）。低分子量の分子、例えばステロイドを、細胞中への取り込みを強化するために分子スキャフォールドに付加してもよい。
ペプチドリガンドに付着することができる官能基の１つのクラスとしては、抗体およびその結合フラグメント、例えばＦａｂ、Ｆｖまたは単一のドメインフラグメントがある。特に、インビボでペプチドリガンドの半減期を増加させることができるタンパク質に結合する抗体を使用してもよい。
１つの実施形態において、本発明によるペプチドリガンド−エフェクター基は、１２時間以上、２４時間以上、２日以上、３日以上、４日以上、５日以上、６日以上、７日以上、８日以上、９日以上、１０日以上、１１日以上、１２日以上、１３日以上、１４日以上、１５日以上または２０日以上からなる群から選択されるｔβ半減期を有する。有利には、本発明によるペプチドリガンド−エフェクター基または組成物は、１２から６０時間の範囲内のｔβ半減期を有することになる。更なる実施形態において、それは１日以上のｔβ半減期を有することになる。更なる実施形態において、それは１２〜２６時間の範囲内であることになる。
本発明の１つの特定の実施形態では、官能基は、医薬関連の金属放射性同位体を錯体化するのに好適な金属キレート剤から選択される。
可能なエフェクター基としてはまた、酵素、例えば、ペプチドリガンドがＡＤＥＰＴにおいて抗体に置き換わる場合は、酵素／プロドラッグ療法において使用するためのカルボキシペプチダーゼＧ２がある。
本発明の１つの特定の実施形態では、官能基は、薬物、例えばがん療法のための細胞毒性剤から選択される。好適な例としては、アルキル化剤、例えばシスプラチンおよびカルボプラチン、ならびにオキサリプラチン、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、イホスファミド；プリン類似体のアザチオプリンおよびメルカプトプリンまたはピリミジン類似体を含む代謝産物拮抗物質；ビンカアルカロイド、例えばビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビンおよびビンデシンを含む植物アルカロイドおよびテルペノイド；ポドフィロトキシンおよびその誘導体のエトポシドおよびテニポシド；もとはタキソールとして公知のパクリタキセルを含むタキサン；カンプトテシンを含むトポイソメラーゼ阻害剤：イリノテカンおよびトポテカン、ならびにアムサクリン、エトポシド、リン酸エトポシド、およびテニポシドを含むＩＩ型阻害剤がある。更なる薬剤としては、免疫抑制薬のダクチノマイシン（これは腎臓移植において使用される）、ドキソルビシン、エピルビシン、ブレオマイシン、カリケアマイシンなどを含む抗腫瘍抗生物質があり得る。
本発明の１つの更なる特定の実施形態において、細胞毒性剤は、メイタンシノイド（例えばＤＭ１）またはモノメチルオーリスタチン（例えばＭＭＡＥ）から選択される。
ＤＭ１は細胞毒性剤であり、メイタンシンのチオール含有誘導体であり、以下の構造：
Figure 2021527702
 を有する。
ＤＭ１を含む毒素にコンジュゲートしているペプチドリガンドの効果を実証するデータを本明細書において表３に示す。
モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）は合成抗悪性腫瘍剤であり、以下の構造：
Figure 2021527702
 を有する。
ＭＭＡＥを含む毒素にコンジュゲートしているペプチドリガンドの効果を実証するデータを本明細書において表３に示す。
本発明の１つの更なる特定の実施形態において、細胞毒性剤は、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）から選択される。
１つの実施形態において、細胞毒性剤は、切断可能な結合、例えばジスルフィド結合またはプロテアーゼ感受性結合によって二環式ペプチドに結合する。更なる実施形態において、ジスルフィド結合に近接している基は、ジスルフィド結合の妨害、これによる細胞毒性剤の開裂および付随する放出の速度を制御するように改変される。
発表済みの研究では、ジスルフィド結合いずれかの側に立体障害を導入することによってジスルフィド結合の還元に対する感受性を改変する可能性を確立している（Ｋｅｌｌｏｇｇ ｅｔ ａｌ（２０１１）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２２，７１７）。立体障害の程度が大きくなるにつれ、細胞内グルタチオン、また細胞外（全身性）還元剤による還元速度が低下し、その結果困難になり、毒素が細胞の内部と外部の両方に放出される。したがって、循環中のジスルフィド安定性（毒素の不所望の副作用を最小限にする）と細胞内環境における効率的な放出（治療効果を最大にする）との比較における最適条件の選択は、ジスルフィド結合のいずれかの側に対する妨害の程度を慎重に選択することによって達成される場合がある。
ジスルフィド結合のいずれかの側に対する妨害は、分子構築物の標的実体（ここでは、二環式ペプチド）または毒素側のいずれかに１つまたは複数のメチル基を導入することを介してモジュレートする。
１つの実施形態において、細胞毒性剤およびリンカーは、国際公開第２０１６／０６７０３５号に記載のものの任意の組合せから選択される（これらの細胞毒性剤およびリンカーは参照により本明細書の一部をなすものとする）。
１つの実施形態において、前記細胞毒性剤と前記二環式ペプチドとの間のリンカーは、１つまたは複数のアミノ酸残基を含む。好適なリンカーとして好適なアミノ酸残基の例としては、Ａｌａ、Ｃｉｔ、Ｌｙｓ、ＴｒｐおよびＶａｌがある。
１つの実施形態において、細胞毒性剤は、ＭＭＡＥから選択され、前記薬物コンジュゲートは、−ＰＡＢＣ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−グルタリル−または−ＰＡＢＣ−シクロブチル−Ａｌａ−Ｃｉｔ−βＡｌａ−（式中、ＰＡＢＣは、ｐ−アミノベンジルカルバメートを表す）から選択されるリンカーを更に含む。リンカーを含むシクロブチルの全詳細は、Ｗｅｉ ｅｔ ａｌ（２０１８）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．６１，９８９−１０００において見出すことができる。更なる実施形態において、細胞毒性剤は、ＭＭＡＥから選択され、リンカーは−ＰＡＢＣ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−グルタリル−である。
代替的な実施形態において、細胞毒性剤はＤＭ１であり、前記薬物コンジュゲートは、−ＳＰＤＢ−（ＳＯ３Ｈ）−（式中、ＳＰＤＢは、Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネートを表す）であるリンカーを更に含む。
代替的な実施形態において、細胞毒性剤はＭＭＡＥであり、二環式ペプチドは、本明細書に記載のＢＣＹ８２３４から選択され、リンカーは、−ＰＡＢＣ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−グルタリル−から選択される。このＢＤＣは、ここではＢＣＹ８２４５として公知であり、
Figure 2021527702
 として図式的に表され、
Figure 2021527702
 としてより詳細な様式でも示してもよい。
表３で示すようにＳＰＲ結合アッセイにおいてＢＣＹ８２４５に関するヒトネクチン−４への優れた結合を実証するデータを本明細書において提示する。このＢＤＣも、例１で示すような非小細胞肺がんモデル、例２で示すような膀胱がんモデル、例３で示すような膵臓がんモデル、および例４で示すような乳がんモデルにおける良好な抗腫瘍活性が実証されている。
代替的な実施形態において、細胞毒性剤はＭＭＡＥであり、二環式ペプチドは、本明細書に記載のＢＣＹ８２３４から選択され、リンカーは、−ＰＡＢＣ−シクロブチル−（Ｂ−Ａｌａ）−から選択される。このＢＤＣは、ここではＢＣＹ８５４９として公知である。表３で示すように、ＳＰＲ結合アッセイにおけるＢＣＹ８５４９に関するヒトネクチン−４への優れた結合を実証するデータを本明細書において提示する。
更なる実施形態において、二環式薬物コンジュゲートは、ＢＣＹ８２４５またはＢＣＹ８５４９から選択される。更なる実施形態において、二環式薬物コンジュゲートはＢＣＹ８２４５である。薬物コンジュゲートＢＣＹ８２４５は、本明細書に記載のデータで実証されるように優れた用量依存的抗腫瘍活性が実証されている。
＜合成＞
本発明のペプチドは、標準的な技術と、それに続くインビトロでの分子スキャフォールドとの反応によって合成的に製造してもよい。これを行う場合、標準的な化学を使用してよい。これによって、更なる下流実感または検証のための溶解性の材料の迅速で大規模な規模な調製が可能になる。そのような方法は、従来の化学、例えばＴｉｍｍｅｒｍａｎら（上記を参照のこと）で開示されるものを使用して達成してもよい。
したがって、本発明は、本明細書において示すように選択されるポリペプチドまたはコンジュゲートの製造にも関し、製造は、以下で説明するような任意選択の更なるステップを含む。１つの実施形態において、これらのステップは、化学的合成によって作製された最終製品のポリペプチド／コンジュゲートに対して行われる。
任意選択で、目的のポリペプチドにおけるアミノ酸残基は、コンジュゲートまたは複合体を製造する場合に置換されていてもよい。
ペプチドは伸長し、例えば別のループを組み込み、その結果、複数の特異性を導入してもよい。
ペプチドを伸長するために、標準的な固相または溶液相化学を使用し、直交的に保護されたリジン（および類似体）を使用してそのＮ末端もしくはＣ末端においてまたはループ内で単純に化学的に延長してもよい。標準的な（バイオ）コンジュゲート技術を、活性化されたまたは活性化可能なＮまたはＣ末端を導入するために使用してもよい。あるいは付加は、例えば（Ｄａｗｓｏｎ ｅｔ ａｌ．１９９４．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｂｙ Ｎａｔｉｖｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｌｉｇａｔｉｏｎ．Ｓｃｉｅｎｃｅ２６６：７７６−７７９）に記載されているようなフラグメント濃縮または天然の化学ライゲーションによって、または例えば（Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．１９９４ Ｄｅｃ ２０；９１（２６）：１２５４４−８またはＨｉｋａｒｉ ｅｔ ａｌ Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ Ｖｏｌｕｍｅ １８，Ｉｓｓｕｅ ２２，１５ Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２００８，Ｐａｇｅｓ ６０００−６００３）に記載されているようなサブチリガーゼ（ｓｕｂｔｉｌｉｇａｓｅ）を使用して酵素によって行ってもよい。
あるいは、ペプチドは、ジスルフィド結合を介した更なるコンジュゲートによって延長しても改変してもよい。これは、第１および第２のペプチドを、細胞還元環境内で一度互いに解離させるという追加の利点を有する。この場合、分子スキャフォールド（例えばＴＡＴＡ）は、第１のペプチドの化学的合成中に添加してもよく、その結果、３つのシステイン基と反応し；次いで、更にシステインまたはチオールを第１のペプチドのＮまたはＣ末端に付加してもよく、その結果、このシステインまたはチオールは第２のペプチドの遊離システインまたはチオールのみと反応し、ジスルフィド結合二環式ペプチド−ペプチドコンジュゲートが形成される。
同様の技術が、２つの二環式および二重特異性大員環の合成／カップリングに等しく適用され、四重特異性分子を潜在的に生成する可能性がある。
更に、他の官能基またはエフェクター基の付加は、適切な化学を使用して、ＮもしくはＣ末端においてまたは側鎖を介してカップリングし、同じ様式で達成してもよい。１つの実施形態において、カップリングは、どちらの実体の活性もブロックしないような様式で行う。
＜医薬組成物＞
本発明の更なる態様によれば、ペプチドリガンドを含む医薬組成物または本明細書に記載の薬物コンジュゲートが、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤と組み合わせて提供される。
一般的に、本発明のペプチドリガンドは、薬理学的に適切な賦形剤または担体とともに精製された形態で利用されることになる。典型的には、これらの賦形剤または担体としては、生理食塩水および／または緩衝媒体を含む、水溶液またはアルコール／水溶液、エマルションまたは懸濁液がある。非経口ビヒクルとしては、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウムおよび乳酸加リンゲルがある。好適な生理学的に許容されるアジュバントは、懸濁液中にポリペプチド複合体を維持する必要がある場合、増粘剤、例えばカルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ゼラチンおよびアルギネートから選択されてもよい。
静脈内ビヒクルとしては、流体および栄養素補充物ならびに電解質補充物、例えばリンゲルデキストロースをベースにしたものがある。防腐剤および他の添加物、例えば抗菌剤、抗酸化剤、キレート化剤および不活性ガスも存在していてもよい（Ｍａｃｋ（１９８２）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ）。
本発明のペプチドリガンドは、個別に投与される組成物としてまたは他の薬剤と共に使用してもよい。これらとしては、抗体、抗体フラグメントおよびさまざまな免疫療法薬物、例えば、シクロスポリン、メトトレキサート、アドリアマイシンまたはシスプラチナム、および免疫毒素があり得る。医薬組成物としては、本発明のタンパク質リガンドと組み合わせたさまざまな細胞毒性剤または他の薬剤の「カクテル」、または更にこれらが投与前にプールされていようとなかろうと、異なる特異性を有する本発明による選択されたポリペプチド、例えば異なる標的リガンドを使用して選択されたポリペプチドの組合せがある。
本発明による医薬組成物の投与経路は、当業者に通常公知のもののうちのいずれかであってもよい。治療法に関しては、本発明のペプチドリガンドは、標準的な技術に従って任意の患者に投与してもよい。非経口、静脈内、筋肉内、腹腔内、経皮を含む任意の適切な様式によって、肺経路を介して、またはカテーテルを用いて直接注入によっても投与してもよい。好ましくは、本発明による医薬組成物は、吸入によって投与されることになる。投薬量および投与頻度は、年齢、性別および患者の状態、他の薬物の同時投与、禁忌および臨床医によって考慮されることになる他のパラメーターに依存することになる。
本発明のペプチドリガンドは、貯蔵し、使用前に好適な担体中で復元するために凍結乾燥してもよい。この技術は効果的であることが示されており、当技術分野で公知の凍結乾燥および復元技術を用いてもよい。凍結乾燥および復元は、活性損失の程度を変化させる場合があり、そのレベルは相殺に向かって上昇するように調整してもよいことは当業者であれば理解するであろう。
本発明のペプチドリガンドまたはそのカクテルを含む組成物は、予防的および／または治療的処置のために投与することができる。ある特定の治療用途において、選択された細胞の母集団の少なくとも部分的な阻害、抑制、モジュレート、致死、またはいくつかの他の測定可能なパラメーターを達成するための適正な量は、「治療有効用量」として定義される。この投薬量を達成するために必要な量は、疾患の重症度および患者自身の免疫系の全身的な状況に依存することになるが、一般的に体重１キログラム当たり選択されたペプチドリガンド０．００５〜５．０ｍｇの範囲であり、０．０５〜２．０ｍｇ／ｋｇ／用量の用量がより一般的に使用される。予防的用途に関しては、本発明のペプチドリガンドまたはそのカクテルを含む組成物も同じかまたはわずかに低い投薬量で投与してもよい。
本発明によるペプチドリガンドを含む組成物は、哺乳動物において選択する標的細胞母集団の変化、不活性化、致死または除去を助けるために予防的および治療的設定において利用してもよい。更に、本明細書に記載のペプチドリガンドは、細胞の不均質なコレクションから標的細胞母集団を致死させるか、枯渇させるか、それ以外の方法で効果的に除去するために体外でまたはインビトロで選択的に使用してもよい。哺乳動物からの血液は、選択されたペプチドリガンドと体外で合わせてもよく、それによって不所望の細胞は致死され、そうでなければ血液から除去されて、標準的な技術に従って哺乳動物に戻される。
＜１つまたは複数の他の治療剤との同時投与＞
処置されることになる特定の状態、または疾患に応じて、その状態を処置するために通常投与される追加の治療剤も、本発明の組成物に存在していてもよい。したがって、１つの実施形態において、医薬組成物は、１つまたは複数の治療剤を更に含む。特定の疾患または状態を処置するために通常投与される本明細書において使用する追加の治療剤は、「疾患、または状態、処置のために適切である」として公知である。
いくつかの実施形態において、本発明は、開示される疾患または状態を処置する方法であって、有効量の本明細書において開示する化合物またはその薬学的に許容される塩を、それを必要とする患者に投与し、有効量の１つまたは複数の追加の治療剤、例えば本明細書に記載のものを同時にまたは連続的に同時投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態において、上記方法は、１つの追加の治療剤を同時投与することを含む。いくつかの実施形態において、上記方法は、２つの追加の治療剤を同時投与することを含む。いくつかの実施形態において、開示される化合物および追加の治療剤または薬剤の組合せは、相乗的に作用する。
本発明の化合物はまた、公知の治療プロセス、例えば、ホルモンまたは放射線の投与と組み合わせて使用してもよい。ある特定の実施形態において、提供される化合物は、特に照射療法に対して不十分な感受性を示す腫瘍を処置するための放射線増感剤として使用する。
本発明の化合物は、単独でまたは１つもしくは複数の他の治療的化合物と組み合わせて投与しても、固定された組合せの形態をとる可能な組合せ療法であっても、または時差的であるかまたは互いに独立して与えられる本発明の化合物と１つまたは複数の他の治療的化合物との投与であっても、または固定された組合せと１つまたは複数の他の治療的化合物との組合せ投与であってもよい。本発明の化合物は、特に、化学療法、照射療法、免疫療法、光線療法、外科的介入、またはこれらの組合せと組み合わせた腫瘍療法のために追加でまたは更に投与してもよい。長期治療法は、上述のような他の処置戦略の文脈におけるアジュバント療法と同様に可能である。他の可能な処置は、腫瘍縮小後の患者の状態を維持するための治療法、または更に例えばリスクがある患者における化学的予防療法である。
１つまたは複数の他の治療剤は、複数の投薬レジメンの一部として本発明の化合物または組成物と個別に投与してもよい。あるいは、１つまたは複数の他の治療剤は、単一の組成物中で本発明の化合物とともに混合された単一の投薬形態の一部であってもよい。複数の投薬レジメンとして投与される場合、１つまたは複数の他の治療剤および本発明の化合物または組成物は、同時に、連続的に、または時間の範囲内で交互に、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４時間以内に交互に投与してもよい。いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他の治療剤および本発明の化合物または組成物は、２４時間超の範囲内で空けて複数の投薬レジメンとして投与される。
本明細書において使用する「組合せ」、「組み合わせた」という用語および関連する用語は、本発明による治療剤の同時のまたは連続的な投与を指す。例えば、本発明の化合物は、１つまたは複数の他の治療剤と同時にまたは連続的に、個別の単位投薬形態でまたは単一の単位投薬形態で一緒に投与してもよい。したがって、本発明は、本発明の化合物、１つまたは複数の他の治療剤、および薬学的に許容される担体、アジュバント、またはビヒクルを含む単一の単位投薬形態を提供する。
担体材料と組み合わせて単一の投薬形態を生成してもよい、本発明の化合物および１つまたは複数の他の治療剤（上述のような追加の治療剤を含む組成物）の量は、処置される宿主および特定の投与様式に依存して変化するであろう。好ましくは、本発明の組成物は、本発明の化合物の０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇの間の体重／日の投薬量を投与できるように製剤化されるべきである。
１つまたは複数の他の治療剤を含むこれらの組成物において、１つまたは複数の他の治療剤および本発明の化合物は相乗的に作用する場合がある。その結果、そのような組成物中の１つまたは複数の他の治療剤の量は、その治療剤のみを利用する単独療法において必要とされるものよりも少ない場合がある。そのような組成物において、０．０１〜１，０００μｇ／ｋｇ体重／日の１つまたは複数の他の治療剤の投薬量を投与してもよい。
本発明の組成物に存在する１つまたは複数の他の治療剤の量は、その治療剤を単独の活性薬剤として含む組成物で通常投与されることになる量以下であってもよい。好ましくは、ここで開示される組成物中の１つまたは複数の他の治療剤の量は、その薬剤を唯一の治療活性剤として含む組成物に通常存在する量の約５０％から１００％の範囲であることになる。いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他の治療剤は、その薬剤に関して通常投与される量の約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％の投薬量で投与される。本明細書において使用する「通常投与される」という句は、ＦＤＡの添付ラベル（ｌａｂｅｌ ｉｎｓｅｒｔ）通りの投薬に関して提供されるＦＤＡ承認された治療剤の量を意味する。
本発明の化合物またはその医薬組成物はまた、埋め込み型医療デバイス、例えばプロテーゼ、人工弁、血管移植片、ステントおよびカテーテルをコーティングするために組成物中に組み込んでもよい。例えば、血管ステントは、再狭窄（損傷後の血管壁の再狭窄）を克服するために使用されてきた。しかし、ステントまたは他の埋め込み型デバイスを使用した患者は、血餅形成または血小板活性化のリスクがある。これらの望ましくない効果は、キナーゼ阻害剤を含む薬学的に許容される組成物でデバイスをプレコーティングすることによって阻止または軽減してもよい。本発明の化合物で被覆された埋め込み型デバイスは、本発明の別の実施形態である。
＜例示的な他の治療剤＞
いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他の治療剤は、ポリＡＤＰリボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤である、いくつかの実施形態において、ＰＡＲＰ阻害剤は、オラパリブ（Ｌｙｎｐａｒｚａ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ルカパリブ（Ｒｕｂｒａｃａ（登録商標）、Ｃｌｏｖｉｓ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）；ニラパリブ（Ｚｅｊｕｌａ（登録商標）、Ｔｅｓａｒｏ）；ラゾパリブ（ＭＤＶ３８００／ＢＭＮ ６７３／ＬＴ００６７３、Ｍｅｄｉｖａｔｉｏｎ／Ｐｆｉｚｅｒ／Ｂｉｏｍａｒｉｎ）；ベリパリブ（ＡＢＴ−８８８、ＡｂｂＶｉｅ）；およびＢＧＢ−２９０（ＢｅｉＧｅｎｅ，Ｉｎｃ．）から選択される。
いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他の治療剤は、ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤である。いくつかの実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤は、ボリノスタット（Ｚｏｌｉｎｚａ（登録商標）、Ｍｅｒｃｋ）；ロミデプシン（Ｉｓｔｏｄａｘ（登録商標）、Ｃｅｌｇｅｎｅ）；パノビノスタット（Ｆａｒｙｄａｋ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ベリノスタット（Ｂｅｌｅｏｄａｑ（登録商標）、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；エンチノスタット（ＳＮＤＸ−２７５、Ｓｙｎｄａｘ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）（ＮＣＴ００８６６３３３）；およびチダミド（Ｅｐｉｄａｚａ（登録商標）、ＨＢＩ−８０００、Ｃｈｉｐｓｃｒｅｅｎ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈｉｎａ）から選択される。
いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他の治療剤は、ＣＤＫ阻害剤、例えばＣＤＫ４／ＣＤＫ６阻害剤である。いくつかの実施形態において、ＣＤＫ４／６阻害剤は、パルボシクリブ（Ｉｂｒａｎｃｅ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ）；リボシクリブ（Ｋｉｓｑａｌｉ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；アベマシクリブ（Ｌｙ２８３５２１９、Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）；およびトリラシクリブ（Ｇ１Ｔ２８、Ｇ１ ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ）から選択される。
いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他の治療剤は、ホスファチジルイノシトール３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤である。いくつかの実施形態において、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、イデラリシブ（Ｚｙｄｅｌｉｇ（登録商標）、Ｇｉｌｅａｄ）、アルペリシブ（ＢＹＬ７１９、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、タセリシブ（ＧＤＣ−００３２、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）；ピクチリシブ（ＧＤＣ−０９４１、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）；コパンリシブ（ＢＡＹ８０６９４６、Ｂａｙｅｒ）；デュベリシブ（以前はＩＰＩ−１４５、Ｉｎｆｉｎｉｔｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；ＰＱＲ３０９（Ｐｉｑｕｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）；およびＴＧＲ１２０２（以前のＲＰ５２３０、ＴＧ ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ）から選択される。
いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他の治療剤は白金系治療薬であり、プラチナとも称する。プラチナはＤＮＡの架橋をもたらし、その結果、これらは、主に急速に再産生される細胞、例えばがん細胞において、ＤＮＡ修復および／またはＤＮＡ合成を阻害する。いくつかの実施形態において、白金系治療薬は、シスプラチン（Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）；カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ；またＴｅｖａ；Ｐｆｉｚｅｒ）；オキサリプラチン（Ｅｌｏｘｉｔｉｎ（登録商標）Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）；ネダプラチン（Ａｑｕｐｌａ（登録商標）、塩野義製薬株式会社）、ピコプラチン（Ｐｏｎｉａｒｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；およびサトラプラチン（ＪＭ−２１６、Ａｇｅｎｎｉｘ）から選択される。
いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他の治療剤はタキサン化合物であり、これは、細胞分裂に必要な微小管の破壊をもたらす。いくつかの実施形態において、タキサン化合物は、パクリタキセル（タキソール（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）、Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ；Ｄｏｃｅｆｒｅｚ（登録商標）、Ｓｕｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）、アルブミン結合パクリタキセル（Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）；Ａｂｒａｘｉｓ／Ｃｅｌｇｅｎｅ）、カバジタキセル（Ｊｅｖｔａｎａ（登録商標）、Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）、およびＳＩＤ５３０（ＳＫ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｃｏ．）（ＮＣＴ００９３１００８）から選択される。
いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他の治療剤は、ヌクレオシド阻害剤、または正常なＤＮＡ合成、タンパク質合成、細胞複製に干渉するか、そうでなければ急速に増殖している細胞を阻害するであろう治療剤である。
いくつかの実施形態において、ヌクレオシド阻害剤は、トラベクテジン（グアニジンアルキル化剤、Ｙｏｎｄｅｌｉｓ（登録商標）、Ｊａｎｓｓｅｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）、メクロレタミン（アルキル化剤、Ｖａｌｃｈｌｏｒ（登録商標）、Ａｋｔｅｌｉｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標）、Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ；Ｖｉｎｃａｓａｒ（登録商標）、Ｔｅｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ；Ｍａｒｑｉｂｏ（登録商標）、Ｔａｌｏｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）；テモゾロミド（アルキル化剤の５−（３−メチルトリアゼン−１−イル）−イミダゾール−４−カルボキサミド（ＭＴＩＣ）に対するプロドラッグであるＴｅｍｏｄａｒ（登録商標）、Ｍｅｒｃｋ）；シタラビン注射（ａｒａ−Ｃ、代謝抑制性シチジン類似体、Ｐｆｉｚｅｒ）；ロムスチン（アルキル化剤、ＣｅｅＮＵ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ；Ｇｌｅｏｓｔｉｎｅ（登録商標）、ＮｅｘｔＳｏｕｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）；アザシチジン（シチジンのピリミジンヌクレオシド類似体、Ｖｉｄａｚａ（登録商標）、Ｃｅｌｇｅｎｅ）；オマセタキシンメペスクシネート（セファロタキシンエステル）（タンパク質合成阻害剤、Ｓｙｎｒｉｂｏ（登録商標）；Ｔｅｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；黒脚病菌（Ｅｒｗｉｎｉａ ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ）アスパラギナーゼ（アスパラギンを枯渇させるための酵素、Ｅｌｓｐａｒ（登録商標）、Ｌｕｎｄｂｅｃｋ；Ｅｒｗｉｎａｚｅ（登録商標）、ＥＵＳＡ Ｐｈａｒｍａ）；メシル酸エリブリン（微小管阻害剤、チューブリンベースの有糸分裂阻害薬、Ｈａｌａｖｅｎ（登録商標）、エーザイ株式会社）；カバジタキセル（微小管阻害剤、チューブリンベースの有糸分裂阻害薬、Ｊｅｖｔａｎａ（登録商標）、Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）；カパセトリン（チミジレートシンターゼ阻害剤、Ｘｅｌｏｄａ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）；ベンダムスチン（二官能性メクロレタミン誘導体、鎖間ＤＮＡ架橋を形成すると考えられる、Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標）、Ｃｅｐｈａｌｏｎ／Ｔｅｖａ）；イクサベピロン（エポチロンＢの半合成類似体、微小管阻害剤、チューブリンベースの有糸分裂阻害薬、Ｉｘｅｍｐｒａ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）；ネララビン（デオキシグアノシン類似体のプロドラッグ、ヌクレオシド代謝阻害剤、Ａｒｒａｎｏｎ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；クロファラビン（リボヌクレオチドレダクターゼ阻害剤のプロドラッグ、デオキシシチジンの競合的阻害剤、Ｃｌｏｌａｒ（登録商標）、Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）；ならびにトリフルリジンおよびチピラシル（チミジンベースのヌクレオシド類似体およびチミジンホスホリラーゼ阻害剤、Ｌｏｎｓｕｒｆ（登録商標）、Ｔａｉｈｏ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）から選択される。
いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他の治療剤は、キナーゼ阻害剤またはＶＥＧＦ−Ｒアンタゴニストである。本発明において有用な承認されたＶＥＧＦ阻害剤およびキナーゼ阻害剤としては、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体；ラムシルマブ（Ｃｙｒａｍｚａ（登録商標）、Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、抗ＶＥＧＦＲ−２抗体およびｚｉｖ−アフリベルセプト、ＶＥＧＦ Ｔｒａｐとしても知られる（Ｚａｌｔｒａｐ（登録商標）；Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ／Ｓａｎｏｆｉ）、ＶＥＧＦＲ阻害剤、例えばレゴラフェニブ（Ｓｔｉｖａｒｇａ（登録商標）、Ｂａｙｅｒ）；バンデタニブ（Ｃａｐｒｅｌｓａ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；アキシチニブ（Ｉｎｌｙｔａ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ）；およびレンバチニブ（Ｌｅｎｖｉｍａ（登録商標）、エーザイ株式会社）；Ｒａｆ阻害剤、例えばソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標）、ＢａｙｅｒＡＧおよびＯｎｙｘ）；ダブラフェニブ（Ｔａｆｉｎｌａｒ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；およびベムラフェニブ（Ｚｅｌｂｏｒａｆ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）；ＭＥＫ阻害剤、例えばコビメタニブ（Ｃｏｔｅｌｌｉｃ（登録商標）、Ｅｘｅｌｅｘｉｓ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）；トラメチニブ（Ｍｅｋｉｎｉｓｔ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；Ｂｃｒ−Ａｂｌチロシンキナーゼ阻害剤、例えばイマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ニロチニブ（Ｔａｓｉｇｎａ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ダサチニブ（Ｓｐｒｙｃｅｌ（登録商標）、ＢｒｉｓｔｏｌＭｙｅｒｓＳｑｕｉｂｂ）；ボスチニブ（Ｂｏｓｕｌｉｆ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ）；およびポナチニブ（Ｉｎｃｌｕｓｉｇ（登録商標）、Ａｒｉａｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；Ｈｅｒ２およびＥＧＦＲ阻害剤、例えばゲフィチニブ（Ｉｒｅｓｓａ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｅｖａ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ／Ａｓｔｅｌｌａｓ）；ラパチニブ（Ｔｙｋｅｒｂ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；アファチニブ（Ｇｉｌｏｔｒｉｆ（登録商標）、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）；オシメルチニブ（活性化ＥＧＦＲを標的化する、Ｔａｇｒｉｓｓｏ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；およびブリガチニブ（Ａｌｕｎｂｒｉｇ（登録商標）、Ａｒｉａｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；ｃ−ＭｅｔおよびＶＥＧＦＲ２阻害剤、例えばカボザンチニブ（Ｃｏｍｅｔｒｉｑ（登録商標）、Ｅｘｅｌｅｘｉｓ）；およびマルチキナーゼ阻害剤、例えばスニチニブ（Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ）；パゾパニブ（Ｖｏｔｒｉｅｎｔ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ＡＬＫ阻害剤、例えばクリゾチニブ（Ｘａｌｋｏｒｉ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ）；セリチニブ（Ｚｙｋａｄｉａ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；およびアレクチニブ（Ａｌｅｃｅｎｚａ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）；ブルトン型チロシンキナーゼ阻害剤、例えばイブルチニブ（Ｉｍｂｒｕｖｉｃａ（登録商標）、Ｐｈａｒｍａｃｙｃｌｉｃｓ／Ｊａｎｓｓｅｎ）；およびＦｌｔ３受容体阻害剤、例えばミドスタウリン（Ｒｙｄａｐｔ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）がある。
開発中であり、本発明において使用してもよい他のキナーゼ阻害剤およびＶＥＧＦ−Ｒアンタゴニストとしては、チボザニブ（Ａｖｅｏ Ｐｈａｒｍａｅｃｕｔｉｃａｌｓ）；バタラニブ（Ｂａｙｅｒ／Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ルシタニブ（Ｃｌｏｖｉｓ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）；ドビチニブ（ＴＫＩ２５８、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；チアウアニブ（Ｃｈｉａｕａｎｉｂ）（Ｃｈｉｐｓｃｒｅｅｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）；ＣＥＰ−１１９８１（Ｃｅｐｈａｌｏｎ）；リニファニブ（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）；ネラチニブ（ＨＫＩ−２７２、Ｐｕｍａ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）；ルキソリチニブ（Ｓｕｐｅｃｔ（登録商標）、ＩＹ５５１１、Ｉｌ−Ｙａｎｇ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｓ．Ｋｏｒｅａ）；ルキソリチニブ（Ｊａｋａｆｉ（登録商標）、Ｉｎｃｙｔｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）；ＰＴＣ２９９（ＰＴＣ療法）；ＣＰ−５４７，６３２（Ｐｆｉｚｅｒ）；フォレチニブ（Ｅｘｅｌｅｘｉｓ、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）；キザルチニブ（第一三共株式会社）およびモテサニブ（Ａｍｇｅｎ／武田薬品工業株式会社）がある。
いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他の治療剤はｍＴＯＲ阻害剤であり、これは細胞増殖、血管新生およびグルコース取り込みを阻害する。いくつかの実施形態において、ｍＴＯＲ阻害剤はエベロリムス（Ａｆｉｎｉｔｏｒ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；テムシロリムス（Ｔｏｒｉｓｅｌ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ）；およびシロリムス（Ｒａｐａｍｕｎｅ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ）である。
いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他の治療剤は、プロテアソーム阻害剤である。本発明において有用な承認されたプロテアソーム阻害剤としては、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標）、武田薬品工業株式会社）；カルフィルゾミブ（Ｋｙｐｒｏｌｉｓ（登録商標）、Ａｍｇｅｎ）；およびイキサゾミブ（Ｎｉｎｌａｒｏ（登録商標）、武田薬品工業株式会社）がある。
いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他の治療剤は、成長因子アンタゴニスト、例えば血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、または表皮成長因子（ＥＧＦ）またはその受容体（ＥＧＦＲ）のアンタゴニストである。本発明において使用してもよい承認されたＰＤＧＦアンタゴニストとしては、オララツマブ（Ｌａｒｔｒｕｖｏ（登録商標）；Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）がある。本発明において使用してもよい承認されたＥＧＦＲアンタゴニストとしては、セツキシマブ（エルビタックス（登録商標）、Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）；ネシツムマブ（Ｐｏｒｔｒａｚｚａ（登録商標）、Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、パニツムマブ（Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（登録商標）、Ａｍｇｅｎ）；およびオシメルチニブ（活性化ＥＧＦＲを標的とする、Ｔａｇｒｉｓｓｏ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）がある。
いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他の治療剤は、アロマターゼ阻害剤である。いくつかの実施形態において、アロマターゼ阻害剤は、エキセメスタン（Ａｒｏｍａｓｉｎ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ）；アナストロゾール（Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）およびレトロゾール（Ｆｅｍａｒａ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）から選択される。
いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他の治療剤は、ヘッジホッグ経路のアンタゴニストである。本発明において使用してもよい承認されたヘッジホッグ経路阻害剤としては、ソニデギブ（Ｏｄｏｍｚｏ（登録商標）、Ｓｕｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）；およびビスモデギブ（Ｅｒｉｖｅｄｇｅ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）があり、両方とも基底細胞がん腫を処置するためのものである。
いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他の治療剤は葉酸阻害剤である。本発明において有用な承認された葉酸阻害剤としては、ペメトレキセド（Ａｌｉｍｔａ（登録商標）、Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）がある。
いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他の治療剤はＣＣケモカイン受容体４（ＣＣＲ４）阻害剤である。本発明において有用であり得る研究中のＣＣＲ４阻害剤としては、モガムリズマブ（Ｐｏｔｅｌｉｇｅｏ（登録商標）、協和キリン株式会社、日本）がある。
いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他の治療剤は、イソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＤＨ）阻害剤である。本発明において使用してもよい研究中のＩＤＨ阻害剤としては、ＡＧ１２０（Ｃｅｌｇｅｎｅ；ＮＣＴ０２６７７９２２）；ＡＧ２２１（Ｃｅｌｇｅｎｅ、ＮＣＴ０２６７７９２２；ＮＣＴ０２５７７４０６）；ＢＡＹ１４３６０３２（Ｂａｙｅｒ、ＮＣＴ０２７４６０８１）；ＩＤＨ３０５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、ＮＣＴ０２９８７０１０）がある。
いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他の治療剤は、アルギナーゼ阻害剤である。本発明において使用してもよい研究中のアルギナーゼ阻害剤としては、ＡＥＢ１１０２（ペグ化組換えアルギナーゼ、Ａｅｇｌｅａ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、急性骨髄性白血病および骨髄異形成症候群（ＮＣＴ０２７３２１８４）ならびに固形腫瘍（ＮＣＴ０２５６１２３４）に関する第１相臨床試験において研究中である；およびＣＢ−１１５８（Ｃａｌｉｔｈｅｒａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）がある。
いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他の治療剤は、グルタミナーゼ阻害剤である。本発明において使用してもよい研究中のグルタミナーゼ阻害剤としては、ＣＢ−８３９（Ｃａｌｉｔｈｅｒａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）がある。
いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他の治療剤は、腫瘍抗原、すなわち、腫瘍細胞の細胞表面上に発現するタンパク質に結合する抗体である。本発明において使用してもよい、腫瘍抗原に結合する承認された抗体としては、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／ＢｉｏｇｅｎＩｄｅｃ）；オファツムマブ（抗ＣＤ２０、Ａｒｚｅｒｒａ（登録商標）、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）；オビヌツズマブ（抗ＣＤ２０、Ｇａｚｙｖａ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、イブリツモマブ（抗ＣＤ２０およびイットリウム−９０、Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標）、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；ダラツムマブ（抗ＣＤ３８、Ｄａｒｚａｌｅｘ（登録商標）、Ｊａｎｓｓｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、ジヌツキシマブ（抗糖脂質ＧＤ２、Ｕｎｉｔｕｘｉｎ（登録商標）、Ｕｎｉｔｅｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）；トラスツズマブ（抗ＨＥＲ２、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）；アド−トラスツズマブエムタンシン（抗ＨＥＲ２、エムタンシンに融合されている、Ｋａｄｃｙｌａ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）；およびペルツズマブ（抗ＨＥＲ２、Ｐｅｒｊｅｔａ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）；およびブレンツキシマブベドチン（抗ＣＤ３０−薬物コンジュゲート、Ａｄｃｅｔｒｉｓ（登録商標）、Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）がある。
いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他の治療剤はトポイソメラーゼ阻害剤である。本発明において有用な承認されたトポイソメラーゼ阻害剤としては、イリノテカン（Ｏｎｉｖｙｄｅ（登録商標）、Ｍｅｒｒｉｍａｃｋ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；トポテカン（Ｈｙｃａｍｔｉｎ（登録商標）、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）がある。本発明において使用してもよい研究中のトポイソメラーゼ阻害剤としては、ピクサントロン（Ｐｉｘｕｖｒｉ（登録商標）、ＣＴＩ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）がある。
いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他の治療剤は、抗アポトーシスタンパク質阻害剤、例えばＢＣＬ−２である。本発明において使用してもよい承認された抗アポトーシス薬としては、ベネトクラクス（Ｖｅｎｃｌｅｘｔａ（登録商標）、ＡｂｂＶｉｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）；およびブリナツモマブ（Ｂｌｉｎｃｙｔｏ（登録商標）、Ａｍｇｅｎ）がある。臨床試験が行われており、本発明において使用してもよいアポトーシスタンパク質を標的とする他の治療剤としては、ナビトクラックス（ＡＢＴ−２６３、Ａｂｂｏｔｔ）、ＢＣＬ−２阻害剤（ＮＣＴ０２０７９７４０）がある。
いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他の治療剤はアンドロゲン受容体阻害剤である。本発明において有用な承認されたアンドロゲン受容体阻害剤としては、エンザルタミド（Ｘｔａｎｄｉ（登録商標）、Ａｓｔｅｌｌａｓ／Ｍｅｄｉｖａｔｉｏｎ）があり；承認されたアンドロゲン合成阻害剤としては、アビラテロン（Ｚｙｔｉｇａ（登録商標）、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ／Ｏｒｔｈｏ）があり；承認されたゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）受容体アンタゴニストとしては、デガレリクス（Ｆｉｒｍａｇｏｎ（登録商標）、Ｆｅｒｒｉｎｇ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）がある。
いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他の治療剤は、選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）であり、これはエストロゲンの合成または活性に干渉する。本発明において有用な承認されたＳＥＲＭとしては、ラロキシフェン（Ｅｖｉｓｔａ（登録商標）、Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）がある。
いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他の治療剤は骨吸収阻害剤である。骨吸収を阻害する承認された治療薬は、デノスマブ（Ｘｇｅｖａ（登録商標）、Ａｍｇｅｎ）であり、これは、ＲＡＮＫＬに結合し、骨転移を伴う固形腫瘍における骨病状を媒介する破骨細胞、その前駆細胞、および破骨細胞様巨細胞の表面上に認められるその受容体ＲＡＮＫへの結合を阻止する抗体である。骨吸収を阻害する他の承認された治療薬としては、ビスホスホネート、例えばゾレドロン酸（Ｚｏｍｅｔａ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）がある。
いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他の治療剤は、２つの主要なｐ５３サプレッサータンパク質であるＭＤＭＸとＭＤＭ２との間の相互作用阻害剤である。本発明において使用してもよい研究中のｐ５３抑制タンパク質阻害剤としては、ステープルペプチドＭＤＭＸおよびＭＤＭ２に等しく結合し、これらとｐ５３との相互作用を破壊するＡＬＲＮ−６９２４（Ａｉｌｅｒｏｎ）がある。ＡＬＲＮ−６９２４は、ＡＭＬ、進行性骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）および末梢Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）の処置に関する臨床試験（ＮＣＴ０２９０９９７２；ＮＣＴ０２２６４６１３）において現在のところ評価されている。
いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他の治療剤は、形質転換成長因子−ベータ（ＴＧＦ−ベータまたはＴＧＦβ）阻害剤である。本発明において使用してもよい研究中のＴＧＦ−ベータタンパク質阻害剤としては、乳がん、肺がん、肝細胞がん、直腸結腸がん、膵臓がん、前立腺がんおよび腎臓がんを含むさまざまながんの処置に関して臨床で試験（ＮＣＴ０２９４７１６５）が行われている抗ＴＧＦ−ベータ抗体のＮＩＳ７９３（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）がある。いくつかの実施形態において、ＴＧＦ−ベータタンパク質阻害剤は、黒色腫（ＮＣＴ００９２３１６９）；腎細胞がん腫（ＮＣＴ００３５６４６０）；および非小細胞肺がん（ＮＣＴ０２５８１７８７）に関して研究中であるフレソリムマブ（ＧＣ１００８；Ｓａｎｏｆｉ−Ｇｅｎｚｙｍｅ）である。更に、いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、例えばＣｏｎｎｏｌｌｙ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｉｎｔ’ｌ Ｊ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ８：９６４−９７８に記載されているＴＧＦ−ベータトラップである。固形腫瘍の処置に関して現在のところ臨床試験中の１つの治療的化合物は、Ｍ７８２４（Ｍｅｒｃｋ ＫｇａＡ−以前はＭＳＢ００１１４５９Ｘ）であり、これは、二重特異性抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ化合物である（ＮＣＴ０２６９９５１５）および（ＮＣＴ０２５１７３９８）。Ｍ７８２４は、ＴＧＦβ「トラップ」として機能するヒトＴＧＦ−ベータ受容体ＩＩの細胞外ドメインに融合されたＰＤ−Ｌ１に対する完全ヒトＩｇＧ１抗体から構成される。
いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他の治療剤は、細胞毒性ＭＭＡＥに結合した抗糖タンパク質ＮＭＢ（ｇｐＮＭＢ）抗体（ＣＲ０１１）であるグレンバツムマブベドチン−モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）（Ｃｅｌｌｄｅｘ）から選択される。ｇｐＮＭＢは、転移するためのがん細胞の能力と関連する複数の腫瘍タイプによって過剰発現されたタンパク質である。
いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他の治療剤は抗増殖薬化合物である。そのような抗増殖薬化合物としては、これらに限定されるものではないが：アロマターゼ阻害剤；抗エストロゲン；トポイソメラーゼＩ阻害剤；トポイソメラーゼＩＩ阻害剤；微小管活性化合物；アルキル化化合物；ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤；細胞分化プロセスを誘導する化合物；シクロオキシゲナーゼ阻害剤；ＭＭＰ阻害剤；ｍＴＯＲ阻害剤；抗悪性腫瘍代謝拮抗薬；白金化合物；タンパク質または脂質キナーゼ活性を標的とする／減少させる化合物および更なる抗血管新生化合物；タンパク質または脂質ホスファターゼの活性を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物；ゴナドレリンアゴニスト；抗アンドロゲン；メチオニンアミノペプチダーゼ阻害剤；マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤；ビスホスホネート；生物学的応答修飾因子；抗増殖薬抗体；ヘパラナーゼ阻害剤；Ｒａｓ発がん性アイソフォーム阻害剤；テロメラーゼ阻害剤；プロテアソーム阻害剤；血液悪性腫瘍の処置において使用する化合物；Ｆｌｔ−３の活性を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物；Ｈｓｐ９０阻害剤、例えば１７−ＡＡＧ（１７−アリルアミノゲルダナマイシン、ＮＳＣ３３０５０７）、１７−ＤＭＡＧ（１７−ジメチルアミノエチルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン、ＮＳＣ７０７５４５）、ＩＰＩ−５０４、ＣＮＦ１０１０、ＣＮＦ２０２４、ＣＮＦ１０１０、Ｃｏｎｆｏｒｍａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ製；テモゾロミド（Ｔｅｍｏｄａｌ（登録商標））；キネシン紡錘体タンパク質阻害剤、例えばＳＢ７１５９９２またはＳＢ７４３９２１、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ製、またはペンタミジン／クロルプロマジン、ＣｏｍｂｉｎａｔｏＲｘ製；ＭＥＫ阻害剤、例えばＡＲＲＹ１４２８８６、Ａｒｒａｙ ＢｉｏＰｈａｒｍａ製、ＡＺｄ６２４４、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ製、ＰＤ１８１４６１、Ｐｆｉｚｅｒ製およびロイコボリンがある。
本明細書において使用する「アロマターゼ阻害剤」という用語は、エストロゲン産生を、例えば、基質アンドロステンジオンおよびテストステロンの、エストロンおよびエストラジオールへのそれぞれの変換を阻害する化合物に関する。その用語は、これらに限定されるものではないがステロイド、特にアタメスタン、エキセメスタンおよびフォルメスタン、特に、非ステロイド、特にアミノグルテチミド、ログレチミド、ピリドグルテチミド、トリロスタン、テストラクトン、ケトコナゾール、ボロゾール、ファドロゾール、アナストロゾールおよびレトロゾールを含む。エキセメスタンは、商標名Ａｒｏｍａｓｉｎ（商標）で市販されている。フォルメスタンは、商標名Ｌｅｎｔａｒｏｎ（商標）で市販されている。ファドロゾールは、商標名Ａｆｅｍａ（商標）で市販されている。アナストロゾールは、商標名Ａｒｉｍｉｄｅｘ（商標）で市販されている。レトロゾールは、商標名Ｆｅｍａｒａ（商標）またはＦｅｍａｒ（商標）で市販されている。アミノグルテチミドは、商標名Ｏｒｉｍｅｔｅｎ（商標）で市販されている。アロマターゼ阻害剤である化学療法剤を含む本発明の組合せは、ホルモン受容体陽性腫瘍、例えば乳房腫瘍の処置に特に有用である。
本明細書において使用する「抗エストロゲン」という用語は、エストロゲン受容体レベルでエストロゲンの効果に拮抗する化合物に関する。その用語は、これらに限定されるものではないが、タモキシフェン、フルベストラント、ラロキシフェンおよびラロキシフェン塩酸塩を含む。タモキシフェンは、商標名Ｎｏｌｖａｄｅｘ（商標）で市販されている。ラロキシフェン塩酸塩は、商標名Ｅｖｉｓｔａ（商標）で市販されている。フルベストラントは、商標名Ｆａｓｌｏｄｅｘ（商標）で投与してもよい。抗エストロゲンである化学療法剤を含む本発明の組合せは、エストロゲン受容体陽性腫瘍、例えば乳房腫瘍の処置に特に有用である。
本明細書において使用する「抗アンドロゲン」という用語は、アンドロゲンホルモンの生物学的効果を阻害することができる任意の物質に関し、これらに限定されるものではないが、ビカルタミド（Ｃａｓｏｄｅｘ（商標））を含む。本明細書において使用する「ゴナドレリンアゴニスト」という用語は、これらに限定されるものではないが、アバレリックス、ゴセレリンおよび酢酸ゴセレリンを含む。ゴセレリンは、商標名Ｚｏｌａｄｅｘ（商標）で投与してもよい。
本明細書において使用する「トポイソメラーゼＩ阻害剤」という用語は、これらに限定されるものではないが、トポテカン、ギマテカン、イリノテカン、カンプトテシンおよびその類似体、９−ニトロカンプトテシンおよび高分子カンプトセシンコンジュゲートＰＮＵ−１６６１４８を含む。イリノテカンを、例えば市販されている形態で、例えば商標名Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（商標）で投与してもよい。トポテカンは、商標名Ｈｙｃａｍｐｔｉｎ（商標）で市販されている。
本明細書において使用する「トポイソメラーゼＩＩ阻害剤」という用語は、これらに限定されるものではないが、アントラサイクリン、例えばドキソルビシン（リポソーム製剤、例えばＣａｅｌｙｘ（商標）を含む）、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシンおよびネモルビシン、アントラキノン ミトキサントロンおよびロソキサントロン、およびポドフィロトキシンエトポシドおよびテニポシドを含む。エトポシドは、商標名Ｅｔｏｐｏｐｈｏｓ（商標）で市販されている。テニポシドは、商標名ＶＭ２６−Ｂｒｉｓｔｏｌで市販されている。ドキソルビシンは、商標名Ａｃｒｉｂｌａｓｔｉｎ（商標）またはアドリアマイシン（商標）で市販されている。エピルビシンは、商標名Ｆａｒｍｏｒｕｂｉｃｉｎ（商標）で市販されている。イダルビシンは商標名Ｚａｖｅｄｏｓ（商標）で市販されている。ミトキサントロンは、商標名Ｎｏｖａｎｔｒｏｎで市販されている。
「微小管活性薬剤」という用語は、微小管安定化化合物、微小管不安定化化合物および微小管重合阻害剤に関連し、これらに限定されないが、タキサン、例えばパクリタキセルおよびドセタキセル；ビンカアルカロイド、例えばビンブラスチンまたは硫酸ビンブラスチン、ビンクリスチンまたは硫酸ビンクリスチン、およびビノレルビン；ディスコデルモライド；コルヒチンおよびエポチロンならびにこれらの誘導体を含む。パクリタキセルは、商標名タキソール（商標）で市販されている。ドセタキセルは、商標名Ｔａｘｏｔｅｒｅ（商標）で市販されている。硫酸ビンブラスチンは、商標名ＶｉｎｂｌａｓｔｉｎＲ．Ｐ（商標）で市販されている。硫酸ビンクリスチンは、商標名Ｆａｒｍｉｓｔｉｎ（商標）で市販されている。
本明細書において使用する「アルキル化剤」という用語は、これらに限定されるものではないが、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファランまたはニトロソウレア（ＢＣＮＵまたはＧｌｉａｄｅｌ）を含む。シクロホスファミドは、商標名Ｃｙｃｌｏｓｔｉｎ（商標）で市販されている。イホスファミドは、商標名Ｈｏｌｏｘａｎ（商標）で市販されている。
「ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤」または「ＨＤＡＣ阻害剤」という用語は、ヒストン脱アセチル化酵素を阻害し、抗増殖薬活性を有する化合物に関する。これは、これらに限定されるものではないが、スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）を含む。
「抗悪性腫瘍代謝拮抗物質」という用語は、これらに限定されるものではないが、５−フルオロウラシルまたは５−ＦＵ、カペシタビン、ゲムシタビン、ＤＮＡ脱メチル化化合物、例えば５−アザシチジンおよびデシタビン、メトトレキサートおよびエダトレキサート、および葉酸アンタゴニスト、例えばペメトレキセドを含む。カペシタビンは、商標名Ｘｅｌｏｄａ（商標）で市販されている。ゲムシタビンは、商標名Ｇｅｍｚａｒ（商標）で市販されている。
本明細書において使用する「白金化合物」という用語は、これらに限定されるものではないが、カルボプラチン、シスプラチン、シスプラチナムおよびオキサリプラチンを含む。カルボプラチンは、例えば、市販されている形態で、例えば商標名Ｃａｒｂｏｐｌａｔ（商標）で投与してもよい。オキサリプラチンは、例えば、市販されている形態で、例えば商標名Ｅｌｏｘａｔｉｎ（商標）で投与してもよい。
本明細書において使用する「タンパク質または脂質キナーゼ活性；またはタンパク質または脂質ホスファターゼ活性を標的とする／減少させる化合物；または更なる抗血管新生化合物」という用語は、これらに限定されるものではないが、タンパク質チロシンキナーゼ、ならびに／またはセリンおよび／もしくはトレオニンキナーゼ阻害剤、または脂質キナーゼ阻害剤、例えば：ａ）血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）の活性を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物、例えばＰＤＧＦＲの活性を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物、特にＰＤＧＦ受容体を阻害する化合物、例えばＮ−フェニル−２−ピリミジン−アミン誘導体、例えばイマチニブ、ＳＵ１０１、ＳＵ６６６８およびＧＦＢ−１１１；ｂ）線維芽細胞成長因子受容体（ＦＧＦＲ）の活性を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物；ｃ）インスリン様成長因子受容体Ｉ（ＩＧＦ−ＩＲ）の活性を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物、例えばＩＧＦ−ＩＲの活性を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物、特にＩＧＦ−Ｉ受容体のキナーゼ活性を阻害する化合物、またはＩＧＦ−Ｉ受容体またはその成長因子の細胞外ドメインを標的とする抗体；ｄ）Ｔｒｋ受容体チロシンキナーゼファミリーの活性を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物、またはエフリンＢ４阻害剤；ｅ）ＡｘＩ受容体チロシンキナーゼファミリーの活性を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物；ｆ）Ｒｅｔ受容体チロシンキナーゼの活性を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物；ｇ）キット／ＳＣＦＲ受容体チロシンキナーゼの活性を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物、例えばイマチニブ；ｈ）ＰＤＧＦＲファミリーの一部であるＣ−キット受容体チロシンキナーゼの活性を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物、例えばｃ−キット受容体チロシンキナーゼファミリーの活性を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物、特にｃ−キット受容体を阻害する化合物、例えばイマチニブ；ｉ）ｃ−Ａｂｌファミリー、その遺伝子融合産物（例えばＢＣＲ−Ａｂｌキナーゼ）および突然変異体のメンバーの活性を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物、例えばｃ−Ａｂｌファミリーメンバーおよびその遺伝子融合産物の活性を減少または阻害を標的とする化合物、例えばＮ−フェニル−２−ピリミジン−アミン誘導体、例えばイマチニブまたはニロチニブ（ＡＭＮ１０７）；ＰＤ１８０９７０；ＡＧ９５７；ＮＳＣ６８０４１０；ＰＤ１７３９５５、ＰａｒｋｅＤａｖｉｓ製；またはダサチニブ（ＢＭＳ−３５４８２５）；ｊ）スタウロスポリン誘導体、例えばミドスタウリンを含む、プロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）のメンバー、およびセリン／トレオニンキナーゼのＲａｆファミリー、ＭＥＫ、ＳＲＣ、ＪＡＫ／ｐａｎ−ＪＡＫ、ＦＡＫ、ＰＤＫ１、ＰＫＢ／Ａｋｔ、Ｒａｓ／ＭＡＰＫ、ＰＩ３Ｋ、ＳＹＫ、ＴＹＫ２、ＢＴＫのメンバーおよびＴＥＣファミリー、および／またはサイクリン依存性キナーゼファミリー（ＣＤＫ）のメンバーの活性を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物；更なる化合物の例としては、ＵＣＮ−０１、サフィンゴール、ＢＡＹ４３−９００６、ブリオスタチン１、ペリフォシン；イルモホシン；ＲＯ３１８２２０およびＲＯ３２０４３２；ＧＯ６９７６；ｌｓｉｓ３５２１；ＬＹ３３３５３１／ＬＹ３７９１９６；イソキノリン化合物；ＦＴＩｓ；ＰＤ１８４３５２またはＱＡＮ６９７（Ｐ１３Ｋ阻害剤）またはＡＴ７５１９（ＣＤＫ阻害剤）がある；ｋ）タンパク質チロシンキナーゼ阻害剤の活性を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物、例えばイマチニブメシラート（Ｇｌｅｅｖｅｃ（商標））またはチルホスチン、例えば、ＴｙｒｐｈｏｓｔｉｎＡ２３／ＲＧ−５０８１０；ＡＧ９９；ＴｙｒｐｈｏｓｔｉｎＡＧ２１３；ＴｙｒｐｈｏｓｔｉｎＡＧ１７４８；ＴｙｒｐｈｏｓｔｉｎＡＧ４９０；ＴｙｒｐｈｏｓｔｉｎＢ４４；ＴｙｒｐｈｏｓｔｉｎＢ４４（＋）エナンチオマー；ＴｙｒｐｈｏｓｔｉｎＡＧ５５５；ＡＧ４９４；ＴｙｒｐｈｏｓｔｉｎＡＧ５５６、ＡＧ９５７およびアダホスチン（４−｛［（２，５−ジヒドロキシフェニル）メチル］アミノ｝−安息香酸アダマンチルエステル；ＮＳＣ６８０４１０、アダホスチン）を含むタンパク質チロシンキナーゼ阻害剤の活性を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物；ｌ）受容体チロシンキナーゼの表皮成長因子ファミリー（ホモまたはヘテロダイマーとしてのＥＧＦＲ１ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４）およびこれらの突然変異体の活性を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物、例えば、表皮成長因子受容体ファミリーの活性を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物は、ＥＧＦ受容体チロシンキナーゼファミリー、例えばＥＧＦ受容体、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３およびＥｒｂＢ４のメンバーを阻害するかまたはＥＧＦまたはＥＧＦ関連リガンドに結合する特定の化合物、タンパク質または抗体、ＣＰ３５８７７４、ＺＤ１８３９、ＺＭ１０５１８０；トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（商標））、セツキシマブ（エルビタックス（商標））、Ｉｒｅｓｓａ、Ｔａｒｃｅｖａ、ＯＳＩ−７７４、Ｃｌ−１０３３、ＥＫＢ−５６９、ＧＷ−２０１６、Ｅ１．１、Ｅ２．４、Ｅ２．５、Ｅ６．２、Ｅ６．４、Ｅ２．１１、Ｅ６．３またはＥ７．６．３、および７Ｈ−ピロロ−［２，３−ｄ］ピリミジン誘導体である；ｍ）ｃ−Ｍｅｔ受容体の活性を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物、例えばｃ−Ｍｅｔの活性を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物、特にｃ−Ｍｅｔ受容体のキナーゼ活性を阻害する化合物、またはｃ−Ｍｅｔの細胞外ドメインを標的とするかまたはＨＧＦに結合する抗体、ｎ）これらに限定されないが、ＰＲＴ−０６２０７０、ＳＢ−１５７８、バリシチニブ、パクリチニブ、モメロチニブ、ＶＸ−５０９、ＡＺＤ−１４８０、ＴＧ−１０１３４８、トファシチニブ、およびルキソリチニブを含む、１つまたは複数のＪＡＫファミリーメンバー（ＪＡＫ１／ＪＡＫ２／ＪＡＫ３／ＴＹＫ２および／またはｐａｎ−ＪＡＫ）のキナーゼ活性を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物；ｏ）これらに限定されないが、ＡＴＵ−０２７、ＳＦ−１１２６、ＤＳ−７４２３、ＰＢＩ−０５２０４、ＧＳＫ−２１２６４５８、ＺＳＴＫ−４７４、ブパルリシブ、ピクトレリシブ、ＰＦ−４６９１５０２、ＢＹＬ−７１９、ダクトリシブ、ＸＬ−１４７、ＸＬ−７６５、およびイデラリシブを含む、ＰＩ３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）のキナーゼ活性を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物；およびｐ）これらに限定されないが、シクロパミン、ビスモデギブ、イトラコナゾール、エリスモデギブ、およびＩＰＩ−９２６（サリデギブ）を含む、ヘッジホッグタンパク質（Ｈｈ）またはスムーズンド受容体（ＳＭＯ）経路のシグナル伝達効果を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物を含む。
本明細書において使用する「ＰＩ３Ｋ阻害剤」という用語は、これらに限定されるものではないが、ＰＩ３Ｋα、ＰＩ３Ｋγ、ＰＩ３Ｋδ、ＰＩ３Ｋβ、ＰＩ３Ｋ−Ｃ２α、ＰＩ３Ｋ−Ｃ２β、ＰＩ３Ｋ−Ｃ２γ、Ｖｐｓ３４、ｐ１１０−α、ｐ１１０−β、ｐ１１０−γ、ｐ１１０−δ、ｐ８５−α、ｐ８５−β、ｐ５５−γ、ｐ１５０、ｐ１０１、およびｐ８７を含むがこれらに限定されないホスファチジルイノシトール−３−キナーゼファミリーにおける１つまたは複数の酵素に対する阻害性活性を有する化合物を含む。本発明において有用なＰＩ３Ｋ阻害剤の例としては、これらに限定されるものではないがＡＴＵ−０２７、ＳＦ−１１２６、ＤＳ−７４２３、ＰＢＩ−０５２０４、ＧＳＫ−２１２６４５８、ＺＳＴＫ−４７４、ブパルリシブ、ピクトレリシブ、ＰＦ−４６９１５０２、ＢＹＬ−７１９、ダクトリシブ、ＸＬ−１４７、ＸＬ−７６５、およびイデラリシブがある。
本明細書において使用する「Ｂｃｌ−２阻害剤」という用語は、これらに限定されるものではないが、ＡＢＴ−１９９、ＡＢＴ−７３１、ＡＢＴ−７３７、アポゴシポール、Ａｓｃｅｎｔａのｐａｎ−Ｂｃｌ−２阻害剤、クルクミン（およびこれらの類似体）、デュアルＢｃｌ−２／Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤（Ｉｎｆｉｎｉｔｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ／Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、Ｇｅｎａｓｅｎｓｅ（Ｇ３１３９）、ＨＡ１４−１（およびこれらの類似体；国際公開第号パンフレット２００８／１１８８０２を参照のこと）、ナビトクラックス（およびこれらの類似体、米国特許第７，３９０，７９９号）、ＮＨ−１（Ｓｈｅｎａｙｎｇ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）、ｏｂａｔｏｃｌａｘ（およびこれらの類似体、国際公開第２００４／１０６３２８号）、Ｓ−００１（Ｇｌｏｒｉａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＴＷシリーズ化合物（ミシガン大学）、およびベネトクラクスを含むがこれらに限定されない、Ｂ細胞リンパ腫２タンパク質（Ｂｃｌ−２）に対する阻害活性を有する化合物を含む。いくつかの実施形態において、Ｂｃｌ−２阻害剤は小分子治療薬である。いくつかの実施形態において、Ｂｃｌ−２阻害剤はペプチド模倣薬である。
本明細書において使用する「ＢＴＫ阻害剤」という用語は、これらに限定されるものではないが、ＡＶＬ−２９２およびイブルチニブを含むがこれらに限定されない、ブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）に対する阻害活性を有する化合物を含む。
本明細書において使用する「ＳＹＫ阻害剤」という用語は、これらに限定されるものではないが、ＰＲＴ−０６２０７０、Ｒ−３４３、Ｒ−３３３、Ｅｘｃｅｌｌａｉｒ、ＰＲＴ−０６２６０７、およびフォスタマチニブを含むがこれらに限定されない、脾臓チロシンキナーゼ（ＳＹＫ）に対する阻害活性を有する化合物を含む。
ＢＴＫ阻害化合物の更なる例、および本発明の化合物と組み合わせたそのような化合物によって処置可能な状態は、国際公開第２００８／０３９２１８号および国際公開第２０１１／０９０７６０号で見出すことができ、これら全体は参照により本明細書の一部をなすものとする。
ＳＹＫ阻害化合物の更なる例、および本発明の化合物と組み合わせたそのような化合物によって処置可能な状態は、国際公開第２００３／０６３７９４号、国際公開第２００５／００７６２３号、および国際公開第２００６／０７８８４６号で見出すことができ、これら全体は参照により本明細書の一部をなすものとする。
ＰＩ３Ｋ阻害化合物の更なる例、および本発明の化合物と組み合わせたそのような化合物によって処置可能な状態は、国際公開第２００４／０１９９７３号、国際公開第２００４／０８９９２５号、国際公開第２００７／０１６１７６号、米国特許第８，１３８，３４７号、国際公開第２００２／０８８１１２号、国際公開第２００７／０８４７８６号、国際公開第２００７／１２９１６１号、国際公開第２００６／１２２８０６号、国際公開第２００５／１１３５５４号、および国際公開第２００７／０４４７２９号で見出すことができ、これら全体は参照により本明細書の一部をなすものとする。
ＪＡＫ阻害化合物の更なる例、および本発明の化合物と組み合わせたそのような化合物によって処置可能な状態は、国際公開第２００９／１１４５１２号、国際公開第２００８／１０９９４３号、国際公開第２００７／０５３４５２号、国際公開第２０００／１４２２４６号、および国際公開第２００７／０７０５１４号で見出すことができ、これら全体は参照により本明細書の一部をなすものとする。
更なる抗血管新生の化合物としては、それらの活性に関して別の機序を有する、例えばタンパク質または脂質キナーゼ阻害と無関係な化合物、例えばサリドマイド（Ｔｈａｌｏｍｉｄ（商標））およびＴＮＰ−４７０がある。
本発明の化合物と組み合わせて使用するのに有用なプロテアソーム阻害剤の例としては、これらに限定されるものではないが、ボルテゾミブ、ジスルフィラム、エピガロカテキン−３−ガレート（ＥＧＣＧ）、サリノスポラミドＡ、カルフィルゾミブ、ＯＮＸ−０９１２、ＣＥＰ−１８７７０、およびＭＬＮ９７０８がある。
タンパク質または脂質ホスファターゼの活性を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物は、例えば、ホスファターゼ１、ホスファターゼ２Ａ、またはＣＤＣ２５の阻害剤、例えばオカダ酸またはその誘導体である。
細胞分化プロセスを誘導する化合物としては、これらに限定されるものではないが、レチノイン酸、α−γ−またはδ−トコフェロールまたはα−γ−またはδ−トコトリエノールがある。
本明細書において使用するシクロオキシゲナーゼ阻害剤という用語は、これらに限定されるものではないが、Ｃｏｘ−２阻害剤、５−アルキル置換２−アリールアミノフェニル酢酸および誘導体、例えばセレコキシブ（Ｃｅｌｅｂｒｅｘ（商標））、ロフェコキシブ（Ｖｉｏｘｘ（商標））、エトリコキシブ、バルデコキシブまたは５−アルキル−２−アリールアミノフェニル酢酸、例えば５−メチル−２−（２’−クロロ−６’−フルオロアニリノ）フェニル酢酸およびルミラコキシブを含む。
本明細書において使用する「ビスホスホネート」という用語は、これらに限定されるものではないが、エトリドン酸、クロドロン酸、チルドロン酸、パミドロン酸、アレンドロン酸、イバンドロン酸、リセドロン酸およびゾレドロン酸を含む。エトリドン酸は、商標名Ｄｉｄｒｏｎｅｌ（商標）で市販されている。クロドロン酸は、商標名Ｂｏｎｅｆｏｓ（商標）で市販されている。チルドロン酸は、商標名Ｓｋｅｌｉｄ（商標）で市販されている。パミドロン酸は、商標名Ａｒｅｄｉａ（商標）で市販されている。アレンドロン酸は、商標名Ｆｏｓａｍａｘ（商標）で市販されている。イバンドロン酸は、商標名Ｂｏｎｄｒａｎａｔ（商標）で市販されている。リセドロン酸は、商標名Ａｃｔｏｎｅｌ（商標）で市販されている。ゾレドロン酸は、商標名Ｚｏｍｅｔａ（商標）で市販されている。「ｍＴＯＲ阻害剤」という用語は、哺乳類におけるラパマイシンの標的（ｍＴＯＲ）を阻害し、抗増殖薬活性を有する化合物、例えば、シロリムス（Ｒａｐａｍｕｎｅ（登録商標））、エベロリムス（Ｃｅｒｔｉｃａｎ（商標））、ＣＣＩ−７７９およびＡＢＴ５７８に関する。
本明細書において使用する「ヘパラナーゼ阻害剤」という用語は、ヘパリン硫酸分解を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物を指す。その用語は、これらに限定されるものではないが、ＰＩ−８８を含む。本明細書において使用する「生物学的応答調節剤」という用語は、リンホカインまたはインターフェロンを指す。
本明細書において使用する「Ｒａｓ発がん性アイソフォーム阻害剤」、例えばＨ−Ｒａｓ、Ｋ−Ｒａｓ、またはＮ−Ｒａｓという用語は、Ｒａｓの発がん活性を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物；例えば、「フェネシルトランスフェラーゼ阻害剤」、例えば、Ｌ−７４４８３２、ＤＫ８Ｇ５５７またはＲ１１５７７７（Ｚａｒｎｅｓｔｒａ（商標））を指す。本明細書において使用する「テロメラーゼ阻害剤」という用語は、テロメラーゼ活性を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物を指す。テロメラーゼ活性を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物は、特に、テロメラーゼ受容体を阻害する化合物、例えばテロメスタチンである。
本明細書において使用する「メチオニンアミノペプチダーゼ阻害剤」という用語は、メチオニンアミノペプチダーゼの活性を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物を指す。メチオニンアミノペプチダーゼの活性を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物としては、これらに限定されるものではないが、ベンガミドまたはその誘導体がある。
本明細書において使用する「プロテアソーム阻害剤」という用語は、プロテアソームの活性を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物を指す。プロテアソーム活性を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物としては、これらに限定されるものではないが、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（商標））およびＭＬＮ３４１がある。
本明細書において使用する「マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤」または（「ＭＭＰ」阻害剤）という用語は、これらに限定されるものではないが、コラーゲンペプチド模倣および非ペプチド模倣阻害剤、テトラサイクリン誘導体、例えばヒドロキサメートペプチド模倣薬阻害剤のバチマスタットおよびその経口で生物学的に利用可能な類似体のマリマスタット（ＢＢ−２５１６）、プリノマスタット（ＡＧ３３４０）、メタスタット（ＮＳＣ６８３５５１）ＢＭＳ−２７９２５１、ＢＡＹ１２−９５６６、ＴＡＡ２１１、ＭＭＩ２７０ＢまたはＡＡＪ９９６を含む。
本明細書において使用する「血液悪性腫瘍の処置において使用する化合物」という用語は、これらに限定されるものではないが、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ受容体（Ｆｌｔ−３Ｒ）の活性を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物であるＦＭＳ様チロシンキナーゼ阻害剤；インターフェロン、１−β−Ｄ−アラビノフランシルシトシン（ａｒａ−ｃ）およびビスルファン；および未分化リンパ腫キナーゼを標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物であるＡＬＫ阻害剤を含む。
ＦＭＳ様チロシンキナーゼ受容体（Ｆｌｔ−３Ｒ）の活性を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物は、Ｆｌｔ−３Ｒ受容体キナーゼファミリーのメンバーを阻害する特定の化合物、タンパク質または抗体、例えばＰＫＣ４１２、ミドスタウリン、スタウロスポリン誘導体、ＳＵ１１２４８およびＭＬＮ５１８である。
本明細書において使用する「ＨＳＰ９０阻害剤」という用語は、これらに限定されるものではないが、ＨＳＰ９０の内因性ＡＴＰａｓｅ活性を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物；ユビキチンプロテオソーム経路を介してＨＳＰ９０クライアントタンパク質を分解し、標的とし、減少させまたは阻害する化合物を含む。ＨＳＰ９０の内因性ＡＴＰａｓｅ活性を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物は、ＨＳＰ９０のＡＴＰａｓｅ活性を阻害する特定の化合物、タンパク質または抗体、例えば１７−アリルアミノ，１７−デメトキシゲルダナマイシン（１７ＡＡＧ）、ゲルダナマイシン誘導体；他のゲルダナマイシン関連化合物；ラジシコールおよびＨＤＡＣ阻害剤である。
本明細書において使用する「抗増殖性抗体」という用語は、これらに限定されるものではないが、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（商標））、トラスツズマブ−ＤＭ１、エルビタックス、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（商標））、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、ＰＲＯ６４５５３（抗ＣＤ４０）および２Ｃ４抗体を含む。抗体は、無傷モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つの無傷抗体から形成された多重特性抗体、および所望の生物学的活性を示す限りは抗体フラグメントを意味する。
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の処置に関しては、本発明の化合物は、標準的な白血病療法と組み合わせて、特にＡＭＬの処置のために使用する治療法と組み合わせて使用してもよい。特に、本発明の化合物は、例えば、フェネシルトランスフェラーゼ阻害剤および／またはＡＭＬの処置に有用な他の薬物、例えば、ダウノルビシン、アドリアマイシン、Ａｒａ−Ｃ、ＶＰ−１６、テニポシド、ミトキサントロン、イダルビシン、カルボプラチンおよびＰＫＣ４１２と組み合わせて投与してもよい。
他の抗白血病化合物としては、例えば、デオキシシチジンの２’−アルファ−ヒドロキシリボース（アラビノシド）誘導体であるＡｒａ−Ｃ、ピリミジン類似体がある。ヒポキサンチンのプリン類似体、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）およびリン酸フルダラビンも含まれる。ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤の活性を標的とするか、減少させるかまたは阻害する化合物、例えば、酪酸ナトリウムおよびスベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）は、ヒストン脱アセチル化酵素として公知の酵素の活性を阻害する。特定のＨＤＡＣ阻害剤としては、ＭＳ２７５、ＳＡＨＡ、ＦＫ２２８（以前はＦＲ９０１２２８）、トリコスタチンＡ、およびこれらに限定されないが、Ｎ−ヒドロキシ−３−［４−［［［２−（２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル）−エチル］−アミノ］メチル］フェニル］−２Ｅ−２−プロペンアミド、またはその薬学的に許容される塩、およびＮ−ヒドロキシ−３−［４−［（２−ヒドロキシエチル）｛２−（１Ｈ−インドール−３−イル）エチル］−アミノ］メチル］フェニル］−２Ｅ−２−プロペンアミド、またはその薬学的に許容される塩、特に乳酸塩を含む米国特許第６，５５２，０６５号で開示される化合物がある。本明細書において使用するソマトスタチン受容体アンタゴニストは、ソマトスタチン受容体を標的とするか、処置するかまたは阻害する化合物、例えば、オクレチド、およびＳＯＭ２３０を指す。腫瘍細胞損傷アプローチは、電離放射線などのアプローチを指す。上記および下記で言及する「電離放射線」という用語は、電磁線（例えば、Ｘ線およびガンマ線）または粒子（例えば、アルファおよびベータ粒子）のいずれかとして生じる電離放射線を意味する。電離放射線は、これらに限定されないが、放射線療法において提供され、当技術分野において公知である。Ｈｅｌｌｍａｎ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｒａｄｉａｔｉｏｎ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｃａｎｃｅｒ，ｉｎ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｄｅｖｉｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｅｄｓ．，４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．１，ｐｐ．２４８−２７５（１９９３）を参照されたい。
ＥＤＧバインダーおよびリボヌクレオチドレダクターゼ阻害剤も含まれる。本明細書において使用する「ＥＤＧバインダー」という用語は、リンパ球再循環をモジュレートするある種の免疫抑制薬、例えばＦＴＹ７２０を指す。「リボヌクレオチドレダクターゼ阻害剤」という用語は、これらに限定されないが、フルダラビンおよび／またはシトシンアラビノシド（ａｒａ−Ｃ）、６−チオグアニン、５−フルオロウラシル、クラドリビン、６−メルカプトプリン（特にＡＬＬに対するａｒａ−Ｃと組み合わせて）および／またはペントスタチンを含む、ピリミジンまたはプリンヌクレオシド類似体を指す。リボヌクレオチドレダクターゼ阻害剤は、特定のヒドロキシ尿素または２−ヒドロキシ−１Ｈ−イソインドール−１，３−ジオン誘導体である。
特にＶＥＧＦの化合物、タンパク質またはモノクローナル抗体、例えば１−（４−クロロアニリノ）−４−（４−ピリジルメチル）フタラジンまたはその薬学的に許容される塩、１−（４−クロロアニリノ）−４−（４−ピリジルメチル）フタラジンスクシネート；アンギオスタチン（商標）；エンドスタチン（商標）；アントラニル酸アミド；ＺＤ４１９０；Ｚｄ６４７４；ＳＵ５４１６；ＳＵ６６６８；ベバシズマブ；または抗ＶＥＧＦ抗体または抗ＶＥＧＦ受容体抗体、例えばｒｈｕＭＡｂおよびＲＨＵＦａｂ、ＶＥＧＦアプタマー、例えば、Ｍａｃｕｇｏｎ；ＦＬＴ−４阻害剤、ＦＬＴ−３阻害剤、ＶＥＧＦＲ−２ＩｇＧＩ抗体、Ａｎｇｉｏｚｙｍｅ（ＲＰＩ４６１０）およびベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（商標））も含む。
本明細書において使用する光線力学的療法は、がんを処置するかまたは阻止するための光増感化合物として公知のある特定の化学物質を使用する治療法を指す。光線力学的療法の例としては、Ｖｉｓｕｄｙｎｅ（商標）およびポルフィマーナトリウムなどの化合物を用いた処置がある。
本明細書において使用する抗血管新生ステロイドは、血管新生をブロックするかまたは阻害する化合物、例えば、アネコルタブ、トリアムシノロン、ヒドロコルチゾン、１１−α−エピヒドロコチゾール、コルテキソロン、１７α−ヒドロキシプロゲステロン、コルチコステロン、デオキシコルチコステロン、テストステロン、エストロンおよびデキサメタゾンを指す。
コルチコステロイドを含む埋め込み体は、フルオシノロンおよびデキサメタゾンなどの化合物を指す。
他の化学療法化合物としては、これらに限定されるものではないが、植物アルカロイド、ホルモン化合物およびアンタゴニスト；生物学的応答修飾因子、好ましくはリンホカインまたはインターフェロン；アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド誘導体；ｓｈＲＮＡまたはｓｉＲＮＡ；または種々の化合物または他のもしくは未知の作用機序を有する化合物がある。
コード番号、一般名または商標名によって同定された活性化合物の構造は、標準的概論「Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ」の現行版からまたはデータベース、例えばＰａｔｅｎｔｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（例えばＩＭＳ Ｗｏｒｌｄ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）から得てもよい。
＜例示的な免疫腫瘍学的薬剤＞
いくつかの実施形態において、１つまたは複数の他の治療剤は免疫腫瘍学的薬剤である。本明細書において使用する「免疫腫瘍学的薬剤」という用語は、対象における免疫応答を強化する、刺激する、および／または上方制御するために効果的である薬剤を指す。いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤の本発明の化合物との投与は、がんの処置において相乗効果を有する。
免疫腫瘍学的薬剤は、例えば、小分子薬物、抗体、または生物学的分子もしくは小分子であってもよい。生物学的免疫腫瘍学的薬剤の例としては、これらに限定されるものではないが、がんワクチン、抗体、およびサイトカインがある。いくつかの実施形態において、抗体はモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体はヒト化またはヒト抗体である。
いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤は、両方とも抗原特異的Ｔ細胞応答の増幅をもたらす、（ｉ）刺激性（共刺激性を含む）受容体のアゴニストまたは（ｉｉ）Ｔ細胞に対する阻害性（共阻害性を含む）シグナルのアンタゴニストである。
ある特定の刺激性および阻害性分子は、免疫グロブリンスーパーファミリー（ＩｇＳＦ）のメンバーである。共刺激性または共阻害性受容体に結合する膜結合リガンドの１つの重要なファミリーは、Ｂ７ファミリーであり、これはＢ７−１、Ｂ７−２、Ｂ７−Ｈ１（ＰＤ−Ｌ１）、Ｂ７−ＤＣ（ＰＤ−Ｌ２）、Ｂ７−Ｈ２（ＩＣＯＳ−Ｌ）、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ５（ＶＩＳＴＡ）、およびＢ７−Ｈ６を含む。共刺激性または共阻害性受容体に結合する膜結合リガンドの別のファミリーは、同族ＴＮＦ受容体ファミリーメンバーに結合する分子のＴＮＦファミリーであり、それは、ＣＤ４０およびＣＤ４０Ｌ、ＯＸ−４０、ＯＸ−４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２−Ｌ、ＴＲＡＩＬＲ１／ＤＲ４、ＴＲＡＩＬＲ２／ＤＲ５、ＴＲＡＩＬＲ３、ＴＲＡＩＬＲ４、ＯＰＧ、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ、ＴＷＥＡＫＲ／Ｆｎ１４、ＴＷＥＡＫ、ＢＡＦＦＲ、ＥＤＡＲ、ＸＥＤＡＲ、ＴＡＣＩ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＬＴβＲ、ＬＩＧＨＴ、ＤｃＲ３、ＨＶＥＭ、ＶＥＧＩ／ＴＬ１Ａ、ＴＲＡＭＰ／ＤＲ３、ＥＤＡＲ、ＥＤＡ１、ＸＥＤＡＲ、ＥＤＡ２、ＴＮＦＲ１、リンホトキシンα／ＴＮＦβ、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦα、ＬＴβＲ、リンホトキシンα１β２、ＦＡＳ、ＦＡＳＬ、ＲＥＬＴ、ＤＲ６、ＴＲＯＹおよびＮＧＦＲを含む。
いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤は、免疫応答を刺激するための、Ｔ細胞活性化を阻害するサイトカイン（例えば、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−β、ＶＥＧＦ、および他の免疫抑制サイトカイン）またはＴ細胞活性化を刺激するサイトカインである。
いくつかの実施形態において、本発明の化合物および免疫腫瘍学的薬剤の組合せは、Ｔ細胞応答を刺激することができる。いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤は、（ｉ）Ｔ細胞活性化を阻害するタンパク質のアンタゴニスト（例えば、免疫チェックポイント阻害剤）、例えばＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、ガレクチン９、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＢＴＬＡ、ＣＤ６９、ガレクチン−１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１３、ＧＰＲ５６、ＶＩＳＴＡ、２Ｂ４、ＣＤ４８、ＧＡＲＰ、ＰＤ１Ｈ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＭ−１、およびＴＩＭ−４；または（ｉｉ）Ｔ細胞活性化を刺激するタンパク質のアゴニスト、例えばＢ７−１、Ｂ７−２、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ７０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＤＲ３およびＣＤ２８Ｈである。
いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤は、ＮＫ細胞上の阻害性受容体のアンタゴニストまたはＮＫ細胞上の活性化受容体のアゴニストである。いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤はＫＩＲのアンタゴニスト、例えばリリルマブである。
いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤は、ＲＧ７１５５を含む、これらに限定されないが、ＣＳＦ−１Ｒアンタゴニスト、例えばＣＳＦ−１Ｒアンタゴニスト抗体を含む、マクロファージまたはモノサイトを阻害するかまたは枯渇させる薬剤である（国際公開第２０１１／７００２４号、国際公開第２０１１／１０７５５３号、国際公開第２０１１／１３１４０７号、国際公開第２０１３／８７６９９号、国際公開第２０１３／１１９７１６号、国際公開第２０１３／１３２０４４号）またはＦＰＡ−００８（国際公開第２０１１／１４０２４９号；国際公開第２０１３／１６９２６４号；国際公開第２０１４／０３６３５７号）。
いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤は、陽性共刺激受容体をライゲーションするアゴニスト剤、阻害性受容体を介したシグナル伝達を弱力化するブロッキング薬剤、抗腫瘍Ｔ細胞の頻度を全身的に増加させるアンタゴニストおよび１つまたは複数の薬剤、腫瘍微小環境内の異なる免疫抑制経路を克服し（例えば、阻害性受容体の関与（例えば、ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１相互作用）をブロックし、Ｔｒｅｇを枯渇させるかまたは阻害し（例えば、抗ＣＤ２５モノクローナル抗体（例えば、ダクリズマブ）を使用してまたはｅｘ ｖｉｖｏでの抗ＣＤ２５ビーズ枯渇によって）、代謝酵素、例えばＩＤＯを阻害するか、またはＴ細胞エネルギーまたは枯渇を逆転させる／阻止する薬剤、ならびに自然免疫活性化および／または腫瘍部位における炎症を誘導する薬剤から選択される。
いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤はＣＴＬＡ−４アンタゴニストである。いくつかの実施形態において、ＣＴＬＡ−４アンタゴニストはアンタゴニストＣＴＬＡ−４抗体である。いくつかの実施形態において、アンタゴニストＣＴＬＡ−４抗体はＹＥＲＶＯＹ（イピリムマブ）またはトレメリムマブである。
いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤はＰＤ−１アンタゴニストである。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、注入によって投与される。いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤は、プログラム死−１（ＰＤ−１）受容体に特に結合してＰＤ−１活性を阻害する、抗体またはその抗原結合部分である。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストはアンタゴニストＰＤ−１抗体である。いくつかの実施形態において、アンタゴニストＰＤ−１抗体は、ＯＰＤＩＶＯ（ニボルマブ）、ＫＥＹＴＲＵＤＡ（ペンブロリズマブ）、またはＭＥＤＩ−０６８０である（ＡＭＰ−５１４；国際公開第２０１２／１４５４９３号）。いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤は、ピジリズマブ（ＣＴ−０１１）であってもよい。いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤は、ＡＭＰ−２２４と称される、ＩｇＧ１のＦｃ部分に融合されたＰＤ−Ｌ２（Ｂ７−ＤＣ）の細胞外ドメインから構成される組換えタンパク質である。
いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤はＰＤ−Ｌ１アンタゴニストである。いくつかの実施形態において、ＰＤ−Ｌ１アンタゴニストはアンタゴニストＰＤ−Ｌ１抗体である。いくつかの実施形態において、ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（ＲＧ７４４６；国際公開第２０１０／０７７６３４号）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、ＢＭＳ−９３６５５９（国際公開第２００７／００５８７４号）、およびＭＳＢ００１０７１８Ｃ（国際公開第２０１３／７９１７４号）である。
いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤はＬＡＧ−３アンタゴニストである。いくつかの実施形態において、ＬＡＧ−３アンタゴニストはアンタゴニストＬＡＧ−３抗体である。いくつかの実施形態において、ＬＡＧ３抗体はＢＭＳ−９８６０１６（国際公開第２０１０／１９５７０号、国際公開第２０１４／０８２１８号）、またはＩＭＰ−７３１またはＩＭＰ−３２１（国際公開第２００８／１３２６０１号、国際公開第２００９／４４２７３号）である。
いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤はＣＤ１３７（４−１ＢＢ）アゴニストである。いくつかの実施形態において、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）アゴニストはアゴニストＣＤ１３７抗体である。いくつかの実施形態において、ＣＤ１３７抗体はウレルマブまたはＰＦ−０５０８２５６６（国際公開第２０１２／３２４３３号）である。
いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤はＧＩＴＲアゴニストである。いくつかの実施形態において、ＧＩＴＲアゴニストはアゴニストＧＩＴＲ抗体である。いくつかの実施形態において、ＧＩＴＲ抗体は、ＢＭＳ−９８６１５３、ＢＭＳ−９８６１５６、ＴＲＸ−５１８（国際公開第２００６／１０５０２１号、国際公開第２００９／００９１１６号）、またはＭＫ−４１６６（国際公開第２０１１／０２８６８３号）である。
いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤は、インドールアミン（２，３）−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）アンタゴニストである。いくつかの実施形態において、ＩＤＯアンタゴニストは、エパカドスタット（ＩＮＣＢ０２４３６０、Ｉｎｃｙｔｅ）；インドキシモド（ＮＬＧ−８１８９、ＮｅｗＬｉｎｋ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）；カプマチニブ（ＩＮＣ２８０、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ＧＤＣ−０９１９（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）；ＰＦ−０６８４０００３（Ｐｆｉｚｅｒ）；ＢＭＳ：Ｆ００１２８７（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）；Ｐｈｙ９０６／ＫＤ１０８（Ｐｈｙｔｏｃｅｕｔｉｃａ）；キヌレニンを分解する酵素（Ｋｙｎａｓｅ、Ｋｙｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）；およびＮＬＧ−９１９（国際公開第２００９／７３６２０号、国際公開第２００９／１１５６６５２号、国際公開第２０１１／５６６５２号、国際公開第２０１２／１４２２３７号）から選択される。
いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤はＯＸ４０アゴニストである。いくつかの実施形態において、ＯＸ４０アゴニストはアゴニストＯＸ４０抗体である。いくつかの実施形態において、ＯＸ４０抗体はＭＥＤＩ−６３８３またはＭＥＤＩ−６４６９である。
いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤はＯＸ４０Ｌアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、ＯＸ４０ＬアンタゴニストはアンタゴニストＯＸ４０抗体である。いくつかの実施形態において、ＯＸ４０ＬアンタゴニストはＲＧ−７８８８（国際公開第２００６／０２９８７９号）である。
いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤はＣＤ４０アゴニストである。いくつかの実施形態において、ＣＤ４０アゴニストはアゴニストＣＤ４０抗体である。いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤はＣＤ４０アンタゴニストである。いくつかの実施形態において、ＣＤ４０アンタゴニストはアンタゴニストＣＤ４０抗体である。いくつかの実施形態において、ＣＤ４０抗体は、ルカツムマブまたはダセツズマブである。
いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤はＣＤ２７アゴニストである。いくつかの実施形態において、ＣＤ２７アゴニストはアゴニストＣＤ２７抗体である。いくつかの実施形態において、ＣＤ２７抗体はバリルマブである。
いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤はＭＧＡ２７１（Ｂ７Ｈ３に対する）（国際公開第２０１１／１０９４００号）である。
いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤は、アバゴボマブ、アデカツムマブ、アフツズマブ、アレムツズマブ、アナツムマブマフェナトックス、アポリズマブ、アテゾリマブ、アベルマブ、ブリナツモマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、カツマキソマブ、デュルバルマブ、エパカドスタット、エプラツズマブ、インドキシモド、イノツズマブオゾガマイシン、インテルムマブ、イピリムマブ、イサツキシマブ、ランブロリズマブ、ＭＥＤ１４７３６、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ニボルマブ、オビヌツズマブ、オカラツズマブ、オファツムマブ、オララツマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、リツキシマブ、チシリムマブ、サマリズマブ、またはトレメリムマブである。
いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤は免疫刺激薬剤である。例えば、ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１阻害性軸をブロックする抗体は、活性化腫瘍反応性Ｔ細胞を開放する場合があり、免疫療法高感受性と従来は考えられていないいくつかの腫瘍タイプを含む腫瘍組織数の増加において恒久的な抗腫瘍応答を誘導することが臨床試験で示されている。例えば、Ｏｋａｚａｋｉ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４，１２１２−１２１８；Ｚｏｕ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．８を参照されたい。抗ＰＤ−１抗体のニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ、ＯＮＯ−４５３８、ＭＤＸ１１０６およびＢＭＳ−９３６５５８としても知られる）は、過去の抗血管新生療法中または後に疾患の進行を経験した腎明細胞がん腫（ＲＣＣ）を呈する患者における全体的な生存率を改善する潜在力を示している。
いくつかの実施形態において、免疫モジュレート治療薬は、腫瘍細胞のアポトーシスを特に誘導する。本発明において使用してもよい承認された免疫モジュレート療法としては、ポマリドマイド（Ｐｏｍａｌｙｓｔ（登録商標）、Ｃｅｌｇｅｎｅ）；レナリドミド（Ｒｅｖｌｉｍｉｄ（登録商標）、Ｃｅｌｇｅｎｅ）；インゲノールメブテート（Ｐｉｃａｔｏ（登録商標）、ＬＥＯＰｈａｒｍａ）がある。
いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤はがんワクチンである。いくつかの実施形態において、がんワクチンは、無症候性または症状があまりない転移性の去勢抵抗性（ホルモン難治性）前立腺がんを処置するために承認されたシプロイセル−Ｔ（Ｐｒｏｖｅｎｇｅ（登録商標）、Ｄｅｎｄｒｅｏｎ／Ｖａｌｅａｎｔ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；および黒色腫における切除不能な皮膚、皮下および結節領域を処置するために承認された遺伝子組換え腫瘍崩壊性ウイルス治療薬であるタリモジェンラヘルパレプベク（Ｉｍｌｙｇｉｃ（登録商標）、ＢｉｏＶｅｘ／Ａｍｇｅｎ、以前はＴ−ＶＥＣとして公知である）から選択される。いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤は、腫瘍崩壊性ウイルス治療薬、例えば、肝細胞がん腫（ＮＣＴ０２５６２７５５）および黒色腫（ＮＣＴ００４２９３１２）のための、ＧＭ−ＣＳＦを発現するように遺伝子操作されたチミジンキナーゼ−（ＴＫ−）欠損ワクシニアウイルスであるペキサスティモジーンデバシレプベック（ｐｅｘａｓｔｉｍｏｇｅｎｅ ｄｅｖａｃｉｒｅｐｖｅｃ）（ＰｅｘａＶｅｃ／ＪＸ−５９４、ＳｉｌｌａＪｅｎ／以前のＪｅｎｎｅｒｅｘ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）；直腸結腸がん（ＮＣＴ０１６２２５４３）；前立腺がん（ＮＣＴ０１６１９８１３）；頭頚部扁平上皮細胞がん（ＮＣＴ０１１６６５４２）；膵臓腺がん（ＮＣＴ００９９８３２２）；および非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）（ＮＣＴ００８６１６２７）を含む多くのがんにおいてＲＡＳ活性化されていない細胞では複製されない呼吸器腸管腸オーファンウイルス（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｅｎｔｅｒｉｃ ｏｒｐｈａｎ ｖｉｒｕｓ）（レオウイルス）のバリアントであるペラレオレプ（ｐｅｌａｒｅｏｒｅｐ）（Ｒｅｏｌｙｓｉｎ（登録商標）、Ｏｎｃｏｌｙｔｉｃｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ）；卵巣がん（ＮＣＴ０２０２８１１７）；転移性のまたは進行した上皮腫瘍、例えば直腸結腸がん、膀胱がん、頭頚部扁平上皮細胞がん腫および唾液腺がん（ＮＣＴ０２６３６０３６）における、完全長ＣＤ８０およびＴ細胞受容体ＣＤ３タンパク質に対して特異的な抗体フラグメントを発現するように遺伝子操作されたアデノウイルスであるエナデノチュシレブ（ｅｎａｄｅｎｏｔｕｃｉｒｅｖ）（ＮＧ−３４８、ＰｓｉＯｘｕｓ、以前はＣｏｌｏＡｄ１として公知である）；黒色腫（ＮＣＴ０３００３６７６）；および腹膜疾患、直腸結腸がんまたは卵巣がん（ＮＣＴ０２９６３８３１）においてＧＭ−ＣＳＦを発現するように遺伝子操作されたアデノウイルスであるＯＮＣＯＳ−１０２（Ｔａｒｇｏｖａｘ／以前はＯｎｃｏｓ）；腹膜がん腫（ＮＣＴ０１４４３２６０）；卵管がん、卵巣がん（ＮＣＴ０２７５９５８８）においてそれぞれ研究された、ベータ−ガラクトシダーゼ（ベータ−ｇａｌ）／ベータ−グルコロニダーゼまたはベータ−ｇａｌ／ヒトヨウ化ナトリウム共輸送体（ｈＮＩＳ）を発現するように遺伝子操作されたワクシニアウイルスであるＧＬ−ＯＮＣ１（ＧＬＶ−１ｈ６８／ＧＬＶ−１ｈ１５３、Ｇｅｎｅｌｕｘ ＧｍｂＨ）；または膀胱がん（ＮＣＴ０２３６５８１８）においてＧＭ−ＣＳＦを発現するように遺伝子操作されたアデノウイルスであるＣＧ００７０（Ｃｏｌｄ Ｇｅｎｅｓｙｓ）から選択される。
いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤は、プロドラッグの５−フルオロシトシンを細胞毒性薬物の５−フルオロウラシルに変換することができるシトシンデアミナーゼを発現するように遺伝子操作されたＴＫおよびワクシニア成長因子欠損ワクシニアウイルスであるＪＸ−９２９（ＳｉｌｌａＪｅｎ／以前はＪｅｎｎｅｒｅｘ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）；処置が困難なＲＡＳ突然変異を標的とするペプチドベースの免疫療法薬剤であるＴＧ０１およびＴＧ０２（Ｔａｒｇｏｖａｘ／以前はＯｎｃｏｓ）；およびＡｄ５／３−Ｅ２Ｆ−ｄｅｌｔａ２４−ｈＴＮＦα−ＩＲＥＳ−ｈＩＬ２０で表示される遺伝子操作されたアデノウイルスであるＴＩＬＴ−１２３（ＴＩＬＴ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）；およびリンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）の糖タンパク質（ＧＰ）を発現するように遺伝子操作され、抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を高めるように設計された抗原を発現するように更に遺伝子操作される場合がある水胞性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）であるＶＳＶ−ＧＰ（ＶｉｒａＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）から選択される。
いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤は、キメラ抗原受容体またはＣＡＲを発現するように遺伝子操作されたＴ細胞である。そのようなキメラ抗原受容体を発現するように遺伝子操作されたＴ細胞はＣＡＲ−Ｔ細胞と称する。
天然リガンドに由来する場合がある結合ドメイン、Ｔリンパ球において活性化シグナルを生成することができるＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の官能性末端であるエンドドメイン、例えばＴＣＲからのＣＤ３−ゼータシグナル伝達ドメインに融合された細胞表面抗原に対して特異的なモノクローナル抗体に由来する単一鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）からなるＣＡＲが構築されている。抗原が結合すると、そのようなＣＡＲは、エフェクター細胞中の内因性シグナル伝達経路にリンクし、ＴＣＲ複合体によって開始されるものと同様の活性化シグナルを生成する。
例えば、いくつかの実施形態において、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、Ｔ細胞抗原受容体複合体ゼータ鎖（例えばＣＤ３ゼータ）の細胞内シグナル伝達ドメインに融合された抗原結合ドメイン（例えば、ＣＤ１９に結合するドメイン）を有する細胞外ドメインを含むように遺伝子操作されたＣＡＲ−Ｔ細胞を開示している米国特許第８，９０６，６８２号（その全体が参照により本明細書の一部をなすものとする）に記載のもののうちの１つである。Ｔ細胞において発現する場合、ＣＡＲは、抗原結合特異性に基づいて抗原認識を再命令することができる。ＣＤ１９の場合、抗原は、悪性Ｂ細胞上に発現する。広範囲の適応症においてＣＡＲ−Ｔを用いた２００を超える臨床試験が現在のところ進行中である［ｈｔｔｐｓ：／／ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ／ｃｔ２／ｒｅｓｕｌｔｓ？ｔｅｒｍ＝ｃｈｉｍｅｒｉｃ＋ａｎｔｉｇｅｎ＋ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ＆ｐｇ＝１］。
いくつかの実施形態において、免疫刺激性薬剤は、レチノイン酸受容体関連オーファン受容体γ（ＲＯＲγｔ）の活性化因子である。ＲＯＲγｔは、ＣＤ４＋（Ｔｈ１７）およびＣＤ８＋（Ｔｃ１７）Ｔ細胞のタイプ１７エフェクターサブセットの分化および維持、ならびにＩＬ−１７発現自然免疫細胞亜母集団、例えばＮＫ細胞の分化において重要な役割を有する転写因子である。いくつかの実施形態において、ＲＯＲγｔの活性化因子は、固形腫瘍の処置に関する臨床試験（ＮＣＴ０２９２９８６２）において現在のところ評価されているＬＹＣ−５５７１６（Ｌｙｃｅｒａ）である。
いくつかの実施形態において、免疫刺激性薬剤は、ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）のアゴニストまたは活性化因子である。ＴＬＲの好適な活性化因子としては、ＴＬＲ９のアゴニストまたは活性化因子、例えばＳＤ−１０１（Ｄｙｎａｖａｘ）がある。ＳＤ−１０１は、Ｂ細胞、濾胞および他のリンパ腫に関して研究中の（ＮＣＴ０２２５４７７２）免疫刺激性ＣｐＧである。本発明において使用してもよいＴＬＲ８のアゴニストまたは活性化因子としては、頭頚部の扁平上皮細胞がん（ＮＣＴ０２１２４８５０）および卵巣がん（ＮＣＴ０２４３１５５９）に関して研究中のモトリモド（ＶＴＸ−２３３７、ＶｅｎｔｉＲｘ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）がある。
本発明において使用してもよい他の免疫腫瘍学的薬剤としては、ウレルマブ（ＢＭＳ−６６３５１３、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、抗ＣＤ１３７モノクローナル抗体；バリルマブ（ＣＤＸ−１１２７、Ｃｅｌｌｄｅｘ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、抗ＣＤ２７モノクローナル抗体；ＢＭＳ−９８６１７８（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、抗ＯＸ４０モノクローナル抗体；リリルマブ（ＩＰＨ２１０２／ＢＭＳ−９８６０１５、Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、抗ＫＩＲモノクローナル抗体；モナリズマブ（ＩＰＨ２２０１、Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）抗ＮＫＧ２Ａモノクローナル抗体；アンデカリキシマブ（ＧＳ−５７４５、Ｇｉｌｅａｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、抗ＭＭＰ９抗体；およびＭＫ−４１６６（Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏ．）、抗ＧＩＴＲモノクローナル抗体がある。
いくつかの実施形態において、免疫刺激性薬剤は、エロツズマブ、ミファムルチド、ｔｏｌｌ様受容体のアゴニストまたは活性化因子、およびＲＯＲγｔの活性化因子から選択される。
いくつかの実施形態において、免疫刺激性治療薬は組換えヒトインターロイキン１５（ｒｈＩＬ−１５）である。ｒｈＩＬ−１５は、黒色腫および腎細胞がん腫（ＮＣＴ０１０２１０５９およびＮＣＴ０１３６９８８８）および白血病（ＮＣＴ０２６８９４５３）に関する治療法として臨床で試験が行われている。いくつかの実施形態において、免疫刺激性薬剤は組換えヒトインターロイキン１２（ｒｈＩＬ−１２）である。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１５ベースの免疫治療薬は、黒色腫、腎細胞がん腫、非小細胞肺がんおよび頭頚部扁平上皮細胞がん腫（ＮＣＴ０２４５２２６８）に関して第１相臨床試験が行われている溶解性ＩＬ−１５結合タンパク質ＩＬ−１５受容体アルファ鎖（ＩＬ１５：ｓＩＬ−１５ＲＡ）と複合体を形成した内因性ＩＬ−１５の融合物複合体の合成形態から構成されるヘテロ二量体ＩＬ−１５（ｈｅｔＩＬ−１５、Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ａｄｍｕｎｅ）である。いくつかの実施形態において、組換えヒトインターロイキン１２（ｒｈＩＬ−１２）はＮＭ−ＩＬ−１２（Ｎｅｕｍｅｄｉｃｉｎｅｓ、Ｉｎｃ．）、ＮＣＴ０２５４４７２４、またはＮＣＴ０２５４２１２４である。
いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤は、Ｊｅｒｒｙ Ｌ．Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．，“Ｂｉｇ ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ ｆｏｒ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｉｎ ｉｍｍｕｎｏ−ｏｎｃｏｌｏｇｙ，”Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ２０１５，Ｖｏｌ．１４，ｐａｇｅｓ ６０３−６２２に記載のものから選択され、その内容は、その全体が参照により本明細書の一部をなすものとする。いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤は、Ｊｅｒｒｙ Ｌ．Ａｄａｍｓらの表１に記載される例から選択される。いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤は、Ｊｅｒｒｙ Ｌ．Ａｄａｍｓらの表２に挙げられるものから選択される免疫腫瘍学的標的を標的とする小分子である。いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤は、Ｊｅｒｒｙ Ｌ．Ａｄａｍｓらの表２に挙げられるものから選択される小分子薬剤である。
いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤は、Ｐｅｔｅｒ Ｌ．Ｔｏｏｇｏｏｄ，“Ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｉｍｍｕｎｏ−ｏｎｃｏｌｏｇｙ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｇｅｎｔｓ，”Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ ２０１８，Ｖｏｌ．２８，ｐａｇｅｓ ３１９−３２９に記載される小分子免疫腫瘍学的薬剤から選択され、その内容は、その全体が参照により本明細書の一部をなすものとする。いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤は、Ｐｅｔｅｒ Ｌ．Ｔｏｏｇｏｏｄに記載されているような、経路を標的とする薬剤である。
いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤は、Ｓａｎｄｒａ Ｌ．Ｒｏｓｓ ｅｔ ａｌ．，“Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ ｃｅｌｌ ｅｎｇａｇｅｒ（ＢｉＴＥ（登録商標））ａｎｔｉｂｏｄｙ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｓ ｃａｎ ｍｅｄｉａｔｅ ｂｙｓｔａｎｄｅｒ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ ｋｉｌｌｉｎｇ”，ＰＬｏＳ ＯＮＥ １２（８）：ｅ０１８３３９０に記載のものから選択され、その内容はその全体が参照により本明細書の一部をなすものとする。いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤は、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ（登録商標））抗体構築物である。いくつかの実施形態において、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ（登録商標））抗体構築物は、ＣＤ１９／ＣＤ３二重特異性抗体構築物である。いくつかの実施形態において、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ（登録商標））抗体構築物は、ＥＧＦＲ／ＣＤ３二重特異性抗体構築物である。いくつかの実施形態において、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ（登録商標））抗体構築物は、Ｔ細胞を活性化させる。いくつかの実施形態において、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ（登録商標））抗体構築物は、サイトカインを放出し、バイスタンダー細胞上の細胞間接着分子１（ＩＣＡＭ−１）およびＦＡＳの上方調節を誘導するＴ細胞を活性化させる。いくつかの実施形態において、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ（登録商標））抗体構築物は、バイスタンダー細胞溶解を誘導するＴ細胞を活性化させる。いくつかの実施形態において、バイスタンダー細胞は固形腫瘍にある。いくつかの実施形態において、溶解したバイスタンダー細胞は、ＢｉＴＥ（登録商標）活性化Ｔ細胞に近接している。いくつかの実施形態において、バイスタンダー細胞は、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）陰性がん細胞を含む。いくつかの実施形態において、バイスタンダー細胞は、ＥＧＦＲ−陰性がん細胞を含む。いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤は、ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ１軸および／またはＣＴＬＡ４をブロックする抗体である。いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤は、ｅｘ ｖｉｖｏで拡大した腫瘍浸潤性Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤は、Ｔ細胞と腫瘍関連表面抗原（ＴＡＡ）とを直接結合させる二重特異性抗体構築物またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。
＜例示的な免疫チェックポイント阻害剤＞
いくつかの実施形態において、免疫腫瘍学的薬剤は、本明細書に記載の免疫チェックポイント阻害剤である。
本明細書において使用する「チェックポイント阻害剤」という用語は、がん細胞が患者の免疫系を回避することを阻止するのに有用な薬剤に関する。抗腫瘍免疫破壊の主要なメカニズムのうちの１つは、阻害性受容体の上方調節をもたらす抗原に慢性的に曝露されることに起因する「Ｔ細胞疲弊」として公知である。これらの阻害性受容体は、免疫チェックポイントとしての役割を果たして制御不良の免疫反応を阻止する。
ＰＤ−１および共阻害性受容体、例えば細胞毒性Ｔ−リンパ球抗原４（ＣＴＬＡ−４、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ；ＣＤ２７２）、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン−３（Ｔｉｍ−３）、リンパ球活性化遺伝子−３（Ｌａｇ−３；ＣＤ２２３）などは、チェックポイント調節因子と称されることが多い。これらは、細胞外情報が、細胞周期の進行および他の細胞内シグナル伝達プロセスを進めるべきかどうかを指示することを可能にする分子「ゲートキーパー」として作用する。
いくつかの実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１に対する抗体である。ＰＤ−１は、プログラム細胞死１受容体（ＰＤ−１）に結合して受容体が阻害性リガンドＰＤＬ−１に結合するのを阻止し、したがって宿主の抗腫瘍免疫応答を抑制する腫瘍の能力を無効にする。
１つの態様において、チェックポイント阻害剤は、生物学的治療薬または小分子である。別の態様において、チェックポイント阻害剤は、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、融合タンパク質またはこれらの組合せである。更なる態様において、チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４、ＰＤＬｌ、ＰＤＬ２、ＰＤｌ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０、ＣＧＥＮ−１５０４９、ＣＨＫ１、ＣＨＫ２、Ａ２ａＲ、Ｂ−７ファミリーリガンドまたはこれらの組合せから選択されるチェックポイントタンパク質を阻害する。追加の態様において、チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４、ＰＤＬｌ、ＰＤＬ２、ＰＤｌ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０、ＣＧＥＮ−１５０４９、ＣＨＫ１、ＣＨＫ２、Ａ２ａＲ、Ｂ−７ファミリーリガンドまたはこれらの組合せから選択されるチェックポイントタンパク質のリガンドと相互作用する。態様において、チェックポイント阻害剤は、免疫刺激性薬剤、Ｔ細胞成長因子、インターロイキン、抗体、ワクチンまたはこれらの組合せである。更なる態様において、インターロイキンは、ＩＬ−７またはＩＬ−１５である。特定の態様において、インターロイキンはグリコシル化ＩＬ−７である。追加の態様において、ワクチンは樹状細胞（ＤＣ）ワクチンである。
チェックポイント阻害剤としては、免疫系の阻害性経路を統計的に有意な様式でブロックするかまたは阻害する任意の薬剤がある。そのような阻害剤としては、小分子阻害剤があり得るか、または免疫チェックポイント受容体に結合し、ブロックするかもしくは阻害する抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または免疫チェックポイント受容体リガンドに結合し、ブロックするかもしくは阻害する抗体があり得る。ブロックするかまたは阻害するために標的となる場合がある例示のチェックポイント分子としては、これらに限定されるものではないが、ＣＴＬＡ−４、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＰＤ１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４（分子のＣＤ２ファミリーに属し、全てのＮＫ、γδ、およびメモリーＣＤ８＋（αβ）Ｔ細胞上に発現する）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５とも称する）、ＣＧＥＮ−１５０４９、ＣＨＫ１およびＣＨＫ２キナーゼ、Ａ２ａＲ、ならびにさまざまなＢ−７ファミリーリガンドがある。Ｂ７ファミリーリガンドとしては、これらに限定されるものではないが、Ｂ７−１、Ｂ７−２、Ｂ７−ＤＣ、Ｂ７−Ｈ１、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ５、Ｂ７−Ｈ６およびＢ７−Ｈ７がある。チェックポイント阻害剤としては、抗体、またはその抗原結合フラグメント、他の結合タンパク質、生物学的治療薬、またはＣＴＬＡ−４、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＰＤ１、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０およびＣＧＥＮ−１５０４９のうちの１つまたは複数に結合し、活性をブロックするかまたは阻害する小分子がある。例示の免疫チェックポイント阻害剤としては、トレメリムマブ（ＣＴＬＡ−４ブロッキング抗体）、抗ＯＸ４０、ＰＤ−Ｌｌモノクローナル抗体（抗Ｂ７−Ｈｌ；ＭＥＤＩ４７３６）、ＭＫ−３４７５（ＰＤ−１ブロッカー）、ニボルマブ（抗ＰＤｌ抗体）、ＣＴ−０１１（抗ＰＤｌ抗体）、ＢＹ５５モノクローナル抗体、ＡＭＰ２２４（抗ＰＤＬｌ抗体）、ＢＭＳ−９３６５５９（抗ＰＤＬｌ抗体）、ＭＰＬＤＬ３２８０Ａ（抗ＰＤＬｌ抗体）、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（抗ＰＤＬｌ抗体）、およびイピリムマブ（抗ＣＴＬＡ−４チェックポイント阻害剤）がある。チェックポイントタンパク質リガンドとしては、これらに限定されるものではないがＰＤ−Ｌｌ、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＣＤ２８、ＣＤ８６およびＴＩＭ−３がある。
ある特定の実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１アンタゴニスト、およびＣＴＬＡ−４アンタゴニストから選択される。いくつかの実施形態において、チェックポイント阻害剤は、ニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標））、イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標））、およびペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標））からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、チェックポイント阻害剤は、ニボルマブ（抗ＰＤ−１抗体、Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）；ペンブロリズマブ（抗ＰＤ−１抗体、Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）、Ｍｅｒｃｋ）；イピリムマブ（抗ＣＴＬＡ−４抗体、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）；デュルバルマブ（抗ＰＤ−Ｌ１抗体、Ｉｍｆｉｎｚｉ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；およびアテゾリズマブ（抗ＰＤ−Ｌ１抗体、Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）から選択される。
いくつかの実施形態において、チェックポイント阻害剤は、ランブロリズマブ（ＭＫ−３４７５）、ニボルマブ（ＢＭＳ−９３６５５８）、ピジリズマブ（ＣＴ−０１１）、ＡＭＰ−２２４、ＭＤＸ−１１０５、ＭＥＤＩ４７３６、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＢＭＳ−９３６５５９、イピリムマブ、リリルマブ、ＩＰＨ２１０１、ペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標））、およびトレメリムマブからなる群から選択される。
いくつかの実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、基底細胞がん腫（ＮＣＴ０３１３２６３６）；ＮＳＣＬＣ（ＮＣＴ０３０８８５４０）；皮膚扁平上皮細胞がん腫（ＮＣＴ０２７６０４９８）；リンパ腫（ＮＣＴ０２６５１６６２）；および黒色腫（ＮＣＴ０３００２３７６）を呈する患者において試験が行われた抗ＰＤ−１抗体のＲＥＧＮ２８１０（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）；びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫および多発性骨髄腫に関する臨床試験においてＰＤ−１に結合する抗体ＣＴ−０１１としても知られるピジリズマブ（ＣｕｒｅＴｅｃｈ）；非小細胞肺がん、メルケル細胞がん腫、中皮腫、固形腫瘍、腎臓がん、卵巣がん、膀胱がん、頭頚部がん、および胃がんに関する臨床試験における完全ヒトＩｇＧ１抗ＰＤ−Ｌ１抗体のアベルマブ（Ｂａｖｅｎｃｉｏ（登録商標）、ＭＳＢ００１０７１８Ｃとしても知られる、Ｐｆｉｚｅｒ／Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ）；または非小細胞肺がん、黒色腫、トリプルネガティブ乳がんおよび進行性または転移性の固形腫瘍に関する臨床試験においてＰＤ−１に結合する阻害性抗体のＰＤＲ００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）である。トレメリムマブ（ＣＰ−６７５，２０６；Ａｓｔｒａｚｅｎｅｃａ）は、中皮腫、直腸結腸がん、腎臓がん、乳がん、肺がんおよび非小細胞肺がん、膵管腺がん、膵臓がん、生殖細胞がん、頭頚部扁平上皮細胞がん、肝細胞がん腫、前立腺がん、子宮内膜がん、肝臓における転移性がん、肝臓がん、大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、卵巣がん、頸部がん、転移性未分化甲状腺がん、尿路上皮がん、卵管がん、多発性骨髄腫、膀胱がん、軟部組織肉腫、および黒色腫を含むいくつかの適応症に関する臨床試験において研究されている、ＣＴＬＡ−４に対する完全ヒトモノクローナル抗体である。ＡＧＥＮ−１８８４（Ａｇｅｎｕｓ）は、進行した固形腫瘍（ＮＣＴ０２６９４８２２）に関する第１相臨床試験において研究中の抗ＣＴＬＡ４抗体である。
いくつかの実施形態において、チェックポイント阻害剤は、タンパク質−３（ＴＩＭ−３）を含むＴ細胞免疫グロブリンムチンの阻害剤である。本発明において使用してもよいＴＩＭ−３阻害剤としては、ＴＳＲ−０２２、ＬＹ３３２１３６７およびＭＢＧ４５３がある。ＴＳＲ−０２２（Ｔｅｓａｒｏ）は、固形腫瘍（ＮＣＴ０２８１７６３３）において研究中の抗ＴＩＭ−３抗体である。ＬＹ３３２１３６７（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）は、固形腫瘍（ＮＣＴ０３０９９１０９）において研究中の抗ＴＩＭ−３抗体である。ＭＢＧ４５３（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）は、進行性悪性腫瘍（ＮＣＴ０２６０８２６８）において研究中の抗ＴＩＭ−３抗体である。
いくつかの実施形態において、チェックポイント阻害剤は、ＩｇおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体、またはある特定のＴ細胞およびＮＫ細胞上の免疫受容体であるＴＩＧＩＴの阻害剤である。本発明において使用してもよいＴＩＧＩＴ阻害剤としては、ＢＭＳ−９８６２０７（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、抗ＴＩＧＩＴモノクローナル抗体（ＮＣＴ０２９１３３１３）；ＯＭＰ−３１３Ｍ３２（Ｏｎｃｏｍｅｄ）；および抗ＴＩＧＩＴモノクローナル抗体（ＮＣＴ０３１１９４２８）がある。
いくつかの実施形態において、チェックポイント阻害剤は、リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ−３）阻害剤である。本発明において使用してもよいＬＡＧ−３阻害剤としては、ＢＭＳ−９８６０１６およびＲＥＧＮ３７６７およびＩＭＰ３２１がある。抗ＬＡＧ−３抗体であるＢＭＳ−９８６０１６（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）は、膠芽腫および神経膠肉腫（ＮＣＴ０２６５８９８１）において研究中である。ＲＥＧＮ３７６７（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）も抗ＬＡＧ−３抗体であり、悪性腫瘍（ＮＣＴ０３００５７８２）において研究中である。ＩＭＰ３２１（Ｉｍｍｕｔｅｐ Ｓ．Ａ．）は、黒色腫（ＮＣＴ０２６７６８６９）；腺がん（ＮＣＴ０２６１４８３３）；および転移性乳がん（ＮＣＴ００３４９９３４）において研究中のＬＡＧ−３−Ｉｇ融合タンパク質である。
本発明において使用してもよいチェックポイント阻害剤としてはＯＸ４０アゴニストがある。臨床試験において研究中のＯＸ４０アゴニストとしては、転移性腎臓がん（ＮＣＴ０３０９２８５６）および進行性がんおよび新生物（ＮＣＴ０２５５４８１２；ＮＣＴ０５０８２５６６）におけるアゴニスト抗ＯＸ４０抗体のＰＦ−０４５１８６００／ＰＦ−８６００（Ｐｆｉｚｅｒ）；第１相がん臨床試験（ＮＣＴ０２５２８３５７）におけるアゴニスト抗ＯＸ４０抗体のＧＳＫ３１７４９９８（Ｍｅｒｃｋ）；進行性固形腫瘍（ＮＣＴ０２３１８３９４およびＮＣＴ０２７０５４８２）におけるアゴニスト抗ＯＸ４０抗体のＭＥＤＩ０５６２（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；直腸結腸がん（ＮＣＴ０２５５９０２４）、乳がん（ＮＣＴ０１８６２９００）、頭頚部がん（ＮＣＴ０２２７４１５５）および転移性前立腺がん（ＮＣＴ０１３０３７０５）を呈する患者におけるアゴニスト抗ＯＸ４０抗体のＭＥＤＩ６４６９（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；および進行性がん（ＮＣＴ０２７３７４７５）におけるアゴニスト抗ＯＸ４０抗体のＢＭＳ−９８６１７８（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）がある。
本発明において使用してもよいチェックポイント阻害剤としては、ＣＤ１３７（４−１ＢＢとも称される）アゴニストがある。臨床試験において研究中のＣＤ１３７アゴニストとしては、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＮＣＴ０２９５１１５６）および進行性がんおよび新生物（ＮＣＴ０２５５４８１２およびＮＣＴ０５０８２５６６）におけるアゴニスト抗ＣＤ１３７抗体のウトミルマブ（ＰＦ−０５０８２５６６、Ｐｆｉｚｅｒ）；黒色腫および皮膚がん（ＮＣＴ０２６５２４５５）および膠芽腫および神経膠肉腫（ＮＣＴ０２６５８９８１）におけるアゴニスト抗ＣＤ１３７抗体のウレルマブ（ＢＭＳ−６６３５１３、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）がある。
本発明において使用してもよいチェックポイント阻害剤としては、ＣＤ２７アゴニストがある。臨床試験において研究中のＣＤ２７アゴニストとしては、扁平上皮細胞頭頚部がん、卵巣がん腫、直腸結腸がん、腎細胞がん、および膠芽腫（ＮＣＴ０２３３５９１８）；リンパ腫（ＮＣＴ０１４６０１３４）；および神経膠腫および星状細胞腫（ＮＣＴ０２９２４０３８）におけるアゴニスト抗ＣＤ２７抗体のバリルマブ（ＣＤＸ−１１２７、Ｃｅｌｌｄｅｘ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）がある。
本発明において使用してもよいチェックポイント阻害剤としては、グルココルチコイド誘発性腫瘍壊死因子受容体（ＧＩＴＲ）アゴニストがある。臨床試験において研究中のＧＩＴＲアゴニストとしては、悪性黒色腫および他の悪性固形腫瘍（ＮＣＴ０１２３９１３４およびＮＣＴ０２６２８５７４）におけるアゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体のＴＲＸ５１８（Ｌｅａｐ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）；固形腫瘍およびリンパ腫（ＮＣＴ０２７４０２７０）におけるアゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体のＧＷＮ３２３（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；進行性がん（ＮＣＴ０２６９７５９１およびＮＣＴ０３１２６１１０）におけるアゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体のＩＮＣＡＧＮ０１８７６（Ｉｎｃｙｔｅ／Ａｇｅｎｕｓ）；固形腫瘍（ＮＣＴ０２１３２７５４）におけるアゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体のＭＫ−４１６６（Ｍｅｒｃｋ）、および進行性固形腫瘍（ＮＣＴ０２５８３１６５）における、ヒトＩｇＧ１Ｆｃドメインを有するアゴニスト六量体ＧＩＴＲ−リガンド分子のＭＥＤＩ１８７３（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）がある。
本発明において使用してもよいチェックポイント阻害剤としては、誘発性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ、ＣＤ２７８としても知られる）アゴニストがある。臨床試験において研究中のＩＣＯＳアゴニストとしては、リンパ腫（ＮＣＴ０２５２０７９１）におけるアゴニスト抗ＩＣＯＳ抗体のＭＥＤＩ−５７０（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）；第１相（ＮＣＴ０２７２３９５５）におけるアゴニスト抗ＩＣＯＳ抗体のＧＳＫ３３５９６０９（Ｍｅｒｃｋ）；および第１相（ＮＣＴ０２９０４２２６）におけるアゴニスト抗ＩＣＯＳ抗体のＪＴＸ−２０１１（Ｊｏｕｎｃｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）がある。
本発明において使用してもよいチェックポイント阻害剤としては、キラーＩｇＧ様受容体（ＫＩＲ）阻害剤がある。臨床試験において研究中のＫＩＲ阻害剤としては、白血病（ＮＣＴ０１６８７３８７、ＮＣＴ０２３９９９１７、ＮＣＴ０２４８１２９７、ＮＣＴ０２５９９６４９）、多発性骨髄腫（ＮＣＴ０２２５２２６３）、およびリンパ腫（ＮＣＴ０１５９２３７０）における抗ＫＩＲ抗体のリリルマブ（ＩＰＨ２１０２／ＢＭＳ−９８６０１５、Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ／Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）；骨髄腫（ＮＣＴ０１２２２２８６およびＮＣＴ０１２１７２０３）におけるＩＰＨ２１０１（１−７Ｆ９、Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ）；およびリンパ腫（ＮＣＴ０２５９３０４５）における、長い細胞質尾部の３つのドメインに結合する抗体である抗ＫＩＲ（ＫＩＲ３ＤＬ２）のＩＰＨ４１０２（Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ）がある。
本発明において使用してもよいチェックポイント阻害剤としては、ＣＤ４７とシグナル調節性タンパク質アルファ（ＳＩＲＰａ）との間の相互作用の阻害剤であるＣＤ４７がある。臨床試験において研究中のＣＤ４７／ＳＩＲＰａ阻害剤としては、第１相（ＮＣＴ０３０１３２１８）における、ＣＤ４７に結合し、ＣＤ４７／ＳＩＲＰａ媒介シグナル伝達（ＳＩＲＰａ）を阻止するアンタゴニストバリアントのＡＬＸ−１４８（Ａｌｅｘｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）；第１相（ＮＣＴ０２８９０３６８およびＮＣＴ０２６６３５１８）における臨床試験において、ＳＩＲＰａのＮ末端ＣＤ４７結合ドメインとヒトＩｇＧ１のＦｃドメインとの結合によって生成され、結合ヒトＣＤ４７によって作用し、マクロファージにその「食べない」シグナルを送達するのを阻止する溶解性組換え融合タンパク質のＴＴＩ−６２１（ＳＩＲＰａ−Ｆｃ、Ｔｒｉｌｌｉｕｍ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）；白血病（ＮＣＴ０２６４１００２）における抗ＣＤ４７抗体のＣＣ−９０００２（Ｃｅｌｇｅｎｅ）；および直腸結腸新生物および固形腫瘍（ＮＣＴ０２９５３７８２）、急性骨髄性白血病（ＮＣＴ０２６７８３３８）およびリンパ腫（ＮＣＴ０２９５３５０９）におけるＨｕ５Ｆ９−Ｇ４（Ｆｏｒｔｙ Ｓｅｖｅｎ、Ｉｎｃ．）がある。
本発明において使用してもよいチェックポイント阻害剤としては、ＣＤ７３阻害剤がある。臨床試験において研究中のＣＤ７３阻害剤としては、固形腫瘍（ＮＣＴ０２５０３７７４）における抗ＣＤ７３抗体のＭＥＤＩ９４４７（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）；および固形腫瘍（ＮＣＴ０２７５４１４１）における抗ＣＤ７３抗体のＢＭＳ−９８６１７９（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）がある。
本発明において使用してもよいチェックポイント阻害剤としては、インターフェロン遺伝子タンパク質の刺激因子（ＳＴＩＮＧ、膜貫通タンパク質１７３、またはＴＭＥＭ１７３としても知られる）のアゴニストがある。臨床試験において研究中のＳＴＩＮＧアゴニストとしては、リンパ腫（ＮＣＴ０３０１０１７６）におけるアゴニスト合成環式ジヌクレオチドのＭＫ−１４５４（Ｍｅｒｃｋ）；および第１相（ＮＣＴ０２６７５４３９およびＮＣＴ０３１７２９３６）におけるアゴニスト合成環式ジヌクレオチドのＡＤＵ−Ｓ１００（ＭＩＷ８１５、Ａｄｕｒｏ Ｂｉｏｔｅｃｈ／Ｎｏｖａｒｔｉｓ）がある。
本発明において使用してもよいチェックポイント阻害剤としては、ＣＳＦ１Ｒ阻害剤がある。臨床試験において研究中のＣＳＦ１Ｒ阻害剤としては、直腸結腸がん、膵臓がん、転移性および進行性がん（ＮＣＴ０２７７７７１０）および黒色腫、非小細胞肺がん、扁平上皮細胞頭頚部がん、胃腸間質腫瘍（ＧＩＳＴ）および卵巣がん（ＮＣＴ０２４５２４２４）におけるＣＳＦ１Ｒ小分子阻害剤のペキシダルチニブ（ＰＬＸ３３９７、Ｐｌｅｘｘｉｋｏｎ）；および膵臓がん（ＮＣＴ０３１５３４１０）、黒色腫（ＮＣＴ０３１０１２５４）、および固形腫瘍（ＮＣＴ０２７１８９１１）における抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体のＩＭＣ−ＣＳ４（ＬＹ３０２２８５５、Ｌｉｌｌｙ）；および進行性固形腫瘍（ＮＣＴ０２８２９７２３）における、経口で利用可能なＣＳＦ１Ｒ阻害剤のＢＬＺ９４５（４−［２（（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシルアミノ）−ベンゾチアゾール−６−イルオキシル］−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミド、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）がある。
本発明において使用してもよいチェックポイント阻害剤としては、ＮＫＧ２Ａ受容体阻害剤がある。臨床試験において研究中のＮＫＧ２Ａ受容体阻害剤としては、頭頚部新生物（ＮＣＴ０２６４３５５０）および慢性リンパ性白血病（ＮＣＴ０２５５７５１６）における抗ＮＫＧ２Ａ抗体のモナリズマブ（ＩＰＨ２２０１、Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ）がある。
いくつかの実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、イピリムマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、またはピジリズマブから選択される。
＜治療的使用＞
本発明の二環式ペプチドは、ネクチン−４結合剤として特定の有用性を有する。
ネクチン−４はタンパク質のネクチンファミリーに属する表面分子であり、４つのメンバーを含む。ネクチンは、さまざまな生物学的プロセス、例えば、発生および成人期中の上皮、内皮、免疫および神経細胞に関する極性、増殖、分化および遊走において重要な役割を果たす細胞接着分子である。これらはヒトにおけるいくつかの病理学的プロセスに関与する。これらは、ポリオウイルス、単純ヘルペスウイルスおよび麻疹ウイルスに対する主な受容体である。ネクチン−１（ＰＶＲＬ１）またはネクチン−４（ＰＶＲＬ４）をコードする遺伝子における突然変異は、他の異常と関連する外胚葉異形成症候群をもたらす。ネクチン−４は胎児の発生中に発現する。成体組織では、その発現はファミリーの他のメンバーのものよりも制限される。ネクチン−４は、乳房、卵巣および肺がん腫のそれぞれ、５０％、４９％および８６％に、予後不良の腫瘍の大部分における腫瘍関連抗原である。その発現は、対応する正常組織では検出されない。乳房腫瘍では、ネクチン−４は、トリプルネガティブおよびＥＲＢＢ２＋がん腫において主に発現する。これらのがんを呈する患者の血清では、ネクチン−４の可溶形態の検出が予後不良と関連する。血清ネクチン−４のレベルは転移性進行中に増加し、処置後に減少する。これらの結果は、ネクチン−４が、がんの処置のための確実な標的であり得ることを示唆する。したがって、いくつかの抗ネクチン−４抗体が先行技術に記載されている。特に、エンフォルツマブベドチン（ＡＳＧ−２２ＭＥ）は、ネクチン−４を標的とする抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）であり、現在のところ固形腫瘍に罹患した患者を処置するために臨床的に研究されている。
本発明の方法に従って選択されたポリペプチドリガンドは、インビボでの治療的および予防的用途、インビトロおよびインビボでの診断用途、インビトロでのアッセイおよび試薬用途などにおいて用いてもよい。選択されたレベルの特異性を有するリガンドは、交差反応性が望ましい非ヒト動物における試験に関与する用途において、またはホモログもしくはパラログを伴う交差反応性が慎重に制御されることを必要とする診断用途において有用である。いくつかの用途、例えばワクチン用途において、所定の範囲の抗原に対する免疫応答を誘発するための能力を利用して、特異的な疾患および病原体に対するワクチンを調整することができる。
少なくとも９０から９５％の均一性である実質的に純粋なペプチドリガンドが、哺乳動物への投与に好ましく、特に哺乳動物がヒトである場合、９８から９９％以上の均一性が医薬用途に最も好ましい。必要に応じて部分的にまたは均一に精製されると、選択されたポリペプチドは、診断的にもしくは治療的に（体外を含む）またはアッセイ手順、免疫蛍光染色などの開発および実行に使用してもよい（Ｌｅｆｋｏｖｉｔｅ ａｎｄ Ｐｅｒｎｉｓ，（１９７９および１９８１）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，Ｖｏｌｕｍｅｓ ＩおよびＩＩ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ）。
本発明の更なる態様によれば、ネクチン−４が介在する疾患または障害の阻止、抑制または処置において使用するための、本明細書に記載のペプチドリガンドまたは薬物コンジュゲートが提供される。
本発明の更なる態様によれば、ネクチン−４が介在する疾患または障害を阻止、抑制または処置する方法であって、エフェクター基および本明細書に記載のペプチドリガンドの薬物コンジュゲートを、それを必要とする患者に投与することを含む方法が提供される。
１つの実施形態において、ネクチン−４は哺乳動物ネクチン−４である。更なる実施形態において、哺乳動物ネクチン−４はヒトネクチン−４である。
１つの実施形態において、ネクチン−４が介在する疾患または障害は、ウイルス感染、外胚葉異形成症候群および他の異常、乳房、卵巣および肺がん腫、転移性進行、および固形腫瘍から選択される。
更なる実施形態において、ネクチン−４が介在する疾患または障害はがんから選択される。
処置（または阻害）され得るがん（およびその良性の対応物）の例としては、これらに限定されるものではないが上皮起源の腫瘍（腺がん腫、扁平上皮がん腫、移行細胞がん腫および他のがん腫を含むさまざまなタイプの腺腫およびがん腫）、例えば、膀胱および尿路、乳房、胃腸管（食道、胃（ｓｔｏｍａｃｈ、ｇａｓｔｒｉｃ）、小腸、結腸、直腸および肛門を含む）、肝臓（肝細胞がん腫）、胆嚢および胆道系、外分泌膵臓、腎臓、肺（例えば、腺がん腫、小細胞肺がん腫、非小細胞肺がん腫、気管支肺胞上皮がん腫および中皮腫）、頭頚部（例えば、舌、頬腔、喉頭、咽頭、鼻咽頭、扁桃腺、唾液腺、鼻腔および副鼻腔のがん）、卵巣、卵管、腹膜、膣、外陰部、陰茎、子宮頸部、子宮筋層、子宮内膜、甲状腺（例えば、甲状腺濾胞がん腫）、副腎、前立腺、皮膚および付属器の（例えば、黒色腫、基底細胞がん腫、扁平上皮細胞がん腫、角化棘細胞腫、異形成母斑）のがん腫；血液学的悪性腫瘍（すなわち白血病、リンパ腫）および前悪性の血液学的障害、ならびに血液学的悪性腫瘍およびリンパ系譜の関連する状態（例えば、急性リンパ性白血病［ＡＬＬ］、慢性リンパ性白血病［ＣＬＬ］、Ｂ細胞リンパ腫、例えばびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫［ＤＬＢＣＬ］、濾胞性リンパ腫、バーキットリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫および白血病、ナチュラルキラー［ＮＫ］細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、ヘアリー細胞白血病、意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症、形質細胞腫、多発性骨髄腫、および移植後リンパ球増殖性障害）、および血液学的悪性腫瘍および骨髄性系譜の関連する状態（例えば、急性骨髄性白血病［ＡＭＬ］、慢性骨髄性白血病［ＣＭＬ］、慢性骨髄単球性白血病［ＣＭＭＬ］、好酸球増加症候群、骨髄増殖性障害、例えば真正多血症、本態性血小板血症および原発性骨髄線維症、骨髄増殖性症候群、骨髄異形成症候群、および前骨髄球性白血病）を含む境界悪性の障害；間葉起源の腫瘍、例えば、軟組織、骨または軟骨の肉腫、例えば骨肉腫、線維肉腫、軟骨肉腫、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、血管肉腫、カポジ肉腫、ユーイング肉腫、滑膜肉腫、類上皮肉腫、胃腸間質腫瘍、良性および悪性組織球種、および隆起性皮膚線維肉腫；中枢または末梢神経系の腫瘍（例えば、星状細胞腫、神経膠腫および神経膠芽腫、髄膜腫、上衣腫、松果体腫瘍および神経鞘腫）；内分泌腫瘍（例えば、下垂体腫瘍、副腎腫瘍、膵膵島細胞腫瘍、副甲状腺腫瘍、カルチノイド腫瘍および甲状腺の髄様がん腫）；眼および付属器腫瘍（例えば、網膜芽細胞腫）；生殖細胞および絨毛性腫瘍（例えば、奇形腫、セミノーマ、未分化胚細胞腫、胞状奇胎および絨毛がん腫）；および小児および胚性腫瘍（例えば、髄芽腫、神経芽細胞腫、ウィルムス腫瘍、および原始神経外胚葉性腫瘍）；または、先天性の、そうでなければ悪性腫瘍に対して患者の感受性を高める症候群（例えば、色素性乾皮症）がある。
更なる実施形態において、がんは、例えば、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、Ｂ慢性リンパ性白血病（Ｂ−ＣＬＬ）、ＢおよびＴ急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、Ｔ細胞リンパ腫（ＴＣＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、毛様細胞白血病（ＨＣＬ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）から選択される造血悪性腫瘍から選択される。
更なる実施形態において、がんは、肺がん（例えば非小細胞肺がん）、膀胱がん、膵臓がんおよび乳がんから選択される。データは、本発明の選択された二環式薬物コンジュゲートがこれらのがんモデルにおいて抗腫瘍活性を示したことを実証する例１から５で本明細書において示す。
本明細書における「阻止」という用語への言及は、疾患が誘発される前の防御性組成物の投与を伴う。「抑制」は、誘発事象後であるが、疾患の臨床的出現より前の組成物の投与を指す。「処置（治療）」は、疾患の症状が現れた後の防御性組成物の投与を伴う。
疾患に対する保護または処置においてペプチドリガンドの有効性をスクリーニングするために使用してもよい動物モデル系が利用可能である。動物モデル系の使用は本発明によって促進され、ヒトおよび動物の標的と交差反応することができるポリペプチドリガンドが開発されて動物モデルの使用が可能になる。
更に、複数の腫瘍タイプからのネクチン−４に関するコピー数変化（ＣＮＶ）と遺伝子発現との間の関連性を実証するデータを本明細書において示す。したがって、本発明の更なる態様によれば、がんを阻止、抑制または処置する方法であって、エフェクター基および本明細書に記載のペプチドリガンドの薬物コンジュゲートを、それを必要とする患者に投与することを含み、前記患者がネクチン−４のコピー数変化（ＣＮＶ）が増加しているとして同定されている方法が提供される。
１つの実施形態において、がんは、ネクチン−４のＣＮＶが増加しているとして本明細書において同定されたものから選択される。更なる実施形態において、がんは、ネクチン−４のＣＮＶが増加しているとして本明細書において同定されたもの、すなわち：乳房、子宮、膀胱、肺腺がん、肺扁平上皮、頸部、頭頚部、膵臓、甲状腺、直腸結腸、胸腺腫、肉腫、腎明細胞がん腫（ＲＣＣ）、前立腺および胃のがんから選択される。
例を参照しながら本発明を以下で更に記載する。
＜略語＞
１，２，４−ＴｒｉＡｚ ３−（１，２，４−トリアゾール−１−イル）−アラニン
１Ｎａｌ １−ナフチルアラニン
２ＦｕＡｌａ ２−フリルアラニン
２ＭｅＰｈｅ ２−メチル−フェニルアラニン
２Ｎａｌ ２−ナフチルアラニン
２Ｐａｌ ２−ピリジルアラニン
３，３−ＤＰＡ ３，３−ジフェニルアラニン
３ＭｅＰｈｅ ３−メチル−フェニルアラニン
３Ｐａｌ ３−ピリジルアラニン
４，４−ＢＰＡ ４，４−ビフェニルアラニン
４，４−ＤＦＰ ４，４−ジフルオロプロリン
４ＭｅＰｈｅ ４−メチル−フェニルアラニン
４Ｐａｌ ４−ピリジルアラニン
４ＴｈｉＡｚ ベータ−（４−チアゾリル）−アラニン
５ＦＴｒｐ ５−フルオロ−Ｌ−トリプトファン
Ａｇｂ ２−アミノ−４−グアニジノ酪酸
Ａｉｂ アミノイソ酪酸
ＡｚａＴｒｐ アザトリプトファン
Ａｚｅ アゼチジン
Ｃ５Ａ シクロペンチルグリシン
Ｃｈａ ３−シクロヘキシル−アラニン
Ｃｐａ シクロプロピルアラニン
Ｃｙａ システイン酸
ＤＯＰＡ ３，４−ジヒドロキシ−フェニルアラニン
ＨＡｒｇ ホモアルギニン
ＨＧｌｎ ホモグルタミン
Ｈｌｅｕ ホモロイシン
Ｈｐｈｅ ホモフェニルアラニン
Ｈｓｅ（ｍｅ） ホモセリン（Ｍｅ）
ＨＳｅｒ ホモセリン
ＨｙＰ ヒドロキシプロリン
Ｌｙｓ（Ａｃ） リシン（アセチル）
Ｍｅｔ（Ｏ２） メチオニンスルホン
Ｎｌｅ ノルロイシン
Ｏｉｃ オクタヒドロインドールカルボン酸
Ｏｘａ オキサゾリジン−４−カルボン酸
ｐＣｏＰｈｅ パラ−カルボキシ−フェニルアラニン
ＰｈｅＯＰｈｅ ４−フェノキシ−フェニルアラニン
Ｐｈｇ フェニルグリシン
Ｐｉｐ ピペコリン酸
Ｐｒｏ（４ＮＨ） ４−アミノ−プロリン
ｔＢｕＡｌａ ｔ−ブチル−アラニン
ＴｅｔｒａＺ テトラゾールアラニン
Ｔｈｉ チエニル−アラニン
ＴＨＰ（Ｏ） テトラヒドロピラン−４−プロパン酸
ＴＨＰ（ＳＯ２） ジオキソ−４−テトラヒドロチオピラニル酢酸
Ｔｒｐ（Ｍｅ） メチルトリプトファン
［材料および方法］
ペプチド合成
ペプチド合成は、Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ製のＳｙｍｐｈｏｎｙペプチドシンセサイザーおよびＭｕｌｔｉＳｙｎＴｅｃｈ製のＳｙｒｏ ＩＩシンセサイザーを使用したＦｍｏｃ化学をベースにした。適切な側鎖保護基を有する標準的なＦｍｏｃ−アミノ酸（Ｓｉｇｍａ、Ｍｅｒｃｋ）を用い、適用可能な標準的なカップリング条件をその都度使用し、続いて標準的な方法論を使用して脱保護した。
あるいは、ペプチドを、ＨＰＬＣを使用して精製し、単離後、これらを１，３，５−トリアクリロイルヘキサヒドロ−１，３，５−トリアジン（ＴＡＴＡ、Ｓｉｇｍａ）を用いて改変した。これに関しては、直鎖状ペプチドを５０：５０のＭｅＣＮ：Ｈ２Ｏで最大約３５ｍＬに希釈し、アセトニトリル中の１００ｍＭ ＴＡＴＡ約５００μＬを添加し、反応を、Ｈ２Ｏ中の１Ｍ ＮＨ４ＨＣＯ３５ｍＬを用いて開始させた。反応を室温で約３０〜６０分間進行させ、反応が完了したら（ＭＡＬＤＩによって判定する）凍結乾燥を行った。完了したら、Ｈ２Ｏ中の１ＭＬ システイン塩酸塩一水和物（Ｓｉｇｍａ）１ｍｌを、反応物に室温で約６０分間添加していくらかの過剰なＴＡＴＡをクエンチした。
凍結乾燥後、改変されたペプチドを上記のように精製し、同時にＬｕｎａ Ｃ８をＧｅｍｉｎｉ Ｃ１８カラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）で置き換え、酸を０．１％トリフルオロ酢酸に変更した。正確なＴＡＴＡ改変材料を含む純粋なフラクションをプールし、凍結乾燥し、−２０℃を維持して保管した。
全てのアミノ酸は、特に注記されていない限りＬ−立体配置で使用した。
一部の場合において、ペプチドを活性化ジスルフィドに変換してから、毒素の遊離チオール基と以下の方法を使用してカップリングする。乾燥ＤＭＳＯ（１．２５ｍｏｌ当量）中の４−メチル（スクシンイミジル４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエート）（１００ｍＭ）の溶液を、乾燥ＤＭＳＯ（１ｍｏｌ当量）中のペプチド（２０ｍＭ）の溶液へ添加した。反応物を十分に混合し、ＤＩＰＥＡ（２０ｍｏｌ当量）を添加した。反応が完了するまでＬＣ／ＭＳによってモニターした。
＜二環式ペプチド薬物コンジュゲートの調製＞
ＢＣＹ８５４９の調製
分離条件：Ａ相：Ｈ２Ｏ中の０．０７５％ＴＦＡ、Ｂ相：ＭｅＣＮ
分離方法：１８〜４８〜５５分、ＲＴ＝５３．５分
分離カラム：Ｌｕｎａ ２００×２５ｍｍ １０μｍ、Ｃ１８、１１０ＡおよびＧｅｍｉｎ１５０×３０ｍｍ、Ｃ１８、５μｍ、１１０Ａ、接続部、５０℃
溶解方法：ＤＭＦ
分離純度：９５％
ＢＣＹ８２３４を固相合成によって合成した。
Figure 2021527702
Figure 2021527702
化合物２の調製
ペプチドを標準的なＦｍｏｃ化学を使用して合成した。
１）ＤＣＭを、ＣＴＣ樹脂（５ｍｍｏｌ、４．３ｇ、１．１７ｍｍｏｌ／ｇ）およびＦｍｏｃ−Ｃｉｔ−ＯＨ（２．０ｇ、５ｍｍｏｌ、１．０当量）を含む容器にＮ２バブリングしながら添加する。
２）ＤＩＥＡ（４．０当量）を滴加し、２時間混合する。
３）ＭｅＯＨ（５ｍＬ）を添加し、３０分間混合する。
４）廃液し、ＤＭＦで５回洗浄する。
５）２０％ピペリジン／ＤＭＦを添加し、３０分間反応させる。
６）廃液し、ＤＭＦで５回洗浄する。
７）Ｆｍｏｃ−アミノ酸溶液を添加し、３０秒混合し、次いで活性化緩衝液を添加し、約１時間Ｎ２バブリングする。
８）上記ステップ４から７を繰り返して以下のアミノ酸をカップリングする。
注記：
Figure 2021527702
 ＤＭＦ中の２０％ピペリジンを使用して３０分間Ｆｍｏｃ脱保護を行った。カップリング反応をニンヒドリン試験によってモニターし、樹脂をＤＭＦで５回洗浄した。
ペプチド切断および精製：
１）切断緩衝液（２０％ＴＦＩＰ／８０％ＤＣＭ）を側鎖が保護されたペプチドを含むフラスコに室温で添加し、１時間２回撹拌する。
２）ろ過し、ろ液を収集する。
３）濃縮して溶媒を除去する。
４）粗製ペプチドを凍結乾燥して最終製品を得た（１．４ｇ、収率８５．０％）。
化合物３の調製
ＤＣＭ（３０ｍＬ）およびＭｅＯＨ（１５ｍＬ）中の化合物２（１．６５ｇ、５．０１ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液へ、ＥＥＤＱ（２．４８ｇ、１０．０２ｍｍｏｌ、２．０当量）および（４−アミノフェニル）メタノール（７４０．３７ｍｇ、６．０１ｍｍｏｌ、１．２当量）を添加した。混合物を１５℃で１６時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳによって、化合物２が完全に消費され、所望のｍ／ｚを有する１つの主要ピークが検出されたことが示された。ＴＬＣによって、化合物２が完全に消費され、多数の新規のスポットが形成されたことが示された。反応混合物を減圧下で濃縮し、溶媒を除去し、残渣を得た。残基を、フラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ（登録商標）；８０ ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム、６０ｍＬ／分で０〜１５ＤＣＭ／ＭｅＯＨ勾配の溶離剤）によって精製した。化合物３（１．３ｇ、２．９９ｍｍｏｌ、収率５９．７２％）を黄色固形物として得た。
化合物４の調製
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の化合物３（１．３ｇ、２．９９ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液へ、ＤＩＥＡ（２．３２ｇ、１７．９５ｍｍｏｌ、３．１３ｍＬ、６．０当量）およびビス（４−ニトロフェニル）炭酸塩（３．６４ｇ、１１．９７ｍｍｏｌ、４．０当量）を添加した。混合物を１５℃で１時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳによって、化合物３が完全に消費され、所望のｍ／ｚを有する１つの主要ピークが検出されたことが示された。残渣をｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ（中性条件）によって精製した。化合物４（１．０ｇ、１．６７ｍｍｏｌ、５５．７４％収率）を黄色固形物として得た。
化合物５の調製
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の化合物５（２５０．５３ｍｇ、４１７．８４μｍｏｌ、１．５当量）の溶液へ、ＨＯＢｔ（５６．４６ｍｇ、４１７．８４μｍｏｌ、１．５当量）およびＤＩＥＡ（１０８．０１ｍｇ、８３５．６８μｍｏｌ、１４５．５６μＬ、３．０当量）、ＭＭＡＥ（０．２００ｇ、２７８．５６μｍｏｌ、１．０当量）を添加した。混合物を３５℃で１２時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳによって、ＭＭＡＥが完全に消費され、所望のｍ／ｚを有する１つの主要ピークが検出されたことが示された。反応物は、ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ（中性条件）によって直接精製した。化合物５（０．１８０ｇ、１５２．７４μｍｏｌ、５４．８３％収率）を黄色固形物として得た。
化合物６の調製
ＴＨＦ（５ｍＬ）およびＨ２Ｏ（５ｍＬ）中の、化合物５（０．１７０ｇ、１４４．２６μｍｏｌ、１．０当量）の溶液へ、ＬｉＯＨ．Ｈ２Ｏ（１２．１１ｍｇ、２８８．５１μｍｏｌ、２．０当量）を添加した。混合物を１５℃で１時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳによって、化合物５が完全に消費され、所望のｍ／ｚを有する１つの主要ピークが検出されたことが示された。ＡｃＯＨを使用してＰＨ＝７に調整し、ＴＨＦを減圧下で除去し、残渣を得た。残渣をｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ（中性条件）によって精製した。化合物６（０．１８５ｇ、粗製物）を黄色固形物として得た。
ＢＣＹ８５４９の調製
ＤＭＡ（４ｍＬ）中の化合物６（０．１００ｇ、８６．９３μｍｏｌ、１．０当量）の溶液へ、ＨＯＳｕ（１０．００ｍｇ、８６．９３μｍｏｌ、１．０当量）およびＥＤＣＩ（１６．６６ｍｇ、８６．９３μｍｏｌ、１．０当量）を添加した。ＮＨＳエステルが形成された後、β−Ａｌａ−ＢＣＹ８２３４（５２５．９８ｍｇ、１７３．８５μｍｏｌ、２．０当量）およびＤＩＥＡ（３３．７０ｍｇ、２６０．７８μｍｏｌ、４５．４２μＬ、３．０当量）を添加した。混合物を１５℃で４時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳによって、化合物６が完全に消費され、所望のｍ／ｚを有する１つの主要ピークが検出されたことが示された。ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件）によって反応物を直接精製した。化合物ＢＣＹ８５４９（０．０５２８ｇ、１２．１５μｍｏｌ、収率１３．９８％、９５．７０％純度）を白色固形物として得た。保持時間＝１１．４８分。質量実測値＝１３８６．４（Ｍ／３＋Ｈ）
ＢＣＹ８２４５の調製
分離条件：Ａ相：Ｈ２Ｏ中の０．０７５％ＴＦＡ、Ｂ相：ＭｅＣＮ
分離方法：１８〜４８〜５５分、ＲＴ＝５３．５分
分離カラム：Ｌｕｎａ ２００×２５ｍｍ １０ｕｍ、Ｃ１８、１１０ＡおよびＧｅｍｉｎ１５０×３０ｍｍ、Ｃ１８、５ｕｍ、１１０Ａ、接続部、５０℃
溶解方法：ＤＭＦ
分離純度：９５％
ＢＣＹ８２３４を固相合成によって合成した。
ＢＣＹ８２４５の反応スキームを以下に示す：
Figure 2021527702
Figure 2021527702
化合物３の調製
化合物３を固相方法によって合成した。
化合物４の調製
ＤＣＭ（１０ｍＬ）およびＭｅＯＨ（５ｍＬ）中の、化合物３（１．３ｇ、３．２３ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液へ、ＥＥＤＱ（１．６０ｇ、６．４６ｍｍｏｌ、２．０当量）および（４−アミノフェニル）メタノール（５１７．１６ｍｇ、４．２０ｍｍｏｌ、１．３当量）を添加した。混合物を２０℃で１６時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳによって、化合物３が完全に消費され、所望のｍ／ｚを有する１つの主要ピークが検出されたことが示された。溶媒を減圧下で除去した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ（登録商標）；４０ｇ ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム、４０ｍＬ／分で０〜１５％ＤＣＭ／ＭｅＯＨ勾配の溶離剤）によって精製した。化合物４（０．９５０ｇ、１．８７ｍｍｏｌ、収率５７．９４％）を黄色固形物として得た。
化合物５の調製
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の化合物４（０．９５０ｇ、１．８７ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液へ、ＤＩＥＡ（１．２１ｇ、９．３６ｍｍｏｌ、１．６３ｍＬ、５．０当量）およびビス（４−ニトロフェニル）炭酸塩（２．２８ｇ、７．４９ｍｍｏｌ、４．０当量）を添加した。混合物を２０℃で１時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳによって、化合物４が完全に消費され、所望のｍ／ｚを有する１つの主要ピークが検出されたことが示された。反応物は、ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ（中性条件）によって直接精製した。化合物５（０．４００ｇ、５９４．６４μｍｏｌ、３１．７７％収率）を白色固形物として得た。
化合物６の調製
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の化合物５（０．２００ｇ、２９７．３２μｍｏｌ、１．０当量）の溶液へ、ＨＯＢｔ（５２．２３ｍｇ、３８６．５１μｍｏｌ、１．３当量）およびＤＩＥＡ（１１５．２８ｍｇ、８９１．９５μｍｏｌ、１５５．３６μＬ、３．０当量）、ＭＭＡＥ（１９２．１２ｍｇ、２６７．５９μｍｏｌ、０．９当量）を添加した。混合物を２０℃で１６時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳによって、化合物５が完全に消費され、所望のｍ／ｚを有する１つの主要ピークが検出されたことが示された。反応物は、ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ（中性条件）によって直接精製した。化合物６（０．１６０ｇ、１２７．８４μｍｏｌ、４３．００％収率）を白色固形物として得た。
化合物７の調製
ＴＨＦ（３ｍＬ）およびＨ２Ｏ（３ｍＬ）中の、化合物６（０．１６０ｇ、１２７．８４μｍｏｌ、１．０当量）の溶液へ、ＬｉＯＨ．Ｈ２Ｏ（２６．８２ｍｇ、６３９．２１μｍｏｌ、５．０当量）を添加した。混合物を２０℃で１時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳによって、化合物６が完全に消費され、所望のｍ／ｚを有する１つの主要ピークが検出されたことが示された。ＴＨＦを減圧下で除去し、ＡｃＯＨによってｐＨ＝７に調整し、混合物を凍結乾燥した。化合物７（０．１３０ｇ、１０５．０５μｍｏｌ、８２．１７％収率）を白色固形物として得た。
化合物８の調製物
ＤＭＡ（６ｍＬ）およびＤＣＭ（２ｍＬ）中の、化合物７（３６．２７ｍｇ、３１５．１５μｍｏｌ、３．０当量）の溶液へ、ＥＤＣＩ（６０．４１ｍｇ、３１５．１５μｍｏｌ、３．０当量）を添加した。混合物を１５℃で３時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳによって、化合物７が完全に消費され、所望のｍ／ｚを有する１つの主要ピークが検出されたことが示された。ＤＣＭを減圧下で除去した。反応物は、ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ（中性条件）によって直接精製した。化合物８（０．０９５ｇ、７１．１８μｍｏｌ、６７．７６％収率）を白色固形物として得た。
ＢＣＹ８２４５の調製
ＤＭＡ（４ｍＬ）中のＢＣＹ８２３４（６６．４１ｍｇ、２２．４８μｍｏｌ、１．０当量）の溶液へ、ＤＩＥＡ（８．７２ｍｇ、６７．４４μｍｏｌ、１１．７５μＬ、３．０当量）および化合物８（０．０３０ｇ、２２．４８μｍｏｌ、１．０当量）を添加した。混合物を２０℃で１６時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳによって、ＢＣＹ８２３４が完全に消費され、所望のｍ／ｚまたは所望の質量を有する１つの主要ピークが検出されたことが示された。ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件）によって反応物を直接精製した。化合物ＢＣＹ８２４５（０．０４２７ｇ、１０．１６μｍｏｌ、４５．１９％収率、９９．３０％純度）を白色固形物として得た。保持時間＝１１，．７分。質量実測値＝１０４３．９（Ｍ／４＋Ｈ）
＜生物学的データ＞
ネクチン−４直接結合アッセイ
ヒトネクチン−４に対する本発明のペプチド親和性（Ｋｉ）を、国際公開第２０１６／０６７０３５号で開示される方法に従って蛍光偏光アッセイを使用して判定した。蛍光タグ（フルオロセイン、ＳＩＧＭＡまたはＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４８８（商標）、Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃのいずれか）を有する本発明のペプチドを、０．０１％ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ中で、または１００ｍＭ ＮａＣｌおよび０．０１％ｔｗｅｅｎ ｐＨ７．４を含む５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ中で（両方ともアッセイ緩衝液と称する）２．５ｎＭに希釈した。これをペプチドと同じアッセイ緩衝液中でタンパク質滴定と組み合わせ、壁および底部が黒い低結合低体積３８４ウェルプレート中で、総体積が２５μＬの、典型的には、アッセイ緩衝液５μＬ、タンパク質１０μＬ、そして蛍光ペプチド１０μＬの１ｎＭのペプチドを得た。２倍段階希釈（One in two serial dilutions）を使用して、公知の高親和性バインダーに関する５００ｎＭから低親和性バインダーに関する１０μＭまでの範囲の、最高濃度を含む１２段階の異なる濃度を得て選択アッセイを行った。測定は、４８５ｎｍで励起し、５２０ｎｍで平行および垂直発光を検出する「ＦＰ ４８５ ５２０５２０」光学モジュールを備えたＢＭＧ ＰＨＥＲＡｓｔａｒ ＦＳで行った。ＰＨＥＲＡｓｔａｒ ＦＳを、２５℃、１ウェル当たり２００フラッシュ、０．１秒の位置決め遅延で設定し、各ウェルを５から１０分間隔で６０分間測定した。ウェル中にタンパク質が存在しない場合は、分析のために使用した増加を６０分の終わりに各トレーサーに関して判定した。データをＳｙｓｔａｔ Ｓｉｇｍａｐｌｏｔ バージョン １２．０を使用して分析した。ｍＰ値をユーザ定義される二次方程式にフィットさせ、Ｋｄ値：ｆ＝ｙｍｉｎ＋（ｙｍａｘ−ｙｍｉｎ）／Ｌｉｇ×（（ｘ＋Ｌｉｇ＋Ｋｄ）／２−ｓｑｒｔ（（（（ｘ＋Ｌｉｇ＋Ｋｄ）／２）＾２）−（Ｌｉｇ×ｘ）））を生成した。「Ｌｉｇ」は、使用したトレーサーの濃度の定義値であった。
ネクチン−４競合結合アッセイ
蛍光タグを有さないペプチドは、ＡＣＰＦＧＣＨＴＤＷＳＷＰＩＷＣＡ−Ｓａｒ６−Ｋ（Ｆｌ）（配列番号２）および（Ｋｄ＝５ｎＭ−上記のプロトコールを使用して判定した）と競合させて試験を行った。ペプチドを、直接結合アッセイに記載されているように最大５％のＤＭＳＯを用いてアッセイ緩衝液中で適切な濃度に希釈し、次いで２倍に連続希釈した。希釈したペプチド５μＬをプレートに添加し、続いてヒトネクチン−４ １０μＬ、次いで蛍光ペプチド１０μＬを添加した。測定は、直接結合アッセイと同様に行ったが、増加を判定してから第１の測定を行った。データ分析は、ｍＰ値がユーザ定義の３次方程式にフィットした場合にＳｙｓｔａｔ Ｓｉｇｍａｐｌｏｔ バージョン１２．０で行い、Ｋｉ値：
ｆ＝ｙｍｉｎ＋（ｙｍａｘ−ｙｍｉｎ）／Ｌｉｇ＊（（Ｌｉｇ＊（（２＊（（Ｋｌｉｇ＋Ｋｃｏｍｐ＋Ｌｉｇ＋Ｃｏｍｐ−Ｐｒｏｔ＊ｃ）＾２−３＊（Ｋｃｏｍｐ＊（Ｌｉｇ−Ｐｒｏｔ＊ｃ）＋Ｋｌｉｇ＊（Ｃｏｍｐ−Ｐｒｏｔ＊ｃ）＋Ｋｌｉｇ＊Ｋｃｏｍｐ））＾０．５＊ＣＯＳ（ＡＲＣＣＯＳ（（−２＊（Ｋｌｉｇ＋Ｋｃｏｍｐ＋Ｌｉｇ＋Ｃｏｍｐ−Ｐｒｏｔ＊ｃ）＾３＋９＊（Ｋｌｉｇ＋Ｋｃｏｍｐ＋Ｌｉｇ＋Ｃｏｍｐ−Ｐｒｏｔ＊ｃ）＊（Ｋｃｏｍｐ＊（Ｌｉｇ−Ｐｒｏｔ＊ｃ）＋Ｋｌｉｇ＊（Ｃｏｍｐ−Ｐｒｏｔ＊ｃ）＋Ｋｌｉｇ＊Ｋｃｏｍｐ）−２７＊（−１＊Ｋｌｉｇ＊Ｋｃｏｍｐ＊Ｐｒｏｔ＊ｃ））／（２＊（（（（Ｋｌｉｇ＋Ｋｃｏｍｐ＋Ｌｉｇ＋Ｃｏｍｐ−Ｐｒｏｔ＊ｃ）＾２−３＊（Ｋｃｏｍｐ＊（Ｌｉｇ−Ｐｒｏｔ＊ｃ）＋Ｋｌｉｇ＊（Ｃｏｍｐ−Ｐｒｏｔ＊ｃ）＋Ｋｌｉｇ＊Ｋｃｏｍｐ））＾３）＾０．５）））／３））−（Ｋｌｉｇ＋Ｋｃｏｍｐ＋Ｌｉｇ＋Ｃｏｍｐ−Ｐｒｏｔ＊ｃ）））／（（３＊Ｋｌｉｇ）＋（（２＊（（Ｋｌｉｇ＋Ｋｃｏｍｐ＋Ｌｉｇ＋Ｃｏｍｐ−Ｐｒｏｔ＊ｃ）＾２−３＊（Ｋｃｏｍｐ＊（Ｌｉｇ−Ｐｒｏｔ＊ｃ）＋Ｋｌｉｇ＊（Ｃｏｍｐ−Ｐｒｏｔ＊ｃ）＋Ｋｌｉｇ＊Ｋｃｏｍｐ））＾０．５＊ＣＯＳ（ＡＲＣＣＯＳ（（−２＊（Ｋｌｉｇ＋Ｋｃｏｍｐ＋Ｌｉｇ＋Ｃｏｍｐ−Ｐｒｏｔ＊ｃ）＾３＋９＊（Ｋｌｉｇ＋Ｋｃｏｍｐ＋Ｌｉｇ＋Ｃｏｍｐ−Ｐｒｏｔ＊ｃ）＊（Ｋｃｏｍｐ＊（Ｌｉｇ−Ｐｒｏｔ＊ｃ）＋Ｋｌｉｇ＊（Ｃｏｍｐ−Ｐｒｏｔ＊ｃ）＋Ｋｌｉｇ＊Ｋｃｏｍｐ）−２７＊（−１＊Ｋｌｉｇ＊Ｋｃｏｍｐ＊Ｐｒｏｔ＊ｃ））／（２＊（（（（Ｋｌｉｇ＋Ｋｃｏｍｐ＋Ｌｉｇ＋Ｃｏｍｐ−Ｐｒｏｔ＊ｃ）＾２−３＊（Ｋｃｏｍｐ＊（Ｌｉｇ−Ｐｒｏｔ＊ｃ）＋Ｋｌｉｇ＊（Ｃｏｍｐ−Ｐｒｏｔ＊ｃ）＋Ｋｌｉｇ＊Ｋｃｏｍｐ））＾３）＾０．５）））／３））−（Ｋｌｉｇ＋Ｋｃｏｍｐ＋Ｌｉｇ＋Ｃｏｍｐ−Ｐｒｏｔ＊ｃ））））
を生成した。「Ｌｉｇ」、「ＫＬｉｇ」および「Ｐｒｏｔ」は全て、蛍光ペプチド濃度、蛍光ペプチドのＫｄおよびネクチン濃度にそれぞれ関連する定義値であった。
ネクチン−４のＢｉａｃｏｒｅ ＳＰＲ結合アッセイ
Ｂｉａｃｏｒｅ実験を行い、ヒトネクチン−４タンパク質（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒから入手した）に結合する単量体ペプチドのｋａ（Ｍ−１ｓ−１）、ｋｄ（ｓ−１）、ＫＤ（ｎＭ）値を判定した。
ｇｐ６７シグナル配列およびＣ末端ＦＬＡＧタグを有するヒトネクチン−４（残基Ｇｌｙ３２−Ｓｅｒ３４９；ＮＣＢＩ 参照配列：ＮＰ＿１１２１７８．２）を、ｐＦａｓｔｂａｃ−１にクローン化し、標準的なＢａｃ−ｔｏ−Ｂａｃ（商標）プロトコール（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してバキュロウイルスを作製した。２７℃のＥｘｃｅｌｌ−４２０培地（Ｓｉｇｍａ）中の１×１０６ｍｌ−１のＳｆ２１細胞を、２ ＭＯＩでＰ１ウイルス原液に感染させ、７２時間で上清を回収した。上清をまとめ、ＰＢＳ中で洗浄した抗ＦＬＡＧＭ２親和性アガロース樹脂（Ｓｉｇｍａ）と４℃で１時間結合させ、その後、樹脂をカラムに移し、ＰＢＳで十分に洗浄した。タンパク質を１００μｇ／ｍｌ ＦＬＡＧペプチドで溶出した。溶出したタンパク質を２ｍｌに濃縮し、ＰＢＳ中のＳ−２００ Ｓｕｐｅｒｄｅｘカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に１ｍｌ／分でロードした。フラクション２ｍｌを収集し、ネクチン−４タンパク質を含むフラクションを１６ｍｇ／ｍｌに濃縮した。
タンパク質を、製造業者が提示するプロトコールに従って、ＥＺ−Ｌｉｎｋ（商標）スルホ−ＮＨＳ−ＬＣ−ＬＣ−ビオチン試薬（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を使用してＰＢＳ中で無作為にビオチン化した。タンパク質を十分に脱塩し、未結合のビオチンを、スピンカラムを使用してＰＢＳ中に除去した。
ペプチド結合の分析に関しては、ＣＭ５チップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を利用したＢｉａｃｏｒｅ ３０００機器を使用した。ストレプトアビジンを、ランニング緩衝液としてＨＢＳ−Ｎ（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ７．４）を用い、２５℃で標準的なアミンカップリング化学を使用してチップに固定した。簡潔には、１：１の比率の０．４Ｍ １−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）／０．１Ｍ Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）を１０μｌ／分の流速で７分注入し、カルボキシメチルデキストラン表面を活性化させた。ストレプトアビジンの捕捉に関しては、タンパク質を１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．５）中で０．２ｍｇ／ｍｌに希釈し、ストレプトアビジン１２０μｌを活性化チップ表面に注入することによって捕捉した。残りの活性化基は、１Ｍエタノールアミン（ｐＨ８．５）を７分注射してブロックし、ビオチン化ネクチン−４を捕捉し、１，２００〜１，８００ＲＵのレベルにした。緩衝液をＰＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０と交換し、ペプチドの希釈系列をこの緩衝液中で調製し、最終ＤＭＳＯ濃度を０．５％にした。最大ペプチド濃度は１００ｎＭであり、更に２倍希釈を６回行った。ＳＰＲ分析を、５０μｌ／分の流速、２５℃、および個々のペプチドに応じて６０秒の結合、ペプチド４００から１，２００秒の間の解離で実行した。データをＤＭＳＯ排除体積効果に関して修正した。全てのデータを標準的なプロセシング手順を使用してブランク注入および参照表面に関して二重参照し、データプロセシングおよび動力学フィッティングを、Ｓｃｒｕｂｂｅｒソフトウェア、バージョン２．０ｃ（ＢｉｏＬｏｇｉｃ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を使用して行った。必要に応じてデータを、物質移動効果を可能にする単純な１：１結合モデルを使用してフィットさせた。
本発明のある特定のペプチドリガンドを上述のネクチン−４結合アッセイで試験し、結果を表１に示す。
Figure 2021527702
本発明のある特定の二環式ペプチドを上述のＳＰＲアッセイで試験し、結果を表２に示す。
Figure 2021527702
本発明のある特定の二環式ペプチドを細胞毒性剤にコンジュゲートさせ、上述のＳＰＲアッセイで試験し、結果を表３に示す。
Figure 2021527702
＜インビボ研究＞
実施例１から５および９において、以下の方法論を各研究に用いた：
試験および陽性対照の物品
Figure 2021527702
＜実験用方法および手順＞
（ｉ）観察
研究における動物の取り扱い、世話および処置と関連する全ての手順は、Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ａｎｄ Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ（ＡＡＡＬＡＣ）のガイドラインに従い、ＷｕＸｉ ＡｐｐＴｅｃのＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）に承認されたガイドラインに従って行った。所定のモニタリングの時点で、動物を、正常行動、例えば運動、餌および水の消費（見た目のみによる）、体重増加／減少、眼／毛髪のつやの消失に対する腫瘍成長および処置の任意の影響、ならびにプロトコールにおいて規定されるようなその他の異常な影響に関して毎日チェックした。死滅および観察された臨床的徴候を、各サブセット内の動物の数に基づいて記録した。
（ｉｉ）腫瘍の測定およびエンドポイント
主要なエンドポイントは、腫瘍の成長を遅らせることができるかどうかまたはマウスを治癒させることができるかどうかを確認することであった。腫瘍体積を、キャリパーを使用して２次元で週に３回測定し、体積は、式：Ｖ＝０．５ａ×ｂ２（式中、ａとｂはそれぞれ腫瘍の長径と短径である）を使用してｍｍ３で示した。次いで、腫瘍サイズを使用してＴ／Ｃ値を算出した。Ｔ／Ｃ値（パーセント）は、抗腫瘍有効性の指標であり；ＴおよびＣはそれぞれ、所与の日における処置群および対照群の平均体積である。ＴＧＩを、式：ＴＧＩ（％）＝［１−（Ｔｉ−Ｔ０）／（Ｖｉ−Ｖ０）］×１００を使用して各群に関して計算し；Ｔｉは、所与の日における処置群の平均腫瘍体積であり、Ｔ０は、処置開始日における処置群の平均腫瘍体積であり、Ｖｉは、Ｔｉと同じ日におけるビヒクル対照群の平均腫瘍体積であり、Ｖ０は、処置開始日におけるビヒクル群の平均腫瘍体積であった。
（ｉｉｉ）統計分析
平均および平均標準誤差（ＳＥＭ）を含む要約統計量を、各時点における各基の腫瘍体積に関して提供する。
群間の腫瘍体積における差の統計分析を、最終投薬後の最良の治療時点において得られたデータに関して行った。
一元ＡＮＯＶＡを行い、群間の腫瘍体積を比較し、有意なＦ統計値（処置分散のエラー分散に対する比率）を得て、群間の比較を、ゲームスハウエル検定を用いて行った。全てのデータを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ５．０を使用して分析した。Ｐ＜０．０５は、統計的に有意であるとみなした。
［実施例１］
＜Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスのＮＣＩ−Ｈ２９２異種移植（非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）モデル）の処置におけるＢＣＹ８２４５のインビボ有効性試験＞
１．研究の目的
研究の目的は、Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスのＮＣＩ−Ｈ２９２異種移植モデルの処置におけるＢＣＹ８２４５のインビボ抗腫瘍有効性を評価することであった。
２．実験デザイン
Figure 2021527702
３．材料
３．１動物および室内条件
３．１．１．動物
種：ハツカネズミ（Ｍｕｓ Ｍｕｓｃｕｌｕｓ）
系統：Ｂａｌｂ／ｃヌード
年齢：６〜８週
性別：雌
体重：１８〜２２ｇ
動物数：ＢＣＹ８２４５に関してはマウス１８匹＋スペア
動物供給業者：Ｓｈａｎｇｈａｉ ＬＣ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃｏ．，ＬＴＤ
３．１．２．室内条件
マウスは、各ケージに３匹の動物を入れ、一定の温度および湿度で個々の換気ケージ中で維持した。
・温度：２０〜２６℃
・湿度４０〜７０％
ケージ：ポリカーボネート製。サイズは、３００ｍｍ×１８０ｍｍ×１５０ｍｍである。床敷材料はトウモロコシの穂軸であり、これは週に２回交換する。
飼料：動物は、研究期間全体を通して、照射滅菌された乾燥顆粒餌を自由に摂取できた。
水：動物は滅菌飲料水を自由に摂取できた。
ケージの同定：各ケージに関する同定ラベルには、動物数、性別、系統、受入日、処置、研究番号、群番号および処置開始日の情報が含まれていた。
動物同定：動物は耳にコードを付けることによってマークした。
３．２試験および陽性対照の物品
４．実験方法および手順
４．１ 細胞培養物
ＮＣＩ−Ｈ２９２腫瘍細胞は、１０％熱不活性化ウシ胎仔血清を添加した培地中、５％ＣＯ２雰囲気中３７℃で維持することになる。腫瘍細胞は、週に２回定期的に継代培養されることになる。指数増殖期に増殖している細胞を採取し、計数し、腫瘍を接種することになる。
４．２ 腫瘍の接種
各マウスの右腹部に、ＰＢＳ０．２ｍｌ中のＮＣＩ−Ｈ２９２腫瘍細胞（１０×１０６）を皮下接種し、腫瘍を発生させることになる。平均腫瘍体積がおよそ１５８〜４０６ｍｍ３に達した場合に動物を無作為化することになり、処置を開始することになる。被検物品の投与および各群における動物数を以下の実験デザインの表に示す。
４．３ 被検物品製剤の調製
Figure 2021527702
４．４ サンプル採取
研究の終わりに、血漿を、最後に投薬してから５分、１５分、３０分、６０分および１２０分後に採取した。
５．結果
５．１ 腫瘍成長曲線
腫瘍成長曲線を図１および２に示す。
５．２ 腫瘍体積トレース
ＮＣＩ−Ｈ２９２異種移植片を有する雌Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスにおける経時的な平均腫瘍体積を、以下の表に示す。
Figure 2021527702
Figure 2021527702
５．３ 腫瘍成長阻害分析
１４日目のＮＣＩ−Ｈ２９２異種移植モデルにおけるＢＣＹ８２４５に関する腫瘍成長阻害率を、腫瘍体積測定に基づいて算出した。
Figure 2021527702
Figure 2021527702
６．結果の要約および考察
本研究において、ＮＣＩ−Ｈ２９２異種移植モデルにおけるＢＣＹ８２４５の治療的有効性を評価した。さまざまな時点における全ての処置群の測定された腫瘍体積を、図１および２ならびに表４から７に示す。
ビヒクル処置されたマウスの平均腫瘍サイズは、１４日目に８７９ｍｍ３に達した。
１ｍｇ／ｋｇのＢＣＹ８２４５は、有意な抗腫瘍活性を生成せず、被検物品は、投薬量を７日目から３ｍｇ／ｋｇに増加させた後に明らかな抗腫瘍活性を示したが、有効性は投薬量を２１日目に５ｍｇ／ｋｇに増加させた後に更に改善されなかった。本研究において、全ての処置動物が投薬スケジュール中に継続的な体重減少を示しており、これは、全身腫瘍組織量および被検物品の毒性に起因し得る。
３ｍｇ／ｋｇ、週に１回（ＴＶ＝１４９ｍｍ３、ＴＧＩ＝１０１．４％、ｐ＜０．００１）、３ｍｇ／ｋｇ、週に２回（ＴＶ＝６５ｍｍ３、ＴＧＩ＝１１２．２％、ｐ＜０．００１）および５ｍｇ／ｋｇ、週に１回（ＴＶ＝８３ｍｍ３、ＴＧＩ＝１０９．８％、ｐ＜０．００１）のＢＣＹ８２４５は、有意な抗腫瘍活性を示した。
［実施例２］
＜ＣＢ１７−ＳＣＩＤマウスのＨＴ−１３７６異種移植（膀胱がんモデル）におけるＢＣＹ７８２５、ＢＣＹ８２４５、ＢＣＹ８２５３、ＢＣＹ８２５４およびＢＣＹ８２５５のインビボ有効性試験＞
１．研究の目的
研究の目的は、ＣＢ１７−ＳＣＩＤマウスのＨＴ−１３７６異種移植の処置における被検物品のインビボ抗腫瘍有効性を評価することである。
２．実験デザイン
Figure 2021527702
３．材料
３．１ 動物および室内条件
３．１．１．動物
種：ハツカネズミ
系統：ＣＢ１７−ＳＣＩＤ
年齢：６〜８週
性別：雌
体重：１８〜２２ｇ
動物数：２１〜４１のマウス＋スペア
動物供給業者：Ｓｈａｎｇｈａｉ ＬＣ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃｏ．，ＬＴＤ。
３．１．２．室内条件
マウスは、各ケージに３または５匹の動物を入れ、一定な温度および湿度で個々の換気ケージ中で維持した。
・温度：２０〜２６℃
・湿度４０〜７０％
ケージ：ポリカーボネート製。サイズは、３００ｍｍ×１８０ｍｍ×１５０ｍｍである。床敷材料はトウモロコシの穂軸であり、これは週に２回交換する。
飼料：動物は、研究期間全体を通して、照射滅菌された乾燥顆粒餌を自由に摂取できた。
水：動物は滅菌飲料水を自由に摂取できた。
ケージの同定：各ケージに関する同定ラベルには、動物数、性別、系統、受入日、処置、研究番号、群番号および処置開始日の情報が含まれていた。
動物の同定：動物は耳にコードを付けることによってマークした。
４．実験方法および手順
４．１ 細胞培養物
ＨＴ−１３７６腫瘍細胞を、１０％熱不活性化ウシ胎仔血清を添加したＥＭＥＭ培地中、５％ＣＯ２雰囲気中３７℃で単層培養物としてインビトロで維持した。腫瘍細胞を、トリプシン−ＥＤＴＡ処置によって週に２回定期的に継代培養した。指数増殖期に増殖している細胞を採取し、計数し、腫瘍を接種した。
４．２ 腫瘍の接種
各マウスの右腹部に、ＰＢＳ０．２ｍｌ中のＨＴ−１３７６腫瘍細胞（５×１０６）をマトリゲル（１：１）と共に皮下接種し、腫瘍を発生させた。平均腫瘍体積が１５３〜１６４ｍｍ３に達した場合に動物を無作為化した。被検物品の投与および各群における動物数を実験デザインの表に示した。
４．３ 被検物品製剤の調製
Figure 2021527702
４．４ サンプル採取
研究の終わりに、２群の血漿を、最後に投薬してから５分、１５分、３０分、６０分および１２０分後に採取した。６群の血漿を、最後に投薬してから５分、１５分、３０分、６０分および１２０分後に採取した。６群の腫瘍を、最後に投薬してから２時間後に採取した。４および５群の腫瘍は、最後に投薬してから２時間後に採取した。
５．結果
５．１ 腫瘍成長曲線
腫瘍成長曲線を図３および４に示す。
５．２ 腫瘍体積トレース
ＨＴ−１３７６異種移植片を有する雌ＣＢ１７−ＳＣＩＤマウスにおける経時的な平均腫瘍体積を表８および９に示す。
Figure 2021527702
Figure 2021527702
５．３ 腫瘍成長阻害分析
ＨＴ−１３７６異種移植モデルにおける被検物品に関する腫瘍成長阻害率を、処置開始後２１日目に腫瘍体積測定に基づいて算出した。
Figure 2021527702
Figure 2021527702
６．結果の要約および考察
１および２群
本研究において、ＨＴ−１３７６異種移植モデルにおける被検物品の治療的有効性を評価した。さまざまな時点における全ての処置群の測定された腫瘍体積を、図３および表８および１０に示す。
ビヒクル処置されたマウスの平均腫瘍サイズは、２１日目に８８４ｍｍ３に達した。１ｍｇ／ｋｇのＢＣＹ８２４５は、わずかな抗腫瘍活性を示し、投薬量を７日目から３ｍｇ／ｋｇに増加させた後により優れた有効性が認められた。
本研究において、３ｍｇ／ｋｇの被検物品で処置されたいくつかのマウスは１０％を超える体重減少を示した。
３〜６群
本研究において、ＨＴ−１３７６異種移植モデルにおける被検物品の治療的有効性を評価した。さまざまな時点における全ての処置群の測定された腫瘍体積を図４および表９および１１に示す。
３ｍｇ／ｋｇ、週に１回（ＴＶ＝６０３ｍｍ３、ＴＧＩ＝５０．９％、ｐ＜０．０１）、３ｍｇ／ｋｇ、週に２回（ＴＶ＝４０７ｍｍ３、ＴＧＩ＝７２．３％、ｐ＜０．００１）および５ｍｇ／ｋｇ、週に１回（ＴＶ＝４６５ｍｍ３、ＴＧＩ＝６６．０％、ｐ＜０．００１）のＢＣＹ８２４５は、有意な抗腫瘍活性を示した。
本研究において、５ｍｇ／ｋｇ、週に１回のＢＣＹ８２４５は、処置スケジュール中に１０％を超える動物の体重減少をもたらした。
［実施例３］
＜Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスのＰａｎｃ２．１３異種移植（膵臓がんモデル）の処置におけるＢＣＹ８２４５のインビボ有効性研究＞
１．研究の目的
研究の目的は、Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスのＰａｎｃ２．１３異種移植の処置における被検物品のインビボ抗腫瘍有効性を評価することである。
２．実験デザイン
Figure 2021527702
３．材料
３．１動物および室内条件
３．１．１動物
種：ハツカネズミ
系統：Ｂａｌｂ／ｃヌード
年齢：６〜８週
性別：雌
体重：１８〜２２ｇ
動物数：４１匹のマウス＋スペア
動物供給業者：Ｓｈａｎｇｈａｉ ＬＣ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃｏ．，ＬＴＤ。
３．１．２．室内条件
マウスは、各ケージに３または５匹の動物を入れ、一定な温度および湿度で個々の換気ケージ中で維持した。
・温度：２０〜２６℃
・湿度４０〜７０％
ケージ：ポリカーボネート製。サイズは、３００ｍｍ×１８０ｍｍ×１５０ｍｍである。床敷材料はトウモロコシの穂軸であり、これは週に２回交換する。
飼料：動物は、研究期間全体を通して、照射滅菌された乾燥顆粒餌を自由に摂取できた。
水：動物は滅菌飲料水を自由に摂取できた。
ケージの同定：各ケージに関する同定ラベルには、動物数、性別、系統、受入日、処置、研究番号、群番号および処置開始日の情報が含まれていた。
動物の同定：動物は耳にコードを付けることによってマークした。
４．実験方法および手順
４．１ 細胞培養物
Ｐａｎｃ２．１３腫瘍細胞は、１５％熱不活性化ウシ胎仔血清および１０単位／ｍｌヒト組換えインスリンを添加したＲＭＰＩ１６４０培地中、５％ＣＯ２雰囲気中３７℃で維持されることになる。腫瘍細胞は、週に２回定期的に継代培養されることになる。指数増殖期に増殖している細胞を採取し、計数し、腫瘍を接種することになる。
４．２ 腫瘍の接種
各マウスの右腹部に、Ｐａｎｃ２．１３腫瘍細胞（５×１０６）をＰＢＳ０．２ｍｌ中のマトリゲル（１：１）と共に皮下接種し、腫瘍を発生させた。平均腫瘍体積が１４９ｍｍ３に達した場合に４１匹の動物を無作為化した。被検物品の投与および各群における動物数を実験デザインの表に示した。
４．３ 被検物品製剤の調製
Figure 2021527702
４．４ サンプル採取
研究の終わりに、全ての群の腫瘍を、最後に投薬してから２時間後に採取した。
５．結果
５．１ 腫瘍成長曲線
腫瘍成長曲線を図５に示す。
５．２ 腫瘍体積トレース
Ｐａｎｃ２．１３異種移植片を有する雌Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスにおける経時的な平均腫瘍体積を表１２に示す。
Figure 2021527702
５．３ 腫瘍成長阻害分析
Ｐａｎｃ２．１３異種移植モデルにおける被検物品に関する腫瘍成長阻害率を、処置開始後１４日目に腫瘍体積測定に基づいて算出した。
Figure 2021527702
６．結果の要約および考察
本研究において、Ｐａｎｃ２．１３異種移植モデルにおける被検物品の治療的有効性を評価した。さまざまな時点における全ての処置群の測定された腫瘍体積を、図５および表１２および１３に示す。
３ｍｇ／ｋｇ、週に１回（ＴＶ＝２７１ｍｍ３、ＴＧＩ＝６９．２％、ｐ＜０．０１）、３ｍｇ／ｋｇ、週に２回（ＴＶ＝２３１ｍｍ３、ＴＧＩ＝７９．１％、ｐ＜０．００１）および５ｍｇ／ｋｇ、週に１回（ＴＶ＝２３８ｍｍ３、ＴＧＩ＝７７．５％、ｐ＜０．００１）のＢＣＹ８２４５は、有意な抗腫瘍活性を示した。
［実施例４］
＜Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスのＭＤＡ−ＭＢ−４６８異種移植（乳がんモデル）の処置におけるＢＣＹ８２４５のインビボ有効性研究＞
１．研究の目的
研究の目的は、Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスのＭＤＡ−ＭＢ−４６８異種移植の処置におけるＢＣＹ８２４５のインビボ抗腫瘍有効性を評価することである。
２．実験デザイン
Figure 2021527702
３．材料
３．１動物および室内条件
３．１．１動物
種：ハツカネズミ
系統：Ｂａｌｂ／ｃヌード
年齢：６〜８週
性別：雌
体重：１８〜２２ｇ
動物数：４１匹のマウス＋スペア
動物供給業者：Ｓｈａｎｇｈａｉ ＬＣ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃｏ．，ＬＴＤ。
３．１．２．室内条件
マウスは、各ケージに３または５匹の動物を入れ、一定な温度および湿度で個々の換気ケージ中で維持した。
・温度：２０〜２６℃
・湿度４０〜７０％
ケージ：ポリカーボネート製。サイズは、３００ｍｍ×１８０ｍｍ×１５０ｍｍである。床敷材料はトウモロコシの穂軸であり、これは週に２回交換する。
飼料：動物は、研究期間全体を通して、照射滅菌された乾燥顆粒餌を自由に摂取できた。
水：動物は滅菌飲料水を自由に摂取できた。
ケージの同定：各ケージに関する同定ラベルには、動物数、性別、系統、受入日、処置、研究番号、群番号および処置開始日の情報が含まれていた。
動物の同定：動物は耳にコードを付けることによってマークした。
４．実験方法および手順
４．１ 細胞培養物
腫瘍細胞を、１０％熱不活性化ウシ胎仔血清を添加したライボビッツＬ−１５培地中、５％ＣＯ２雰囲気中３７℃で維持した。腫瘍細胞を週に２回定期的に継代培養した。指数増殖期に増殖している細胞を採取し、計数し、腫瘍を接種した。
４．２ 腫瘍の接種
各マウスの右腹部に、５０％マトリゲルを添加したＰＢＳ０．２ｍｌ中のＭＤＡ−ＭＢ−４６８腫瘍細胞（１０×１０６）を皮下接種し、腫瘍を発生させた。平均腫瘍体積が１９６ｍｍ３に達した場合に４１匹の動物を無作為化した。被検物品の投与および各群における動物数を実験デザインの表に示した。
４．３ 被検物品製剤の調製
Figure 2021527702
４．４ サンプル採取
研究の２１日目に、２群の血漿を、最後に投薬してから５分、１５分、３０分、６０分および１２０分後に採取した。１および３群の腫瘍を、最後に投薬してから２時間後に採取した。４群の動物は一切投薬せずに更に２１日間の実行を維持し、これらの群の腫瘍を４２日目に採取した。
５．結果
５．１ 腫瘍成長曲線
腫瘍成長曲線を図６に示す。
５．２ 腫瘍体積トレース
ＭＤＡ−ＭＢ−４６８異種移植片を有する雌Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスにおける経時的な平均腫瘍体積を表１４および１５に示す。
Figure 2021527702
Figure 2021527702
５．３ 腫瘍成長阻害分析
ＭＤＡ−ＭＢ−４６８異種移植モデルにおける被検物品に関する腫瘍成長阻害率を、処置開始後２１日目に腫瘍体積測定に基づいて算出した。
Figure 2021527702
６．結果の要約および考察
本研究において、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８異種移植モデルにおける被検物品の治療的有効性を評価した。さまざまな時点における全ての処置群の測定された腫瘍体積を図６および表１４から１６に示す。
３ｍｇ／ｋｇ、週に１回（ＴＶ＝８５ｍｍ３、ＴＧＩ＝１４４．２％、ｐ＜０．００１）、３ｍｇ／ｋｇ、週に２回（ＴＶ＝２２ｍｍ３、ＴＧＩ＝１６９．８％、ｐ＜０．００１）および５ｍｇ／ｋｇ、週に１回（ＴＶ＝２９ｍｍ３、ＴＧＩ＝１６８．４％、ｐ＜０．００１）のＢＣＹ８２４５は、用量または用量−頻度依存的様式で有意な抗腫瘍活性を示した。
５ｍｇ／ｋｇの投薬群は２１日目から中断し、腫瘍は、追加の３週間のモニタリングスケジュール中に一切の再発を示さなかった。
［実施例５］
＜Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスのＮＣＩ−Ｈ２９２異種移植（非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）モデル）の処置におけるＢＣＹ８５４９のインビボ有効性試験＞
１．研究の目的
研究の目的は、Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスのＮＣＩ−Ｈ２９２異種移植の処置におけるＢＣＹ８５４９のインビボ抗腫瘍有効性を評価することである。
２．実験デザイン
Figure 2021527702
３．材料
３．１動物および室内条件
３．１．１．動物
種：ハツカネズミ
系統：Ｂａｌｂ／ｃヌード
年齢：６〜８週
性別：雌
体重：１８〜２２ｇ
動物数：４３匹のマウス＋スペア
動物供給業者：Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｌｉｎｇｃｈａｎｇ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃｏ．Ｌｔｄ
３．１．２．室内条件
マウスは、各ケージに３または４匹の動物を入れ、一定な温度および湿度で個々の換気ケージ中で維持した。
・温度：２０〜２６℃
・湿度４０〜７０％
ケージ：ポリカーボネート製。サイズは、３００ｍｍ×１８０ｍｍ×１５０ｍｍである。床敷材料はトウモロコシの穂軸であり、これは週に２回交換する。
飼料：動物は、研究期間全体を通して、照射滅菌された乾燥顆粒餌を自由に摂取できた。
水：動物は滅菌飲料水を自由に摂取できた。
ケージの同定：各ケージに関する同定ラベルには、動物数、性別、系統、受入日、処置、研究番号、群番号および処置開始日の情報が含まれていた。
動物の同定：動物は耳にコードを付けることによってマークした。
４．実験方法および手順
４．１ 細胞培養物
ＮＣＩ−Ｈ２９２腫瘍細胞を、１０％熱不活性化ウシ胎仔血清を添加したＲＰＭＩ−１６４０培地中、５％ＣＯ２雰囲気中３７℃で単層培養物としてインビトロで維持した。腫瘍細胞を、トリプシン−ＥＤＴＡ処置によって週に２回継代培養した。指数増殖期に増殖している細胞を採取し、計数し、腫瘍を接種した。
４．２ 腫瘍の接種
各マウスの右腹部に、ＰＢＳ０．２ｍｌ中のＮＣＩ−Ｈ２９２腫瘍細胞（１０×１０６）を皮下接種し、腫瘍を発生させた。平均腫瘍体積が１６８ｍｍ３に達した場合に４３匹の動物を無作為化した。被検物品の投与および各群における動物数を実験デザインの表に示した。
被検物品製剤の調製
Figure 2021527702
４．４ サンプル採取
研究の終わりに、２群のマウスの血漿を、最後に投薬してから５分、１５分、３０分、１時間および２時間後に採取した。
５．結果
５．１ 腫瘍成長曲線
腫瘍成長曲線を図７に示す。
５．２ 腫瘍体積トレース
ＮＣＩ−Ｈ２９２異種移植片を有する雌Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスにおける経時的な平均腫瘍体積を表１７に示す。
Figure 2021527702
５．３ 腫瘍成長阻害分析
ＮＣＩ−Ｈ２９２異種移植モデルにおける被検物品に関する腫瘍成長阻害率を、処置開始後１４日目に腫瘍体積測定に基づいて算出した。
Figure 2021527702
６．結果の要約および考察
本研究において、ＮＣＩ−Ｈ２９２異種移植モデルにおけるＢＣＹの治療的有効性を評価した。さまざまな時点における全ての処置群の測定された腫瘍体積を図７および表１７および１８に示す。
ビヒクル処置されたマウスの平均腫瘍サイズは、１４日目に８４３ｍｍ３に達した。３ｍｇ／ｋｇのＢＣＹ８５４９は有意な抗腫瘍活性を示した。本研究において、全てのマウスが体重を十分に維持した。
［実施例６］
＜複数の腫瘍タイプからのネクチン−４に関するコピー数変化（ＣＮＶ）と遺伝子発現との間の関連性の調査＞
＜方法＞
１．ｃＢｉｏＰｏｒｔａｌ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｂｉｏｐｏｒｔａｌ．ｏｒｇ／）において全ての研究を選択し、ネクチン４に関して探索する。
（ａ）暫定研究を除去する。
（ｂ）重複サンプルを含む研究の選択を解除し、サンプルの偏りを阻止する（ｃＢｉｏＰｏｒｔａｌの警告に基づいて）−これが任意である場合、ＰａｎＣａｎｃｅｒ研究を常に維持する。
（ｃ）研究を選択し、分析を行う（表１９）。
Figure 2021527702
Figure 2021527702
Figure 2021527702
Figure 2021527702
 ２．ｃＢｉｏＰｏｒｔａｌからＣＮＶおよびＲＮＡ発現データをエクスポートする。
３．ＣＮＶがネクチン−４に関するｍＲＮＡ発現における変化と統計的に有意に関連しているかどうかを試験する（ｌｏｇ２は適用しない）。
（ａ）ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（７．０４）およびＲ／Ｒｓｔｕｄｉｏでノンパラメトリッククラスカル−ウォリス検定を実行する（有意性に関する閾値：ｐ＜０．０１）。
（ｉ）ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ：列テーブルを設定し、マッチングまたはペアリングなしでノンパラメトリック検定を実行し、ガウス分布は仮定しない。
（ｉｉ）Ｒにおいて使用するパッケージ：
１．ＸＬＣｏｎｎｅｃｔ
２．ｄｐｌｙｒ
３．Ｋｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ Ｒａｎｋ Ｓｕｍ Ｔｅｓｔ：Ｋｒｕｓｋａｌ．ｔｅｓｔ
４．ダン検定を使用してＲ／Ｒｓｔｕｄｉｏで（例え群内でｎ＝１であっても全ての可能な比較を含む）多重比較のために調整する（有意性に関する閾値：ｐ＜０．０２５）。
（ａ）多重比較方法を含むダン検定＝「ボンフェローニ」
＜結果＞
結果を以下の表２０に示す。ネクチン−４に関する腫瘍ＣＮＶとｍＲＮＡ遺伝子発現データの両方を報告する４１の公的に利用可能なＴＣＧＡデータセットにわたって、ネクチン−４のコピー数の増加（２〜３コピー）または増幅（＞３コピー）のいずれかで症例が報告されている場合、多くの指標が存在する。更に、別の症例では、浅い欠損（＜２コピー）を有することが立証されており、１コピー超の損失または２対立遺伝子のネクチン−４損失と一致する深い欠損を含む腫瘍の稀な報告を伴う。増幅が最も頻繁に検出された指標は、乳がん（１０〜２２％）、膀胱がん（２０％）、肺がん（５〜７％）および肝細胞がん腫（８％）であった。コピー数の損失が最も多い指標は、腎臓嫌色素体（７７％）、腎明細胞がん腫（ＲＣＣ）（６．５％）、肉腫（１０％）、結腸がん（１０％）、頭頚部がん（７％）および肺扁平上皮がんであった。これらのデータは、腫瘍の指標内におよびそれにわたってさまざまなＣＮＶが存在し、異なる適応症にわたってコピー数パターンに多様性があることを示す。
ＴＣＧＡデータセット内のＣＮＶに加えて、１つの指標当たりのネクチン−４ｍＲＮＡ発現レベルの中央値は、およそ２１０の範囲をカバーする。その結果、ネクチン−４ｍＲＮＡ発現レベルの範囲ならびに腫瘍タイプにわたっておよびその内で観察されたＣＮＶを考慮して、統計的検定を行い、ネクチン−４ｍＲＮＡレベルと個々のＴＣＧＡデータセット／適応症内のネクチン−４ＣＮＶとの間の潜在的な関連を同定した。１つの指標当たりの腫瘍を５つのクラスのうちの１つに割り当てた。
ａ）深い欠失；
ｂ）浅い欠失；
ｃ）２倍体；
ｄ）増加；または
ｅ）増幅
次いで、クラスカル−ウォリス検定を行い、１クラス当たりのｍＲＮＡ発現値の分布がクラス間で異なる（Ｐ＜０．０１）かどうかを検出した。Ｐ＜０．０１のこれらのＴＣＧＡデータセットに関して、どのクラスが互いに異なっていたかを同定するために、算出された調整済みＰ値を有するＺ統計値を算出することによって事後検定を行った（ボンフェローニ）。説明を簡単にするために、ペアワイズ比較対２倍体を指標ごとにレビューした（ただし全てのペアワイズＰ値を算出した）。１８／４１ＴＣＧＡ研究は、増加対２倍体および／または増幅対２倍体の比較に関してクラスカル−ウォリスＰ＜０．０１およびボンフェローニＰ＜０．０２５を満たし、ネクチン−４ｍＲＮＡ発現の増加とネクチン−４コピー数の増加との関連を示す。これらの１８の研究は、１４の独立した腫瘍組織構造：乳房、子宮、膀胱、肺腺がん、肺扁平上皮、頸部、頭頚部、膵臓、甲状腺、直腸結腸、胸腺腫、肉腫、腎明細胞がん腫（ＲＣＣ）および胃を表す。
更に、６つの研究で、コピー数損失と関連してｍＲＮＡ発現が減少している。これら６つの研究のうち４つ：胃、肺扁平上皮、結腸および甲状腺は、ＣＮＶ損失と低発現との間の関連を示しただけではなく、高発現と関連するＣＮＶ増加も報告した。
一方で、２つの指標、腎臓嫌色素体および前立腺がんのみが、ＣＮＶ損失と低転写産物存在量との関連性を報告した。更に、コピー数増加が高発現と関連する（２倍体と比較して）ことを示す別の前立腺がん研究（転移性前立腺がん、ＳＵ２Ｃ／ＰＣＦ Ｄｒｅａｍ Ｔｅａｍ（Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ２０１５））が存在した。
腫瘍ＣＮＶ損失および増加とｍＲＮＡ発現レベルのこれらの観察は、そのような関連性が観察されたこれらの指標におけるネクチン−４腫瘍タンパク質発現の背後にある機序を表す場合がある。明らかにＣＮＶが予測可能なパターンでｍＲＮＡ発現レベルに影響を与えないと思われる指標、例えば肝細胞がん腫が存在する。本発明のある特定のネクチン−４二環式薬物コンジュゲートを用いたインビボ前臨床的有効性は、ＩＨＣによって測定されるようなネクチン−４タンパク質発現と相関することが立証されている。したがって、腫瘍ネクチン−４ＣＮＶがｍＲＮＡレベルと関連し、タンパク質発現レベルが予測される場合、増加（ｉｎｃｒｅａｓｅｓ）（増加（ｇａｉｎ）または増幅）したコピー数を含む腫瘍を呈する患者は、本発明のネクチン−４二環式薬物コンジュゲートに応答する可能性がより高い場合があることが正式にあり得る。患者が、ネクチン−４におけるＣＮＶの増加を用いて同定することができる場合、次いでこの情報を使用し、患者を選択し、本発明のネクチン−４二環式薬物コンジュゲートを用いて処置することができる。
Figure 2021527702
Figure 2021527702
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Figure 2021527702
Figure 2021527702
Figure 2021527702
Figure 2021527702
Figure 2021527702
Figure 2021527702
Figure 2021527702
Figure 2021527702
Figure 2021527702
Figure 2021527702
［実施例７］
＜６つの細胞株におけるネクチン−４の発現分析＞
１．研究の目的
研究の目的は、フローサイトメトリーによって、２つの乳がん（Ｔ−４７Ｄ、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８）、３つの肺がん（ＮＣＩ−Ｈ２９２、ＮＣＩ−Ｈ３２２、ＮＣＩ−Ｈ５２６）および１つの線維肉腫（ＨＴ−１０８０）細胞株を含む６つの細胞株におけるネクチン−４の発現を評価することであった。
２．パネル設計
Ｔ−４７Ｄ、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８、ＮＣＩ−Ｈ２９２、ＮＣＩ−Ｈ３２２およびＨＴ−１０８０におけるＦＣＭのためのパネル
Figure 2021527702
ＮＣＩ−Ｈ５２６のためのパネル
Figure 2021527702
３．材料
３．１．サンプル
細胞株リスト
Figure 2021527702
３．２．試薬
フローサイトメトリー分析のための抗体およびキット
Figure 2021527702
 ＤＰＢＳ（Ｃｏｒｎｉｎｇ−２１−０３１−ＣＶ）
染色緩衝液（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ−００−４２２２）
固定緩衝液（ＢＤ−５５４６５５）
３．３．機器
Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ遠心分離機５８１０Ｒ
ＢＤ ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏフローサイトメーター（ＢＤ）
４．実験方法および手順
４．１．サンプル採取
指数増殖期において成長している細胞株を回収する。トリパンブルー染色を用いた血球計算器によって細胞を計数する。細胞を４００×ｇ、４℃で５分間遠心分離し、細胞を染色緩衝液で２回洗浄し、染色緩衝液中で細胞を懸濁し、１×１０７／ｍＬにする。
４．２．抗体染色
１）９６ウェルＶプレートの各ウェルに細胞懸濁液１００μＬを分注した。
２）アイソタイプ対照または抗体を懸濁細胞に添加し、暗室中４℃で３０分間インキュベートした。
３）４００×ｇ、４℃で５分間遠心分離することによって細胞を２回洗浄し、上清を廃棄した。
４）固定緩衝液１００μＬを用いて細胞を再懸濁し、暗室中、４℃で３０分間インキュベートした。
５）３００×ｇ、４℃で５分間細胞を遠心分離することによって２回洗浄し、上清を除去した。
６）細胞染色緩衝液４００μＬ中に細胞を再懸濁した。
７）ＦｌｏｗＪｏ Ｖ１０ソフトウェアを使用してＦＡＣＳデータを分析した。
４．３．データ分析
全てのＦＡＣＳデータを、Ｆｌｏｗｊｏ Ｖ１０ソフトウェアおよびＧｒａｐｈＰａｄ ＰｒｉｓｍまたはＥｘｃｅｌソフトウェアによって分析した。
５．結果
５．１．パネルに関するゲート戦略
ネクチン−４に関するゲーティング戦略を図８〜１１に示す。
５．２．データ分析
５．２．１．細胞株の生存率
細胞株の生存率は以下の通りであった。
Figure 2021527702
５．２．２．細胞株におけるネクチン−４の陽性発現
６つの細胞株におけるネクチン−４の陽性発現およびＭＦＩは、リストの通りであった。
Figure 2021527702
６．考察
乳がんＴ−４７Ｄ（９９．０％）、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８（９９．０％）および肺がんＮＣＩ−Ｈ２９２（９７．９％）、ＮＣＩ−Ｈ３２２（９９．１％）においてネクチン−４の高発現が認められた。ＮＣＩ−Ｈ５２６およびＨＴ−１０８０では、ネクチン−４の発現は認められなかった。
［実施例８］
＜フローサイトメトリーによる９つのＣＤＸ細胞株におけるネクチン−４の発現分析＞
１．研究の目的
プロジェクトの目的は、１つの乳がん（ＭＤＡ−ＭＢ−４６８）、４つの肺がん（ＮＣＩ−Ｈ２９２、ＮＣＩ−Ｈ３５８、ＮＣＩ−Ｈ５２６、Ａ５４９）、１つの膵臓がん（Ｐａｎｃ０２．１３）、２つの直腸結腸がん（ＨＣＴ−１１６、ＨＴ−２９）および１つの膀胱がん（ＨＴ１３７６）細胞株を含む９つの細胞株において、ネクチン−４（ＰＶＲＬ−４）の表面発現を評価することである。
２．パネル設計
９つの細胞株におけるＦＣＭのためのパネル
Figure 2021527702
３．材料
３．１サンプル
細胞株リスト
Figure 2021527702
３．２．試薬
１）ＤＰＢＳ（Ｃｏｒｎｉｎｇ、２１−０３１−ＣＶ）
２）０．２５％トリプシン（ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ−２５２０００７２）
３）染色緩衝液（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、００−４２２２）
４）固定緩衝液（ＢＤ、５５４６５５）
５）抗体
Figure 2021527702
３．３．機器
Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ遠心分離機５８１０Ｒ
ＢＤ ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏフローサイトメーター（ＢＤ）
４．実験方法および手順
４．１細胞培養物
細胞の解凍
１）凍結バイアルを７０％アルコールで洗浄し、３７℃の水浴中でバイアルを素早く解凍した。
２）細胞懸濁液をおよそ１０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、上清を除去し、予め加温した培地をフラスコに添加した。
３）培養フラスコを、３７℃の５％ＣＯ２インキュベーターでインキュベートした。
細胞継代
１）３７℃の水浴中で培地およびトリプシンを加温した。
２）培養培地を除去し、細胞層をＤＰＢＳですすいだ。
３）０．２５％トリプシン溶液５ｍＬをフラスコに添加し、トリプシンを培地５ｍＬで希釈した。
４）細胞懸濁液を１０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。
５）新鮮な培地１５ｍＬを添加し、細胞を穏やかにピペッティングすることによって再懸濁した。
６）適切な細胞懸濁液を新規の培養フラスコに添加した。
７）培養フラスコを３７℃の５％ＣＯ２インキュベーターでインキュベートした。
４．２．サンプル採取
指数増殖期において成長している細胞株を採取した。トリパンブルー染色を用いて細胞を計数した。細胞を４００×ｇ、４℃で５分間遠心分離し、細胞を染色緩衝液で２回洗浄し、細胞を染色緩衝液中で５×１０６／ｍＬに懸濁した。
４．３．抗体染色
９６ウェルＶプレートの各ウェルに細胞懸濁液１００μＬを分注した。アイソタイプ対照または抗体を懸濁細胞に添加し、暗室中４℃で３０分間インキュベートした。細胞を、４００×ｇ、４℃で５分間遠心分離することによって２回洗浄し、上清を廃棄した。細胞を染色緩衝液３００μＬ中に再懸濁した。Ｆｌｏｗ Ｊｏ Ｖ１０ソフトウェアを使用してＦＡＣＳデータを分析した。
４．４．データ分析
全てのＦＡＣＳデータを、Ｆｌｏｗ Ｊｏ Ｖ１０ソフトウェアおよびＧｒａｐｈＰａｄ ＰｒｉｓｍまたはＥｘｃｅｌソフトウェアによって分析した。
５．結果
５．１．パネルに関するゲート戦略
ネクチン−４に関するゲーティング戦略を図１２〜１６に示す。
５．２．データ分析
９つの細胞株におけるネクチン−４の陽性発現およびＭＦＩはリストの通りであった。
Figure 2021527702
６．考察
膀胱がんＨＴ−１３７６（９２．４％）、乳がんＭＤＡ−ＭＢ−４６８（９７．１％）および肺がんＮＣＩ−Ｈ３５８（９０．１％）においてネクチン−４の高発現が認められた。ネクチン−４の中程度の発現が、ＨＴ−２９（４０．０％）、ＮＣＩ−Ｈ２９２（７１．１％）およびＰａｎｃ０２．１３（５１．９％）において認められた。ＨＣＴ−１１６、Ａ５４９およびＮＣＩ−５２６においてネクチン−４の発現は認められなかった。このデータは、有効性研究のためのモデル選択をガイドするために使用されるであろう。
［実施例９］
インビボ有効性研究
［実施例９．１］
＜Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスのＡ５４９異種移植の処置における被検物品のインビボ有効性研究＞
１．研究の目的
研究の目的は、Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスのＡ５４９異種移植の処置における被検物品のインビボ抗腫瘍有効性を評価することである。
２．実験デザイン
Figure 2021527702
３．材料
動物および室内条件
３．１．１．動物
種：ハツカネズミ
系統：Ｂａｌｂ／ｃヌード
年齢：６〜８週
性別：雌
体重：１８〜２２ｇ
動物数：４１匹のマウス＋スペア
３．１．２．室内条件
マウスは、各ケージに３または５匹の動物を入れ、一定な温度および湿度で個々の換気ケージ中で維持した。
・温度：２０〜２６℃
・湿度４０〜７０％
ケージ：ポリカーボネート製。サイズは、３００ｍｍ×１８０ｍｍ×１５０ｍｍである。床敷材料はトウモロコシの穂軸であり、これは週に２回交換する。
飼料：動物は、研究期間全体を通して、照射滅菌された乾燥顆粒餌を自由に摂取できた。
水：動物は滅菌飲料水を自由に摂取できた。
ケージの同定：各ケージに関する同定ラベルには、動物数、性別、系統、受入日、処置、研究番号、群番号および処置開始日の情報が含まれていた。
動物の同定：動物は耳にコードを付けることによってマークした。
４．実験方法および手順
４．１．細胞培養物
Ａ５４９腫瘍細胞を、１０％熱不活性化ウシ胎仔血清を添加したＦ−１２Ｋ培地中、５％ＣＯ２雰囲気中３７℃で単層培養物としてインビトロで維持した。腫瘍細胞を、トリプシン−ＥＤＴＡ処置によって週に２回定期的に継代培養した。指数増殖期に増殖している細胞を採取し、計数し、腫瘍を接種した。
４．２．腫瘍の接種
各マウスの右腹部に、ＰＢＳ０．２ｍｌ中のＡ５４９腫瘍細胞（５×１０６）を皮下接種し、腫瘍を発生させた。平均腫瘍体積が１５８ｍｍ３に達した場合に４１匹の動物を無作為化した。被検物品の投与および各群における動物数を実験デザインの表に示した。
４．３．被検物品製剤の調製
Figure 2021527702
４．４．サンプル採取
研究の終わりに、全ての群の腫瘍を、最後に投薬してから２時間後に採取した。
５．結果
５．１．腫瘍成長曲線
腫瘍成長曲線を図１７に示す。
５．２．腫瘍体積トレース
Ａ５４９異種移植片を有する雌Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスにおける経時的な平均腫瘍体積を表２１に示す。
Figure 2021527702
５．３．腫瘍成長阻害分析
Ａ５４９異種移植モデルにおける被検物品に関する腫瘍成長阻害率を、処置開始後１４日目に腫瘍体積測定に基づいて算出した。
Figure 2021527702
６．結果の要約および考察
本研究において、Ａ５４９異種移植モデルにおける被検物品の治療的有効性を評価した。さまざまな時点における全ての処置群の測定された腫瘍体積を図１７および表２１および２２に示す。
ビヒクル処置されたマウスの平均腫瘍サイズは、１４日目に５６８ｍｍ３に達した。３ｍｇ／ｋｇ、週に１回（ＴＶ＝３５６ｍｍ３、ＴＧＩ＝５１．４％、ｐ＜０．０５）、３ｍｇ／ｋｇ、週に２回（ＴＶ＝１９４ｍｍ３、ＴＧＩ＝９０．８％、ｐ＜０．０１）および５ｍｇ／ｋｇ、週に１回（ＴＶ＝２２８ｍｍ３、ＴＧＩ＝８２．６％、ｐ＜０．００１）のＢＣＹ８２４５は、用量または用量−頻度依存的様式で有意な抗腫瘍活性を示した。
ＢＣＹ８２４５群における動物は体重を十分に維持した。ＦＡＣＳ研究においてネクチン−４の最小限の発現を示すこの細胞株では、腫瘍成長は、ＢＣＹ８２４５によって抑制されるが、腫瘍は退縮せず、最適な有効性のための標的指向性の必要性が強調される。
［実施例９．２］
＜Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスのＨＣＴ１１６異種移植の処置における被検物品のインビボ有効性研究＞
１．研究の目的
研究の目的は、Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスのＨＣＴ１１６異種移植の処置における被検物品のインビボ抗腫瘍有効性を評価することである。
２．実験デザイン
Figure 2021527702
３．材料
３．１．動物および室内条件
３．１．１．動物
種：ハツカネズミ
系統：Ｂａｌｂ／ｃヌード
年齢：６〜８週
性別：雌
体重：１８〜２２ｇ
動物数：４１匹のマウス＋スペア
３．１．２．室内条件
マウスは、各ケージに３または５匹の動物を入れ、一定な温度および湿度で個々の換気ケージ中で維持した。
・温度：２０〜２６℃
・湿度４０〜７０％
ケージ：ポリカーボネート製。サイズは、３００ｍｍ×１８０ｍｍ×１５０ｍｍである。床敷材料はトウモロコシの穂軸であり、これは週に２回交換する。
飼料：動物は、研究期間全体を通して、照射滅菌された乾燥顆粒餌を自由に摂取できた。
水：動物は滅菌飲料水を自由に摂取できた。
ケージの同定：各ケージに関する同定ラベルには、動物数、性別、系統、受入日、処置、研究番号、群番号および処置開始日の情報が含まれていた。
動物の同定：動物は耳にコードを付けることによってマークした。
４．実験方法および手順
４．１．細胞培養物
ＨＣＴ１１６細胞を、ウシ胎仔血清を添加した１０％熱不活性化培地中、５％ＣＯ２雰囲気中３７℃で維持した。腫瘍細胞を、週に２回定期的に継代培養した。指数増殖期に増殖している細胞を採取し、計数し、腫瘍を接種した。
４．２．腫瘍の接種
各マウスの右腹部に、ＰＢＳ０．２ｍｌ中のＨＣＴ１１６腫瘍細胞（５．０×１０６）を皮下接種し、腫瘍を発生させた。平均腫瘍体積が１６６ｍｍ３に達した場合に４１匹の動物を無作為化した。被検物品の投与および各群における動物数を実験デザインの表に示した。
４．３．被検物品製剤の調製
Figure 2021527702
４．４．サンプル採取
１４日目の研究の終わりに、１および２群からの腫瘍をＦＦＰＥのために採取した。４群に関しては、血漿を投薬してから５分、１５分、３０分、６０分および１２０分後に採取した。腫瘍も採取し、−８０℃で保管した。
５．結果
５．１．腫瘍成長曲線
腫瘍成長曲線を図１８に示す。
５．２．腫瘍体積トレース
ＨＣＴ１１６異種移植片を有する雌Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスにおける経時的な平均腫瘍体積を表２３に示す。
Figure 2021527702
５．３．腫瘍成長阻害分析
ＨＣＴ１１６異種移植モデルにおける被検物品に関する腫瘍成長阻害率を、処置開始後１４日目に腫瘍体積測定に基づいて算出した。
Figure 2021527702
６．結果の要約および考察
本研究において、ＨＣＴ１１６異種移植モデルにおける被検物品の治療的有効性を評価した。さまざまな時点における全ての処置群の測定された腫瘍体積を図１８および表２３および２４に示す。
ビヒクル処置されたマウスの平均腫瘍サイズは、処置開始後１４日目に７６９ｍｍ３に達した。３ｍｇ／ｋｇ、週に１回（ＴＶ＝４２５ｍｍ３、ＴＧＩ＝５７．１％、ｐ＜０．００１）、３ｍｇ／ｋｇ、週に２回（ＴＶ＝１９７ｍｍ３、ＴＧＩ＝９４．９％、ｐ＜０．００１）および５ｍｇ／ｋｇ、週に１回（ＴＶ＝１３４ｍｍ３、ＴＧＩ＝１０５．２％、ｐ＜０．００１）のＢＣＹ８２４５は、用量または用量−頻度依存的様式で有意な抗腫瘍活性を示した。
本研究において、５ｍｇ／ｋｇ週に１回の群の全てにおける動物の体重が、平均で１０％を超えて減少した。
ＦＡＣＳ研究においてネクチン−４の最小限の発現を示すこの細胞株において、腫瘍成長はＢＣＹ８２４５によって抑制されるが、腫瘍は退縮せず、最適な有効性のための標的指向性の必要性が強調される。
［実施例９．３］
＜ＣＢ１７−ＳＣＩＤマウスのＨＴ−１３７６異種移植の処置における被検物品のインビボ有効性研究＞
１．研究の目的
研究の目的は、ＣＢ１７−ＳＣＩＤマウスのＨＴ−１３７６異種移植の処置における被検物品のインビボ抗腫瘍有効性を評価することである。
２．実験デザイン
Figure 2021527702
３．材料
３．１動物および室内条件
３．１．１．動物
種：ハツカネズミ
系統：ＣＢ１７−ＳＣＩＤ
年齢：６〜８週
性別：雌
体重：１８〜２２ｇ
動物数：４１匹のマウス＋スペア
３．１．２．室内条件
マウスは、各ケージに３または５匹の動物を入れ、一定な温度および湿度で個々の換気ケージ中で維持した。
・温度：２０〜２６℃
・湿度４０〜７０％
ケージ：ポリカーボネート製。サイズは、３００ｍｍ×１８０ｍｍ×１５０ｍｍである。床敷材料はトウモロコシの穂軸であり、これは週に２回交換する。
飼料：動物は、研究期間全体を通して、照射滅菌された乾燥顆粒餌を自由に摂取できた。
水：動物は滅菌飲料水を自由に摂取できた。
ケージの同定：各ケージに関する同定ラベルには、動物数、性別、系統、受入日、処置、研究番号、群番号および処置開始日の情報が含まれていた。
動物の同定：動物は耳にコードを付けることによってマークした。
４．実験方法および手順
４．１細胞培養物
ＨＴ−１３７６腫瘍細胞は、１０％熱不活性化ウシ胎仔血清を添加したＥＭＥＭ培地中、５％ＣＯ２雰囲気中３７℃で維持されることになる。腫瘍細胞は、週に２回定期的に継代培養されることになる。指数増殖期に増殖している細胞を採取し、計数し、腫瘍を接種することになる。
４．２腫瘍の接種
各マウスの右腹部に、ＰＢＳ０．２ｍｌ中のＨＴ−１３７６腫瘍細胞（５×１０６）をマトリゲル（１：１）と共に皮下接種し、腫瘍を発生させた。平均腫瘍体積が１５３ｍｍ３に達した場合に４１匹の動物を無作為化した。被検物品の投与および各群における動物数を実験デザインの表に示した。
４．３．被検物品製剤の調製
Figure 2021527702
４．４．サンプル採取
研究の終わりに、４群の血漿を、最後に投薬してから５分、１５分、３０分、６０分および１２０分後に採取した。４群の腫瘍を最後に投薬してから２時間後に採取した。１、２および３群の腫瘍は、最後に投薬してから２時間後に採取した。
５．結果
５．１．腫瘍成長曲線
腫瘍成長曲線を図１９に示す。
５．２．腫瘍体積トレース
ＨＴ−１３７６異種移植片を有する雌ＣＢ１７−ＳＣＩＤマウスにおける経時的な平均腫瘍体積を表２５に示す。
Figure 2021527702
５．３．腫瘍成長阻害分析
ＨＴ−１３７６異種移植モデルにおける被検物品に関する腫瘍成長阻害率を、処置開始後１４日目に腫瘍体積測定に基づいて算出した。
Figure 2021527702
６．結果の要約および考察
本研究において、ＨＴ−１３７６異種移植モデルにおける被検物品の治療的有効性を評価した。さまざまな時点における全ての処置群の測定された腫瘍体積を図１９および表２５および２６に示す。
ビヒクル処置されたマウスの平均腫瘍サイズは、１４日目に１０６９ｍｍ３に達した。３ｍｇ／ｋｇ、週に１回（ＴＶ＝６０３ｍｍ３、ＴＧＩ＝５０．９％、ｐ＜０．０１）、３ｍｇ／ｋｇ、週に２回（ＴＶ＝４０７ｍｍ３、ＴＧＩ＝７２．３％、ｐ＜０．００１）および５ｍｇ／ｋｇ、週に１回（ＴＶ＝４６５ｍｍ３、ＴＧＩ＝６６．０％、ｐ＜０．００１）のＢＣＹ８２４５は、有意な抗腫瘍活性を示した。本研究において、５ｍｇ／ｋｇ、週に１回のＢＣＹ８２４５は、処置スケジュール中に１０％を超える動物体重減少をもたらした。
［実施例９．４］
＜Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスのＭＤＡ−ＭＢ−４６８異種移植の処置における被検物品のインビボ有効性研究＞
１．研究の目的
研究の目的は、Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスのＭＤＡ−ＭＢ−４６８異種移植の処置における被検物品のインビボ抗腫瘍有効性を評価することである。
２．実験デザイン
Figure 2021527702
３．材料
３．１．動物および室内条件
３．１．１．動物
種：ハツカネズミ
系統：Ｂａｌｂ／ｃヌード
年齢：６〜８週
性別：雌
体重：１８〜２２ｇ
動物数：４１匹のマウス＋スペア
３．１．２．室内条件
マウスは、各ケージに３または５匹の動物を入れ、一定な温度および湿度で個々の換気ケージ中で維持した。
・温度：２０〜２６℃
・湿度４０〜７０％
ケージ：ポリカーボネート製。サイズは、３００ｍｍ×１８０ｍｍ×１５０ｍｍである。床敷材料はトウモロコシの穂軸であり、これは週に２回交換する。
飼料：動物は、研究期間全体を通して、照射滅菌された乾燥顆粒餌を自由に摂取できた。
水：動物は滅菌飲料水を自由に摂取できた。
ケージの同定：各ケージに関する同定ラベルには、動物数、性別、系統、受入日、処置、研究番号、群番号および処置開始日の情報が含まれていた。
動物の同定：動物は耳にコードを付けることによってマークした。
４．実験方法および手順
４．１．細胞培養物
腫瘍細胞を、１０％熱不活性化ウシ胎仔血清を添加したライボビッツＬ−１５培地中、５％ＣＯ２雰囲気中３７℃で維持した。腫瘍細胞を週に２回定期的に継代培養した。指数増殖期に増殖している細胞を採取し、計数し、腫瘍を接種した。
４．２．腫瘍の接種
各マウスの右腹部に、５０％マトリゲルを添加した、ＰＢＳ０．２ｍｌ中のＭＤＡ−ＭＢ−４６８腫瘍細胞（１０×１０６）を皮下接種し、腫瘍を発生させた。平均腫瘍体積が１９６ｍｍ３に達した場合に４１匹の動物を無作為化した。被検物品の投与および各群における動物数を実験デザインの表に示した。
４．３．被検物品製剤の調製
Figure 2021527702
４．４．サンプル採取
研究の２１日目に、２群の血漿を、最後に投薬してから５分、１５分、３０分、６０分および１２０分後に採取した。１および３群の腫瘍を、最後に投薬してから２時間後に採取した。４群の動物は、一切投薬せずに更に２１日間の実行を維持し、これらの群の腫瘍を４２日目に採取した。
５．結果
５．１．腫瘍成長曲線
腫瘍成長曲線を図２０に示す。
５．２．腫瘍体積トレース
ＭＤＡ−ＭＢ−４６８異種移植片を有する雌Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスにおける経時的な平均腫瘍体積を表２７および２８に示す。
５．３．腫瘍成長阻害分析
ＭＤＡ−ＭＢ−４６８異種移植モデルにおける被検物品に関する腫瘍成長阻害率を、処置開始後２１日目に腫瘍体積測定に基づいて算出した。
Figure 2021527702
Figure 2021527702
Figure 2021527702
６．結果の要約および考察
本研究において、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８異種移植モデルにおける被検物品の治療的有効性を評価した。さまざまな時点における全ての処置群の測定された腫瘍体積を図２０および表２７から２９に示す。
ビヒクル処置されたマウスの平均腫瘍サイズは、２１日目に４４７ｍｍ３に達した。３ｍｇ／ｋｇ、週に１回（ＴＶ＝８５ｍｍ３、ＴＧＩ＝１４４．２％、ｐ＜０．００１）、３ｍｇ／ｋｇ、週に２回（ＴＶ＝２２ｍｍ３、ＴＧＩ＝１６９．８％、ｐ＜０．００１）および５ｍｇ／ｋｇ、週に１回（ＴＶ＝２９ｍｍ３、ＴＧＩ＝１６８．４％、ｐ＜０．００１）のＢＣＹ８２４５は、用量または用量−頻度依存的様式で有意な抗腫瘍活性を示した。
５ｍｇ／ｋｇの投薬群は２１日目から中断し、腫瘍は、追加の３週間のモニタリングスケジュール中に一切の再発を示さなかった。ＦＡＣＳ研究においてネクチン−４の高発現を示すこの細胞株において、ＢＣＹ８２４５は腫瘍の退縮をもたらし、最適な有効性の標的指向性の特性が強調される。
［実施例９．５］
＜Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスのＮＣＩ−Ｈ２９２異種移植の処置における被検物品のインビボ有効性研究＞
１．研究の目的
研究の目的は、Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスのＮＣＩ−Ｈ２９２異種移植の処置における被検物品のインビボ抗腫瘍有効性を評価することである。
２．実験デザイン
Figure 2021527702
３．材料
３．１．動物および室内条件
３．１．１．動物
種：ハツカネズミ
系統：Ｂａｌｂ／ｃヌード
年齢：６〜８週
性別：雌
体重：１８〜２２ｇ
動物数：４１匹のマウス＋スペア
３．１．２．室内条件
マウスは、各ケージに３または５匹の動物を入れ、一定な温度および湿度で個々の換気ケージ中で維持した。
・温度：２０〜２６℃
・湿度４０〜７０％
ケージ：ポリカーボネート製。サイズは、３００ｍｍ×１８０ｍｍ×１５０ｍｍである。床敷材料はトウモロコシの穂軸であり、これは週に２回交換する。
飼料：動物は、研究期間全体を通して、照射滅菌された乾燥顆粒餌を自由に摂取できた。
水：動物は滅菌飲料水を自由に摂取できた。
ケージの同定：各ケージに関する同定ラベルには、動物数、性別、系統、受入日、処置、研究番号、群番号および処置開始日の情報が含まれていた。
動物の同定：動物は耳にコードを付けることによってマークした。
４．実験方法および手順
４．１．細胞培養物
ＮＣＩ−Ｈ２９２腫瘍細胞を、１０％熱不活性化ウシ胎仔血清を添加したＲＰＭＩ−１６４０培地中、５％ＣＯ２雰囲気中３７℃で、単層培養物としてインビトロで維持した。腫瘍細胞を、トリプシン−ＥＤＴＡ処置によって週に２回定期的に継代培養した。指数増殖期に増殖している細胞を採取し、計数し、腫瘍を接種した。
４．２．腫瘍の接種
各マウスの右腹部に、ＰＢＳ０．２ｍｌ中のＮＣＩ−Ｈ２９２腫瘍細胞（１０×１０６）を皮下接種し、腫瘍を発生させた。平均腫瘍体積が１６２ｍｍ３に達した場合に４１匹の動物を無作為化した。被検物品の投与および各群における動物数を実験デザインの表に示した。
４．３．被検物品製剤の調製
Figure 2021527702
４．４．サンプル採取
研究の終わりに、全ての群の腫瘍を、最後に投薬してから２時間後に採取した。
５．結果
５．１．腫瘍成長曲線
腫瘍成長曲線を図２１に示す。
５．２．腫瘍体積トレース
ＮＣＩ−Ｈ２９２異種移植片を有する雌Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスにおける経時的な平均腫瘍体積を表３０に示す。
Figure 2021527702
５．３．腫瘍成長阻害分析
ＮＣＩ−Ｈ２９２異種移植モデルにおける被検物品に関する腫瘍成長阻害率を、処置開始後１４日目に腫瘍体積測定に基づいて算出した。
Figure 2021527702
６．結果の要約および考察
本研究において、ＮＣＩ−Ｈ２９２異種移植モデルにおける被検物品の治療的有効性を評価した。さまざまな時点における全ての処置群の測定された腫瘍体積を図２１および表３０および３１に示す。
ビヒクル処置されたマウスの平均腫瘍サイズは、１４日目に９４８ｍｍ３に達した。３ｍｇ／ｋｇ、週に１回（ＴＶ＝１４９ｍｍ３、ＴＧＩ＝１０１．４％、ｐ＜０．００１）、３ｍｇ／ｋｇ、週に２回（ＴＶ＝６５ｍｍ３、ＴＧＩ＝１１２．２％、ｐ＜０．００１）および５ｍｇ／ｋｇ、週に１回（ＴＶ＝８３ｍｍ３、ＴＧＩ＝１０９．８％、ｐ＜０．００１）のＢＣＹ８２４５は、有意な抗腫瘍活性を示した。
３ｍｇ／ｋｇ、週に１回、３ｍｇ／ｋｇ、週に２回および５ｍｇ／ｋｇ、週に１回の被検物品全てが同等の抗腫瘍活性を示し、投薬量または投薬頻度を増加させた場合、有効性は更に改善されなかった。
本研究において、全ての群におけるマウスが体重を十分に維持した。
ＦＡＣＳ研究においてネクチン−４の高発現を示すこの細胞株において、ＢＣＹ８２４５は腫瘍の退縮をもたらし、最適な有効性の標的指向性の特性が強調される。
［実施例９．６］
＜Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスのＮＣＩ−Ｈ５２６異種移植の処置における被検物品のインビボ有効性研究＞
１．研究の目的
研究の目的は、Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスのＮＣＩ−Ｈ５２６異種移植の処置における被検物品のインビボ抗腫瘍有効性を評価することである。
２．実験デザイン
Figure 2021527702
３．材料
３．１．動物および室内条件
３．１．１．動物
種：ハツカネズミ
系統：Ｂａｌｂ／ｃヌード
年齢：６〜８週
性別：雌
体重：１８〜２２ｇ
動物数：２１匹のマウス＋スペア
３．１．２．室内条件
マウスは、各ケージに３匹の動物を入れ、一定の温度および湿度で個々の換気ケージ中で維持した。
・温度：２０〜２６℃
・湿度４０〜７０％
ケージ：ポリカーボネート製。サイズは、３００ｍｍ×１８０ｍｍ×１５０ｍｍである。床敷材料はトウモロコシの穂軸であり、これは週に２回交換する。
飼料：動物は、研究期間全体を通して、照射滅菌された乾燥顆粒餌を自由に摂取できた。
水：動物は滅菌飲料水を自由に摂取できた。
ケージの同定：各ケージに関する同定ラベルには、動物数、性別、系統、受入日、処置、研究番号、群番号および処置開始日の情報が含まれていた。
動物の同定：動物は耳にコードを付けることによってマークした。
４．実験方法および手順
４．１．細胞培養物
ＮＣＩ−Ｈ５２６細胞を、１０％熱不活性化ウシ胎仔血清を添加した培地中、５％ＣＯ２雰囲気中３７℃で維持した。腫瘍細胞を週に２回定期的に継代培養した。指数増殖期に増殖している細胞を採取し、計数し、腫瘍を接種した。
４．２．腫瘍の接種
各マウスの右腹部に、ＰＢＳ０．２ｍｌ中のＮＣＩ−Ｈ５２６腫瘍細胞（５．０×１０６）を皮下接種し、腫瘍を発生させた。平均腫瘍体積が１８１ｍｍ３に達した場合に２１匹の動物を無作為化した。被検物品の投与および各群における動物数を実験デザインの表に示した。
４．３．被検物品製剤の調製
Figure 2021527702
４．４．サンプル採取
１４日目の研究の終わりに、全ての腫瘍をＦＦＰＥのために採取した。
５．結果
５．１．腫瘍成長曲線
腫瘍成長曲線を図２２に示す。
５．２．腫瘍体積トレース
ＮＣＩ−Ｈ５２６異種移植片を有する雌Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスにおける経時的な平均腫瘍体積を表３２に示す。
Figure 2021527702
５．３．腫瘍成長阻害分析
ＮＣＩ−Ｈ５２６異種移植モデルにおける被検物品に関する腫瘍成長阻害率を、処置開始後１４日目に腫瘍体積測定に基づいて算出した。
Figure 2021527702
６．結果の要約および考察
本研究において、ＮＣＩ−Ｈ５２６異種移植モデルにおける被検物品の治療的有効性を評価した。さまざまな時点における全ての処置群の測定された腫瘍体積を図２２および表３２および３３に示す。
ビヒクル処置されたマウスの平均腫瘍サイズは、処置開始後１４日目に１３６５３に達した。３ｍｇ／ｋｇ、週に１回（ＴＶ＝１２０５ｍｍ３、ＴＧＩ＝１３．４％、ｐ＞０．０５）および３ｍｇ／ｋｇ、週に２回（ＴＶ＝１１０９ｍｍ３、ＴＧＩ＝２１．６％、ｐ＞０．０５）のＢＣＹ８２４５は、わずかな抗腫瘍活性を示し、５ｍｇ／ｋｇ、週に１回（ＴＶ＝４７６ｍｍ３、ＴＧＩ＝７５．０％、ｐ＜０．０１）のＢＣＹ８２４５は、有意な抗腫瘍活性を示した。本研究において、５ｍｇ／ｋｇ、週に２回のＢＣＹ８２４５は１０％を超える動物の体重減少をもたらした。ＦＡＣＳ研究においてネクチン−４の最小限の発現を示すこの細胞株において、腫瘍成長は、ＢＣＹ８２４５によって抑制されるが腫瘍は退縮せず、最適な有効性のための標的指向性の必要性が強調される。
［実施例９．７］
＜ヌードマウスのＰａｎｃ２．１３異種移植Ｂａｌｂ／ｃの処置における被検物品のインビボ有効性研究＞
１．研究の目的
研究の目的は、Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスのＰａｎｃ２．１３異種移植の処置における被検物品のインビボ抗腫瘍有効性を評価することである。
２．実験デザイン
Figure 2021527702
３．材料
３．１．動物および室内条件
３．１．１．動物
種：ハツカネズミ
系統：Ｂａｌｂ／ｃヌード
年齢：６〜８週
性別：雌
体重：１８〜２２ｇ
動物数：４１匹のマウス＋スペア
３．１．２．室内条件
マウスは、各ケージに３または５匹の動物を入れ、一定な温度および湿度で個々の換気ケージ中で維持した。
・温度：２０〜２６℃
・湿度４０〜７０％
ケージ：ポリカーボネート製。サイズは、３００ｍｍ×１８０ｍｍ×１５０ｍｍである。床敷材料はトウモロコシの穂軸であり、これは週に２回交換する。
飼料：動物は、研究期間全体を通して、照射滅菌された乾燥顆粒餌を自由に摂取できた。
水：動物は滅菌飲料水を自由に摂取できた。
ケージの同定：各ケージに関する同定ラベルには、動物数、性別、系統、受入日、処置、研究番号、群番号および処置開始日の情報が含まれていた。
動物の同定：動物は耳にコードを付けることによってマークした。
４．実験方法および手順
４．１．細胞培養物
Ｐａｎｃ２．１３腫瘍細胞は、１５％熱不活性化ウシ胎仔血清および１０単位／ｍｌヒト組換えインスリンを添加したＲＭＰＩ１６４０培地中、５％ＣＯ２雰囲気中３７℃で維持されることになる。腫瘍細胞は、週に２回定期的に継代培養されることになる。指数増殖期に増殖している細胞を採取し、計数し、腫瘍を接種することになる。
４．２．腫瘍の接種
各マウスの右腹部に、ＰＢＳ０．２ｍｌ中のＰａｎｃ２．１３腫瘍細胞（５×１０６）をマトリゲル（１：１）と共に皮下接種し、腫瘍を発生させた。平均腫瘍体積が１４９ｍｍ３に達した場合に４１匹の動物を無作為化した。被検物品の投与および各群における動物数を実験デザインの表に示した。
４．３．被検物品製剤の調製
Figure 2021527702
４．４．サンプル採取
研究の終わりに、全ての群の腫瘍を、最後に投薬してから２時間後に採取した。
５．結果
５．１．腫瘍成長曲線
腫瘍成長曲線を図２３に示す。
５．２．腫瘍体積トレース
Ｐａｎｃ２．１３異種移植片を有する雌Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスにおける経時的な平均腫瘍体積を表３４に示す。
Figure 2021527702
５．３．腫瘍成長阻害分析
Ｐａｎｃ２．１３異種移植モデルにおける被検物品に関する腫瘍成長阻害率を、処置開始後１４日目に腫瘍体積測定に基づいて算出した。
Figure 2021527702
６．結果の要約および考察
本研究において、Ｐａｎｃ２．１３異種移植モデルにおける被検物品の治療的有効性を評価した。さまざまな時点における全ての処置群の測定された腫瘍体積を図２３および表３４および３５に示す。
ビヒクル処置されたマウスの平均腫瘍サイズは、１４日目に５４５ｍｍ３に達した。３ｍｇ／ｋｇ、週に１回（ＴＶ＝２７１ｍｍ３、ＴＧＩ＝６９．２％、ｐ＜０．０１）、３ｍｇ／ｋｇ、週に２回（ＴＶ＝２３１ｍｍ３、ＴＧＩ＝７９．１％、ｐ＜０．００１）および５ｍｇ／ｋｇ、週に１回（ＴＶ＝２３８ｍｍ３、ＴＧＩ＝７７．５％、ｐ＜０．００１）のＢＣＹ８２４５は、有意な抗腫瘍活性を示した。本研究において、５ｍｇ／ｋｇ、週に１回の群の全ての動物の体重が、平均１５％を超えて減少した。ＦＡＣＳ研究においてネクチン−４の中程度発現のみを示すこの細胞株において、腫瘍成長は、ＢＣＹ８２４５によって抑制されるが、腫瘍は退縮していない。
［実施例９．８］
＜Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスのＭＤＡ−ＭＢ−４６８異種移植の処置における被検物品のインビボ有効性研究＞
１．研究の目的
研究の目的は、Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスのＭＤＡ−ＭＢ−４６８異種移植の処置におけるＢＣＹ８２４５およびＢＣＹ８２４５とＢＣＹ８２３４との組合せのインビボ抗腫瘍有効性を評価し、標的結合が最適な有効性を果たすことになる役割を判定することである。
２．実験デザイン
Figure 2021527702
３．材料
３．１．動物および室内条件
３．１．１．動物
種：ハツカネズミ
系統：Ｂａｌｂ／ｃヌード
年齢：６〜８週
性別：雌
体重：１８〜２２ｇ
動物数：３６匹のマウス＋スペア
３．１．２．室内条件
マウスは、各ケージに４匹の動物を入れ、一定な温度および湿度で個々の換気ケージ中で維持した。
・温度：２０〜２６℃
・湿度４０〜７０％
ケージ：ポリカーボネート製。サイズは、３００ｍｍ×１８０ｍｍ×１５０ｍｍである。床敷材料はトウモロコシの穂軸であり、これは週に２回交換する。
飼料：動物は、研究期間全体を通して、照射滅菌された乾燥顆粒餌を自由に摂取できた。
水：動物は滅菌飲料水を自由に摂取できた。
ケージの同定：各ケージに関する同定ラベルには、動物数、性別、系統、受入日、処置、研究番号、群番号および処置開始日の情報が含まれていた。
動物の同定：動物は耳にコードを付けることによってマークした。
４．実験方法および手順
４．１．細胞培養物
腫瘍細胞を、１０％熱不活性化ウシ胎仔血清を添加したライボビッツＬ−１５培地中、空気中の０％ＣＯ２雰囲気中３７℃で維持した。腫瘍細胞を週に２回定期的に継代培養した。指数増殖期に増殖している細胞を採取し、計数し、腫瘍を接種した。
４．２．腫瘍の接種
各マウスの右腹部に、５０％マトリゲルを添加した、ＰＢＳ０．２ｍｌ中のＭＤＡ−ＭＢ−４６８腫瘍細胞（１０×１０６）を皮下接種し、腫瘍を発生させた。平均腫瘍体積が１８６ｍｍ３に達した場合に３６匹の動物を無作為化した。被検物品の投与および各群における動物数を実験デザインの表に示した。
４．３．被検物品製剤の調製
Figure 2021527702
４．４．サンプル採取
研究の２１日目に、５および６群の腫瘍をＦＦＰＥのために採取した。研究の終わりに、３群の腫瘍をＦＦＰＥのために採取した。
５．結果
５．１．腫瘍成長曲線
腫瘍成長曲線を図２４に示す。
５．２．腫瘍体積トレース
ＭＤＡ−ＭＢ−４６８異種移植片を有する雌Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスにおける経時的な平均腫瘍体積を表３６から３８に示す。
５．３．腫瘍成長阻害分析
ＭＤＡ−ＭＢ−４６８異種移植モデルにおける被検物品に関する腫瘍成長阻害率を、処置開始後２１日目に腫瘍体積測定に基づいて算出した。
６．結果の要約および考察
本研究において、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８異種移植モデルにおける被検物品の治療的有効性を評価した。さまざまな時点における全ての処置群の測定された腫瘍体積を図２４および表３６から３９に示す。
ビヒクル処置されたマウスの平均腫瘍サイズは、２１日目に４２０ｍｍ３に達した。１ｍｇ／ｋｇ、週に１回（ＴＶ＝２０４ｍｍ３、ＴＧＩ＝９２．１％、ｐ＜０．００１）、３ｍｇ／ｋｇ、週に１回（ＴＶ＝２７ｍｍ３、ＴＧＩ＝１６４．９％、ｐ＜０．００１）のＢＣＹ８２４５は、用量依存性様式で有意な抗腫瘍活性を示した。０．３ｍｇ／ｋｇ、週に１回または週に２回のＢＣＹ８２４５は抗腫瘍活性を一切示さなかった。
３００ｍｇ／ｋｇ、週に１回のＢＣＹ８２３４（毒素不含同族ペプチド）と組み合わせた１ｍｇ／ｋｇ、週に１回および３ｍｇ／ｋｇ、週に１回のＢＣＹ８２４５は、有意な抗腫瘍活性を示した（ＴＶ＝２４２ｍｍ３、ＴＧＩ＝７５．４％、ｐ＜０．０１）。ＢＣＹ８２４５単独と比較した場合、３ｍｇ／ｋｇのＢＣＹ８２４５の抗腫瘍活性は３００ｍｇ／ｋｇのＢＣＹ８２３４によって拮抗された（ｐ＜０．００１）。競合する毒素不含ペプチドによる有効性のこの低下によって、最適な有効性に関する標的結合の重要性が実証される。以下のモニタリングスケジュール中、１ｍｇ／ｋｇ、週に１回のＢＣＹ８２４５で処置されたマウスは、明らかな腫瘍再発を示したが、同時に３ｍｇ／ｋｇ、週に１回のＢＣＹ８２４５で処置されたマウスは腫瘍再発を一切示さなかった。
Figure 2021527702
Figure 2021527702
Figure 2021527702
Figure 2021527702
［実施例９．９］
＜Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスのＭＤＡ−ＭＢ−４６８異種移植の処置における被検物品のインビボ有効性研究＞
１．研究の目的
研究の目的は、Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスのＭＤＡ−ＭＢ−４６８異種移植の処置における、ＢＣＹ８２４５単独またはＢＣＹ８２３４との組合せのインビボ抗腫瘍有効性を評価することである。
２．実験デザイン
Figure 2021527702
３．材料
３．１動物および室内条件
３．１．１．動物
種：ハツカネズミ
系統：Ｂａｌｂ／ｃヌード
年齢：６〜８週
性別：雌
体重：１８〜２２ｇ
動物数：２０匹のマウス＋スペア
３．１．２．室内条件
マウスは、各ケージに５匹の動物を入れ、一定な温度および湿度で個々の換気ケージ中で維持した。
・温度：２０〜２６℃
・湿度４０〜７０％
ケージ：ポリカーボネート製。サイズは、３００ｍｍ×１８０ｍｍ×１５０ｍｍである。床敷材料はトウモロコシの穂軸であり、これは週に２回交換する。
飼料：動物は、研究期間全体を通して、照射滅菌された乾燥顆粒餌を自由に摂取できた。
水：動物は滅菌飲料水を自由に摂取できた。
ケージの同定：各ケージに関する同定ラベルには、動物数、性別、系統、受入日、処置、研究番号、群番号および処置開始日の情報が含まれていた。
動物の同定：動物は耳にコードを付けることによってマークした。
４．実験方法および手順
４．１細胞培養物
腫瘍細胞を、１０％熱不活性化ウシ胎仔血清を添加したライボビッツＬ−１５培地中、空気中の０％ＣＯ２雰囲気中３７℃で維持した。腫瘍細胞を週に２回定期的に継代培養した。指数増殖期に増殖している細胞を採取し、計数し、腫瘍を接種した。
４．２．腫瘍の接種
各マウスの右腹部に、５０％マトリゲルを添加した、ＰＢＳ０．２ｍｌ中のＭＤＡ−ＭＢ−４６８腫瘍細胞（１０×１０６）を皮下接種し、腫瘍を発生させた。平均腫瘍体積が４６４ｍｍ３に達した場合に２０匹の動物を無作為化した。被検物品の投与および各群における動物数を実験デザインの表に示した。
４．３．被検物品製剤の調製
Figure 2021527702
４．４．サンプル採取
研究の終わりに、３群の腫瘍をＦＦＰＥのために採取した。
５．結果
５．１．腫瘍成長曲線
腫瘍成長曲線を図２５に示す。
５．２．腫瘍体積トレース
ＭＤＡ−ＭＢ−４６８異種移植片を有する雌Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスにおける経時的な平均腫瘍体積を表４０から４２に示す。
５．３．腫瘍成長阻害分析
ＭＤＡ−ＭＢ−４６８異種移植モデルにおける被検物品に関する腫瘍成長阻害率を、処置開始後２８日目に腫瘍体積測定に基づいて算出した。
６．結果の要約および考察
本研究において、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８異種移植モデルにおける被検物品の治療的有効性を評価した。さまざまな時点における全ての処置群の測定された腫瘍体積を図２５および表４０から４３に示す。
初期の腫瘍出発サイズは、ＢＣＹ８２４５がこの大きなサイズにおいて有効性を示したかどうかを判定するために、以前に使用されたものよりも意図的に大きくした。ビヒクル処置されたマウスの平均腫瘍サイズは、２８日目に７７３ｍｍ３に達した。１ｍｇ／ｋｇ、週に１回（ＴＶ＝３８４ｍｍ３、ＴＧＩ＝１２６．６％、ｐ＜０．００１）および３ｍｇ／ｋｇ、週に１回（ＴＶ＝５０ｍｍ３、ＴＧＩ＝２３４．６％、ｐ＜０．００１）のＢＣＹ８２４５は、２８日目に用量依存的様式で有意な抗腫瘍活性を示した。これらの中で、３ｍｇ／ｋｇ、週に１回のＢＣＹ８２４５で処置されたマウスは、処置を中止した後にいくつかの腫瘍再発を示し、７６日目から更に投薬しても腫瘍退縮にほぼ効果はなかった。
３００ｍｇ／ｋｇ、週に１回のＢＣＹ８２３４と組み合わせた３ｍｇ／ｋｇ、週に１回のＢＣＹ８２４５は、２８日目に有意な抗腫瘍活性を示し（ＴＶ＝５５ｍｍ３、ＴＧＩ＝２３４．０％、ｐ＜０．００１）、腫瘍は、モニタリングスケジュール全体を通して一切の再発を示さなかった。
ＰＧ−Ｄ２８に対して、１０ｍｇ／ｋｇのネクチン−４ＡＤＣまたは５ｍｇ／ｋｇのＢＣＹ８２４５で処置したビヒクル群のマウスおよび５ｍｇ／ｋｇのＢＣＹ８２４５で処置した２群（ＢＣＹ８２４５、１ｍｐｋ、週に１回）のマウスは、３週後に効果的な腫瘍退縮を示し、その後薬物を中断した場合、腫瘍は次の４週で再成長を示した。
ＢＣＹ８２４５は、およそ４５０ｍｍ３の腫瘍においてだけではなく、ビヒクルが以前に投与された群に投与した場合、およそ７７０ｍｍ３の出発体積を有する腫瘍においても腫瘍退縮をもたらすことができた。
Figure 2021527702
Figure 2021527702
Figure 2021527702
Figure 2021527702
［実施例１０：インビボ ＰＫ研究］
ＭＤＡ−ＭＢ−４６８異種移植動物に、３ｍｇ／ｋｇのＢＣＹ８２４５（ＢＴ８００９）を注射した。さまざまな時点において動物を安楽死させ、血漿および腫瘍を採取し、急速冷凍した。サンプルをＭＭＡＥに関して分析した。ＢＴ８００９（ＢＣＹ８２４５）の血漿レベルは、過去のＰＫ研究からのものであった。血漿におけるＭＭＡＥ濃度、腫瘍におけるＭＭＡＥ、および血漿におけるＢＴ８００９を図３３に示す。ＭＭＡＥは、血漿よりも腫瘍において長く保持され、全身性の曝露は腫瘍の曝露よりも有意に低いという仮説を支持した。
［実施例１１：ＨＣＳアッセイ］
ＨＣＳアッセイを、ネクチン−４ＢＤＣ結合研究において使用した。細胞を被検薬剤とインキュベートし、次いで洗浄した。検出は、ＭＭＡＥに対する蛍光性抗体によるものであった。ＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞は、中程度のネクチン−４発現を示し、２００００個の細胞の良好な画像が得られる。ＮＣＩ−Ｈ２９２細胞は、このアッセイにおいて低発現を示し、ＭＭＡＥの検出は２００００個の細胞でさえ不十分であった。ＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞株に対するＨＣＳデータを図３４および表４４に示す。
Figure 2021527702
ネクチン−４ＡＤＣおよびＢＣＹ８２４５を細胞上に保持し、膜染色で共局在化した。ＢＣＹ８７８１およびＭＭＡＥは、最小限の保持を示した。ＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞株に対する全ての化合物のＫｄは以前のデータと一致した。ネクチン−４ＡＤＣは、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞株に対して検出可能な結合親和性を示した。ＢＣＹ８４２５は、Ｂｍａｘでネクチン−４ＡＤＣに関するものよりも低い一桁のナノモル濃度親和性を示した。この減少した蛍光強度は、ネクチン−４ＡＤＣのＭＭＡＥ対薬物の比率が４であり、一方ＢＣＹ８２４５のＭＭＡＥ対薬物の比率が１であることに起因する。ＢＣＹ８７８１は、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞株に対して非常に弱い親和性のみを示したが、ＭＭＡＥは、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞株に対して検出可能な結合親和性をほとんど示さなかった。
［実施例１２］
＜肺がんの２つのＰＤＸモデルにおけるＢＣＹ８２４５のインビボ有効性＞
目的
扁平上皮非小細胞がんおよび腺がん（両方とも非小細胞がん腫）のＰＤＸモデルにおけるＢＣＹ８２４５の有効性を評価することである。
動物
種：ハツカネズミ
系統：Ｂａｌｂ／ｃヌード
年齢：６〜８週
性別：雌
体重：１８−２２
試験における薬剤
ＢＣＹ８２４５およびネクチン−４ＡＤＣまたはＢＣＹ８７８１
研究前動物
各マウスの右腹部に、ＬＵ−０１−０００７またはＬＵ−０１−０４１２腫瘍断片（約３０ｍｍ３）を皮下接種し、腫瘍を発生させた。平均腫瘍体積が１６１ｍｍ３（ＬＵ−０１−０００７）または１４７ｍｍ３（ＬＵ−０１−０４１２）に達した場合に動物を無作為化した。
生存中の測定およびエンドポイント
動物を、正常行動、例えば運動、餌および水の消費（見た目のみによる）、体重増加／減少、眼／毛髪のつやの消失に対する腫瘍成長および処置の任意の影響、ならびにプロトコールにおいて規定されるようなその他の異常効果に関して毎日確認した。死滅および観察された臨床的徴候を、各サブセット内の動物の数に基づいて記録した。
主要なエンドポイントは、腫瘍の成長を遅らせることができるかどうかまたはマウスを治癒させることができるかどうかを確認することであった。腫瘍体積を、キャリパーを使用して２次元で週に３回測定し、体積は、式：Ｖ＝０．５ａ×ｂ２（式中、ａとｂはそれぞれ腫瘍の長径と短径である）を使用してｍｍ３で示した。次いで、腫瘍サイズを使用してＴ／Ｃ値を算出した。Ｔ／Ｃ値（パーセント）は、抗腫瘍有効性の指標であり；ＴおよびＣはそれぞれ、所与の日における処置群および対照群の平均体積である。
ＴＧＩを、式：ＴＧＩ（％）＝［１−（Ｔｉ−Ｔ０）／（Ｖｉ−Ｖ０）］×１００を使用して各群に関して計算し；Ｔｉは、所与の日における処置群の平均腫瘍体積であり、Ｔ０は、処置開始日における処置群の平均腫瘍体積であり、Ｖｉは、Ｔｉと同じ日におけるビヒクル対照群の平均腫瘍体積であり、Ｖ０は、処置開始日におけるビヒクル群の平均腫瘍体積であった。
これらの研究の結果を図２６および２７に示す。
Ｌｕ−０１−０４１２（図２６）：ＢＣＹ８２４５は、このＰＤＸモデルにおいて用量に関連する有効性を示し、１ｍｇ／ｋｇ、週に１回で腫瘍成長速度が低下したが、３ｍｇ／ｋｇ、週に１回で腫瘍がベースラインまで顕著に退縮した。投薬を中断した後（２１日目）５／６匹の動物が、研究開始後１０５日目まで腫瘍の再成長を示さなかった。再成長を示した１匹の動物は３ｍｇ／ｋｇのＢＣＹ８２４５に対して応答し、ベースラインまでの退縮の回復を示した。３ｍｇ／ｋｇのＢＣＹ８７８１非結合ＢＤＣの疾患は不変であり、投薬を中断したときに腫瘍はビヒクル処置群と同じ速度で急速に成長し、ネクチン−４結合がこれらの薬剤に与える有効性の増加が強調された。大きな腫瘍（ビヒクル処置群）は、ＢＣＹ８２４５またはＢＣＹ８７８１の単一の用量に応答して退縮した。
ＬＵ−０１−０００７（図２７）：ＢＣＹ８２４５は、用量に関連する有効性をもたらし、１ｍｇ／ｋｇ、週に１回で疾患は不変であり、３ｍｇ／ｋｇで完全な退縮をもたらした。投薬は、完全な退縮を達成するために（投薬が中止された場合）５６日目まで維持しなければならなかった。この群ではそれを超えて腫瘍が再成長することはなかった（後者は研究開始後１２６日目まで維持された）。ネクチン−４ＡＤＣは同程度の有効性をもたらした。１ｍｇ／ｋｇの不変の疾患群は、投薬の増加（３および５ｍｇ／ｋｇ）に対して応答し、低用量のＢＣＹ８２４５は、抵抗性の発生をもたらさないことが示唆された。
［実施例１３］
＜免疫減弱状態のマウスでのヒト乳房、食道および膀胱がんの低継代ＰＤＸモデルにおけるＢＣＹ８２４５のインビボ評価＞
目的
免疫減弱状態マウスでのヒト乳房、食道、および膀胱がんの低継代Ｃｈａｍｐｉｏｎｓ ＴｕｍｏｒＧｒａｆｔモデルにおいて二環薬剤の抗腫瘍活性を評価すること。
試験系
種：マウス
系統：無胸腺ヌード−Ｆｏｘｎ１ｎｕ（免疫減弱されている）
原料：Ｅｎｖｉｇｏ：Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、Ｉｎｄｉａｎａ
性別：雌
投薬開始時の標的年齢：少なくとも６〜８週齢
投薬開始時の標的体重：少なくとも１８グラム
順化期間：３日
実験デザイン
研究前動物：家畜動物の腫瘍が１．０〜１．５ｃｍ３に十分に到達した場合に採取し、研究前動物に再移植した。研究前動物は、家畜動物から採取された腫瘍断片を左側腹部に一側性に移植されることになる。各動物は、特定の継代ロットから移植され、記録される。
研究動物：研究前腫瘍体積を、移植から７から１０日後に開始される各実験に関して記録する。腫瘍が平均腫瘍体積の１５０〜３００ｍｍ３に達した場合、動物は、腫瘍体積によって処置または対照群にマッチさせ、投薬のために使用し、０日目に投薬を開始することになる。
試験における薬剤
ＢＣＹ８２４５およびネクチン−４抗体薬物コンジュゲートをビヒクル対照と比較する。標準治療薬剤のドセタキセルが含まれていてもよい。静脈内経路によって週に１回投薬されることになる全ての薬剤、用量をグラフに示す。
生存中の測定
有効腫瘍体積：腫瘍体積は週に２回得ることになる。最終的な腫瘍体積は、研究がエンドポイントに達した日に得られることになる。可能であれば、最終的な腫瘍体積は、動物が瀕死状態である場合に得られることになる。
有効動物体重：動物の体重は、週に２回秤量することになる。最終的な体重は、研究がエンドポイントに達した日に、または可能であれば動物が瀕死状態であることが認められた場合に得られることになる。０日目と比較した場合に１０％以上の体重減少を示す動物は、ＤｉｅｔＧｅｌ（登録商標）を適宜与えることになる。７日間持続して２０％を超える正味の体重減少を示す任意の動物を、またはマウスが０日目と比較して３０％を超える正味の体重減少を示した場合、瀕死状態とみなし、安楽死させることになる。
データ分析
薬剤毒性：０日目から始め、動物は毎日観察し、デジタルスケールを使用して週に２回秤量することになり；個々のおよび平均グラム体重（平均体重±ＳＥＭ）を含むデータ、０日目に対する平均パーセント体重変化（％ｖＤ０）を各群に関して記録し、研究の完了時に％ｖＤ０をプロットすることになる。動物の死滅を毎日記録し、体重減少および肉眼による観察に基づいて薬物関連（Ｄ）、技術（Ｔ）、腫瘍関連（Ｂ）、または未知（Ｕ）として示すことになり；２０％を超える平均％ｖＤ０および／または１０％を超える死亡率が報告された単一の薬剤または組合せの群が、評価されたレジメンにおいてその処置の最大耐量（ＭＴＤ）を超えているとみなされることになる。各処置群に関する最大平均％ｖＤ０（最低の体重）が研究の完了時に報告される。
薬剤有効性
腫瘍成長阻害−０日目から始め、腫瘍寸法をデジタルキャリパーによって週に２回測定し、個々のおよび平均の推定腫瘍体積（平均ＴＶ±ＳＥＭ）を含むデータを各群に関して記録し；腫瘍体積を、式（１）：ＴＶ＝幅２×長さ×０．５２を使用して算出する。研究の完了時に、式（２）：％ＴＧＩ＝１−（Ｔｆ−Ｔｉ）／（Ｃｆ−Ｃｉ）によって、初期の（ｉ）および最終的な（ｆ）腫瘍の測定値を使用し、各処置群（Ｔ）対対照（Ｃ）に関するパーセント腫瘍成長阻害（％ＴＧＩ）値を算出し、報告することになる。２つの連続的な測定に関して０日目の測定値の３０％以下の腫瘍体積を報告した個々のマウスは、部分反応例（responders）（ＰＲ）とみなすことになる。触診可能の腫瘍がない（２つの連続的な測定に関して０．００ｍｍ３）個々のマウスは、完全反応例（ＣＲ）として分類することになり；研究の完了まで持続するＣＲは、腫瘍のない生存例（ＴＦＳ）とみなすことになる。腫瘍倍加時間（ＤＴ）は、式ＤＴ＝（Ｄｆ−Ｄｉ）×ｌｏｇ２／（ｌｏｇＴＶｆ−ｌｏｇＴＶｉ）（式中、Ｄ＝日数およびＴＶ＝腫瘍体積）を使用してビヒクル処置群に関して判定されることになる。本研究において収集した全てのデータは、電子的に管理し、冗長サーバシステムに保管する。
これらの研究の結果を図２８から３１に示す。
ＢＣＹ８２４５を、膀胱がん（ＣＴＧ−１７７１）、エストロゲンおよびプロゲステロン陰性Ｈｅｒ２陽性乳がん（ＣＴＧ−１１７１）、トリプルネガティブ乳がん（ＣＴＧ−１１０６）および食道がん（ＣＴＧ−０８９６）を示す４匹の低継代ＰＤＸモデルで試験を行った。これらのモデル全てにおいて、ＢＣＹ８２４５は、腫瘍退縮を引き起こす優れた有効性を示し、４匹のうちの３匹はベースラインまでの完全な退縮を示した。有効性は、全ての症例においてＡＤＣに相当し、ドセタキセルＳＯＣよりも優れているかまたはそれと同等であった。全てのモデルにおいて、ＢＣＹ８２４５はドセタキセルよりも優れた耐容性を示した。

Claims (19)

  1. ネクチン−４に対して特異的なペプチドリガンドであって、少なくとも２つのループ配列によって隔てられた少なくとも３つのシステイン残基を含むポリペプチド、および少なくとも２つのポリペプチドループが分子スキャフォールド上に形成されるように前記ポリペプチドの前記システイン残基と共有結合を形成する分子スキャフォールドを含み、アミノ酸配列：
    ＣｉＰ［１Ｎａｌ］［ｄＤ］ＣｉｉＭ［ＨＡｒｇ］ＤＷＳＴＰ［ＨｙＰ］ＷＣｉｉｉ（配列番号１）
    （式中、１ＮａＩは１−ナフチルアラニンを表し、ＨＡｒｇはホモアルギニンを表し、ＨｙＰはヒドロキシプロリンを表し、Ｃｉ、ＣｉｉおよびＣｉｉｉは、それぞれ第１、第２および第３のシステイン残基を表す）
    を含むペプチドリガンドまたはこれらの薬学的に許容される塩。
  2. ［Ｂ−Ａｌａ］［Ｓａｒ１０］−（配列番号１）（以下ＢＣＹ８２３４と称する）；
    Ａｃ−［Ｂ−Ａｌａ］［Ｓａｒ５］−（配列番号１）（以下ＢＣＹ８１２２と称する）；
    Ａｃ−（配列番号１）（以下ＢＣＹ８１２６と称する）；
    （配列番号１）（以下ＢＣＹ８１１６と称する）；
    フルオロセイン−（配列番号１）（以下ＢＣＹ８２０５と称する）；および
    ［ＰＹＡ］［Ｂ−Ａｌａ］［Ｓａｒ１０］−（配列番号１）（以下ＢＣＹ８８４６と称する）
    から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のペプチドリガンド。
  3. ［Ｂ−Ａｌａ］［Ｓａｒ１０］−（配列番号１）（以下ＢＣＹ８２３４と称する）；
    Ａｃ−［Ｂ−Ａｌａ］［Ｓａｒ５］−（配列番号１）（以下ＢＣＹ８１２２と称する）；
    Ａｃ−（配列番号１）（以下ＢＣＹ８１２６と称する）；
    （配列番号１）（以下ＢＣＹ８１１６と称する）；および
    フルオロセイン−（配列番号１）（以下ＢＣＹ８２０５と称する）
    から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載のペプチドリガンド。
  4. Ａｃ−［Ｂ−Ａｌａ］［Ｓａｒ５］−（配列番号１）（以下ＢＣＹ８１２２と称する）；
    Ａｃ−（配列番号１）（以下ＢＣＹ８１２６と称する）；および
    （配列番号１）（以下ＢＣＹ８１１６と称する）
    から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載のペプチドリガンド。
  5. Ａｃ−［Ｂ−Ａｌａ］［Ｓａｒ５］−（配列番号１）（以下ＢＣＹ８１２２と称する）；および
    Ａｃ−（配列番号１）（以下ＢＣＹ８１２６と称する）
    から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載のペプチドリガンド。
  6. ［Ｂ−Ａｌａ］［Ｓａｒ１０］−（配列番号１）（以下ＢＣＹ８２３４と称する）
    から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載のペプチドリガンド。
  7. 前記分子スキャフォールドが、１，１’，１’’−（１，３，５−トリアジナン−１，３，５−トリイル）トリプロパ−２−エン−１−オン（ＴＡＴＡ）から選択される、請求項１〜６のいずれか１項に記載のペプチドリガンド。
  8. 前記薬学的に許容される塩が、遊離酸、またはナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム塩から選択される、請求項１〜７のいずれか１項に記載のペプチドリガンド。
  9. 前記ネクチン−４がヒトネクチン−４である、請求項１〜８のいずれか１項に記載のペプチドリガンド。
  10. １つもしくは複数のエフェクターおよび／または官能基にコンジュゲートされた、請求項１〜９のいずれか１項に記載のペプチドリガンドを含む薬物コンジュゲート。
  11. １つまたは複数の細胞毒性剤にコンジュゲートされた、請求項１０に記載の薬物コンジュゲート。
  12. 前記細胞毒性剤が、ＭＭＡＥまたはＤＭ１から選択され、特にＭＭＡＥである、請求項１１に記載の薬物コンジュゲート。
  13. 前記細胞毒性剤がＭＭＡＥであり、前記コンジュゲートが、−ＰＡＢＣ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−グルタリル−または−ＰＡＢＣ−シクロブチル−Ａｌａ−Ｃｉｔ−βＡｌａ−、例えば−ＰＡＢＣ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−グルタリル−（式中、ＰＡＢＣは、ｐ−アミノベンジルカルバメートを表す）から選択されるリンカーを更に含む、請求項１２に記載の薬物コンジュゲート。
  14. 前記細胞毒性剤がＤＭ１であり、前記コンジュゲートが、−ＳＰＤＢ−（ＳＯ３Ｈ）−（式中、ＳＰＤＢは、Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネートを表す）であるリンカーを更に含む、請求項１３に記載の薬物コンジュゲート。
  15. ＢＣＹ８２４５またはＢＣＹ８５４９から選択され、特にＢＣＹ８２４５である、請求項１０〜１４のいずれか１項に記載の薬物コンジュゲート。
  16. 請求項１〜９のいずれか１項に記載のペプチドリガンドまたは請求項１０〜１５のいずれか１項に記載の薬物コンジュゲートを、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤と組み合わせて含む、医薬組成物。
  17. １つまたは複数の治療剤を更に含む、請求項１６に記載の医薬組成物。
  18. ネクチン−４が介在する疾患または障害の阻止、抑制または処置において使用するための、請求項１０〜１５のいずれか１項に記載の薬物コンジュゲート。
  19. がんを阻止、抑制または処置する方法であって、請求項１０〜１５のいずれか１項に記載の薬物コンジュゲートを、それを必要とする患者に投与することを含み、前記患者が、ネクチン−４のコピー数変化（ＣＮＶ）が増加しているとして同定されている、方法。
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