TW202016129A - 對ｎｅｃｔｉｎ－４具有專一性之雙環胜肽配體 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於一種與分子支架共價結合使得二或多個胜肽環介於與該 支架的連接點之間的多肽。特定而言，本發明記載的胜肽為Nectin-4的高親和性結合劑。本發明另包括含有結合至一或多效應物及/或官能基的胜肽的藥物結合物、包括該胜肽配體或藥物結合物之醫藥組成物、以及該胜肽配體和藥物結合物用於預防、抑制或治療Nectin-4介導的疾病或病症之用途。

Description

對NECTIN-4具有專一性之雙環胜肽配體
本發明係關於一種與分子支架共價結合使得二或多胜肽環介於支架連接點之間的多肽。特定而言，本發明揭示之胜肽為Nectin-4的高親和性結合劑。本發明另包括含有結合至一或多效應物及/或官能基之該胜肽的藥物結合物、包括該胜肽配體或藥物結合物之醫藥組成物、以及該胜肽配體和藥物結合物用於預防、抑制或治療Nectin-4介導的疾病或病症之用途。
環肽能夠以高親和性和標的專一性結合於標的蛋白，因此對於醫療的發展來說是具有吸引力的分子類別。事實上有數種環肽已成功用於臨床，例如抗菌胜肽萬古黴素、免疫抑制藥物環孢素、或抗癌藥物奧曲肽(Driggers et al.(2008),Nat Rev Drug Discov 7(7),608-24)。其良好的結合特性係源自形成於胜肽和標的之間相對較大的交互作用表面以及降低的環狀結構構形可撓性。大環通常結合至數百平方埃(angstrom)之表面，例如環肽CXCR4拮抗劑CVX15(400Å2；Wu et al.(2007),Science 330,1066-71)、具有Arg-Gly-Asp模體結合至組合蛋白αVb3之環肽(355Å2)(Xiong et al.(2002),Science 296(5565),151-5)、或結合至尿激酶型血漿蛋白原活化因子的環肽抑制劑upain-1(603Å2；Zhao et al.(2007),J Struct Biol 160(1),1-10)。
由於其環狀結構，大環胜肽相較於線狀胜肽具有較低可撓性，使得結合至標靶時熵損失較少，並產生較高的結合親和力。降低的可撓性亦產生鎖定的標靶專一性結構，相較於線狀胜肽具有增強的結合專一性。前述功效已藉由基質金屬蛋白酶8(MMP8)之有效選擇性抑制劑例示，其在環被打開時喪失對於其他MMP之選擇性(Cherney et al.(1998),J Med Chem 41(11),1749-51)。通過大環化所實現之較佳結合特性在具有不只一個肽環的多環胜肽中更加顯著，例如萬古黴素、乳酸鏈球菌素、和放線菌素。
多組研究團隊先前已將具有半胱胺酸殘基之多肽連接至合成的分子結構(Kemp and McNamara(1985),J.Org.Chem；Timmerman et al.(2005),ChemBioChem)。Meloen與其同事使用參(溴甲基)苯以及相關分子來將多個肽環快速且大量地環化至合成支架上以在結構上模擬蛋白表面(Timmerman et al.(2005),ChemBioChem)。製造候選藥物化合物之方法中該化合物藉由連接具有多肽之半胱胺酸與分子支架而產生，該分子支架例如TATA(1,1',1"-(1,3,5-三嗪烷-1,3,5-三基)三丙-2-烯-1-酮，Heinis et al.Angew Chem,Int Ed.2014；53：1602-1606)。
已經開發了基於噬菌體呈現之組合方法來產生和篩選針對目標標靶的大雙環胜肽庫(Heinis et al.(2009),Nat Chem Biol 5(7),502-7及WO 2009/098450)。簡而言之，將包括三半胱胺酸殘基以及二區域之6隨機胺基酸(Cys-(Xaa)6-Cys-(Xaa)6-Cys)的線狀胜肽之組合庫呈現於噬菌體上，並藉由共價連接半胱胺酸側鏈與小分子支架而環化。
本發明之第一實施態樣提供一種Nectin-4特用之胜肽配體，包括：一多肽，包括至少三半胱胺酸殘基，以至少二環狀序列分離；以及一分子支架，與該多肽之該些半胱胺酸殘基形成共價鍵，使得至少二多肽環形成於該分子支架上；其中該胜肽配體包括以下胺基酸序列：
CiP[1Nal][dD]CiiM[HArg]DWSTP[HyP]WCiii(SEQ ID NO：1)；
其中1 Nal表示1-萘基丙胺酸，HArg表示高精胺酸，HyP表示羥脯胺酸，Ci、Cii、和Ciii分別表示第一、第二、和第三半胱胺酸殘基或其醫藥上可接受之鹽。
本發明之另一實施態樣提供一種藥物結合物，包括結合至一或多效應物和/或官能基之本說明書定義之胜肽配體。
本發明之另一實施態樣提供一種醫藥組成物，包括本說明書定義之胜肽配體或藥物結合物以及一或多醫藥上可接受之賦形劑。
本發明之另一實施態樣提供一種本說明書定義之胜肽配體或藥物結合物用於預防、抑制或治療Nectin-4介導之疾病或病症之用途。
圖1和圖2為將BCY8245施用於具有NCI-H292異體移植之BALB/c雌性裸鼠後之腫瘤體積紀錄。
圖3和圖4為將BCY8245施用於具有HT-1376異體移植之CB17-SCID雌鼠後之腫瘤體積紀錄。
圖5為將BCY8245施用於具有Panc2.13異體移植之Balb/c雌性裸鼠後之腫瘤體積紀錄。
圖6為將BCY8245施用於具有MDA-MB-468異體移植之Balb/c雌性裸鼠後之腫瘤體積紀錄。
圖7為將BCY8549(以BCY8245作為對照)施用於具有NCI-H292異體移植之Balb/c雌性裸鼠後之腫瘤體積紀錄。
圖8為乳腺(T-47D和MDA-MB-468)中Nectin-4的圈選策略。
圖9為NCI-H292和NCI-H322中Nectin-4的圈選策略。
圖10和圖11分別為NCI-H526和HT1080中對於Nectin-4的圈選策略。
圖12至圖16分別為膀胱癌(HT1376；圖12)、乳癌(MDA-MB-468；圖13)、結腸直腸癌(HT-29；圖14A和HCT-116；圖14B))、肺癌(A549；圖15A，NCI-H292；圖15B，NCI-H358；圖15C和NCI-526；圖15D)和胰腺癌(Panc02.13；圖16)中的Nectin-4圈選策略。
圖17為將BCY8245施用於具有A549異體移植之Balb/c雌性裸鼠後之腫瘤體積紀錄。
圖18為將BCY8245施用於具有HCT116異體移植之Balb/c雌性裸鼠後之腫瘤體積紀錄。
圖19為將BCY8245施用於具有HT-1376異體移植之CB17-SCID雌鼠後之腫瘤體積紀錄。
圖20為將BCY8245施用於具有MDA-MB-468異體移植之Balb/c雌性裸鼠後之腫瘤體積紀錄。
圖21為將BCY8245施用於具有NCI-H292異體移植之Balb/c雌性裸鼠後之腫瘤體積紀錄。
圖22為將BCY8245施用於具有NCI-H526異體移植之Balb/c雌性裸鼠後之腫瘤體積紀錄。
圖23為將BCY8245施用於具有Panc2.13異體移植之Balb/c雌性裸鼠後之腫瘤體積紀錄。
圖24為將BCY8245或BCY8245與BCY8234一起施用於具有MDA-MB-468異體移植之Balb/c雌性裸鼠後之腫瘤體積紀錄。
圖25為單獨施用BCY8245或將BCY8245與BCY8234一起施用於具有MDA-MB-468異種移植物之Balb/c雌性裸鼠後之腫瘤體積紀錄。
圖26至圖31為n Lu-01-0412,LU-01-0007、CTG-1771、CTG-1171、CTG-1106和CTG-0896 PDX異種移植物中的腫瘤體積紀錄。
圖32顯示BT8009(即BCY8245)功效與CDX/PDX異種移植物表達相關。具有很少/沒有Nectin-4表達的異種移植物表現出降低的腫瘤生長速率。表達Nectin-4的異種移植物表現出腫瘤消退。此分析包含了PDX和CDX模型，且數值係整理自多個報告。
圖33顯示MDA-MB-468細胞表達Nectin-4且顯示MMAE於腫瘤中延長滯留。
圖34為MDA-MB-468細胞株的HCS-數據分析。
於一實施例，胜肽配體CiP[1Nal][dD]CiiM[HArg]DWSTP[HyP]WCiii(SEQ ID NO：1)包括一胺基酸序列，該胺基酸序列係選自：
[B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO：1)(以下稱為BCY8234)；
Ac-[B-Ala][Sar5]-(SEQ ID NO：1)(以下稱為BCY8122)；
Ac-(SEQ ID NO：1)(以下稱為BCY8126)；
(SEQ ID NO：1)(以下稱為BCY8116)；
螢光素-(SEQ ID NO：1)(以下稱為BCY8205)；以及
[PYA][B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO：1)(以下稱為BCY8846)。
於另一實施例，胜肽配體CiP[1Nal][dD]CiiM[HArg]DWSTP[HyP]WCiii(SEQ ID NO：1)包括一胺基酸序列，該胺基酸序列係選自：
B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO：1)(以下稱為BCY8234)；
Ac-[B-Ala][Sar5]-(SEQ ID NO：1)(以下稱為BCY8122)；
Ac-(SEQ ID NO：1)(以下稱為BCY8126)；
(SEQ ID NO：1)(以下稱為BCY8116)；以及
螢光素-(SEQ ID NO：1)(以下稱為BCY8205)。
於另一實施例，胜肽配體CiP[1Nal][dD]CiiM[HArg]DWSTP[HyP]WCiii(SEQ ID NO：1)包括一胺基酸序列，該胺基酸序列係選自：
Ac-[B-Ala][Sar5]-(SEQ ID NO：1)(以下稱為BCY8122)；
Ac-(SEQ ID NO：1)(以下稱為BCY8126)；以及
(SEQ ID NO：1)(以下稱為BCY8116)。
本文表2所示的數據證實，本實施例的胜肽配體對於人類Nectin-4表現出優異的結合水平，如SPR結合數據所證明的。
於另一實施例，胜肽配體CiP[1Nal][dD]CiiM[HArg]DWSTP[HyP]WCiii(SEQ ID NO：1)包括一胺基酸序列，該胺基酸序列係選自：
Ac-[B-Ala][Sar5]-(SEQ ID NO：1)(以下稱為BCY8122)；以及
Ac-(SEQ ID NO：1)(以下稱為BCY8126)。
本文表1所示之數據證實，本實施例之該胜肽配體對於人類Nectin-4表現出優異的結合水平，如競爭性結合實驗數據之結合數據所證明的。
於另一實施例，胜肽配體CiP[1Nal][dD]CiiM[HArg]DWSTP[HyP]WCiii(SEQ ID NO：1)包括一胺基酸序列，該胺基酸序列係選自：
[B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO：1)(以下稱為BCY8234)。
本文表3所示之數據證實，當與胞殺劑結合時，本實施例的胜肽配體對於人類Nectin-4表現出優異的結合水平(<10nM)，如SPR結合數據所證明的。
於一實施例，分子支架係為1,1',1"-(1,3,5-三嗪烷-1,3,5-三基)三丙-2-烯-1-酮(TATA)(1,1',1"-(1,3,5-triazinane-1,3,5-triyl)triprop-2-en-1-one(TATA))。
除非另有定義，否則本說明書中使用的所有技術和科學用語皆具有所屬技術領域中具有通常知識者通常所理解之意義，例如於胜肽化學、細胞培養、噬菌體顯示、核酸化學及生物化學等技術領域。分子生物學、遺傳學、和生物化學方法則使用標準技術(參見Sambrook et al.,Molecular Cloning：A Laboratory Manual,3rd ed.,2001,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NY；Ausubel et al.,Short Protocols in Molecular Biology(1999)4th ed.,John Wiley & Sons,Inc.)，包含於說明書作為參照。
命名
編號
當指稱本發明之胜肽中的胺基酸殘基位置時，由於半胱胺酸殘基(Ci、Cii、和Ciii)是不變的故將其編號省略，因此指稱本發明之胜肽中的胺基酸殘基之編號如下：
Ci-P1-[1Nal]2-[dD]3-Cii-M4-[HArg]5-D6-W7-S8-T9-P10-[HyP]11-W12-Ciii(SEQ ID NO：1)
為了說明起見，假定全部的雙環胜肽均藉由1,1',1"-(1,3,5-三嗪烷-1,3,5-三基)三丙-2-烯-1-酮(TATA)環化，並產生三取代之結構。由TATA形成的環化發生於Ci、Cii、和Ciii。
分子式
將接至雙環核心序列的N或C端延伸增加至該序列的左側或右側，並以連號區隔。例如，可將N端的βAla-Sar10-Ala尾部表示為：
βAla-Sar10-A-(SEQ ID NO：X)。
反胜肽序列
有鑑於Nair et al(2003)J Immunol 170(3)),1362-1373的揭露，可知本說明書揭露之胜肽序列於反逆(retro-inverso)形式亦有功能。例如，序列反轉(即N端變為C端，反之亦然)，其立體化學亦如是反轉(即D型胺基酸變為L型胺基酸，反之亦然)。
胜肽配體
如本說明書所指稱之胜肽配體是指與分子支架共價結合之胜肽。通常這種胜肽包括可與該支架形成共價鍵的二或多個反應基團(即半胱胺酸殘基)、以及被包圍在該些反應基團之間的一序列，該序列被稱為環序列，因為當該胜肽連結該支架時形成一環。在本案例中，該胜肽包括至少三個半胱胺酸殘基(本說明書稱為Ci、Cii及Ciii)，並於該支架上形成至少二環。
胜肽配體之優勢
本發明之雙環胜肽具有多項優勢，使其可作為適當的類藥物分子，用於注射、吸入、鼻腔、眼部、口服、或局部給藥。該些優勢包括：
- 物種交叉反應性：此為臨床前之藥效學和藥物動力學評估之一般需求；
- 蛋白酶穩定性：雙環胜肽配體理想上應對血漿蛋白酶、上皮(「膜錨定(membrane-anchored)」)蛋白酶、胃和腸道蛋白酶、肺表面蛋白酶、胞內蛋白酶等具有穩定性。蛋白酶穩定性可於不同物種之間維持，使得雙環領先候選物可於動物模型中發展出，亦可充滿信心地將其施用於人類；
- 理想的溶解度曲線：此為帶電和親水性比例相對於疏水性殘基和分子內/分子間氫鍵之函數，對於調劑和吸收的目的具有重要性；
- 於循環中具有適當的血漿半衰期：依據臨床用途和治療療程，可能須發展可在急性疾病管理環境中短時間暴露的雙環胜肽，或是發展在循環中具有延 長滯留的雙環胜肽，因此對於較慢性疾病狀態的管理是最佳的。其他驅動理想血漿半衰期的因素是持續暴露以實現最大治療效果之需求與藥劑持續暴露所伴隨的毒性之權衡；以及
- 選擇性：本發明之胜肽配體對於其他nectin具有良好選擇性。
醫藥上可接受之鹽類
習知技術者可知，本發明之範圍包含鹽類形式，指稱胜肽配體時包括該配體之鹽類。
本發明之鹽類可藉由傳統化學方法自包含鹼或酸基團之母化合物合成，該方法例如Pharmaceutical Salts：Properties,Selection,and Use,P.Heinrich Stahl(Editor),Camille G.Wermuth(Editor),ISBN：3-90639-026-8,Hardcover,388 pages,August 2002所述。一般而言，該些鹽類可藉由將該些化合物之游離酸或鹼形式與適當的鹼或酸在水或有機溶劑或上述二者之混合物中反應而得。
酸加成鹽(單或二鹽)可由多種酸形成，無機或有機均可。酸加成鹽的實例包括使用一酸所形成之單或二鹽、以及丙烯酸化胺基酸及陽離子交換樹脂，該酸係選自以下所構成之群組：乙酸(acetic)、2,2-二氯乙酸(2,2-dichloroacetic)、己二酸(adipic)、藻酸(alginic)、抗壞血酸(ascorbic，例如，L-抗壞血酸(L-ascorbic))、L-天冬氨酸(L-aspartic)、苯磺酸(benzenesulfonic)、苯甲酸(benzoic)、4-乙醯胺苯甲酸(4-acetamidobenzoic)、丁酸(butanoic)、(+)樟腦酸((+)camphoric)、樟腦磺酸(camphor-sulfonic)、(+)-(1S)-樟腦-10-磺酸((+)-(1S)-camphor-10-sulfonic)、癸酸(capric)、己酸(caproic)、辛酸(caprylic)、肉桂酸(cinnamic)、檸檬酸(citric)、環己烷氨基磺酸(cyclamic)、十二烷基硫酸 (dodecylsulfuric)、乙烷-1,2-二磺酸(ethane-1,2-disulfonic)、乙磺酸(ethanesulfonic)、2-羥基乙磺酸(2-hydroxyethanesulfonic)、甲酸(formic)、富馬酸(fumaric)、半乳糖二酸(galactaric)、龍膽酸(gentisic)、葡庚糖酸(glucoheptonic)、D-葡糖酸(D-gluconic)、葡糖醛酸(glucuronic)(例如，D-葡糖醛酸(D-glucuronic))、谷氨酸(glutamic)(例如，L-谷氨酸(L-glutamic))、α-酮戊二酸(α-oxoglutaric)、乙醇酸(glycolic)、馬尿酸(hippuric)、氫鹵酸(例如，氫溴酸(hydrobromic)、鹽酸、氫碘酸(hydriodic))、羥乙磺酸(isethionic)、乳酸(lactic)(例如(+)-L-乳酸((+)-L-lactic)、(±)-DL-乳酸((±)-DL-lactic))、乳糖酸(lactobionic)、馬來酸(maleic)、蘋果酸(malic)、(-)-L-蘋果酸((-)-L-malic)、丙二酸(malonic)、(±)-DL-扁桃酸((±)-DL-mandelic)、甲磺酸(methanesulfonic)、萘-2-磺酸(naphthalene-2-sulfonic))、萘-1,5-二磺酸(naphthalene-1,5-disulfonic)、1-羥基-2-萘酸(1-hydroxy-2-naphthoic)、菸鹼酸(nicotinic)、硝酸(nitric)、油酸(oleic)、乳清酸(orotic)、草酸(oxalic)、棕櫚酸(palmitic)、雙羥萘酸(pamoic)、磷酸(phosphoric)、丙酸(propionic)、丙酮酸(pyruvic)、L-焦谷氨酸(L-pyroglutamic)、水楊酸(salicylic)、4-氨基水楊酸(4-amino-salicylic)、癸二酸(sebacic)、硬脂酸(stearic)、琥珀酸(succinic)、硫酸(sulfuric)、單寧酸(tannic)、(+)-L-酒石酸((+)-L-tartaric)、硫氰酸(thiocyanic)、對甲苯磺酸(p-toluenesulfonic)、十一碳烯酸(undecylenic)及戊酸(valeric)。
特定鹽類群組係由乙酸、鹽酸、氫碘酸(hydriodic)、磷酸(phosphoric)、硝酸(nitric)、硫酸(sulfuric)、檸檬酸(citric)、乳酸(lactic)、琥珀酸(succinic)、馬來酸(maleic)、蘋果酸(malic)、羥乙磺酸(isethionic)、富馬酸(fumaric)、苯磺酸(benzenesulfonic)、甲苯磺酸(toluenesulfonic)、硫酸、甲磺酸(methanesulfonic)(甲磺酸酯(mesylate))、乙磺酸(ethanesulfonic)、萘磺酸 (naphthalenesulfonic)、戊酸(valeric)、丙酸(propanoic)、丁酸(butanoic)、丙二酸(malonic)、葡糖醛酸(glucuronic)和乳糖酸(lactobionic)形成之鹽類所組成。一特定鹽係鹽酸鹽。另一特定鹽係乙酸鹽。
若化合物為陰離子或具有陰離子官能基(例如-COOH可為-COO-)，則鹽可由一有機或無機鹼形成，而產生一適當陽離子。適當無機陽離子之實例包括(但不限於)：鹼金屬離子，如Li+、Na+、和K+，鹼土金屬離子，如Ca2+和Mg2+，和其他陽離子，如Al3+或Zn+。適當有機陽離子之實例包括(但不限於)：胺離子(即NH4+)和具取代基之胺離子(例如NH3R+、NH2R2 +、NHR3 +、NR4 +)。適當具取代基之胺離子之實例係源自：甲胺(methylamine)、乙胺(ethylamine)、二乙胺(diethylamine)、丙胺(propylamine)、二環己胺(dicyclohexylamine)、三乙胺(triethylamine)、丁胺(butylamine)、乙二胺(ethylenediamine)、乙醇胺(ethanolamine)、二乙醇胺(diethanolamine)、哌嗪(piperazine)、芐胺(benzylamine)、苯基芐胺(phenylbenzylamine)、膽鹼(choline)、葡甲胺(meglumine)、氨基丁三醇(tromethamine)、以及胺基酸，如離胺酸(lysine)和精胺酸(arginine)。習知四級銨離子之實例為N(CH3)4 +。
若本發明之胜肽包括一胺官能基，則可形成四級銨鹽，例如藉由習知技術者所知的方法與一烷化劑反應。該些四級銨化合物係落入本發明之範圍內。
修飾衍生物
習知技術者可知，在此所定義之胜肽配體的修飾衍生物也在本發明的範圍內。這種適合的修飾衍生物的實例包括選自下列修飾之一或多修飾：N 端和/或C端修飾；用一或多非自然胺基酸殘基取代一或多胺基酸殘基(例如用一或多電子等排的或等電子的胺基酸取代一或多極性胺基酸殘基；用其他非自然電子等排的或等電子的胺基酸取代一或多非極性胺基酸殘基)；添加間隔基團；用一或多抗氧化胺基酸殘基取代一或多氧化敏感胺基酸殘基；用丙胺酸取代一或多胺基酸殘基、用一或多D-胺基酸殘基取代一或多L-胺基酸殘基；雙環胜肽配體內一或多醯胺鍵的N-烷基化；用替代鍵替換一或多胜肽鍵；胜肽主鏈長度修飾；用另一化學基團取代一或多胺基酸殘基的α-碳上的氫，用適合的胺、硫醇、羧酸和苯酚反應試劑修飾如半胱胺酸、離胺酸、麩胺酸/天冬胺酸和酪胺酸之胺基酸以便官能化該胺基酸，以及引入適合官能化的正交反應性之胺基酸引入或取代，例如具有疊氮基或炔基之胺基酸，其分別用炔或疊氮基團官能化。
於一實施例，修飾的衍生物包含N端和/或C端修飾。於另一實施例中，該修飾的衍生物包括使用適當的胺基反應化學的N端修飾、和/或使用適當的羧基反應化學的C端修飾。於另一實施例，該N端或C端修飾包括添加效應物基團，該效應物基團包含但不限於胞殺劑、放射性螯合劑或發色團。
於另一實施例，修飾的衍生物包含N端修飾。於另一實施例，該N端修飾包括N端乙醯基。於該實施例，N端半胱胺酸基團(本文中稱為Ci的基團)在胜肽合成期間被乙酸酐或其他適當的試劑封端，從而產生N端乙醯化的分子。該實施例提供了以下優點：去除胺肽酶的潛在辨識點，並且避免了雙環胜肽的降解。
於另一實施例，N修飾包括添加分子間隔基團，其促進效應物基團的結合和雙環胜肽對其目標的效力持續。
於另一實施例，修飾的衍生物包含C端修飾。於另一實施例，該C端修飾包括醯胺基團。於該實施例，C端半胱胺酸基團(本文中稱為Ciii的基團)在胜肽合成期間被合成為醯胺，從而產生C端醯胺化的分子。該實施例提供了以下優點：去除羧肽酶的潛在辨識點，並且降低了雙環胜肽的蛋白降解可能性。
於一實施例，修飾的衍生物包括用一或多非自然胺基酸殘基取代一或多胺基酸殘基。於該實施例，可選擇具有電子等排的/等電子的側鏈之非自然胺基酸，其既不被降解蛋白酶識別也不對標的效價有任何不利影響。
或者，可以使用具有受限胺基酸側鏈的非自然胺基酸，使得附近胜肽鍵的蛋白水解作用在構象上和空間上受到阻礙。特別地，這些涉及脯胺酸類似物、龐大的側鏈、Cα-二取代的衍生物(例如，胺基異丁酸，Aib)和環胺基酸，一種簡單的衍生物是胺基-環丙基羧酸。
於一實施例，修飾的衍生物包括添加一間隔基團。於另一實施例，修飾的衍生物包括添加一間隔基團至N端半胱胺酸(Ci)和/或C端半胱胺酸(Ciii)。
於一實施例，修飾的衍生物包括用一或多氧化敏感胺基酸殘基取代一或多氧化敏感胺基酸殘基。
於一實施例，修飾的衍生物包括用一或多疏水性胺基酸殘基取代一或多帶電荷的胺基酸殘基。於另一實施例，修飾的衍生物包括用一或多帶電荷的胺基酸殘基取代一或多疏水性胺基酸殘基。帶電荷與疏水性胺基酸殘基的正確平衡是雙環胜肽配體的重要特徵。例如，疏水性胺基酸殘基影響血漿蛋白結合的程度，從而影響血漿中游離的可用部分的濃度，而帶電荷的胺基酸殘基(特別是精胺酸)可能影響胜肽與細胞表面上的磷脂膜的交互作用。上述兩者的組合 可能影響半衰期、分佈體積和胜肽藥物的暴露，並且可以根據臨床終點打造。此外，正確的組合以及正確的帶電荷相對於疏水性胺基酸殘基的數量可減少注射部位的刺激(如果已經皮下施用胜肽藥物)。
於一實施例，修飾的衍生物包括用一或多D-胺基酸殘基取代一或多L-胺基酸殘基。該實施例據信可藉由立體阻礙及D-胺基酸的傾向提高蛋白水解的穩定性，以穩定β-轉折結構(Tugyi et al(2005)PNAS,102(2),413-418)。
於一實施例，修飾的衍生物包括除去任何胺基酸殘基和用丙胺酸取代。該實施例提供了去除潛在的蛋白水解攻擊位點的優點。
需要注意的是，每個上述修飾係用於有意地改善胜肽的效價或是穩定性。另外，基於修飾的效價改善可藉由以下機制達成：
- 加入疏水性基團，利用疏水效應並降低脫落率，從而獲得更高的親和力；
- 加入利用長距離離子交互作用的帶電基團，使速度更快以及親合性更高(參見例如Schreiber et al,Rapid,electrostatically assisted association of proteins(1996),Nature Struct.Biol.3,427-31)；以及
- 將額外的限制引入胜肽，例如藉由正確地限制胺基酸側鏈使得在與目標結合時的熵損失最小化、藉由限制主鏈的扭轉角使得在與目標結合時的熵損失最小化、以及為了相同的原因在分子中引入額外的環化。
(請見Gentilucci et al,Curr.Pharmaceutical Design,(2010),16,3185-203,and Nestor et al,Curr.Medicinal Chem(2009),16,4399-418。)
同位素變體
本發明包括本發明之全部醫藥上可接受之(放射)同位素標定胜肽配體，其中一或多原子由具有相同原子序、但原子量或質量數不同於自然出現的原子量或質量數之原子取代；以及其中連接金屬螯合基團(即效應物)可保有相關(放射)同位素之本發明胜肽配體；以及其中特定官能基被相關(放射)同位素或同位素標定官能基共價取代之本發明胜肽配體。
可適當包含於本發明之胜肽配體之同位素的實例包括氫的同位素，例如2H(D)和3H(T)；碳，例如11C、13C、和14C；氯，例如36Cl；氟，例如18F；碘，例如123I、125I、和131I；氮，例如13N和15N；氧，例如15O、17O、和18O；磷，例如32P；硫，例如35S；銅，例如64Cu；鎵，例如67Ga或68Ga；釔，例如90Y；以及鎦，例如177Lu；以及鉍，例如213Bi。
本發明之特定同位素標定胜肽配體，例如具有放射同位素，可用於藥物和/或組織基質分布研究，並用於臨床評估罹病組織存在/不存在Nectin-4標的。本發明之胜肽配體另可用於診斷用途，其可用於偵測或辨認標定分子和其他分子、胜肽、蛋白質、酵素、或受體所形成的複合物。偵測或辨認之方法可使用具有標記試劑之化合物，例如放射同位素、酵素、螢光物、發光物(例如發光醇(luminol)、發光醇衍生物、發光素(luciferin)、水母蛋白(aequorin)及螢光酵素(luciferase))等。由於可簡單地包含以及容易用於偵測手段，放射同位素氚，即3H(T)，以及碳-14，即14C，特別適用於上述用途。
由於較佳的代謝穩定性，較重同位素之取代，例如刀，即2H(D)，可具有治療上的優勢，例如增加體內半衰期或降低需求劑量，因此較佳地可用於某些情況。
正子發射同位素之取代，例如11C、18F、15O、和13N，可用於正子發射斷層掃描(PET)，檢查標的所佔體積。
本發明之同位素標定胜肽配體一般可以習知技術者所知的傳統方法製備，或藉由與實施例相似之製程，使用適當同位素標定反應物取代先前所使用之無標定反應物。
分子支架
於一實施例，分子支架包括非芳香性分子支架。本說明書用語「非芳香性分子支架」指涉任何本說明書定義之分子支架，其不包含芳香(即非飽和)碳環或雜環系統。
非芳香性分子支架之適當實例揭露於Heinis et al(2014)Angewandte Chemie,International Edition 53(6)1602-1606。
如上述文件所述，該分子支架可為小分子，例如有機小分子。
於一實施例，該分子支架可為大分子。於一實施例，該分子支架可為胺基酸、核苷酸、或碳水化合物組成之大分子。
於一實施例，該分子支架包括可與多肽之官能基反應以形成共價鍵之反應基團。
該分子支架可包括與胜肽形成連結之化學基團，例如胺、硫醇、醇、酮、醛、腈、羧酸、酯、烯、炔、三氮化物(azides)、酸酐、琥珀醯亞胺(succinimides)、順丁烯二醯亞胺(maleimides)、烷基鹵化物、和醯基鹵化物。
包含αβ不飽和羰基之化合物之實例為1,1',1"-(1,3,5-三嗪烷-1,3,5-三基)三丙-2-烯-1-酮(TATA)(Angewandte Chemie,International Edition(2014),53(6),1602-1606)。
效應物和官能基
本發明另一實施態樣提供一藥物結合物，包括結合至一或多效應物和/或官能基之本說明書所定義胜肽配體。
效應物和/或官能基可連接至例如多肽之N端和/或C端、多肽中的胺基酸、或分子支架。
適當效應物基團包括抗體和其部分或片段。例如，效應物基團可包括抗體輕鏈恆定區(CL)、抗體CH1重鏈域、抗體CH2重鏈域、抗體CH3重鏈域、或其任意組合，以及一或多恆定區域。效應物基團亦可包括抗體鉸鍊區(hinge region)(該區通常位於IgG分子的CH1和CH2域之間)。
於本發明實施態樣之另一實施例，本發明之效應物基團為IgG分子的Fc區。較佳地，本發明之胜肽配體-效應物基團包括或組成自具有至少1日、至少2日、至少3日、至少4日、至少5日、至少6日、或至少7日之tβ半衰期之胜肽配體之Fc融合。更佳地，本發明之胜肽配體包括或組成自具有至少1日之tβ半衰期之胜肽配體之Fc融合。
一般而言，官能基團包括結合基團、藥物、結合其他單元之反應基團、協助細胞吸收大環胜肽之官能基團、或類似物。
胜肽透入細胞之能力可使胜肽有效地拮抗胞內標的。胜肽可穿透細胞抵達之標的包括轉錄因子、胞內訊息分子例如酪胺酸激酶、以及涉及細胞凋亡路徑之分子。可穿透細胞之官能基團包括胜肽或連接胜肽或分子支架之化學基團。前述胜肽例如源自VP22、HIV-Tat、果蠅(Antennapedia)同源框(homeobox)蛋白，例如Chen and Harrison,Biochemical Society Transactions(2007)Volume 35,part 4,p821；Gupta et al.in Advanced Drug Discovery Reviews(2004)Volume 57 9637所揭示。可有效地穿透細胞膜的短胜肽之實例包括源自果蠅觸角足蛋白(Drosophila Antennapedia protein)的16胺基酸穿透肽(penetratin)(Derossi et al(1994)J Biol.Chem.Volume 269 p10444)、18胺基酸「模式兩性(amphipathic)胜肽」(Oehlke et al(1998)Biochim Biophys Acts Volume 1414 p127)、和HIV之TAT蛋白之富含精胺酸區域。非胜肽之方法包括：使用小分子模擬物或SMOC，可輕易連接至生物分子(Okuyama et al(2007)Nature Methods Volume 4 p153)。其他連接胍基團至分子的化學方法亦促進細胞穿透(Elson-Scwab et al(2007)J Biol Chem Volume 282 p13585)。小分子量之分子，例如類固醇，可連接至分子支架，以促進細胞吸收。
可連接至胜肽配體之官能基團之一類包括抗體和其結合片段，例如Fab、Fv、或單域片段。特定而言，使用連接可增加胜肽配體之半衰期之蛋白質之抗體。
於一實施例，本發明之胜肽配體-效應物基團具有tβ半衰期選自至少12小時、至少24小時、至少2日、至少3日、至少4日、至少5日、至少6日、至少7日、至少8日、至少9日、至少10日、至少11日、至少12日、至少13日、至少14日、至少15日、或至少20日所構成之群組。較佳地，本發明之胜肽配體-效應物基團或組成物具有之tβ介於12至60小時。於另一實施例，tβ係至少1日。於另一實施例，tβ係介於12至26小時。
於本發明一特定實施例，該官能基團係選自金屬螯合物，適用於複合醫療相關金屬放射同位素。
可能之效應物基團另包括酵素，例如羧肽酶G2，用於酵素/前驅藥物治療，其中胜肽配體取代ADEPT中的抗體。
於本發明一特定實施例，該官能基團係選自藥劑，例如癌症療法之胞殺劑。適當之實例包括：烷化劑如順鉑和卡鉑以及奧沙利鉑(oxaliplatin)、甲基二(氯乙基)胺(mechlorethamine)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、異環磷醯胺(ifosfamide)；抗代謝劑，包括嘌呤相似物硫唑嘌呤(azathioprine)和巰基嘌呤或嘧啶相似物；植物鹼類或萜類，包括長春花鹼(vinca alkaloids)如如長春新鹼(vincristine)、長春鹼(vinblastine)、長春瑞濱(vinorelbine)、和長春地辛(vindesine)；鬼臼毒素及其衍生物依託泊苷(etoposide)和替尼泊苷(teniposide)；紫杉烷(taxane)，包括紫杉醇(原名Taxol)；拓樸酶抑制劑，包括喜樹鹼(camptothecin)：愛萊諾迪肯(irinotecan)和托普樂肯(Topotecan)，以及第二型抑制劑，包括安吖啶(amsacrine)、依託泊苷(etoposide)、依託泊苷磷酸鹽(etoposide phosphate)、和替尼泊苷(teniposide)。其他藥劑可包括：腫瘤抗生素，包括免疫抑制劑放線菌素(dactinomycin)(用於腎臟移植)、多柔比星(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、博來黴素(bleomycin)、刺孢黴素(calicheamycin)、和其他。
於本發明另一特定實施例，胞殺劑係選自類美登素(Maytansinoids)(例如DM1)或單甲基奧里斯他汀(auristatin)(例如MMAE)。
DM1係一種胞殺劑，為包括硫醇之美登素(maytansine)衍生物並具有下列結構：
Figure 108121725-A0202-12-0021-1
本說明書表3中顯示了數據，其證明了胜肽配體結合至含有DM1的毒素的效果。
單甲基奧里斯他汀E(Monomethyl auristatin E(MMAE))係一種合成抗腫瘤劑並具有下列結構：
Figure 108121725-A0202-12-0021-2
本說明書在表3中列出了數據，其證明了胜肽配體結合至含有MMAE的毒素的效果。
於本發明另一特定實施例，胞殺劑係選自單甲基奧里斯他汀E(MMAE)。
於一實施例，該胞殺劑藉由一可裂解鍵連接二環胜肽，例如雙硫鍵或蛋白酶敏感鍵。於另一實施例，鄰接雙硫鍵之基團具有修飾，以控制雙硫鍵之阻礙，以及控制胞殺劑裂解率和伴隨之釋放。
已有公開文獻建立修飾雙硫鍵的還原易感性的方法，係藉由將立體阻礙引入雙硫鍵任一側(Kellogg et al(2011)Bioconjugate Chemistry,22,717)。較大程度的立體阻礙可降低胞內麩胺基硫以及胞外(系統性)還原劑造成還原的速率，因此無論於胞內或胞外均可降低釋放毒素的容易度。因此，可藉由小心選擇雙硫鍵任一側之阻礙度來達成循環中適當的雙硫鍵穩定性選擇(最小化毒素的不必要副作用)以及胞內環境的釋放效率(將療效最大化)。
藉由將一或多甲基引入分子構築體之靶向物(此處為雙環胜肽)或毒素側，可調整雙硫鍵任一側之阻礙。
於一實施例，胞殺劑和連接子係選自WO 2016/067035所揭露之任意組合(其胞殺劑和連接子以引用方式併入本說明書中)。
於一實施例，在該胞殺劑和該雙環胜肽之間的連接子包含一或多胺基酸殘基。作為適當連接子的適當胺基酸殘基之實例包含Ala、Cit、Lys、Trp以及Val。
於一實施例，胞殺劑係選自MMAE，並且該藥物結合物更包括選自以下之連接子：-PABC-Cit-Val-戊二醯基-(-PABC-Cit-Val-Glutaryl-)或-PABC-環丁基-Ala-Cit-βAla-(-PABC-cyclobutyl-Ala-Cit-βAla-)，其中，PABC表示對胺基苄基胺甲酸酯(p-aminobenzylcarbamate)。含有環丁基的連接子的全部細節可參見Wei et al(2018)J.Med.Chem.61,989-1000。於另一實施例，胞殺劑係選自MMAE，並且連接子為-PABC-Cit-Val-戊二醯基-。
於另一實施例，胞殺劑係為DM1，並且該藥物結合物更包括連接子-SPDB-(SO3H)-，其中，SPDB表示N-琥珀醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯(N-succinimidyl 3-(2-pyridyldithio)propionate)。
於另一實施例，胞殺劑係為MMAE，雙環胜肽係選自如本說明書所定義之BCY8234，並且連接子係選自-PABC-Cit-Val-戊二醯基-。該BDC在本說明書中稱為BCY8245，並且示意性地表示為：
Figure 108121725-A0202-12-0023-3
並且可更詳細地表示為：
Figure 108121725-A0202-12-0024-4
如表3所示，本說明書提供之數據顯示，在SPR結合測定中BCY8245對人類Nectin-4具有優異的結合性。該BDC在如實施例1所示之非小細胞肺癌模型、如實施例2所示之膀胱癌模型、如實施例3所示之胰臟癌模型以及如實施例4所示之乳癌模型中也顯示出良好的抗腫瘤活性。
於另一實施例，胞殺劑係為MMAE，雙環胜肽係選自如本說明書所定義之BCY8234，且連接子係選自-PABC-環丁基-(B-Ala)-。在本說明書中，該BDC被稱為BCY8549。本說明書提供的數據顯示在SPR結合測定中BCY8549對人類Nectin-4具有優異的結合性，如表3所示。
於另一實施例，雙環藥物結合物係選自BCY8245或BCY8549。於另一實施例，雙環藥物結合物是BCY8245。該藥物結合物BCY8245顯示出優異的劑量依賴性抗腫瘤活性，如本說明書之數據所示。
合成
本發明之胜肽可藉由標準技術來合成製備，而後與分子支架於體外反應。製備時可使用標準化學方法。其可快速大量製備可溶性材料，用於後續實驗或驗證。該些方法可使用傳統化學方法實施，例如文獻Timmerman et al(supra)所揭示。
因此，本發明另關於如本說明書所述選擇之多肽或結合物之製備，其中該製備包括選擇性之其他步驟，如下文所述。於一實施例，該些步驟係用於化學合成所製造之多肽/結合物終端產物。
製備結合物或複合物時，目標多肽中的胺基酸殘基可選擇性地被取代。
可將胜肽延長以包括例如另一環，因此可引入多重專一性。
可使用標準固相或液相化學方法，簡單地延伸N端或C端、或使用正交保護(Orthogonally protected)離胺酸(和類似物)於環內延伸，以延伸該胜肽。標準(生物)結合技術可用於引入活化或可活化之N或C端。或者，可藉由片段縮合(condensation)或自然化學連接(ligation)實施加成反應，例如文獻Dawson et al.1994.Synthesis of Proteins by Native Chemical Ligation.Science 266：776-779所揭示，或藉由酵素實施加成反應，例如使用枯草連接酶(subtiligase)，如文獻Chang et al Proc Natl Acad Sci U S A.1994 Dec 20；91(26)：12544-8或Hikari et al Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters Volume 18,Issue 22,15 November 2008,Pages 6000-6003所述。
或者，可另藉由雙硫鍵結合以延伸或修飾胜肽。其具有之優勢在於一旦位於細胞的還原環境中即可使第一和第二胜肽彼此分離。若是如此，可於化學合成第一胜狀時加入分子支架(例如TATA)，使其與三半胱胺酸基團反應；另一半胱胺酸基團或硫醇可接著附加於該第一胜肽之N或C端，因此該半胱胺酸或硫醇僅與第二胜肽之自由半胱胺酸或硫醇反應，從而形成連結雙硫化物之雙環胜肽-胜肽結合物。
相似技術可同樣應用於合成/耦合二雙環和雙專一性大環，具製造四專一性分子的潛力。
再者，可以相同方法加成其他官能基或效應物基團，使用適當化學方法，於N或C端或藉側鏈耦合。於一實施例，該耦合係以不阻礙各反應物之活性的方式實施。
醫藥組成物
本發明另一實施態樣係提供一種醫藥組成物，包括本說明書定義之胜肽配體或藥物結合物以及一或多醫藥上可接受之賦形劑。
一般而言，本發明之胜肽配體可以純化形式與藥理學上適當之賦形劑或載劑一併使用。該些賦形劑或載劑通常包括水性或醇類/水性溶液、乳化劑、或懸浮劑，包括鹽水和/或緩衝介質。腸道外載劑包括氯化鈉溶液、林格氏葡萄糖、葡萄糖和氯化鈉和乳酸化林格氏溶液。若有必要將多肽複合物保持於懸浮劑，可自增厚劑選擇適當生理可接受之佐劑，例如羧甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、明膠、和藻酸鹽。
靜脈內載劑包括流體和營養補充液和電解質補充液，例如基於林格氏葡萄糖調製的。亦可存在防腐劑和其他添加物，例如抗微生物劑、抗氧化劑、螯合劑、和惰性氣體(Mack(1982)Remington's Pharmaceutical Sciences,16th Edition)。
本發明之胜肽配體可用於分別給藥之組成物或與其他藥劑一併使用。該些藥劑可包括抗體、抗體片段、和多種免疫治療藥物，例如環孢素(cylcosporine)、胺甲喋呤(methotrexate)、阿德力黴素(adriamycin)、或順鉑以及免疫毒素。醫藥組成物可包括多種胞殺劑或其他藥劑與本發明之胜肽配體合併使用之「雞尾酒療法」，或經選擇之本發明之多肽組合，其具有不同專一性，例如使用不同標的配體選擇之多肽，於給藥前可混合或不必混合之。
本發明之醫藥組成物之給藥途徑可為任何習知技術者所知的途徑。用於治療時，本發明之胜肽配體可依據標準技術給予任何患者。可藉由任何適當模式給藥，包括腸道內、靜脈、肌內、腹腔內、透皮、肺途徑、或適當地藉由導管直接輸液。較佳地，本發明之醫藥組成物可藉由吸入給藥。給藥之 劑量和頻率係由醫師依據年齡、性別、患者病況、同時服用其他藥物、用藥禁忌、和其他參數而考量。
本發明之胜肽配體可凍乾用於保存，並於使用前以適當載劑重構。此技術顯示為有效，並可使用習知的凍乾和重構技術。習知技術者可知，凍乾和重構可造成不同程度的活性喪失，而劑量可能必須上調作為補償。
包括本發明之胜肽配體或其雞尾酒之組成物之給藥可用於預防或治療。於特定治療用途，用於完成經選擇之細胞族群之至少部分抑制、抑止、調節、消滅、或其他可測量參數的適當量係定義為「治療有效劑量」。達成此劑量之量將依據疾病嚴重度和患者自身免疫系統之一般狀態而定，但經選擇之胜肽配體一般介於每公斤體重0.005至5.0毫克(mg)，更常使用0.05至2.0mg/kg/劑之劑量。於預防用途，包括本發明之胜肽配體或其雞尾酒之組成物可以相似或較低劑量給藥。
包括本發明之胜肽配體之組成物可用於預防或治療，以協助改變、去活化、消滅、或移除哺乳類動物中經選擇之標的細胞族群。此外，本說明書所述之胜肽配體可用於體外或胞外選擇性地自異質細胞群之中消滅、消耗、或以其他方式有效地移除標的細胞族群。依據標準技術，哺乳類的血液可於體外結合經選擇之胜肽配體，從而不需要的細胞可被從血液中消滅或移除，並返回哺乳類動物。
與一或多種其他治療劑共同給藥
根據待治療的特定病症或疾病，通常用於治療該病症的其他治療劑也可存在於本發明的組成物中。因此，於一實施例，該藥物組成物更包含一 或多種治療劑。如本說明書所使用，通常用於治療特定疾病或病症的其他治療劑被稱為「適合所治療的疾病或病症」。
於一些實施例，本發明提供一種治療揭露的疾病或病症的方法，包括向有此需要的患者投予有效量的本說明書公開的化合物或其醫藥上可接受的鹽，並同時或依序共同施用有效量的一或多種其他治療劑，例如本說明所述的那些治療劑。於一些實施例，該方法包括共同施用一種其他治療劑。於一些實施例，該方法包括共同施用其他兩種治療劑。於一些實施例，所揭露的化合物和其他一或多治療劑的組合具有協同作用。
本發明之化合物還可以與已知的治療過程組合使用，例如激素或放射線的施用。於某些實施例，所提供的化合物係用作為放射增敏劑，尤其係用於治療對放射療法具有不良敏感性的腫瘤。
本發明的化合物可單獨施用或與一或多種其他治療性化合物共同給藥，可能的組合療法係採取固定組合的形式、本發明化合物和一或多種其他治療化合物交錯地或彼此獨立給予地施用、或固定組合和一或多種其他治療化合物的組合施用。除此之外或另外地，本發明之化合物可與化學療法、放射療法、免疫療法、光療法、外科手術或其組合結合使用以特別地施用於腫瘤治療。在其他治療策略的情況下，長期治療同樣可能是輔助治療，如上所述。其他可能的治療方法是在腫瘤消退後維持患者狀態的治療，甚至是化學預防治療，例如用於有風險的患者。
作為多次給藥方案的一部分，一或多種其他治療劑可與本發明之化合物或組成物分開施用。或者，一或多種其他治療劑可為單一劑型的一部分，其在單一組成物內與本發明之化合物混合。若以多次給藥方案施用，一或多種 其他治療劑和本發明之化合物或組成物可彼此同時、依次或在一段時間內施用，例如彼此在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24小時內。於一些實施例，一或多種其他治療劑和本發明之化合物或組成物以相隔大於24小時的多次給藥方案施用。
如本說明書所使用之術語「組合」或「組合的」是指本發明治療劑的同時或按順序給藥。舉例而言，本發明化合物可與一或多種其他治療劑同時或是按順序給藥，其可以是分離的單位劑型或是單一的單位劑型給藥。因此，本發明提供單一單位劑型，其包含本發明之化合物，一或多種其他治療劑和醫藥上可接受之載劑、佐劑或媒介物。
可和載劑材料結合以產生單一劑型之本發明化合物以及一或多種其他治療劑(在包括如上所述之其他治療劑的那些組成物中)的量將根據所治療的受試者而不同。和特定的管理方式。較佳地，為了給藥，本發明所調配之組成物中本發明化合物之劑量應在0.01-100毫克/公斤體重/天。
在包含一或多種其他治療劑的該些組成物中，該一或多種其他治療劑和本發明化合物可以協同作用。因此，在該些組成物中的一或多種其他治療劑的量可少於僅使用該治療劑的單藥治療所需的量。在該些組成物中，可施用劑量為0.01-1,000微克/公斤體重/天的一或多種其他治療劑。
本發明之組成物中存在的一或多種其他治療劑的量可少於該治療劑在組成物中作為唯一治療劑時通常的量。較佳地，在本發明公開的組成物中的一或多種其他治療劑的量約為在包含該治療劑作為唯一治療劑通常的量的50%至100%。於一些實施例，一或多種其他治療劑以通常施用該治療劑的量的約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90 或約95%給藥。如本說明書用語「通常施用」是指根據每個FDA說明書提供的FDA批准的用於給藥的治療劑的量。
本發明化合物或其醫藥組成物也可加入至用於塗覆可植入醫療裝置的組成物中，該醫療裝置舉例而言可為假體、人工瓣膜、血管移植物、支架和導管。例如血管支架已被用於克服再狹窄(損傷後血管壁的再度狹窄)。然而，使用支架或其他可植入裝置的患者會有凝塊形成或血小板活化的風險。藉由預先用包含激酶抑制劑的醫藥上可接受的組成物塗覆於裝置上可避免這些不待見的反應。本發明另一實施例為塗覆本發明化合物之可植入裝置。
其他治療劑之示例
於一些實施例，一或多種其他治療劑係為多聚ADP核糖聚合酶(PARP)抑制劑。於一些實施例，PARP抑制劑係選自奧拉帕尼(olaparib)(Lynparza®,AstraZeneca)、魯卡帕尼(rucaparib)(Rubraca®,Clovis Oncology)、尼拉帕尼(niraparib)(Zejula®,Tesaro)、拉唑帕尼(talazoparib)(MDV3800/BMN 673/LT00673,Medivation/Pfizer/Biomarin)、維利帕尼(veliparib)(ABT-888,AbbVie)以及BGB-290(BeiGene,Inc.)。
於一些實施例，一或多種其他治療劑係為組蛋白去乙醯酶(HDAC)抑制劑。於一些實施例，HDAC抑制劑選自伏立諾他(vorinostat)(Zolinza®,Merck)、羅米地辛(romidepsin)(Istodax®,Celgene)、帕比司他(panobinostat)(Farydak®,Novartis)、貝利司他(belinostat)(Beleodaq®,Spectrum Pharmaceuticals)、恩替諾特(entinostat)(SNDX-275,Syndax Pharmaceuticals)(NCT00866333)以及西達本胺(chidamide)(Epidaza®,HBI-8000,Chipscreen Biosciences,China)。
於一些實施例，一或多種其他治療劑係為CDK抑制劑，例如CDK4/CDK6抑制劑。於一些實施例，CDK 4/6抑制劑係選自(palbociclib)(Ibrance®,Pfizer)、瑞博西尼(ribociclib)(Kisqali®,Novartis)、玻瑪西林(abemaciclib)(Ly2835219,Eli Lilly)以及曲來西尼(trilaciclib)(G1T28,G1 Therapeutics)。
於一些實施例，一或多種其他治療劑係為磷脂肌醇-3-激酶(PI3K)抑制劑。於一些實施例，PI3K抑制劑係選自艾代拉利司(idelalisib)(Zydelig®,Gilead)、阿派裡斯(alpelisib)(BYL719,Novartis)、他賽裡斯(taselisib)(GDC-0032,Genentech/Roche)、匹替裡斯(pictilisib)(GDC-0941,Genentech/Roche)、庫盼裡斯(copanlisib)(BAY806946,Bayer)、杜維裡斯(duvelisib)(原IPI-145,Infinity Pharmaceuticals)、PQR309(Piqur Therapeutics,Switzerland)以及TGR1202(原RP5230,TG Therapeutics)。
於一些實施例，一或多種其他治療劑係為鉑類治療劑(platinum-based therapeutic)，也稱為鉑類(platins)。鉑類引起DNA的交聯，主要在快速繁殖細胞(例如癌細胞)中抑制DNA修復及/或DNA合成。於一些實施例，鉑類治療劑係選自順鉑(cisplatin)(Platinol®,Bristol-Myers Squibb)、卡鉑(carboplatin)(Paraplatin®,Bristol-Myers Squibb；和Teva；Pfizer)、奧沙利鉑(oxaliplatin)(Eloxitin® Sanofi-Aventis)、奈達鉑(nedaplatin)(Aqupla®,Shionogi)、吡鉑(picoplatin)(Poniard Pharmaceuticals)、以及賽特鉑(satraplatin)(JM-216,Agennix)。
於一些實施例，一或多種其他治療劑係為紫杉烷化合物，其引起細胞微管的破壞，而細胞微管對於細胞分裂是必需的。於一些實施例，紫杉烷化合物係選自紫杉醇(paclitaxel)(Taxol®,Bristol-Myers Squibb)、多西紫杉醇 (docetaxel)(Taxotere®,Sanofi-Aventis；Docefrez®,Sun Pharmaceutical)、白蛋白結合的紫杉醇(slbumin-bound paclitaxel)(Abraxane®；Abraxis/Celgene)、卡巴他賽(cabazitaxel)(Jevtana®,Sanofi-Aventis)以及SID530(SK Chemicals,Co.)(NCT00931008)。
於一些實施例，一或多種其他治療劑係核苷抑制劑，或干擾正常DNA合成、蛋白質合成、細胞複製或抑制快速增生細胞的治療劑。
於一些實施例，核苷抑制劑係選自曲貝替定(trabectedin)(胍烷化劑，Yondelis®,Janssen Oncology)、氮芥(mechlorethamine)(烷化劑，Valchlor®,Aktelion Pharmaceuticals)、長春新鹼(vincristine)(Oncovin®,Eli Lilly；Vincasar®,Teva Pharmaceuticals；Marqibo®,Talon Therapeutics)、帝盟多(temozolomide)(烷化劑5-(3-甲基三氮雜-1-基)-咪唑-4-甲醯胺(MTIC)Temodar®的前驅藥，Merck)、阿糖胞苷注射劑(cytarabine injection)(ara-C，抗代謝胞苷類似物，Pfizer)、洛莫司汀(lomustine)(烷化劑CeeNU®,Bristol-Myers Squibb；Gleostine®,NextSource Biotechnology)、阿扎胞苷(azacitidine)(胞苷的嘧啶核苷類似物，Vidaza®,Celgene)、高三尖杉酯鹼(omacetaxine mepesuccinate)(Cephalotaxine ester)(蛋白質合成抑制劑，Synribo®；Teva Pharmaceuticals)、天門冬醯胺酶Erwinia chrysanthemi(asparaginase Erwinia chrysanthemi)(用於消除天冬醯胺的酶，Elspar®,Lundbeck；Erwinaze®,EUSA Pharma)、甲磺酸艾瑞布林(eribulin mesylate)(微管抑制劑，微管蛋白類抗有絲分裂劑，Halaven®,Eisai)、卡巴他賽(cabazitaxel)(微管抑制劑，微管蛋白類抗有絲分裂，Jevtana®,Sanofi-Aventis)、capacetrine(胸苷酸合成酶抑制劑，Xeloda®,Genentech)、苯達莫司汀(bendamustine)(雙功能甲基二(氯乙基)胺衍生物，據信形成DNA股間交叉鏈結，Treanda®,Cephalon/Teva)、易莎平 (Ixabepilone)(Epothilone B的半合成類似物，微管抑制劑，微管蛋白類抗有絲分裂劑，Ixempra®，Bristol-Myers Squibb)、奈拉濱(nelarabine)(去氧鳥苷類似物的前驅藥，核苷代謝抑制劑，Arranon®，Novartis)、克羅拉濱(clorafabine)(核糖核苷酸還原酶抑制劑的前驅藥，去氧胞苷的競爭性抑制劑，Clolar®，Sanofi-Aventis)以及曲氟尿苷與替普瑞新(trifluridine and tipiracil)(胸苷類核苷類似物和胸苷磷酸化酶抑制劑，Lonsurf®，Taiho Oncology)。
於一些實施例，一或多種其他治療劑係為激酶抑制劑或VEGF-R拮抗劑。適用於本發明認可的VEGF抑制劑和激酶抑制劑包括：貝伐單抗(bevacizumab)(Avastin®，Genentech/Roche)，抗VEGF單株抗體、雷莫司單抗(ramucirumab)(Cyramza®，Eli Lilly)、抗VEGFR-2抗體和ziv-aflibercept(anti-VEGFR-2 antibody and ziv-aflibercept)，也稱為VEGF Trap(Zaltrap®；Regeneron/Sanofi)。VEGFR抑制劑，例如瑞格非尼(regorafenib)(Stivarga®，Bayer)、凡德他尼(vandetanib)(Caprelsa®，AstraZeneca)、阿西替尼(axitinib)(Inlyta®，Pfizer)、和樂伐替尼(lenvatinib)(Lenvima®，Eisai)；Raf抑制劑，例如索拉非尼(sorafenib)(Nexavar®，Bayer AG和Onyx)、達拉菲尼(dabrafenib)(Tafinlar®，Novartis)、和威羅菲尼(vemurafenib)(Zelboraf®，Genentech/Roche)；MEK抑制劑，例如考比替尼(cobimetanib)(Cotellic®，Exelexis/Genentech/Roche)、曲美替尼(trametinib)(Mekinist®，Novartis)；Bcr-Abl酪胺酸激酶抑制劑，例如伊馬替尼(imatinib)(Gleevec®，Novartis)、尼羅替尼(nilotinib)(Tasigna®，Novartis)、達沙替尼(dasatinib)(Sprycel®，BristolMyersSquibb)、博舒替尼(bosutinib)(Bosulif®，Pfizer)和普納替尼(ponatinib)(Inclusig®，Ariad Pharmaceuticals)；Her2和EGFR抑制劑，如吉非替尼(gefitinib)(Iressa®，AstraZeneca)、厄洛替尼(erlotinib)(Tarceeva®， Genentech/Roche/Astellas)、拉帕替尼(lapatinib)(Tykerb®，諾華)、阿法替尼(afatinib)(Gilotrif®，Boehringer Ingelheim)、奧希替尼(osimertinib)(靶向活化的EGFR，Tagrisso®，AstraZeneca)和博瑞加替尼(brigatinib)(Alunbrig®，Ariad Pharmaceuticals)；c-Met和VEGFR2抑制劑，例如卡博替尼(cabozanitib)(Cometriq®，Exelexis)；和多激酶抑制劑，如舒尼替尼(sunitinib)(Sutent®，Pfizer)、帕唑帕尼(pazopanib)(Votrient®，Novartis)；ALK抑制劑，如克唑替尼(crizotinib)(Xalkori®，Pfizer)；色瑞替尼(ceritinib)(Zykadia®，Novartis)和阿雷替尼(aectinib)(Alecenza®，Genentech/Roche)；布魯頓氏酪胺酸激酶抑制劑(Bruton’s tyrosine kinase)，如依魯替尼(ibrutinib)(Imbruvica®，Pharmacyclics/Janssen)；和Flt3受體抑制劑，如米哚妥林(midostaurin)(Rydapt®，Novartis)。
其他正在開發中並可用於本發明的激酶抑制劑和VEGF-R拮抗劑包括：替沃紮尼(tivozanib)(Aveo Pharmaecuticals)、瓦他拉尼(vatalanib)(Bayer/Novartis)、德立替尼(lucitanib)(Clovis Oncology)、多韋替尼(dovitinib)(TKI258,Novartis)、西奧羅尼(chiauanib)(Chipscreen Biosciences)、CEP-11981(Cephalon)、利尼伐尼(linifanib)(Abbott Laboratories)、來那替尼(neratinib)(HKI-272，Puma Biotechnology)、雷多替尼(radotinib)(Supect®，IY5511，Il-Yang Pharmaceuticals，S.Korea)、魯索利替尼(ruxolitinib)(Jakafi®，Incyte Corporation)、PTC299(PTC Therapeutics)、CP-547,632(Pfizer)、弗雷替尼(foretinib)(Exelexis，GlaxoSmithKline)、奎扎替尼(quizartinib)(Daiichi Sankyo)和莫特塞尼(motesanib)(Amgen/Takeda)。
於一些實施例，一或多種其他治療劑係mTOR抑制劑，其抑制細胞增生、血管生成和葡萄糖攝取。於一些實施例，mTOR抑制劑係依維莫司(everolimus)(Afinitor®，Novartis)、特適癌temsirolimus(Torisel®，Pfizer)和西羅莫司(sirolimus)(Rapamune®，Pfizer)。
於一些實施例，一或多種其他治療劑係蛋白酶體抑制劑。可用於本發明認可的蛋白酶體抑制劑包括硼替佐米(bortezomib)(Velcade®，Takeda)、卡非佐米(carfilzomib)(Kyprolis®，Amgen)和伊沙佐米(ixazomib)(Ninlaro®，Takeda)。
於一些實施例，一或多種其他治療劑係生長因子拮抗劑，例如血小板衍生生長因子(PDGF)或表皮生長因子(EGF)或其受體(EGFR)的拮抗劑。可用於本發明認可的PDGF拮抗劑包括奧拉單抗(Lartruvo®；Eli Lilly)。可用於本發明認可的EGFR拮抗劑包括：西妥昔單抗(cetuximab)(Erbitux®，Eli Lilly)、奈昔妥珠單抗(necitumumab)(Portrazza®，Eli Lilly)、帕尼單抗(panitumumab)(Vectibix®，Amgen)和奥希替尼(osimertinib)(靶向活化的EGFR，Tagrisso®，AstraZeneca)。
於一些實施例，一或多種其他治療劑係芳香酶抑制劑。在一些實施方案中，芳香酶抑制劑係選自：依西美坦(exemestane)(Amemasin®，Pfizer)、安那斯它佐(anastazole)(Arimidex®，AstraZeneca)和來曲唑(letrozole)(Femara®，Novartis)。
於一些實施例，一或多種其他治療劑是刺蝟途徑(hedgehog pathway)的拮抗劑。可用於本發明認可的刺蝟途徑抑制劑包括：索尼得吉(sonidegib)(Odomzo®，Sun Pharmaceuticals)和維莫德吉(vismodegib)(Erivedge®，Genentech)，兩者皆用於治療基底細胞癌。
於一些實施例，一或多種其他治療劑係葉酸抑制劑。可用於本發明認可的葉酸抑制劑包括培美曲塞(pemetrexed)(Alimta®，Eli Lilly)。
於一些實施例，一或多種其他治療劑是CC趨化激素受體4(CCR4)抑制劑。可用於本發明的正在研究的CCR4抑制劑包括莫迦木單抗(mogamulizumab)(Poteligeo，Kyowa Hakko Kirin，Japan)。
於一些實施例，一或多種其他治療劑係異檸檬酸脫氫酶(IDH)抑制劑。可用於本發明的IDH抑制劑包括：AG120(Celgene；NCT02677922)、AG221(Celgene，NCT02677922；NCT02577406)、BAY1436032(Bayer，NCT02746081)、IDH305(Novartis，NCT02987010)。
於一些實施例，一或多種其他治療劑係精胺酸酶抑制劑。可用於本發明的精胺酸酶抑制劑包括：AEB1102(聚乙二醇化重組精胺酸酶，Aeglea Biotherapeutics)，其正在急性骨髓性白血病和骨髓增生不良症候群(NCT02732184)和實體腫瘤(NCT02561234)的第一期臨床試驗中進行研究；以及CB-1158(Calithera Biosciences)。
於一些實施例，一或多種其他治療劑係麩醯胺酸酶抑制劑。可用於本發明的研究的麩醯胺酸酶抑制劑包括CB-839(Calithera Biosciences)。
於一些實施例，一或多種其他治療劑係結合腫瘤抗原的抗體，即，在腫瘤細胞的細胞表面上表現的蛋白質。可用於本發明認可的與腫瘤抗原結合的抗體包括：利妥昔單抗(rituximab)(Rituxan®，Genentech/BiogenIdec)、奧法木單抗(ofatumumab)(抗-CD20，Arzerra®，GlaxoSmithKline)、奧濱尤妥珠單抗(obinutuzumab)(抗-CD20，Gazyva®，Genentech)、替伊莫單抗(ibritumomab)(抗-CD20和Yttrium-90，Zevalin®，Spectrum Pharmaceuticals)、達雷木單抗 (daratumumab)(抗-CD38，Darzalex®，Janssen Biotech)、地努圖希單抗(dinutuximab)(抗醣脂GD2，Unituxin®，United Therapeutics)；曲妥珠單抗(trastuzumab)(抗HER2，Herceptin®，Genentech)、ado-trastuzumab emtansine(抗HER2，與emtansine融合，Kadcyla®，Genentech)、帕妥珠單抗(pertuzumab)(抗-HER2，Perjeta®，Genentech)和貝倫妥單抗維多汀(brentuximab vedotin)(抗-CD30-藥物結合物，Adcetris®，Seattle Genetics)。
於一些實施例，一或多種其他治療劑係拓撲異構酶抑制劑。可用於本發明認可的拓撲異構酶抑制劑包括：伊立替康(irinotecan)(Onivyde®，Merrimack Pharmaceuticals)、拓撲替康(topotecan)(Hycamtin®，GlaxoSmithKline)。可用於本發明的正在研究的拓撲異構酶抑制劑包括匹杉瓊(pixantrone)(Pixuvri®，CTI Biopharma)。
於一些實施例，一或多種其他治療劑係抗凋亡蛋白抑制劑，例如BCL-2。可用於本發明認可的抗凋亡劑包括：維奈托克(venetoclax)(Venclexta®，AbbVie/Genentech)和布拿土摩單抗(blinatumomab)(Blincyto®，Amgen)。其他經過臨床試驗且可用於本發明的凋亡蛋白標靶治療劑包括：那托克斯(navitoclax)(ABT-263，Abbott)，BCL-2抑制劑(NCT02079740)。
於一些實施例，一或多種其他治療劑係雄激素受體抑制劑。可用於本發明認可的雄激素受體抑制劑包括恩雜魯胺(enzalutamide)(Xtndi®，Astellas/Medivation)；認可的雄激素合成抑制劑包括阿比特龍(abiraterone)(Zytiga®，Centocor/Ortho)；認可的促性腺激素釋放激素(GnRH)受體拮抗劑(degaralix，Firmagon®，Ferring Pharmaceuticals)。
於一些實施例，一或多種其他治療劑係選擇性雌激素受體調節劑(SERM)，其干擾雌激素的合成或活性。可用於本發明認可的SERM包括雷洛昔芬(raloxifene)(Evista®，Eli Lilly)。
於一些實施例，一或多種其他治療劑係骨吸收的抑制劑。被認可的抑制骨吸收治療藥物是迪諾塞麥(Denosumab)(Xgeva®，Amgen)，其為與RANKL結合的抗體，阻止RANKL與破骨細胞、破骨細胞先驅物以及類噬骨細胞表面的受體RANK結合，介導骨轉移的實體腫瘤的骨病理學。抑制骨吸收的其他認可的治療劑包括：雙膦酸鹽，例如唑來膦酸(Zometa®，Novartis)。
於一些實施例，一或多種其他治療劑是兩種主要的p53抑制蛋白MDMX和MDM2相互作用的抑制劑。可用於本發明的正在研究的p53抑制蛋白的抑制劑包括ALRN-6924(Aileron)，其為一種裝訂胜肽，等效地結合以及干擾MDMX和MDM2與p53的相互作用。ALRN-6924目前正在治療AML、晚期骨髓增生不良症候群(MDS)和外周T細胞淋巴瘤(PTCL)的臨床試驗中進行評估(NCT02909972；NCT02264613)。
於一些實施例，一或多種其他治療劑係轉化生長因子-β(TGF-β或TGFβ)的抑制劑。可用於本發明的正在研究的TGF-β蛋白抑制劑包括NIS793(Novartis)，其為一種抗-TGF-β抗體，在臨床上被測試用於治療各種癌症，包括乳癌、肺癌、肝癌、結腸直腸癌、胰臟癌、前列腺癌和腎臟癌(NCT 02947165)。於一些實施例，TGF-β蛋白的抑制劑為夫蘇木單抗抗(fresolimumab)(GC1008；Sanofi-Genzyme)，其正進行對黑色素瘤(NCT00923169)、腎臟癌(NCT00356460)和非小細胞肺癌(NCT02581787)的研究。另外，於一些實施例，其他治療劑係TGF-β捕捉劑，如Connolly et al.(2012)Int’l J.Biological Sciences 8：964-978所述。 目前用於治療實體腫瘤的臨床試驗中的治療化合物為M7824(Merck KgaA-舊稱為MSB0011459X)，其為雙專一性、抗-PD-L1/TGFβ捕捉化合物(NCT02699515)和(NCT02517398)。M7824由針對PD-L1的全人源IgG1抗體組成，其與作為TGFß「捕捉劑」的TGFβ的細胞外結構域融合。
於一些實施例，一或多種其他治療劑選自格萊莫單抗-單甲基奧利斯他丁(MMAE)(glembatumumab vedotin-monomethyl auristatin E)(Celldex)，一種與細胞毒性MMAE連接的抗-糖蛋白NMB(gpNMB)抗體(CR011)。gpNMB在不同腫瘤類型過度表現，且和癌細胞的轉移能力相關。
於一些實施例，一或多種其他治療劑係抗增生化合物。該些抗增殖化合物包括(但不限於)：芳香酶抑制劑；抗雌激素；拓撲異構酶I抑制劑；拓撲異構酶II抑制劑；微管活性化合物；烷化化合物；組蛋白去乙醯酶抑制劑；誘導細胞分化過程的化合物；環氧化酶抑制劑；MMP抑制劑；mTOR抑制劑；抗腫瘤抗代謝物；鉑類化合物；靶向/降低蛋白質或脂質激酶活性的化合物和其他抗血管生成化合物；靶向、降低或抑制蛋白質或脂質磷酸酶活性之化合物；性腺釋素促效劑；抗雄激素；甲硫胺酸胺基肽酶抑制劑；基質金屬蛋白酶抑制劑；雙磷酸鹽類；生物反應調節劑；抗增生抗體；肝素酶抑制劑；Ras致癌同功異型物之抑制劑；端粒酶抑制劑；蛋白酶體抑制劑；用於治療惡性血液病之化合物；靶向、降低或抑制Flt-3活性之化合物；Hsp90抑制劑，例如來自Conforma Therapeutics的17-AAG(17-烯丙基胺基格爾德黴素，NSC330507)、17-DMAG(17-二甲基胺基乙基胺基-17-去甲氧基-格爾德黴素，NSC707545)、IPI-504、CNF1010、CNF2024、CNF1010；替莫唑胺(Temodal®)；紡錘體驅動蛋白抑制劑，例如來自GlaxoSmithKline的SB715992或SB743921，或來自CombinatoRx的噴他脒/氯丙 嗪(pentamidine/chlorpromazine)；MEK抑制劑，例如來自Array BioPharma的ARRY142886，來自AstraZeneca的AZd6244，來自Pfizer的PD181461和甲醯四氫葉酸。
本說明書用語「芳香酶抑制劑」係關於一種抑制雌激素產生的化合物，例如，分別將基質雄烯二酮和睪固酮轉化為雌酮和雌二醇。該術語包括(但不限於)：類固醇，尤其是阿托斯汀(atamestane)，依西美坦(exemestane)和福美坦(formestane)，以及，特別是非類固醇，尤其是胺麩精(aminoglutethimide)，羅利米特(roglethimide)，吡啶基乙醯亞胺(pyridoglutethimide)，特蘿斯坦尼(trilostane)，睪內酯(testolactone)，克多可那唑(ketkononazole)，伏氯唑(vorozole)，法倔唑(fadrozole)，阿那曲唑(anastrozole)和來曲唑(letrozole)。依西美坦(exemestane)以商品名AromasinTM銷售。福美坦(formestane)以商品名LentaronTM銷售。法倔唑(fadrozole)以商品名AfemaTM銷售。阿那曲唑(anastrozole)以商品名ArimidexTM銷售。來曲唑(letrozole)以商品名FemaraTM或FemarTM銷售。胺麩精(aminoglutethimide)以商品名OrimetenTM銷售。本發明中包括芳香酶抑制劑化學治療劑的組合對於荷爾蒙受體陽性癌症，例如乳癌，特別有用。
本說明書用語「抗雌激素」係關於一種在雌激素受體層級拮抗雌激素效果的化合物。該術語包括(但不限於)：他莫昔芬(tamoxifen)，氟維司群(fulvestrant)，雷洛昔芬(raloxifene)和鹽酸雷洛昔芬(raloxifene hydrochloride)。他莫昔芬(tamoxifen)以商品名NolvadexTM銷售。雷鹽酸雷洛昔芬(raloxifene hydrochloride)以商品名EvistaTM銷售。氟維司群(fulvestrant)可以商品名FaslodexTM施用。本發明中包括抗雌激素化學治療劑的組合對於雌激素受體陽性癌症，例如乳癌，特別有用。
本說明書用語「抗雄激素」係關於能夠抑制雄激素生物作用的任何物質，包括(但不限於)：比卡魯胺(bicalutamide)(CasodexTM)。本說明書用語「性腺釋素促效劑」包括(但不限於)：阿巴瑞克(abarelix)，戈舍瑞林(goserelin)和醋酸戈舍瑞林(goserelin acetate)。戈舍瑞林(goserelin)可以商品名ZoladexTM施用。
本說明書用語「拓撲異構酶I抑制劑」包括(但不限於)拓撲替康(topotecan)，吉馬替康(gimatecan)，伊立替康(irinotecan)，喜樹鹼(camptothecian)及其類似物，9-硝基喜樹鹼(9-nitrocamptothecin)和大分子喜樹鹼結合物PNU-166148。伊立替康(Irinotecan)舉例可以市售形式施用，例如商標CamptosarTM。拓撲替康(topotecan)以商品名HycamptinTM銷售。
本說明書用語「拓撲異構酶II抑制劑」包括(但不限於)：蒽環黴素，例如多魯必新(doxorubicin)(包括微脂體製劑，例如CaelyxTM)，道羅魯必新(daunorubicin)，丕魯必新(epirubicin)，達魯必新(idarubicin)和雷魯必新(nemorubicin)，蒽醌米托蒽醌(anthraquinones mitoxantrone)和洛索蒽醌(losoxantrone)，以及婆多非脫新脫婆咁(podophillotoxines etoposide)及天婆咁(teniposide)。脫婆咁以商品名EtopophosTM銷售。天婆咁以商品名VM 26-Bristol銷售。多魯必新(doxorubicin)以商品名AcriblastinTM或AdriamycinTM銷售。丕魯必新(epirubicin)以商品名FarmorubicinTM銷售。達魯必新(idarubicin)以商品名ZavedosTM。米托蒽醌以商品名Novantron銷售。
本說明書用語「微管活化劑」係關於微管安定化合物、微管解安定化合物以及微管蛋白聚合抑制劑，包括(但不限於)：紫杉烷類(taxanes)，如紫杉醇(paclitaxel)和多西紫杉醇(docetaxel)；長春花鹼類(vinca alkaloids)，如長春鹼(vinblastine)或硫酸鹽長春鹼(vinblastine sulfate)，長春新鹼(vincristine)或硫酸長 春新鹼(vincristine sulfate)，長春瑞濱(vinorelbine)；第柯多鄰(discodermolide)；秋水仙鹼(cochicine)和埃博黴素(epothilones)及其衍生物。紫杉醇(paclitaxel)以商品名TaxolTM銷售。多西紫杉醇(docetaxel)以商品名TaxotereTM銷售。硫酸鹽長春鹼(vinblastine sulfate)以商品名Vinblastin R.PTM銷售。硫酸長春新鹼(vincristine sulfate)以商品名FarmistinTM銷售。
本說明書用語「烷化劑」包括(但不限於)：環磷醯胺(cyclophosphamide)、異環磷醯胺(ifosfamide)、美法崙(melphalan)或亞硝基脲(BCNU或Gliadel)。環磷醯胺(cyclophosphamide)以商品名CyclostinTM銷售。異環磷醯胺(ifosfamide)以商品名HoloxanTM銷售。
本說明書用語「組蛋白去乙醯酶抑制劑」或「HDAC抑制劑」係關於抑制組蛋白去乙醯酶並具有抗增生活性的化合物。這包括(但不限於)辛二醯基苯胺異羥肟酸(SAHA)。
本說明書用語「抗腫瘤抗代謝物」包括(但不限於)5-氟尿嘧啶或5-FU、卡培他濱(capecitabine)、吉西他濱(gemcitabine)、DNA去甲基化合物，例如5-氮雜胞苷(5-azacytidine)和地西他濱(decitabine)、胺甲喋呤(methotrexate)和依達曲沙(edatrexate)、和葉酸拮抗劑，例如培美曲塞(pemetrexed)。卡培他濱(capecitabine)以商品名XelodaTM銷售。吉西他濱(gemcitabine)以商品名GemzarTM銷售。
本說明書用語「鉑類化合物」包括(但不限於)：卡鉑(carboplatin)、順鉑(cis-platin)、和奧沙利鉑(oxaliplatin)。卡鉑(carboplatin)舉例可以其市售形式投藥，例如商標為CarboplatTM。奧沙利鉑(oxaliplatin)舉例可以其市售形式投藥，例如商標為EloxatinTM。
本說明書用語「靶向/降低蛋白質或脂質激酶活性；或蛋白質或脂質磷酸酶活性的化合物；或其他抗血管生成化合物」包括(但不限於)：蛋白質酪胺酸激酶和/或絲胺酸和/或蘇胺酸激酶抑制劑或脂質激酶抑制劑，例如：a)靶向、降低或抑制血小板衍生生長因子受體(PDGFR)活性的化合物，例如靶向、降低或抑制PDGFR活性的化合物，尤其是那些抑制PDGF受體的化合物，如N-苯基-2-嘧啶-胺衍生物，如伊馬替尼，SU101，SU6668和GFB-111；b)靶向、降低或抑制纖維母細胞生長因子受體(FGFR)活性的化合物；c)靶向、降低或抑制胰島素樣生長因子受體I(IGF-IR)活性的化合物，例如靶向、降低或抑制IGF-IR活性的化合物，尤其是抑制IGF-I受體的激酶活性的化合物，或是靶向IGF-I受體或其生長因子的細胞外結構域的抗體；d)靶向、降低或抑制Trk受體酪胺酸激酶家族活性的化合物或酪胺酸蛋白激酶(ephrin)B4抑制劑；e)靶向、降低或抑制AxI受體酪胺酸激酶家族活性的化合物；f)靶向、降低或抑制Ret受體酪胺酸激酶活性的化合物；g)靶向、降低或抑制Kit/SCFR受體酪胺酸激酶活性的化合物，例如伊馬替尼(imatinib)；h)靶向、降低或抑制C-kit受體酪胺酸激酶(其為PDGFR家族之一)活性的化合物，例如靶向、降低或抑制c-Kit受體酪胺酸激酶家族活性的化合物，尤其是抑制c-Kit受體的化合物，例如伊馬替尼(imatinib)；i)靶向、降低或抑制c-Abl家族成員、其基因融合產物(例如BCR-Abl激酶)和突變體活性的化合物，例如靶向降低或抑制c-Abl家族成員及其基因融合產物，如N-苯基-2-嘧啶-胺衍生物，如伊馬替尼(imatinib)或尼羅替尼(nilotinib)(AMN107)；PD180970；AG957；NSC 680410；PD173955；來自ParkeDavis；或達沙替尼(dasatinib)(BMS-354825)；j)靶向、降低或抑制蛋白激酶C(PKC)和Raf家族絲胺酸/蘇胺酸激酶成員，MEK、SRC、JAK/pan-JAK、FAK、PDK1、PKB/Akt、 Ras/MAPK、PI3K、SYK、TYK2、BTK和TEC家族的成員，和/或細胞周期蛋白依賴型激酶(CDK)的成員，包括星形孢菌素衍生物，例如米哚妥林(midostaurin)；其他化合物的實例包括UCN-01、沙芬戈(safingol)、BAY 43-9006、苔蘚抑素1(Bryostatin 1)、哌立福新(Perifosine)；伊莫福星(llmofosine)；RO 318220和RO 320432；GO 6976；lsis 3521；LY333531/LY379196；異喹啉化合物；FTIs；PD184352或QAN697(P13K抑制劑)或AT7519(CDK抑制劑)；k)靶向、降低或抑制蛋白-酪胺酸激酶抑制劑活性之化合物，例如靶向、降低或抑制蛋白-酪胺酸激酶抑制劑活性之化合物，包括甲磺酸伊馬替尼(GleevecTM)或酪胺酸磷酸化抑制劑(tyrphostin)，例如酪胺酸磷酸化抑制劑A23/RG-50810；AG 99；酪胺酸磷酸化抑制劑AG 213；酪胺酸磷酸化抑制劑AG 1748；酪胺酸磷酸化抑制劑AG 490；酪胺酸磷酸化抑制劑B44；酪胺酸磷酸化抑制劑B44(+)對映異構體；酪胺酸磷酸化抑制劑AG 555；AG 494；酪胺酸磷酸化抑制劑AG 556、AG957及阿當福斯丁(4-{[(2,5-二羥基苯基)甲基]胺基}-苯甲酸金剛烷酯；NSC 680410，adaphostin)；l)靶向、降低或抑制表皮生長因子家族受體酪胺酸激酶(呈同二聚體或雜二聚體形式之EGFR1ErbB2、ErbB3、ErbB4)及其突變體活性之化合物，例如靶向、降低或抑制表皮生長因子受體家族活性之化合物，尤其抑制EGF受體酪胺酸激酶家族成員(如EGF受體、ErbB2、ErbB3及ErbB4)或結合於EGF或EGF相關配體之化合物、蛋白質或抗體，CP 358774，ZD 1839，ZM 105180；曲妥珠單抗(trastuzumab)(HerceptinTM)、西妥昔單抗(cetuximab)(ErbituxTM)、易瑞沙(Iressa)、它賽瓦(Tarceva)、OSI-774、Cl-1033、EKB-569、GW-2016、E1.1、E2.4、E2.5、E6.2、E6.4、E2.11、E6.3或E7.6.3及7H-吡咯并-[2,3-d]嘧啶衍生物；m)靶向、降低或抑制c-Met受體活性之化合物，例如靶向、降低或抑制c-Met活性之化合 物，尤其抑制c-Met受體之激酶活性的化合物，或靶向c-Met之細胞外域或結合於HGF之抗體；n)靶向、降低或抑制一或多種JAK家族成員(JAK1/JAK2/JAK3/TYK2及/或泛-JAK)激酶活性之化合物，包括(但不限於)PRT-062070、SB-1578、巴西替尼(baricitinib)、帕里替尼(pacritinib)、莫羅替尼(momelotinib)、VX-509、AZD-1480、TG-101348、托法替尼(tofacitinib)及魯索利替尼(ruxolitinib)；o)靶向、降低或抑制PI3激酶(PI3K)激酶活性之化合物，包括(但不限於)ATU-027、SF-1126、DS-7423、PBI-05204、GSK-2126458、ZSTK-474、布帕里斯(buparlisib)、皮特里斯(pictrelisib)、PF-4691502、BYL-719、達托里斯(dactolisib)、XL-147、XL-765及艾代拉利司(idelalisib)；及p)靶向、降低或抑制刺蝟因子蛋白(Hh)或平滑受體(SMO)路徑之訊號傳導作用之化合物，包括(但不限於)環巴胺(cyclopamine)、維莫德吉(vismodegib)、伊曲康唑(itraconazole)、埃莫德格(erismodegib)及IPI-926(薩拉德格(saridegib))。
本說明書用語「PI3K抑制劑」包括(但不限於)具有針對磷脂醯肌醇-3-激酶家族中之一或多種酶的抑制活性之化合物，包括(但不限於)PI3Kα、PI3Kγ、PI3Kδ、PI3Kβ、PI3K-C2α、PI3K-C2β、PI3K-C2γ、Vps34、p110-α、p110-β、p110-γ、p110-δ、p85-α、p85-β、p55-γ、p150、p101及p87。適用於本發明中之PI3K抑制劑的實例包括(但不限於)ATU-027、SF-1126、DS-7423、PBI-05204、GSK-2126458、ZSTK-474、布帕里斯(buparlisib)、皮特里斯(pictrelisib)、PF-4691502、BYL-719、達托里斯(dactolisib)、XL-147、XL-765及艾代拉利司(idelalisib)。
本說明書用語「Bcl-2抑制劑」包括(但不限於)對B細胞淋巴瘤2蛋白(Bcl-2)具有抑制活性的化合物，包括(但不限於)ABT-199、ABT-731、 ABT-737、變棉子酚(apogossypol)、Ascenta的泛-Bcl-2抑制劑、薑黃素(及其類似物)、雙重Bcl-2/Bcl-xL抑制劑(Infinity Pharmaceuticals/Novartis Pharmaceuticals)、根納三思(Genasense)(G3139)、HA14-1(及其類似物；參見WO 2008/118802)、那托克斯(navitoclax)(及其類似物，參見US 7,390,799)、NH-1(Shenayng Pharmaceutical University)、奧巴拉西(obatoclax)(及其類似物，參見WO 2004/106328)、S-001(Gloria Pharmaceuticals)、TW系列化合物(Univ.of Michigan)和維奈托克(venetoclax)。於一實施例，Bcl-2抑制劑是小分子治療劑。在一些實施方案中，Bcl-2抑制劑是擬胜肽藥物。
本說明書用語「BTK抑制劑」包括(但不限於)具有針對布魯頓氏酪胺酸激酶(Bruton's Tyrosine Kinase，BTK)之抑制活性的化合物，包括(但不限於)AVL-292及依魯替尼(ibrutinib)。
本說明書用語「SYK抑制劑」包括(但不限於)具有針對脾臟酪胺酸激酶(SYK)之抑制活性的化合物，包括(但不限於)PRT-062070、R-343、R-333、Excellair、PRT-062607及福他替尼(fostamatinib)。
BTK抑制性化合物及可由該等化合物與本發明化合物之組合治療的病狀之其他實例可見於WO2008/039218及WO2011/090760中，該等專利以全文引用的方式併入本文中。
SYK抑制性化合物及可由該等化合物與本發明化合物之組合治療的病狀之其他實例可見於WO2003/063794、WO2005/007623及WO2006/078846中，該等專利以全文引用的方式併入本文中。
PI3K抑制性化合物及可由該等化合物與本發明化合物之組合治療的病狀之其他實例可見於WO2004/019973、WO2004/089925、WO2007/016176、 US8,138,347、WO2002/088112、WO2007/084786、WO2007/129161、WO2006/122806、WO2005/113554及WO2007/044729中，該等專利以全文引用的方式併入本文中。
JAK抑制性化合物及可由該等化合物與本發明化合物之組合治療的病狀之其他實例可見於WO2009/114512、WO2008/109943、WO2007/053452、WO2000/142246及WO2007/070514中，該等專利以全文引用的方式併入本文中。
其他抗血管生成化合物包括對於其活性具有另一機制(例如與蛋白或脂質激酶抑制無關)的化合物，例如沙利度胺(thalidomide)(ThalomidTM)及TNP-470。
適用於與本發明化合物組合使用之蛋白酶體抑制劑的實例包括(但不限於)硼替佐米(bortezomib)、雙硫侖(disulfiram)、表焙兒茶素-3-沒食子酸鹽(EGCG)、鹽孢醯胺A(salinosporamide A)、卡非佐米(carfilzomib)、ONX-0912、CEP-18770及MLN9708。
靶向、降低或抑制蛋白或脂質磷酸酶活性之化合物例如磷酸酶1、磷酸酶2A或CDC25之抑制劑，例如岡田酸(okadaic acid)或其衍生物。
誘導細胞分化過程之化合物包括(但不限於)視黃酸、α-生育酚、γ-生育酚或δ-生育酚或α-生育三烯酚、γ-生育三烯酚或δ-生育三烯酚。
如說明書用語環加氧酶抑制劑包括(但不限於)Cox-2抑制劑、5-烷基取代之2-芳基胺基苯基乙酸及衍生物，例如塞內昔布(celecoxib)(CelebrexTM)、羅非昔布(rofecoxib)(VioxxTM)、依託昔布(etoricoxib)、伐地昔布(valdecoxib)或5- 烷基-2-芳基胺基苯基乙酸(例如5-甲基-2-(2'-氯-6'-氟苯胺基)苯乙酸)、羅美昔布(lumiracoxib)。
本說明書用語「雙膦酸鹽」包括(但不限於)依替酮酸(etridonic acid)、氯膦酸(clodronic acid)、替魯羅酸(tiludronic acid)、帕米膦酸(pamidronic acid)、阿侖膦酸(alendronic acid)、伊班膦酸(ibandronic acid)、利塞膦酸(risedronic acid)及唑來膦酸(zoledronic acid)。依替酮酸(etridonic acid)以商品名稱DidronelTM銷售。氯膦酸(clodronic acid)以商品名稱BonefosTM銷售。替魯羅酸(tiludronic acid)以商品名稱SkelidTM銷售。帕米膦酸(pamidronic acid)以商品名稱ArediaTM銷售。阿侖膦酸(alendronic acid)以商品名稱FosamaxTM銷售。伊班膦酸(ibandronic acid)以商品名稱BondranatTM銷售。利塞膦酸(risedronic acid)以商品名稱ActonelTM銷售。唑來膦酸(zoledronic acid)以商品名稱ZometaTM銷售。用語「mTOR抑制劑」係關於抑制雷帕黴素(rapamycin)之哺乳動物目標(mTOR)且具有抗增生活性之化合物，例如西羅莫司(sirolimus)(Rapamune®)、依維莫司(everolimus)(CerticanTM)、CCI-779及ABT578。
本說明書用語「肝素酶抑制劑」係指靶向、降低或抑制硫酸肝素降解之化合物。該用語包括(但不限於)PI-88。如本說明書所使用，用語「生物反應調節劑」係指淋巴因子或干擾素。
本文用語「Ras致癌同功異型物之抑制劑」(例如H-Ras、K-Ras或N-Ras)係指靶向、降低或抑制Ras致癌活性之化合物；例如「法尼基轉移酶抑制劑」，如L-744832、DK8G557或R115777(ZarnestraTM)。本說明書用語「端粒酶抑制劑」係指靶向、降低或抑制端粒酶活性之化合物。靶向、降低或抑制 端粒酶活性之化合物尤其為抑制端粒酶受體之化合物，諸如端粒酶抑素(telomestatin)。
本說明書用語「甲硫胺酸胺基肽酶抑制劑」係指靶向、降低或抑制甲硫胺酸胺基肽酶活性之化合物。靶向、降低或抑制甲硫胺酸胺基肽酶活性之化合物包括(但不限於)苯胍麥(bengamide)或其衍生物。
本說明書用語「蛋白酶體抑制劑」係指靶向、降低或抑制蛋白酶體活性之化合物。靶向、降低或抑制蛋白酶體活性之化合物包括(但不限於)硼替佐米(Bortezomib)(VelcadeTM)及MLN 341。
本說明書用語「基質金屬蛋白酶抑制劑」或(「MMP」抑制劑)包括(但不限於)膠原蛋白擬胜肽及非擬胜肽抑制劑、四環素衍生物，例如氫草醯胺酸酯擬胜肽抑制劑巴馬司他(batimastat)及其具有經口生物可用性之類似物馬立馬司他(marimastat)(BB-2516)、普馬司他(prinomastat)(AG3340)、美他司他(metastat)(NSC 683551)BMS-279251、BAY 12-9566、TAA211、MMI270B或AAJ996。
本說明書用語「用於治療惡性血液病之化合物」包括(但不限於)FMS樣酪胺酸激酶抑制劑，其為靶向、降低或抑制FMS樣酪胺酸激酶受體(Flt-3R)活性之化合物；干擾素、1-β-D-阿糖呋喃胞嘧啶(ara-c)及白消安(busulfan)；及ALK抑制劑，其為靶向、降低或抑制間變性淋巴瘤激酶之化合物。
靶向、降低或抑制FMS樣酪胺酸激酶受體(Flt-3R)活性之化合物尤其為抑制Flt-3R受體激酶家族成員之化合物、蛋白質或抗體，例如PKC412、米哚妥林(midostaurin)、星形孢菌素衍生物、SU11248及MLN518。
本說明書用語「HSP90抑制劑」包括(但不限於)靶向、降低或抑制HSP90固有ATP酶活性之化合物；經由泛素蛋白酶體路徑降解、靶向、降低或抑制HSP90客戶蛋白之化合物。靶向、降低或抑制HSP90固有ATP酶活性之化合物尤其為抑制HSP90之ATP酶活性的化合物、蛋白質或抗體，如17-烯丙基胺基，17-去甲氧基格爾德黴素(17AAG)(一種格爾德黴素衍生物)；其他格爾德黴素相關化合物；根赤殼菌素(radicicol)及HDAC抑制劑。
本說明書用語「抗增生抗體」包括(但不限於)曲妥珠單抗(HerceptinTM)、曲妥珠單抗-DM1、艾比特思(erbitux)、貝伐單抗(bevacizumab)(AvastinTM)、利妥昔單抗(Rituxan®)、PRO64553(抗-CD40)及2C4抗體。抗體意謂完整單株抗體、多株抗體、由至少兩種完整抗體形成之多專一性抗體及抗體片段，只要其展現所需生物活性即可。
對於急性骨髓白血病(AML)的治療，本發明化合物可與標準白血病療法組合使用，尤其與用於治療AML之療法組合使用。特別地，本發明化合物可與例如法尼基轉移酶抑制劑及/或適用於治療AML之其他藥物組合給藥，例如道羅魯必新(daunorubicin)、阿德力黴素(Adriamycin)、Ara-C、VP-16、替尼泊苷(Teniposide)、米托蒽醌(Mitoxantrone)、達魯必新(Idarubicin)、卡鉑(Carboplatinum)及PKC412。
其他抗白血病化合物舉例包括Ara-C，一種嘧啶類似物，其為去氧胞苷之2'-α-羥基核糖(阿拉伯糖)衍生物。亦包括次黃嘌呤、6-巰基嘌呤(6-MP)及磷酸氟達拉濱(fludarabine phosphate)之嘌呤類似物。靶向、降低或抑制組蛋白去乙醯酶(HDAC)抑制劑活性之化合物(例如丁酸鈉及辛二醯基苯胺氧肟酸(SAHA))抑制稱為組蛋白去乙醯酶之酶的活性。特定HDAC抑制劑包括MS275、 SAHA、FK228(以前為FR901228)、曲古菌素A(Trichostatin A)及US 6,552,065中所揭示之化合物，包括(但不限於)N-羥基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-胺基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯醯胺或其醫醫藥上可接受之鹽及N-羥基-3-[4-[(2-羥基乙基){2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-胺基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯醯胺或其醫醫藥上可接受之鹽，尤其為乳酸鹽。如本說明書所使用，生長抑素(somatostatin)受體拮抗劑係指靶向、處理或抑制生長抑素受體之化合物，例如奧曲肽(octreotide)及SOM230。腫瘤細胞破壞方法係指例如電離輻射之方法。上文及下文中所提及之用語「電離輻射」意謂以電磁射線(例如X射線及γ射線)或粒子(例如α及β粒子)形式發生之電離輻射。電離輻射已於(但不限於)放射療法中提供且為此領域所習知。參見Hellman,Principles of Radiation Therapy,Cancer,in Principles and Practice of Oncology,Devita et al.,Eds.,4th Edition,Vol.1,pp.248-275(1993)。
還包括EDG結合劑及核糖核苷酸還原酶抑制劑。本說明書用語「EDG結合劑」係指一類調節淋巴細胞再循環之免疫抑制劑，例如FTY720。用語「核糖核苷酸還原酶抑制劑」係指嘧啶或嘌呤核苷類似物，包括(但不限於)氟達拉濱及/或胞嘧啶阿拉伯糖苷(ara-C)、6-硫代鳥嘌呤、5-氟尿嘧啶、克拉屈濱(cladribine)、6-巰基嘌呤(尤其與針對ALL之ara-C組合)及/或噴司他丁(pentostatin)。核糖核苷酸還原酶抑制劑尤其係為羥基脲或2-羥基-1H-異吲哚-1,3-二酮衍生物。
尤其亦包括針對VEGF之彼等化合物、蛋白質或單株抗體，例如1-(4-氯苯胺基)-4-(4-吡啶基甲基)酞嗪或其醫醫藥上可接受之鹽、1-(4-氯苯胺基)-4-(4-吡啶基甲基)酞嗪丁二酸鹽；AngiostatinTM；EndostatinTM；鄰胺基苯甲酸醯胺；ZD4190；ZD6474；SU5416；SU6668；貝伐單抗；或抗-VEGF抗體或抗 VEGF受體抗體(例如rhuMAb及RHUFab)、VEGF適體(如Macugon)；FLT-4抑制劑、FLT-3抑制劑、VEGFR-2 IgGI抗體、血管酶(Angiozyme)(RPI 4610)及貝伐單抗(AvastinTM)。
本說明書所使用之光動力學療法係指使用某些稱為感光化合物來治療或預防癌症之化學物質的療法。光動力學療法之實例包括用例如VisudyneTM及卟吩姆鈉(porfimer sodium)之化合物治療。
本說明書所使用之血管生成抑制性類固醇(angiostatic steroid)係指阻斷或抑制血管生成之化合物，例如阿奈可他(anecortave)、曲安西龍(triamcinolone)、氫化可的松、11-α-表氫化皮質醇、皮甾酮(cortexolone)、17α-羥基孕酮、皮質酮、去氧皮質酮、睪丸酮、雌酮及地塞米松。
含有皮質類固醇之植入物係指例如氟輕鬆(fluocinolone)及地塞米松之化合物。
其他化學治療化合物包括(但不限於)：植物生物鹼、激素化合物及拮抗劑；生物反應調節劑，較佳為淋巴因子或干擾素；反義寡聚核苷酸或寡聚核苷酸衍生物；shRNA或siRNA；或混雜化合物或具有其他或未知作用機制之化合物。
由代號、通用名或商品名識別的活性化合物的結構可摘自標準綱要「The Merck Index」的實際版本或來自資料庫，如國際專利(例如IMS World Publications)。
免疫腫瘤藥劑
於一些實施例，一或多種其他治療劑係為免疫腫瘤藥劑。本說明書用語「免疫腫瘤藥劑」係指可有效增強、刺激及/或上調個體之免疫反應之藥 劑。於一實施例，本發明化合物與免疫腫瘤藥劑之投與在治療癌症方面具有協同作用。
免疫腫瘤藥劑舉例可為小分子藥物、抗體或生物分子或小分子。生物學免疫腫瘤藥劑之實例包括(但不限於)：癌症疫苗、抗體及細胞激素。於一些實施例，該抗體為單株抗體。於一些實施例，該單株抗體為人源化或人類抗體。
於一些實施例，該免疫腫瘤藥劑為(i)刺激(包括共同刺激)受體之促效劑或(ii)抑制(包括共同抑制)T細胞之訊號的拮抗劑，兩者均導致抗原專一性T細胞反應放大。
某些刺激及抑制分子為免疫球蛋白超家族(IgSF)之成員。結合至共同刺激或共同抑制受體之膜結合配體的一個重要家族為B7家族，其包括B7-1、B7-2、B7-H1(PD-L1)、B7-DC(PD-L2)、B7-H2(ICOS-L)、B7-H3、B7-H4、B7-H5(VISTA)及B7-H6。結合至共同刺激或共同抑制受體之膜結合配體的另一家族為結合至同源TNF受體家族成員之分子的TNF家族，其包括CD40及CD40L、OX-40、OX-40L、CD70、CD27L、CD30、CD30L、4-1BBL、CD137(4-1BB)、TRAIL/Apo2-L、TRAILR1/DR4、TRAILR2/DR5、TRAILR3、TRAILR4、OPG、RANK、RANKL、TWEAKR/Fn14、TWEAK、BAFFR、EDAR、XEDAR、TACI、APRIL、BCMA、LTβR、LIGHT、DcR3、HVEM、VEGI/TL1A、TRAMP/DR3、EDAR、EDA1、XEDAR、EDA2、TNFR1、淋巴毒素α/TNFβ、TNFR2、TNFα、LTβR、淋巴毒素α 1β2、FAS、FASL、RELT、DR6、TROY和NGFR。
於一些實施例，免疫腫瘤藥劑是抑制T細胞活化的細胞激素(例如，IL-6、IL-10、TGF-β、VEGF和其他免疫抑制細胞激素)或刺激T細胞活化的細胞激素，用於刺激免疫反應。
於一些實施例，T細胞反應可受本發明化合物與一免疫腫瘤藥劑之組合刺激。於一些實施例，免疫腫瘤藥劑是：(i)抑制T細胞活化之蛋白質的拮抗劑(例如，免疫檢查點抑制劑)，例如CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、LAG-3、TIM-3、半乳糖凝集素9、CEACAM-1、BTLA、CD69、半乳糖凝集素-1、TIGIT、CD113、GPR56、VISTA、2B4、CD48、GARP、PD1H、LAIR1、TIM-1及TIM-4；或(ii)刺激T細胞活化之蛋白質的促效劑，例如B7-1、B7-2、CD28、4-1BB(CD137)、4-1BBL、ICOS、ICOS-L、OX40、OX40L、GITR、GITRL、CD70、CD27、CD40、DR3及CD28H。
於一些實施例，免疫腫瘤藥劑是NK細胞上之抑制受體的拮抗劑或NK細胞上之活化受體的促效劑。於一些實施例，免疫腫瘤藥劑是KIR之拮抗劑，例如利魯單抗(lirilumab)。
於一些實施例，免疫腫瘤藥劑是抑制或消耗巨噬細胞或單核細胞之藥劑，包括(但不限於)CSF-1R拮抗劑，例如CSF-1R拮抗劑抗體，包括RG7155(WO 2011/70024、WO 2011/107553、WO 2011/131407、WO 2013/87699、WO 2013/119716、WO 2013/132044)或FPA-008(WO 2011/140249；WO 2013169264；WO 2014/036357)。
於一些實施例，免疫腫瘤藥劑係選自：結合陽性共同刺激受體之促效劑、減弱通過抑制受體之訊號傳遞之阻斷劑、拮抗劑及一或多種全身性增加抗腫瘤T細胞之頻率的藥劑、克服腫瘤微環境內不同免疫抑制路徑(例如，阻 斷抑制受體的參與(例如，PD-L1/PD-1交互作用)、消耗或抑制Treg(例如，使用抗-CD25單株抗體(例如，達利珠單抗(daclizumab))或藉由體外抗-CD25珠消耗)、抑制例如IDO之代謝酶、或逆轉/阻止T細胞能量或衰竭)之藥劑及在腫瘤位置觸發先天免疫活化及/或發炎之藥劑。
於一些實施例，該免疫腫瘤藥劑為CTLA-4拮抗劑。於一些實施例，該CTLA-4拮抗劑是拮抗性CTLA-4抗體。於一些實施例，拮抗性CTLA-4抗體是YERVOY(伊匹單抗(ipilimumab))或曲美單抗(tremelimumab)。
於一些實施例，該免疫腫瘤藥劑為PD-1拮抗劑。於一些實施例，PD-1拮抗劑是透過輸液投予。於一些實施例，該免疫腫瘤藥劑是抗體或其抗原結合部分，其專一性結合Programmed Death-1(PD-1)受體並抑制PD-1活性。於一些實施例，PD-1拮抗劑是拮抗性PD-1抗體。於一些實施例，該拮抗性PD-1抗體是OPDIVO(尼沃單抗(nivolumab))、KEYTRUDA(派立珠單抗(pembrolizumab))、或MEDI-0680(AMP-514；WO 2012/145493)。於一些實施例，免疫腫瘤藥劑可為免疫腫瘤藥劑亦可包括皮立珠單抗(pidilizumab)(CT-011)。於一些實施例，免疫腫瘤藥劑是重組蛋白，該重組蛋白是由與IgG1之Fc部分融合的PD-L2之細胞外結構域(B7-DC)組成，稱為AMP-224。
於一些實施例，免疫腫瘤藥劑是PD-L1拮抗劑。於一些實施例，PD-L1拮抗劑是拮抗性PD-L1抗體。於一些實施例，PD-L1抗體是MPDL3280A(RG7446；WO2010/077634)、德瓦魯單抗(durvalumab)(MEDI4736)、BMS-936559(WO 2007/005874)和MSB0010718C(WO 2013/79174)。
於一些實施例，該免疫腫瘤藥劑為LAG-3拮抗劑。於一些實施例，LAG-3拮抗劑是拮抗性LAG-3抗體。於一些實施例，LAG-3抗體是BMS-986016 (WO 2010/19570、WO 2014/08218)、或IMP-731或IMP-321(WO 2008/132601、WO 2009/44273)。
於一些實施例，免疫腫瘤藥劑為CD137(4-1BB)促效劑。於一些實施例，CD137(4-1BB)促效劑為促效性CD137抗體。於一些實施例，CD137抗體是烏洛單抗(urelumab)或PF-05082566(WO 2012/32433)。
於一些實施例，免疫腫瘤藥劑為GITR促效劑。於一些實施例，GITR促效劑是促效性GITR抗體。於一些實施例，GITR抗體是BMS-986153、BMS-986156、TRX-518(WO 2006/105021、WO 2009/009116)或MK-4166(WO11/028683)。
於一些實施例，免疫腫瘤藥劑為吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO)拮抗劑。於一些實施例，IDO拮抗劑係選自：艾帕斯塔(epacadostat)(INCB024360，Incyte)、吲哚西莫(indoximod)(NLG-8189，NewLink Genetics Corporation)、Capmanitib(INC280，Novartis)、GDC-0919(Genentech/Roche)、PF-06840003(Pfizer)、BMS：F001287(Bristol-Myers Squibb)、Phy906/KD108(Phytoceutica)、一種分解犬尿胺酸的酶(Kynase，Kyn Therapeutics)和NLG-919(WO 2009/73620、WO 2009/1156652、WO 2011/56652、WO 2012/142237)。
於一些實施例，免疫腫瘤藥劑為OX40促效劑。於一些實施例，OX40促效劑是促效性OX40抗體。於一些實施例，OX40抗體是MEDI-6383或MEDI-6469。
於一些實施例，免疫腫瘤藥劑為OX40L拮抗劑。於一些實施例，OX40L拮抗劑是拮抗性OX40抗體。於一些實施例，OX40L拮抗劑是RG-7888(WO 2006/029879)。
於一些實施例，免疫腫瘤藥劑為CD40促效劑。於一些實施例，CD40促效劑是促效性CD40抗體。於一些實施例，免疫腫瘤藥劑是CD40拮抗劑。於一些實施例，CD40拮抗劑是促效性CD40抗體。於一些實施例，CD40抗體是魯卡木單抗(lucatumumab)或達西珠單抗(dacetuzumab)。
於一些實施例，免疫腫瘤藥劑為CD27促效劑。於一些實施例，CD27促效劑為促效性CD27抗體。於一些實施例，CD27抗體是瓦利路單抗(varlilumab)。
於一些實施例，免疫腫瘤藥劑為MGA271(至B7H3)(WO 2011/109400)。
於一些實施例，免疫腫瘤藥劑為阿巴伏單抗(abagovomab)、阿達木單抗(adecatumumab)、阿夫妥珠單抗(afutuzumab)、阿侖單抗(alemtuzumab)、麻安莫單抗(anatumomab mafenatox)、阿泊珠單抗(apolizumab)、阿特珠單抗(atezolimab)、艾維路單抗(avelumab)、布拿土摩單抗(blinatumomab)、BMS-936559、卡托莫西單抗(catumaxomab)、德瓦魯單抗(durvalumab)、艾帕斯塔(epacadostat)、依帕珠單抗(epratuzumab)、吲哚西莫(indoximod)、奧英妥珠單抗(inotuzumab ozogamicin)、伊特魯單抗(intelumumab)、伊匹單抗(ipilimumab)、伊薩土西單抗(isatuximab)、拉立珠單抗(lambrolizumab)、MED14736、MPDL3280A、尼沃單抗(nivolumab)、奧濱尤妥珠單抗(obinutuzumab)、奧卡拉珠單抗(ocaratuzumab)、奧法木單抗(ofatumumab)、奧拉他單抗(olatatumab)、派立珠單抗(pembrolizumab)、皮立珠單抗(pidilizumab)、利妥昔單抗(rituximab)、替西單抗(ticilimumab)、薩馬里珠單抗(samalizumab)或曲美單抗(tremelimumab)。
於一些實施例，免疫腫瘤藥劑為免疫刺激劑。舉例而言，阻斷PD-1及PD-L1抑制軸之抗體可釋放活化之腫瘤反應性T細胞且已在臨床試驗中顯示誘導耐久的抗腫瘤反應，增加腫瘤組織結構之數目，包括習知尚未認為對免疫療法敏感之一些腫瘤類型。參見例如Okazaki,T.et al.(2013)Nat.Immunol.14,1212-1218；Zou et al.(2016)Sci.Transl.Med.8。抗-PD-1抗體尼沃單抗(Opdivo®，Bristol-Myers Squibb，亦稱為ONO-4538、MDX1106及BMS-936558)已顯示提高在抗血管生成療法期間或之後經歷疾病進展之腎透明細胞癌(RCC)患者中的總存活率之潛能。
於一些實施例，免疫調節治療劑專一性誘發腫瘤細胞之細胞凋亡。經批准之可用於本發明中之免疫調節治療劑包括泊利度胺(pomalidomide)(Pomalyst®，Celgene)；來那度胺(lenalidomide)(Revlimid®，Celgene)；巨大戟醇甲基丁烯酸酯(ingenol mebutate)(Picato®，LEO Pharma)。
於一些實施例，免疫腫瘤藥劑為癌症疫苗。於一些實施例，癌症疫苗係選自：西普亮塞-T(sipuleucel-T)(Provenge®，Dendreon/Valeant Pharmaceuticals)，已批准其用於治療無症狀或最少症狀之轉移性去勢抗性(激素難治性)前列腺癌；以及拉赫塔里(talimogene laherparepvec)(Imlygic®，BioVex/Amgen，先前稱為T-VEC)，一種批准用於治療黑色素瘤中不可切除之皮膚、皮下及結節病變的經基因修飾之溶瘤病毒療法。於一些實施例，免疫腫瘤藥劑係選自溶瘤病毒療法，諸如派沙德瓦(pexastimogene devacirepvec)(PexaVec/JX-594，SillaJen/以前為Jennerex Biotherapeutics)，一種經工程改造以表現GM-CSF之缺乏胸苷激酶(TK-)之痘瘡病毒，針對肝細胞癌(NCT02562755)及黑色素瘤(NCT00429312)；派拉瑞(pelareorep)(Reolysin®，Oncolytics Biotech)， 一種呼吸道腸道孤兒病毒(里奧病毒(reovirus))變異體，其在大量癌症中之未RAS活化之細胞中不複製，該等癌症包括結腸直腸癌(NCT01622543)、前列腺癌(NCT01619813)、頭頸部鱗狀細胞癌(NCT01166542)、胰腺癌(NCT00998322)及非小細胞肺癌(NSCLC)(NCT 00861627)；安德土西(enadenotucirev)(NG-348，PsiOxus，以前稱為ColoAd1)，一種經工程改造以表現對T細胞受體CD3蛋白質具有專一性之全長CD80及抗體片段的腺病毒，在卵巢癌(NCT02028117)、轉移性或晚期上皮腫瘤、諸如結腸直腸癌、膀胱癌、頭頸部鱗狀細胞癌及唾液腺癌(NCT02636036)中；ONCOS-102(Targovax/以前為Oncos)，一種經工程改造以表現GM-CSF之腺病毒，在黑色素瘤(NCT03003676)及腹膜疾病、結腸直腸癌或卵巢癌(NCT02963831)中；GL-ONC1(GLV-1h68/GLV-1h153,Genelux GmbH)，經工程改造以表現β-半乳糖苷酶(β-gal)/β-葡萄糖醛酸苷酶或β-gal/人類碘化鈉同向轉運蛋白(hNIS)之痘瘡病毒，分別在腹膜癌(NCT01443260)、輸卵管癌、卵巢癌(NCT 02759588)中研究；或CG0070(Cold Genesys)，一種經工程改造以表現GM-CSF之腺病毒，在膀胱癌(NCT02365818)中。
在一些實施例中，免疫腫瘤藥劑係選自：JX-929(SillaJen/以前為Jennerex Biotherapeutics)，一種經工程改造以表現胞嘧啶脫胺酶之缺乏TK及痘瘡生長因子之痘瘡病毒，其能夠將前驅藥物5-氟胞嘧啶轉化成細胞毒性藥物5-氟尿嘧啶；TG01及TG02(Targovax/以前為Oncos)，靶向難以治療之RAS突變的基於胜肽之免疫治療劑；以及TILT-123(TILT Biotherapeutics)，一種經工程改造之腺病毒，其稱為：Ad5/3-E2F-delta24-hTNFα-IRES-hIL20；以及VSV-GP(ViraTherapeutics)，一種經工程改造以表現淋巴球性脈絡叢腦膜炎病毒(LCMV) 之醣蛋白(GP)的水泡性口炎病毒(VSV)，其可進一步經工程改造以表現經設計以產生抗原專一性CD8+T細胞反應之抗原。
於一些實施例，免疫腫瘤藥劑為經工程改造以表現嵌合抗原受體或CAR之T細胞。經工程改造以表現此類嵌合抗原受體之T細胞稱為CAR-T細胞。
已構築如下CAR，其由可來源於天然配體之結合域、來源於對細胞表面抗原具有專一性之單株抗體的單鏈可變片段(scFv)與作為T細胞受體(TCR)之功能末端的胞內域、諸如能夠在T淋巴細胞中產生活化信號之來自TCR之CD3-zeta信號傳導結構域融合組成。在抗原結合時，此類CAR連接至效應細胞中之內源性信號傳導路徑且產生類似於由TCR複合物引發之活化信號的活化信號。
舉例而言，於一些實施例，CAR-T細胞為美國專利8,906,682(以全文引用之方式併入本文中)中描述之CAR-T細胞之一，該專利揭示經工程改造以包含具有抗原結合域(諸如結合於CD19之結構域)之細胞外域與T細胞抗原受體複合物zeta鏈(諸如CD3 zeta)之胞內信號傳導結構域融合的CAR-T細胞。當在T細胞中表現時，CAR能夠基於抗原結合專一性重新引導抗原識別。在CD19之情況下，抗原在惡性B細胞上表現。目前超過200個在各種適應症中採用CAR-T之臨床試驗正在進展中。[https：//clinicaltrials.gov/ct2/results？term=chimeric+antigen+receptors&pg=1]。
於一些實施例，免疫刺激劑為視黃酸受體相關孤兒受體γ(RORγ)之活化劑。RORγt為一種在CD4+(Th17)及CD8+(Tc17)T細胞之類型17效應亞群的分化及維持以及表現IL-17之先天性免疫細胞亞群(例如NK細胞)之分化中 起作用之轉錄因子。於一些實施例，RORγt之活化劑為LYC-55716(Lycera)，當前其正在用於治療實體腫瘤(NCT02929862)之臨床試驗中進行評估。
於一些實施例，免疫刺激劑為toll樣受體(TLR)之促效劑或活化劑。合適之TLR活化劑包括TLR9之促效劑或活化劑，例如SD-101(Dynavax)。SD-101為一種免疫刺激CpG，研究其用於B細胞、濾泡性及其他淋巴瘤(NCT02254772)。可用於本發明中之TLR8之促效劑或活化劑包括莫托莫特(motolimod)(VTX-2337,VentiRx Pharmaceuticals)，正研究其用於頭頸部鱗狀細胞癌(NCT02124850)及卵巢癌(NCT02431559)。
可用於本發明之其他免疫腫瘤藥劑包括烏洛單抗(urelumab)(BMS-663513，Bristol-Myers Squibb)，一種抗-CD137單株抗體；瓦利路單抗(varlilumab)(CDX-1127,Celldex Therapeutics)，一種抗-CD27單株抗體；BMS-986178(Bristol-Myers Squibb)，一種抗-OX40單株抗體；利魯單抗(lirilumab)(IPH2102/BMS-986015，Innate Pharma，Bristol-Myers Squibb)，一種抗-KIR單株抗體；莫利珠單抗(monalizumab)(IPH2201，Innate Pharma，AstraZeneca)，一種抗-NKG2A單株抗體；安利西單抗(andecaliximab)(GS-5745，Gilead Sciences)，一種抗-MMP9抗體；MK-4166(Merck & Co.)，以及一種抗-GITR單株抗體。
於一些實施例，免疫刺激劑係選自埃羅妥珠單抗(elotuzumab)、米伐木肽(mifamurtide)、toll樣受體之促效劑或活化劑及RORγt之活化劑。
於一些實施例，免疫刺激治療劑為重組人類介白素15(rhIL-15)。rhIL-15已在臨床中作為黑色素瘤及腎細胞癌(NCT01021059及NCT01369888)及白血病(NCT02689453)之療法進行測試。於一些實施例，免疫刺激劑為重組人類介白素12(rhIL-12)。於一些實施例，基於IL-15之免疫治療劑為雜二聚體IL-15 (hetIL-15，Novartis/Admune)，一種由內源性IL-15之合成形式與可溶性IL-15結合蛋白IL-15受體α鏈複合構成之融合複合物(IL15：sIL-15RA)，已在第一期臨床試驗中針對黑色素瘤、腎細胞癌、非小細胞肺癌及頭頸部鱗狀細胞癌(NCT02452268)進行測試。於一些實施例，重組人類介白素12(rhIL-12)為NM-IL-12(Neumedicines,Inc.)、NCT02544724或NCT02542124。
於一些實施例，免疫腫瘤藥劑係選自Jerry L.Adams等人，「Big opportunities for small moleculesin immuno-oncology,」Cancer Therapy 2015，第14卷，第603-622頁中所述之免疫腫瘤藥劑，該文獻之內容以全文引用的方式併入本文中。於一些實施例，免疫腫瘤藥劑係選自Jerry L.Adams等人之表1中所述之實例。於一些實施例，免疫腫瘤藥劑為選自Jerry L.Adams等人之表2中列出之靶向免疫-腫瘤學標靶之小分子的靶向免疫-腫瘤學標靶之小分子。於一些實施例，免疫腫瘤藥劑係選自Jerry L.Adams等人之表2中列出之小分子藥劑的小分子藥劑。
於一些實施例，免疫腫瘤藥劑係選自Peter L.Toogood於「Small molecule immuno-oncology therapeutic agents,」Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 2018，第28卷，第319-329頁中所述之小分子免疫腫瘤藥劑，該文獻之內容以全文引用的方式併入本文中。於一些實施例，免疫腫瘤藥劑為靶向如Peter L.Toogood所述路徑的藥劑。
於一些實施例，免疫腫瘤藥劑係選自Sandra L.Ross等人於「Bispecific T cell engager(BiTE®)antibody constructs can mediate bystander tumor cell killing」,PLoS ONE 12(8)：e0183390中所述之免疫腫瘤藥劑，該文獻之內容以全文引用的方式併入本文中。於一些實施例，免疫腫瘤藥劑為雙專一 性T細胞接合分子(engager)(BiTE®)抗體構築體。於一些實施例，雙專一性T細胞接合分子(BiTE®)抗體構築體為CD19/CD3雙專一性抗體構築體。於一些實施例，雙專一性T細胞接合分子(BiTE®)抗體構築體為EGFR/CD3雙專一性抗體構築體。於一些實施例，雙專一性T細胞接合分子(BiTE®)抗體構築體活化T細胞。於一些實施例，雙專一性T細胞接合分子(BiTE®)抗體構築體活化T細胞，從而釋放誘導旁觀者細胞(bystander cells)上的細胞間黏附分子1(ICAM-1)及FAS上調的細胞介素。於一些實施例，雙專一性T細胞接合分子(BiTE®)抗體構築體活化T細胞，從而造成誘導之旁觀者細胞溶解。於一些實施例，旁觀者細胞在實體腫瘤中。於一些實施例，溶解之旁觀者細胞接近BiTE®活化之T細胞。於一些實施例，旁觀者細胞包含腫瘤相關抗原(tumor-associated surface antigen，TAA)陰性癌細胞。於一些實施例，旁觀者細胞包含EGFR陰性癌細胞。於一些實施例，免疫腫瘤藥劑為阻斷PD-L1/PD1軸及/或CTLA4之抗體。於一些實施例，免疫腫瘤藥劑為離體擴增之腫瘤浸潤性T細胞。於一些實施例，免疫腫瘤藥劑為將T細胞與腫瘤相關之表面抗原(TAA)直接連接的雙專一性抗體構築體或嵌合抗原受體(CAR)。
示例性免疫檢查點抑制劑
於一些實施例，該免疫腫瘤藥劑為如本說明書所述之一免疫檢查點抑制劑。
本文用語「檢查點抑制劑」係關於一種用於避免癌細胞避開患者免疫系統的藥劑。抗腫瘤免疫顛覆的主要機制之一是「T細胞衰竭」，其是由於長期暴露於抗原導致抑制受體上調所致。這些抑制受體作為免疫檢查點，以防止不受控制的免疫反應。
PD-1和共同抑制受體，例如細胞毒性T淋巴細胞抗原4(CTLA-4、B和T淋巴細胞衰減劑(BTLA；CD272)、T細胞免疫球蛋白和黏蛋白結構域3(Tim-3)、淋巴細胞活化基因-3(Lag-3；CD223)等，常被稱為檢查點調節劑。它們作為分子的「守門人」，允許細胞外訊息以決定是否應繼續進行細胞週期進程和其他細胞內訊號傳遞。
於一些實施例，免疫檢查點抑制劑是針對PD-1的抗體。PD-1與細胞程序性死亡1受體(PD-1)結合，以防止該受體與抑制性配體PDL-1結合，從而無效化腫瘤抑制宿主的抗腫瘤免疫反應的能力。
於一態樣，檢查點抑制劑是生物治療劑或小分子。於另一態樣，檢查點抑制劑是單株抗體，人源化抗體、完全人源抗體、融合蛋白或其組合。在另一態樣，所述檢查點抑制劑是抑制選自CTLA-4和PDL1和PDL2和PD1和B7-H3和B7-H4和BTLA和HVEM和TIM3、GAL9、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD160、CGEN-15049、CHK 1、CHK2、A2aR、B-7家族配體或其組合。於另一態樣，免疫檢查點抑制劑與檢查點蛋白質之配體相互作用，該配體選自CTLA-4、PDL1、PDL2、PD1、B7-H3、B7-H4、BTLA、HVEM、TIM3、GAL9、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD160、CGEN-15049、CHK 1、CHK2、A2aR、B-7家族配體或其組合。於一態樣，檢查點抑制劑是免疫刺激劑、T細胞生長因子、介白素、抗體、疫苗或其組合。於另一態樣，介白素是IL-7或IL-15。於一具體態樣，介白素是糖基化的IL-7。於另一態樣，疫苗是樹突細胞(DC)疫苗。
檢查點抑制劑包括任何可阻斷或抑制(其在統計上有顯著性)免疫系統中抑制性途徑的藥物。該等抑制劑可包括小分子抑制劑或可包括結合於及阻斷或抑制免疫檢查點受體之抗體或其抗原結合片段，或結合於及阻斷或抑制 免疫檢查點受體配位體之抗體。可被針對以阻斷或抑制之示意性免疫檢查點分子包括(但不限於)：CTLA-4、PDL1、PDL2、PD1、B7-H3、B7-H4、BTLA、HVEM、GAL9、LAG3、TIM3、VISTA、KIR、2B4(屬於分子之CD2家族且在所有NK、γδ及記憶CD8+(αβ)T細胞上表現)、CD160(亦稱為BY55)、CGEN-15049、CHK 1和CHK2激酶、A2aR和各種B-7家族配體。B-7家族配體包括(但不限於)B7-1、B7-2、B7-DC、B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-H4、B7-H5、B7-H6和B7-H7。檢查點抑制劑包括抗體或其抗原結合片段、其他結合蛋白、生物治療劑或小分子，可結合及阻斷或抑制一或多以下物質的活性：CTLA-4、PDL1、PDL2、PD1、BTLA、HVEM、TIM3、GAL9、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD 160和CGEN-15049。示例性免疫檢查點抑制劑包括曲美單抗(tremelimumab)(CTLA-4阻斷抗體)、抗OX40、PD-L1單株抗體(Anti-B7-H1；MEDI4736)、MK-3475(PD-1阻斷劑)、尼沃單抗(nivolumab)(抗PD1抗體)、CT-011(抗PD1抗體)、BY55 monoclonal抗體、AMP224(anti-PDL1抗體)、BMS-936559(anti-PDL1抗體)、MPLDL3280A(抗PDL1抗體)、MSB0010718C(抗PDL1抗體)、伊匹單抗(ipilimumab)(抗CTLA-4檢查點抑制劑)。檢查點但白配體包括(但不限於)PD-L1、PD-L2、B7-H3、B7-H4、CD28、CD86和TIM-3。
於一些實施例，免疫檢查點抑制劑係選自PD-1拮抗劑、PD-L1拮抗劑和CTLA-4拮抗劑於一些實施例，檢查點抑制劑係選自由尼沃單抗(nivolumab)(Opdivo®)、伊匹單抗(ipilimumab)(Yervoy®)和派姆單抗(pembrolizumab)(Keytruda®)所組成之群組。於一些實施例，檢查點抑制劑係選自：尼沃單抗(抗PD-1抗體，Opdivo®，Bristol-Myers Squibb)；和派姆單抗(抗PD-1抗體，Keytruda®，Merck)；伊匹單抗(抗CTLA-4抗體，Yervoy®，Bristol-Myers Squibb)；德瓦魯單抗(抗PD-L1抗體，Imfinzi®，AstraZeneca)；和阿特珠單抗(atezolizumab)(抗PD-L1抗體，Tecentriq®，Genentech)。
於一些實施例，檢查點抑制劑係選自由拉立珠單抗(MK-3475)、尼沃單抗(BMS-936558)、皮立珠單抗(CT-011)、AMP-224、MDX-1105、MEDI4736、MPDL3280A、BMS-936559、伊匹單抗、立魯單抗(lirlumab)、IPH2101、派立珠單抗(Keytruda®)、和曲美單抗所組成的群組。
於一些實施例，免疫檢查點抑制劑為：REGN2810(Regeneron)，其為一種抗PD-1抗體，已在基底細胞癌(NCT03132636)、NSCLC(NCT03088540)、皮膚鱗狀細胞癌(NCT02760498)、淋巴瘤(NCT02651662)和黑色素瘤(NCT03002376)的患者中試驗；皮立珠單抗(pidilizumab)(CureTech)，也稱為CT-011，其為一種與PD-1結合的抗體，用於瀰漫性大型B細胞淋巴癌和多發性骨髓瘤的臨床試驗；艾維路單抗(avelumab)(Bavencio®，Pfizer/Merck KGaA，也稱為MSB0010718C)，為一種全人源IgG1抗PD-L1抗體，用在非小細胞肺癌、默克細胞癌、間皮瘤、實體腫瘤、腎臟癌、卵巢癌、膀胱癌、頭頸癌和胃癌的臨床試驗中；或PDR001(Novartis)，其為一種與PD-1結合的抑制性抗體，用於非小細胞肺癌、黑色素瘤、三陰性乳癌和晚期或轉移性實體腫瘤的臨床試驗中。曲美單抗(tremelimumab)(CP-675,206；Astrazeneca)是針對CTLA-4的全人源單株抗體，已在臨床試驗中針對多種適應症進行了研究，包括：間皮瘤、結腸直腸癌、腎臟癌、乳癌、肺癌和非小細胞肺癌、胰臟導管腺癌、胰臟癌、生殖細胞癌、頭頸部鱗狀細胞癌、肝細胞癌、前列腺癌、子宮內膜癌、肝臟轉移癌、肝癌、大型B細胞淋巴瘤、卵巢癌、子宮頸癌、轉移性變性甲狀腺癌、泌尿上皮癌、輸卵管癌、多發性骨髓瘤、膀胱癌、軟組織肉瘤和黑色素瘤。 AGEN-1884(Agenus)是抗CTLA4抗體，正在對晚期實體腫瘤(NCT02694822)進行第一期臨床試驗。
於一些實施例，檢查點抑制劑是T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3(TIM-3)的抑制劑。可用於本發明的TIM-3抑制劑包括TSR-022、LY3321367和MBG453。TSR-022(Tesaro)是抗TIM-3抗體，正在實體腫瘤中進行研究(NCT02817633)。LY3321367(Eli Lilly)是抗TIM-3抗體，正在實體腫瘤中進行研究(NCT03099109)。MBG453(諾華公司)是抗TIM-3抗體，正在晚期惡性腫瘤中進行研究(NCT02608268)。
於一些實施例，檢查點抑制劑是具有Ig和ITIM結構域的T細胞免疫受體或TIGIT(為某些T細胞和NK細胞上的免疫受體)的抑制劑。可用於本發明的TIGIT抑制劑包括BMS-986207(Bristol-Myers Squibb)，其為一種抗TIGIT單株抗體(NCT02913313)；OMP-313M32(Oncomed)和抗TIGIT單株抗體(NCT03119428)。
於一些實施例，檢查點抑制劑是淋巴細胞活化基因3(LAG-3)的抑制劑。可用於本發明的LAG-3抑制劑包括BMS-986016和REGN3767和IMP321。BLA-986016(Bristol-Myers Squibb)是一種抗LAG-3抗體，正在神經膠質母細胞瘤和神經膠肉瘤中研究(NCT02658981)。REGN3767(Regeneron)也是一種抗LAG-3抗體，且正在惡性腫瘤中研究中(NCT03005782)。IMP321(Immutep S.A.)是一種LAG-3-Ig融合蛋白，正在黑色素瘤(NCT02676869)、腺癌(NCT02614833)和轉移性乳癌(NCT00349934)中研究。
可用於本發明的檢查點抑制劑包括OX40促效劑。正在臨床試驗中研究的OX40促效劑包括：PF-04518600/PF-8600(Pfizer)，其為一種促效性抗 OX40抗體，用於轉移性腎臟癌(NCT03092856)和晚期癌症及腫瘤(NCT02554812；NCT05082566)；GSK3174998(Merck)，其為一種促效性抗OX40抗體，正處於癌症第一期臨床試驗中(NCT02528357)；MEDI0562(Medimmune/AstraZeneca)，其為一種促效性抗OX40抗體，用於晚期實體腫瘤(NCT02318394和NCT02705482)；MEDI6469，其為一種促效性抗OX40抗體(Medimmune/AstraZeneca)，用於大腸癌(NCT02559024)、乳癌(NCT01862900)、頭頸癌(NCT02274155)和轉移性前列腺癌(NCT01303705)的患者；和BMS-986178(Bristol-Myers Squibb)，其為一種促效性OX40抗體，用於晚期癌症(NCT02737475)。
可用於本發明的檢查點抑制劑包括CD137(也稱為4-1BB)促效劑。正在臨床試驗中研究的CD137促效劑包括：烏托米單抗(utomilumab)(PF-05082566，Pfizer)是一種促效性抗CD137抗體，用於瀰漫性大型B細胞淋巴瘤(NCT02951156)中以及晚期癌症和腫瘤(NCT02554812和NCT05082566)；屋洛單抗(urelumab)(BMS-663513，Bristol-Myers Squibb)，其為一種促效性抗CD137抗體，用於黑色素瘤和皮膚癌(NCT02652455)和神經膠質母細胞瘤和神經膠肉瘤(NCT02658981)。
可用於本發明的檢查點抑制劑包括CD27促效劑。正在臨床試驗研究的CD27促效劑包括：瓦利路單抗(varlilumab)(CDX-1127，Celldex Therapeutics)，其為一種促效性抗CD27抗體，用於鱗狀細胞癌和頭頸癌、卵巢癌、結腸癌、腎細胞癌和神經膠質母細胞瘤(NCT02335918)；淋巴瘤(NCT01460134)；以及神經膠質瘤和星狀細胞瘤(NCT02924038)。
可用於本發明的檢查點抑制劑包括糖皮質激素誘導的腫瘤壞死因子受體(GITR)促效劑。正在臨床試驗研究的GITR促效劑包括：TRX518(Leap Therapeutics)，其為一種促效性抗GITR抗體，用於惡性黑色素瘤和其他惡性實體腫瘤(NCT01239134和NCT02628574)；GWN323(Novartis)，其為一種抗GITR的促效劑，用於實體腫瘤和淋巴瘤(NCT02740270)；INCAGN01876(Incyte/Agenus)，其為一種促效性抗GITR抗體，用於晚期癌症(NCT02697591和NCT03126110)；MK-4166(Merck)，其為一種促效性抗GITR抗體，用於實體腫瘤(NCT02132754)；以及MEDI1873(Medimmune/AstraZeneca)，其為一種具有人IgG1 Fc結構域的促效性六聚體GITR-配體分子，用於晚期人實體腫瘤(NCT02583165)。
可用於本發明的檢查點抑制劑包括可誘導的T細胞共同刺激劑(ICOS，也稱為CD278)促效劑。正在臨床試驗研究的ICOS促效劑包括：MEDI-570(Medimmune)，其為一種促效性抗ICOS抗體，用於淋巴瘤(NCT02520791)；GSK3359609(Merck)，其為一種促效性抗ICOS抗體，處於第一期臨床試驗(NCT02723955)；以及JTX-2011(Jounce Therapeutics)，其為一種促效性抗ICOS抗體，處於第一期臨床試驗(NCT02904226)。
可用於本發明的檢查點抑制劑包括殺傷細胞IgG樣受體(KIR)抑制劑。正在臨床試驗研究的KIR抑制劑包括：利魯單抗(lirilumab)(IPH2102/BMS-986015，Innate Pharma/Bristol-Myers Squibb)，其為一種抗KIR抗體，用於白血病(NCT01687387、NCT02399917、NCT02481297、NCT02599649)、多發性骨髓瘤(NCT02252263)和淋巴瘤(NCT01592370)；IPH2101(1-7F9,Innate Pharma)用於骨髓瘤(NCT01222286和NCT01217203)；以及IPH4102 (Innate Pharma)，其為一種抗KIR抗體，可與淋巴瘤中長細胞質尾巴的三個結構域(KIR3DL2)結合(NCT02593045)。
可用於本發明的檢查點抑制劑包括CD47和訊號調節蛋白α(SIRPa)之間相互作用的CD47抑制劑。正在臨床試驗研究的CD47/SIRPa抑制劑包括：ALX-148(Alexo Therapeutics)，為一種SIRPa的拮抗性變體，其與CD47結合且阻止CD47/SIRPa介導的訊號傳導，正在第一期臨床試驗(NCT03013218)；TTI-621(SIRPa-Fc，Trillium Therapeutics)，其為一種可溶性重組融合蛋白，其係藉由SIRPa的N端CD47結合域與人IgG1的Fc結構域的連接而產生，TTI-621透過結合人CD47而起作用並阻止其傳遞「別吃我」訊號給巨噬細胞，用於第一期臨床試驗(NCT02890368和NCT02663518)；CC-90002(Celgene)，其為一種抗CD47抗體，用於白血病(NCT02641002)；和Hu5F9-G4(Forty Seven,Inc.)，用於結腸直腸腫瘤和實體腫瘤(NCT02953782)、急性髓細胞性白血病(NCT02678338)和淋巴瘤(NCT02953509)。
可用於本發明的檢查點抑制劑包括CD73抑制劑。正在臨床試驗研究的CD73抑制劑包括：MEDI9447(Medimmune)，其為一種抗CD73抗體，用於實體腫瘤(NCT02503774)；以及BMS-986179(Bristol-Myers Squibb)，其為一種抗CD73抗體，用於實體腫瘤(NCT02754141)。
可用於本發明的檢查點抑制劑包括干擾素基因蛋白(STING，也稱為跨膜蛋白173或TMEM173)的刺激劑的促效劑。正在臨床試驗研究的STING促效劑包括：MK-1454(Merck)，其為一種促效性合成環狀二核苷酸，用於淋巴瘤(NCT03010176)；以及ADU-S100(MIW815,Aduro Biotech/Novartis)，其為一 種促效性合成環狀二核苷酸，處於第一期臨床試驗(NCT02675439和NCT03172936)。
可用於本發明的檢查點抑制劑包括CSF1R抑制劑。正在臨床試驗研究的CSF1R抑制劑包括：培西達替尼(pexidartinib)(PLX3397，Plexxikon)，其為一種CSF1R小分子抑制劑，用於結腸直腸癌、胰臟癌、轉移性和晚期癌症(NCT02777710)和黑素瘤、非小細胞肺癌、鱗狀細胞癌頭頸癌、胃腸基質瘤(GIST)和卵巢癌(NCT02452424)；以及IMC-CS4(LY3022855,Lilly)，其為一種抗CSF-1R抗體，用於胰臟癌(NCT03153410)、黑素瘤(NCT03101254)和實體腫瘤(NCT02718911)；以及BLZ945(4-[2(((1R，2R)-2-羥基環己基胺基-苯并噻唑-6-基氧基]-吡啶-2-羧酸甲醯胺，Novartis)，其為一種CSF1R的可口服抑制劑，用於晚期實體腫瘤(NCT02829723)。
可用於本發明的檢查點抑制劑包括NKG2A受體抑制劑。正在臨床試驗研究的NKG2A受體抑制劑包括莫利珠單抗(monalizumab)(IPH2201,Innate Pharma)，其為一種抗NKG2A抗體，用於頭頸部腫瘤(NCT02643550)以及慢性淋巴細胞性白血病(NCT02557516)。
於一些實施例，免疫檢查點抑制劑係選自尼沃單抗(nivolumab)、派立珠單抗(nivolumab)、伊匹單抗(ipilimumab)、艾維路單抗(avelumab)、德瓦魯單抗(durvalumab)、阿特珠單抗(atezolizumab)或皮立珠單抗(pidilizumab)。
治療用途
本發明之雙環胜肽具有作為Nectin-4結合劑的特定效用。
Nectin-4是一種表面分子，屬於蛋白質的nectin家族，其包含四個成員。Nectin是細胞黏附分子，在發育和成年期間，在上皮、內皮、免疫和神 經細胞的各種生物學進程(例如極化、增生、分化和遷移)中扮演關鍵的角色。它們參與了人類的幾種病理進程。它們是小兒麻痺病毒、單純皰疹病毒和麻疹病毒的主要受體。當編碼Nectin-1(PVRL1)或Nectin-4(PVRL4)的基因發生突變會導致與其他異常相關的外胚層發育不良綜合症。Nectin-4在胎兒發育過程中表現。在成人組織中，其表現比該家族其他成員的表現更受限制。Nectin-4是一種與腫瘤相關的抗原，其分別存在於50%的乳癌、49%的卵巢癌以及86%的肺癌，主要是在預後不良的腫瘤上，而在相應的正常組織中並未檢測到其表現。在乳房腫瘤中，Nectin-4主要在三陰性和ERBB2+癌中表現。在患有這些癌症的患者血清中，檢測到可溶形式的Nectin-4與不良預後有關。血清Nectin-4含量在轉移進程中增加，在治療後降低。這些結果顯示，Nectin-4可能是治療癌症的可靠靶標。因此，在現有技術中已經記載了幾種抗Nectin-4抗體。特定而言，Enfortumab Vedotin(ASG-22ME)是靶向Nectin-4的抗體-藥物結合物(ADC)，且目前已對於治療實體瘤患者進行了臨床研究。
根據本發明的方法選擇的多肽配體可用於體內治療和預防應用、體外和體內診斷應用、體外測定和試劑應用等。具有選擇的專一性水平的配體可用於以下應用：涉及需要在非人類動物中進行測試的應用，其需要交叉反應性、或診斷應用，其需要小心控制與同源物或旁系同源物的交叉反應性。於某些應用中，例如疫苗應用，可利用對預定範圍的抗原引起免疫反應的能力來針對特定疾病和病原體訂製疫苗。
對於哺乳動物給藥，較佳為至少具有90至95%同質性的基本上純的胜肽配體，而對於藥物用途，尤其是在該哺乳動物為人類時，最佳為具有98至99%或更高的同質性。一旦純化了所需的部分或同質性多肽，所選多肽可 用於診斷或治療(包括體外地)，或用於發展和執行測定程序、免疫螢光染色等(Lefkovite and Pernis,(1979 and 1981)Immunological Methods,Volumes I and II,Academic Press,NY)。
根據本發明的另一態樣，提供如本文所定義之胜肽配體或藥物結合物，其用於預防、抑制或治療由Nectin-4介導的疾病或病症。
根據本發明的另一態樣，提供一種預防、抑制或治療由Nectin-4介導的疾病或病症的方法，其包括向需要其的患者施用如本說明書定義之胜肽配體的效應物基團和藥物結合物。
於一實施例，Nectin-4為哺乳類Nectin-4。於另一實施例，哺乳類Nectin-4為人類Nectin-4。
於一實施例，由Nectin-4介導的疾病或病症選自病毒感染、外胚層發育不良綜合症和其他異常、乳癌、卵巢癌和肺癌、轉移性進程和實體腫瘤。
於另一實施例，由Nectin-4介導的疾病或病症係選自癌症。
可以治療(或抑制)的癌症(及其良性腫瘤)的舉例包括(但不限於)：上皮起源的腫瘤(腺瘤和各種類型的癌症，包括腺癌、鱗狀癌、移行細胞癌和其他癌症)，例如膀胱癌和泌尿道癌、乳癌、胃腸道(包括食道、胃、小腸、結腸、直腸和肛門)癌、肝癌(肝細胞癌)、膽囊癌和膽道系統癌、胰分泌腺癌、腎臟癌、肺癌(例如腺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、支氣管肺泡癌和間皮瘤)、頭和頸癌(例如舌癌、頰腔癌、喉癌、咽癌、鼻咽癌、扁桃腺癌、唾液腺癌、鼻腔癌和鼻竇癌)、卵巢癌、輸卵管癌、腹膜癌、陰道癌、外陰癌、陰莖癌、子宮頸癌、子宮肌層癌、子宮內膜癌、甲狀腺(例如甲狀腺濾泡癌)癌、腎臟癌、前列腺癌、皮膚和附件癌(例如黑色素瘤、基底細胞癌、鱗狀細胞癌、角膜棘皮瘤、發育不 良痣)；血液惡性腫瘤(即白血病、淋巴瘤)和癌前血液疾病以及交界性腫瘤，包括血液惡性腫瘤和淋巴群系的相關病症(例如急性淋巴細胞性白血病[ALL]、慢性淋巴細胞性白血病[CLL]、B細胞淋巴瘤，例如瀰漫性大型B細胞淋巴瘤[DLBCL]、濾泡性淋巴瘤、勃氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)、被套細胞淋巴瘤、T細胞淋巴瘤和白血病、自然殺傷性[NK]細胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤(Hodgkin’s lymphomas)、毛細胞白血病、意義不明單株伽瑪球蛋白症、漿細胞瘤、多發性骨髓瘤和移植後的淋巴增生性疾病)、以及血液惡性腫瘤和骨髓群系的相關病症(例如急性骨髓性白血病(AML)、慢性粒細胞性白血病(CML)、慢性粒細胞性白血病(CMML)、嗜酸性粒細胞增多綜合症、骨髓增生性疾病，例如原發性多血症、原發性血小板增多症及原發性骨髓纖維化症、骨髓增生異常綜合症、骨髓增生不良症和前骨髓白血病)；間葉來源的腫瘤，例如軟組織肉瘤、骨或軟骨肉瘤，例如骨肉瘤、纖維肉瘤、軟骨肉瘤、橫紋肌肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肉瘤、血管肉瘤、卡波西肉瘤、尤因肉瘤、滑膜肉瘤、上皮樣肉瘤、良性和惡性組織細胞瘤和隆突性皮膚纖維肉瘤；中樞或周圍神經系統的腫瘤(例如星狀細胞瘤、神經膠質瘤和神經膠質母細胞瘤、腦膜瘤、室管膜瘤、松果體瘤和神經鞘瘤)；內分泌腫瘤(例如垂體瘤、腎上腺腫瘤、胰島細胞瘤、甲狀旁腺腫瘤、類癌和甲狀腺髓樣癌)；眼和附件腫瘤(例如視網膜母細胞瘤)；生殖細胞和滋養細胞腫瘤(例如畸胎瘤、精原細胞瘤、惡性胚細胞瘤、葡萄胎和絨毛膜癌)；小兒和胚胎腫瘤(例如髓母細胞瘤、神經母細胞瘤、威爾姆斯腫瘤和原始神經外胚層腫瘤)；或是先天性或後天性使患者容易患惡性腫瘤的症候群(例如著色性乾皮病)。
於另一實施例，癌症係選自造血系統惡性腫瘤，例如選自：非霍奇金淋巴瘤(NHL)、勃氏(BL)、多發性骨髓瘤(MM)、B慢性淋巴細胞性白血病 (B-CLL)、B和T急性淋巴細胞白血病(ALL)、T細胞淋巴瘤(TCL)、急性骨髓細胞白血病(AML)、毛細胞白血病(HCL)、霍奇金淋巴瘤(HL)和慢性骨髓細胞白血病(CML)。
於另一實施例，癌症係選自肺癌(例如非小細胞肺癌)、膀胱癌、胰臟癌和乳癌。本說明書之實施例1至5列出了實驗數據，證明本發明所選之雙環藥物結合物在這些癌症模型中展現抗腫瘤活性。
本說明書用語「預防」包括於疾病誘發前給予保護性組成物。「抑制」指涉於誘發事件後、疾病於臨床出現前給予該組成物。「治療」包括於疾病病徵出現後給予保護性組成物。
可使用用於篩選胜肽配體預防或治療疾病之動物模式。本發明可利用動物模式系統，使人類和動物標的均可發展胜肽配體，並允許使用動物模式。
此外，本文提供了數據，其證明了多種腫瘤類型的Nectin-4的複製數變異(CNV)與基因表現之間的關聯。因此，根據本發明的另一態樣，提供了一種預防、抑制或治療癌症的方法，該方法包括向有此需要的患者施用本文定義的胜肽配體的效應物基團和藥物結合物，其中所述患者被認定為具有增強的Nectin-4的複製數變異(CNV)。
於一實施例，癌症係選自本文認定為具有增強的Nectin-4 CNV的癌症。於另一實施例，癌症係選自本文認定為具有增強的Nectin-4 CNV的癌症，即：乳癌、子宮癌、膀胱癌，肺腺癌、肺鱗狀癌、子宮頸癌、頭頸癌、胰臟癌、甲狀腺癌、結腸直腸癌、胸腺瘤、肉瘤，腎透明細胞癌(RCC)、前列腺癌和胃癌。
藉由下列實施例進一步描述本發明。
實施例
縮寫
Figure 108121725-A0202-12-0077-5
Figure 108121725-A0202-12-0078-6
Figure 108121725-A0202-12-0079-7
材料和方法
胜肽合成
基於Fmoc化學原理進行胜肽合成，使用Peptide Instruments生產的Symphon胜肽合成儀和MultiSynTech生產的Syro II胜肽合成儀。使用帶有適當的側鏈保護基的標準Fmoc-胺基酸(Sigma，Merck)：在每種情況下均使用標準的耦合條件，然後使用標準方法去保護。
或者，使用HPLC純化胜肽，並在分離後用1,3,5-三丙烯醯基六氫-1,3,5-三嗪(TATA，Sigma)修飾。為此，將線性胜肽用50：50 MeCN：H2O稀釋至約35mL，加入約500μL的100mM TATA乙腈溶液，並用5mL的1M NH4HCO3水溶液引發反應。在室溫下進行反應約30至60分鐘，並且一旦反應完成就凍乾(通過MALDI判斷)。一但完成，加入在H2O的1ml的1M L-半胱胺酸鹽酸鹽單水合物(Sigma)，在室溫下反應約60分鐘，以淬滅任何過量的TATA。在凍乾之後，如上所述純化經修飾的胜肽，同時用Gemini C18管柱(Phenomenex)代替Luna C8，並將酸改為0.1%三氟乙酸。將含有正確TATA-修飾材料的純片段集中、凍乾並保存在-20℃中。
除非另有說明，所有胺基酸均以L-構型使用。
在某些情況下，在使用以下方法將胜肽與毒素的游離硫醇基耦合之前，先將胜肽轉化為活化的二硫化物；將在無水DMSO(1.25mol equiv)中的4-甲基(琥珀醯亞胺基4-(2-吡啶硫基)戊酸酯)(100mM)溶液加到在無水DMSO(1mol equiv)中的胜肽(20mM)溶液中。該反應充分混合並且加入DIPEA(20mol equiv)。藉由LC/MS監測反應直至完成。
雙環胜肽藥物結合物之製備
BCY8549之製備
分離條件：A相：0.075%TFA在H2O中，B相：MeCN
分離方法：18-48-55min，RT=53.5min
分離管柱：Luna 200*25mm 10μm，C18，110A和Gemin 150*30mm，C18，5μm，110A，連接，50℃
溶解方式：DMF
分離純度：95%
藉由固相合成法以合成BCY8234。
Figure 108121725-A0202-12-0080-8
Figure 108121725-A0202-12-0081-9
Figure 108121725-A0202-12-0082-10
化合物2之製備
使用標準Fmoc化學合成胜肽。
1)將DCM加入裝有CTC樹脂(5mmol，4.3g，1.17mmol/g)和Fmoc-Cit-OH(2.0g，5mmol，1.0eq)的容器中，並用N2起泡。
2)滴加DIEA(4.0eq)並混合2小時。
3)加入MeOH(5mL)並混合30分鐘。
4)瀝乾水分並用DMF洗滌5次。
5)加入20%哌啶/DMF，並反應30分鐘。
6)瀝乾水分並用DMF洗滌5次。
7)加入Fmoc-胺基酸溶液並混合30秒，然後加入活化緩衝液，N2起泡約1小時。
8)重複上述步驟4至7，以耦合以下胺基酸。
註解：
Figure 108121725-A0202-12-0083-11
將在DMF中的20%哌啶用於Fmoc去保護30分鐘。通過茚三酮試驗監測耦合反應，並且用DMF洗滌樹脂5次。
胜肽切割和純化：
1)在室溫下，將切割緩衝液(20%TFIP/80%DCM)加入裝有側鏈保護的胜肽的燒瓶中，攪拌1小時兩次。
2)過濾並收集濾液。
3)濃縮以除去溶劑。
4)凍乾粗胜肽以得到最終產物(1.4g，85.0%產率)。
化合物3之製備
於化合物2(1.65g，5.01mmol，1.0eq)在DCM(30mL)和MeOH(15mL)中的溶液中加入EEDQ(2.48g，10.02mmol，2.0eq)和(4-胺基苯基)甲醇(740.37mg，6.01mmol，1.2eq)。將混合物在15℃下攪拌16小時。LC-MS顯示化合物2被完全消耗，並且檢測到一個具有所需m/z的主峰。TLC指示了化合物2被完全消耗並且形成許多新斑點。將反應混合物減壓濃縮以除去溶劑，得到殘餘物。藉由快速管柱層析(ISCO®；80S epaFlash®Silica Flash Column，洗脫液：0~15 DCM/MeOH梯度@ 60mL/min)純化殘餘物。得到為黃色固體的化合物3(1.3g，2.99mmol，產率59.72%)。
化合物4之製備
於化合物3(1.3g，2.99mmol，1.0eq)在DMF(10mL)中的溶液中加入DIEA(2.32g，17.95mmol，3.13mL，6.0eq)和碳酸二(4-硝基苯基)酯(3.64g，11.97mmol，4.0eq)。將混合物在15℃下攪拌1小時。LC-MS顯示化合物3被完全消耗，並且檢測到一個具有所需m/z的主峰。殘餘物通過製備型HPLC純化(中性條件)。得到為黃色固體的化合物4(1.0g，1.67mmol，55.74%產率)。
化合物5之製備
於化合物5(250.53mg，417.84μmol，1.5eq)在DMF(5mL)中的溶液中加入HOBt(56.46mg，417.84μmol，1.5eq)和DIEA(108.01mg，835.68μmol，145.56μL，3.0eq)、MMAE(0.200g，278.56μmol，1.0eq)。將混合物在35℃下攪拌12小時。LC-MS顯示MMAE已完全耗盡，並且檢測到一個具有所需m/z的主峰。通過製備型HPLC(中性條件)直接純化反應。得到為黃色固體的化合物5(0.180g，152.74μmol，產率54.83%)。
化合物6之製備
於化合物5(0.170g，144.26μmol，1.0eq)在THF(5mL)和H2O(5mL)中的溶液中加入LiOH.H2O(12.11mg，288.51μmol，2.0eq)。將混合物在15℃下攪拌1小時。LC-MS顯示化合物5被完全耗盡，並且檢測到一個具有所需m/z的主峰。減壓除去AcOH和THF使用的調整的PH=7，得到殘餘物。通過製備型HPLC(中性條件)純化殘餘物。得到為黃色固體的化合物6(0.185g，粗產物)。
BCY8549之製備
於化合物6(0.100g，86.93μmol，1.0eq)在DMA(4mL)中的溶液中加入HOSu(10.00mg，86.93μmol，1.0eq)和EDCI(16.66mg，86.93μmol，1.0eq)。 在NHS酯形成後，加入β-Ala-BCY8234(525.98mg，173.85μmol，2.0eq)和DIEA(33.70mg，260.78μmol，45.42μL，3.0eq)。將混合物在15℃下攪拌4小時。LC-MS顯示化合物6被完全耗盡，並且檢測到一個具有所需m/z的主峰。通過製備型HPLC(TFA條件)直接純化反應。得到為白色固體的化合物BCY8549(0.0528g，12.15μmol，產率13.98%，純度95.70%)。滯留時間=11.48min。發現質量=1386.4(M/3+H)。
BCY8245之製備
分離條件：A相：0.075%TFA在H2O中，B相：MeCN
分離方法：18-48-55min，RT=53.5min
分離管柱：Luna 200*25mm 10um，C18，110A和Gemin150*30mm，C18，5um，110A，連接，50℃
溶解方式：DMF
分離純度：95%
藉由固相合成法合成BCY8234。
BCY8245之反應機制如下：
Figure 108121725-A0202-12-0085-12
Figure 108121725-A0202-12-0086-13
Figure 108121725-A0202-12-0087-14
化合物3之製備
藉由固相法合成化合物3。
化合物4之製備
於化合物3(1.3g，3.23mmol，1.0eq)在DCM(10mL)和MeOH(5mL)的溶液中加入EEDQ(1.60g，6.46mmol，2.0eq)和(4-胺基苯基)甲醇(517.16mg，4.20mmol，1.3eq)。將混合物在20℃下攪拌16小時。LC-MS顯示化合物3被完全 耗盡，並且檢測到一個具有所需m/z的主峰。減壓除去溶劑。藉由快速管柱層析(ISCO®；40g SepaFlash® Silica Flash Column，洗脫液：0~15% DCM/MeOH梯度@ 40mL/min)以純化殘餘物。得到為黃色固體的化合物4(0.950g，1.87mmol，57.94%產率)。
化合物5之製備
於化合物4(0.950g，1.87mmol，1.0eq)在DMF(5mL)中的溶液中加入DIEA(1.21g，9.36mmol，1.63mL，5.0eq)和碳酸二(4-硝基苯基)酯(2.28g，7.49mmol，4.0eq)。將混合物在20℃下攪拌1小時。LC-MS顯示化合物4被完全耗盡，並且檢測到一個具有所需m/z的主峰。通過製備型HPLC(中性條件)直接純化反應。得到為白色固體的化合物5(0.400g，594.64μmol，產率31.77%)。
化合物6之製備
於化合物5(0.200g，297.32μmol，1.0eq)在DMF(5mL)中的溶液中加入HOBt(52.23mg，386.51μmol，1.3eq)和DIEA(115.28mg，891.95μmol，155.36μL，3.0eq)、MMAE(192.12mg，267.59μmol，0.9eq)。將混合物在20℃下攪拌16小時。LC-MS顯示化合物5被完全耗盡，並且檢測到一個具有所需m/z的主峰。通過製備型HPLC(中性條件)直接純化反應。得到為白色固體的化合物6(0.160g，127.84μmol，產率43.00%)。
化合物7之製備
於化合物6(0.160g，127.84μmol，1.0eq)在THF(3mL)和H2O(3mL)中的溶液中加入LiOH.H2O(26.82mg，639.21μmol，5.0eq)。將混合物在20℃下攪拌1小時。LC-MS顯示化合物6被完全耗盡，並且檢測到一個具有所需m/z的主 峰。減壓除去THF，並藉由AcOH調節pH=7，將混合物凍乾。得到為白色固體的化合物7(0.130g，105.05μmol，產率82.17%)。
化合物8之製備
於化合物7(36.27mg，315.15μmol，3.0eq)在DMA(6mL)和DCM(2mL)中的溶液中加入EDCI(60.41mg，315.15μmol，3.0eq)。將混合物在15℃下攪拌3小時LC-MS顯示化合物7被完全耗盡，並且檢測到一個具有所需m/z的主峰。減壓除去DCM。藉由製備型HPLC(中性條件)直接純化反應。得到為白色固體的化合物8(0.095g，71.18μmol，產率67.76%)。
BCY8245之製備
於BCY8234(66.41mg，22.48μmol，1.0eq)在DMA(4mL)中的溶液中添加DIEA(8.72mg，67.44μmol，11.75μL，3.0eq)和化合物8(0.030g，22.48μmol，1.0eq)。將混合物在20℃下攪拌16小時。LC-MS顯示BCY8234已完全耗盡，並檢測到一個具有所需m/z或所需質量的主峰。藉由製備型HPLC(TFA條件)直接純化反應。得到為白色固體的化合物BCY8245(0.0427g，10.16μmol，收率45.19%，純度99.30%)。滯留時間=11.7min。發現質量=1043.9(M/4+H)。
生物數據
Nectin-4直接結合試驗
根據WO 2016/067035揭露的方法，使用螢光極化試驗測定本發明之胜肽對人類Nectin-4(Ki)的親和力。具有螢光標記(螢光素(SIGMA)或Alexa Fluor488TM(Fisher Scientific))之本發明胜肽以2.5nM稀釋於含有0.01% tween 20之PBS或含有100mM NaCl和0.01% tween的50mM HEPES(pH 7.4)(均稱之為試驗緩衝液)。將其混合溶於相同試驗緩衝液之蛋白滴定，於黑色壁底低結合低體 積384孔盤中獲得總體積25μL的1nM胜肽，通常為5μL試驗緩衝液，10μL蛋白以及10μL螢光胜肽。二序列稀釋其中之一用於獲得12不同濃度，高濃度範圍自500nM作為高親和力結合物至10μM作為低親和力結合物和選擇性試驗。使用備有「FP 485 520 520」光學模組的BMG PHERAstar FS測量，其發出485nm光波，以及於520nm偵測平行和垂直發光。PHERAstar FS設定於25℃並每孔洞200次發光，以及定位延遲0.1秒，各孔洞以5至10分鐘間隔測量60分鐘。60分鐘結束後，以用於分析的獲得物判斷各追蹤物，其中孔洞內不含蛋白質。使用Systat Sigmaplot(12.0版)分析數據。mP值帶入使用者定義之二次方程式，產生Kd值：f=ymin+(ymax-ymin)/Lig*((x+Lig+Kd)/2-sqrt((((x+Lig+Kd)/2)^2)-(Lig*x)))。「Lig」為使用追蹤物之濃度定義值。
Nectin-4競爭結合試驗
將不具有螢光標記之胜肽與ACPFGCHTDWSWPIWCA-Sar6-K(Fl)(SEQ ID NO：2)進行競爭試驗，且(Kd=5nM-使用上述方法確定)。將胜肽適當稀釋於如直接結合試驗所述的試驗緩衝液並含有5%DMSO，再序列稀釋1/2倍。將5μL稀釋後的胜肽加入培養盤中再加入10μL人類Nectin-4，再加入10μL螢光胜肽。使用與直接結合試驗相同方法測量，但獲得物於第一次測量之前判斷。使用Systat Sigmaplot(12.0版)分析數據，其中mP值帶入使用者定義之三次方程式，以產生Ki值：
f=ymin+(ymax-ymin)/Lig*((Lig*((2*((Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot*c)^2-3*(Kcomp*(Lig-Prot*c)+Klig*(Comp-Prot*c)+Klig*Kcomp))^0.5*COS(ARCCOS((-2*(Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot*c)^3+9*(Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot*c)*(Kcomp*(Lig-Prot*c)+Klig*(Comp-Prot*c)+Klig*Kcomp)-27*(-1*Klig*Kc omp*Prot*c))/(2*((((Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot*c)^2-3*(Kcomp*(Lig-Prot*c)+Klig*(Comp-Prot*c)+Klig*Kcomp))^3)^0.5)))/3))-(Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot*c)))/((3*Klig)+((2*((Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot*c)^2-3*(Kcomp*(Lig-Prot*c)+Klig*(Comp-Prot*c)+Klig*Kcomp))^0.5*COS(ARCCOS((-2*(Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot*c)^3+9*(Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot*c)*(Kcomp*(Lig-Prot*c)+Klig*(Comp-Prot*c)+Klig*Kcomp)-27*(-1*Klig*Kcomp*Prot*c))/(2*((((Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot*c)^2-3*(Kcomp*(Lig-Prot*c)+Klig*(Comp-Prot*c)+Klig*Kcomp))^3)^0.5)))/3))-(Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot*c))))。
「Lig」、「KLig」、和「Prot」全部為定義值，係分別關於：螢光胜肽濃度、螢光胜肽Kd值、和Nectin濃度。
Nectin-4 Biacore SPR結合試驗
進行Biacore實驗以決定與人類Necin-4蛋白(得自Charles River)結合的單體胜肽之ka(M-1s-1)、kd(s-1)、KD(nM)值。
將具有gp67訊息序列和C端FLAG標記的人類Nectin-4(殘基Gly32-Ser349；NCBI RefSeq：NP_112178.2)轉殖到pFastbac-1和桿狀病毒中，該桿狀病毒使用標準Bac-to-BacTM過程(Life Technologies)製備。在27℃的Excell-420培養基(Sigma)中1 x 106ml-1的Sf21細胞以MOI為2用P1病毒原液感染，並在72小時收集上清液。在4℃下，用在PBS中洗滌的抗-FLAG M2親和洋菜樹脂(Sigma)將上清液分批結合1小時，用在PBS中洗滌的抗-FLAG M2親和洋菜樹脂(Sigma)在4℃下將上清液分批結合1小時，然後將樹脂轉移到管柱並用PBS充分洗滌。用100μg/ml FLAG胜肽沖提蛋白質。將沖提的蛋白質濃縮至2ml，並在PBS中以1ml/min的速度上樣至S-200 Superdex管柱(GE Healthcare)。收集2ml的片段，並將含有Nectin-4蛋白的片段濃縮至16mg/ml。
根據廠商建議的實驗流程，使用EZ-LinkTM Sulfo-NHS-LC-LC-Biotin試劑(Thermo Fisher)在PBS中將蛋白質隨機生物素化。使用旋轉柱將蛋白質廣泛脫鹽，以將未耦合的生物素除至PBS中。
為分析胜肽之結合，使用Biacore 300分析儀和CM5晶片(GE Healthcare)。使用標準胺耦合化學方法，於電泳緩衝液HBS-N(10mM HEPES、0.15M NaCl、pH 7.4)將鏈親和素固定於晶片上。簡而言之，羧甲基右旋糖酐表面之活化係使用注射7分鐘的1：1比例之0.4M 1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)/0.1M的N-羥琥珀醯亞胺(NHS)，流速為10μl/min。為捕捉鏈親和素，蛋白質稀釋於為0.2mg/ml之10mM乙酸鈉溶液(pH 4.5)，以及注射120μl於活化晶片表面並捕捉。活化基團以7分鐘注射之1M乙醇胺(pH 8.5)阻斷，捕捉1200-1800RU的生物素化之Nectin-4。再改用PBS/0.05% Tween 20的緩衝液，並在緩衝液中製備胜肽的序列稀釋，DMSO的最終濃度為0.5%。再進行6次2倍稀釋，胜肽濃度最大值為100nM。SPR分析執行於25℃，流速50μl/min，60秒連接和400-1200秒分離，具體取決於各個胜肽。數據以DMSO排除體積效應校正。全部數據雙重參照空白注射，以及對比表面使用標準程序方法，並且數據處理和動態帶入執行於Scrubber軟體(2.0c版)(BioLogic Software)。數據帶入樣本1：1結合模組，適當時用於大量傳輸效應。
上述Nectin-4結合試驗中測試了本發明的某些胜肽配體，結果示於表1：
表1：本發明所選定之胜肽配體的競爭結合數據
Figure 108121725-A0202-12-0093-15
上述SPR試驗中測試了本發明的某些胜肽配體，結果示於表2：
表2：本發明所選定之胜肽配體的SPR數據
Figure 108121725-A0202-12-0093-16
n=平均實驗次數
將本發明的某些雙環胜肽結合至胞殺劑並在上述SPR試驗中進行測試，結果示於表3：
表3：本發明所選定之BDC的SPR數據
Figure 108121725-A0202-12-0093-17
體內研究
在實施例1至5及9中，每個研究使用下列方法：
測試和正對照組藥物
Figure 108121725-A0202-12-0094-18
實驗方法和流程
(i)觀察
實施例中處理、飼養、和治療動物之全部流程依據WuXi AppTec的機構動物飼養和使用委員會(IACUC)所公布的準則進行，以及按照實驗動物飼養評估和認證協會(AAALAC)的指導。於日常監測中，每日檢查動物腫瘤生長和治療對於一般行為之影響，例如行動力、飲食及飲水(僅目視)、體重增減、眼/毛光澤、和其他不正常影響，如實驗方法所述。依據各組動物數紀錄死亡和臨床徵兆。
(ii)腫瘤測量及終點
主要終點係觀察腫瘤的生長是否可被延緩或或小鼠是否可被治癒。每周3次使用卡尺測量腫瘤二維體積，該體積以mm3使用下列方程式表示：V=0.5 a x b 2，其中a和b分別係腫瘤之長和短直徑。而後腫瘤體積用於計算T/C值。該T/C值(百分比)係抗腫瘤功效之指標；T和C分別係一給定日期之治療組和對照組之平均體積。
以下列方程式計算各組TGI：TGI(%)=[1-(Ti-T0)/(Vi-V0)]×100；Ti係給定日期之治療組之平均腫瘤體積，T0係治療始日之治療組之平均腫瘤體積，Vi係在與Ti同日之載劑對照組之平均腫瘤體積，以及V0係治療始日之載劑對照組之平均腫瘤體積。
(iii)統計分析
提供各組於各時間點之腫瘤體積的統計摘要，包括平均值和平均值標準差(SEM)。
以最終給藥後最佳療效時點所獲得的數據進行各組之間腫瘤體積差異之統計分析。
執行單因子獨立變異數分析(one-way ANOVA)比較各組腫瘤，以及當取得顯著F檢驗統計(治療變異和誤差變異之比例)時，各組之間的比較以Games-Howell檢定執行。全部數據使用GraphPad Prism 5.0分析。P<0.05為具有顯著差異。
實施例1：BCY8245治療NCI-H292異體移植(非小細胞肺癌(NSCLC)模式)Balb/c裸鼠之體內功效
1.研究目的
本研究之目的係評估BCY8245治療NCI-H292異體移植Balb/c裸鼠之體內抗腫瘤功效。
2.實驗設計
Figure 108121725-A0202-12-0095-19
3.材料
3.1 動物和飼養條件
3.1.1.動物
物種：Mus Musculus
品系：Balb/c裸鼠
年齡：6-8周
性別：雌性
體重：18-22g
動物數量：用於BCY8245及備用之小鼠為18隻
動物供應商：Shanghai LC Laboratory Animal Co.,LTD.
3.1.2.飼養條件
小鼠存於各自之通氣籠內，每籠3隻，恆溫以及恆濕。
溫度：20~26℃
濕度：40-70%
鼠籠：聚碳酸酯製造。尺寸為300mm x 180mm x 150mm。墊料為玉米芯，每周更換2次。
食物：研究期間動物可自由取得輻射消毒之乾燥顆粒食物。
飲水：動物可自由取得消毒過的飲用水。
鼠籠辨識：各籠的辨識辨識包括下列資訊：動物數、性別、品系、收貨日、治療、研究編號、組別編號、和治療始日。
動物辨識：動物均標記耳碼。
3.2 測試和正對照組藥物
4.實驗方法和步驟
4.1 細胞培養
腫瘤細胞NCI-H292於37℃以及5% CO2環境下培養於包含10%熱滅活小牛血清的培養基。腫瘤細胞每周2次進行繼代培養。收取指數成長期的細胞，並用於腫瘤接種之計算。
4.2 腫瘤接種
各小鼠於右腹皮下接種在0.2ml的PBS中的NCI-H292(10 x 106)腫瘤細胞並待其發展。隨機分組該些動物，當平均腫瘤體積約為158-406mm3時開始治療。各組中試驗藥物之給藥和動物數量揭示於下列實驗設計表。
4.3 製備試驗藥物配方
Figure 108121725-A0202-12-0097-20
4.4 樣本收集
在研究結束時，在最後一次給藥後5分鐘、15分鐘、30分鐘、60分鐘和120分鐘收集血漿。
5.結果
5.1 腫瘤生長曲線
圖1和圖2顯示腫瘤生長曲線。
5.2 腫瘤體積紀錄
下表顯示帶有NCI-H292異體移植之Balb/c雌性裸鼠隨時間的平均腫瘤體積：
表4：腫瘤體積對應時間之記錄
Figure 108121725-A0202-12-0098-21
表5：腫瘤體積對應時間之記錄
Figure 108121725-A0202-12-0099-22
5.3 腫瘤生長抑制之分析
根據治療起始後第14日測量的腫瘤體積，計算BCY8245對於NCI-H292異體移植模式的腫瘤生長抑制率。
表6：腫瘤生長抑制之分析
Figure 108121725-A0202-12-0099-23
a.平均值±SEM
b.將治療組的組平均腫瘤體積除以對照組的組平均腫瘤體積，計算腫瘤生長抑制(T/C)
表7：腫瘤生長抑制之分析
Figure 108121725-A0202-12-0100-24
a.平均值±SEM
b.將治療組的組平均腫瘤體積除以對照組的組平均腫瘤體積，計算腫瘤生長抑制(T/C)
6.結果和討論
本實施例評估BCY8245對於NCI-H292異體移植模式之治療功效。將全部組別於多個時間點測量之腫瘤體積顯示於圖1和圖2以及表4至表7。
給予載劑治療之小鼠之平均腫瘤體積於第14日達到879mm3。
BCY8245於1mg/kg並未產生明顯的抗腫瘤活性，從第7天開始將劑量增加至3mg/kg後，試驗藥物出現明顯的抗腫瘤活性，但是在第21天時，當劑量增加至5mg/kg時，療效並沒有進一步提高。在本實施例中，所有治療動物在給藥治療期間均出現持續的體重減輕，這可能是因為腫瘤負荷和試驗藥物的毒性所導致。
BCY8245於3mg/kg,qw(TV=149mm3,TGI=101.4%,p<0.001)，3mg/kg,biw(TV=65mm3,TGI=112.2%,p<0.001)以及5mg/kg,qw(TV=83mm3,TGI=109.8%,p<0.001)產生顯著的抗腫瘤活性。
實施例2：BCY7825、BCY8245、BCY8253、BCY8254及BCY8255治療HT-1376異體移植(膀胱癌模式)CB17-SCID小鼠之體內功效試驗
1.研究目的
本研究之目的係評估試驗藥物治療HT-1376異體移植CB17-SCID小鼠之體內抗腫瘤功效。
2.實驗設計
Figure 108121725-A0202-12-0101-25
a 第一周為1mg/kg，接下來2週為3mg/kg
3.材料
3.1 動物和飼養條件
3.1.1.動物
物種：Mus Musculus
品系：CB17-SCID
年齡：6-8周
性別：雌性
體重：18-22g
動物數量：包含備用小鼠為21-41隻
動物供應商：Shanghai LC Laboratory Animal Co.,LTD.
3.1.2.飼養條件
小鼠存於各自之通氣籠內，每籠3-5隻，恆溫以及恆濕。
溫度：20~26℃
濕度：40-70%
鼠籠：聚碳酸酯製造。尺寸為300mm x 180mm x 150mm。墊料為玉米芯，每周更換2次。
食物：研究期間動物可自由取得輻射消毒之乾燥顆粒食物。
飲水：動物可自由取得消毒過的飲用水。
鼠籠辨識：各籠的辨識辨識包括下列資訊：動物數、性別、品系、收貨日、治療、研究編號、組別編號、和治療始日。
動物辨識：動物均標記耳碼。
4.實驗方法和步驟
4.1 細胞培養
腫瘤細胞HT-1376於37℃以及5% CO2環境下單層培養於包含10%熱滅活小牛血清的EMEM培養基。腫瘤細胞每周用胰蛋白-EDTA進行2次繼代培養。收取指數成長期的細胞，用於腫瘤接種之計算以接種腫瘤。
4.2 腫瘤接種
各小鼠於右腹皮下接種HT-1376腫瘤細胞(5 x 106)並待其發展，該些腫瘤細胞係在0.2ml含有基質膠(1：1)的PBS中。當平均腫瘤體積約為153-164mm3時隨機分組該些動物。各組中試驗藥物之給藥和動物數量揭示於下列實驗設計表。
4.3 製備試驗藥物配方
Figure 108121725-A0202-12-0103-26
4.4 樣本收集
在研究結束時，在最後一次給藥後5分鐘、15分鐘、30分鐘、60分鐘和120分鐘收集第2組的血漿。在最後一次給藥後5分鐘、15分鐘、30分鐘、60分鐘和120分鐘收集第6組的血漿。在最後一次給藥後2小時收集第4組和第5組的腫瘤。
5.結果
5.1 腫瘤生長曲線
圖3和圖4顯示腫瘤生長曲線。
5.2 腫瘤體積紀錄
表8和9顯示帶有HT-1376異體移植之CB17-SCID雌性小鼠隨時間的平均腫瘤體積
表8：腫瘤體積對應時間之記錄
Figure 108121725-A0202-12-0105-293
表9：腫瘤體積對應時間之記錄
Figure 108121725-A0202-12-0106-163
5.3 腫瘤生長抑制之分析
根據治療起始後第21日測量的腫瘤體積，計算試驗藥物對於HT-1376異體移植模式的腫瘤生長抑制率。
表10：腫瘤生長抑制之分析
Figure 108121725-A0202-12-0106-164
a.平均值±SEM
b.將治療組的組平均腫瘤體積除以對照組的組平均腫瘤體積，計算腫瘤生長抑制(T/C)
表11：腫瘤生長抑制之分析
Figure 108121725-A0202-12-0107-165
a.平均值±SEM
b.將治療組的組平均腫瘤體積除以對照組的組平均腫瘤體積，計算腫瘤生長抑制(T/C)
6.結果和討論
第1組和第2組
本實施例評估試驗藥物對於HT-1376異體移植模式之治療功效。將全部組別於多個時間點測量之腫瘤體積顯示於圖3以及表8和表10。
給予載劑治療之小鼠之平均腫瘤體積於第21日達到884mm3。BCY8245於1mg/kg產生些微的抗腫瘤活性，並且從第7天起劑量增至3mg/kg後被發現有更好的療效。
在本實施例中，用3mg/kg試驗藥物的有些治療動物出現10%的體重減輕。
第3-6組
本實施例評估試驗藥物對於HT-1376異體移植模式之治療功效。將全部組別於多個時間點測量之腫瘤體積顯示於圖4以及表9和表11。
BCY8245於3mg/kg,qw(TV=603mm3,TGI=50.9%,p<0.01)、3mg/kg,biw(TV=407mm3,TGI=72.3%,p<0.001)和5mg/kg,qw(TV=465mm3,TGI=66.0%,p<0.001)產生顯著抗腫瘤活性。
在本實施例中，BCY8245於5mg/kg造成治療過程中出現10%的動物體重減輕。
實施例3：BCY8245治療Panc2.13異體移植(胰臟癌模式)Balb/c裸鼠之體內功效
1.研究目的
本研究之目的係評估試驗藥物治療Panc2.13異體移植Balb/c裸鼠之體內抗腫瘤功效。
2.實驗設計
Figure 108121725-A0202-12-0108-166
3.材料
3.1 動物和飼養條件
3.1.1.動物
物種：Mus Musculus
品系：Balb/c裸鼠
年齡：6-8周
性別：雌性
體重：18-22g
動物數量：包含備用小鼠為41隻
動物供應商：Shanghai LC Laboratory Animal Co.,LTD.
3.1.2.飼養條件
小鼠存於各自之通氣籠內，每籠3或5隻，恆溫以及恆濕。
溫度：20~26℃
濕度：40-70%
鼠籠：聚碳酸酯製造。尺寸為300mm x 180mm x 150mm。墊料為玉米芯，每周更換2次。
食物：研究期間動物可自由取得輻射消毒之乾燥顆粒食物。
飲水：動物可自由取得消毒過的飲用水。
鼠籠辨識：各籠的辨識辨識包括下列資訊：動物數、性別、品系、收貨日、治療、研究編號、組別編號、和治療始日。
動物辨識：動物均標記耳碼。
4.實驗方法和步驟
4.1 細胞培養
腫瘤細胞Panc2.13於37℃以及5% CO2環境下培養於包含15%熱滅活小牛血清和10units/ml人類重組胰島素的RMPI1640培養基。腫瘤細胞每周進行2次繼代培養。收取指數成長期的細胞，用於腫瘤接種之計算以接種腫瘤。
4.2 腫瘤接種
各小鼠於右腹皮下接種Panc2.13腫瘤細胞(5 x 106)並待其發展，該些腫瘤細胞係在0.2ml含有基質膠(1：1)的PBS中。當平均腫瘤體積約為149mm3時隨機分組這41隻動物。各組中試驗藥物之給藥和動物數量揭示於下列實驗設計表。
4.3 製備試驗藥物配方
Figure 108121725-A0202-12-0110-167
4.4 樣本收集
在研究結束時，在最後一次給藥後2小時收集所有組別的腫瘤。
5.結果
5.1 腫瘤生長曲線
圖5顯示腫瘤生長曲線。
5.2 腫瘤體積紀錄
表12顯示帶有Panc2.13異體移植之Balb/c雌性裸鼠隨時間的平均腫瘤體積。
表12：腫瘤體積對應時間之記錄
Figure 108121725-A0202-12-0111-168
5.3 腫瘤生長抑制之分析
根據治療起始後第14日測量的腫瘤體積，計算試驗藥物對於Panc2.13異體移植模式的腫瘤生長抑制率。
表13：腫瘤生長抑制之分析
Figure 108121725-A0202-12-0111-169
a.平均值±SEM
b.將治療組的組平均腫瘤體積除以對照組的組平均腫瘤體積，計算腫瘤生長抑制(T/C)
6.結果和討論
本實施例評估試驗藥物對於Panc2.13異體移植模式之治療功效。將全部組別於多個時間點測量之腫瘤體積顯示於圖5以及表12和表13。
BCY8245於3mg/kg,qw(TV=271mm3,TGI=69.2%,p<0.01)、3mg/kg,biw(TV=231mm3,TGI=79.1%,p<0.001)和5mg/kg,qw(TV=238mm3,TGI=77.5%,p<0.001)產生顯著抗腫瘤活性。
實施例4：BCY8245治療MDA-MB-468異體移植(乳癌模式)Balb/c裸鼠之體內功效
1.研究目的
本研究之目的係評估BCY8245治療MDA-MB-468異體移植Balb/c裸鼠之體內抗腫瘤功效。
2.實驗設計
Figure 108121725-A0202-12-0112-170
3.材料
3.1 動物和飼養條件
3.1.1.動物
物種：Mus Musculus
品系：Balb/c裸鼠
年齡：6-8周
性別：雌性
體重：18-22g
動物數量：包含備用小鼠為41隻
動物供應商：Shanghai LC Laboratory Animal Co.,LTD.
3.1.2.飼養條件
小鼠存於各自之通氣籠內，每籠3或5隻，恆溫以及恆濕。
溫度：20~26℃
濕度：40-70%
鼠籠：聚碳酸酯製造。尺寸為300mm x 180mm x 150mm。墊料為玉米芯，每周更換2次。
食物：研究期間動物可自由取得輻射消毒之乾燥顆粒食物。
飲水：動物可自由取得消毒過的飲用水。
鼠籠辨識：各籠的辨識辨識包括下列資訊：動物數、性別、品系、收貨日、治療、研究編號、組別編號、和治療始日。
動物辨識：動物均標記耳碼。
4.實驗方法和步驟
4.1 細胞培養
腫瘤細胞Panc2.13於37℃以及5% CO2環境下培養於包含10%熱滅活小牛血清的Leibovitz's L-15培養基。腫瘤細胞每周進行2次繼代培養。收取指數成長期的細胞，用於腫瘤接種之計算以接種腫瘤。
4.2 腫瘤接種
各小鼠於右腹皮下接種MDA-MB-468腫瘤細胞(10 x 106)並待其發展，該些腫瘤細胞係在0.2ml含有50%基質膠的PBS中。當平均腫瘤體積約為196mm3時隨機分組這41隻動物。各組中試驗藥物之給藥和動物數量揭示於下列實驗設計表。
4.3 製備試驗藥物配方
Figure 108121725-A0202-12-0114-171
4.4 樣本收集
在研究的第21天，在最後一次給藥後5分鐘、15分鐘、30分鐘、60分鐘和120分鐘收集第2組的血漿。在最後一次給藥後2小時收集第1組和第3組的腫瘤。第4組中的動物在不進行任何給藥的情況下繼續運行21天，並且在第42天收集這些組別的腫瘤。
5.結果
5.1 腫瘤生長曲線
圖6顯示腫瘤生長曲線。
5.2 腫瘤體積紀錄
表14和表15顯示帶有MDA-MB-468異體移植之Balb/c雌性裸鼠隨時間的平均腫瘤體積
表14：腫瘤體積對應時間之記錄(第0天至第21天)
Figure 108121725-A0202-12-0116-294
5.3 腫瘤生長抑制之分析
根據治療起始後第21日測量的腫瘤體積，計算試驗藥物對於MDA-MB-468異體移植模式的腫瘤生長抑制率。
表16：腫瘤生長抑制之分析
Figure 108121725-A0202-12-0117-173
a.平均值±SEM
b.將治療組的組平均腫瘤體積除以對照組的組平均腫瘤體積，計算腫瘤生長抑制(T/C)
6.結果和討論
本實施例評估試驗藥物對於MDA-MB-468異體移植模式之治療功效。將全部組別於多個時間點測量之腫瘤體積顯示於圖6以及表14至表16。
BCY8245於3mg/kg,qw(TV=85mm3,TGI=144.2%,p<0.001)、3mg/kg,biw(TV=22mm3,TGI=169.8%,p<0.001)和5mg/kg,qw(TV=29mm3,TGI=168.4%,p<0.001)時產生顯著抗腫瘤活性，其有劑量依賴性或劑量-頻率依賴性。
從第21天起暫停5mg/kg組的給藥，在另外3週的監測時間表中，未見腫瘤有任何復發。
實施例5：BCY8549治療NCI-H292異體移植(非小細胞肺癌(NSCLC)模式)Balb/c裸鼠之體內功效
1.研究目的
本研究之目的係評估BCY8549治療NCI-H292異體移植Balb/c裸鼠之體內抗腫瘤功效。
2.實驗設計
Figure 108121725-A0202-12-0118-174
3.材料
3.1 動物和飼養條件
3.1.1.動物
物種：Mus Musculus
品系：Balb/c裸鼠
年齡：6-8周
性別：雌性
體重：18-22g
動物數量：包含備用小鼠為43隻
動物供應商：Shanghai Lingchang Biotechnology Experimental Animal Co.Ltd
3.1.2.飼養條件
小鼠存於各自之通氣籠內，每籠3或4隻，恆溫以及恆濕。
溫度：20~26℃
濕度：40-70%
鼠籠：聚碳酸酯製造。尺寸為300mm x 180mm x 150mm。墊料為玉米芯，每周更換2次。
食物：研究期間動物可自由取得輻射消毒之乾燥顆粒食物。
飲水：動物可自由取得消毒過的飲用水。
鼠籠辨識：各籠的辨識辨識包括下列資訊：動物數、性別、品系、收貨日、治療、研究編號、組別編號、和治療始日。
動物辨識：動物均標記耳碼。
4.實驗方法和步驟
4.1 細胞培養
腫瘤細胞NCI-H292於37℃以及5% CO2環境下離體單層培養於包含10%熱滅活小牛血清的RPMI-1640培養基。腫瘤細胞每周用胰蛋白-EDTA進行2次繼代培養。收取指數成長期的細胞，用於腫瘤接種之計算以接種腫瘤。
4.2 腫瘤接種
各小鼠於右腹皮下接種NCI-H292腫瘤細胞(10 x 106)並待其發展，該些腫瘤細胞係在0.2ml的PBS中。當平均腫瘤體積約為168mm3時隨機分組這43隻動物。各組中試驗藥物之給藥和動物數量顯示於下列實驗設計表。
製備試驗藥物配方’
Figure 108121725-A0202-12-0120-175
4.4 樣本收集
在研究結束時，在最後一次給藥後5分鐘、15分鐘、30分鐘、1小時和2小時收集第2組的血漿。
5.結果
5.1 腫瘤生長曲線
圖7顯示腫瘤生長曲線。
5.2 腫瘤體積紀錄
表17顯示帶有NCI-H292異體移植之Balb/c雌性裸鼠隨時間的平均腫瘤體積。
表17：腫瘤體積對應時間之記錄
Figure 108121725-A0202-12-0120-176
Figure 108121725-A0202-12-0121-177
5.3 腫瘤生長抑制之分析
根據治療起始後第14日測量的腫瘤體積，計算試驗藥物對於NCI-H292異體移植模式的腫瘤生長抑制率。
表18：腫瘤生長抑制之分析
Figure 108121725-A0202-12-0121-178
a.平均值±SEM
b.將治療組的組平均腫瘤體積除以對照組的組平均腫瘤體積，計算腫瘤生長抑制(T/C)
6.結果和討論
本實施例評估該等BCY試驗藥物對於NCI-H292異體移植模式之治療功效。將全部組別於多個時間點測量之腫瘤體積顯示於圖7以及表17和表18。
給予載劑治療之小鼠之平均腫瘤體積於第14日達到843mm3。BCY8549於3mg/kg時出現顯著抗腫瘤活性。在本研究中，所有的小鼠皆良好地維持了體重。
實施例6：研究複製數變異(CNV)與多種腫瘤類型的Nectin-4基因表現量之間的關聯
方法
1.選擇cBioPortal(http：//www.cbioportal.org/)中所有研究並搜尋NECTIN4。
(a)移除暫時研究
(b)不選擇重疊樣本的研究，以防止樣本偏差(基於cBioPortal上的警告)-如果可以選擇，始終保留PanCancer研究
(c)選擇用於分析之研究(表19)
表19：cBioPortal的統計分析以及實驗單元
Figure 108121725-A0202-12-0122-179
Figure 108121725-A0202-12-0123-180
Figure 108121725-A0202-12-0124-181
Figure 108121725-A0202-12-0125-182
Figure 108121725-A0202-12-0126-183
2. cBioPortal輸出的CNV和RNA表現量數據
3.檢測CNV是否與Nectin-4之mRNA表現量具有統計學上顯著相關(不應用log2)
(a)於GraphPad Prism(7.04)以及R/R studio執行非參數Kruskal-Wallis檢定(顯著性臨界值：p<0.01)
(i)GraphPad Prism：設定表格，執行無配對之非參數檢定，不預設高斯分佈
(ii)R使用的包裹
1. XLConnect
2. Dplyr
3. Kruskal-Wallis秩和檢定：Kruskal.test.
4.於R/Rstudio使用鄧恩檢定調整多重比較(包括全部可能比較，即使組別n=1)(顯著性臨界值：p<0.025)
(a)鄧恩多重比較法=“bonferonni”
結果
結果顯示於下表20。在報導Nectin-4的腫瘤CNV和mRNA基因表現資料的41個公開TCGA資料組中，有許多跡象表明，報導的病例中Nectin-4複製數增加(2-3複製數)或擴增(>3複製數)。另外，不同病例已被證明具有淺度缺失(shallow-deletion)(<2複製數)，但對於包含深度缺失(>1複製數喪失或Nectin-4雙對偶基因喪失)的腫瘤的報導則較不常見。最常檢測到擴增的適應症為乳癌(10-22%)、膀胱癌(20%)、肺癌(5-7%)和肝細胞癌(8%)。最常檢測到複製數喪失的適應症為腎臟難染腺瘤(77%)、腎臟透明細胞癌(RCC)(6.5%)、肉瘤(10%)、結腸癌(10%)、頭頸癌(7%)和肺鱗狀癌。這些資料表明在腫瘤適應症內和之間存在一定範圍的CNV，並且在不同適應症之間存在多種複製數模式。
除了TCGA資料組內的CNV外，每個適應症的Nectin-4 mRNA中位表現量涵蓋約210範圍。因此，鑒於Nectin-4 mRNA表現量的範圍和在腫瘤類型之間和內部觀察到的CNV，進行統計檢定以辨別在單獨TCGA資料組/適應症中Nectin-4 mRNA量與Nectin-4 CNV之間的潛在關係。各適應症之腫瘤分類為下列五種類別其中之一：
a)深度缺失；
b)淺度缺失；
c)二倍體；
d)增加；或
e)擴增。
而後執行Kruskall-Wallis檢定，偵測各組mRNA表現量分布是否具有差異(P<0.01)。針對P<0.01的TCGA數據組別以及辨識哪一組與其他不同，藉由計算Z-統計以及調整計算P值(Bonferroni)而執行事後檢定(post-hoc testing)。為簡單解釋，檢閱配對比較和各適應症二倍體(儘管計算了所有成對的P值)。18/41的TCGA實驗中，針對增加相對於二倍體及/或擴增相對於二倍體，具有<0.01的Kruskall-Wallis p值和<0.025的Bonferroni p值，顯示Nectin-4 mRNA表現量的增加與Nectin-4複製數的增加有關。這18項實驗中代表了14種獨立的腫瘤組織學：
乳癌、子宮癌、膀胱癌、肺腺癌、肺鱗狀癌、子宮頸癌、頭頸癌、胰臟癌、 甲狀腺癌、結腸直腸癌、胸腺瘤、肉瘤、腎透明細胞癌(RCC)和胃癌。
此外，有6項實驗mRNA的減少與複製數的喪失有關。這6項實驗中的4項實驗不僅顯示了CNV喪失和表現量減少之間的關聯，也報導了CNV的增加與高表現量有關：
胃癌、肺鱗狀癌、結腸癌和甲狀腺癌。
而腎臟難染腺瘤和前列腺癌這兩種適應症被報導維和CNV喪失及低轉錄本豐度有關。此外，還有一項單獨的前列腺癌研究(Metastatic Prostate Cancer,SU2C/PCF Dream Team(Robinson et al.,Cell 2015))顯示複製數的增加與高表現量(相對於二倍體)相關。
這些被觀察到與mRNA表現量相關的腫瘤CNV減少和增加可能代表了在觀察到這些關聯的適應症中Nectin-4腫瘤蛋白表現量背後的機制。顯然 地，仍有適應症不如預期，其CNV似乎對mRNA表現量沒有影響，該適應症舉例為肝細胞癌。已經證明，使用本發明某些Nectin-4雙環藥物結合物的體內臨床前療效與Nectin-4蛋白表現量相關，其藉由IHC測定。因此，如果腫瘤Nectin-4的CNV與mRNA含量相關並且預測蛋白質表現量，則具有複製數增加(增加或擴增)的腫瘤的病患更有可能對本發明的Nectin-4雙環藥物結合物有反應。如果可以辨別出對Nectin-4具有增加的CNV的患者，那麼該資訊可用在選擇用本發明的Nectin-4雙環藥物結合物治療的患者。
表20：複製數變異(CNV)與Nectin-4基因表現量間之關聯研究結果
Figure 108121725-A0202-12-0130-295
Figure 108121725-A0202-12-0131-185
Figure 108121725-A0202-12-0132-186
Figure 108121725-A0202-12-0133-187
Figure 108121725-A0202-12-0134-188
Figure 108121725-A0202-12-0135-189
Figure 108121725-A0202-12-0136-190
Figure 108121725-A0202-12-0137-191
Figure 108121725-A0202-12-0138-192
Figure 108121725-A0202-12-0139-193
Figure 108121725-A0202-12-0140-194
Figure 108121725-A0202-12-0141-195
Figure 108121725-A0202-12-0142-196
Figure 108121725-A0202-12-0143-197
Figure 108121725-A0202-12-0144-198
實施例7：Nectin-4在6個細胞株中的表現分析
1.研究目的
本研究之目的係藉由流式細胞儀分析法評估Nectin-4在6個細胞株中的表現，包括2種乳癌細胞株(T-47D、MDA-MB-468)、3種肺癌細胞株(NCI-H292、NCI-H322、NCI-H526)和1種纖維肉瘤細胞株(HT-1080)。
2.平台設計
針對在T-47D、MDA-MB-468、NCI-H292、NCI-H322和HT-1080中的FCM平台。
Figure 108121725-A0202-12-0145-199
NCI-H526的平台
Figure 108121725-A0202-12-0145-200
3.材料
3.1 樣本
細胞株列表
Figure 108121725-A0202-12-0145-201
Figure 108121725-A0202-12-0146-202
3.2 試劑
流式細胞儀分析法之抗體及試劑盒
Figure 108121725-A0202-12-0146-203
DPBS(Corning-21-031-CV)
染色緩衝液(eBioscience-00-4222)
固定緩衝液(BD-554655)
3.3.儀器
Eppendorf Centrifuge 5810R
BD FACS Canto Flow Cytometer(BD)
4.實驗方法和步驟
4.1 樣本收集
收取指數成長期的細胞，用血球計和Trypan blue staining計算細胞數。在4℃以400Xg離心細胞5分鐘，用染色緩衝液洗滌細胞兩次，然後將細胞懸浮在染色緩衝液中至1X107/mL。
4.2 抗體染色
1)將100μL細胞懸浮液均分到96孔V盤的每一孔中。
2)將同種型對照或抗體添加到懸浮細胞中，並在黑暗中於4℃培養30分鐘。
3)藉由在4℃下以400 X g離心5分鐘以洗滌細胞2次，然後除去上清液。
4)用100μL固定緩衝液重新懸浮細胞，並於4℃在黑暗中培養30分鐘。
5)在4℃下以300 X g離心5分鐘以洗滌細胞2次並除去上清液
6)在400μL染色緩衝液中重新懸浮細胞。
7)使用FlowJo V10軟體分析FACS數據。
4.3.數據分析
藉由Flowjo V10軟體和Graphpad Prism或Excel軟體分析所有FACS數據。
5.結果
5.1平台之圈選策略
圖8至圖11顯示Nectin-4之圈選策略。
5.2.數據分析
5.2.1細胞株之存活率
以下為細胞株之存活率。
Figure 108121725-A0202-12-0148-204
5.2.2. Nectin-4在細胞株中的陽性表現
Nectin-4在6個細胞株中的陽性表現和MFI如下所列。
Figure 108121725-A0202-12-0148-205
6.討論
Nectin-4在乳癌T-47D(99.0%)、MDA-MB-468(99.0%)和肺癌NCI-H292(97.9%)、NCI-H322(99.1%)中具有高表現量。在NCI-H526和HT-1080中，未發現Nectin-4的表現。
實施例8：利用流式細胞儀分析Nectin-4在9個CDX細胞株中的表現
1.研究目的
本研究之目的係評估Nectin-4(PVRL-4)在9個細胞株中的表面表現量，包括1個乳癌細胞株(MDA-MB-468)、4個肺癌細胞株(NCI-H292、NCI-H358、NCI-H526、A549)、1個胰臟癌細胞株(Panc02.13)、2個結腸直腸癌細胞株(HCT-116、HT-29)以及1個膀胱癌細胞株(HT1376)。
2.平台設計
針對在9個細胞株中的FCM平台。
Figure 108121725-A0202-12-0149-206
3.材料
3.1 樣本
細胞株列表
Figure 108121725-A0202-12-0149-207
Figure 108121725-A0202-12-0150-208
3.2 試劑
1)DPBS(Corning,21-031-CV)
2)Trypsin 0.25%(Invitrogen-25200072)
3)染色緩衝液(eBioscience,00-4222)
4)固定緩衝液r(BD,554655)
5)抗體
Figure 108121725-A0202-12-0150-209
3.3.儀器
Eppendorf Centrifuge 5810R
BD FACS Canto Flow Cytometer(BD)
4.實驗方法和步驟
4.1細胞培養
細胞解凍
1)用70%酒精清潔冷凍小瓶，然後在37℃水浴槽中快速解凍。
2)以約1000rpm離心細胞懸浮液5分鐘，除去上清液，並向燒瓶中加入預熱的培養基。
3)在37℃、5%CO2培養箱中培養。
細胞繼代
1)在37℃水浴槽中加熱培養基和胰蛋白酶。
2)除去培養基，並用DPBS沖洗細胞層。
3)於燒瓶中加入5mL 0.25%胰蛋白酶溶液，並用5mL培養基稀釋胰蛋白酶。
4)以1000rpm離心細胞懸浮液5分鐘。
5)加入15mL新鮮培養基，輕輕地攪動以重新懸浮細胞。
6)於新的培養瓶中添加適當的細胞懸浮液。
7)在37℃、5% CO2培養箱中培養。
4.2 樣本收集
收取指數成長期的細胞，用血球計和Trypan blue staining計算細胞數。在4℃以400Xg離心細胞5分鐘，用染色緩衝液洗滌細胞兩次，然後將細胞懸浮在染色緩衝液中至5×106/mL。
4.3 抗體染色
將100μL細胞懸浮液均分到96孔V盤的每一孔中。將同種型對照或抗體添加到懸浮細胞中，並在黑暗中於4℃培養30分鐘。藉由在4℃下以400×g離心5分鐘以洗滌細胞2次，然後除去上清液。在300μL染色緩衝液中重新懸浮細胞。使用FlowJo V10軟體分析FACS數據。
4.4.數據分析
藉由Flowjo V10軟體和Graphpad Prism或Excel軟體分析所有FACS數據。
5.結果
5.1平台之圈選策略
圖12-圖16顯示Nectin-4之圈選策略。
5.2.數據分析
Nectin-4在9個細胞株中的陽性表現和MFI如下所列。
Figure 108121725-A0202-12-0152-210
6.討論
Nectin-4在膀胱癌HT-1376(92.4%)、乳癌MDA-MB-468(97.1%)和肺癌NCI-H358(90.1%)中具有高表現量。在HT-29(40.0%)、NCI-H292(71.1%)和Panc02.13(51.9%)中發現Nectin-4的中等表現量。在HCT-116，A549和NCI-526中，未發現Nectin-4的表現。將依據此數據選擇功效研究之模式。
實施例9：體內功效之研究
實施例9.1：試驗藥物治療A549異體移植Balb/c裸鼠之體內功效
1.研究目的
本研究之目的係評估試驗藥物治療A549異體移植Balb/c裸鼠之體內抗腫瘤功效。
2.實驗設計
Figure 108121725-A0202-12-0153-211
3.材料
3.1動物和飼養條件
3.1.1.動物
物種：Mus Musculus
品系：Balb/c裸鼠
年齡：6-8周
性別：雌性
體重：18-22g
動物數量：包含備用小鼠為41隻
3.1.2.飼養條件
小鼠存於各自之通氣籠內，每籠3或5隻，恆溫以及恆濕。
溫度：20~26℃
濕度：40-70%
鼠籠：聚碳酸酯製造。尺寸為300mm x 180mm x 150mm。墊料為玉米芯，每周更換2次。
食物：研究期間動物可自由取得輻射消毒之乾燥顆粒食物。
飲水：動物可自由取得消毒過的飲用水。
鼠籠辨識：各籠的辨識辨識包括下列資訊：動物數、性別、品系、收貨日、治療、研究編號、組別編號、和治療始日。
動物辨識：動物均標記耳碼。
4.實驗方法和步驟
4.1細胞培養
腫瘤細胞A549於37℃以及5% CO2環境下單層培養於包含10%熱滅活小牛血清的F-12K培養基。腫瘤細胞每周用胰蛋白-EDTA進行2次繼代培養。收取指數成長期的細胞，用於腫瘤接種之計算以接種腫瘤。
4.2 腫瘤接種
各小鼠於右腹皮下接種A549腫瘤細胞(5x 106)並待其發展，該些腫瘤細胞係在0.2ml的PBS中。當平均腫瘤體積約為158mm3時隨機分組這41隻動物。各組中試驗藥物之給藥和動物數量顯示於下列實驗設計表。
4.3製備試驗藥物配方
Figure 108121725-A0202-12-0155-212
4.4 樣本收集
在研究結束時，在最後一次給藥後2小時收集所有組別的腫瘤。
5.結果
5.1 腫瘤生長曲線
圖17顯示腫瘤生長曲線。
5.2腫瘤體積紀錄
表21顯示帶有A549異體移植之Balb/c雌性裸鼠隨時間的平均腫瘤體積。
表21：腫瘤體積對應時間之記錄
Figure 108121725-A0202-12-0156-213
5.3腫瘤生長抑制之分析
根據治療起始後第14日測量的腫瘤體積，計算試驗藥物對於A549異體移植模式的腫瘤生長抑制率。
表22：腫瘤生長抑制之分析
Figure 108121725-A0202-12-0156-214
a.平均值±SEM
b.將治療組的組平均腫瘤體積除以對照組的組平均腫瘤體積，以計算腫瘤生長抑制率(T/C)
6.結果和討論
本實施例評估試驗藥物對於A549異體移植模式之治療功效。將全部組別於多個時間點測量之腫瘤體積顯示於圖17以及表21和表22。
給予載劑治療之小鼠之平均腫瘤體積於第14日達到568mm3。BCY8245於3mg/kg,qw(TV=356mm3,TGI=51.4%,p<0.05)、3mg/kg,biw(TV=194mm3,TGI=90.8%,p<0.01)和5mg/kg,qw(TV=228mm3,TGI=82.6%,p<0.001)產生顯著抗腫瘤活性，其有劑量依賴性或劑量-頻率依賴性。
BCY8245組別中的良好地動物維持體重。該細胞株在FACS研究中顯示了Nectin-4的最低表現量，腫瘤生長受到BCY8245的抑制，但腫瘤並未消退，強調了最佳療效的目標驅動要求。
實施例9.2：試驗藥物治療HCT116異體移植Balb/c裸鼠之體內功效
1.研究目的
本研究之目的係評估試驗藥物治療HCT116異體移植Balb/c裸鼠之體內抗腫瘤功效。
2.實驗設計
Figure 108121725-A0202-12-0157-215
3.材料
3.1動物和飼養條件
3.1.1.動物
物種：Mus Musculus
品系：Balb/c裸鼠
年齡：6-8周
性別：雌性
體重：18-22g
動物數量：包含備用小鼠為41隻
3.1.2.飼養條件
小鼠存於各自之通氣籠內，每籠3或5隻，恆溫以及恆濕。
溫度：20~26℃
濕度：40-70%
鼠籠：聚碳酸酯製造。尺寸為300mm x 180mm x 150mm。墊料為玉米芯，每周更換2次。
食物：研究期間動物可自由取得輻射消毒之乾燥顆粒食物。
飲水：動物可自由取得消毒過的飲用水。
鼠籠辨識：各籠的辨識辨識包括下列資訊：動物數、性別、品系、收貨日、治療、研究編號、組別編號、和治療始日。
動物辨識：動物均標記耳碼。
4.實驗方法和步驟
4.1細胞培養
HCT116細胞於37℃以及5% CO2環境下培養於包含10%熱滅活小牛血清的培養基。腫瘤細胞每周進行2次繼代培養。收取指數成長期的細胞，用於腫瘤接種之計算以接種腫瘤。
4.2 腫瘤接種
各小鼠於右腹皮下接種HCT116腫瘤細胞(5.0 x 106)並待其發展，該些腫瘤細胞係在0.2ml的PBS中。當平均腫瘤體積約為166mm3時隨機分組這41隻動物。各組中試驗藥物之給藥和動物數量顯示於下列實驗設計表。
4.3製備試驗藥物配方
Figure 108121725-A0202-12-0159-216
4.4 樣本收集
在第14天研究結束時，收集第1組和第2組的腫瘤以進行FFPE。至於第4組，在給藥後的5分鐘、15分鐘、30分鐘、60分鐘和120分鐘後收集血漿，並且也收集其腫瘤以及存放於-80℃。
5.結果
5.1 腫瘤生長曲線
圖18顯示腫瘤生長曲線。
5.2腫瘤體積紀錄
表23顯示帶有HCT116異體移植之Balb/c雌性裸鼠隨時間的平均腫瘤體積。
表23：腫瘤體積對應時間之記錄
Figure 108121725-A0202-12-0160-217
5.3腫瘤生長抑制之分析
根據治療起始後第14日測量的腫瘤體積，計算試驗藥物對於HCT116異體移植模式的腫瘤生長抑制率。
表24：腫瘤生長抑制之分析
Figure 108121725-A0202-12-0161-218
a.平均值±SEM；b.將治療組的組平均腫瘤體積除以對照組的組平均腫瘤體積，計算腫瘤生長抑制(T/C)
6.結果和討論
本實施例評估試驗藥物對於HCT116異體移植模式之治療功效。將全部組別於多個時間點測量之腫瘤體積顯示於圖18以及表23和表24。
給予載劑治療之小鼠之平均腫瘤體積於第14日達到769mm3。BCY8245於3mg/kg,qw(TV=425mm3,TGI=57.1%,p<0.001)、3mg/kg,biw(TV=197mm3,TGI=94.9%,p<0.001)和5mg/kg,qw(TV=134mm3,TGI=105.2%,p<0.001)產生顯著抗腫瘤活性，其有劑量依賴性或劑量-頻率依賴性。
在本實施例中，所有在5mg/kg qw組別中的動物平均減少了10%的體重。
該細胞株在FACS研究中顯示了Nectin-4的最低表現量，強調了最佳療效的目標驅動要求。
實施例9.3：試驗藥物治療HT-1376異體移植CB17-SCID小鼠之體內功效
1.研究目的
本研究之目的係評估試驗藥物治療HT-1376異體移植CB17-SCID小鼠之體內抗腫瘤功效。
2.實驗設計
Figure 108121725-A0202-12-0162-219
3.材料
3.1動物和飼養條件
3.1.1.動物
物種：Mus Musculus
品系：CB17-SCID
年齡：6-8周
性別：雌性
體重：18-22g
動物數量：包含備用小鼠為41隻
3.1.2.飼養條件
小鼠存於各自之通氣籠內，每籠3或5隻，恆溫以及恆濕。
溫度：20~26℃
濕度：40-70%
鼠籠：聚碳酸酯製造。尺寸為300mm x 180mm x 150mm。墊料為玉米芯，每周更換2次。
食物：研究期間動物可自由取得輻射消毒之乾燥顆粒食物。
飲水：動物可自由取得消毒過的飲用水。
鼠籠辨識：各籠的辨識辨識包括下列資訊：動物數、性別、品系、收貨日、治療、研究編號、組別編號、和治療始日。
動物辨識：動物均標記耳碼。
4.實驗方法和步驟
4.1細胞培養
HT-1376腫瘤細胞於37℃以及5% CO2環境下培養於包含10%熱滅活小牛血清的EMEM培養基。腫瘤細胞每周進行2次繼代培養。收取指數成長期的細胞，用於腫瘤接種之計算以接種腫瘤。
4.2 腫瘤接種
各小鼠於右腹皮下接種HT-1376腫瘤細胞(5 x 106)並待其發展，該些腫瘤細胞係在含有基質膠(1：1)的0.2ml的PBS中。當平均腫瘤體積約為153mm3時隨機分組這41隻動物。各組中試驗藥物之給藥和動物數量顯示於下列實驗設計表。
4.3 製備試驗藥物配方
Figure 108121725-A0202-12-0164-220
4.4 樣本收集
在研究結束時，在最後一次給藥後5分鐘、15分鐘、30分鐘、60分鐘和120分鐘後收集第4組的血漿。在最後一次給藥後2小時收集第4組的腫瘤。在最後一次給藥後2小時收集第1、2和3組的腫瘤。
5.結果
5.1 腫瘤生長曲線
圖19顯示腫瘤生長曲線。
5.2腫瘤體積紀錄
表25顯示帶有HT-1376異體移植之雌性CB17-SCID小鼠隨時間的平均腫瘤體積。
表25：腫瘤體積對應時間之記錄
Figure 108121725-A0202-12-0165-221
5.3腫瘤生長抑制之分析
根據治療起始後第14日測量的腫瘤體積，計算試驗藥物對於HT-1376異體移植模式的腫瘤生長抑制率。
表26：腫瘤生長抑制之分析
Figure 108121725-A0202-12-0165-222
a.平均值±SEM
b.將治療組的組平均腫瘤體積除以對照組的組平均腫瘤體積，計算腫瘤生長抑制(T/C)
6.結果和討論
本實施例評估試驗藥物對於HT-1376異體移植模式之治療功效。將全部組別於多個時間點測量之腫瘤體積顯示於圖19以及表25和表26。
給予載劑治療之小鼠之平均腫瘤體積於第14日達到1069mm3。BCY8245於3mg/kg,qw(TV=603mm3,TGI=50.9%,p<0.01)、3mg/kg,biw(TV=407mm3,TGI=72.3%,p<0.001)和5mg/kg,qw(TV=465mm3,TGI=66.0%,p<0.001)產生顯著抗腫瘤活性。在此研究中，BCY8245於5mg/kg qw導致動物體重在治療過程中減少了超過10%。
實施例9.4：試驗藥物治療MDA-MB-468異體移植Balb/c裸鼠之體內功效
1.研究目的
本研究之目的係評估試驗藥物治療MDA-MB-468異體移植Balb/c裸鼠之體內抗腫瘤功效。
2.實驗設計
Figure 108121725-A0202-12-0166-223
3.材料
3.1動物和飼養條件
3.1.1.動物
物種：Mus Musculus
品系：Balb/c裸鼠
年齡：6-8周
性別：雌性
體重：18-22g
動物數量：包含備用小鼠為41隻
3.1.2.飼養條件
小鼠存於各自之通氣籠內，每籠3或5隻，恆溫以及恆濕。
溫度：20~26℃
濕度：40-70%
鼠籠：聚碳酸酯製造。尺寸為300mm x 180mm x 150mm。墊料為玉米芯， 每周更換2次。
食物：研究期間動物可自由取得輻射消毒之乾燥顆粒食物。
飲水：動物可自由取得消毒過的飲用水。
鼠籠辨識：各籠的辨識辨識包括下列資訊：動物數、性別、品系、收貨日、治療、研究編號、組別編號、和治療始日。
動物辨識：動物均標記耳碼。
4.實驗方法和步驟
4.1細胞培養
HT-1376腫瘤細胞於37℃以及5% CO2環境下培養於包含10%熱滅活小牛血清的Leibovitz's L-15培養基。腫瘤細胞每周進行2次繼代培養。收取指數成長期的細胞，用於腫瘤接種之計算以接種腫瘤。
4.2 腫瘤接種
各小鼠於右腹皮下接種MDA-MB-468腫瘤細胞(10 x 106)並待其發展，該些腫瘤細胞係在含有基50%基質膠的0.2ml的PBS中。當平均腫瘤體積約為196mm3時隨機分組這41隻動物。各組中試驗藥物之給藥和動物數量顯示於下列實驗設計表。
4.3 製備試驗藥物配方
Figure 108121725-A0202-12-0168-224
4.4 樣本收集
在第21天時，在最後一次給藥後5分鐘、15分鐘、30分鐘、60分鐘和120分鐘後收集第2組的血漿。在最後一次給藥後2小時收集第1和3組的腫瘤。第4組中的動物在不進行任何給藥的情況下繼續運行21天，並且在第42天收集這些組別的腫瘤。
5.結果
5.1 腫瘤生長曲線
圖20顯示腫瘤生長曲線。
5.2腫瘤體積紀錄
表27和28顯示帶有MDA-MB-468異體移植之Balb/c雌性裸鼠隨時間的平均腫瘤體積。
5.3腫瘤生長抑制之分析
根據治療起始後第21日測量的腫瘤體積，計算試驗藥物對於MDA-MB-468異體移植模式的腫瘤生長抑制率。
表27：腫瘤體積對應時間之記錄(第0天至第21天)
Figure 108121725-A0202-12-0170-296
表28：腫瘤體積對應時間之記錄(第23天至第42天)
Figure 108121725-A0202-12-0171-226
表29：腫瘤生長抑制之分析
Figure 108121725-A0202-12-0171-227
a.平均值±SEM
b.將治療組的組平均腫瘤體積除以對照組的組平均腫瘤體積，計算腫瘤生長抑制(T/C)
6.結果和討論
本實施例評估試驗藥物對於MDA-MB-468異體移植模式之治療功效。將全部組別於多個時間點測量之腫瘤體積顯示於圖20以及表27至表29。
給予載劑治療之小鼠之平均腫瘤體積於第21日達到447mm3。BCY8245於3mg/kg,qw(TV=85mm3,TGI=144.2%,p<0.001)、3mg/kg,biw(TV=22mm3,TGI=169.8%,p<0.001)和5mg/kg,qw(TV=29mm3,TGI=168.4%,p<0.001)產生顯著的抗腫瘤活性，其有劑量依賴性或劑量-頻率依賴性。
從第21天起暫停5mg/kg組的給藥，在額外3週的監測中，腫瘤未見任何復發。該細胞株在FACS研究中顯示了Nectin-4的高表現量，BCY8245造成了腫瘤的消退，強調了最佳療效的目標驅動特性。
實施例9.5：試驗藥物治療NCI-H292異體移植Balb/c裸鼠之體內功效
1.研究目的
本研究之目的係評估試驗藥物治療NCI-H292異體移植Balb/c裸鼠之體內抗腫瘤功效。
2.實驗設計
Figure 108121725-A0202-12-0172-228
3.材料
3.1 動物和飼養條件
3.1.1.動物
物種：Mus Musculus
品系：Balb/c裸鼠
年齡：6-8周
性別：雌性
體重：18-22g
動物數量：包含備用小鼠為41隻
3.1.2.飼養條件
小鼠存於各自之通氣籠內，每籠3或5隻，恆溫以及恆濕。
溫度：20~26℃
濕度：40-70%
鼠籠：聚碳酸酯製造。尺寸為300mm x 180mm x 150mm。墊料為玉米芯，每周更換2次。
食物：研究期間動物可自由取得輻射消毒之乾燥顆粒食物。
飲水：動物可自由取得消毒過的飲用水。
鼠籠辨識：各籠的辨識辨識包括下列資訊：動物數、性別、品系、收貨日、治療、研究編號、組別編號、和治療始日。
動物辨識：動物均標記耳碼。
4.實驗方法和步驟
4.1 細胞培養
NCI-H292腫瘤細胞於37℃以及5% CO2環境下離體單層培養於包含10%熱滅活小牛血清的RPMI-1640培養基。腫瘤細胞用胰蛋白-EDTA處理每周進行2次繼代培養。收取指數成長期的細胞，用於腫瘤接種之計算以接種腫瘤。
4.2 腫瘤接種
各小鼠於右腹皮下接種NCI-H292腫瘤細胞(10 x 106)並待其發展，該些腫瘤細胞係在0.2ml的PBS中。當平均腫瘤體積約為162mm3時隨機分組這41隻動物。各組中試驗藥物之給藥和動物數量顯示於下列實驗設計表。
4.3 製備試驗藥物配方
Figure 108121725-A0202-12-0174-229
4.4 樣本收集
在實驗結束時，在最後一次給藥後2小時收集所有組別的腫瘤。
5.結果
5.1 腫瘤生長曲線
圖21顯示腫瘤生長曲線。
5.2 腫瘤體積紀錄
表30顯示帶有NCI-H292異體移植之Balb/c雌性裸鼠隨時間的平均腫瘤體積。
表30：腫瘤體積對應時間之記錄
Figure 108121725-A0202-12-0175-230
5.3 腫瘤生長抑制之分析
根據治療起始後第14日測量的腫瘤體積，計算試驗藥物對於NCI-H292異體移植模式的腫瘤生長抑制率。
表31：腫瘤生長抑制之分析
Figure 108121725-A0202-12-0175-231
a.平均值±SEM
b.將治療組的組平均腫瘤體積除以對照組的組平均腫瘤體積，計算腫瘤生長抑制(T/C)
6.結果和討論
本實施例評估試驗藥物對於NCI-H292異體移植模式之治療功效。將全部組別於多個時間點測量之腫瘤體積顯示於圖21以及表30和表31。
給予載劑治療之小鼠之平均腫瘤體積於第14日達到948mm3。BCY8245於3mg/kg,qw(TV=149mm3,TGI=101.4%,p<0.001)、3mg/kg,biw(TV=65mm3,TGI=112.2%,p<0.001)和5mg/kg,qw(TV=83mm3,TGI=109.8%,p<0.001)產生顯著抗腫瘤活性。
所有3mg/kg,qw、3mg/kg,biw和5mg/kg,qw的試驗藥物組別均顯示出相當的抗腫瘤活性，當增加劑量或劑量頻率時，療效沒有進一步提高。
在此實施例中，所有組別的動物均良好地維持體重。
該細胞株在FACS研究中顯示了Nectin-4的高表現量，BCY8245造成了腫瘤的消退，強調了最佳療效的目標驅動。
實施例9.6：試驗藥物治療NCI-H526異體移植Balb/c裸鼠之體內功效
1.研究目的
本研究之目的係評估試驗藥物治療NCI-H526異體移植Balb/c裸鼠之體內抗腫瘤功效。
2.實驗設計
Figure 108121725-A0202-12-0177-232
3.材料
3.1 動物和飼養條件
3.1.1.動物
物種：Mus Musculus
品系：Balb/c裸鼠
年齡：6-8周
性別：雌性
體重：18-22g
動物數量：包含備用小鼠為21隻
3.1.2.飼養條件
小鼠存於各自之通氣籠內，每籠3或5隻，恆溫以及恆濕。
溫度：20~26℃
濕度：40-70%
鼠籠：聚碳酸酯製造。尺寸為300mm x 180mm x 150mm。墊料為玉米芯，每周更換2次。
食物：研究期間動物可自由取得輻射消毒之乾燥顆粒食物。
飲水：動物可自由取得消毒過的飲用水。
鼠籠辨識：各籠的辨識辨識包括下列資訊：動物數、性別、品系、收貨日、治療、研究編號、組別編號、和治療始日。
動物辨識：動物均標記耳碼。
4.實驗方法和步驟
4.1 細胞培養
NCI-H526腫瘤細胞於37℃以及5% CO2環境下培養於包含10%熱滅活小牛血清的培養基。腫瘤細胞每周進行2次繼代培養。收取指數成長期的細胞，用於腫瘤接種之計算以接種腫瘤。
4.2 腫瘤接種
各小鼠於右腹皮下接種NCI-H526腫瘤細胞(5.0 x 106)並待其發展，該些腫瘤細胞係在0.2ml的PBS中。當平均腫瘤體積約為181mm3時隨機分組這21隻動物。各組中試驗藥物之給藥和動物數量顯示於下列實驗設計表。
4.3 製備試驗藥物配方
Figure 108121725-A0202-12-0178-233
4.4 樣本收集
在第14天實驗結束時，收集所有組別的腫瘤以進行FFPE。
5.結果
5.1 腫瘤生長曲線
圖22顯示腫瘤生長曲線。
5.2 腫瘤體積紀錄
表32顯示帶有NCI-H526異體移植之Balb/c雌性裸鼠隨時間的平均腫瘤體積。
表32：腫瘤體積對應時間之記錄
Figure 108121725-A0202-12-0179-234
5.3 腫瘤生長抑制之分析
根據治療起始後第14日測量的腫瘤體積，計算試驗藥物對於NCI-H526異體移植模式的腫瘤生長抑制率。
表33：腫瘤生長抑制之分析
Figure 108121725-A0202-12-0180-235
a.平均值±SEM
b.將治療組的組平均腫瘤體積除以對照組的組平均腫瘤體積，計算腫瘤生長抑制(T/C)
6.結果和討論
本實施例評估試驗藥物對於NCI-H526異體移植模式之治療功效。將全部組別於多個時間點測量之腫瘤體積顯示於圖22以及表32和表33。
給予載劑治療之小鼠之平均腫瘤體積於第14日達到13653。BCY8245於3mg/kg,qw(TV=1205mm3,TGI=13.4%,p>0.05)和3mg/kg,biw(TV=1109mm3,TGI=21.6%,p>0.05)出現些微的抗腫瘤活性，BCY8245於5mg/kg,qw(TV=476mm3,TGI=75.0%,p<0.01)出現顯著的抗腫瘤活性。在此實施例中，BCY8245於5mg/kg biw導致動物減少了超過10%的體重。該細胞株在FACS研究中顯示了Nectin-4的最低表現量，腫瘤生長受到BCY8245的抑制，但腫瘤並未消退，強調了最佳療效的目標驅動要求。
實施例9.7：試驗藥物治療Panc2.13異體移植Balb/c裸鼠之體內功效
1.研究目的
本研究之目的係評估試驗藥物治療Panc2.13異體移植Balb/c裸鼠之體內抗腫瘤功效。
2.實驗設計
Figure 108121725-A0202-12-0181-236
3.材料
3.1 動物和飼養條件
3.1.1.動物
物種：Mus Musculus
品系：Balb/c裸鼠
年齡：6-8周
性別：雌性
體重：18-22g
動物數量：包含備用小鼠為41隻
3.1.2.飼養條件
小鼠存於各自之通氣籠內，每籠3或5隻，恆溫以及恆濕。
溫度：20~26℃
濕度：40-70%
鼠籠：聚碳酸酯製造。尺寸為300mm x 180mm x 150mm。墊料為玉米芯，每周更換2次。
食物：研究期間動物可自由取得輻射消毒之乾燥顆粒食物。
飲水：動物可自由取得消毒過的飲用水。
鼠籠辨識：各籠的辨識辨識包括下列資訊：動物數、性別、品系、收貨日、治療、研究編號、組別編號、和治療始日。
動物辨識：動物均標記耳碼。
4.實驗方法和步驟
4.1 細胞培養
Panc2.13腫瘤細胞於37℃以及5% CO2環境下培養於包含15%熱滅活小牛血清和10units/ml人類重組胰島素的RMPI1640培養基。腫瘤細胞每周進行2次繼代培養。收取指數成長期的細胞，用於腫瘤接種之計算以接種腫瘤。
4.2 腫瘤接種
各小鼠於右腹皮下接種Panc2.13腫瘤細胞(5 x 106)並待其發展，該些腫瘤細胞係在含有基質膠(1：1)的0.2ml的PBS中。當平均腫瘤體積約為149mm3時隨機分組這41隻動物。各組中試驗藥物之給藥和動物數量顯示於下列實驗設計表。
4.3 製備試驗藥物配方
Figure 108121725-A0202-12-0183-237
4.4 樣本收集
在實驗結束時，在最後一次給藥後2小時後收集所有組別的腫瘤。
5.結果
5.1 腫瘤生長曲線
圖23顯示腫瘤生長曲線。
5.2 腫瘤體積紀錄
表34顯示帶有Panc2.13異體移植之Balb/c雌性裸鼠隨時間的平均腫瘤體積。
表34：腫瘤體積對應時間之記錄
Figure 108121725-A0202-12-0184-238
5.3 腫瘤生長抑制之分析
根據治療起始後第14日測量的腫瘤體積，計算試驗藥物對於Panc2.13異體移植模式的腫瘤生長抑制率。
表35：腫瘤生長抑制之分析
Figure 108121725-A0202-12-0184-239
a.平均值±SEM
b.將治療組的組平均腫瘤體積除以對照組的組平均腫瘤體積，計算腫瘤生長抑制(T/C)
6.結果和討論
本實施例評估試驗藥物對於Panc2.13異體移植模式之治療功效。將全部組別於多個時間點測量之腫瘤體積顯示於圖23以及表34和表35。
給予載劑治療之小鼠之平均腫瘤體積於第14日達到545mm3。BCY8245於3mg/kg,qw(TV=271mm3,TGI=69.2%,p<0.01)、3mg/kg,biw(TV=231mm3,TGI=79.1%,p<0.001)和5mg/kg,qw(TV=238mm3,TGI=77.5%,p<0.001)產生顯著抗腫瘤活性。在此實施例中，在所有的5mg/kg qw組別中的動物體重平均減少了15%。該細胞株在FACS研究中顯示了Nectin-4的中等表現量，腫瘤生長受到BCY8245的抑制，但腫瘤並未消退。
實施例9.8：試驗藥物治療MDA-MB-468異體移植Balb/c裸鼠之體內功效
1.研究目的
本研究之目的係評估BCY8245以及BCY8245與BCY8234的組合使用對於治療MDA-MB-468異體移植Balb/c裸鼠之體內抗腫瘤功效，以確定靶向結合在最佳功效中所起的作用。
2.實驗設計
Figure 108121725-A0202-12-0186-240
3.材料
3.1 動物和飼養條件
3.1.1.動物
物種：Mus Musculus
品系：Balb/c裸鼠
年齡：6-8周
性別：雌性
體重：18-22g
動物數量：包含備用小鼠為36隻
3.1.2.飼養條件
小鼠存於各自之通氣籠內，每籠4隻，恆溫以及恆濕。
溫度：20~26℃
濕度：40-70%
鼠籠：聚碳酸酯製造。尺寸為300mm x 180mm x 150mm。墊料為玉米芯，每周更換2次。
食物：研究期間動物可自由取得輻射消毒之乾燥顆粒食物。
飲水：動物可自由取得消毒過的飲用水。
鼠籠辨識：各籠的辨識辨識包括下列資訊：動物數、性別、品系、收貨日、治療、研究編號、組別編號、和治療始日。
動物辨識：動物均標記耳碼。
4.實驗方法和步驟
4.1 細胞培養
腫瘤細胞於37℃以及0% CO2環境下培養於包含10%熱滅活小牛血清的Leibovitz's L-15培養基。腫瘤細胞每周進行2次繼代培養。收取指數成長期的細胞，用於腫瘤接種之計算以接種腫瘤。
4.2 腫瘤接種
各小鼠於右腹皮下接種MDA-MB-468腫瘤細胞(10 x 106)並待其發展，該些腫瘤細胞係在含有50%基質膠的0.2ml的PBS中。當平均腫瘤體積約為186mm3時隨機分組這36隻動物。各組中試驗藥物之給藥和動物數量顯示於下列實驗設計表。
4.3 製備試驗藥物配方
Figure 108121725-A0202-12-0188-241
4.4 樣本收集
在第21天時，收集第5和6組的腫瘤以進行FFPE。在實驗結束時，收集第3組的腫瘤以進行FFPE。
5.結果
5.1 腫瘤生長曲線
圖24顯示腫瘤生長曲線。
5.2 腫瘤體積紀錄
表36至38顯示帶有MDA-MB-468異體移植之Balb/c雌性裸鼠隨時間的平均腫瘤體積。
5.3 腫瘤生長抑制之分析
根據治療起始後第21日測量的腫瘤體積，計算試驗藥物對於MDA-MB-468異體移植模式的腫瘤生長抑制率。
6.結果和討論
本實施例評估試驗藥物對於MDA-MB-468異體移植模式之治療功效。將全部組別於多個時間點測量之腫瘤體積顯示於圖24以及表36至表39。
給予載劑治療之小鼠之平均腫瘤體積於第21日達到420mm3。BCY8245於1mg/kg,qw(TV=204mm3,TGI=92.1%,p<0.001)、3mg/kg,qw(TV=27mm3,TGI=164.9%,p<0.001)產生顯著抗腫瘤活性，其具有劑量依賴性。BCY8245於0.3mg/kg qw或biw並未出現任何抗腫瘤活性。
BCY8245於1mg/kg,qw和3mg/kg,qw並與BCY8234(無毒素的同源肽)於300mg/kg,qw一起使用，產生顯著抗腫瘤活性(TV=242mm3,TGI=75.4%,p<0.01)。當與單獨使用BCY8245進行比較時，300mg/kg的BCY8234拮抗3mg/kg的BCY8245的抗腫瘤活性(p<0.001)。透過競爭性無毒素胜肽降低功效證實了靶向結合對於最佳療效的重要性。在接下來的監測過程中，以BCY8245 1mg/kg qw治療的小鼠顯示出明顯的腫瘤復發，而以BCY8245 3mg/kg qw治療的小鼠沒有顯示出腫瘤復發。
表36：腫瘤體積對應時間之記錄(第0天至第21天)
Figure 108121725-A0202-12-0190-297
表37：腫瘤體積對應時間之記錄(第23天至第32天)
Figure 108121725-A0202-12-0191-243
表38：腫瘤體積對應時間之記錄(第35天至第91天)
Figure 108121725-A0202-12-0192-244
表39：腫瘤生長抑制之分析
Figure 108121725-A0202-12-0193-245
a.平均值±SEM
b.將治療組的組平均腫瘤體積除以對照組的組平均腫瘤體積，以計算腫瘤生長抑制率(T/C)
實施例9.9：試驗藥物治療MDA-MB-468異體移植Balb/c裸鼠之體內功效
1.研究目的
本研究之目的係評估BCY8245或與BCY8234的組合使用對於治療MDA-MB-468異體移植Balb/c裸鼠之體內抗腫瘤功效。
2.實驗設計
Figure 108121725-A0202-12-0194-246
3.材料
3.1 動物和飼養條件
3.1.1.動物
物種：Mus Musculus
品系：Balb/c裸鼠
年齡：6-8周
性別：雌性
體重：18-22g
動物數量：包含備用小鼠為20隻
3.1.2.飼養條件
小鼠存於各自之通氣籠內，每籠5隻，恆溫以及恆濕。
溫度：20~26℃
濕度：40-70%
鼠籠：聚碳酸酯製造。尺寸為300mm x 180mm x 150mm。墊料為玉米芯，每周更換2次。
食物：研究期間動物可自由取得輻射消毒之乾燥顆粒食物。
飲水：動物可自由取得消毒過的飲用水。
鼠籠辨識：各籠的辨識辨識包括下列資訊：動物數、性別、品系、收貨日、治療、研究編號、組別編號、和治療始日。
動物辨識：動物均標記耳碼。
4.實驗方法和步驟
4.1 細胞培養
腫瘤細胞於37℃以及0% CO2環境下培養於包含10%熱滅活小牛血清的Leibovitz's L-15培養基。腫瘤細胞每周進行2次繼代培養。收取指數成長期的細胞，用於腫瘤接種之計算以接種腫瘤。
4.2 腫瘤接種
各小鼠於右腹皮下接種MDA-MB-468腫瘤細胞(10 x 106)並待其發展，該些腫瘤細胞係在含有50%基質膠的0.2ml的PBS中。當平均腫瘤體積約為464mm3時隨機分組這20隻動物。各組中試驗藥物之給藥和動物數量顯示於下列實驗設計表。
4.3 製備試驗藥物配方
Figure 108121725-A0202-12-0196-247
4.4 樣本收集
在實驗結束時，收集第3組的腫瘤以進行FFPE。
5.結果
5.1 腫瘤生長曲線
圖25顯示腫瘤生長曲線。
5.2 腫瘤體積紀錄
表40至42顯示帶有MDA-MB-468異體移植之Balb/c雌性裸鼠隨時間的平均腫瘤體積。
5.3 腫瘤生長抑制之分析
根據治療起始後第28日測量的腫瘤體積，計算試驗藥物對於MDA-MB-468異體移植模式的腫瘤生長抑制率。
6.結果和討論
本實施例評估試驗藥物對於MDA-MB-468異體移植模式之治療功效。將全部組別於多個時間點測量之腫瘤體積顯示於圖25以及表40至表43。
故意選用較之前大的初始腫瘤尺寸以確定BCY8245是否可在較大尺寸的腫瘤中展示出療效。給予載劑治療之小鼠之平均腫瘤體積於第28日達到773mm3。在第28天時，BCY8245於1mg/kg,qw(TV=384mm3,TGI=126.6%,p<0.001)和3mg/kg,qw(TV=50mm3,TGI=234.6%,p<0.001)產生顯著抗腫瘤活性，其具有劑量依賴性。其中，用BCY8245(3mg/kg qw)治療的小鼠在停止治療後出現一些腫瘤復發，從第76天開始的給藥對於腫瘤的完全消退並沒有效果。
在第28天時，BCY8245(3mg/kg,qw)和BCY8234(300mg/kg,qw)的組合使用產生顯著的抗腫瘤活性(TV=55mm3,TGI=234.0%,p<0.001)，並且在整個監測過程中並未出現任何腫瘤復發。
在接下來的3周，用10mg/kg Nectin-4 ADC或5mg/kg BCY8245治療的載劑組的小鼠，以及於PG-D28用5mg/kg BCY8245治療的第2組(BCY8245,1mpk,qw)的小鼠顯示出有效的腫瘤消退，之後，在沒有投藥的接下來4周出現腫瘤再次生長。
BCY8245在先前給予載劑的組別中對於約450mm3能夠造成腫瘤消退，且在大約770mm3的初始腫瘤中也能夠造成腫瘤消退。
表40：腫瘤體積對應時間之記錄(第0天至第28天)
Figure 108121725-A0202-12-0198-298
表41：腫瘤體積對應時間之記錄(第30天至第75天)
Figure 108121725-A0202-12-0199-249
表42：腫瘤體積對應時間之記錄(第79天至第103天)
Figure 108121725-A0202-12-0200-250
表43：腫瘤生長抑制之分析
Figure 108121725-A0202-12-0200-251
a.平均值±SEM
b.將治療組的組平均腫瘤體積除以對照組的組平均腫瘤體積，計算腫瘤生長抑制(T/C)
實施例10：體內PK研究。
對MDA-MB-468異種移植動物注射3mg/kg的BCY8245(BT8009)。在各時間點，對動物實施安樂死，取血漿和腫瘤並速凍。分析樣本的MMAE。BT8009(BCY8245)的血漿水平來自歷史PK研究。圖33顯示血漿中MMAE的濃 度、腫瘤中的MMAE以及血漿中的BT8009的濃度。MMAE在腫瘤中的滯留時間比血漿中更久，這支持了全身暴露顯著低於腫瘤暴露的假設。
實施例11：HCS測定
HCS測定係用於Nectin-4 BDC結合研究。將細胞與試驗劑一起培養，然後洗滌。藉由針對MMAE的螢光抗體進行檢測。MDA-MB-468細胞顯示中度的Nectin-4表現量，其中20000個細胞顯示出最佳圖像。NCI-H292細胞在該測定法中顯示低表現，即使在20000細胞中，MMAE的檢測也很差。圖34和表44顯示MDA-MB-468細胞株中的HCS數據。
表44
Figure 108121725-A0202-12-0201-252
Nectin-4 ADC和BCY8245滯留在細胞上並與膜染色劑共定位。BCY8781和MMAE顯示出最小的滯留。MDA-MB-468細胞株上所有化合物的Kd與歷史資料一致。Nectin-4 ADC在MDA-MB-468細胞株上顯示出可檢測的結合親和力。BCY8425顯示一位數的奈米莫耳親和力，其Bmax低於Nectin-4 ADC。最大螢光強度降低是因為Nectin-4 ADC的MMAE與藥物的比例為4，而BCY8245的MMAE與藥物的比例為1。BCY8781對MDA-MB-468細胞株的結合親和力很弱，而MMAE對在MDA-MB-468細胞株上沒有可檢測的結合親和力。
實施例12：BCY8245治療兩種PDX模式之體內功效
目的
評估BCY8245在非小鱗狀細胞癌和腺癌(均為非小細胞癌)的PDX模式中的療效。
動物
物種：Mus Musculus
品系：Balb/c裸鼠
年齡：6-8周
性別：雌性
體重：18-22
試驗藥物
BCY8245和Nectin-4 ADC或BCY8781
研究前的動物
各小鼠於右腹皮下接種LU-01-0007或LU-01-0412腫瘤片段(約30mm3)以發展腫瘤。當平均腫瘤體積達到161mm3(LU-01-0007)或147mm3(LU-01-0412)時隨機分組這20隻動物。
日常測量和終點
每天檢查動物的腫瘤生長和治療對正常行為的任何影響，例如活動能力、食物和水的消耗(僅通過觀察)、體重增加/減少、眼睛/頭髮黯淡以及任何實驗方法敘述的其他異常影響。根據每個子集中的動物數量記錄死亡和觀察到的臨床症狀。
主要終點為觀察是否可延緩腫瘤生長或可以治癒小鼠。使用卡尺每週測量腫瘤體積的二維尺寸三次，並使用以下公式表示體積(mm3)：V=0.5 a x b2，其中a和b分別是腫瘤的長徑和短徑。然後將腫瘤大小用於T/C值的計算。T/C 值(以百分比表示)是抗腫瘤效力的指標；T和C分別是在指定天數的治療組和對照組的平均體積。
使用以下公式計算各組的TGI：TGI(%)=[1-(Ti-T0)/(Vi-V0)]×100；Ti是治療組在指定日期的平均腫瘤體積，T0是治療組在治療起始當天的平均腫瘤體積，Vi是載劑對照組在跟Ti同日的平均腫瘤體積，以及V0是載劑組在治療起始當天的平均腫瘤體積。
圖26和27顯示了這些研究的結果。
Lu-01-0412(圖26)：BCY8245在此PDX模式中產生具有劑量相關性的功效，其中，於1mg/kg qw時腫瘤生長速率下降，但於3mg/kg qw時腫瘤消退至基準線。在停止給藥後(第21天)，到研究開始後的105天，有5/6動物沒有出現腫瘤再生長。出現再生長的單一動物對3mg/kg BCY8245有反應，並顯示腫瘤恢復消退至基準線。非結合BDC之BCY8781以3mg/kg的劑量具有穩定的疾病狀態，並且在停止給藥後腫瘤以與載劑治療組相同的速率迅速生長，強調了Nectin-4的結合為這些藥物帶來功效的增強。大型腫瘤(載劑治療組)對於單獨給藥BCY8245或BCY8781有所反應而產生消退。
LU-01-0007(圖27)：BCY8245產生具有劑量相關性的功效，於1mg/kg qw產生穩定的疾病，於3mg/kg產生完全消退。劑量必須維持至第56天才能達到完全消退(停止給藥時)。該組中沒有腫瘤再生長(後者在研究開始後一直保持到126天)。Nectin-4 ADC的功效相似。1mg/kg疾病穩定組對劑量增加(3和5mg/kg)有反應，表示低劑量的BCY8245不會導致抗藥性的發展。
實施例13：BCY8245對免疫功能受損小鼠中人類乳癌、食道癌和膀胱癌的低傳代次數PDX模式之體內功效評估
目的
評估在免疫功能受損小鼠的人類乳癌、食道癌和膀胱癌的低傳代次數腫瘤異體移植模型中雙環胜肽藥劑的抗腫瘤活性。
物種：小鼠
品系：Athymic Nude-Foxn1nu(免疫功能受損的)
來源：Envigo：Indianapolis,Indiana
性別：雌性
開始給藥的目標年齡：至少6-8周
開始給藥的目標體重：至少18克
適應期：3天
實驗設計
研究前的動物：當夠多的儲備動物到達1.0-1.5cm3時，收集腫瘤以重新植入研究前的動物中。研究前的動物將單側植入從儲備動物身上收集的腫瘤片段。各動物植入特定繼代批次並進行記錄。
研究動物：在植入後七至十天開始記錄每個實驗的研究前腫瘤體積。當平均腫瘤體積達到150-300mm3時，將根據腫瘤體積將動物分為治療組或對照組以用於給藥，給藥是從第0天開始。
試驗藥物
BCY8245和Nectin-4抗體藥物結合物係與載劑對照組比較。可能包括標準治療劑Docetaxel。所有藥劑需要透過靜脈途徑給藥每周一次(qw)，劑量如圖所示。
日常測量
功效腫瘤體積：每周測量腫瘤體積兩次。在研究到達終點的當天收集最終腫瘤體積。如果可能的話，若發現動物垂死則收集最終腫瘤體積。
功效動物體重：每周測量體重兩次。在研究到達終點的當天收集最終腫瘤體重，或是，若發現動物垂死則收集最終腫瘤體積，如果可能的話。與第0天相比，體重減輕
Figure 108121725-A0202-12-0205-162
10%的動物將提供DietGel®隨意餵養。若任何動物連續7天體重減輕>20%，或如果與第0天相比小鼠體重減輕超過30%，將被視為垂死以及安樂死。
數據分析
藥劑毒性：從第0天開始，每天觀察動物，且每周使用數字秤稱重兩次；將記錄每組的數據，包括單一和平均克重(Mean We±SEM)，相對於第0天的平均體重變化百分比(%vD0)，並在研究完成時繪製%vD0。每天記錄動物死亡，並根據體重減輕和肉眼觀察確定其為與藥物有關的(D)、與技術有關的(T)、與腫瘤有關的(B)或未知的(U)；單一藥劑或組合使用的組別中，若平均%vD0>20%及/或>10%死亡率，則將被視為高於評估方案中該治療的最大耐受劑量(MTD)。研究結束時報導每個治療組的最大平均%vD0(體重最低點)。
腫瘤生長抑制-從第0天開始，每周用數字卡尺測量腫瘤大小兩次，並記錄每組的數據，包括單一和平均腫瘤體積(Mean TV±SEM)；使用公式(1)計算腫瘤體積：TV=寬度2 x長度x 0.52。研究完成後，各治療組(T)相對於對照組(C)的腫瘤生長抑制率(%TGI)的計算和報告將透過初始(i)和最終(f)腫瘤量測使用公式(2)計算而得：%TGI=1-(Tf-Ti)/(Cf-Ci)。若單一小鼠連續兩次測量到的腫瘤體積小於等於在第0天測量到的30%，則將被視為部分有效者(PR)。若單一小鼠缺少明顯腫瘤(連續兩次測量為0.00mm3)，則將被視為完全有效者(CR)； 一直持續到研究完成的CR則被視為無腫瘤倖存者(TFS)。載劑治療組別的腫瘤倍增時間(DT)可藉由公式DT=(Df-Di)* log2/(logTVf-logTVi)得到，其中，D=Day(天)以及TV=Tumor Volume(腫瘤體積)。本研究中收集的所有數據均以電子方式進行管理，並儲存在備用伺服器系統上。
圖28至圖31顯示了這些研究結果。
在代表膀胱癌(CTG-1771)、雌激素和黃體素陰性Her2陽性乳癌(CTG-1171)、三陰性乳癌(CTG-1106)和食道癌(CTG-0896)的四個低傳代次數PDX模式中測試了BCY8245)。在所有這些模型中，BCY8245均顯示出出色的功效，可引起腫瘤消退，並且這四個中的三個達到完全消退至基準線。在所有情況下功效均與ADC相當，並且優於或等於Docetaxel SOC。在所有模式中，BCY8245的耐受性均優於Docetaxel。
<110> 英商拜西可泰克斯有限公司
<120> 對NECTIN-4具有專一性之雙環胜肽配體
<130> BIC-C-P2584TW
<150> GB 1810250.9
<151> 2018-06-22
<150> GB 1815684.4
<151> 2018-09-26
<150> GB 1818499.4
<151> 2018-11-13
<150> GB 1904632.5
<151> 2019-04-02
<160> 2
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<221> Xaa
<222> (3)..(3)
<223> 1-Nal
<220>
<221> Xaa
<222> (4)..(4)
<223> dD
<220>
<221> Xaa
<222> (7)..(7)
<223> HArg
<220>
<221> Xaa
<222> (13)..(13)
<223> HyP
<400> 1
Figure 108121725-A0202-12-0208-253
<210> 2
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<221> Xaa
<222> (18)..(18)
<223> Sar6-K(F1)
<400> 2
Figure 108121725-A0202-12-0208-254

Claims (19)

  1. 一種對Nectin-4具有專一性之胜肽配體，包括：一多肽，包括至少三半胱胺酸殘基，該至少三半胱胺酸殘基被至少二環狀序列分隔；以及一分子支架，該分子支架與該多肽之該些半胱胺酸殘基形成共價鍵，使得至少二多肽環形成於該分子支架上；其中該胜肽配體包括以下胺基酸序列：
    CiP[1Nal][dD]CiiM[HArg]DWSTP[HyP]WCiii(SEQ ID NO：1)；
    其中1Nal表示1-萘基丙胺酸，HArg表示高精胺酸，HyP表示羥脯胺酸，Ci、Cii、和Ciii分別表示第一、第二、和第三半胱胺酸殘基或其醫藥上可接受之鹽。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之胜肽配體，包括一胺基酸序列，該胺基酸序列係選自：
    [B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO：1)(以下稱為BCY8234)；
    Ac-[B-Ala][Sar5]-(SEQ ID NO：1)(以下稱為BCY8122)；
    Ac-(SEQ ID NO：1)(以下稱為BCY8126)；
    (SEQ ID NO：1)(以下稱為BCY8116)；
    螢光素-(SEQ ID NO：1)(以下稱為BCY8205)；以及
    [PYA][B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO：1)(以下稱為BCY8846)。
  3. 如申請專利範圍第1項或第2項所述之胜肽配體，包括一胺基酸序列，該胺基酸序列係選自：
    [B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO：1)(以下稱為BCY8234)；
    Ac-[B-Ala][Sar5]-(SEQ ID NO：1)(以下稱為BCY8122)；
    Ac-(SEQ ID NO：1)(以下稱為BCY8126)；
    (SEQ ID NO：1)(以下稱為BCY8116)；以及
    螢光素-(SEQ ID NO：1)(以下稱為BCY8205)。
  4. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所述之胜肽配體，包括一胺基酸序列，該胺基酸序列係選自：
    Ac-[B-Ala][Sar5]-(SEQ ID NO：1)(以下稱為BCY8122)；
    Ac-(SEQ ID NO：1)(以下稱為BCY8126)；以及
    (SEQ ID NO：1)(以下稱為BCY8116)。
  5. 如申請專利範圍第1至4項中任一項所述之胜肽配體，包括一胺基酸序列，該胺基酸序列係選自：
    Ac-[B-Ala][Sar5]-(SEQ ID NO：1)(以下稱為BCY8122)；以及
    Ac-(SEQ ID NO：1)(以下稱為BCY8126)。
  6. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所述之胜肽配體，包括一胺基酸序列，該胺基酸序列係選自：
    [B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO：1)(以下稱為BCY8234)。
  7. 如申請專利範圍第1至6項中任一項所述之胜肽配體，其中該分子支架係選自1,1',1"-(1,3,5-三嗪烷-1,3,5-三基)三丙-2-烯-1-酮(TATA)。
  8. 如申請專利範圍第1至7項中任一項所述之胜肽配體，其中該醫藥上可接受之鹽係選自游離酸或鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、銨鹽。
  9. 如申請專利範圍第1至8項中任一項所述之胜肽配體，其中該Nectin-4係人類Nectin-4。
  10. 一種藥物結合物，包括結合至一或多效應物及/或官能基之如申請專利範圍第1至9項中任一項所述之一胜肽。
  11. 如申請專利範圍第10項所述之藥物結合物，其係結合至一或多胞殺劑。
  12. 如申請專利範圍第11項所述之藥物結合物，其中該胞殺劑係選自MMAE或DM1，特別係MMAE。
  13. 如申請專利範圍第12項所述之藥物結合物，其中該胞殺劑係MMAE，並且該藥物結合物更包括選自以下之一連接子：-PABC-Cit-Val-戊二醯基-(-PABC-Cit-Val-Glutaryl-)或-PABC-環丁基-Ala-Cit-βAla-(-PABC-cyclobutyl-Ala-Cit-βAla-)，例如-PABC-Cit-Val-戊二醯基-(-PABC-Cit-Val-Glutaryl-)，其中PABC表示對胺基苄基胺甲酸酯(p-aminobenzylcarbamate)。
  14. 如申請專利範圍第13項所述之藥物結合物，其中該胞殺劑係DM1，並且該藥物結合物更包括一連接子-SPDB-(SO3H)-，其中SPDB表示N-琥珀醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯(N-succinimidyl 3-(2-pyridyldithio)propionate)。
  15. 如申請專利範圍第10至14項中任一項所述之藥物結合物，其係選自：BCY8245或BCY8549，特別係BCY8245。
  16. 一種醫藥組成物，包括申請專利範圍第1至9項中任一項所述之胜肽配體或申請專利範圍第10至15項中任一項所述之藥物結合物、以及一或多醫藥上可接受之賦形劑。
  17. 如申請專利範圍第16項所述之醫藥組成物，更包括一或多治療劑。
  18. 如申請專利範圍第10至15項中任一項所述之藥物結合物，其係用於預防、抑制或治療由Nectin-4介導之疾病或病症。
  19. 一種預防、抑制或治療癌症之方法，包括對所需之一患者投予如申請專利範圍第10至15項中任一項所述之藥物結合物，其中該患者係被認定為具有增強的Nectin-4複製數變異(CNV)。
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Families Citing this family (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP7301757B2 (ja) 2017-06-26 2023-07-03 バイスクルアールディー・リミテッド 検出可能部分を持つ二環式ペプチドリガンドおよびその使用
GB201721265D0 (en) 2017-12-19 2018-01-31 Bicyclerd Ltd Bicyclic peptide ligands specific for EphA2
TWI825046B (zh) * 2017-12-19 2023-12-11 英商拜西可泰克斯有限公司 Epha2特用之雙環胜肽配位基
US11180531B2 (en) * 2018-06-22 2021-11-23 Bicycletx Limited Bicyclic peptide ligands specific for Nectin-4
GB201810316D0 (en) 2018-06-22 2018-08-08 Bicyclerd Ltd Peptide ligands for binding to EphA2
KR20220007098A (ko) 2019-05-09 2022-01-18 바이사이클티엑스 리미티드 Ox40에 특이적인 이환식 펩티드 리간드
TW202110485A (zh) 2019-07-30 2021-03-16 英商拜西可泰克斯有限公司 異質雙環肽複合物
US11508566B2 (en) * 2019-09-03 2022-11-22 National Taiwan University Use of anthranilic acid derivative as matrix for MALDI mass spectrometry
US11332500B2 (en) 2019-10-03 2022-05-17 Bicycletx Limited Heterotandem bicyclic peptide complexes
GB201914872D0 (en) * 2019-10-15 2019-11-27 Bicycletx Ltd Bicyclic peptide ligand drug conjugates
AU2021226133A1 (en) * 2020-02-28 2022-10-20 Ascend Biopharmaceuticals Ltd Methods of treatment and related compositions
CA3179152A1 (en) * 2020-05-20 2021-11-25 Amy Katherine DICKSON Bicyclic peptide ligands specific for nectin-4 and uses thereof
CA3186504A1 (en) 2020-08-17 2022-02-24 Stephen J. Blakemore Bicycle conjugates specific for nectin-4 and uses thereof
EP4213844A1 (en) * 2020-09-17 2023-07-26 Mirati Therapeutics, Inc. Combination therapies
GB202016331D0 (en) * 2020-10-15 2020-12-02 Bicyclerd Ltd Bicyclic peptide ligand drug conjugates
EP4274844A1 (en) 2021-01-08 2023-11-15 BicycleTx Limited Heterotandem bicyclic peptide complexes
JP2024502189A (ja) 2021-01-11 2024-01-17 バイシクルティーエクス・リミテッド 癌を処置する方法
CN115252813A (zh) * 2021-04-30 2022-11-01 江苏迈威康新药研发有限公司 靶向Nectin-4的抗体药物偶联物及其制备方法和用途
WO2022253051A1 (zh) * 2021-06-01 2022-12-08 南京明德新药研发有限公司 多肽偶联药物及其应用
IL310795A (en) 2021-09-03 2024-04-01 Bicycletx Ltd Synthesis of bicyclic toxin conjugates and their intermediates
CN118055772A (zh) * 2021-09-29 2024-05-17 星联肽(珠海)生物科技有限公司 三环多肽偶联药物及其应用
GB202114279D0 (en) * 2021-10-06 2021-11-17 Bicycletx Ltd Bicyclic peptide ligand drug conjugates
CN118201627A (zh) * 2021-10-19 2024-06-14 西藏海思科制药有限公司 Nectin-4的双环肽配体及其用途
CN114133434B (zh) * 2021-12-01 2022-11-15 北京大学第一医院 靶向Nectin-4的双环肽核素配体与探针
CN116768978A (zh) * 2022-03-11 2023-09-19 上海智肽生物科技有限公司 Nectin-4靶向肽化合物及其药物偶联物
CN115400141B (zh) * 2022-09-20 2023-08-11 天津医科大学总医院 Sting激动剂在制备治疗慢性瘙痒的药物中的应用

Family Cites Families (139)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2642514A (en) 1946-08-10 1953-06-16 American Cyanamid Co Ion exchange process with magnetic ion exchange resins
GB1239978A (en) 1968-07-15 1971-07-21 Permutt Company Ltd Ion-exchange processes
US5516931A (en) 1982-02-01 1996-05-14 Northeastern University Release tag compounds producing ketone signal groups
US4709016A (en) 1982-02-01 1987-11-24 Northeastern University Molecular analytical release tags and their use in chemical analysis
US5650270A (en) 1982-02-01 1997-07-22 Northeastern University Molecular analytical release tags and their use in chemical analysis
US4650750A (en) 1982-02-01 1987-03-17 Giese Roger W Method of chemical analysis employing molecular release tag compounds
US20020164788A1 (en) 1994-12-02 2002-11-07 The Wellcome Foundation Limited Humanized antibodies to CD38
ATE219517T1 (de) 1995-08-18 2002-07-15 Morphosys Ag Protein-/(poly)peptidbibliotheken
GB9819592D0 (en) 1998-09-08 1998-11-04 Smithkline Beecham Plc Novel compounds
US6326144B1 (en) 1998-09-18 2001-12-04 Massachusetts Institute Of Technology Biological applications of quantum dots
AU3468500A (en) 1998-09-24 2000-06-05 Advanced Research And Technology Institute, Inc. Water-soluble luminescent quantum dots and biomolecular conjugates thereof and related compositions and methods of use
US6927203B1 (en) 1999-08-17 2005-08-09 Purdue Research Foundation Treatment of metastatic disease
TR200400105T4 (tr) 1999-12-10 2004-02-23 Prizer Products Inc. Pirrolo [2,3-d] pirimidin bileşikleri
PE20020354A1 (es) 2000-09-01 2002-06-12 Novartis Ag Compuestos de hidroxamato como inhibidores de histona-desacetilasa (hda)
US7071189B2 (en) 2001-04-27 2006-07-04 Zenyaku Kogyo Kabushiki Kaisha Heterocyclic compound and antitumor agent containing the same as active ingredient
TWI329105B (en) 2002-02-01 2010-08-21 Rigel Pharmaceuticals Inc 2,4-pyrimidinediamine compounds and their uses
AU2003217606C1 (en) 2002-02-21 2008-07-17 Institute Of Virology Soluble Form of Carbonic Anhydrase IX (s-CA IX), Assays to Detect s-CA IX, CA IXs Coexpression with HER-2/neu/c-erbB-2 and CA IX-Specific Monoclonal Antibodies to Non-Immunodominant Epitopes
BRPI0313733A8 (pt) 2002-08-14 2016-08-16 Atugen Ag Uso da proteína n beta cinase
EP1452868A2 (en) 2003-02-27 2004-09-01 Pepscan Systems B.V. Method for selecting a candidate drug compound
AU2004228668B2 (en) 2003-04-03 2011-10-27 Park Funding, Llc PI-3 kinase inhibitor prodrugs
MXPA05012799A (es) 2003-05-30 2006-02-22 Gemin X Biotechnologies Inc Compuestos triheterociclicos, composiciones y metodos para tratar cancer o enfermedades virales.
WO2005007623A2 (en) 2003-07-03 2005-01-27 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Inhibition of syk kinase expression
RS54056B1 (en) 2004-02-06 2015-10-30 Morphosys Ag ANTI-CD38 HUMAN ANTIBODIES AND THEIR USES
US7151047B2 (en) 2004-04-28 2006-12-19 Warren Chan Stable, water-soluble quantum dot, method of preparation and conjugates thereof
EP1761540B1 (en) 2004-05-13 2016-09-28 Icos Corporation Quinazolinones as inhibitors of human phosphatidylinositol 3-kinase delta
TWI309240B (en) 2004-09-17 2009-05-01 Hoffmann La Roche Anti-ox40l antibodies
CA2591948C (en) 2005-01-19 2013-11-12 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Prodrugs of 2,4-pyrimidinediamine compounds and their uses
NZ560504A (en) 2005-01-24 2009-07-31 Pepscan Systems Bv Binding compounds, immunogenic compounds and peptidomimetics
EP2343320B1 (en) 2005-03-25 2017-10-25 GITR, Inc. Anti-gitr antibodies and uses thereof
TWI337608B (en) 2005-05-12 2011-02-21 Abbott Lab Apoptosis promoters
GB0510390D0 (en) 2005-05-20 2005-06-29 Novartis Ag Organic compounds
MX2007015942A (es) 2005-07-01 2008-03-07 Medarex Inc Anticuerpos monoclonales humanos para ligandos 1 (pd-l1) de muerte programada.
US7402325B2 (en) 2005-07-28 2008-07-22 Phoenix Biotechnology, Inc. Supercritical carbon dioxide extract of pharmacologically active components from Nerium oleander
KR101504994B1 (ko) 2005-10-07 2015-03-23 엑셀리시스, 인코포레이티드 포스파티딜이노시톨 3-키나아제 억제제 및 이의 사용 방법
EP1951684B1 (en) 2005-11-01 2016-07-13 TargeGen, Inc. Bi-aryl meta-pyrimidine inhibitors of kinases
ES2611588T3 (es) 2005-12-13 2017-05-09 Incyte Holdings Corporation Pirrolo[2,3-b]piridinas y pirrolo[2,3-b]pirimidinas sustituidas con heteroarilo como inhibidores de quinasas Janus
JO2660B1 (en) 2006-01-20 2012-06-17 نوفارتيس ايه جي Pi-3 inhibitors and methods of use
PT2024372E (pt) 2006-04-26 2010-09-16 Hoffmann La Roche Derivado de tieno[3,2-d]pirimidina útil como inibidor de pi3k
US7666392B2 (en) 2006-09-15 2010-02-23 Siemens Medical Solutions Usa, Inc. Click chemistry-derived cyclopeptide derivatives as imaging agents for integrins
CN102887900B (zh) 2006-09-22 2015-04-29 药品循环公司 布鲁顿酪氨酸激酶的抑制剂
KR101737753B1 (ko) 2007-03-12 2017-05-18 와이엠 바이오사이언시즈 오스트레일리아 피티와이 엘티디 페닐 아미노 피리미딘 화합물 및 이의 용도
WO2008118802A1 (en) 2007-03-23 2008-10-02 Regents Of The University Of Minnesota Therapeutic compounds
EP1987839A1 (en) 2007-04-30 2008-11-05 I.N.S.E.R.M. Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale Cytotoxic anti-LAG-3 monoclonal antibody and its use in the treatment or prevention of organ transplant rejection and autoimmune disease
PE20090717A1 (es) 2007-05-18 2009-07-18 Smithkline Beecham Corp Derivados de quinolina como inhibidores de la pi3 quinasa
KR20100056438A (ko) 2007-06-18 2010-05-27 메디뮨 엘엘씨 ＥｐｈＡ2 및 ＥｒｂＢ2를 발현하는 세포의 상승적 치료 방법
JP5932217B2 (ja) 2007-07-12 2016-06-08 ジーアイティーアール， インコーポレイテッド Ｇｉｔｒ結合分子を使用する併用療法
EP2044949A1 (en) 2007-10-05 2009-04-08 Immutep Use of recombinant lag-3 or the derivatives thereof for eliciting monocyte immune response
JP5583592B2 (ja) 2007-11-30 2014-09-03 ニューリンク ジェネティクス コーポレイション Ｉｄｏ阻害剤
CN102698276B (zh) 2008-01-03 2014-12-10 艾克斯-马赛大学 抗hiv治疗期间使用的组合物和方法
EP2653544A1 (en) 2008-02-05 2013-10-23 Bicycle Therapeutics Limited Methods and compositions
SG191660A1 (en) 2008-03-11 2013-07-31 Incyte Corp Azetidine and cyclobutane derivatives as jak inhibitors
US8338439B2 (en) 2008-06-27 2012-12-25 Celgene Avilomics Research, Inc. 2,4-disubstituted pyrimidines useful as kinase inhibitors
AR072999A1 (es) 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
HUE034832T2 (hu) 2008-12-09 2021-12-28 Hoffmann La Roche Anti-PD-L1 antitestek és alkalmazásuk T-sejt-funkció fokozására
GB0913775D0 (en) 2009-08-06 2009-09-16 Medical Res Council Multispecific peptides
GB0914110D0 (en) 2009-08-12 2009-09-16 Medical Res Council Peptide libraries
EP2473531A4 (en) 2009-09-03 2013-05-01 Merck Sharp & Dohme ANTI-GITRANT ANTIBODIES
WO2011056652A1 (en) 2009-10-28 2011-05-12 Newlink Genetics Imidazole derivatives as ido inhibitors
BR112012013717B1 (pt) 2009-12-10 2020-01-28 Hoffmann La Roche anticorpos de ligação ao csf-1r humano, composição farmacêutica e usos do anticorpo
EP2343081A1 (en) 2009-12-31 2011-07-13 Rijksuniversiteit Groningen Interferon analogs
JP2013518807A (ja) * 2010-02-04 2013-05-23 メディカル リサーチ カウンシル 多重特異性ペプチド
HUE045487T2 (hu) 2010-03-04 2019-12-30 Macrogenics Inc B7-H3-ra reaktív antitestek, immunológiailag aktív fragmenseik és alkalmazásaik
KR101656548B1 (ko) 2010-03-05 2016-09-09 에프. 호프만-라 로슈 아게 인간 ｃｓｆ-1ｒ에 대한 항체 및 이의 용도
KR101647871B1 (ko) 2010-03-05 2016-08-11 에프. 호프만-라 로슈 아게 인간 ｃｓｆ-1ｒ에 대한 항체 및 이의 용도
ES2706412T3 (es) 2010-05-04 2019-03-28 Five Prime Therapeutics Inc Anticuerpos que se unen a CSF1R
PL2614082T3 (pl) 2010-09-09 2019-02-28 Pfizer Inc. Cząsteczki wiążące 4-1BB
PL2621526T3 (pl) * 2010-09-29 2018-11-30 Agensys, Inc. Koniugaty leków i przeciwciał (adc), które wiążą białka 191p4d12
WO2012057624A1 (en) 2010-10-25 2012-05-03 Pepscan Systems B.V. Novel bicyclic peptide mimetics
DK2649086T3 (en) 2010-12-09 2017-09-18 Univ Pennsylvania USING CHEMICAL ANTIGEN RECEPTOR-MODIFIED T-CELLS TO TREAT CANCER
US20130072598A1 (en) 2011-03-18 2013-03-21 Board Of Regents Of The University Of Nebraska Thermoplastics from Distillers Dried Grains and Feathers
NO2694640T3 (zh) 2011-04-15 2018-03-17
MX338353B (es) 2011-04-20 2016-04-13 Medimmune Llc Anticuerpos y otras moleculas que se unen a b7 - h1 y pd - 1.
DK2764140T3 (en) 2011-10-07 2017-12-04 Bicyclerd Ltd MODULATION OF STRUCTURED POLYPEPTIME SPECIFICITY
GB201117428D0 (en) 2011-10-07 2011-11-23 Bicycle Therapeutics Ltd Structured polypeptides with sarcosine linkers
JP6138813B2 (ja) 2011-11-28 2017-05-31 メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツングＭｅｒｃｋ Ｐａｔｅｎｔ Ｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ｍｉｔ ｂｅｓｃｈｒａｅｎｋｔｅｒ Ｈａｆｔｕｎｇ 抗ｐｄ−ｌ１抗体及びその使用
WO2013087699A1 (en) 2011-12-15 2013-06-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies against human csf-1r and uses thereof
CA2861122A1 (en) 2012-02-06 2013-08-15 Genentech, Inc. Compositions and methods for using csf1r inhibitors
AR090263A1 (es) 2012-03-08 2014-10-29 Hoffmann La Roche Terapia combinada de anticuerpos contra el csf-1r humano y las utilizaciones de la misma
BR112014028013A2 (pt) 2012-05-11 2018-02-27 Five Prime Therapeutics Inc métodos para tratar uma condição associada com artrite reumatoide, artrite reumatoide, lesões de pele, nefrite lúpica, lúpus, uma condição inflamatória, distúrbio de cd16+, método para reduzir o número de monócitos cd16+, métodos para desacelerar a progressão de uma condição renal,de formação de panos e de perda óssea
UY34887A (es) 2012-07-02 2013-12-31 Bristol Myers Squibb Company Una Corporacion Del Estado De Delaware Optimización de anticuerpos que se fijan al gen de activación de linfocitos 3 (lag-3) y sus usos
CA2882804A1 (en) 2012-08-31 2014-03-06 Brian Wong Methods of treating conditions with antibodies that bind colony stimulating factor 1 receptor (csf1r)
KR101990341B1 (ko) 2013-03-12 2019-06-19 몰레큘러 템플레이츠, 인코퍼레이션. 세포 내재화를 유도하기 위한 ｃｄ20-결합 면역독소 및 이의 사용 방법
US20140274759A1 (en) * 2013-03-15 2014-09-18 Bicycle Therapeutics Limited Modification of polypeptides
GB201306623D0 (en) 2013-04-11 2013-05-29 Bicycle Therapeutics Ltd Modulation of structured polypeptide specificity
WO2014190257A2 (en) 2013-05-23 2014-11-27 Ohio State Innovation Foundation Chemical synthesis and screening of bicyclic peptide libraries
WO2015063465A2 (en) 2013-10-28 2015-05-07 Bicycle Therapeutics Limited Novel polypeptides
CN106415269B (zh) 2014-05-08 2020-11-27 贵州美鑫达医疗科技有限公司 直接免疫组织化学测定
HUE045872T2 (hu) 2014-05-21 2020-01-28 Entrada Therapeutics Inc Sejteket penetráló peptidek és ezek elõállítására és alkalmazására szolgáló eljárások
GB201416960D0 (en) 2014-09-25 2014-11-12 Antikor Biopharma Ltd Biological materials and uses thereof
AU2015340300B2 (en) 2014-10-29 2019-12-05 Bicyclerd Limited Bicyclic peptide ligands specific for MT1-MMP
WO2016171242A1 (ja) 2015-04-24 2016-10-27 第一三共株式会社 Ｅｐｈａ２の検出
MX2017013892A (es) * 2015-04-28 2018-06-06 Ecole Polytechnique Fed Lausanne Epfl Inhibidores novedosos del factor xii activado por la enzima (fxiia).
ES2794557T3 (es) * 2015-09-09 2020-11-18 Inst Nat Sante Rech Med Anticuerpos que tienen especificidad hacia nectina-4 y usos de los mismos
EP3429630A1 (en) 2016-03-16 2019-01-23 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Nanoliposomal targeting of ephrin receptor a2 (epha2) and related diagnosticss
MA45328A (fr) 2016-04-01 2019-02-06 Avidity Biosciences Llc Compositions acide nucléique-polypeptide et utilisations de celles-ci
WO2017182672A1 (en) * 2016-04-22 2017-10-26 Alligator Bioscience Ab Novel bispecific polypeptides against cd137
GB201607827D0 (en) 2016-05-04 2016-06-15 Bicycle Therapeutics Ltd Bicyclic peptide-toxin conjugates specific for MT1-MMP
WO2018096365A1 (en) 2016-11-27 2018-05-31 Bicyclerd Limited Methods for treating cancer
US11730819B2 (en) 2016-12-23 2023-08-22 Bicycletx Limited Peptide derivatives having novel linkage structures
KR20230042153A (ko) 2016-12-23 2023-03-27 바이사이클티엑스 리미티드 Ｍｔ１－ｍｍｐ에 대한 결합용 펩티드 리간드
WO2018127699A1 (en) 2017-01-06 2018-07-12 Bicyclerd Limited Compounds for treating cancer
US11459394B2 (en) 2017-02-24 2022-10-04 Macrogenics, Inc. Bispecific binding molecules that are capable of binding CD137 and tumor antigens, and uses thereof
GB201706477D0 (en) 2017-04-24 2017-06-07 Bicycle Therapeutics Ltd Modification of polypeptides
US10857196B2 (en) 2017-04-27 2020-12-08 Bicycletx Limited Bicyclic peptide ligands and uses thereof
JP7301757B2 (ja) 2017-06-26 2023-07-03 バイスクルアールディー・リミテッド 検出可能部分を持つ二環式ペプチドリガンドおよびその使用
EP3661948B1 (en) 2017-08-04 2022-06-01 BicycleTx Limited Bicyclic peptide ligands specific for cd137
US20200291096A1 (en) 2017-08-14 2020-09-17 Bicyclerd Limited Bicyclic peptide ligand sting conjugates and uses thereof
EP3668550A1 (en) 2017-08-14 2020-06-24 Bicyclerd Limited Bicyclic peptide ligand prr-a conjugates and uses thereof
TWI825046B (zh) 2017-12-19 2023-12-11 英商拜西可泰克斯有限公司 Epha2特用之雙環胜肽配位基
GB201721265D0 (en) 2017-12-19 2018-01-31 Bicyclerd Ltd Bicyclic peptide ligands specific for EphA2
WO2019136442A1 (en) 2018-01-08 2019-07-11 Kleo Pharmaceuticals, Inc. Cd16a binding agents and uses thereof
BR112020014576A2 (pt) 2018-02-23 2020-12-08 Bicycletx Limited Ligantes peptídicos bicíclicos multiméricos
US11453703B2 (en) 2018-04-04 2022-09-27 Bicycletx Limited Heterotandem bicyclic peptide complexes
CA3099308A1 (en) 2018-05-21 2019-11-28 Compass Therapeutics Llc Compositions and methods for enhancing the killing of target cells by nk cells
US11180531B2 (en) * 2018-06-22 2021-11-23 Bicycletx Limited Bicyclic peptide ligands specific for Nectin-4
GB201810316D0 (en) 2018-06-22 2018-08-08 Bicyclerd Ltd Peptide ligands for binding to EphA2
US10919937B2 (en) 2018-10-23 2021-02-16 Bicycletx Limited Bicyclic peptide ligands and uses thereof
CA3116504A1 (en) 2018-10-30 2020-05-07 Bicyclerd Limited Bt1718 for use in treating cancer
CN113507962A (zh) 2018-12-13 2021-10-15 拜斯科技术开发有限公司 Mt1-mmp特异性的双环肽配体
CA3120800A1 (en) 2018-12-17 2020-06-25 Revitope Limited Twin immune cell engager
US20220306689A9 (en) 2018-12-21 2022-09-29 Bicycletx Limited Bicyclic peptide ligands specific for pd-l1
US10882987B2 (en) 2019-01-09 2021-01-05 Nova Chemicals (International) S.A. Ethylene interpolymer products having intermediate branching
WO2020178574A1 (en) 2019-03-04 2020-09-10 Bicyclerd Limited Synthesis of bicycle toxin conjugates, and intermediates thereof
SG11202110828UA (en) 2019-04-02 2021-10-28 Bicycletx Ltd Bicycle toxin conjugates and uses thereof
KR20220007098A (ko) 2019-05-09 2022-01-18 바이사이클티엑스 리미티드 Ox40에 특이적인 이환식 펩티드 리간드
TW202108165A (zh) 2019-05-10 2021-03-01 英商拜西克爾德有限公司 治療癌症之方法
TW202110485A (zh) 2019-07-30 2021-03-16 英商拜西可泰克斯有限公司 異質雙環肽複合物
JP2022544246A (ja) 2019-08-13 2022-10-17 バイスクルテクス・リミテッド 修飾された多量体二環式ペプチドリガンド
US11332500B2 (en) 2019-10-03 2022-05-17 Bicycletx Limited Heterotandem bicyclic peptide complexes
GB201914872D0 (en) 2019-10-15 2019-11-27 Bicycletx Ltd Bicyclic peptide ligand drug conjugates
US20220387611A1 (en) 2019-10-16 2022-12-08 Bicyclerd Limited Methods for treating cancer
IL293200A (en) 2019-11-27 2022-07-01 Bicycletx Ltd Bicyclic peptide ligands specific for epha2 and their use
CA3179152A1 (en) 2020-05-20 2021-11-25 Amy Katherine DICKSON Bicyclic peptide ligands specific for nectin-4 and uses thereof
CN115698720A (zh) 2020-06-12 2023-02-03 拜斯科技术开发有限公司 特征在于促红细胞生成素产生肝细胞受体a2(epha2)的过表达的疾病的治疗
CA3186504A1 (en) 2020-08-17 2022-02-24 Stephen J. Blakemore Bicycle conjugates specific for nectin-4 and uses thereof
EP4274844A1 (en) 2021-01-08 2023-11-15 BicycleTx Limited Heterotandem bicyclic peptide complexes
JP2024502189A (ja) 2021-01-11 2024-01-17 バイシクルティーエクス・リミテッド 癌を処置する方法
IL310795A (en) 2021-09-03 2024-04-01 Bicycletx Ltd Synthesis of bicyclic toxin conjugates and their intermediates
CA3237681A1 (en) 2021-11-16 2023-05-25 Shawn Watson Methods for treating cancer

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