JP2019512272A - 多重特異性および多機能性分子ならびにその使用 - Google Patents
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Abstract
Description
(i)癌抗原に結合する腫瘍標的化部分、例えば第1の腫瘍標的化部分と;
(ii)NK細胞エンゲージャ、T細胞エンゲージャ、B細胞エンゲージャ、樹枝状細胞エンゲージャまたはマクロファージ細胞エンゲージャから選択される免疫細胞エンゲージャ;
(iii)サイトカイン分子;および
(iv)間質調節部分
の1つ、2つまたは全てと
を含む多重特異性または多重特異性分子(例えば、ポリペプチドまたはそれをコードする核酸)を特徴とする。
(ii)および(iii)が存在しない場合、(i)および(iv)が存在し、
1つの(i)および1つの(ii)が存在する場合、(iii)もしくは(iv)または両方が存在し、または
1つの(i)および1つの(iii)が存在する場合、(ii)もしくは(iv)または両方が存在する。
(i)1つまたは複数の癌抗原に結合する少なくとも2つの腫瘍標的化部分、例えば第1および第2の腫瘍標的化部分と;
(ii)NK細胞エンゲージャ、T細胞エンゲージャ、B細胞エンゲージャ、樹枝状細胞エンゲージャまたはマクロファージ細胞エンゲージャから選択される免疫細胞エンゲージャ;
(iii)間質調節部分;および
(iv)例えば、少なくとも2つの非隣接ポリペプチドを含むサイトカイン分子(例えば、多連鎖サイトカイン)
の1つ、2つまたは全てと
を含む多重特異性または多機能性分子ポリペプチドが本明細書において提供される。ある実施形態において、サイトカイン分子は、2つの鎖、例えばαおよびβ鎖(例えば、IL−12)を含む。
A、B−[二量体化モジュール]−C、−D
(式中、
(1)二量体化モジュールは、免疫グロブリン定常ドメイン、例えば重鎖定常ドメイン(例えば、ホモ二量体またはヘテロ二量体重鎖定常領域、例えばFc領域)、または免疫グロブリン可変領域の定常ドメイン(例えば、Fab領域)を含み;および
(2)A、B、CおよびDは、独立して、存在しないか;(i)腫瘍標的化部分、例えば第1および/もしくは第2の腫瘍標的化部分;(ii)NK細胞エンゲージャ、T細胞エンゲージャ、B細胞エンゲージャ、樹枝状細胞エンゲージャもしくはマクロファージ細胞エンゲージャから選択される免疫細胞エンゲージャ;(iii)サイトカイン分子または(iv)間質調節部分である)
を含む多重特異性または多機能性分子ポリペプチドが本明細書において提供される。
(i)癌抗原に結合する腫瘍標的化部分、例えば第1の腫瘍標的化部分と;
(ii)NK細胞エンゲージャ、T細胞エンゲージャ、B細胞エンゲージャ、樹枝状細胞エンゲージャまたはマクロファージ細胞エンゲージャから選択される免疫細胞エンゲージャ;
(iii)サイトカイン分子;および
(iv)間質調節部分
の1つ、2つまたは全てとを含む。ある実施形態において、
(ii)および(iii)が存在しない場合、(i)および(iv)は、存在し、
1つの(i)および1つの(ii)が存在する場合、(iii)もしくは(iv)または両方は、存在し、または
1つの(i)および1つの(iii)が存在する場合、(ii)もしくは(iv)または両方は、存在する。
(i)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、Cは、第1の免疫細胞エンゲージャを含み、かつDは、第2の免疫細胞エンゲージャを含み(例えば、AおよびBは、同じかまたは異なる標的化部分を含み、かつCおよびDは、同じかまたは異なる免疫細胞エンゲージャを含み);
(ii)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、Cは、第1のサイトカイン分子を含み、かつDは、第2のサイトカイン分子を含み(例えば、AおよびBは、同じかまたは異なる標的化部分を含み、かつCおよびDは、同じかまたは異なるサイトカイン分子を含み);
(iii)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、Cは、第1の間質調節部分を含み、かつDは、第2の間質調節部分を含み(例えば、AおよびBは、同じかまたは異なる標的化部分を含み、かつCおよびDは、同じかまたは異なる間質調節部分を含み);
(iv)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、Cは、免疫細胞エンゲージャを含み、かつDは、サイトカイン分子を含み(例えば、AおよびBは、同じかまたは異なる標的化部分を含み);
(v)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、Cは、サイトカイン分子を含み、かつDは、免疫細胞エンゲージャを含み(例えば、AおよびBは、同じかまたは異なる標的化部分を含み);
(vi)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、Cは、免疫細胞エンゲージャを含み、かつDは、間質調節部分を含み(例えば、AおよびBは、同じかまたは異なる標的化部分を含み);
(vii)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、Cは、間質調節部分を含み、かつDは、免疫細胞エンゲージャを含み(例えば、AおよびBは、同じかまたは異なる標的化部分を含み);
(viii)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、Cは、サイトカイン分子を含み、かつDは、間質調節部分を含み(例えば、AおよびBは、同じかまたは異なる標的化部分を含み);
(ix)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、Cは、間質調節部分を含み、かつDは、サイトカイン分子を含み(例えば、AおよびBは、同じかまたは異なる標的化部分を含み);
(x)Aは、腫瘍標的化部分を含み、かつB、CおよびDの少なくとも1つ、2つまたは3つは、第2の腫瘍標的化部分、免疫細胞エンゲージャ、サイトカイン分子、間質調節部分を含むかまたは存在せず、ただし、(ii)および(iii)が存在しない場合、(i)および(iv)は、存在し;
(xi)Bは、腫瘍標的化部分を含み、かつA、CおよびDの少なくとも1つ、2つまたは3つは、第2の腫瘍標的化部分、免疫細胞エンゲージャ、サイトカイン分子、間質調節部分を含むかまたは存在せず、ただし、(ii)および(iii)が存在しない場合、(i)および(iv)は、存在し;
(xii)Cは、腫瘍標的化部分を含み、かつA、BおよびDの少なくとも1つ、2つまたは3つは、第2の腫瘍標的化部分、免疫細胞エンゲージャ、サイトカイン分子、間質調節部分を含むかまたは存在せず、ただし、(ii)および(iii)が存在しない場合、(i)および(iv)は、存在し;
(xiii)Dは、腫瘍標的化部分を含み、かつA、BおよびCの少なくとも1つ、2つまたは3つは、第2の腫瘍標的化部分、免疫細胞エンゲージャ、サイトカイン分子、間質調節部分を含むかまたは存在せず、ただし、(ii)および(iii)が存在しない場合、(i)および(iv)は、存在し;
(xiv)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、CおよびDは、それぞれ免疫細胞エンゲージャおよび非存在であり;
(xv)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、CおよびDは、それぞれ非存在および免疫細胞エンゲージャであり;
(xvi)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、CおよびDは、それぞれサイトカイン分子および非存在であり;
(xvii)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、CおよびDは、それぞれ非存在およびサイトカイン分子であり;
(xviii)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、CおよびDは、それぞれ間質調節部分および非存在であり;
(xix)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、CおよびDは、それぞれ非存在および間質調節部分であり;
(xx)Aは、腫瘍標的化部分を含み、かつB、CまたはDの1つは、間質調節部分を含み;
(xxi)Bは、腫瘍標的化部分を含み、かつA、CまたはDの1つは、間質調節部分を含み;
(xxii)Cは、腫瘍標的化部分を含み、かつA、BまたはDの1つは、間質調節部分を含み;
(xxiii)Dは、腫瘍標的化部分を含み、かつA、BまたはCの1つは、間質調節部分を含み;
(xiv)AまたはBは、腫瘍標的化部分を含み、かつCは、免疫細胞エンゲージャを含み、かつDは、サイトカイン分子を含み;
(xv)AまたはBは、腫瘍標的化部分を含み、かつDは、免疫細胞エンゲージャを含み、かつCは、サイトカイン分子を含み;
(xvi)Aおよび/またはBは、1つまたは2つの免疫細胞エンゲージャを含み、かつDは、腫瘍標的化部分を含み、かつCは、サイトカイン分子を含み;
(xvii)Aおよび/またはBは、1つまたは2つの免疫細胞エンゲージャを含み、かつCは、腫瘍標的化部分を含み、かつBは、サイトカイン分子を含み;
(xviii)Aおよび/またはBは、1つまたは2つのサイトカインを含み、かつDは、腫瘍標的化部分を含み、かつCは、免疫細胞エンゲージャを含み;または
(xix)Aおよび/またはBは、1つまたは2つのサイトカインを含み、かつCは、腫瘍標的化部分を含み、かつDは、免疫細胞エンゲージャを含む。
(i)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、Cは、免疫細胞エンゲージャ(例えば、樹枝状細胞エンゲージャ)を含み、かつDは、サイトカイン分子を含み(例えば、AおよびBは、同じかまたは異なる標的化部分を含み);
(ii)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、Cは、サイトカイン分子を含み、かつDは、免疫細胞エンゲージャを含み(例えば、AおよびBは、同じかまたは異なる標的化部分を含み);
(iii)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、CおよびDは、それぞれ免疫細胞エンゲージャおよび非存在であり;
(iv)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、CおよびDは、それぞれ非存在および免疫細胞エンゲージャ、例えばT細胞エンゲージャであり;
(v)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、CおよびDは、それぞれサイトカイン分子および非存在であり;
(vi)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、CおよびDは、それぞれ非存在およびサイトカイン分子であり;
(vii)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、CおよびDは、それぞれ間質調節部分および非存在であり;
(viii)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、CおよびDは、それぞれ非存在および間質調節部分であり;または
(ix)Aは、腫瘍標的化部分を含み、かつB、CまたはDの1つは、間質調節部分を含む。
(i)配列番号61の36−464のアミノ酸配列;
(ii)配列番号61に記載されるアミノ酸の配列を有するPH20の36−481、36−482または36−483のアミノ酸配列;または
(iii)配列番号61に記載されるアミノ酸の配列のポリペプチドまたは切断型に対する少なくとも95%〜100%の配列同一性を有するアミノ酸配列;または
(iv)配列番号61に記載されるアミノ酸配列に対する30、20、10、5個またはそれよりも少ないアミノ酸置換を有するアミノ酸配列
を含む。
(i)第1のポリペプチドは、例えば、NからCの配向で、任意選択的にリンカーを介して、サイトカイン分子、間質調節部分または免疫細胞エンゲージャに連結される、例えば癌抗原、例えば固形腫瘍、間質または血液抗原に結合する腫瘍標的化部分、例えば抗体分子(例えば、第1の抗原ドメインの第1の部分、例えばFab分子の第1のVH−CH1)、例えば抗体分子、例えば免疫細胞抗原に結合するscFvを含み;および
(ii)第2のポリペプチドは、例えば、NからCの配向で、例えば癌抗原、例えば固形腫瘍、間質または血液抗原(例えば、第1のVH−CH1によって結合される同じ腫瘍または間質抗原)に結合する第1の抗原ドメインの第2の部分、例えばFabの第1のVL−CLを含む。
(i)第1のポリペプチドは、例えば、NからCの配向で、任意選択的にリンカーを介して、第1および第2のポリペプチド間の結合を促進する第1のドメイン(例えば、第1の免疫グロブリン定常ドメイン(例えば、本明細書に記載される第1のFc分子)に連結される、例えば癌抗原、例えば固形腫瘍、間質または血液抗原に結合する腫瘍標的化部分、例えば抗体分子(例えば、第1の抗原ドメインの第1の部分、例えばFab分子の第1のVH−CH1)を含み;
(ii)第2のポリペプチドは、例えば、NからCの配向で、任意選択的にリンカーを介して、第1および第2のポリペプチド間の結合を促進する第2のドメイン(例えば、第2の免疫グロブリン定常ドメイン(例えば、本明細書に記載される第2のFc分子)に連結されるサイトカイン分子、間質調節部分または免疫細胞エンゲージャ(例えば、抗体分子、例えば免疫細胞抗原に結合するscFv)を含み;および
(iii)第3のポリペプチドは、例えば、NからCの配向で、癌抗原に結合する第1の抗原ドメインの第2の部分、例えばFabの第1のVL−CLを含む。
(i)第1のポリペプチドは、例えば、NからCの配向で、任意選択的にリンカーを介して、第1および第2のポリペプチド間の結合を促進する第1のドメイン(例えば、第1の免疫グロブリン定常ドメイン(例えば、本明細書に記載される第1のFc分子)に連結される、例えば癌抗原に結合する腫瘍標的化部分、例えば抗体分子(例えば、第1の抗原ドメインの第1の部分、例えばFab分子の第1のVH−CH1)を含み;
(ii)第2のポリペプチドは、例えば、NからCの配向で、任意選択的にリンカーを介して、第1および第2のポリペプチド間の結合を促進する第2のドメイン(例えば、第2の免疫グロブリン定常ドメイン(例えば、本明細書に記載される第2のFc分子)に連結されるサイトカイン分子、間質調節部分または免疫細胞エンゲージャ(例えば、抗体分子、例えば免疫細胞抗原に結合するscFv)を含み;および
(iii)第3のポリペプチドは、例えば、NからCの配向で、癌抗原に結合する第1の抗原ドメインの第2の部分、例えばFabの第1のVL−CLを含み、
第1または第2のポリペプチドのいずれかは、第1または第2の免疫グロブリン定常ドメインのC末端に任意選択的に共有結合されるサイトカイン分子または免疫細胞エンゲージャをさらに含む。
(i)第1のポリペプチドは、例えば、NからCの配向で、任意選択的にリンカーを介して、第1および第2のポリペプチド間の結合を促進する第1のドメイン(例えば、第1の免疫グロブリン定常ドメイン(例えば、本明細書に記載される第1のFc分子)に連結される、例えば癌抗原に結合する腫瘍標的化部分、例えば抗体分子(例えば、第1の抗原ドメインの第1の部分、例えばFab分子の第1のVH−CH1)を含み;
(ii)第2のポリペプチドは、例えば、NからCの配向で、任意選択的にリンカーを介して、第1および第2のポリペプチド間の結合を促進する第2のドメイン(例えば、第2の免疫グロブリン定常ドメイン(例えば、本明細書に記載される第2のFc分子)に連結されるサイトカイン分子、間質調節部分または免疫細胞エンゲージャ(例えば、抗体分子、例えば免疫細胞抗原に結合するscFv)を含み;および
(iii)第3のポリペプチドは、例えば、NからCの配向で、癌抗原に結合する第1の抗原ドメインの第2の部分、例えばFabの第1のVL−CLを含み、
第1および第2のポリペプチドは、第1または第2の免疫グロブリン定常ドメインのC末端に任意選択的に共有結合されるサイトカイン分子および/または免疫細胞エンゲージャをさらに含む。
腫瘍標的化部分;2つの免疫細胞エンゲージャおよびサイトカイン分子または間質調節部分;または
2つの腫瘍標的化部分;免疫細胞エンゲージャおよびサイトカイン分子または間質調節部分
を含む。
i)第1のポリペプチドは、例えば、N−CまたはC−N方向に、腫瘍標的化部分;第1および第2のポリペプチドの結合を促進するドメイン、例えばFc分子ならびに免疫細胞エンゲージャを含むこと;
ii)第1のポリペプチドは、例えば、N−CまたはC−N方向に、腫瘍標的化部分;第1および第2のポリペプチドの結合を促進するドメイン、例えばFc分子ならびにサイトカイン分子または間質調節部分を含むこと;または
iii)第1のポリペプチドは、例えば、N−CまたはC−N方向に、サイトカイン;第1および第2のポリペプチドの結合を促進するドメイン、例えばFc分子ならびに免疫細胞エンゲージャを含むこと;
iv)第2のポリペプチドは、例えば、N−CまたはC−N方向に、腫瘍標的化部分;第1および第2のポリペプチドの結合を促進するドメイン、例えばFc分子ならびに免疫細胞エンゲージャを含むこと;
ii)第2のポリペプチドは、例えば、N−CまたはC−N方向に、腫瘍標的化部分;第1および第2のポリペプチドの結合を促進するドメイン、例えばFc分子ならびにサイトカイン分子または間質調節部分を含むこと;または
iii)第2のポリペプチドは、例えば、N−CまたはC−N方向に、サイトカイン;第1および第2のポリペプチドの結合を促進するドメイン、例えばFc分子ならびに免疫細胞エンゲージャを含むこと
を含む。
(ia)PDL1、メソテリン、HER3、IGF−1R、GD2、PMSA、CEA、Ronキナーゼもしくはc−Metから選択される固形腫瘍抗原に対する抗体分子;および/または
(ib)FAP、ヒアルロン酸、コラーゲンIV、テネイシンCもしくはテネイシンWから選択される間質抗原に対する抗体分子;あるいは
固形腫瘍抗原に対する抗体分子と、間質抗原に対する抗体分子との組合せと;
(ii)
(iia)CD40LもしくはCD70リガンド;CD40もしくはCD70に結合する抗体分子;OX40に対する抗体分子;OX40L;B7−H6またはSTINGアゴニストあるいはその組合せの1つ、2つ、3つまたは全てから選択される免疫細胞エンゲージャ;
(iib)IL−2、IL−12、IL−15、IL−18もしくはIL−21、その断片もしくは変異体または上記のサイトカイン分子のいずれかの組合せから選択されるサイトカイン分子;
(iic)ヒアルロニダーゼまたはゼラチナーゼから選択される間質調節部分
の1つ、2つまたは全てと
を含む。
ある実施形態において、多重特異性分子は、腫瘍標的化部分を含む。本明細書において使用される際の「腫瘍標的化部分」は、癌細胞中の標的を認識し、またはそれと関連する、例えばそれに結合する結合剤を指す。腫瘍標的化部分は、癌抗原(例えば、腫瘍および/または間質抗原)に結合する抗体分子、受容体分子(例えば、完全長受容体、受容体断片、またはその融合(例えば、受容体−Fc融合))、またはリガンド分子(例えば、完全長リガンド、リガンド断片、またはその融合(例えば、リガンド−Fc融合))であり得る。実施形態において、腫瘍標的化部分は、標的腫瘍に特異的に結合し、例えば標的腫瘍に選択的に結合する。例えば、腫瘍標的化部分が抗体分子である場合、それは、約10nM未満、より典型的には10〜100pMの解離定数で癌抗原(例えば、腫瘍抗原および/または間質抗原)に結合する。
一実施形態において、抗体分子は、癌抗原、例えば腫瘍抗原または間質抗原に結合する。ある実施形態において、癌抗原は、例えば、哺乳動物、例えばヒト癌抗原である。他の実施形態において、抗体分子は、免疫細胞抗原、例えば哺乳動物、例えばヒト免疫細胞抗原に結合する。例えば、抗体分子は、エピトープ、例えば癌抗原または免疫細胞抗原上の線形または立体構造エピトープに特異的に結合する。
本明細書に定義される多重特異性および多機能性分子の例示的な構造が全体を通して記載されている。例示的な構造は、Weidle U et al.(2013)The Intriguing Options of Multispecific Antibody Formats for Treatment of Cancer.Cancer Genomics&Proteomics 10:1−18(2013);およびSpiess C et al.(2015)Alternative molecular formats and therapeutic applications for bispecific antibodies.Molecular Immunology 67:95−106(これらのそれぞれの全内容が参照により本明細書に援用される)にさらに記載されている。
実施形態において、抗体分子は、CDR移植足場ドメインである。実施形態において、足場ドメインは、フィブロネクチンドメイン、例えばフィブロネクチンIII型ドメインに基づいている。フィブロネクチンIII型(Fn3)ドメインの全体的な折り畳みは、最小機能抗体断片、抗体重鎖の可変ドメインのものと密接に関連している。Fn3の末端に3つのループがあり;BC、DEおよびFGループの位置は、抗体のVHドメインのCDR1、2および3の位置にほぼ相当する。Fn3は、ジスルフィド結合を有さず;したがって、Fn3は、抗体およびそれらの断片と異なり、還元条件下で安定している(例えば、国際公開第98/56915号パンフレット;国際公開第01/64942号パンフレット;国際公開第00/34784号パンフレットを参照)。Fn3ドメインは、例えば、本明細書に記載される抗原/マーカー/細胞に結合するドメインを選択するように、(例えば、本明細書に記載されるCDRまたは高度可変ループを用いて)修飾または変異され得る。
抗体のNまたはC末端に結合されるさらなる結合実体を含有する様々なフォーマットが生成され得る。一本鎖またはジスルフィド安定化FvまたはFabとのこれらの融合は、各抗原に対する二価結合特異性を有する四価分子の生成をもたらす。scFvおよびscFabと、IgGとの組合せは、3つ以上の異なる抗原を認識し得る分子の生成を可能にする。
抗体−Fab融合は、第1の標的に対する従来の抗体、および抗体重鎖のC末端に融合された第2の標的に対するFabを含む二重特異性抗体である。一般的に、この抗体およびFabは、共通の軽鎖を有するであろう。抗体融合は、(1)標的融合のDNA配列を操作し、(2)融合タンパク質を発現するように、標的DNAを好適な宿主細胞へとトランスフェクトすることによって生成され得る。抗体−scFv融合は、Coloma,J.et al.(1997)Nature Biotech 15:159によって記載されているように、CH3ドメインのC末端とscFvのN末端との間の(Gly)−Serリンカーによって連結され得るようである。
抗体−scFv融合は、従来の抗体、および抗体重鎖のC末端に融合された独自の特異性のscFvを含む二重特異性抗体である。scFvは、直接またはリンカーペプチドを介して、scFvの重鎖を介してC末端に融合され得る。抗体融合は、(1)標的融合のDNA配列を操作し、(2)融合タンパク質を発現するように、標的DNAを好適な宿主細胞へとトランスフェクトすることによって生成され得る。抗体−scFv融合は、Coloma,J.et al.(1997)Nature Biotech 15:159によって記載されているように、CH3ドメインのC末端とscFvのN末端との間の(Gly)−Serリンカーによって連結され得るようである。
関連するフォーマットは、短鎖リンカー配列によってVドメインのN末端に配置される、第2の特異性のVHおよびVLドメインから構成される二重可変ドメイン免疫グロブリン(DVD)である。
ミニ抗体としても知られているFc含有実体は、scFvを、定常重鎖領域ドメイン3(CH3−scFv)のC末端に、および/または異なる特異性を有する抗体のヒンジ領域(scFv−ヒンジ−Fc)に融合することによって生成され得る。IgGのCH3ドメインのC末端に融合されたジスルフィド安定化可変ドメイン(ペプチドリンカーを用いない)を有する三価実体も作製され得る。
ある実施形態において、本明細書に開示される多重特異性分子は、免疫グロブリン定常領域(例えば、Fc領域)を含む。例示的なFc領域は、IgG1、IgG2、IgG3またはIgG4の重鎖定常領域;より特定的にヒトIgG1、IgG2、IgG3、またはIgG4の重鎖定常領域から選択され得る。
不適切な重鎖対合の問題に対処するように、多重特異性抗体を産生する様々な方法が開示されている。例示的な方法が後述される。例示的な多重特異性抗体フォーマットおよび前記多重特異性抗体を作製する方法はまた、例えば、Speiss et al.Molecular Immunology 67(2015)95−106;およびKlein et al mAbs 4:6,653−663;2012年11月/12月(これらのそれぞれの全内容が参照により本明細書に援用される)に開示されている。
米国特許第5,731,116号明細書、米国特許第7,476,724号明細書およびRidgway,J.et al.(1996)Prot.Engineering 9(7):617−621に記載されるノブ・イン・ホールは、概して、(1)ヘテロ二量体化を促進するように一方または両方の抗体のCH3ドメインを変異させ;(2)ヘテロ二量体化を促進する条件下で変異された抗体を組み合わせることを含む。「ノブ」または「突起」は、典型的に、親抗体中の小さいアミノ酸をより大きいアミノ酸(例えば、T366YまたはT366W)で置換することによって作成され;「ホール」または「空洞」は、親抗体中のより大きい残基をより小さいアミノ酸(例えば、Y407T、T366S、L368Aおよび/またはY407V)で置換することによって作成される。
鎖交換操作ドメイン(SEED)C(H)3ヘテロ二量体を考案することにより、二重特異性および非対称融合タンパク質を支持するヘテロ二量体Fcプラットフォームが公知である。ヒトIgGおよびIgA C(H)3ドメインのこれらの誘導体は、ヒトIgAおよびIgG C(H)3配列の交互のセグメントから構成される相補的ヒトSEED C(H)3ヘテロ二量体を生成する。SEED C(H)3ドメインの得られる対は、哺乳類細胞内で発現されるとき、ヘテロ二量体を形成するように優先的に結合する。SEEDボディ(Sb)融合タンパク質は、1つまたは複数の融合パートナーと遺伝的に連鎖し得る[IgG1ヒンジ]−C(H)2−[SEED C(H)3]からなる(例えば、Davis JH et al.SEEDbodies:fusion proteins based on strand exchange engineered domain(SEED)CH3 heterodimers in an Fc analogue platform for asymmetric binders or immunofusions and bispecific antibodies.Protein Eng Des Sel 2010;23:195−202;PMID:20299542および米国特許第8871912号明細書(これらのそれぞれの内容が参照により本明細書に援用される)を参照)。
適切な重鎖対合を有する二重特異性抗体を産生するための「デュオボディ」技術が公知である。デュオボディ技術は、産生後(post−production)交換反応において安定した二重特異性ヒトIgG1抗体を産生するための3つの基本的工程を含む。第1の工程において、第3の定常(CH3)ドメイン中に単一の適合した変異をそれぞれ含む2つのIgG1が標準的な哺乳動物組み換え細胞株を用いて別々に産生される。その後、これらのIgG1抗体は、回収および精製のための標準的なプロセスに従って精製される。産生および精製(産生後)後、2つの抗体は、調整された実験室条件下で再結合されて、非常に高い収率(典型的に>95%)で二重特異性抗体産物をもたらす(例えば、Labrijn et al,PNAS 2013;110(13):5145−5150およびLabrijn et al.Nature Protocols 2014;9(10):2450−63(これらのそれぞれの内容が参照により本明細書に援用される)を参照)。
ホモ二量体の形成が静電的に不利であるように、荷電アミノ酸によるCH3アミノ酸交換を用いて多重特異性抗体を作製する方法が開示されている。欧州特許第1870459号明細書および国際公開第2009089004号パンフレットには、宿主細胞内の異なる抗体ドメインの共発現時にヘテロ二量体の形成に有利に機能する他の手法が記載されている。これらの方法において、両方のCH3ドメインにおけるCH3−CH3境界部である、重鎖定常ドメイン3(CH3)を構成する1つまたは複数の残基が荷電アミノ酸で置き換えられて、ホモ二量体の形成が静電的に不利であり、ヘテロ二量体化が静電的に有利であるようにする。静電相互作用を用いて多重特異性分子を作製するさらなる方法が、米国特許出願公開第20100015133号明細書、米国特許第8592562B2号明細書、米国特許第9200060B2号明細書、米国特許出願公開第20140154254A1号明細書、および米国特許第9358286A1号明細書を含む参考文献(これらのそれぞれの内容が参照により本明細書に援用される)に記載されている。
軽鎖の誤対合は、二重特異性IgGの均質な調製物を生成することを避ける必要がある。これを行うための1つの方法は、共通の軽鎖の原理の使用、すなわち1つの軽鎖を共有するが、別の特異性を依然として有する2つの結合剤を組み合わせることによる。モノマーの混合物からの所望の二重特異性抗体の形成を促進する例示的な方法は、二重特異性抗体の異種可変重鎖領域のそれぞれと相互作用する共通の可変軽鎖を提供することによる。例えば、米国特許第7183076B2号明細書、米国特許出願公開第20110177073A1号明細書、欧州特許出願公開第2847231A1号明細書、国際公開第2016079081A1号パンフレット、および欧州特許出願公開第3055329A1号明細書(これらのそれぞれの内容が参照により本明細書に援用される)に開示されるような、共通の軽鎖を有する二重特異性抗体を産生する組成物および方法である。
軽鎖の誤対合を減少させるための別の選択肢は、二重特異性抗体の半分のFab中のCH1およびCLドメインを交換することにより、非特異的なL鎖の誤対合を避けるCrossMab技術である。このようなクロスオーバー変異体は、結合特異性および親和性を保持するが、L鎖の誤対合が防がれるほど2つのアームを異ならせる。CrossMab技術(上記のKlein et al.に概説されるように)は、適切な対合の形成を促進するように、重鎖と軽鎖との間のドメイン交換を含む。簡潔には、2つの異なる軽鎖−重鎖対を用いることによって2つの抗原に結合し得る二重特異性IgG様CrossMab抗体を構築するために、2工程の修飾プロセスが適用される。まず、二量体化の境界部が、ヘテロ二量体化手法、例えばノブ・イントゥ・ホール(KiH)技術を用いて各重鎖のC末端へと操作されて、1つの抗体(例えば、抗体A)および第2の抗体(例えば、抗体B)からの2つの異なる重鎖のヘテロ二量体のみが確実に効率的に形成される。次に、1つの抗体の定常重鎖1(CH1)および定常軽鎖(CL)ドメインが交換されて(抗体A)、可変重鎖(VH)および可変軽鎖(VL)ドメインを不変に保つ。CH1およびCLドメインの交換は、修飾抗体(抗体A)軽鎖が修飾抗体(抗体A)重鎖とのみ効率的に二量体化し得る一方、非修飾抗体(抗体B)軽鎖が非修飾抗体(抗体B)重鎖とのみ効率的に二量体化し得ることを確実にし;したがって、所望の二重特異性CrossMabのみが効率的に形成されるであろう(例えば、Cain,C.SciBX 4(28);doi:10.1038/scibx.2011.783(この内容が参照により本明細書に援用される)を参照)。
モノマーの混合物からの所望の二重特異性抗体の形成を促進する例示的な方法は、二重特異性抗体の異種可変軽鎖領域のそれぞれと相互作用する共通の可変重鎖を提供することによる。共通の重鎖を有する二重特異性抗体を産生する組成物および方法は、例えば、米国特許出願公開第20120184716号明細書、米国特許出願公開第20130317200号明細書、および米国特許出願公開第20160264685A1号明細書(これらのそれぞれの内容が参照により本明細書に援用される)に開示されている。
適切な軽鎖の対合を有する多重特異性抗体を産生する代替的な組成物および方法は、様々なアミノ酸修飾を含む。例えば、Zymeworksは、CH1および/またはCLドメインにおける1つまたは複数のアミノ酸修飾、VHおよび/またはVLドメインにおける1つまたは複数のアミノ酸修飾、またはその組合せを有するヘテロ二量体を記載しており、これらのドメインは、軽鎖と重鎖との間の境界部の一部であり、各重鎖と所望の軽鎖との間に優先的な対合を形成して、ヘテロ二量体対の2つの重鎖および2つの軽鎖が細胞内で共発現されるとき、第1のヘテロ二量体の重鎖が他のものより軽鎖の1つと優先的に対合するようになっている(例えば、国際公開第2015181805号パンフレットを参照)。他の例示的な方法は、国際公開第2016026943号パンフレット(Argen−X)、米国特許出願公開第20150211001号明細書、米国特許出願公開第20140072581A1号明細書、米国特許出願公開第20160039947A1号明細書、および米国特許出願公開第20150368352号明細書に記載されている。
λ軽鎖ポリペプチドおよびκ軽鎖ポリペプチドを含む多重特異性分子(例えば、多重特異性抗体分子)は、ヘテロ二量体化を可能にするのに使用され得る。λ軽鎖ポリペプチドおよびκ軽鎖ポリペプチドを含む二重特異性抗体分子を生成するための方法が、2016年9月23日に出願された米国仮特許出願第62/399,319号明細書に開示され、これは、全体が参照により本明細書に援用される。
第1のエピトープに対して特異的なλ軽鎖ポリペプチド1(LLCP1);
第1のエピトープに対して特異的な重鎖ポリペプチド1(HCP1);
第2のエピトープに対して特異的なκ軽鎖ポリペプチド2(KLCP2);および
第2のエピトープに対して特異的な重鎖ポリペプチド2(HCP2)
を含む。
LLCP1は、HCP2よりHCP1に対してより高い親和性を有し;および/または
KLCP2は、HCP1よりHCP2に対してより高い親和性を有する。
HCP1は、HCP1の第2の分子よりHCP2に対してより高い親和性を有し;および/または
HCP2は、HCP2の第2の分子よりHCP1に対してより高い親和性を有する。
(i)第1の重鎖ポリペプチド(例えば、第1の重鎖可変領域(第1のVH)、第1のCH1、第1の重鎖定常領域(例えば、第1のCH2、第1のCH3、または両方)の1つ、2つ、3つまたは全てを含む重鎖ポリペプチド)を提供すること;
(ii)第2の重鎖ポリペプチド(例えば、第2の重鎖可変領域(第2のVH)、第2のCH1、第2の重鎖定常領域(例えば、第2のCH2、第2のCH3、または両方)の1つ、2つ、3つまたは全てを含む重鎖ポリペプチド)を提供すること;
(iii)第1の重鎖ポリペプチド(例えば、第1のVH)と優先的に結合するλ鎖ポリペプチド(例えば、λ軽鎖可変領域(VLλ)、λ軽定常鎖(light constant chain)(VLλ)、または両方)を提供すること;および
(iv)第2の重鎖ポリペプチド(例えば、第2のVH)と優先的に結合するκ鎖ポリペプチド(例えば、λ軽鎖可変領域(VLκ)、λ軽定常鎖(VLκ)、または両方)を提供すること
を含む。
(i)第1の重鎖ポリペプチド(HCP1)(例えば、第1の重鎖可変領域(第1のVH)、第1のCH1、第1の重鎖定常領域(例えば、第1のCH2、第1のCH3、または両方)の1つ、2つ、3つまたは全てを含む重鎖ポリペプチド)(例えば、HCP1は、第1のエピトープに結合する);
(ii)第2の重鎖ポリペプチド(HCP2)(例えば、第2の重鎖可変領域(第2のVH)、第2のCH1、第2の重鎖定常領域(例えば、第2のCH2、第2のCH3、または両方)の1つ、2つ、3つまたは全てを含む重鎖ポリペプチド)(例えば、HCP2は、第2のエピトープに結合する);
(iii)第1の重鎖ポリペプチド(例えば、第1のVH)と優先的に結合するλ軽鎖ポリペプチド(LLCP1)(例えば、λ軽鎖可変領域(VLl)、λ軽定常鎖(VLl)、または両方)(例えば、LLCP1は、第1のエピトープに結合する);および
(iv)第2の重鎖ポリペプチド(例えば、第2のVH)と優先的に結合するκ軽鎖ポリペプチド(KLCP2)(例えば、λ軽鎖可変領域(VLk)、λ軽定常鎖(VLk)、または両方)(例えば、KLCP2は、第2のエピトープに結合する)
を含む多重特異性、例えば二重特異性抗体分子である。
ある実施形態において、多重特異性分子は、第1および第2の非隣接ポリペプチドを含み、
(i)第1のポリペプチドは、例えば、NからCの配向で、任意選択的にリンカーを介して、サイトカイン分子または免疫細胞エンゲージャに連結される、例えば癌抗原、例えば固形腫瘍、間質または血液抗原に結合する腫瘍標的化部分、例えば抗体分子(例えば、第1の抗原ドメインの第1の部分、例えばFab分子の第1のVH−CH1)、例えば抗体分子、例えば免疫細胞抗原に結合するscFvを含み;
(ii)第2のポリペプチドは、例えば、NからCの配向で、例えば腫瘍または間質抗原(例えば、第1のVH−CH1によって結合される同じ腫瘍または間質抗原)に結合する、第1の抗原ドメインの第2の部分、例えばFabの第1のVL−CLを含む。ある実施形態において、多重特異性分子は、任意選択的にリンカーを介して、scFvに連結されるFab分子を含む。実施形態において、多重特異性分子は、二重特異性分子である。
(i)第1のポリペプチドは、例えば、NからCの配向で、任意選択的にリンカーを介して、第1および第2のポリペプチドの間の結合を促進する第1のドメイン(例えば、第1の免疫グロブリン定常ドメイン(例えば、本明細書に記載される第1のFc分子)に連結される、例えば腫瘍または間質抗原に結合する腫瘍標的化部分、例えば抗体分子(例えば、第1の抗原ドメインの第1の部分、例えばFab分子の第1のVH−CH1)を含み;
(ii)第2のポリペプチドは、例えば、NからCの配向で、任意選択的にリンカーを介して、第1および第2のポリペプチドの間の結合を促進する第2のドメイン(例えば、第2の免疫グロブリン定常ドメイン(例えば、本明細書に記載される第2のFc分子)に連結されるサイトカイン分子または免疫細胞エンゲージャ(例えば、抗体分子、例えば免疫細胞抗原に結合するscFv)を含み;および
(iii)第3のポリペプチドは、例えば、NからCの配向で、例えば腫瘍または間質抗原(例えば、第1のVH−CH1によって結合される同じ腫瘍または間質抗原)に結合する、第1の抗原ドメインの第2の部分、例えばFabの第1のVL−CLを含む。ある実施形態において、多重特異性分子は、任意選択的にリンカーを介して、第2のFc分子に連結される、任意選択的にリンカーを介して、第1のFc分子、サイトカインまたは免疫細胞エンゲージャ(例えば、scFv)に連結されるFab分子を含む。実施形態において、多重特異性分子は、二重特異性分子である。
(i)第1のポリペプチドは、例えば、NからCの配向で、任意選択的にリンカーを介して、第1および第2のポリペプチドの間の結合を促進する第1のドメイン(例えば、第1の免疫グロブリン定常ドメイン(例えば、本明細書に記載される第1のFc分子)に連結される、例えば癌抗原に結合する腫瘍標的化部分、例えば抗体分子(例えば、第1の抗原ドメインの第1の部分、例えばFab分子の第1のVH−CH1)を含み;
(ii)第2のポリペプチドは、例えば、NからCの配向で、任意選択的にリンカーを介して、第1および第2のポリペプチドの間の結合を促進する第2のドメイン(例えば、第2の免疫グロブリン定常ドメイン(例えば、本明細書に記載される第2のFc分子)に連結されるサイトカイン分子または免疫細胞エンゲージャ(例えば、抗体分子、例えば免疫細胞抗原に結合するscFv)を含み;および
(iii)第3のポリペプチドは、例えば、NからCの配向で、例えば腫瘍または間質抗原(例えば、第1のVH−CH1によって結合される同じ腫瘍または間質抗原)に結合する、第1の抗原ドメインの第2の部分、例えばFabの第1のVL−CLを含む。ある実施形態において、多重特異性分子は、任意選択的にリンカーを介して、第2のFc分子に連結される、任意選択的にリンカーを介して、第1のFc分子、サイトカインまたは免疫細胞エンゲージャ(例えば、scFv)に連結されるFab分子を含み、第1または第2のポリペプチドのいずれかは、第1または第2の免疫グロブリン定常ドメインのC末端に任意選択的に共有結合される、サイトカイン分子または免疫細胞エンゲージャをさらに含む。実施形態において、多重特異性分子は、三重特異性分子である。
(i)第1のポリペプチドは、例えば、NからCの配向で、任意選択的にリンカーを介して、第1および第2のポリペプチドの間の結合を促進する第1のドメイン(例えば、第1の免疫グロブリン定常ドメイン(例えば、本明細書に記載される第1のFc分子)に連結される、例えば腫瘍または間質抗原に結合する腫瘍標的化部分、例えば抗体分子(例えば、第1の抗原ドメインの第1の部分、例えばFab分子の第1のVH−CH1)を含み;
(ii)第2のポリペプチドは、例えば、NからCの配向で、任意選択的にリンカーを介して、第1および第2のポリペプチドの間の結合を促進する第2のドメイン(例えば、第2の免疫グロブリン定常ドメイン(例えば、本明細書に記載される第2のFc分子)に連結されるサイトカイン分子または免疫細胞エンゲージャ(例えば、抗体分子、例えば免疫細胞抗原に結合するscFv)を含み;および
(iii)第3のポリペプチドは、例えば、NからCの配向で、例えば腫瘍または間質抗原(例えば、第1のVH−CH1によって結合される同じ腫瘍または間質抗原)に結合する、第1の抗原ドメインの第2の部分、例えばFabの第1のVL−CLを含む。ある実施形態において、多重特異性分子は、任意選択的にリンカーを介して、第2のFc分子に連結される、任意選択的にリンカーを介して、第1のFc分子、サイトカインまたは免疫細胞エンゲージャ(例えば、scFv)に連結されるFab分子を含み、第1および第2のポリペプチドのいずれかは、任意選択的に第1または第2の免疫グロブリン定常ドメインのC末端に共有結合されるサイトカイン分子、免疫細胞エンゲージャまたは両方をさらに含む。実施形態において、多重特異性分子は、四重特異性分子である。
腫瘍標的化部分;
(任意選択的に)第1および第2のポリペプチドの結合を促進するドメイン、例えばFc分子;および
免疫細胞エンゲージャまたはサイトカイン分子を含む第1のポリペプチドを含み;第2のポリペプチドは、例えば、NからC方向に:
腫瘍標的化部分、またはそのサブユニット;
(任意選択的に)第1および第2のポリペプチドの結合を促進するドメイン、例えばFc分子;および
免疫細胞エンゲージャまたはサイトカイン分子を含む第2のポリペプチドを含み、第1および第2のポリペプチドは異なる。
a)以下を含む第1のポリペプチド:
第1および第2のポリペプチドの結合を促進する第1のドメイン、例えば第1のFc分子;および
腫瘍標的化部分;免疫細胞エンゲージャまたはサイトカイン分子から選択される2つのポリペプチド;ならびに
b)以下を含む第2のポリペプチド:
第1および第2のポリペプチドの結合を促進する第2のドメイン、例えば第2のFc分子;および
腫瘍標的化部分;免疫細胞エンゲージャまたはサイトカイン分子から選択される2つのポリペプチド
を含み、多重特異性分子は、腫瘍標的化部分;免疫細胞エンゲージャおよびサイトカイン分子を含む。実施形態において、多重特異性分子は、以下のもの:
(i)腫瘍標的化部分;免疫細胞エンゲージャおよび2つのサイトカイン分子;
(ii)腫瘍標的化部分;2つの免疫細胞エンゲージャおよびサイトカイン分子;または
(iii)2つの腫瘍標的化部分;免疫細胞エンゲージャおよびサイトカイン分子
の1つを含む。
i)第1のポリペプチドは、例えば、N−CまたはC−N方向に、腫瘍標的化部分;第1および第2のポリペプチドの結合を促進する第1のドメイン、例えば第1のFc分子および免疫細胞エンゲージャを含み;
ii)第1のポリペプチドは、例えば、N−CまたはC−N方向に、腫瘍標的化部分;第1および第2のポリペプチドの結合を促進する第1のドメイン、例えば第1のFc分子およびサイトカイン分子を含み;または
iii)第1のポリペプチドは、例えば、N−CまたはC−N方向に、サイトカイン;第1および第2のポリペプチドの結合を促進する第1のドメイン、例えば第1のFc分子および免疫細胞エンゲージャを含み;
iv)第2のポリペプチドは、例えば、N−CまたはC−N方向に、腫瘍標的化部分;第1および第2のポリペプチドの結合を促進する第2のドメイン、例えば第2のFc分子および免疫細胞エンゲージャを含み;
ii)第2のポリペプチドは、例えば、N−CまたはC−N方向に、腫瘍標的化部分;第1および第2のポリペプチドの結合を促進する第2のドメイン、例えば第2のFc分子およびサイトカイン分子を含み;または
iii)第2のポリペプチドは、例えば、N−CまたはC−N方向に、サイトカイン;第1および第2のポリペプチドの結合を促進する第2のドメイン、例えば第2のFc分子および免疫細胞エンゲージャを含む。
R1−(任意選択的にL1)−R2−(任意選択的にL2)−R3;
R1−(任意選択的にL1)−R3−(任意選択的にL2)−R2;
R2−(任意選択的にL1)−R1−(任意選択的にL2)−R3;
R2−(任意選択的にL1)−R3−(任意選択的にL2)−R1;
R3−(任意選択的にL1)−R1−(任意選択的にL2)−R2;または
R3−(任意選択的にL1)−R2−(任意選択的にL2)−R1;
(i)R1は、本明細書に記載される腫瘍標的化部分であり、R2およびR3が存在する場合のみ、R1は0であり得、またはR1は、1つ、2つまたはそれを超える腫瘍標的化部分(例えば、同じかまたは異なる腫瘍標的化部分)を含み;
(ii)R2は、本明細書に記載される免疫細胞エンゲージャであり、R1およびR3が存在する場合のみ、R2は0であり得、またはR2は、1つ、2つまたはそれを超える免疫細胞エンゲージャ(例えば、同じかまたは異なる免疫細胞エンゲージャ)を含み;
(iii)R3は、本明細書に記載されるサイトカイン分子であり、R1およびR2が存在する場合のみ、R3は0であり得、またはR3は、1つ、2つまたはそれを超えるサイトカイン分子(例えば、同じかまたは異なるサイトカイン分子)を含み;
(iv)任意選択的に、L1および/またはL2は、本明細書に記載されるリンカーのいずれかである。
(i)R1は、本明細書に記載される腫瘍標的化部分であり、例えば、R1は、1つ、2つまたはそれを超える腫瘍標的化部分(例えば、同じかまたは異なる腫瘍標的化部分)を含み;
(ii)R2は、本明細書に記載されるサイトカイン分子であり、例えば、R2は、1つ、2つまたはそれを超えるサイトカイン分子(例えば、同じかまたは異なるサイトカイン分子)を含み;および
(iii)任意選択的に、L1および/またはL2は、本明細書に記載されるリンカーである。
(i)R1は、本明細書に記載される腫瘍標的化部分であり、例えば、R1は、1つ、2つまたはそれを超える腫瘍標的化部分(例えば、同じかまたは異なる腫瘍標的化部分)を含み;
(ii)R2は、本明細書に記載される免疫細胞エンゲージャであり、例えば、R2は、1つ、2つまたはそれを超える免疫細胞エンゲージャ(例えば、同じかまたは異なる免疫細胞エンゲージャ)を含み;
(iii)R3は、本明細書に記載されるサイトカイン分子であり、例えば、R3は、1つ、2つまたはそれを超えるサイトカイン分子(例えば、同じかまたは異なるサイトカイン分子)を含み;
(iv)任意選択的に、L1および/またはL2は、本明細書に記載されるリンカーである。
(i)R1は、本明細書に記載される腫瘍標的化部分であり;
(ii)R2およびR4は、それぞれ本明細書に記載される第1および第2の免疫細胞エンゲージャであり;
(iii)R3は、本明細書に記載されるサイトカイン分子であり;および
(iv)任意選択的に、L1および/またはL2は、本明細書に記載されるリンカーである。
本開示は、分子を腫瘍細胞に指向する1つまたは複数の腫瘍特異的標的化部分を含む、例えばそれを含むように操作される特に多重特異性(例えば、二重、三重、四重特異性)分子を提供する。
の重鎖可変ドメイン配列からの1つ、2つ、3つのCDR、または密接に関連したCDR、例えば配列番号1のCDR配列からの少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、2つ、3つまたは4つ以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するCDRを含む。
の重鎖可変ドメイン配列またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号1のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号5のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を有する重鎖定常領域(CH1)をさらに含む。ある実施形態において、抗体分子は、シグナルペプチド、例えばアミノ酸配列:MEFGLSWVFLVALFRGVQC(配列番号6)を含むシグナルペプチドをさらに含む。
の軽鎖可変ドメイン配列からの1つ、2つ、3つのCDR、または密接に関連したCDR、例えば配列番号7のCDR配列からの少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、2つ、3つまたは4つ以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するCDRを含む。
の軽鎖可変ドメイン配列またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号7のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号11のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域(CL1)をさらに含む。実施形態において、抗体分子は、シグナルペプチド、例えばアミノ酸配列:MKYLLPTAAAGLLLLAAQPAMA(配列番号12)を含むシグナルペプチドをさらに含む。
またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号14のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を有する重鎖定常領域(CH1)をさらに含む。実施形態において、抗体分子は、シグナルペプチド、例えばアミノ酸配列:MEFGLSWVFLVALFRGVQCEV(配列番号15)を含むシグナルペプチドをさらに含む。
またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号11のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域(CL1)をさらに含む。ある実施形態において、抗体分子は、シグナルペプチド、例えばアミノ酸配列:MKYLLPTAAAGLLLLAAQPAMA(配列番号12)を含むシグナルペプチドをさらに含む。
サイトカインは、一般に、例えば、シグナル伝達経路を介して細胞活性に影響を与えるポリペプチドである。したがって、多重特異性または多機能性ポリペプチドのサイトカインは、有用であり、細胞内の応答を調節するように細胞膜の外部から信号を伝達する受容体媒介シグナル伝達と関連し得る。サイトカインは、免疫応答のメディエータであるタンパク性シグナル伝達化合物である。それらは、増殖、分化および細胞生存/アポトーシスを含む多くの異なる細胞機能を制御し;サイトカインはまた、ウイルス感染および自己免疫疾患を含むいくつかの病態生理学的過程に関与する。サイトカインは、自然(単球、マクロファージ、樹枝状細胞)および適応(T−およびB細胞)免疫系の両方の様々な細胞によって様々な刺激下で合成される。サイトカインは、2つのグループ:炎症性および抗炎症性に分類され得る。IFNγ、IL−1、IL−6およびTNF−αを含む炎症性サイトカインは、主に、自然免疫細胞およびTh1細胞に由来する。IL−10、IL−4、IL−13およびIL−5を含む抗炎症性サイトカインは、Th2免疫細胞から合成される。
のポリペプチド配列を含む。別の特定の実施形態において、多重特異性または多機能性ポリペプチドのIL−2サイトカインは、配列番号228
のポリペプチド配列を含む。
のポリペプチド配列を含む。一実施形態において、IL−12サイトカインは、NK細胞における増殖、NK細胞における分化、T細胞における増殖、およびT細胞における分化からなる群から選択される細胞応答の1つまたは複数を引き起こし得る。
のポリペプチド配列を含む。別の特定の実施形態において、IL−10サイトカインは、モノマーIL−10サイトカインである。より具体的な実施形態において、モノマーIL−10サイトカインは、配列番号231
のポリペプチド配列を含む。一実施形態において、IL−10サイトカインは、サイトカイン分泌の阻害、抗原提示細胞による抗原提示の阻害、酸素ラジカル放出の減少、およびT細胞増殖の阻害からなる群から選択される細胞応答の1つまたは複数を引き起こし得る。サイトカインがIL−10である、本発明に係る多重特異性または多機能性ポリペプチドは、例えば炎症性疾患の治療における、炎症の抑制に特に有用である。
のポリペプチド配列を含む。一実施形態において、IL−15サイトカインは、活性化Tリンパ球細胞における増殖、活性化Tリンパ球細胞における分化、細胞傷害性T細胞(CTL)活性、活性化B細胞における増殖、活性化B細胞における分化、ナチュラルキラー(NK)細胞における増殖、NK細胞における分化、活性化T細胞またはNK細胞によるサイトカイン分泌、およびNK/リンパ球活性化キラー(LAK)抗腫瘍細胞毒性からなる群から選択される細胞応答の1つまたは複数を引き起こし得る。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号17のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号18のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。ある実施形態において、多重特異性分子のサイトカイン分子(例えば、IL−15)および受容体二量体化ドメイン(例えば、IL15Rα二量体化ドメイン)は、例えば、リンカー(例えば、Gly−Serリンカー、例えばアミノ酸配列SGGSGGGGSGGGSGGGGSLQ(配列番号19)を含むリンカーを介して共有結合される。他の実施形態において、多重特異性分子のサイトカイン分子(例えば、IL−15)および受容体二量体化ドメイン(例えば、IL15Rα二量体化ドメイン)は、共有結合されず、例えば非共有結合的に結合される。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号20のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む)。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号21のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む)。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号22のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む)。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号23のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む)。
本明細書に開示される多重特異性分子の免疫細胞エンゲージャは、免疫細胞、例えば免疫エフェクター細胞への結合、および/またはその活性化を媒介し得る。ある実施形態において、免疫細胞は、NK細胞、B細胞、樹枝状細胞、またはマクロファージ細胞エンゲージャ、またはその組合せから選択される。ある実施形態において、免疫細胞エンゲージャは、T細胞エンゲージャ、NK細胞エンゲージャ、B細胞エンゲージャ、樹枝状細胞エンゲージャまたはマクロファージ細胞エンゲージャ、またはその組合せの1つ、2つ、3つまたは全てから選択される。免疫細胞エンゲージャは、免疫系のアゴニストであり得る。ある実施形態において、免疫細胞エンゲージャは、抗体分子、リガンド分子(例えば、免疫グロブリン定常領域、例えばFc領域をさらに含むリガンド)、小分子、ヌクレオチド分子であり得る。
ナチュラルキラー(NK)細胞は、抗体に依存しない方法で腫瘍およびウイルス感染細胞を認識し、破壊する。NK細胞の制御は、NK細胞表面上の受容体を活性化および阻害することによって媒介される。受容体を活性化する1つのファミリーは、NKp30、NKp44およびNKp46を含む天然細胞毒性受容体(NCR)である。NCRは、癌細胞上のヘパラン硫酸の認識によって腫瘍標的化を開始させる。NKG2Dは、細胞傷害性活性をもたらす活性化キラー(NK)細胞における刺激および共刺激自然免疫応答の両方を提供する受容体である。DNAM1は、細胞間接着、リンパ球シグナル伝達、細胞毒性、ならびに細胞傷害性T−リンパ球(CTL)およびNK細胞によって媒介されるリンホカイン分泌に関与する受容体である。DAP10(HCSTとしても知られている)は、KLRK1と結合して、リンパ細胞および骨髄細胞内で活性化受容体KLRK1−HCSTを形成する膜貫通アダプタータンパク質であり;この受容体は、MHCクラスI鎖関連MICAおよびMICB、およびU(任意選択的にL1)6−結合タンパク質(ULBP)などの細胞表面リガンドを発現する標的細胞に対する細胞毒性を引き起こす際に大きい役割を果たし;KLRK1−HCST受容体は、腫瘍に対する免疫学的監視において役割を果たし、腫瘍細胞の細胞溶解に必要とされ;実際に、KLRK1リガンドを発現しない黒色腫細胞は、NK細胞によって媒介される免疫学的監視から逃れる。CD16は、複合体化または凝集IgGおよびさらにモノマーIgGに結合し、それにより抗体依存性細胞傷害(ADCC)および食作用などの他の抗体依存性応答を媒介する、IgGのFc領域の受容体である。
のアミノ酸配列、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号24のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
(i)MICAは、アミノ酸配列:
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号25のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含み;
(ii)MICBは、アミノ酸配列:
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号26のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含み;または
(iii)ULBP1は、アミノ酸配列:
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号27のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
(i)NECTIN2は、アミノ酸配列:
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号28のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含み;または
(ii)NECL5は、アミノ酸配列:
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号29のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号30のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号31のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号32のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号30のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号33のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号34のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号35のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
本開示は、T細胞への結合および/またはその活性化を媒介する1つまたは複数のT細胞エンゲージャを含むように操作される特に多重特異性(例えば、二重、三重、四重特異性)タンパク質を提供する。したがって、ある実施形態において、T細胞エンゲージャは、CD3、TCRα、TCRβ、TCRγ、TCRζ、ICOS、CD28、CD27、HVEM、LIGHT、CD40、4−1BB、OX40、DR3、GITR、CD30、TIM1、SLAM、CD2、またはCD226の1つまたは複数に結合する(例えば、ある実施形態において、それを活性化する)抗原結合ドメインまたはリガンドから選択される。他の実施形態において、T細胞エンゲージャは、CD3、TCRα、TCRβ、TCRγ、TCRζ、ICOS、CD28、CD27、HVEM、LIGHT、CD40、4−1BB、OX40、DR3、GITR、CD30、TIM1、SLAM、CD2、またはCD226の1つまたは複数に結合し、それを活性化しない抗原結合ドメインまたはリガンドから選択される。ある実施形態において、T細胞エンゲージャは、CD3に結合する。
概して、Bリンパ球としても知られているB細胞は、リンパ球サブタイプの白血球のタイプである。それらは、抗体を分泌することにより、適応免疫系の体液性免疫成分中で機能する。さらに、B細胞は、抗原(それらは、プロフェッショナル抗原提示細胞(APC)としても分類される)を提示し、サイトカインを分泌する。マクロファージは、食作用により、細胞残屑、異物、微生物、癌細胞を取り込み、消化する白血球のタイプである。食作用に加えて、それらは、非特異的防御(自然免疫)において重要な役割を果たし、また、リンパ球などの他の免疫細胞を動員することによって特異的防御機構(適応免疫)を開始させるのに役立つ。例えば、それらは、T細胞に対する抗原提示因子(antigen presenter)として重要である。炎症の増加および免疫系の刺激に加えて、マクロファージは、重要な抗炎症の役割も果たし、サイトカインの放出によって免疫反応を減少させ得る。樹枝状細胞(DC)は、抗原物質をプロセシングし、免疫系のT細胞に対する細胞表面にそれを提示する際に機能する抗原提示細胞である。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号36のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号37のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号38のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む、41BBリガンドを含む。
Toll様受容体(TLR)は、ショウジョウバエTollタンパク質のホモログである進化的に保存された受容体であり、微生物病原体によってのみ発現される、病原体関連微生物パターン(PAMP)として知られている高度に保存された構造モチーフ、または壊死または死細胞から放出される内因性分子である危険関連分子パターン(DAMP)を認識する。PAMPは、リポ多糖(LPS)、ペプチドグリカン(PGN)およびリポペプチド、ならびにフラジェリン、細菌DNAおよびウイルス二本鎖RNAなどの様々な細菌細胞壁成分を含む。DAMPは、熱ショックタンパク質などの細胞内タンパク質ならびに細胞外基質からのタンパク質断片を含む。対応するPAMPまたはDAMPによるTLRの刺激は、シグナル伝達カスケードを開始させて、AP−1、NF−κBおよびインターフェロン調節因子(IRF)などの転写因子の活性化をもたらす。TLRによるシグナル伝達は、適応免疫応答を指向する、インターフェロン(IFN)、炎症性サイトカインおよびエフェクターサイトカインの産生を含む様々な細胞応答をもたらす。TLRは、いくつかの炎症性および免疫障害に関与し、癌において役割を果たす(Rakoff−Nahoum S.&Medzhitov R.,2009.Toll−like receptors and cancer.Nat Revs Cancer 9:57−63)。
TLR9は、DNA分子中の非メチル化CpG配列を認識する。CpG部位は、細菌ゲノムまたはウイルスDNAと比較して脊椎動物ゲノムにおいて比較的稀である(約1%)。TLR9は、Bリンパ球、単球、ナチュラルキラー(NK)細胞および形質細胞様樹状細胞などの免疫系の多くの細胞によって発現される。TLR9は、エンドソーム区画内で、細胞内で発現され、CpGモチーフに富むDNAに結合することにより、免疫系にウイルスおよび細菌感染を警告するように機能する。TLR9シグナルは、細胞の活性化をもたらして、炎症反応を開始させて、I型インターフェロンおよびIL−12などのサイトカインの産生をもたらす。
TLRアゴニストは、1つまたは複数のTLR、例えばヒトTLR−1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10の1つまたは複数を作動させ得る。ある実施形態において、本明細書に記載される補助剤は、TLRアゴニストである。ある実施形態において、TLRアゴニストは、ヒトTLR−9を特異的に作動させる。ある実施形態において、TLR−9アゴニストは、CpG部分である。本明細書において使用される際、CpG部分は、配列:5’−C−ホスフェート−G−3’、すなわち1つのみのホスフェートによって隔てられたシトシンおよびグアニンを有する線状ジヌクレオチドである。
固形腫瘍は、正常組織の構造に類似した異なる構造を有し、異なるが互いに依存する2つの区画:腫瘍細胞が生じ、それらが分散される、実質(腫瘍細胞)および間質を含む。全ての腫瘍は、間質を有し、栄養補給および老廃物の除去のために間質を必要とする。細胞懸濁液として成長する腫瘍(例えば、白血病、腹水腫瘍)の場合、血漿が間質として機能する(Connolly JL et al.Tumor Structure and Tumor Stroma Generation.In:Kufe DW et al.,editors.Holland−Frei Cancer Medicine.6th edition.Hamilton:BC Decker;2003)。間質は、細胞外基質(ECM)および細胞外分子とともに、線維芽細胞/筋線維芽細胞、グリア、上皮、脂肪、血管、平滑筋、および免疫細胞を含む様々な細胞型を含む(Li Hanchen et al.Tumor Microenvironment:The Role of the Tumor Stroma in Cancer.J of Cellular Biochemistry 101:805−815(2007))。
ある実施形態において、間質調節部分は、酵素である。例えば、間質調節部分は、限定はされないが、ヒアルロニダーゼ、コラゲナーゼ、コンドロイチナーゼ、マトリックスメタロプロテイナーゼ(例えば、マクロファージメタロエラスターゼ)を含み得る。
ヒアルロニダーゼは、動物界全体に見られる中性および酸活性酵素の群である。ヒアルロニダーゼは、基質特異性、および作用機序に関して様々である。ヒアルロニダーゼの3つの一般的クラスがある:(1)主な最終産物として四糖類および六糖類を伴うエンド−β−N−アセチルヘキソサミニダーゼである哺乳動物型ヒアルロニダーゼ(EC 3.2.1.35)。それらは、加水分解およびトランスグリコシダーゼ活性の両方を有し、ヒアルロナンおよびコンドロイチン硫酸を分解することができ;(2)細菌ヒアルロニダーゼ(EC 4.2.99.1)は、ヒアルロナンおよび様々な程度にコンドロイチン硫酸およびデルマタン硫酸を分解する。それらは、主に二糖類最終産物を生じるβ脱離反応によって作用するエンド−β−N−アセチルヘキソサミニダーゼであり;(3)ヒル類、他の寄生生物、および甲殻類からのヒアルロニダーゼ(EC 3.2.1.36)は、β1−3結合の加水分解によって四糖類および六糖類最終産物を生成するエンド−β−グルクロニダーゼである。
のアミノ酸配列と少なくとも95%(例えば、少なくとも96%、97%、98%、99%、100%)同一の配列を有する。
コンドロイチナーゼは、エンドグリコシダーゼ反応を介して、グリコサミノグリカン、特にコンドロイチンおよびコンドロイチン硫酸を分解する、動物界全体に見られる酵素である。ある実施形態において、コンドロイチナーゼは、哺乳動物コンドロイチナーゼである。ある実施形態において、コンドロイチナーゼは、組み換えヒトコンドロイチナーゼである。ある実施形態において、コンドロイチナーゼは、HYAL4である。他の例示的なコンドロイチナーゼとしては、コンドロイチナーゼABC(プロテウス・ブルガリス(Proteus vulgaris)に由来する;特開平6−153947号公報、T.Yamagata et al.J.Biol.Chem.,243,1523(1968)、S.Suzuki et al,J.Biol.Chem.,243,1543(1968))、コンドロイチナーゼAC(フラボバクテリウム・ヘパリナム(Flavobacterium heparinum)に由来する;T.Yamagata et al.,J.Biol.Chem.,243,1523(1968))、コンドロイチナーゼAC II(アルスロバクター・アウレッセンス(Arthrobacter aurescens)に由来する;K.Hiyama,and S.Okada,J.Biol.Chem.,250,1824(1975)、K.Hiyama and S.Okada,J.Biochem.(Tokyo),80,1201(1976))、ヒアルロニダーゼACIII(フラボバクテリウム属(Flavobacterium sp.)Hp102に由来する;Hirofumi Miyazono et al.,Seikagaku,61,1023(1989))、コンドロイチナーゼB(フラボバクテリウム・ヘパリナム(Flavobacterium heparinum)に由来する;Y.M.Michelacci and C.P.Dietrich,Biochem.Biophys.Res.Commun.,56,973(1974)、Y.M.Michelacci and C.P.Dietrich,Biochem.J.,151,121(1975)、Kenichi Maeyama et al,Seikagaku,57,1189(1985))、コンドロイチナーゼC(フラボバクテリウム属(Flavobacterium sp.)Hp102に由来する;Hirofumi Miyazono et al,Seikagaku,61,1023(1939))などが挙げられる。
マトリックスメタロプロテアーゼ(MMP)は、細胞外基質(ECM)分解に関与する主なプロテアーゼである亜鉛依存性エンドペプチダーゼである。MMPは、広範囲の細胞外分子および多くの生物活性分子を分解することが可能である。24のMMP遺伝子が、ヒトにおいて同定されており、これは、ドメイン構成および基質選択に基づいて6つのグループに分けることができる:コラゲナーゼ(MMP−1、−8および−13)、ゼラチナーゼ(MMP−2およびMMP−9)、ストロメリシン(MMP−3、−10および−11)、マトリリシン(MMP−7およびMMP−26)、膜タイプ(MT)−MMP(MMP−14、−15、−16、−17、−24および−25)およびその他(MMP−12、−19、−20、−21、−23、−27および−28)。ある実施形態において、間質調節部分は、ヒト組み換えMMP(例えば、MMP−1、−2、−3、−4、−5、−6、−7、−8、−9、10、−11、−12、−13、−14、15、−15、−17、−18、−19、20、−21、−22、−23、または−24)である。
3つの哺乳動物コラゲナーゼ(MMP−1、−8、および−13)は、コラーゲン細胞外基質を切断することが可能である、主な分泌されるエンドペプチダーゼである。線維性コラーゲンに加えて、コラゲナーゼは、成長因子を含むいくつかの他のマトリックスおよび非マトリックスタンパク質を切断し得る。コラゲナーゼは、不活性プロフォーム(pro−form)として合成され、活性化されると、それらの活性は、メタロプロテイナーゼの特異的組織阻害剤、TIMPにより、ならびに非特異的プロティナーゼ阻害剤により阻害される(Ala−aho R et al.Biochimie.Collagenases in cancer.2005 Mar−Apr;87(3−4):273−86)。ある実施形態において、間質調節部分は、コラゲナーゼである。ある実施形態において、コラゲナーゼは、ヒト組み換えコラゲナーゼである。ある実施形態において、コラゲナーゼは、MMP−1である。ある実施形態において、コラゲナーゼは、MMP−8である。ある実施形態において、コラゲナーゼは、MMP−13である。
MMP−12としても知られているマクロファージメタロエラスターゼ(MME)は、MMPのストロメリシンサブグループのメンバーであり、可溶性および不溶性エラスチンならびにIV型コラーゲン、フィブロネクチン、ラミニン、ビトロネクチン、エンタクチン、ヘパラン、およびコンドロイチン硫酸を含む、広範囲のマトリックスおよび非マトリックス基質の加水分解を触媒する(Erja Kerkelae et al.Journal of Investigative Dermatology(2000)114,1113−1119;doi:10.1046/j.1523−1747.2000.00993)。ある実施形態において、間質調節部分は、MMEである。ある実施形態において、MMEは、ヒト組み換えMMEである。ある実施形態において、MMEは、MMP−12である。
本開示は、(i)腫瘍標的化部分;および(ii)免疫細胞エンゲージャ(例えば、NK細胞エンゲージャ、B細胞エンゲージャ、樹枝状細胞エンゲージャまたはマクロファージ細胞エンゲージャの1つ、2つ、3つまたは全てから選択される);および/または(iii)サイトカイン分子の一方または両方を含む、特に新規な多重特異性分子に関する。理論に制約されるものではないが、本明細書に開示される多重特異性分子は、癌細胞において、免疫細胞(例えば、NK細胞、B細胞、樹枝状細胞またはマクロファージから選択される免疫エフェクター細胞)を標的化(例えば、局在化、架橋および/または活性化)することが予想される。本明細書に記載される多重特異性分子を用いて、免疫細胞の近接および/または活性を増大させることは、癌細胞に対する免疫応答を促進し、それにより、より有効な癌治療を提供することが予想される。したがって、特に上記の部分を含む多重特異性分子(例えば、多重特異性抗体分子)、それをコードする核酸、上記の分子を生成する方法、および上記の分子を用いて癌を治療する方法が本明細書において提供される。
(i)例えば、癌抗原(例えば、固形腫瘍抗原、間質抗原、または血液抗原)に結合する腫瘍標的化部分と;
(ii)例えば、NK細胞エンゲージャ、T細胞エンゲージャ、B細胞エンゲージャ、樹枝状細胞エンゲージャもしくはマクロファージ細胞エンゲージャの1つ、2つ、3つもしくは全てから選択される免疫細胞エンゲージャ;または
(iii)サイトカイン分子
の1つまたは2つと
を含む多重特異性分子を特徴とする。
i)腫瘍標的化部分およびサイトカイン分子;または
ii)腫瘍標的化部分および免疫細胞エンゲージャ
を含む二重特異性または二機能性分子である。
(i)1つの腫瘍標的化部分、1つの免疫細胞エンゲージャ、および1つのサイトカイン分子;
(ii)1つの腫瘍標的化部分および2つの免疫細胞エンゲージャ(例えば、同じかまたは異なる免疫細胞エンゲージャ);
(iii)1つの腫瘍標的化部分および2つのサイトカイン(例えば、同じかまたは異なるサイトカイン);
(iv)1つの腫瘍標的化部分、2つの免疫細胞エンゲージャ(例えば、同じかまたは異なる免疫細胞エンゲージャ)、および1つのサイトカイン分子;
(v)1つの腫瘍標的化部分、1つの免疫細胞エンゲージャ、および2つのサイトカイン分子(例えば、同じかまたは異なるサイトカイン分子);
(vi)1つの腫瘍標的化部分および3つの免疫細胞エンゲージャ(例えば、同じかまたは異なる免疫細胞エンゲージャ);
(vii)1つの腫瘍標的化部分および3つのサイトカイン分子(例えば、同じかまたは異なるサイトカイン分子);
(viii)2つの腫瘍標的化部分(例えば、同じかまたは異なる標的化部分)および1つの免疫細胞エンゲージャ;
(ix)2つの腫瘍標的化部分(例えば、同じかまたは異なる標的化部分)および1つのサイトカイン分子;および
(ix)2つの腫瘍標的化部分(例えば、同じかまたは異なる標的化部分)、1つの免疫細胞エンゲージャ、および1つのサイトカイン分子
を含む。
(i)第1のポリペプチドは、N−からC−の配向で、第1の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第1のFc領域)を含み;および
(ii)第2のポリペプチドは、N−からC−の配向で、第2の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第2のFc領域)を含む。
(i)第1のポリペプチドは、N−からC−の配向で、任意選択的にリンカーを介して、第1の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第1のFc領域)に連結される、第1の結合特異性、例えば第1の抗体分子を含み;
(ii)第2のポリペプチドは、N−からC−の配向で、第2の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第2のFc領域)を含み;および
(任意選択的に)(iii)第3のポリペプチドは、第1の抗体分子または第2の抗体分子の一部を含む。
(a)任意選択的にリンカーを介して、第1の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第1のFc領域)に連結される、第1の抗原ドメインの第1の部分、例えば癌抗原、例えば固形腫瘍、間質または血液抗原に結合する、例えばFab分子の第1のVH−CH1(例えば、結合部位#1);
(b)任意選択的にリンカーを介して、第2の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第2のFc領域)に連結される、サイトカイン分子、または免疫細胞エンゲージャから選択される第2の結合特異性(例えば、第2の結合部位)
を有し;および
(c)第3のポリペプチドは、N−から−Cに以下の立体配置:第1の抗原ドメインの第2の部分、例えば癌抗原、例えば固形腫瘍、間質または血液抗原(例えば、第1のVH−CH1、例えば、結合部位#1によって結合される同じ癌抗原)に結合する、例えばFabの第1のVL−CLを有する(例えば、この立体配置の例が図7に示される)。
(i)任意選択的にリンカーを介して、第2の結合特異性(例えば、結合部位#3、例えば、サイトカイン、リガンドまたは第2の抗体分子、例えばscFv)に連結される、第1の抗原ドメインの第1の部分、例えば腫瘍または間質抗原に結合する、例えばFab分子の第1のVH−CH1(例えば、結合部位#1)を有し;
(ii)第2のポリペプチドは、N−から−Cに以下の立体配置:任意選択的にリンカーを介して、第3の結合特異性(例えば、結合部位#2、例えば、サイトカイン、リガンドまたは第2の抗体分子、例えばscFv)に連結される、第1の抗原ドメインの第2の部分、例えば腫瘍または間質抗原(例えば、第1のVH−CH1、例えば、結合部位#1によって結合される同じ腫瘍または間質抗原)に結合する、例えばFabの第1のVL−CLを有する(例えば、この立体配置の例が図8A〜8Cに示される)。
(i)第1のポリペプチドは、N−からC−の配向で、任意選択的にリンカーを介して、第1の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第1のFc領域)に連結される、第1の結合特異性、例えば第1の抗体分子を含み;
(ii)第2のポリペプチドは、N−からC−の配向で、任意選択的にリンカーを介して、第2の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第2のFc領域)に連結される第2の結合特異性を含み;および
(任意選択的に)(iii)第3のポリペプチドは、第1の抗体分子または第2の抗体分子の一部を含み、
第1または第2のポリペプチドのいずれかは、第3の結合特異性をさらに含む。
(a)任意選択的にリンカーを介して、第1の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第1のFc領域)に連結される、第1の抗原ドメインの第1の部分、例えば腫瘍または間質抗原に結合する、例えばFab分子の第1のVH−CH1(例えば、結合部位#1);
(b)任意選択的にリンカーを介して、第2の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第2のFc領域)に連結される、サイトカイン分子、または免疫細胞エンゲージャから選択される第2の結合特異性(例えば、第2の結合部位)
を有し;および
(c)第3のポリペプチドは、N−から−Cに以下の立体配置:第1の抗原ドメインの第2の部分、例えば腫瘍または間質抗原(例えば、第1のVH−CH1、例えば、結合部位#1によって結合される同じ腫瘍または間質抗原)に結合する、例えばFabの第1のVL−CLを有し、
第1または第2のポリペプチドのいずれかは、任意選択的にリンカーを介して、第1または第2の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第1または第2のFc領域)に連結される第3の結合特異性をさらに含む。一実施形態において、第3の結合特異性は、任意選択的にリンカーを介して、第1の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第1のFc領域)に連結される。別の実施形態において、第3の結合特異性は、任意選択的にリンカーを介して、第2の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第2のFc領域)に連結される。これらの立体配置の例が図9A〜9Bに示される。
(i)第1のポリペプチドは、N−からC−の配向で、任意選択的にリンカーを介して、第1の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第1のFc領域)に連結される、第1の結合特異性、例えば第1の抗体分子を含み;
(ii)第2のポリペプチドは、N−からC−の配向で、任意選択的にリンカーを介して、第2の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第2のFc領域)に連結される第2の結合特異性を含み;および
(任意選択的に)(iii)第3のポリペプチドは、第1の抗体分子または第2の抗体分子の一部を含み、
第1または第2のポリペプチドは、第3および第4の結合特異性をさらに含む。
(a)任意選択的にリンカーを介して、第1の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第1のFc領域)に連結される、第1の抗原ドメインの第1の部分、例えば腫瘍または間質抗原に結合する、例えばFab分子の第1のVH−CH1(例えば、結合部位#1);
(b)任意選択的にリンカーを介して、第2の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第2のFc領域)に連結される、サイトカイン分子、または免疫細胞エンゲージャから選択される第2の結合特異性(例えば、第2の結合部位)
を有し;および
(c)第3のポリペプチドは、N−から−Cに以下の立体配置:第1の抗原ドメインの第2の部分、例えば腫瘍または間質抗原(例えば、第1のVH−CH1、例えば、結合部位#1によって結合される同じ腫瘍または間質抗原)に結合する、例えばFabの第1のVL−CLを有し、
第1および第2のポリペプチドは、それぞれ任意選択的にリンカーを介して、第1および第2の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第1および第2のFc領域)にそれぞれ連結される第3および第4の結合特異性をさらに含む。一実施形態において、第3の結合特異性は、任意選択的にリンカーを介して、第2の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第2のFc領域)に連結され;第4の結合特異性は、任意選択的にリンカーを介して、第1の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第1のFc領域)に連結される。これらの立体配置の例が図10A〜10Cに示される。
一実施形態において、腫瘍標的化部分は、メソテリンに結合する抗体分子(例えば、FabまたはscFv)を含む。ある実施形態において、メソテリンに対する抗体分子は、
の重鎖可変ドメイン配列からの1つ、2つ、3つのCDR、または密接に関連したCDR、例えば配列番号1のCDR配列からの少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、2つ、3つまたは4つ以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するCDRを含む。
の重鎖可変ドメイン配列またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号1のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。実施形態において、メソテリンに対する抗体分子は、Fabであり、アミノ酸配列:
またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号5のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を有する重鎖定常領域(CH1)をさらに含む。ある実施形態において、抗体分子は、シグナルペプチド、例えば、アミノ酸配列:MEFGLSWVFLVALFRGVQC(配列番号6)を含むシグナルペプチドをさらに含む。
の軽鎖可変ドメイン配列からの1つ、2つ、3つのCDR、または密接に関連したCDR、例えば配列番号7のCDR配列からの少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、2つ、3つまたは4つ以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するCDRを含む。
の軽鎖可変ドメイン配列またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号7のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号11のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域(CL1)をさらに含む。実施形態において、抗体分子は、シグナルペプチド、例えば、アミノ酸配列:MKYLLPTAAAGLLLLAAQPAMA(配列番号12)を含むシグナルペプチドをさらに含む。
またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号14のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を有する重鎖定常領域(CH1)をさらに含む。実施形態において、抗体分子は、シグナルペプチド、例えば、アミノ酸配列:MEFGLSWVFLVALFRGVQCEV(配列番号15)を含むシグナルペプチドをさらに含む。
またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号11のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域(CL1)をさらに含む。ある実施形態において、抗体分子は、シグナルペプチド、例えば、アミノ酸配列:MKYLLPTAAAGLLLLAAQPAMA(配列番号12)を含むシグナルペプチドをさらに含む。
一実施形態において、NK細胞エンゲージャは、B7−6であるNKp30のリガンドであり、例えば、
のアミノ酸配列、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号24のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
(i)MICAは、アミノ酸配列:
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号25のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含み;
(ii)MICBは、アミノ酸配列:
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号26のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含み;または
(iii)ULBP1は、アミノ酸配列:
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号27のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
(i)NECTIN2は、アミノ酸配列:
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号28のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含み;または
(ii)NECL5は、アミノ酸配列:
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号29のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号30のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号31のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号32のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号29のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号33のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号34のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号35のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号36のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号37のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号38のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む41BBリガンドを含む。
ある実施形態において、本明細書に開示される多重特異性分子は、サイトカイン分子を含む。実施形態において、サイトカイン分子は、サイトカインの完全長、断片もしくは変異体;サイトカイン受容体ドメイン、例えばサイトカイン受容体二量体化ドメイン;またはサイトカイン受容体のアゴニスト、例えばサイトカイン受容体に対する抗体分子(例えば、作動性抗体)を含む。ある実施形態において、サイトカインは、一本鎖である。ある実施形態において、サイトカインは、2つまたは2つ以上のポリペプチド鎖を含む。例示的な多連鎖サイトカイン分子は、IL12である。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号17のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号40のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。ある実施形態において、多重特異性分子のサイトカイン分子(例えば、IL−15)および受容体二量体化ドメイン(例えば、IL15Rα二量体化ドメイン)は、例えば、リンカー(例えば、Gly−Serリンカー、例えばアミノ酸配列SGGSGGGGSGGGSGGGGSLQ(配列番号19)を含むリンカーを介して、共有結合される。他の実施形態において、多重特異性分子のサイトカイン分子(例えば、IL−15)および受容体二量体化ドメイン(例えば、IL15Rα二量体化ドメイン)は、共有結合されず、例えば非共有結合的に結合される。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号20のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む)。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号41のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む)。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号22のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む)。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号23のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む)。
本明細書に開示される多重特異性分子は、リンカー、例えば標的化部分およびサイトカイン分子、標的化部分および免疫細胞エンゲージャ、サイトカイン分子および免疫細胞エンゲージャ、サイトカイン分子および免疫グロブリン鎖定常領域(例えば、Fc領域)、標的化部分および免疫グロブリン鎖定常領域、または免疫細胞エンゲージャおよび免疫グロブリン鎖定常領域の1つまたは複数の間のリンカーをさらに含み得る。実施形態において、切断可能なリンカー、切断不可能なリンカー、ペプチドリンカー、フレキシブルリンカー、剛性リンカー、らせん状リンカーもしくは非らせん状リンカーまたはその組合せから選択されるリンカーである。
ある実施形態において、本明細書に開示される多重特異性分子のいずれかは、
(I)以下を含む腫瘍標的化部分:
(a)メソテリン、GD2、PMSA、CEA、Ronキナーゼ、またはc−Metから選択される固形腫瘍抗原に対する抗体分子;および/または
(b)FAP、ヒアルロン酸、コラーゲンIV、テネイシンC、またはテネイシンWから選択される、間質抗原に対する抗体分子;または
(c)固形腫瘍抗原に対する抗体分子と、間質抗原に対する抗体分子との組合せ;および
(II)以下の一方または両方:
(a)CD40LもしくはCD70リガンド;CD40もしくはCD70に結合する抗体分子;OX40に対する抗体分子;OX40L;B7H6、41BBリガンド(41BBL)もしくはSTINGアゴニストまたはその組合せの1つ、2つ、3つまたは全てから選択される免疫細胞エンゲージャ;または
(b)IL−2、IL−12、IL−15、IL−18、IL−7もしくはIL−21、その断片もしくは変異体、またはサイトカイン受容体に対する抗体分子(例えば、IL−15Ra、またはIL−21Rに対する抗体(例えば、作動性抗体))、あるいは上記のいずれかの組合せから選択されるサイトカイン分子
を含み得る。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号46のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号47のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号48のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号49のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号50のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号51のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号52のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む)。
以下を含む第1のアミノ酸配列:
またはそれと実質的に相同のアミノ酸配列(ここで、アミノ酸配列は、IL−15ポリペプチド、リンカー、および免疫グロブリンFcを含む);
以下を含む第2のアミノ酸配列:
またはそれと実質的に相同のアミノ酸配列(ここで、アミノ酸配列は、Fabの抗FAP重鎖および免疫グロブリンFcを含む);および
以下を含む第3のアミノ酸配列:
またはそれと実質的に相同のアミノ酸配列)(ここで、アミノ酸配列は、抗FAP Fabのヒトκ軽鎖を含む)
を含む多重特異性分子を特徴とする。
以下を含む第1のアミノ酸配列:
またはそれと実質的に相同のアミノ酸配列(ここで、アミノ酸配列は、リーダーペプチド、IL−15、リンカー、および免疫グロブリンFcを含む);
以下を含む第2のアミノ酸配列:
またはそれと実質的に相同のアミノ酸配列(ここで、アミノ酸配列は、リーダーペプチド、Fabの抗FAP重鎖および免疫グロブリンFcを含む);および
以下を含む第3のアミノ酸配列:
またはそれと実質的に相同のアミノ酸配列(ここで、アミノ酸配列は、リーダーペプチドおよび抗FAP Fabのヒトκ軽鎖を含む)
を含む多重特異性分子を特徴とする。
以下を含む第1のアミノ酸配列:
またはそれと実質的に相同のアミノ酸配列(ここで、アミノ酸配列は、Fabの抗メソテリン重鎖、リンカー、およびIL−15を含む);および
以下を含む第2のアミノ酸配列:
またはそれと実質的に相同のアミノ酸配列(ここで、アミノ酸配列は、抗メソテリンFabのヒトκ軽鎖、リンカー、およびCD40Lを含む)
を含む多重特異性分子を特徴とする。
以下を含む第1のアミノ酸配列:
またはそれと実質的に相同のアミノ酸配列(ここで、アミノ酸配列は、リーダーペプチド、Fabの抗メソテリン重鎖、リンカー、およびIL−15を含む);および
以下を含む第2のアミノ酸配列:
またはそれと実質的に相同のアミノ酸配列(ここで、アミノ酸配列は、リーダーペプチド、抗メソテリンFabのヒトκ軽鎖、リンカー、およびCD40Lを含む)
を含む多重特異性分子を特徴とする。
以下を含む第1のアミノ酸配列:
またはそれと実質的に相同のアミノ酸配列(ここで、アミノ酸配列は、IL−15、リンカー、および免疫グロブリンFc、リンカー、およびCD40Lを含む);
以下を含む第2のアミノ酸配列:
またはそれと実質的に相同のアミノ酸配列(ここで、アミノ酸配列は、Fabの抗B7H6重鎖および免疫グロブリンFc、リンカー、およびB7H6を含む);および
以下を含む第3のアミノ酸配列:
またはそれと実質的に相同のアミノ酸配列(ここで、アミノ酸配列は、抗FAP Fabのヒトκ軽鎖を含む)
を含む多重特異性分子を特徴とする。
以下を含む第1のアミノ酸配列:
またはそれと実質的に相同のアミノ酸配列(ここで、アミノ酸配列は、リーダーペプチド、IL−15、リンカー、および免疫グロブリンFc、リンカー、およびCD40Lを含む);
以下を含む(またはそれと実質的に相同の)第2のアミノ酸配列:
またはそれと実質的に相同のアミノ酸配列(ここで、アミノ酸配列は、リーダーペプチド、Fabの抗FAP重鎖および免疫グロブリンFc、リンカー、およびB7H6を含む);および
以下を含む第3のアミノ酸配列:
またはそれと実質的に相同のアミノ酸配列(ここで、アミノ酸配列は、リーダーペプチドおよび抗FAP Fabのヒトκ軽鎖を含む)
を含む多重特異性分子を特徴とする。
本開示は、特に(i)間質調節部分および(ii)腫瘍抗原または間質抗原に結合する腫瘍標的化部分(例えば、抗体分子、リガンド分子、または受容体分子)を含む、新規な多機能性、例えば多重特異性分子に関する。理論に制約されるものではないが、本明細書に開示される多機能性分子は、特に癌部位を標的化(例えば、それに局在化)し、腫瘍間質を変化させ、例えば癌部位の近くの腫瘍微小環境を変化させるものと考えられる。多機能性分子は、免疫細胞エンゲージャ(例えば、NK細胞エンゲージャ、T細胞エンゲージャ、B細胞エンゲージャ、樹枝状細胞エンゲージャまたはマクロファージ細胞エンゲージャの1つ、2つ、3つまたは全てから選択される);および/またはサイトカイン分子の一方または両方をさらに含み得る。したがって、特に上記の部分を含む多機能性、例えば多重特異性分子、それをコードする核酸、上記の分子を生成する方法、および上記の分子を用いて癌を治療する方法が本明細書において提供される。
(i)例えば、NK細胞エンゲージャ、T細胞エンゲージャ、B細胞エンゲージャ、樹枝状細胞エンゲージャまたはマクロファージ細胞エンゲージャの1つ、2つ、3つまたは全てから選択される免疫細胞エンゲージャ;または
(ii)サイトカイン分子
をさらに含む。
(i)1つの腫瘍標的化部分、1つの間質調節部分および1つの免疫細胞エンゲージャ;
(ii)1つの腫瘍標的化部分、1つの間質調節部分および1つのサイトカイン分子;
(iii)1つの腫瘍標的化部分、1つの間質調節部分および2つの免疫細胞エンゲージャ(例えば、同じかまたは異なる免疫細胞エンゲージャ);
(iv)1つの腫瘍標的化部分、1つの間質調節部分および2つのサイトカイン(例えば、同じかまたは異なるサイトカイン);
(v)1つの腫瘍標的化部分、1つの間質調節部分、1つの免疫細胞エンゲージャ、および1つのサイトカイン分子;
(vi)2つの腫瘍標的化部分(例えば、同じかまたは異なる標的化部分)および1つの間質調節部分;
(vii)1つの腫瘍標的化部分および2つの間質調節部分(例えば、同じかまたは異なる間質調節部分);
(viii)2つの腫瘍標的化部分(例えば、同じかまたは異なる標的化部分)、1つの間質調節部分および1つの免疫細胞エンゲージャ;
(ix)2つの腫瘍標的化部分(例えば、同じかまたは異なる標的化部分)、1つの間質調節部分および1つのサイトカイン分子;
(x)1つの腫瘍標的化部分、2つの間質調節部分(例えば、同じかまたは異なる間質調節部分)および1つの免疫細胞エンゲージャ;および
(xi)1つの腫瘍標的化部分、2つの間質調節部分(例えば、同じかまたは異なる間質調節部分)および1つのサイトカイン分子
を含む。
ある実施形態において、間質調節部分は、間質または細胞外基質(ECM)成分のレベルもしくは産生の減少;腫瘍線維化の減少;間質腫瘍輸送の増加;腫瘍灌流の改善;腫瘍微小血管系の拡張;腫瘍における間質液圧(IFP)の低下または腫瘍もしくは腫瘍血管系への薬剤、例えば癌治療薬もしくは細胞療法薬の浸透もしくは拡散の減少または促進の1つまたは複数を引き起こす。
、またはその断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号61のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
(i)配列番号61の36−464のアミノ酸配列;
(ii)配列番号61に記載されるアミノ酸の配列を有するPH20の36−481、36−482、または36−483のアミノ酸配列;または
(iii)配列番号61に記載されるアミノ酸の配列のポリペプチドまたは切断型に対する少なくとも95%〜100%の配列同一性を有するアミノ酸配列;または
(iv)配列番号61に記載されるアミノ酸配列に対する30、20、10、5またはそれよりも少ないアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。ある実施形態において、ヒアルロニダーゼ分子は、配列番号61のアミノ酸配列に対して少なくとも95%(例えば、少なくとも95%、96%、97%、98%、99%、100%)同一のアミノ酸配列を含む。ある実施形態において、ヒアルロニダーゼ分子は、配列番号61のヌクレオチド配列に対して少なくとも95%(例えば、少なくとも96%、97%、98%、99%、100%)同一のヌクレオチド配列によってコードされる。
、またはその断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号62のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
のアミノ酸配列、またはその断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号63のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含むコラゲナーゼ分子IVである。
ある実施形態において、腫瘍標的化部分は、メソテリンに結合する抗体分子(例えば、FabまたはscFv)を含む。ある実施形態において、メソテリンに対する抗体分子は、
の重鎖可変ドメイン配列からの1つ、2つ、3つのCDR、または密接に関連したCDR、例えば配列番号1のCDR配列からの少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、2つ、3つまたは4つ以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するCDRを含む。
の重鎖可変ドメイン配列またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号1のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号5のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を有する重鎖定常領域(CH1)をさらに含む。
の軽鎖可変ドメイン配列からの1つ、2つ、3つのCDR、または密接に関連したCDR、例えば配列番号7のCDR配列からの少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、2つ、3つまたは4つ以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するCDRを含む。
の軽鎖可変ドメイン配列またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号7のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号11のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域(CL1)をさらに含む。
の重鎖可変ドメイン配列からの1つ、2つ、3つのCDR、または密接に関連したCDR、例えば配列番号65のCDR配列からの少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、2つ、3つまたは4つ以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するCDRを含む。
の重鎖可変ドメイン配列またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号65のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号14のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を有する重鎖定常領域(CH1)をさらに含む。
の軽鎖可変ドメイン配列からの1つ、2つ、3つのCDR、または密接に関連したCDR、例えば配列番号69のCDR配列からの少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、2つ、3つまたは4つ以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するCDRを含む。
(配列番号69の軽鎖可変ドメイン配列またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号69のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号11のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域(CL1)をさらに含む。
ある実施形態において、NKp30のリガンドは、B7−6であり、例えば、
のアミノ酸配列、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号24のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号25のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含み;
(ii)MICBは、アミノ酸配列:
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号26のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含み;または
(iii)ULBP1は、アミノ酸配列:
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号27のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
(i)NECTIN2は、アミノ酸配列:
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号28のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含み;または
(ii)NECL5は、アミノ酸配列:
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号29のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号30のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号31のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号32のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号29のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号33のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号34のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号35のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号36のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号37のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号38のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む、41BBリガンドを含む。
一実施形態において、サイトカイン分子は、IL−15、例えばヒトIL−15である(例えば、アミノ酸配列:
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号17のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号73のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。ある実施形態において、多重特異性分子のサイトカイン分子(例えば、IL−15)および受容体二量体化ドメイン(例えば、IL15Rα二量体化ドメイン)は、例えば、リンカー(例えば、Gly−Serリンカー、例えばアミノ酸配列SGGSGGGGSGGGSGGGGSLQ(配列番号19)を含むリンカーを介して、共有結合される。他の実施形態において、多重特異性分子のサイトカイン分子(例えば、IL−15)および受容体二量体化ドメイン(例えば、IL15Rα二量体化ドメイン)は、共有結合されず、例えば非共有結合的に結合される。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号20のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む)。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号74のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む)。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号22のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む)。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号23のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む)。
ある実施形態において、多機能性分子は、リンカー、例えば腫瘍標的化部分および間質調節部分、サイトカイン分子および免疫グロブリン鎖定常領域(例えば、Fc領域)、標的化部分および免疫グロブリン鎖定常領域、または免疫細胞エンゲージャおよび免疫グロブリン鎖定常領域間のリンカーをさらに含む。
ある実施形態において、多機能性分子は、一本鎖抗体分子、例えば単一ドメイン抗体、scFv、ラクダ科、またはサメ抗体、および第2の部分を含む。ある実施形態において、多機能性分子は、NからCの配向で、任意選択的にリンカーを介して、第2の部分に連結されるscFvのVHからVLを含み(例えば、図1Aおよび1Bに示されるように);scFvは、第1の結合特異性を形成し得る(図1A〜1Bに結合部分「1」として示される)。ある実施形態において、第2の部分(図1A〜1BにパートナーAとして示される)は、N−からC−の配向で、scFvのVH領域の前に(例えば、図1Aに示されるように)、またはN−からC−の配向で、scFvのVL領域の後に配置され(例えば、図1Bに示されるように);第2の部分は、第2の結合特異性を形成し得る(図1A〜1Bに結合部分「2」として示される)。他の実施形態において、多機能性分子は、NからCの配向で、任意選択的にリンカーを介して、第2の部分に連結されるscFvのVLからVHを含み(例えば、図2Aおよび2Bに示されるように);scFvは、第1の結合特異性を形成し得る(図2A〜2Bに結合部分「1」として示される)。ある実施形態において、第2の部分(図2A〜2BにパートナーAとして示される)は、N−からC−の配向で、scFvのVL領域の前に(例えば、図2Aに示されるように)、またはN−からC−の配向で、scFvのVH領域の後に配置され(例えば、図2Bに示されるように)、第2の部分は、第2の結合特異性を形成し得る(図2A〜2Bに結合部分「2」として示される)。実施形態において、scFvは、腫瘍標的化部分であり得(例えば、癌抗原、例えば固形腫瘍、間質、または血液抗原に結合する)、または免疫細胞エンゲージャであり得る(例えば、免疫細胞抗原に結合する)。他の実施形態において、第2の部分(例えば、図1A〜1Bまたは2A〜2BにパートナーAとして示される)は、例えば、本明細書に記載されるような間質調節である。
(i)第1のポリペプチドは、N−からC−の配向で、第1の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第1のFc領域)を含み;および
(ii)第2のポリペプチドは、N−からC−の配向で、第2の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第2のFc領域)を含む。
(i)第1のポリペプチドは、N−からC−の配向で、任意選択的にリンカーを介して、第1の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第1のFc領域)に連結される、第1の結合および/または機能的特異性、例えば第1の抗体分子を含み;
(ii)第2のポリペプチドは、N−からC−の配向で、第2の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第2のFc領域)を含み;および
(任意選択的に)(iii)第3のポリペプチドは、第1の抗体分子または第2の抗体分子の一部を含む。
(a)任意選択的にリンカーを介して、第1の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第1のFc領域)に連結される、第1の抗原ドメインの第1の部分、例えば癌抗原、例えば固形腫瘍、間質または血液抗原に結合する、例えばFab分子の第1のVH−CH1(例えば、結合部位#1);
(b)任意選択的にリンカーを介して、第2の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第2のFc領域)に連結される間質調節部分である第2の結合および/または機能的特異性(例えば、第2の結合部位)
を有し;および
(c)第3のポリペプチドは、N−から−Cに以下の立体配置:第1の抗原ドメインの第2の部分、例えば癌抗原、例えば固形腫瘍、間質または血液抗原(例えば、第1のVH−CH1、例えば、結合部位#1によって結合される同じ癌抗原)に結合する、例えばFabの第1のVL−CLを有する(例えば、この立体配置の例が図7に示される)。
(i)任意選択的にリンカーを介して、第2の結合および/または機能的特異性(例えば、結合部位#3、例えば、サイトカイン、リガンドまたは第2の抗体分子、例えばscFv)に連結される、第1の抗原ドメインの第1の部分、例えば癌抗原に結合する、例えばFab分子の第1のVH−CH1(例えば、結合部位#1)を有し;および
(ii)第2のポリペプチドは、N−から−Cに以下の立体配置:任意選択的にリンカーを介して、第3の結合および/または機能的特異性に連結される、第1の抗原ドメインの第2の部分、例えば腫瘍または間質抗原(例えば、第1のVH−CH1、例えば、結合部位#1によって結合される同じ腫瘍または間質抗原)に結合する、例えばFabの第1のVL−CL(例えば、結合部位#2、例えば、間質調節部分)を有する(例えば、この立体配置の例が図18に示される。
(i)第1のポリペプチドは、N−からC−の配向で、任意選択的にリンカーを介して、第1の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第1のFc領域)に連結される、第1の結合特異性、例えば第1の抗体分子を含み;
(ii)第2のポリペプチドは、N−からC−の配向で、任意選択的にリンカーを介して、第2の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第2のFc領域)に連結される第2の結合特異性を含み;および
(任意選択的に)(iii)第3のポリペプチドは、第1の抗体分子または第2の抗体分子の一部を含み、
第1または第2のポリペプチドのいずれかは、第3の結合および/または機能的特異性をさらに含む。
(a)任意選択的にリンカーを介して、第1の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第1のFc領域)に連結される、第1の抗原ドメインの第1の部分、例えば腫瘍または間質抗原に結合する、例えばFab分子の第1のVH−CH1(例えば、結合部位#1);
(b)任意選択的にリンカーを介して、第2の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第2のFc領域)に連結される、サイトカイン分子、または免疫細胞エンゲージャから選択される第2の結合および/または機能的特異性(例えば、第2の結合部位)
を有し;および
(c)第3のポリペプチドは、N−から−Cに以下の立体配置:第1の抗原ドメインの第2の部分、例えば腫瘍または間質抗原(例えば、第1のVH−CH1、例えば、結合部位#1によって結合される同じ腫瘍または間質抗原)に結合する、例えばFabの第1のVL−CLを有し、
第1または第2のポリペプチドのいずれかは、任意選択的にリンカーを介して、第1または第2の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第1または第2のFc領域)に連結される第3の結合および/または機能的特異性をさらに含む。一実施形態において、第3の結合特異性は、任意選択的にリンカーを介して、第1の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第1のFc領域)に連結される。別の実施形態において、第3の結合特異性は、任意選択的にリンカーを介して、第2の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第2のFc領域)に連結される。これらの立体配置の例が図19A〜19Bに示される。
(i)第1のポリペプチドは、N−からC−の配向で、任意選択的にリンカーを介して、第1の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第1のFc領域)に連結される、第1の結合および/または機能的特異性、例えば第1の抗体分子を含み;
(ii)第2のポリペプチドは、N−からC−の配向で、任意選択的にリンカーを介して、第2の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第2のFc領域)に連結される第2の結合および/または機能的特異性を含み;および
(任意選択的に)(iii)第3のポリペプチドは、第1の抗体分子または第2の抗体分子の一部を含み、
第1または第2のポリペプチドは、第3および第4の結合および/または機能的特異性をさらに含む。
(a)任意選択的にリンカーを介して、第1の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第1のFc領域)に連結される、第1の抗原ドメインの第1の部分、例えば腫瘍または間質抗原に結合する、例えばFab分子の第1のVH−CH1(例えば、結合部位#1);
(b)任意選択的にリンカーを介して、第2の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第2のFc領域)に連結される、サイトカイン分子、または免疫細胞エンゲージャから選択される第2の結合および/または機能的特異性(例えば、第2の結合部位)
を有し;および
(c)第3のポリペプチドは、N−から−Cに以下の立体配置:第1の抗原ドメインの第2の部分、例えば腫瘍または間質抗原(例えば、第1のVH−CH1、例えば、結合部位#1によって結合される同じ腫瘍または間質抗原)に結合する、例えばFabの第1のVL−CLを有し、
第1および第2のポリペプチドは、それぞれ第3および第4の結合および/または機能的特異性をさらに含み、これらのそれぞれは、任意選択的にリンカーを介して、第1および第2の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第1および第2のFc領域)に連結される。一実施形態において、第3の結合および/または機能的特異性は、任意選択的にリンカーを介して、第2の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第2のFc領域)に連結され;第4の結合および/または機能的特異性は、任意選択的にリンカーを介して、第1の免疫グロブリン定常領域(例えば、CH3領域に連結されたCH2)(例えば、第1のFc領域)に連結される。これらの立体配置の例が図20に示される。
R1−(任意選択的にL1)−R2;
R2−(任意選択的にL1)−R1;
(i)R1は、1つ、2つまたはそれを超える間質調節部分、例えば本明細書に記載される同じかまたは異なる間質調節部分を含み;
(ii)R2は、1つ、2つまたはそれを超える腫瘍標的化部分、例えば本明細書に記載される同じかまたは異なる腫瘍標的化部分を含み;および
(iii)任意選択的に、L1は、リンカー(例えば、本明細書に記載されるリンカー)である。
R1−(任意選択的にL1)−R2−(任意選択的にL2)−R3/R4;
R1−(任意選択的にL1)−R3/R4−(任意選択的にL2)−R2;
R2−(任意選択的にL1)−R1−(任意選択的にL2)−R3/R4;
R2−(任意選択的にL1)−R3/R4−(任意選択的にL2)−R1;
R3/R4−(任意選択的にL1)−R1−(任意選択的にL2)−R2;または
R3/R4−(任意選択的にL1)−R2−(任意選択的にL2)−R1;
(i)R1は、1つ、2つまたはそれを超える間質調節部分(例えば、本明細書に記載される部分)(例えば、同じかまたは異なる間質調節部分)を含み;
(ii)R2は、1つ、2つまたはそれを超える腫瘍標的化部分(例えば、本明細書に記載される部分)(例えば、同じかまたは異なる腫瘍標的化部分)を含み;
(iii)R3は、1つ、2つまたはそれを超えるサイトカイン分子、例えばサイトカイン分子(例えば、本明細書に記載されるサイトカイン分子)(例えば、同じかまたは異なるサイトカイン分子)を含み;
(iv)R4は、1つ、2つまたはそれを超える免疫細胞エンゲージャ(例えば、NK細胞エンゲージャ、T細胞エンゲージャ、B細胞エンゲージャ、樹枝状細胞エンゲージャまたはマクロファージ細胞エンゲージャ(例えば、本明細書に記載される免疫細胞エンゲージャ))を含み;
R3およびR4は、両方とも存在し;
R3は存在し、R4は存在せず;
R4は存在し、R3は存在せず;および
任意選択的に、L1および/またはL2は、リンカー(例えば、本明細書に記載されるリンカー)である。
(i)任意選択的に、Fabと間質調節部分との間に、Gly−Serリンカーを含む、N末端からC末端に、腫瘍または間質抗原に結合するFabの重鎖(例えば、VH−CH1)に連結される間質調節部分;および/または
(ii)N末端からC末端に、Fabの軽鎖(例えば、VL−CL1)を有する。
その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号79のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列;および
例えば、以下を含むヒアルロニダーゼ分子またはコラゲナーゼ分子IVの一方または両方:
(i)以下のヒアルロニダーゼ分子アミノ酸配列
、またはその断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号62のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列;または
(ii)以下のコラゲナーゼ分子アミノ酸配列
配列番号63、またはその断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号63のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含み、任意選択的に、Fabと、ヒアルロニダーゼ分子またはコラゲナーゼ分子IVとの間にGly−Serリンカーを含む。
、またはその断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号80のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、またはその断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号81のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列;および
例えば、以下を含む、ヒアルロニダーゼ分子またはコラゲナーゼ分子IVの一方または両方:
(i)以下のヒアルロニダーゼ分子アミノ酸配列:
、またはその断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号62のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列;または
(ii)以下のコラゲナーゼ分子アミノ酸配列
配列番号63、またはその断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号63のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含み、任意選択的に、Fabと、ヒアルロニダーゼ分子またはコラゲナーゼIV分子との間にGly−Serリンカーを含む。VHのアミノ酸配列には下線が引かれ、CH1のアミノ酸配列は、下線なしで示される。
、またはその断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号49のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。VLのアミノ酸配列には下線が引かれ、CL1のアミノ酸配列は、下線なしで示される。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号82のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
、その断片またはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号83のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10または15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む。
本発明はまた、本明細書に記載されるような抗体分子の重鎖および軽鎖可変領域およびCDRまたは高度可変ループをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を特徴とする。例えば、本発明は、本明細書に開示される抗体分子の1つまたは複数から選択される抗体分子の重鎖および軽鎖可変領域をそれぞれコードする第1および第2の核酸を特徴とする。核酸は、本明細書の表に記載されるヌクレオチド配列またはそれと実質的に同一の配列(例えば、それと少なくとも約85%、90%、95%、99%またはそれを超えて同一の配列、または本明細書の表に示される配列と3、6、15、30、または45ヌクレオチド以下だけ異なる配列を含み得る。
本明細書に記載される抗体分子をコードするヌクレオチド配列を含むベクターが本明細書においてさらに提供される。一実施形態において、ベクターは、本明細書に記載される抗体分子をコードするヌクレオチドを含む。一実施形態において、ベクターは、本明細書に記載されるヌクレオチド配列を含む。ベクターとしては、限定はされないが、ウイルス、プラスミド、コスミド、λファージまたは酵母人工染色体(YAC)が挙げられる。
別の態様において、本出願は、本明細書に記載される核酸を含有する宿主細胞およびベクターを特徴とする。核酸は、同じ宿主細胞または別個の宿主細胞中に存在する単一のベクターまたは別個のベクター中に存在し得る。宿主細胞は、真核細胞、例えば哺乳動物細胞、昆虫細胞、酵母細胞、または原核細胞、例えば大腸菌(E.coli)であり得る。えば、哺乳動物細胞は、培養細胞または細胞株であり得る。例示的な哺乳類細胞としては、リンパ球細胞株(例えば、NSO)、チャイニーズハムスター卵巣細胞(CHO)、COS細胞、卵母細胞およびトランスジェニック動物に由来する細胞、例えば乳房上皮細胞が挙げられる。
本明細書に記載される方法は、本明細書に記載される多重特異性分子を用いることにより、例えば、本明細書に記載される医薬組成物を用いることにより、対象における癌を治療することを含む。対象における癌の症状を軽減または改善するための方法、ならびに癌の増殖を抑制し、および/または1つまたは複数の癌細胞を殺滅するための方法も提供される。実施形態において、本明細書に記載される方法は、本明細書に記載されるまたは本明細書に記載される医薬組成物を投与された対象における、腫瘍のサイズを減少させ、および/または癌細胞の数を減少させる。
本明細書に開示される多重特異性分子は、第2の治療剤または手順と組み合わせて使用され得る。
他の実施形態において、多重特異性分子は、低または小分子量化学療法剤と組み合わせて投与される。例示的な低または小分子量化学療法剤としては、限定はされないが、13−シス−レチノイン酸(イソトレチノイン、ACCUTANE(登録商標))、2−CdA(2−クロロデオキシアデノシン、クラドリビン、LEUSTATIN(商標))、5−アザシチジン(アザシチジン、VIDAZA(登録商標))、5−フルオロウラシル(5−FU、フルオロウラシル、ADRUCIL(登録商標))、6−メルカプトプリン(6−MP、メルカプトプリン、PURINETHOL(登録商標))、6−TG(6−チオグアニン、チオグアニン、THIOGUANINE TABLOID(登録商標))、アブラキサン(タンパク結合パクリタキセル)、アクチノマイシン−D(ダクチノマイシン、COSMEGEN(登録商標))、アリトレチノイン(PANRETIN(登録商標))、オール−トランスレチノイン酸(ATRA、トレチノイン、VESANOID(登録商標))、アルトレタミン(ヘキサメチルメラミン、HMM、HEXALEN(登録商標))、アメトプテリン(メトトレキサート、メトトレキサートナトリウム、MTX、TREXALL(商標)、RHEUMATREX(登録商標))、アミホスチン(ETHYOL(登録商標))、アラビノシルシトシン(Ara−C、シタラビン、CYTOSAR−U(登録商標))、三酸化ヒ素(TRISENOX(登録商標))、アスパラギナーゼ(エルウィニアL−アスパラギナーゼ、L−アスパラギナーゼ、ELSPAR(登録商標)、KIDROLASE(登録商標))、BCNU(カルムスチン、BiCNU(登録商標))、ベンダムスチン(TREANDA(登録商標))、ベキサロテン(TARGRETIN(登録商標))、ブレオマイシン(BLENOXANE(登録商標))、ブスルファン(BUSULFEX(登録商標)、MYLERAN(登録商標))、カルシウムロイコボリン(シトロボラム因子、フォリン酸、ロイコボリン)、カンプトテシン−11(CPT−11、イリノテカン、CAMPTOSAR(登録商標))、カペシタビン(XELODA(登録商標))、カルボプラチン(PARAPLATIN(登録商標))、カルムスチンウェハー(カルムスチンインプラントを有するプロリフェプロスパン(prolifeprospan)20、GLIADEL(登録商標)ウェハー)、CCI−779(テムシロリムス、TORISEL(登録商標))、CCNU(ロムスチン、CeeNU)、CDDP(シスプラチン、PLATINOL(登録商標)、PLATINOL−AQ(登録商標))、クロラムブシル(ロイケラン)、シクロホスファミド(CYTOXAN(登録商標)、NEOSAR(登録商標))、ダカルバジン(DIC、DTIC、イミダゾールカルボキサミド、DTIC−DOME(登録商標))、ダウノマイシン(ダウノルビシン、ダウノルビシン塩酸塩、ルビドマイシン塩酸塩、CERUBIDINE(登録商標))、デシタビン(DACOGEN(登録商標))、デクスラゾキサン(ZINECARD(登録商標))、DHAD(ミトキサントロン、NOVANTRONE(登録商標))、ドセタキセル(TAXOTERE(登録商標))、ドキソルビシン(ADRIAMYCIN(登録商標)、RUBEX(登録商標))、エピルビシン(ELLENCE(商標))、エストラムスチン(EMCYT(登録商標))、エトポシド(VP−16、リン酸エトポシド、TOPOSAR(登録商標)、VEPESID(登録商標)、ETOPOPHOS(登録商標))、フロクスウリジン(FUDR(登録商標))、フルダラビン(FLUDARA(登録商標))、フルオロウラシル(クリーム)(CARAC(商標)、EFUDEX(登録商標)、FLUOROPLEX(登録商標))、ゲムシタビン(GEMZAR(登録商標))、ヒドロキシウレア(HYDREA(登録商標)、DROXIA(商標)、MYLOCEL(商標))、イダルビシン(IDAMYCIN(登録商標))、イホスファミド(IFEX(登録商標))、イクサベピロン(IXEMPRA(商標))、LCR(ロイロクリスチン(leurocristine)、ビンクリスチン、VCR、ONCOVIN(登録商標)、VINCASAR PFS(登録商標))、L−PAM(L−サルコリシン、メルファラン、フェニルアラニンマスタード、ALKERAN(登録商標))、メクロレタミン(メクロレタミン塩酸塩、ムスチン、ナイトロジェンマスタード、MUSTARGEN(登録商標))、メスナ(MESNEX(商標))、マイトマイシン(マイトマイシン−C、MTC、MUTAMYCIN(登録商標))、ネララビン(ARRANON(登録商標))、オキサリプラチン(ELOXATIN(商標))、パクリタキセル(TAXOL(登録商標)、ONXAL(商標))、ペガスパルガーゼ(PEG−L−アスパラギナーゼ、ONCOSPAR(登録商標))、ペメトレキセド(ALIMTA(登録商標))、ペントスタチン(NIPENT(登録商標))、プロカルバジン(MATULANE(登録商標))、ストレプトゾシン(ZANOSAR(登録商標))、テモゾロミド(TEMODAR(登録商標))、テニポシド(VM−26、VUMON(登録商標))、TESPA(チオホスファミド(thiophosphoamide)、チオテパ、TSPA、THIOPLEX(登録商標))、トポテカン(HYCAMTIN(登録商標))、ビンブラスチン(ビンブラスチン硫酸塩、ビンカレウコブラスチン、VLB、ALKABAN−AQ(登録商標)、VELBAN(登録商標))、ビノレルビン(ビノレルビン酒石酸塩、NAVELBINE(登録商標))、およびボリノスタット(ZOLINZA(登録商標))が挙げられる。
他の実施形態において、本明細書に記載される方法は、多重特異性分子と組み合わせた免疫チェックポイント阻害剤の使用を含む。本方法は、インビボで治療プロトコルに使用され得る。
一般的な方法:
1.プラスミドの構築
タンパク質配列をコードするDNAをモンゴルキヌゲネズミ(Cricetulus griseus)における発現について最適化し、合成し、Gatewayクローニングを用いて、pcDNA3.4−TOPO(Life Technologies A14697)へとクローニングした。全ての構築物は、Igκリーダー配列(配列番号84
、配列番号16METDTLLLWVLLLWVPGSTG)を含んでいた。使用される核酸配列は、表1に示される。
プラスミドを、Expi293細胞(Life Technologies A14527)またはExpiCHO細胞(Life Technologies A29127)のいずれかへと共トランスフェクトした。1:1のノブ対ホール重鎖比および3:2の軽鎖対重鎖比を用いて、多重特異性構築物のために1mgの全DNAを用いて、トランスフェクションを行った。ビオチン化が必要とされる場合、多重特異性構築物DNAに加えて、1リットル当たり250μgの配列番号226のBirAを加えた。Expi293細胞におけるトランスフェクションを、全DNAを用いて3:1の比率で直鎖状25,000Daポリエチレンイミン(PEI、Polysciences Inc 23966)を用いて行った。DNAおよびPEIをそれぞれ50mLのOptiMem(Life Technologies 31985088)培地に加え、滅菌ろ過した。DNAおよびPEIを、10分間組み合わせて、1.8〜2.8×106個の細胞/mLの細胞密度および少なくとも95%の生存率を有するExpi293細胞に加えた。ExpiCHOトランスフェクションを、製造業者の指示に従って行った。Expi293細胞を、トランスフェクション後5〜7日間にわたって8%のCO2により、37℃において、加湿したインキュベータ中で成長させ、ExpiCHO細胞を、5%のCO2により、32℃において14日間にわたって成長させた。細胞を、4500×gで遠心分離によってペレット化し、上清を0.2μmの膜に通してろ過した。プロテインA樹脂(GE 17−1279−03)を、ろ過された上清に加え、室温で1〜3時間インキュベートした。樹脂を、3×10カラム体積のダルベッコリン酸緩衝生理食塩水(DPBS、Life Technologies 14190−144)で洗浄されたカラムに充填した。結合タンパク質を、20mMのクエン酸塩、100mMのNaCl、pH2.9を含むカラムから溶出した。必要に応じて、DPBSの泳動用緩衝液を用いたSuperdex 200カラムにおいて、リガンド親和性および/またはサイズ排除クロマトグラフィーを用いて、タンパク質をさらに精製した。
ELISAアッセイを、Pierce 96ウェルストレプトアビジン被覆高容量プレート(15500)またはNunc−Immuno96ウェルマキシソーププレート(Invitrogen 44−2404−21)のいずれかを用いて行った。プレートを1×リン酸緩衝生理食塩水tween 20(Pierce 28352)で洗浄し、次に10μg/mLの捕捉タンパク質で被覆した。振とうしながら室温で2時間インキュベートした後、プレートを1×PBSTで洗浄し、分子を、1μM〜1pMの連続希釈を用いて行A〜Gに加えた。プレートを30分間インキュベートし、洗浄し、100μLの、ペルオキシダーゼがコンジュゲートされたaffinipureヤギ抗ヒトIgG(109−035−008)またはストレプトアビジン−HRP(R&D Systems DY998)のいずれかを各ウェルに加えた。プレートを振とうしながら30分間インキュベートし、洗浄し、100μLの1−step turbo TMB−ELISA基質溶液(Thermo Scientific 34022)を各ウェルに加えた。プレートを5分間インキュベートし、100μLの1MのHClを用いて反応を停止させ、SpectraMax i3xプレートリーダーにおける450nmでの吸光度を用いて、プレートを読み取った。
産生された構築物の活性を評価するために、BxPC3−ルシフェラーゼ細胞殺滅アッセイを行った。ルシフェラーゼ(Genecopia SCL−C012−HLG)を含有するBxPC3細胞を、1μg/mLのピューロマイシン(Gibco A1113802)とともに、RPMI 1640(Gibco 11875119)および10%のウシ胎仔血清(Gibco 10082147)中で成長させた。この細胞を用いて、1ウェル当たり15,000個の細胞で96ウェルプレートに播種した。1日インキュベートした後、培地を除去し、0.5%のPen/Strep(Gibco 15140122)を含む無血清培地RPMI1640と交換した。無血清培地中のPBMC(C.T.L.Lot # LP_123)を、450,000個の細胞/ウェルで96ウェルプレートの行A〜Gに加えた。化合物を、行A〜F中の1μM〜1pMの範囲の濃度において3連でカラムに加えた。プレートを測定前に6または24時間インキュベートした。細胞殺滅測定へと進む前に120μLを各ウェルから取り出し、96ウェル低結合タンパク質プレートに加えた。これにより80μLがプレートに残り、80μLのBright−Glo(Promega E2610)を各ウェルに加えた。次に、SpectraMax i3xプレートリーダーにおいてプレートを読み取った。
サイトカイン放出アッセイのために、細胞殺滅プレートから取り出した上清を、quansys洗浄緩衝液で5倍に希釈した。QuansysヒトIFNγ(Quansys 464649HU)singleplexアッセイキットについて、製造業者の指示に従った。プレートをBioRad ChemiDoc XRS+において撮像し、Quansys Q−viewソフトウェアを用いて分析した。
3つの異なるタンパク質鎖:配列番号168、配列番号169、および配列番号196を含む、メソテリンを標的化するFabアームおよびIL2エフェクターアームを含有する多重特異性分子1を、細胞に、配列番号116、配列番号118、および配列番号119を共トランスフェクトすることによって発現させた。多重特異性分子1を精製し、最終産物のSDS−PAGEゲルが図21に示される。図43は、多重特異性分子1のサイズ排除クロマトグラムを示す。配列番号181のヒトメソテリンを用いて行われたELISAにより、112pMのEC50が得られた(図48)。図53は、配列番号182のヒトIL2受容体αとの結合を評価し、111pMのEC50が得られたことを示す。細胞殺滅アッセイにおけるEC50は、79pMであった(図58)。図59は、アッセイにおける多重特異性分子1についてのIFNγのサイトカイン放出データを示す。
配列番号174、配列番号169、配列番号196を含む、メソテリンを標的化するFabアーム、IL2エフェクターアーム、および抗NKp30 NK細胞エンゲージャを含有する多重特異性分子2を、細胞に、配列番号117、配列番号118、および配列番号119を共トランスフェクトすることによって発現させた。多重特異性分子2を精製し、最終産物のSDS−PAGEゲルが図22に示される。配列番号181のヒトメソテリンを用いて行われたELISAにより、1.38nMのEC50が得られた(図48)。図53は、154pMのEC50で、配列番号182のヒトIL2受容体αとの結合を示す。配列番号180から生成されるヒトNKp30との結合により、230nMのEC50が得られた(図55)。細胞殺滅アッセイにおけるEC50は、4.7pMであった(図58)。図59は、アッセイにおける多重特異性分子2についてのIFNγのサイトカイン放出データを示す。
配列番号174、配列番号169、および配列番号197を含む、メソテリン標的化アームおよび抗NKp30 NK細胞エンゲージャを含有する多重特異性分子3を、細胞に、配列番号117、配列番号118、および配列番号125を共トランスフェクトすることによって発現させた。多重特異性分子3を精製し、最終産物のSDS−PAGEゲルが図23に示される。配列番号181のヒトメソテリンを用いて行われたELISAにより、152pMのEC50が得られた(図48)。配列番号180から生成されるヒトNKp30との結合により、93.4nMのEC50が得られた(図55)。細胞殺滅アッセイにおけるEC50は、5.9pMであった(図58)。図59は、アッセイにおける多重特異性分子3についてのIFNγのサイトカイン放出データを示す。
配列番号176および配列番号196を含む、IL2エフェクターアームを含有する多重特異性分子4を、細胞に、配列番号124および配列番号119を共トランスフェクトすることによって発現させた。多重特異性分子4を精製し、最終産物のSDS−PAGEゲルが図24に示される。図53は、配列番号182のヒトIL2受容体αとの結合を評価し、110pMのEC50が得られたことを示す。細胞殺滅アッセイにおけるEC50は、41pMであった(図58)。図59は、アッセイにおける多重特異性分子4についてのIFNγのサイトカイン放出データを示す。
配列番号172、配列番号173、配列番号192、および配列番号171を含む、メソテリン標的化アームおよびPDL1標的化アームを含有する多重特異性分子5を、細胞に、配列番号122、配列番号123、配列番号135、および配列番号121を共トランスフェクトすることによって発現させた。多重特異性分子5を精製し、最終産物のSDS−PAGEゲルが図25に示される。図44は、多重特異性分子5のサイズ排除クロマトグラムを示す。配列番号181のヒトメソテリンを用いて行われたELISAにより、163nMのEC50が得られた(図49)。配列番号178のヒトPDL1を用いて行われたELISAにより、250pMのEC50が得られた(図51)。多重特異性分子5は、細胞殺滅アッセイにおいて有意な効果を有さなかった(図60)。
配列番号172、配列番号173、配列番号177、および配列番号171を含む、メソテリン標的化アーム、PDL1標的化アーム、およびIL2エフェクターアームを含有する多重特異性分子6を、細胞に、配列番号122、配列番号123、配列番号120、および配列番号121を共トランスフェクトすることによって発現させた。多重特異性分子6を精製し、最終産物のSDS−PAGEゲルが図26に示される。配列番号181のヒトメソテリンを用いて行われたELISAにより、13.1nMのEC50が得られた(図49)。配列番号178のヒトPDL1を用いて行われたELISAにより、363pMのEC50が得られた(図51)。図54は、配列番号182のヒトIL2受容体αとの結合を評価し、156pMのEC50が得られたことを示す。多重特異性分子6は、図60に示される細胞殺滅アッセイにおいて、159pMのEC50を示した。
配列番号193、配列番号173、配列番号192、および配列番号171を含む、メソテリン標的化アーム、PDL1標的化アーム、および抗NKp46 NK細胞エンゲージャを含有する多重特異性分子7を、細胞に、配列番号136、配列番号123、配列番号135、および配列番号121を共トランスフェクトすることによって発現させた。多重特異性分子7を精製し、最終産物のSDS−PAGEゲルが図27に示される。配列番号181のヒトメソテリンを用いて行われたELISAにより、2.37nMのEC50が得られた(図49)。配列番号178のヒトPDL1を用いて行われたELISAにより、158pMのEC50が得られた(図51)。図56は、450pMのEC50で、配列番号179からのヒトNKp46との結合を示す。多重特異性分子7は、15pMのEC50で、細胞殺滅アッセイにおいて細胞の増殖を示した(図60)。
配列番号193、配列番号173、配列番号192、および配列番号171を含む、メソテリン標的化アーム、PDL1標的化アーム、IL2エフェクターアーム、および抗NKp46 NK細胞エンゲージャを含有する多重特異性分子8を、細胞に、配列番号136、配列番号123、配列番号135、および配列番号121を共トランスフェクトすることによって発現させた。多重特異性分子8を精製し、最終産物のSDS−PAGEゲルが図28に示される。配列番号181のヒトメソテリンを用いて行われたELISAにより、1.77nMのEC50が得られた(図49)。配列番号178のヒトPDL1を用いて行われたELISAにより、255pMのEC50が得られた(図52)。図54は、84pMのEC50で、配列番号182のヒトIL2受容体αとの結合を示す。図57は、670pMのEC50で、配列番号179からのヒトNKp46との結合を示す。多重特異性分子8は、44pMのEC50で、細胞殺滅アッセイにおいて細胞の増殖を示した(図60)。
配列番号193、配列番号173、配列番号192、および配列番号171を含む、メソテリン標的化アーム、PDL1標的化アーム、および抗NKp46 NK細胞エンゲージャを含有する多重特異性分子9を、細胞に、配列番号136、配列番号123、配列番号135、および配列番号121を共トランスフェクトすることによって発現させた。多重特異性分子9を精製し、最終産物のSDS−PAGEゲルが図29に示される。配列番号181のタンパク質1を用いて行われたELISAにより、275nMのEC50が得られた(図50)。配列番号178のヒトPDL1を用いて行われたELISAにより、124pMのEC50が得られた(図51)。図56は、6.2nMのEC50で、配列番号179からのヒトNKp46との結合を示す。多重特異性分子9は、84pMのEC50で、細胞殺滅アッセイにおいて細胞の増殖を示した(図)。
配列番号193、配列番号173、配列番号192、および配列番号171を含む、メソテリン標的化アーム、PDL1標的化アーム、IL2エフェクターアーム、および抗NKp46 NK細胞エンゲージャを含有する多重特異性分子10を、細胞に、配列番号136、配列番号123、配列番号135、および配列番号121を共トランスフェクトすることによって発現させた。多重特異性分子10を精製し、最終産物のSDS−PAGEゲルが図30に示される。配列番号181のヒトメソテリンを用いて行われたELISAにより、263nMのEC50が得られた(図50)。配列番号178のヒトPDL1を用いて行われたELISAにより、1.91nMのEC50が得られた(図52)。図54は、88pMのEC50で、配列番号182のヒトIL2受容体αとの結合を示す。図57は、1.8nMのEC50で、配列番号179からのヒトNKp46との結合を示す。多重特異性分子10は、35pMのEC50で、細胞殺滅アッセイにおいて細胞の増殖を示した(図61)。
配列番号193、配列番号173、配列番号192、および配列番号171を含む、メソテリン標的化アーム、PDL1標的化アーム、および抗NKp46 NK細胞エンゲージャを含有する多重特異性分子11を、細胞に、配列番号136、配列番号123、配列番号135、および配列番号121を共トランスフェクトすることによって発現させた。多重特異性分子11を精製し、最終産物のSDS−PAGEゲルが図31に示される。図45は、多重特異性分子11のサイズ排除クロマトグラムを示す。配列番号178のヒトPDL1を用いて行われたELISAにより、206pMのEC50が得られた(図52)。図56は、8.7nMのEC50で、配列番号179からのヒトNKp46との結合を示す。多重特異性分子11は、119pMのEC50で、細胞殺滅アッセイにおいて細胞の増殖を示した(図62)。
配列番号193、配列番号173、配列番号192、および配列番号171を含む、メソテリン標的化アーム、PDL1標的化アーム、IL2エフェクターアーム、および抗NKp46 NK細胞エンゲージャを含有する多重特異性分子12を、細胞に、配列番号136、配列番号123、配列番号135、および配列番号121を共トランスフェクトすることによって発現させた。多重特異性分子12を精製し、最終産物のSDS−PAGEゲルが図32に示される。図26は、多重特異性分子12のサイズ排除クロマトグラムを示す。配列番号181のヒトメソテリンを用いて行われたELISAにより、216nMのEC50が得られた(図50)。配列番号178のヒトPDL1を用いて行われたELISAにより、1.82nMのEC50が得られた(図52)。図54は、107pMのEC50で、配列番号182のヒトIL2受容体αとの結合を示す。図57は、19.3nMのEC50で、配列番号179からのヒトNKp46との結合を示す。多重特異性分子12は、16pMのEC50で、細胞殺滅アッセイにおいて細胞の増殖を示した(図62)。
配列番号187、配列番号185、および配列番号184を含む、HER3標的化アーム、IGF1R標的化アーム、およびIL2エフェクターアームを含有する多重特異性分子13を、細胞に、配列番号DNA BH022、配列番号128、および配列番号127を共トランスフェクトすることによって発現させた。多重特異性分子13を精製し、最終産物のSDS−PAGEゲルが図33に示される。図47は、多重特異性分子13のサイズ排除クロマトグラムを示す。配列番号182からのヒトIL2Rαを用いた多重特異性分子13のELISAにより、85pMのEC50が得られた(図65)。細胞殺滅アッセイにおけるEC50は、14pMであった(図67)。図68は、アッセイにおける多重特異性分子13についてのIFNγのサイトカイン放出データを示す。
配列番号188、配列番号183、および配列番号184を含む、HER3標的化アーム、IGF1R標的化アーム、および抗NKp46 NK細胞エンゲージャを含有する多重特異性分子14を、細胞に、配列番号131、配列番号126、および配列番号127を共トランスフェクトすることによって発現させた。多重特異性分子14を精製し、最終産物のSDS−PAGEゲルが図34に示される。図66は、2.3nMのEC50で、配列番号179からのヒトNKp46との結合を示す。細胞殺滅アッセイにおけるEC50は、100pMであった(図67)。図68は、アッセイにおける多重特異性分子14についてのIFNγのサイトカイン放出データを示す。
配列番号189、配列番号183、および配列番号184を含む、HER3標的化アーム、IGF1R標的化アーム、およびCD3標的化アームを含有する多重特異性分子15を、細胞に、配列番号132、配列番号126、および配列番号127を共トランスフェクトすることによって発現させた。多重特異性分子15を精製し、最終産物のSDS−PAGEゲルが図35に示される。細胞殺滅アッセイにおけるEC50は、277pMであった(図69)。図70は、アッセイにおける多重特異性分子15についてのIFNγのサイトカイン放出データを示す。
配列番号188、配列番号185、および配列番号184を含む、HER3標的化アーム、IGF1R標的化アーム、抗NKp46 NK細胞エンゲージャ、およびIL2エフェクターアームを含有する多重特異性分子16を、細胞に、配列番号131、配列番号128、および配列番号127を共トランスフェクトすることによって発現させた。多重特異性分子16を精製し、最終産物のSDS−PAGEゲルが図36に示される。配列番号182からのヒトIL2Rαを用いた多重特異性分子16のELISAにより、167pMのEC50が得られた(図65)。細胞殺滅アッセイにおけるEC50は、330pMであった(図67)。図68は、アッセイにおける多重特異性分子16についてのIFNγのサイトカイン放出データを示す。
配列番号189、配列番号185、および配列番号184を含む、HER3標的化アーム、IGF1R標的化アーム、CD3標的化アーム、およびIL2エフェクターアームを含有する多重特異性分子17を、細胞に、配列番号132、配列番号128、および配列番号127を共トランスフェクトすることによって発現させた。多重特異性分子17を精製し、最終産物のSDS−PAGEゲルが図37に示される。配列番号182からのヒトIL2Rαを用いた多重特異性分子17のELISAにより、116pMのEC50が得られた(図65)。細胞殺滅アッセイにおけるEC50は、18pMであった(図69)。図70は、アッセイにおける多重特異性分子17についてのIFNγのサイトカイン放出データを示す。
配列番号187、配列番号183、および配列番号184を含む、HER3標的化アームおよびIGF1R標的化アームを含有する多重特異性分子18を、細胞に、配列番号DNA BH022、配列番号126、および配列番号127を共トランスフェクトすることによって発現させた。多重特異性分子18を精製し、最終産物のSDS−PAGEゲルが図38に示される。細胞殺滅アッセイにおけるEC50は、28pMであった(図67)。図68は、アッセイにおける多重特異性分子18についてのIFNγのサイトカイン放出データを示す。
配列番号187、配列番号186、および配列番号184を含む、HER3標的化アーム、IGF1R標的化アーム、およびIL7エフェクターアームを含有する多重特異性分子19を、細胞に、配列番号130、配列番号129、および配列番号127を共トランスフェクトすることによって発現させた。多重特異性分子19を精製し、最終産物のSDS−PAGEゲルが図39に示される。
配列番号189、配列番号186、および配列番号184を含む、HER3標的化アーム、IGF1R標的化アーム、CD3標的化アーム、およびIL7エフェクターアームを含有する多重特異性分子20を、細胞に、配列番号132、配列番号129、および配列番号127を共トランスフェクトすることによって発現させた。多重特異性分子20を精製し、最終産物のSDS−PAGEゲルが図40に示される。細胞殺滅アッセイにおけるEC50は、445pMであった(図71)。図72は、アッセイにおける多重特異性分子20についてのIFNγのサイトカイン放出データを示す。
配列番号190、配列番号169、配列番号186、および配列番号184を含む、HER3標的化アーム、IGF1R標的化アーム、抗NKp46 NK細胞エンゲージャ、およびIL7エフェクターアームを含有する多重特異性分子21を、細胞に、配列番号133、配列番号118、配列番号128、および配列番号127を共トランスフェクトすることによって発現させた。多重特異性分子21を精製し、最終産物のSDS−PAGEゲルが図41に示される。図46は、1.3nMのEC50で、配列番号179からのヒトNKp46との結合を示す。細胞殺滅アッセイにおけるEC50は、770pMであった(図73)。図74は、アッセイにおける多重特異性分子21についてのIFNγのサイトカイン放出データを示す。
配列番号190、配列番号169、配列番号192、および配列番号191を含む、メソテリン標的化アーム、IL2エフェクターを有するPDL1標的化アーム、および抗NKp46 NK細胞エンゲージャを含有する多重特異性分子22を、細胞に、配列番号133、配列番号118、配列番号135、および配列番号134を共トランスフェクトすることによって発現させた。多重特異性分子22を精製し、最終産物のSDS−PAGEゲルが図42に示される。配列番号181からのヒトメソテリンを用いた多重特異性分子22のELISAにより、310pMのEC50が得られた(図63)。図44は、8pMのEC50で、配列番号178からのヒトPDL1に結合する多重特異性分子22についてのデータを示す。配列番号182からのヒトIL2Rαを用いた多重特異性分子22のELISAにより、8.2nMのEC50が得られた(図65)。図46は、2.4nMのEC50で、配列番号179からのヒトNKp46との結合を示す。細胞殺滅アッセイにおけるEC50は、995pMであった(図75)。図76は、アッセイにおける多重特異性分子22についてのIFNγのサイトカイン放出データを示す。
配列番号168、配列番号169、配列番号192、および配列番号171を含む、メソテリン標的化アームおよびPDL1標的化アームを含有する多重特異性分子23を、細胞に、配列番号116、配列番号118、配列番号135、および配列番号121を共トランスフェクトすることによって発現させた。多重特異性分子23を精製し、図75に示される細胞殺滅アッセイに使用して、250pMのEC50を得た。図76は、アッセイにおける多重特異性分子23についてのIFNγのサイトカイン放出データを示す。
一般的な方法:
1.プラスミドの構築
タンパク質配列をコードするDNAをモンゴルキヌゲネズミ(Cricetulus griseus)における発現について最適化し、合成し、Gatewayクローニングを用いて、pcDNA3.4−TOPO(Life Technologies A14697)へとクローニングした。全ての構築物は、Igκリーダー配列(配列番号84
、配列番号64METDTLLLWVLLLWVPGSTG)を含んでいた。使用される核酸配列は、表10に示される。
プラスミドを、Expi293細胞(Life Technologies A14527)またはExpiCHO細胞(Life Technologies A29127)のいずれかへと共トランスフェクトした。1:1のノブ対ホール重鎖比および3:2の軽鎖対重鎖比を用いて、多重特異性構築物のために1mgの全DNAを用いて、トランスフェクションを行った。ビオチン化が必要とされる場合、多重特異性構築物DNAに加えて、1リットル当たり250μgの配列番号144 226のBirAを加えた。Expi293細胞におけるトランスフェクションを、全DNAを用いて3:1の比率で直鎖状25,000Daポリエチレンイミン(PEI、Polysciences Inc 23966)を用いて行った。DNAおよびPEIをそれぞれ50mLのOptiMem(Life Technologies 31985088)培地に加え、滅菌ろ過した。DNAおよびPEIを、10分間組み合わせて、1.8〜2.8×106個の細胞/mLの細胞密度および少なくとも95%の生存率を有するExpi293細胞に加えた。ExpiCHOトランスフェクションを、製造業者の指示に従って行った。Expi293細胞を、トランスフェクション後5〜7日間にわたって8%のCO2により、37℃において、加湿したインキュベータ中で成長させ、ExpiCHO細胞を、5%のCO2により、32℃において14日間にわたって成長させた。細胞を、4500×gで遠心分離によってペレット化し、上清を0.2μmの膜に通してろ過した。プロテインA樹脂(GE 17−1279−03)を、ろ過された上清に加え、室温で1〜3時間インキュベートした。樹脂を、3×10カラム体積のダルベッコリン酸緩衝生理食塩水(DPBS、Life Technologies 14190−144)で洗浄されたカラムに充填した。結合タンパク質を、20mMのクエン酸塩、100mMのNaCl、pH2.9を含むカラムから溶出した。必要に応じて、DPBSの泳動用緩衝液を用いたSuperdex 200カラムにおいて、リガンド親和性および/またはサイズ排除クロマトグラフィーを用いて、タンパク質をさらに精製した。
ELISAアッセイを、Pierce 96ウェルストレプトアビジン被覆高容量プレート(15500)またはNunc−Immuno 96ウェルマキシソーププレート(Invitrogen 44−2404−21)のいずれかを用いて行った。プレートを1×リン酸緩衝生理食塩水tween 20(Pierce 28352)で洗浄し、次に10μg/mLの捕捉タンパク質で被覆した。振とうしながら室温で2時間インキュベートした後、プレートを1×PBSTで洗浄し、分子を、1μM〜1pMの連続希釈を用いて行A〜Gに加えた。プレートを30分間インキュベートし、洗浄し、100μLの、ペルオキシダーゼがコンジュゲートされたaffinipureヤギ抗ヒトIgG(109−035−008)またはストレプトアビジン−HRP(R&D Systems DY998)のいずれかを各ウェルに加えた。プレートを振とうしながら30分間インキュベートし、洗浄し、100μLの1−step turbo TMB−ELISA基質溶液(Thermo Scientific 34022)を各ウェルに加えた。プレートを5分間インキュベートし、100μLの1MのHClを用いて反応を停止させ、SpectraMax i3xプレートリーダーにおける450nmでの吸光度を用いて、プレートを読み取った。
産生された構築物の活性を評価するために、BxPC3−ルシフェラーゼ細胞殺滅アッセイを行った。ルシフェラーゼ(Genecopia SCL−C012−HLG)を含有するBxPC3細胞を、1μg/mLのピューロマイシン(Gibco A1113802)とともに、RPMI 1640(Gibco 11875119)および10%のウシ胎仔血清(Gibco 10082147)中で成長させた。この細胞を用いて、1ウェル当たり15,000個の細胞で96ウェルプレートに播種した。1日インキュベートした後、培地を除去し、0.5%のPen/Strep(Gibco 15140122)を含む無血清培地RPMI 1640と交換した。無血清培地中のPBMC(C.T.L.Lot # LP_123)を、450,000個の細胞/ウェルで96ウェルプレートの行A〜Gに加えた。化合物を行A〜F中の1μM〜10pMの範囲の濃度において3連でカラムに加えた。プレートを測定前に6または24時間インキュベートした。細胞殺滅測定へと進む前に120μLを各ウェルから取り出し、96ウェル低結合タンパク質プレートに加えた。これにより80μLがプレートに残り、80μLのBright−Glo(Promega E2610)を各ウェルに加えた。次に、SpectraMax i3xプレートリーダーにおいてプレートを読み取った。
サイトカイン放出アッセイのために、細胞殺滅プレートから取り出した上清を、quansys洗浄緩衝液で5倍に希釈した。QuansysヒトIFNγ(Quansys 464649HU)singleplexアッセイキットについて、製造業者の指示に従った。プレートをBioRad ChemiDoc XRS+において撮像し、Quansys Q−viewソフトウェアを用いて分析した。
ヒアルロニダーゼ活性を試験するために、酵素アッセイを、上述されるように行った(Dorfman,A.,Ott,M.L.A Turbidimetric Method for the Assay of Hyaluronidase,Journal of Biological Chemistry,1948)。ヒアルロン酸(Sigma 53747)のストック溶液を、300mMのリン酸ナトリウム、pH5.35中1mg/mLで調製した。ヒアルロニダーゼ含有構築物を、20mMのリン酸ナトリウム、pH7.0、77mMの塩化ナトリウム、0.01%のウシ血清アルブミン(Sigma A6003)中1mg/mLに希釈した。0.01mg/mL〜1mg/mLの酵素構築物を、1mg/mLのヒアルロン酸と組み合わせて、37℃で45分間インキュベートした。次に、酸性化したBSA溶液(24mMの酢酸ナトリウム、79mMの酢酸、0.1%のウシ血清アルブミン、pH3.75)を、酵素および基質に加えた。室温で10分間インキュベートした後、活性を540nmでの吸光度で測定した。酵素がヒアルロン酸を分解するにつれて、ヒアルロニダーゼ活性は、吸光度の低下として見られる。
ヒアルロニダーゼ活性をさらに実証するために、0.1mg/mLのヒアルロン酸(Sigma 53747)を含有する12%のSDS−PAGEゲルを作製した。構築物をゲル上で泳動させ、次にゲルを1時間にわたって3%のTriton X−100(Sigma 93443)中でインキュベートした。次に、ゲルを37℃で16時間にわたってアッセイ緩衝液(20mMのクエン酸塩、150mMの塩化ナトリウム、pH3.5)中でインキュベートした。ゲルを、0.5%のアルシアンブルー(Alcian Blue)(Sigma B8438)を用いてヒアルロニダーゼ活性について染色し、アルシアンブルーは、ヒアルロン酸を青色に染色し、酵素がヒアルロン酸を分解した場合は透明の点を残す。
製造業者の指示に従って、EnzChekゼラチナーゼ/コラゲナーゼアッセイキット(Molecular Probes E−12055)を用いて、MMP−2を含有する構築物の酵素活性を決定した。
3つの異なるタンパク質鎖:配列番号214、配列番号215、および配列番号219を含む、FAPを標的化するFabアームおよびヒアルロニダーゼアームを含有する多重特異性分子24を、細胞に、配列番号202、配列番号203、および配列番号207を共トランスフェクトすることによって発現させた。多重特異性分子23を精製し、最終産物のSDS−PAGEゲルが図77に示される。多重特異性分子23のサイズ排除クロマトグラムが図86に示される。配列番号225から生成されるヒトFAPを用いて、ELISAを行ったところ、144nMのEC50が得られた(図94)。図98は、多重特異性分子24がヒアルロニダーゼ活性を有することを実証する。ヒアルロニダーゼザイモグラム(図100)中の青色背景における白色のバンドの存在は、多重特異性分子24のヒアルロニダーゼ活性をさらに実証する。
配列番号218、配列番号215、配列番号219を含む、FAPを標的化するFabアーム、IL2エフェクターアーム、およびヒアルロニダーゼアームを含有する多重特異性分子25を、細胞に、配列番号206、配列番号203、および配列番号207を共トランスフェクトすることによって発現させた。多重特異性分子24を精製し、最終産物のSDS−PAGEゲルが図78に示される。多重特異性分子24のサイズ排除クロマトグラムが図87に示される。配列番号225から生成されるヒトFAPを用いて、ELISAを行ったところ、128nMのEC50が得られた(図94)。図781は、101nMのEC50で、ヒトIL2Rα(配列番号182から生成される)への多重特異性分子25の結合を示す。図98は、多重特異性分子25がヒアルロニダーゼ活性を有することを実証する。ヒアルロニダーゼザイモグラム(図100)中の青色背景における白色のバンドの存在は、多重特異性分子25のヒアルロニダーゼ活性をさらに実証する。
配列番号214、配列番号215、および配列番号224を含む、FAP標的化アームおよびヒアルロニダーゼアームを含有する多重特異性分子26を、細胞に、配列番号202、配列番号203、および配列番号212を共トランスフェクトすることによって発現させた。多重特異性分子25を精製し、最終産物のSDS−PAGEゲルが図79に示される。多重特異性分子25のサイズ排除クロマトグラムが図88に示される。配列番号225から生成されるヒトFAPを用いて、ELISAを行ったところ、18.5nMのEC50が得られた(図94)。図98は、多重特異性分子26がヒアルロニダーゼ活性を有することを実証する。ヒアルロニダーゼザイモグラム(図100)中の青色背景における白色のバンドの存在は、多重特異性分子26のヒアルロニダーゼ活性をさらに実証する。
配列番号220、配列番号171、配列番号219、および配列番号215を含む、PDL1標的化アーム、FAP標的化アーム、およびヒアルロニダーゼアームを含有する多重特異性分子27を、細胞に、配列番号121、配列番号207、および配列番号208を共トランスフェクトすることによって発現させた。多重特異性分子26を精製し、最終産物のSDS−PAGEゲルが図80に示される。配列番号178のヒトPDL1を用いて行われたELISAにより、52pMのEC50が得られた(図93)。配列番号225から生成されるヒトFAPを用いて、ELISAを行ったところ、44nMのEC50が得られた(図94)。図99は、多重特異性分子27がヒアルロニダーゼ活性を有することを実証する。ヒアルロニダーゼザイモグラム(図100)中の青色背景における白色のバンドの存在は、多重特異性分子27のヒアルロニダーゼ活性をさらに実証する。
配列番号221、配列番号171、配列番号219、および配列番号215を含む、PDL1標的化アーム、FAP標的化アーム、IL2エフェクターアーム、およびヒアルロニダーゼアームを含有する多重特異性分子28を、細胞に、配列番号209、配列番号121、配列番号207、および配列番号208を共トランスフェクトすることによって発現させた。多重特異性分子27を精製し、最終産物のSDS−PAGEゲルが図81に示される。多重特異性分子27のサイズ排除クロマトグラムが図90に示される。配列番号178のヒトPDL1を用いて行われたELISAにより、0.207nMのEC50が得られた(図93)。配列番号225から生成されるヒトFAPを用いて、ELISAを行ったところ、69nMのEC50が得られた(図95)。図97は、97nMのEC50で、ヒトIL2Rα(配列番号182から生成される)への多重特異性分子27の結合を示す。図99は、多重特異性分子28がヒアルロニダーゼ活性を有することを実証する。ヒアルロニダーゼザイモグラム(図100)中の青色背景における白色のバンドの存在は、多重特異性分子28のヒアルロニダーゼ活性をさらに実証する。
配列番号221、配列番号171、配列番号222、および配列番号223を含む、PDL1標的化アーム、抗NKp46 NK細胞エンゲージャ、IL2エフェクターアーム、およびヒアルロニダーゼアームを含有する多重特異性分子29を、細胞に、配列番号209、配列番号121、配列番号210、および配列番号211を共トランスフェクトすることによって発現させた。多重特異性分子28を精製し、最終産物のSDS−PAGEゲルが図82に示される。多重特異性分子28のサイズ排除クロマトグラムが図91に示される。配列番号178のヒトPDL1を用いて行われたELISAにより、866pMのEC50が得られた(図93)。配列番号179からのヒトNKp46を用いたELISAにより、126pMのEC50が得られた(図96)。図97は、48nMのEC50で、ヒトIL2Rα(配列番号182から生成される)への多重特異性分子6の結合を示す。図99は、多重特異性分子29がヒアルロニダーゼ活性を有することを実証する。ヒアルロニダーゼザイモグラム(図100)中の青色背景における白色のバンドの存在は、多重特異性分子29のヒアルロニダーゼ活性をさらに実証する。
配列番号214、配列番号215、および配列番号216を含む、FAP標的化アームおよびゼラチナーゼアームを含有する多重特異性分子30を、細胞に、配列番号202、配列番号203、および配列番号207を共トランスフェクトすることによって発現させた。多重特異性分子29を精製し、最終産物のSDS−PAGEゲルが図83に示される。多重特異性分子30のサイズ排除クロマトグラムが図92に示される。配列番号225から生成されるヒトFAPを用いて、ELISAを行ったところ、385nMのEC50が得られた(図95)。図101は、多重特異性分子30がコラゲナーゼ活性を有することを実証する。
配列番号214、配列番号215、および配列番号217を含む、FAP標的化アームおよびゼラチナーゼアームを含有する多重特異性分子31を、細胞に、配列番号202、配列番号203、および配列番号D205を共トランスフェクトすることによって発現させた。多重特異性分子30を精製し、最終産物のSDS−PAGEゲルが図84に示される。多重特異性分子31のサイズ排除クロマトグラムが図93に示される。配列番号225から生成されるヒトFAPを用いて、ELISAを行ったところ、466nMのEC50が得られた(図95)。図101は、多重特異性分子31がコラゲナーゼ活性を有することを実証する。
配列番号221、配列番号171、配列番号216、および配列番号215を含む、PDL1標的化アーム、FAP標的化アーム、IL2エフェクターアーム、およびゼラチナーゼアームを含有する多重特異性分子32を、細胞に、配列番号209、配列番号121、配列番号204、および配列番号203を共トランスフェクトすることによって発現させた。多重特異性分子31を精製し、最終産物のSDS−PAGEゲルが図85に示される。配列番号178のヒトPDL1を用いて行われたELISAにより、155pMのEC50が得られた(図93)。配列番号225から生成されるヒトFAPを用いて、ELISAを行ったところ、85nMのEC50が得られた(図95)。図97は、36nMのEC50で、ヒトIL2Rα(配列番号182から生成される)への多重特異性分子32の結合を示す。図101は、多重特異性分子32がコラゲナーゼ活性を有することを実証する。
本明細書において言及される全ての刊行物および特許は、各個々の刊行物または特許が参照により援用されるように具体的にかつ個別に示されているかのように、全体が参照により本明細書に援用される。
当業者は、単なる日常的な実験を用いて、本明細書に記載される本発明の特定の実施形態の多くの均等物を認識または確認することができる。このような均等物は、以下の特許請求の範囲によって包含されることが意図される。
Claims (192)
- 多重特異性または多機能性分子ポリペプチドであって、
(i)癌抗原に結合する腫瘍標的化部分、例えば第1の腫瘍標的化部分と;
(ii)NK細胞エンゲージャ、T細胞エンゲージャ、B細胞エンゲージャ、樹枝状細胞エンゲージャまたはマクロファージ細胞エンゲージャから選択される免疫細胞エンゲージャ;
(iii)サイトカイン分子;および
(iv)間質調節部分
の2つまたは全てと
を含む多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。 - (i)、(ii)ならびに(iii)および(iv)の一方または両方を含む、請求項1に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- (i)、(iii)ならびに(ii)および(iv)の一方または両方を含む、請求項1に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- (i)、(ii)および(iii)または(i)、(ii)および(iv)を含む、請求項1に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- (i)、(ii)、(iii)および(iv)を含む、請求項1に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 多重特異性または多機能性分子ポリペプチドであって、
(i)1つまたは複数の癌抗原に結合する少なくとも2つの腫瘍標的化部分、例えば第1および第2の腫瘍標的化部分と;
(ii)NK細胞エンゲージャ、T細胞エンゲージャ、B細胞エンゲージャ、樹枝状細胞エンゲージャまたはマクロファージ細胞エンゲージャから選択される免疫細胞エンゲージャ;および
(iii)間質調節部分
の一方または両方と
を含む多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。 - 間質調節部分と、腫瘍抗原または間質抗原に結合する腫瘍標的化部分(例えば、抗体分子、リガンド分子または受容体分子)とを含む多機能性(例えば、二機能性)分子ポリペプチド。
- 第2の腫瘍標的化部分をさらに含み、前記第2の腫瘍標的化部分は、前記第1の腫瘍標的化部分、例えば(i)の前記腫瘍標的化部分と同じかまたは異なる癌抗原に結合する、請求項1〜5または7のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記第2の腫瘍標的化部分は、前記第1の腫瘍標的化部分と同じ癌抗原における異なるエピトープに結合する、請求項6または8に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記第2の腫瘍標的化部分および前記第1の腫瘍標的化部分は、異なる癌抗原に結合する、請求項6または8に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記異なる癌抗原は、同じ細胞または腫瘍組織に存在する、請求項10に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記異なる癌抗原は、異なる細胞または腫瘍組織に存在する、請求項10に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記第1の腫瘍標的化部分および前記第2の腫瘍標的化部分の前記癌抗原に対する親和性、例えば複合親和性は、その対応する結合メンバーに対する(ii)、(iii)または(iv)(単独でまたは多重特異性分子の一部としてのいずれかで)の親和性と等しいかまたはそれを超える、請求項11または12に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記第1の腫瘍標的化部分および前記第2の腫瘍標的化部分の前記癌抗原に対する前記親和性、例えば前記複合親和性は、その対応する結合メンバーに対する(ii)、(iii)または(iv)(単独でまたは前記多重特異性分子の一部としてのいずれかで)の前記親和性より少なくとも2、5、10、20、30、40、50、75または100倍高い、請求項13に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 腫瘍、例えば癌細胞または間質細胞に対する前記第1の腫瘍標的化部分および前記第2の腫瘍標的化部分の親和性、例えば複合親和性は、前記腫瘍標的化部分または前記第2の腫瘍標的化部分の1つのみを有する同様の多重特異性または多機能性分子ポリペプチドの親和性と等しいかまたはそれを超える、請求項11または12に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記腫瘍、例えば癌細胞または間質細胞に対する前記第1の腫瘍標的化部分および前記第2の腫瘍標的化部分の前記親和性、例えば前記複合親和性は、前記腫瘍標的化部分または前記第2の腫瘍標的化部分の1つのみを有する同様の多重特異性または多機能性分子ポリペプチドの親和性より少なくとも2、5、10、20、30、40、50、75または100倍高い、請求項15に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 少なくとも2つの非隣接ポリペプチド鎖を含む、請求項1〜16のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- A、B−[二量体化モジュール]−C、−D
(式中、
(1)前記二量体化モジュールは、免疫グロブリン定常ドメイン、例えば重鎖定常ドメイン(例えば、ホモ二量体またはヘテロ二量体重鎖定常領域、例えばFc領域)または免疫グロブリン可変領域(例えば、Fab領域)の定常ドメインを含み;および
(2)A、B、CおよびDは、独立して、存在しないか;(i)腫瘍標的化部分、例えば第1および/もしくは第2の腫瘍標的化部分;(ii)NK細胞エンゲージャ、T細胞エンゲージャ、B細胞エンゲージャ、樹枝状細胞エンゲージャもしくはマクロファージ細胞エンゲージャから選択される免疫細胞エンゲージャ;(iii)サイトカイン分子または(iv)間質調節部分である)
を含む多重特異性または多機能性分子ポリペプチドであって、
(i)癌抗原に結合する前記腫瘍標的化部分、例えば第1の腫瘍標的化部分と;
(ii)NK細胞エンゲージャ、T細胞エンゲージャ、B細胞エンゲージャ、樹枝状細胞エンゲージャまたはマクロファージ細胞エンゲージャから選択される免疫細胞エンゲージャ;
(iii)サイトカイン分子;および
(iv)間質調節部分
の1つ、2つまたは全てと
を含み、ただし、
(ii)および(iii)が存在しない場合、(i)および(iv)は、存在し、
1つの(i)および1つの(ii)が存在する場合、(iii)もしくは(iv)または両方は、存在し、または
1つの(i)および1つの(iii)が存在する場合、(ii)もしくは(iv)または両方は、存在する、多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。 - (i)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、Cは、第1の免疫細胞エンゲージャを含み、かつDは、第2の免疫細胞エンゲージャを含み(例えば、AおよびBは、同じかまたは異なる標的化部分を含み、かつCおよびDは、同じかまたは異なる免疫細胞エンゲージャを含み);
(ii)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、Cは、第1のサイトカイン分子を含み、かつDは、第2のサイトカイン分子を含み(例えば、AおよびBは、同じかまたは異なる標的化部分を含み、かつCおよびDは、同じかまたは異なるサイトカイン分子を含み);
(iii)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、Cは、第1の間質調節部分を含み、かつDは、第2の間質調節部分を含み(例えば、AおよびBは、同じかまたは異なる標的化部分を含み、かつCおよびDは、同じかまたは異なる間質調節部分を含み);
(iv)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、Cは、免疫細胞エンゲージャを含み、かつDは、サイトカイン分子を含み(例えば、AおよびBは、同じかまたは異なる標的化部分を含み);
(v)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、Cは、サイトカイン分子を含み、かつDは、免疫細胞エンゲージャを含み(例えば、AおよびBは、同じかまたは異なる標的化部分を含み);
(vi)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、Cは、免疫細胞エンゲージャを含み、かつDは、間質調節部分を含み(例えば、AおよびBは、同じかまたは異なる標的化部分を含み);
(vii)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、Cは、間質調節部分を含み、かつDは、免疫細胞エンゲージャを含み(例えば、AおよびBは、同じかまたは異なる標的化部分を含み);
(viii)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、Cは、サイトカイン分子を含み、かつDは、間質調節部分を含み(例えば、AおよびBは、同じかまたは異なる標的化部分を含み);
(ix)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、Cは、間質調節部分を含み、かつDは、サイトカイン分子を含み(例えば、AおよびBは、同じかまたは異なる標的化部分を含み);
(x)Aは、腫瘍標的化部分を含み、かつB、CおよびDの少なくとも1つ、2つまたは3つは、第2の腫瘍標的化部分、免疫細胞エンゲージャ、サイトカイン分子、間質調節部分を含むかまたは存在せず、ただし、(ii)および(iii)が存在しない場合、(i)および(iv)は、存在し;
(xi)Bは、腫瘍標的化部分を含み、かつA、CおよびDの少なくとも1つ、2つまたは3つは、第2の腫瘍標的化部分、免疫細胞エンゲージャ、サイトカイン分子、間質調節部分を含むかまたは存在せず、ただし、(ii)および(iii)が存在しない場合、(i)および(iv)は、存在し;
(xii)Cは、腫瘍標的化部分を含み、かつA、BおよびDの少なくとも1つ、2つまたは3つは、第2の腫瘍標的化部分、免疫細胞エンゲージャ、サイトカイン分子、間質調節部分を含むかまたは存在せず、ただし、(ii)および(iii)が存在しない場合、(i)および(iv)は、存在し;
(xiii)Dは、腫瘍標的化部分を含み、かつA、BおよびCの少なくとも1つ、2つまたは3つは、第2の腫瘍標的化部分、免疫細胞エンゲージャ、サイトカイン分子、間質調節部分を含むかまたは存在せず、ただし、(ii)および(iii)が存在しない場合、(i)および(iv)は、存在し;
(xiv)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、CおよびDは、それぞれ免疫細胞エンゲージャおよび非存在であり;
(xv)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、CおよびDは、それぞれ非存在および免疫細胞エンゲージャであり;
(xvi)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、CおよびDは、それぞれサイトカイン分子および非存在であり;
(xvii)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、CおよびDは、それぞれ非存在およびサイトカイン分子であり;
(xviii)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、CおよびDは、それぞれ間質調節部分および非存在であり;
(xix)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、CおよびDは、それぞれ非存在および間質調節部分であり;
(xx)Aは、腫瘍標的化部分を含み、かつB、CまたはDの1つは、間質調節部分を含み;
(xxi)Bは、腫瘍標的化部分を含み、かつA、CまたはDの1つは、間質調節部分を含み;
(xxii)Cは、腫瘍標的化部分を含み、かつA、BまたはDの1つは、間質調節部分を含み;
(xxiii)Dは、腫瘍標的化部分を含み、かつA、BまたはCの1つは、間質調節部分を含み;
(xiv)AまたはBは、腫瘍標的化部分を含み、かつCは、免疫細胞エンゲージャを含み、かつDは、サイトカイン分子を含み;
(xv)AまたはBは、腫瘍標的化部分を含み、かつDは、免疫細胞エンゲージャを含み、かつCは、サイトカイン分子を含み;
(xvi)Aおよび/またはBは、1つまたは2つの免疫細胞エンゲージャを含み、かつDは、腫瘍標的化部分を含み、かつCは、サイトカイン分子を含み;
(xvii)Aおよび/またはBは、1つまたは2つの免疫細胞エンゲージャを含み、かつCは、腫瘍標的化部分を含み、かつBは、サイトカイン分子を含み;
(xviii)Aおよび/またはBは、1つまたは2つのサイトカインを含み、かつDは、腫瘍標的化部分を含み、かつCは、免疫細胞エンゲージャを含み;または
(xix)Aおよび/またはBは、1つまたは2つのサイトカインを含み、かつCは、腫瘍標的化部分を含み、かつDは、免疫細胞エンゲージャを含む、請求項18に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。 - (i)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、Cは、免疫細胞エンゲージャ(例えば、樹枝状細胞エンゲージャ)を含み、かつDは、サイトカイン分子を含み(例えば、AおよびBは、同じかまたは異なる標的化部分を含み);
(ii)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、Cは、サイトカイン分子を含み、かつDは、免疫細胞エンゲージャを含み(例えば、AおよびBは、同じかまたは異なる標的化部分を含み);
(iii)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、CおよびDは、それぞれ免疫細胞エンゲージャおよび非存在であり;
(iv)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、CおよびDは、それぞれ非存在および免疫細胞エンゲージャ、例えばT細胞エンゲージャであり;
(v)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、CおよびDは、それぞれサイトカイン分子および非存在であり;
(vi)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、CおよびDは、それぞれ非存在およびサイトカイン分子であり;
(vii)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、CおよびDは、それぞれ間質調節部分および非存在であり;
(viii)Aは、第1の腫瘍標的化部分を含み、Bは、第2の腫瘍標的化部分を含み、CおよびDは、それぞれ非存在および間質調節部分であり;または
(ix)Aは、腫瘍標的化部分を含み、かつB、CまたはDの1つは、間質調節部分を含む、請求項18に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。 - 前記第1および第2の腫瘍標的化部分は、同じ癌抗原における異なるエピトープに結合する、請求項19または20に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記第1および第2の腫瘍標的化部分は、異なる癌抗原に結合する、請求項19または20に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記異なる癌抗原は、同じ細胞または腫瘍組織に存在する、請求項22に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記異なる癌抗原は、異なる細胞または腫瘍組織に存在する、請求項22に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記第1および第2の腫瘍標的化部分の前記癌抗原に対する親和性、例えば複合親和性は、その対応する結合メンバーに対する(ii)、(iii)または(iv)(単独でまたは多重特異性分子の一部としてのいずれかで)の親和性と等しいかまたはそれを超える、請求項21または22に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記第1および第2の腫瘍標的化部分の前記癌抗原に対する前記親和性、例えば前記複合親和性は、その対応する結合メンバーに対する(ii)、(iii)または(iv)(単独でまたは前記多重特異性分子の一部としてのいずれかで)の前記親和性より少なくとも2、5、10、20、30、40、50、75または100倍高い、請求項25に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 腫瘍、例えば癌細胞または間質細胞に対する前記第1および第2の腫瘍標的化部分の親和性、例えば複合親和性は、前記腫瘍標的化部分または前記第2の腫瘍標的化部分の1つのみを有する同様の多重特異性または多機能性分子ポリペプチドの親和性と等しいかまたはそれを超える、請求項21または22に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記腫瘍、例えば癌細胞または間質細胞に対する前記第1および第2の腫瘍標的化部分の前記親和性、例えば前記複合親和性は、前記腫瘍標的化部分または前記第2の腫瘍標的化部分の1つのみを有する同様の多重特異性または多機能性分子ポリペプチドの親和性より少なくとも2、5、10、20、30、40、50、75または100倍高い、請求項27に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記免疫細胞エンゲージャは、免疫細胞、例えばエフェクター細胞に結合するが、それを活性化しない、請求項1〜28のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記免疫細胞エンゲージャは、免疫細胞、例えばエフェクター細胞に結合し、かつそれを活性化する、請求項1〜28のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記腫瘍標的化部分は、前記癌抗原に結合する抗体分子、受容体分子(例えば、受容体、受容体断片もしくはその機能的変異体)またはリガンド分子(例えば、リガンド、リガンド断片もしくはその機能的変異体)、あるいはその組合せを含む、請求項1〜30のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記腫瘍標的化部分は、血液癌、固形腫瘍、転移性癌、軟部組織腫瘍、転移性病変またはその組合せに存在する癌抗原に結合する、請求項1〜31のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記癌抗原は、腫瘍抗原もしくは間質抗原または血液抗原である、請求項1〜32のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記腫瘍抗原または間質抗原は、線維性または線維形成性固形腫瘍に存在する、請求項33に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記腫瘍抗原または間質抗原は、腫瘍、例えば限定された腫瘍灌流、圧縮された血管または線維性腫瘍間質の1つまたは複数を有することを特徴とする種類の腫瘍に存在する、請求項33または34に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記腫瘍、例えば固形腫瘍は、膵臓癌(例えば、膵臓腺癌)、乳癌、大腸癌、肺癌(例えば、小細胞または非小細胞肺癌)、皮膚癌、卵巣癌または肝臓癌の1つまたは複数から選択される、請求項32に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記血液癌は、B細胞またはT細胞悪性腫瘍、例えばホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫(例えば、B細胞リンパ腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、慢性リンパ球性白血病、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯B細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、有毛細胞白血病)、急性骨髄性白血病(AML)、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫または急性リンパ球性白血病の1つまたは複数から選択される、請求項32に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記癌抗原、例えば固形腫瘍抗原は、PDL1、メソテリン、CD47、ガングリオシド2(GD2)、前立腺幹細胞抗原(PSCA)、前立腺特異的膜抗原(PMSA)、前立腺特異的抗原(PSA)、癌胎児性抗原(CEA)、Ronキナーゼ、c−Met、未熟ラミニン受容体、TAG−72、BING−4、カルシウム活性化塩素イオンチャネル2、サイクリン−B1、9D7、Ep−CAM、EphA3、Her2/neu、テロメラーゼ、SAP−1、サバイビン、NY−ESO−1/LAGE−1、PRAME、SSX−2、メラン−A/MART−1、Gp100/pmel17、チロシナーゼ、TRP−1/−2、MC1R、β−カテニン、BRCA1/2、CDK4、CML66、フィブロネクチン、p53、Ras、TGF−Β受容体、AFP、ETA、MAGE、MUC−1、CA−125、BAGE、GAGE、NY−ESO−1、β−カテニン、CDK4、CDC27、CD47、αアクチニン−4、TRP1/gp75、TRP2、gp100、メラン−A/MART1、ガングリオシド、WT1、EphA3、上皮成長因子受容体(EGFR)、CD20、MART−2、MART−1、MUC1、MUC2、MUM1、MUM2、MUM3、NA88−1、NPM、OA1、OGT、RCC、RUI1、RUI2、SAGE、TRG、TRP1、TSTA、葉酸受容体α、L1−CAM、CAIX、EGFRvIII、gpA33、GD3、GM2、VEGFR、インテグリン(インテグリンαVβ3、インテグリンα5β1)、炭水化物(Le)、IGF1R、EPHA3、TRAILR1、TRAILR2またはRANKLから選択される、請求項1〜37のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記癌抗原は、PDL1、メソテリン、GD2、PMSA、CEA、Ronキナーゼまたはc−Metから選択される、請求項1〜37のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記癌抗原は、線維芽細胞活性化プロテアーゼ(FAP)、TGF−β、ヒアルロン酸、コラーゲン、例えばコラーゲンIV、テネイシンCまたはテネイシンWから選択される間質抗原である、請求項1〜37のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記癌抗原は、CD19、CD33、CD47、CD123、CD20、CD99、CD30、BCMA、CD38、CD22、SLAMF7またはNY−ESO1から選択される血液抗原である、請求項1〜37のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記腫瘍標的化部分は、メソテリン、PDL1、HER3、IGF1R、FAP、CD47またはCD123から選択される癌抗原に対する抗体分子から選択される、請求項1〜37のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記腫瘍標的化部分は、メソテリンに結合する抗体分子(例えば、FabまたはscFv)を含む、請求項1〜37のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記腫瘍標的化部分は、PDL1に結合する抗体分子(例えば、FabまたはscFv)を含む、請求項1〜37のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- メソテリン、PDL1、HER3、IGF1R、FAP、CD123またはCD47から選択される2つまたは3つの癌抗原に対する2つまたは3つの抗体分子を含む、請求項1〜37のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記腫瘍標的化部分は、PDL1に結合し、かつPD1とのPDL1の相互作用を阻害する、請求項42、44または45のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記腫瘍標的化部分は、PDL1に結合し、かつPD1とのPDL1の相互作用を阻害しない、請求項42、44または45のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記第1および第2の腫瘍標的化部分は、それぞれ抗メソテリン抗体分子および抗PDL1抗体分子である、請求項1〜37のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記第2および第1の腫瘍標的化部分は、それぞれ抗メソテリン抗体分子および抗PDL1抗体分子である、請求項1〜37のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記第1および第2の腫瘍標的化部分は、それぞれ抗FAP抗体分子および抗PDL1抗体分子である、請求項1〜37のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記第2および第1の腫瘍標的化部分は、それぞれ抗FAP抗体分子および抗PDL1抗体分子である、請求項1〜37のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記第1および第2の腫瘍標的化部分は、それぞれ抗HER3抗体分子および抗IGF1R抗体分子であり;または
前記第2および第1の腫瘍標的化部分は、それぞれ抗HER3抗体分子および抗IGF1R抗体分子である、請求項1〜37のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。 - 前記第1および第2の腫瘍標的化部分は、それぞれ抗CD123抗体分子および抗CD47抗体分子であり;または
前記第2および第1の腫瘍標的化部分は、それぞれ抗CD123抗体分子および抗CD47抗体分子である、請求項1〜37のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。 - 前記免疫細胞エンゲージャは、NK細胞エンゲージャ、T細胞エンゲージャ、B細胞エンゲージャ、樹枝状細胞エンゲージャもしくはマクロファージ細胞エンゲージャまたはその組合せから選択される、請求項1〜53のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記免疫細胞エンゲージャは、NK細胞への結合およびNK細胞の活性化を媒介するNK細胞エンゲージャを含む、請求項1〜54のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記免疫細胞エンゲージャは、NK細胞への結合を媒介するが、NK細胞の活性化を媒介しないNK細胞エンゲージャを含む、請求項1〜54のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記NK細胞エンゲージャは、NKp30、NKp40、NKp44、NKp46、NKG2D、DNAM1、DAP10、CD16(例えば、CD16a、CD16bまたは両方)、CRTAM、CD27、PSGL1、CD96、CD100(SEMA4D)、NKp80、CD244(SLAMF4または2B4としても知られている)、SLAMF6、SLAMF7、KIR2DS2、KIR2DS4、KIR3DS1、KIR2DS3、KIR2DS5、KIR2DS1、CD94、NKG2C、NKG2EまたはCD160に結合する(例えば、それを活性化する)抗体分子、例えば抗原結合ドメインまたはリガンドから選択される、請求項1〜56のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記NK細胞エンゲージャは、抗体分子、例えば抗原結合ドメインである、請求項1〜56のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記NK細胞エンゲージャは、NKp30またはNKp46に結合する抗体分子、例えば抗原結合ドメインである、請求項58に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記NK細胞エンゲージャは、リガンドであり、任意選択的に、前記リガンドは、免疫グロブリン定常領域、例えばFc領域をさらに含む、請求項1〜54のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- NKp44またはNKp46の前記リガンドは、ウイルスHAである、請求項60に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- DAP10の前記リガンドは、NKG2Dの補助受容体である、請求項60に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- CD16の前記リガンドは、CD16a/bリガンド、例えば抗体Fc領域をさらに含むCD16a/bリガンドである、請求項60に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記免疫細胞エンゲージャは、B細胞、マクロファージおよび/もしくは樹枝状細胞の1つもしくは複数への結合もしくはその活性化または両方を媒介する、請求項1〜54のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記免疫細胞エンゲージャは、CD40リガンド(CD40L)もしくはCD70リガンド;CD40もしくはCD70に結合する抗体分子;OX40に対する抗体分子;OX40リガンド(OX40L);Toll様受容体のアゴニスト(例えば、TLR4、例えば構成的活性型TLR4(caTLR4)もしくはTLR9アゴニスト);41BB;CD2アゴニスト;CD47またはSTINGアゴニストあるいはその組合せの1つまたは複数から選択されるB細胞、マクロファージおよび/または樹枝状細胞エンゲージャを含む、請求項64に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記B細胞エンゲージャは、CD40L、OX40LもしくはCD70リガンドまたはOX40、CD40もしくはCD70に結合する抗体分子である、請求項64に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記マクロファージ細胞エンゲージャは、CD2アゴニスト;CD40L;OX40L;OX40、CD40もしくはCD70に結合する抗体分子;Toll様受容体(TLR)のアゴニスト(例えば、TLR4、例えば構成的活性型TLR4(caTLR4)もしくはTLR9アゴニスト);CD47またはSTINGアゴニストである、請求項64に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記樹枝状細胞エンゲージャは、CD2アゴニスト、OX40抗体、OX40L、41BBアゴニスト、Toll様受容体アゴニストもしくはその断片(例えば、TLR4、例えば構成的活性型TLR4(caTLR4))、CD47アゴニストまたはSTINGアゴニストである、請求項64に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記STINGアゴニストは、任意選択的に2’,5’または3’,5’リン酸塩結合とともに環状ジヌクレオチド、例えば環状ジ−GMP(cdGMP)、環状ジ−AMP(cdAMP)またはその組合せを含み、例えば、前記STINGアゴニストは、前記多重特異性または多機能性分子ポリペプチドに共有結合される、請求項67に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記サイトカイン分子は、インターロイキン−2(IL−2)、インターロイキン−7(IL−7)、インターロイキン−12(IL−12)、インターロイキン−15(IL−15)、インターロイキン−18(IL−18)、インターロイキン−21(IL−21)、またはインターフェロンγ、またはその断片もしくは変異体、あるいは上記のサイトカインのいずれかの組合せから選択される、請求項1〜69のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記サイトカイン分子は、モノマーまたは二量体である、請求項70に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記サイトカイン分子は、受容体二量体化ドメイン、例えばIL15Rα二量体化ドメインをさらに含む、請求項70または71に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記サイトカイン分子(例えば、IL−15)および受容体二量体化ドメイン(例えば、IL15Rα二量体化ドメイン)は、共有結合されず、例えば非共有結合的に結合される、請求項70に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記間質調節部分は、間質または細胞外基質(ECM)成分のレベルもしくは産生の減少;腫瘍線維化の減少;間質腫瘍輸送の増加;腫瘍灌流の改善;腫瘍微小血管系の拡張;腫瘍における間質液圧(IFP)の低下または腫瘍もしくは腫瘍血管系への薬剤、例えば癌治療薬もしくは細胞療法薬の浸透もしくは拡散の減少もしくは促進の1つまたは複数を引き起こす、請求項1〜73のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 減少される前記間質またはECM成分は、グリコサミノグリカンもしくは細胞外タンパク質またはその組合せから選択される、請求項74に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記グリコサミノグリカンは、ヒアルロナン(ヒアルロン酸またはHAとしても知られている)、コンドロイチン硫酸、コンドロイチン、デルマタン硫酸、ヘパラン硫酸、ヘパリン、エンタクチン、テネイシン、アグリカンおよびケラチン硫酸から選択される、請求項75に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記細胞外タンパク質は、コラーゲン、ラミニン、エラスチン、フィブリノゲン、フィブロネクチンまたはビトロネクチンから選択される、請求項75に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記間質調節部分は、腫瘍間質または細胞外基質(ECM)を分解する酵素分子を含む、請求項1〜73のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記酵素分子は、ヒアルロニダーゼ分子、コラゲナーゼ分子、コンドロイチナーゼ分子、マトリックスメタロプロテイナーゼ分子(例えば、マクロファージメタロエラスターゼ)または上記のいずれかの変異体(例えば、断片)から選択される、請求項1〜78のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記間質調節部分は、ヒアルロン酸のレベルまたは産生を減少させる、請求項1〜73のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記間質調節部分は、ヒアルロナン分解酵素、ヒアルロナン合成を阻害する薬剤またはヒアルロン酸に対する抗体分子を含む、請求項1〜73のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記ヒアルロナン分解酵素は、ヒアルロニダーゼ分子またはその変異体(例えば、その断片)である、請求項81に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記ヒアルロナン分解酵素は、中性または酸性pH、例えば約4〜5のpHで活性である、請求項81に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記ヒアルロニダーゼ分子は、哺乳動物ヒアルロニダーゼ分子、例えば組み換えヒトヒアルロニダーゼ分子またはその変異体(例えば、その切断型)である、請求項82または83に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記ヒアルロニダーゼ分子は、HYAL1、HYAL2もしくはPH−20/SPAM1またはその変異体(例えば、その切断型)から選択される、請求項84に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記切断型は、C末端グリコシルホスファチジルイノシトール(GPI)付着部位または前記GPI付着部位の一部を欠いている、請求項84または85に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記ヒアルロニダーゼ分子は、グリコシル化され、例えば少なくとも1つのN−結合グリカンを含む、請求項82〜86のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記ヒアルロニダーゼ分子は、配列番号61のアミノ酸配列またはその断片、あるいはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号61の前記アミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10もしくは15個以下の改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む、請求項82〜87のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記ヒアルロニダーゼ分子は、
(i)配列番号61の36−464のアミノ酸配列;
(ii)配列番号61に記載されるアミノ酸の配列を有するPH20の36−481、36−482または36−483のアミノ酸配列;または
(iii)配列番号61に記載されるアミノ酸の配列のポリペプチドまたは切断型に対する少なくとも95%〜100%の配列同一性を有するアミノ酸配列;または
(iv)配列番号61に記載される前記アミノ酸配列に対する30、20、10、5個またはそれよりも少ないアミノ酸置換を有するアミノ酸配列
を含む、請求項82〜88のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。 - 前記ヒアルロニダーゼ分子は、配列番号61の前記アミノ酸配列に対して少なくとも95%(例えば、少なくとも95%、96%、97%、98%、99%、100%)同一のアミノ酸配列を含む、請求項82〜88のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記ヒアルロニダーゼ分子は、配列番号61のヌクレオチド配列に対して少なくとも95%(例えば、少なくとも96%、97%、98%、99%、100%)同一のヌクレオチド配列によってコードされる、請求項82〜88のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記ヒアルロニダーゼ分子は、PH20、例えばrHuPH20である、請求項82〜88のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記ヒアルロニダーゼ分子は、HYAL1であり、かつ配列番号62のアミノ酸配列またはその断片、あるいはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号62の前記アミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10もしくは15個以下の改変(例えば、置換、欠失もしくは挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含む、請求項82〜87のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記ヒアルロナン分解酵素、例えば前記ヒアルロニダーゼ分子は、ポリマーをさらに含み、例えば、ポリマー、例えばPEGにコンジュゲートされる、請求項82〜93のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記ヒアルロナン分解酵素は、PEG化PH20酵素(PEGPH20)である、請求項94に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記ヒアルロナン分解酵素、例えば前記ヒアルロニダーゼ分子は、例えば、IgG1、IgG2、IgG3およびIgG4の重鎖定常領域、より特定的にヒトIgG1、IgG2、IgG3またはIgG4の重鎖定常領域から選択される免疫グロブリン鎖定常領域(例えば、Fc領域)をさらに含む、請求項82〜93のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記免疫グロブリン定常領域(例えば、前記Fc領域)は、前記ヒアルロナン分解酵素、例えば前記ヒアルロニダーゼ分子に結合され、例えば共有結合される、請求項96に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記免疫グロブリン鎖定常領域(例えば、Fc領域)は、Fc受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能または補体機能の1つまたは複数を増加または減少させるように改変され、例えば変異される、請求項96または97に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記ヒアルロナン分解酵素、例えば前記ヒアルロニダーゼ分子は、二量体を形成する、請求項82〜93のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記間質調節部分は、ヒアルロナン、例えばHAシンターゼの合成の阻害剤を含む、請求項1〜81のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記阻害剤は、HAシンターゼに対するセンスもしくはアンチセンス核酸分子を含むか、または小分子薬剤である、請求項100に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記阻害剤は、4−メチルウンベリフェロン(MU)もしくはその誘導体(例えば、6,7−ジヒドロキシ−4−メチルクマリンもしくは5,7−ジヒドロキシ−4−メチルクマリン)またはレフルノミドもしくはその誘導体である、請求項101に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記間質調節部分は、コラゲナーゼ分子、例えば哺乳動物コラゲナーゼ分子またはその変異体(例えば、断片)を含む、請求項1〜81のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記コラゲナーゼ分子は、例えば、(配列番号63のアミノ酸配列またはその断片、あるいはそれと実質的に同一である(例えば、それと95%〜99.9%同一であるか、または配列番号63の前記アミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸改変であるが、5、10もしくは15個以下の改変(例えば、置換、欠失もしくは挿入、例えば保存的置換)を有するアミノ酸配列を含むコラゲナーゼ分子IVである、請求項103に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 2つの結合特異性または機能を含み、例えば、例として、
i)前記腫瘍標的化部分および前記免疫細胞エンゲージャであって、ただし、前記多重特異性分子が前記腫瘍標的化部分および前記免疫細胞エンゲージャのみを含む場合、前記免疫細胞エンゲージャは、NK細胞抗原に対する抗体分子でない、前記腫瘍標的化部分および前記免疫細胞エンゲージャ;または
ii)前記腫瘍標的化部分および前記間質調節部分
を含む二重特異性または二機能性分子である、請求項1〜104のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。 - 3つまたは4つの結合特異性または機能を含み、例えば、三重特異性または四重特異性分子である、請求項1〜104のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- (i)少なくとも2つの腫瘍標的化部分、前記免疫細胞エンゲージャおよび前記サイトカイン分子;
(ii)前記腫瘍標的化部分、前記免疫細胞エンゲージャおよび前記間質調節部分;または
(iii)メソテリン、PDL1、HER3、線維芽細胞活性化タンパク質(FAP)もしくはインスリン成長因子1R(IGF1R)、CD47またはCD123から選択される2つの癌抗原であって、ただし、FAPおよびIGF1Rでない2つの癌抗原に結合する少なくとも2つの腫瘍標的化部分およびサイトカイン分子
を含む、請求項1〜104のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。 - (i)1つの腫瘍標的化部分と;
(ii)2つの免疫細胞エンゲージャ(例えば、同じかまたは異なる免疫細胞エンゲージャ)と;
(iii)1つのサイトカイン分子、または
(iv)1つの間質調節部分
の一方または両方と
を含む、請求項1〜104のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。 - (i)2つの腫瘍標的化部分(例えば、同じかまたは異なる標的化部分)と;
(ii)1つの免疫細胞エンゲージャと;
(iii)1つのサイトカイン分子、または
(iv)1つの間質調節部分
の一方または両方と
を含む、請求項1〜104のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。 - (i)1つの腫瘍標的化部分と;
(ii)1つの免疫細胞エンゲージャと;
(iii)2つのサイトカイン分子(例えば、同じかまたは異なるサイトカイン分子)の一方または両方と
を含む、請求項1〜104のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。 - 前記2つの腫瘍標的化部分の1つは、PDL1に結合し;前記2つの腫瘍標的化部分の1つは、メソテリンに結合し;前記免疫細胞エンゲージャは、NKp46またはNKp30に結合し;かつ前記サイトカイン分子は、IL2である、請求項109に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記腫瘍標的化部分もしくは前記免疫細胞エンゲージャまたは両方は、(i)抗体分子、例えば少なくとも1つの免疫グロブリンドメインおよび/あるいは(ii)受容体もしくはリガンドまたはその断片を含む、請求項1〜111のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記腫瘍標的化抗体分子は、約10nM未満、より典型的には10〜100pMの解離定数で前記固形腫瘍抗原および/または前記間質抗原に結合する、請求項112に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記免疫細胞エンゲージャ抗体分子は、約10nM未満、より典型的には10〜100pMの解離定数で前記NK細胞抗原、前記B細胞抗原、前記樹枝状細胞抗原および/または前記マクロファージ細胞抗原に結合する、請求項112に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記腫瘍標的化抗体分子は、前記腫瘍抗原または前記間質抗原上の立体構造または線形エピトープに結合する、請求項112に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記免疫細胞エンゲージャ抗体分子は、前記NK細胞抗原、前記B細胞抗原、前記樹枝状細胞抗原および/または前記マクロファージ細胞抗原上の立体構造または線形エピトープに結合する、請求項114に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記腫瘍標的化抗体分子は、単一特異性抗体分子、二重特異性抗体分子または三重特異性抗体分子である、請求項112に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記腫瘍標的化抗体分子は、一価抗体分子、二価抗体分子または三価抗体分子である、請求項112に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記免疫細胞エンゲージャ抗体分子は、単一特異性、二重特異性抗体分子または三重特異性抗体である、請求項116に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記免疫細胞エンゲージャ抗体分子は、一価、二価または三価抗体である、請求項116に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記腫瘍標的化抗体分子および/または免疫細胞エンゲージャ抗体分子は、完全抗体(例えば、少なくとも1つ、好ましくは2つの完全な重鎖および少なくとも1つ、好ましくは2つの完全な軽鎖を含む抗体)または抗原結合断片(例えば、Fab、F(ab’)2、Fv、一本鎖Fv、単一ドメイン抗体、ダイアボディ(dAb)、二価抗体もしくは二重特異性抗体またはその断片、その単一ドメイン変異体、あるいはラクダ科抗体)である、請求項112〜120のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記腫瘍標的化抗体分子および免疫細胞エンゲージャ抗体分子は、独立して、完全抗体(例えば、少なくとも1つ、好ましくは2つの完全な重鎖および少なくとも1つ、好ましくは2つの完全な軽鎖を含む抗体)または抗原結合断片(例えば、Fab、F(ab’)2、Fv、一本鎖Fv断片、単一ドメイン抗体、ダイアボディ(dAb)、二価抗体もしくは二重特異性抗体またはその断片、その単一ドメイン変異体、あるいはラクダ科抗体)である、請求項112〜120のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記腫瘍標的化抗体分子および/または免疫細胞エンゲージャ抗体分子は、IgG1、IgG2、IgG3もしくはIgG4から選択される重鎖定常領域またはその断片を含む、請求項122に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記腫瘍標的化抗体分子および/または免疫細胞エンゲージャ抗体分子は、κもしくはλの軽鎖定常領域から選択される軽鎖定常領域またはその断片を含む、請求項122または123に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記腫瘍標的化部分もしくは前記免疫細胞エンゲージャまたは両方は、前記腫瘍抗原および/もしくは前記間質抗原、または前記NK細胞抗原、前記B細胞抗原、前記樹枝状細胞抗原および/もしくは前記マクロファージ細胞抗原に結合する受容体もしくは受容体断片またはリガンドもしくはリガンド断片を含む、請求項112に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- IgG1、IgG2およびIgG4の前記重鎖定常領域、より特定的にヒトIgG1、IgG2またはIgG4の前記重鎖定常領域から選択される免疫グロブリン定常領域(例えば、Fc領域)をさらに含む、請求項1〜125のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記免疫グロブリン定常領域(例えば、Fc領域)は、前記腫瘍標的化部分、前記免疫細胞エンゲージャまたは前記サイトカイン分子の1つまたは複数に結合され、例えば共有結合される、請求項126に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記免疫グロブリン鎖定常領域(例えば、Fc領域)は、Fc受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能または補体機能の1つまたは複数を増加または減少させるように改変され、例えば変異される、請求項126または127に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記腫瘍標的化部分または免疫細胞エンゲージャは、κもしくはλの前記軽鎖定常領域から選択される軽鎖定常領域またはその断片を含む、請求項1〜128のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 第1の腫瘍標的化部分および第2の腫瘍標的化部分を含み、前記第1の腫瘍標的化部分は、κ軽鎖定常領域またはその断片を含み、かつ前記第2の腫瘍標的化部分は、λ軽鎖定常領域またはその断片を含む、請求項129に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 第1の腫瘍部分および第2の腫瘍標的化部分を含み、前記第1の腫瘍標的化部分および前記第2の腫瘍標的化部分は、共通の軽鎖可変領域を含む、請求項1〜128のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記免疫グロブリン定常領域(例えば、Fc領域)は、腫瘍標的化部分、前記免疫細胞エンゲージャ、前記サイトカイン分子または前記間質調節部分の1つまたは複数に結合され、例えば共有結合される、請求項1〜128のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 第1および第2の免疫グロブリン鎖定常領域(例えば、Fc領域)のインターフェースは、例えば、非改変インターフェースと比べて二量体化を増加または減少させるように改変され、例えば変異される、請求項1〜132のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記免疫グロブリン鎖定常領域(例えば、Fc領域)の二量体化は、例えば、非改変インターフェースと比べてヘテロ多量体:ホモ多量体のより高い比率が生じるように、第1および第2のFc領域のFcインターフェースに、対になった空洞−突起(「ノブ・イン・ホール」)、静電相互作用または鎖交換の1つまたは複数を提供することによって促進される、請求項133に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記免疫グロブリン鎖定常領域(例えば、Fc領域)は、例えば、ヒトIgG1の前記Fc領域の347、349、350、351、366、368、370、392、394、395、397、398、399、405、407または409の1つまたは複数から選択される位置にアミノ酸置換を含む、請求項133または134に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記免疫グロブリン鎖定常領域(例えば、Fc領域)は、T366S、L368AもしくはY407V(例えば、空洞もしくはホールに対応する)またはT366W(例えば、突起もしくはノブに対応する)あるいはその組合せから選択されるアミノ酸置換を含む、請求項133〜135のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- リンカー、例えば前記標的化部分および前記サイトカイン分子もしくは前記間質調節部分、前記標的化部分および前記免疫細胞エンゲージャ、前記サイトカイン分子もしくは前記間質調節部分および前記免疫細胞エンゲージャ、前記サイトカイン分子もしくは前記間質調節部分および前記免疫グロブリン鎖定常領域(例えば、前記Fc領域)、前記標的化部分および前記免疫グロブリン鎖定常領域、または前記免疫細胞エンゲージャおよび前記免疫グロブリン鎖定常領域の1つまたは複数間のリンカーをさらに含む、請求項1〜136のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記リンカーは、切断可能なリンカー、切断不可能なリンカー、ペプチドリンカー、フレキシブルリンカー、剛性リンカー、らせん状リンカーまたは非らせん状リンカーから選択される、請求項137に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記リンカーは、ペプチドリンカーである、請求項138に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記ペプチドリンカーは、GlyおよびSerを含む、請求項139に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 第1および第2の非隣接ポリペプチドを含む二重特異性分子であり、
(i)前記第1のポリペプチドは、例えば、NからCの配向で、任意選択的にリンカーを介して、サイトカイン分子、間質調節部分または免疫細胞エンゲージャに連結される、例えば癌抗原、例えば固形腫瘍、間質または血液抗原に結合する腫瘍標的化部分、例えば抗体分子(例えば、第1の抗原ドメインの第1の部分、例えばFab分子の第1のVH−CH1)、例えば抗体分子、例えば免疫細胞抗原に結合するscFvを含み;および
(ii)前記第2のポリペプチドは、例えば、NからCの配向で、例えば癌抗原、例えば固形腫瘍、間質または血液抗原(例えば、前記第1のVH−CH1によって結合される同じ腫瘍または間質抗原)に結合する前記第1の抗原ドメインの第2の部分、例えば前記Fabの第1のVL−CLを含む、請求項1〜140のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。 - 第1および第2の非隣接ポリペプチドを含む二重特異性分子であり、
(i)前記第1のポリペプチドは、例えば、NからCの配向で、任意選択的にリンカーを介して、前記第1および第2のポリペプチド間の結合を促進する第1のドメイン(例えば、第1の免疫グロブリン定常ドメイン(例えば、本明細書に記載される第1のFc分子)に連結される、例えば癌抗原、例えば固形腫瘍、間質または血液抗原に結合する腫瘍標的化部分、例えば抗体分子(例えば、第1の抗原ドメインの第1の部分、例えばFab分子の第1のVH−CH1)を含み;
(ii)前記第2のポリペプチドは、例えば、NからCの配向で、任意選択的にリンカーを介して、前記第1および第2のポリペプチド間の結合を促進する第2のドメイン(例えば、第2の免疫グロブリン定常ドメイン(例えば、本明細書に記載される第2のFc分子)に連結されるサイトカイン分子、間質調節部分または免疫細胞エンゲージャ(例えば、抗体分子、例えば免疫細胞抗原に結合するscFv)を含み;および
(iii)前記第3のポリペプチドは、例えば、NからCの配向で、前記癌抗原に結合する前記第1の抗原ドメインの第2の部分、例えば前記Fabの第1のVL−CLを含む、請求項1〜140のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。 - 第1、第2および第3の非隣接ポリペプチドを含む三重特異性分子であり、
(i)前記第1のポリペプチドは、例えば、NからCの配向で、任意選択的にリンカーを介して、前記第1および第2のポリペプチド間の結合を促進する第1のドメイン(例えば、第1の免疫グロブリン定常ドメイン(例えば、本明細書に記載される第1のFc分子)に連結される、例えば癌抗原に結合する腫瘍標的化部分、例えば抗体分子(例えば、第1の抗原ドメインの第1の部分、例えばFab分子の第1のVH−CH1)を含み;
(ii)前記第2のポリペプチドは、例えば、NからCの配向で、任意選択的にリンカーを介して、前記第1および第2のポリペプチド間の結合を促進する第2のドメイン(例えば、第2の免疫グロブリン定常ドメイン(例えば、本明細書に記載される第2のFc分子)に連結されるサイトカイン分子、間質調節部分または免疫細胞エンゲージャ(例えば、抗体分子、例えば免疫細胞抗原に結合するscFv)を含み;および
(iii)前記第3のポリペプチドは、例えば、NからCの配向で、前記癌抗原に結合する前記第1の抗原ドメインの第2の部分、例えば前記Fabの第1のVL−CLを含み、
前記第1または第2のポリペプチドのいずれかは、前記第1または第2の免疫グロブリン定常ドメインのC末端に任意選択的に共有結合されるサイトカイン分子または免疫細胞エンゲージャをさらに含む、請求項1〜140のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。 - 第1、第2および第3の非隣接ポリペプチドを含む四重特異性分子であり、
(i)前記第1のポリペプチドは、例えば、NからCの配向で、任意選択的にリンカーを介して、前記第1および第2のポリペプチド間の結合を促進する第1のドメイン(例えば、第1の免疫グロブリン定常ドメイン(例えば、本明細書に記載される第1のFc分子)に連結される、例えば癌抗原に結合する腫瘍標的化部分、例えば抗体分子(例えば、第1の抗原ドメインの第1の部分、例えばFab分子の第1のVH−CH1)を含み;
(ii)前記第2のポリペプチドは、例えば、NからCの配向で、任意選択的にリンカーを介して、前記第1および第2のポリペプチド間の結合を促進する第2のドメイン(例えば、第2の免疫グロブリン定常ドメイン(例えば、本明細書に記載される第2のFc分子)に連結されるサイトカイン分子、間質調節部分または免疫細胞エンゲージャ(例えば、抗体分子、例えば免疫細胞抗原に結合するscFv)を含み;および
(iii)前記第3のポリペプチドは、例えば、NからCの配向で、前記癌抗原に結合する前記第1の抗原ドメインの第2の部分、例えば前記Fabの第1のVL−CLを含み、
前記第1および第2のポリペプチドは、前記第1または第2の免疫グロブリン定常ドメインのC末端に任意選択的に共有結合されるサイトカイン分子および/または免疫細胞エンゲージャをさらに含む、請求項1〜140のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。 - a)第1のポリペプチドであって、
前記第1および第2のポリペプチドの結合を促進するドメイン、例えばFc分子と;
腫瘍標的化部分;免疫細胞エンゲージャ;間質調節部分およびサイトカイン分子から選択される2つのポリペプチドと
を含む第1のポリペプチドと、
b)第2のポリペプチドであって、
前記第1および第2のポリペプチドの結合を促進するドメイン、例えばFc分子と;
腫瘍標的化部分;免疫細胞エンゲージャおよびサイトカイン分子から選択される2つのポリペプチドと
を含む第2のポリペプチドと
を含み、腫瘍標的化部分;免疫細胞エンゲージャ;間質調節部分およびサイトカイン分子を含む、請求項1〜140のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。 - 腫瘍標的化部分;免疫細胞エンゲージャおよび2つのサイトカイン分子または2つの間質調節部分;
腫瘍標的化部分;2つの免疫細胞エンゲージャおよびサイトカイン分子または間質調節部分;または
2つの腫瘍標的化部分;免疫細胞エンゲージャおよびサイトカイン分子または間質調節部分
を含む、請求項145に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。 - 2つの腫瘍標的化部分;免疫細胞エンゲージャおよびサイトカイン分子を含み、前記2つの腫瘍標的化部分の1つは、PDL1に結合する抗体分子であり;前記2つの腫瘍標的化部分の1つは、メソテリンに結合し;前記免疫細胞エンゲージャは、NKp46またはNKp30に結合し;かつ前記サイトカインは、IL2である、請求項146に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- i)第1のポリペプチドは、例えば、N−CまたはC−N方向に、腫瘍標的化部分;前記第1および第2のポリペプチドの結合を促進するドメイン、例えばFc分子ならびに免疫細胞エンゲージャを含むこと;
ii)第1のポリペプチドは、例えば、N−CまたはC−N方向に、腫瘍標的化部分;前記第1および第2のポリペプチドの結合を促進するドメイン、例えばFc分子ならびにサイトカイン分子または間質調節部分を含むこと;または
iii)第1のポリペプチドは、例えば、N−CまたはC−N方向に、サイトカイン;前記第1および第2のポリペプチドの結合を促進するドメイン、例えばFc分子ならびに免疫細胞エンゲージャを含むこと;および
iv)第2のポリペプチドは、例えば、N−CまたはC−N方向に、腫瘍標的化部分;前記第1および第2のポリペプチドの結合を促進するドメイン、例えばFc分子ならびに免疫細胞エンゲージャを含むこと;
ii)第2のポリペプチドは、例えば、N−CまたはC−N方向に、腫瘍標的化部分;前記第1および第2のポリペプチドの結合を促進するドメイン、例えばFc分子ならびにサイトカイン分子または間質調節部分を含むこと;または
iii)第2のポリペプチドは、例えば、N−CまたはC−N方向に、サイトカイン;前記第1および第2のポリペプチドの結合を促進するドメイン、例えばFc分子ならびに免疫細胞エンゲージャを含むこと
を含む、請求項146に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。 - (i)前記腫瘍標的化部分は、
(ia)PDL1、メソテリン、HER3、IGF−1R、GD2、PMSA、CEA、Ronキナーゼもしくはc−Metから選択される固形腫瘍抗原に対する抗体分子;および/または
(ib)FAP、ヒアルロン酸、コラーゲンIV、テネイシンCもしくはテネイシンWから選択される間質抗原に対する抗体分子;あるいは
前記固形腫瘍抗原に対する前記抗体分子と、前記間質抗原に対する前記抗体分子との組合せと;
(ii)
(iia)CD40LもしくはCD70リガンド;CD40もしくはCD70に結合する抗体分子;OX40に対する抗体分子;OX40L;B7−H6またはSTINGアゴニストあるいはその組合せの1つ、2つ、3つまたは全てから選択される前記免疫細胞エンゲージャ;
(iib)IL−2、IL−12、IL−15、IL−18、IL−7もしくはIL−21、その断片もしくは変異体または上記のサイトカイン分子のいずれかの組合せから選択される前記サイトカイン分子;
(iic)ヒアルロニダーゼまたはゼラチナーゼから選択される前記間質調節部分
の1つ、2つまたは全てと
を含む、請求項1〜148のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。 - メソテリン、例えばヒトメソテリンに対する抗体分子;CD40LポリペプチドおよびIL−15またはIL−2分子を含む、請求項149に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記抗体分子は、軽鎖および重鎖を有する、メソテリンに対するFabを含む、請求項150に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- メソテリンに対する前記Fabの前記重鎖は、前記IL−15またはIL−2分子、例えばヒトIL−15分子をさらに含み、任意選択的に、前記Fabおよび前記IL−15またはIL−2分子は、例えば、GlyおよびSerを含むリンカーを介して結合される、請求項151に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 以下の立体配置:N末端からC末端に、メソテリンに対する前記Fabの重鎖(例えば、VH−CH1)からIL−15またはIL−2を有し、任意選択的に、前記Fabおよび前記IL−15またはIL−2間のGly−Serリンカーを含む、請求項152に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- メソテリンに対する前記Fabの前記軽鎖は、CD40Lをさらに含み、任意選択的に、前記Fabおよび前記CD40Lは、例えば、GlyおよびSerを含むリンカーを介して結合される、請求項150〜153のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 以下の立体配置:N末端からC末端に、CD40Lに融合されたメソテリンに対する前記Fabの軽鎖(例えば、VL−CL1)を有し、任意選択的に、前記Fabおよび前記CD40L間のGly−Serリンカーを含む、請求項154に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- FAP、例えばヒトFAPに対する抗体分子およびIL−15またはIL−2分子を含む、請求項149に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記抗体分子は、軽鎖および重鎖を有する、FAPに対するFabを含む、請求項156に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- FAPに対する前記Fabの前記重鎖は、前記第1のFc領域の前記Fcインターフェース中の対になった空洞−突起(ノブ・イン・ホール)のメンバーを有する第1のFc領域をさらに含む、請求項157に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 以下の立体配置:N末端からC末端に、第1のFc領域(例えば、CH2からCH3)に融合されたFAPの前記Fabの重鎖(例えば、VH−CH1)を有する、請求項158に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記IL−15またはIL−2分子、例えばヒトIL−15またはIL−2分子は、例えば、GlyおよびSerを含むリンカーを介して連結される、前記第2のFc領域の前記Fcインターフェース中の対になった空洞−突起(ノブ・イン・ホール)の第2のメンバーを有する第2のFc領域をさらに含む、請求項156〜159のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 以下の立体配置:N末端からC末端に、IL−15またはIL−2分子−第2のFc領域(例えば、CH2からCH3)を有し、例えば、前記IL−15またはIL−2分子および前記第2のFc領域は、GlyおよびSerを含むリンカーを介して連結される、請求項160に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 免疫細胞エンゲージャをさらに含む、請求項156〜161のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記免疫細胞エンゲージャは、CD40リガンドを含む、請求項162に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記免疫細胞エンハンサーは、前記対になった空洞−突起(ノブ・イン・ホール)の前記第2のメンバーおよび前記IL−15またはIL−2分子、例えばヒトIL−15またはIL−2分子を有する前記第2のFc領域に結合され、例えば共有結合され、任意選択的に、前記IL−15もしくはIL−2分子と前記第2のFc領域との間および/または前記第2のFc領域と前記免疫細胞エンハンサーとの間に、GlyおよびSerを含むリンカーを含む、請求項162または163に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 以下の立体配置:N末端からC末端に、IL−15またはIL−2分子−第2のFc領域(例えば、CH2からCH3)−免疫細胞エンハンサーを有し、任意選択的に、前記IL−15もしくはIL−2分子と前記第2のFc領域との間および/または前記第2のFc領域と前記免疫細胞エンハンサーとの間に、GlyおよびSerを含むリンカーを含む、請求項164に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 第2の免疫細胞エンハンサーをさらに含む、請求項156〜165のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記第2の免疫細胞エンハンサーは、B7H6分子を含む、請求項166に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記第2の免疫細胞エンハンサーは、前記第1のFc領域の前記Fcインターフェース中の前記対になった空洞−突起(ノブ・イン・ホール)の前記第1のメンバーおよび前記Fabの前記重鎖を有する前記第1のFc領域に結合され、例えば共有結合され、任意選択的に、前記B7H6分子および前記第1のFc領域間に、GlyおよびSerを含むリンカーを含む、請求項166または167に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 固形腫瘍抗原または間質抗原に対する標的化抗体分子および少なくとも2つの免疫細胞エンハンサーを含む、請求項149に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記抗体分子は、メソテリンまたはFAPに結合する、請求項169に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記免疫細胞エンハンサーは、TLRアゴニスト(例えば、TLR9アゴニスト)またはSTINGアゴニストおよびOX40に対する抗体分子である、請求項169または170に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記STINGアゴニストは、任意選択的に、2’,5’または3’,5’リン酸塩結合とともに環状ジヌクレオチド、例えば環状ジ−GMP(cdGMP)、環状ジ−AMP(cdAMP)またはその組合せを含み、任意選択的に、前記STINGアゴニストは、前記標的化抗体または前記免疫細胞エンハンサーに結合される(例えば、直接コンジュゲートされる)、請求項171に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記TLRアゴニストは、非メチル化CpG配列を含む、請求項171に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- メソテリンまたはFAPに対する第1の結合特異性およびOX40に対する第2の結合特異性を有する二重特異性抗体を含む、請求項92〜96のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 請求項1〜174のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチドをコードする単離核酸分子。
- (i)請求項1〜174のいずれか一項に記載の腫瘍標的化部分;
(ii)請求項1〜174のいずれか一項に記載の免疫細胞エンゲージャ;
(iii)請求項1〜174のいずれか一項に記載のサイトカイン分子;および
(iv)任意選択的に、請求項137〜174のいずれか一項に記載のリンカー
の1つまたは複数をコードする単離核酸分子。 - 本明細書に記載される前記多重特異性もしくは多機能性分子のいずれかをコードする前記ヌクレオチド配列またはそれと実質的に相同である(例えば、それと少なくとも95%〜99.9%同一である)ヌクレオチド配列を含む単離核酸分子。
- 請求項175〜177のいずれか一項に記載の核酸分子の1つまたは複数を含むベクター、例えば発現ベクター。
- 請求項175〜178のいずれか一項に記載の核酸分子またはベクターを含む宿主細胞。
- 請求項1〜174のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチドを作製、例えば産生する方法であって、好適な条件、例えば遺伝子発現および/またはホモ二量体化もしくはヘテロ二量体化に好適な条件下において、請求項179に記載の宿主細胞を培養することを含む方法。
- 請求項1〜174のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチドと、薬学的に許容できる担体、賦形剤または安定剤とを含む医薬組成物。
- 癌を治療する方法であって、それを必要とする対象に、請求項1〜174のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチドを投与することを含み、前記多重特異性抗体は、前記癌を治療するのに有効な量で投与される、方法。
- 前記癌は、固形腫瘍癌または転移性病変である、請求項182に記載の方法。
- 前記固形腫瘍癌は、膵臓癌(例えば、膵臓腺癌)、乳癌、大腸癌、肺癌(例えば、小細胞または非小細胞肺癌)、皮膚癌、卵巣癌または肝臓癌の1つまたは複数である、請求項183に記載の方法。
- 前記癌は、血液癌である、請求項182に記載の方法。
- 第2の治療処置を投与することをさらに含む、請求項182〜185のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第2の治療処置は、治療剤(例えば、化学療法剤、生物剤、ホルモン療法)、放射線または手術を含む、請求項186に記載の方法。
- 前記治療剤は、化学療法剤または生物剤から選択される、請求項187に記載の方法。
- 前記第1の腫瘍標的化部分は、CD123に結合し、前記第2の腫瘍標的化部分は、CD47に結合し、かつ前記T細胞エンゲージャは、CD3アゴニストであるかまたはそれを含む、請求項6に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記免疫細胞エンゲージャは、T細胞への結合およびT細胞の活性化を媒介するT細胞エンゲージャを含む、請求項1〜54のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記免疫細胞エンゲージャは、T細胞への結合を媒介するが、T細胞の活性化を媒介しないT細胞エンゲージャを含む、請求項1〜54のいずれか一項に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
- 前記T細胞エンゲージャは、CD3、TCRα、TCRβ、TCRγ、TCRζ、ICOS、CD28、CD27、HVEM、LIGHT、CD40、4−1BB、OX40、DR3、GITR、CD30、TIM1、SLAM、CD2またはCD226に結合する、請求項190または191に記載の多重特異性または多機能性分子ポリペプチド。
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