JP2019142926A - ＡＴＲキナーゼ阻害剤として有用な２−アミノ−６−フルオロ−Ｎ−［５−フルオロ−ピリジン−３−イル］ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−カルボキサミド化合物の放射性標識された誘導体、この化合物およびその異なる固体形態の調製 - Google Patents

Abstract

【課題】ＡＴＲキナーゼ阻害剤を提供すると。【解決手段】本発明は、ＡＴＲプロテインキナーゼの阻害剤として有用な化合物に関する。本発明は、本発明の化合物を含有する薬学的に受容可能な組成物；本発明の化合物を使用する種々の疾患、障害、および状態の処置の方法；本発明の化合物を調製するためのプロセス；本発明の化合物の調製のための中間体；ならびに本発明の化合物の固体形態に関する。本発明の化合物は、式Ｉ−１またはＩ−Ａ：を有し、ここでこれらの可変物は、本明細書中で定義されるとおりである。【選択図】なし

Description

発明の背景
ＡＴＲ（「ＡＴＭおよびＲａｄ３関連」）キナーゼは、ＤＮＡ損傷に対する細胞応答に
関与するプロテインキナーゼである。ＡＴＲキナーゼはＡＴＭ（「毛細血管拡張性運動失
調変異遺伝子」）キナーゼおよび多くの他のタンパク質と一緒に働いて、ＤＮＡ損傷に対
する細胞応答（一般に、ＤＮＡ損傷応答（「ＤＤＲ」）と呼ばれる）の調節を行う。ＤＤ
ＲはＤＮＡ修復を刺激し、生存を促進し、細胞周期チェックポイントの活性化により細胞
周期進行を失速させることで修復の時間を与える。ＤＤＲがない場合、細胞はＤＮＡ損傷
に対してより敏感になり、ＤＮＡ複製などの内因性細胞プロセスや、がん治療において一
般的に使用される外因性ＤＮＡ損傷因子により誘導されるＤＮＡ疾患によって容易に死滅
する。

健常な細胞は、ＤＤＲキナーゼＡＴＲを含むＤＮＡ修復用の多数の様々なタンパク質に
依存し得る。いくつかの場合において、これらのタンパク質は、機能的に冗長なＤＮＡ修
復プロセスを活性化することによって、互いに補償することができる。一方、多くのがん
細胞はそのＤＮＡ修復プロセス（例えばＡＴＭシグナル伝達）のうちのいくつかにおける
欠陥を内包しており、従って、ＡＴＲを含む無傷の残存ＤＮＡ修復タンパク質に対してよ
り大きな依存性を示す。

さらに、多くの癌細胞は活性化された腫瘍遺伝子を発現しているか、あるいは主要な腫
瘍抑制遺伝子を欠いており、これによりこれらのがん細胞はＤＮＡ複製の調節不全フェー
ズの影響を受けやすくあり得、これは次に、ＤＮＡ損傷を引き起こす。ＡＴＲは、ＤＮＡ
複製の破壊に応答するＤＤＲの重要な構成要素とされている。その結果、これらのがん細
胞は、健常な細胞に比べ、生存するためにＡＴＲ活動により依存的になる。したがってＡ
ＴＲ阻害剤は、単独使用で、またはＤＮＡ損傷因子と組み合わせて使用することによって
、がん処置に有用であり得る。なぜなら、健常な正常細胞にとってよりも多くのがん細胞
にとって細胞生存のために重要であるＤＮＡ修復機構を、ＡＴＲ阻害剤がシャットダウン
するからである。

実際に、ＡＴＲ機能の破壊（例えば遺伝子欠損により）は、ＤＮＡ損傷因子の非存在下
と存在下の両方において、がん細胞の死を促進することが示されている。このことは、Ａ
ＴＲ阻害剤が単剤として、および放射線治療または遺伝子毒性化学療法に対する強力な増
感剤としての両方において、有効であり得ることを示唆する。

これらの全ての理由から、がんの処置のための、単剤として、または放射線治療もしく
は遺伝子毒性化学療法との併用療法としてのいずれかで、強力かつ選択的なＡＴＲ阻害剤
の開発が必要とされている。さらに、大規模合成に耐えられ、現在公知である方法を改善
する、ＡＴＲ阻害剤のための合成経路を有することが望ましい。
ＡＴＲペプチドは、文献で知られている様々な方法を用いて発現させ単離することがで
きる（例えば、Ｕｅｎｓａｌ−Ｋａｃｍａｚら，ＰＮＡＳ ９９：１０，ｐｐ６６７３−
６６７８，２００２年５月１４日を参照のこと；Ｋｕｍａｇａｉら．Ｃｅｌｌ １２４，
ｐｐ９４３−９５５，２００６年３月１０日；Ｕｎｓａｌ−Ｋａｃｍａｚら．Ｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００４年２月，ｐ１２９２−
１３００；およびＨａｌｌ−Ｊａｃｋｓｏｎら．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １９９９，１８，６
７０７−６７１３もまた参照のこと）。

Ｕｅｎｓａｌ−Ｋａｃｍａｚら，ＰＮＡＳ ９９：１０，ｐｐ６６７３−６６７８，２００２年５月１４日 Ｋｕｍａｇａｉら．Ｃｅｌｌ １２４，ｐｐ９４３−９５５，２００６年３月１０日 Ｕｎｓａｌ−Ｋａｃｍａｚら．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００４年２月，ｐ１２９２−１３００ Ｈａｌｌ−Ｊａｃｋｓｏｎら．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １９９９，１８，６７０７−６７１３

図面の簡単な説明
図１ａ：ＸＲＰＤ 化合物Ｉ−Ｉの無水物遊離塩基
図２ａ：ＴＧＡ 化合物Ｉ−１の無水物遊離塩基
図３ａ：ＤＳＣ 化合物Ｉ−１の無水物遊離塩基
図１ｂ：ＸＲＰＤ 化合物Ｉ−１の水和物
図２ｂ：ＴＧＡ 化合物Ｉ−１の水和物
図３ｂ：ＤＳＣ 化合物Ｉ−１の水和物
図１ｃ：ＸＲＰＤ 化合物Ｉ−１酒石酸
図２ｃ：ＴＧＡ 化合物Ｉ−１酒石酸
図３ｃ：ＤＳＣ 化合物Ｉ−１酒石酸
発明の要旨
本発明は、ＡＴＲ阻害剤および重水素化ＡＴＲ阻害剤の固体形態に関する。本発明はま
た、ＡＴＲキナーゼの強力な阻害剤として有用な、アミノピラゾロピリミジン化合物を調
製するためのプロセスおよび中間体に関する。アミノ−ピラゾロピリミジン誘導体は、Ａ
ＴＲ阻害剤として有用であり、そしてＡＴＲ阻害剤を調製するためにもまた有用である。

本発明の１つの局面は、化合物Ｉ−１：

を調製するためのプロセスを提供する。

本発明の別の局面は、式Ｉ−Ａ：

の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくは誘導体を包含し、式Ｉ−Ａにおいて：
Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、およびＹ^７の各々は独立して、水素またはジュ
ウテリウムであり；ただし、Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、およびＹ^７のうちの
少なくとも１つはジュウテリウムであり；
Ｘ^１、Ｘ^２、およびＸ^４の各々は独立して、^１２Ｃまたは^１３Ｃから選択され；そして
Ｘ^３は独立して、−^１２Ｃ（Ｏ）−または−^１３Ｃ（Ｏ）−から選択される。

本発明のなお別の局面は、式Ｉ−１：

の化合物の固体形態を提供する。
本発明の他の局面は、本明細書中に記載される。
一実施形態において、例えば、以下の項目が提供される。
（項目１）
式Ｉ−Ａ：

の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくは誘導体であって、式Ｉ−Ａにおいて：
Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、およびＹ^７の各々は独立して、水素またはジュウテリウムであり；ただし、Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、およびＹ^７のうちの少なくとも１つはジュウテリウムであり；
Ｘ^１、Ｘ^２、およびＸ^４の各々は独立して、^１２Ｃまたは^１３Ｃから選択され；そして
Ｘ^３ は独立して、−^１２Ｃ（Ｏ）−または−^１３Ｃ（Ｏ）−から選択される、
化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくは誘導体。
（項目２）
Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、およびＹ^４は独立して、ジュウテリウムまたは水素から選択され；そしてＹ^５、Ｙ^６、およびＹ^７はジュウテリウムである、項目１に記載の化合物。
（項目３）
Ｙ^１およびＹ^２は独立して、ジュウテリウムまたは水素から選択され；そしてＹ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、およびＹ^７はジュウテリウムである、項目１に記載の化合物。
（項目４）
Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^５、Ｙ^６、およびＹ^７は独立して、ジュウテリウムまたは水素から選択され；そしてＹ^３およびＹ^４はジュウテリウムである、項目１に記載の化合物。
（項目５）
Ｙ^１、Ｙ^３、およびＹ^４は独立して、ジュウテリウムまたは水素から選択され；そしてＹ^２、Ｙ^５、Ｙ^６、およびＹ^７はジュウテリウムである、項目１に記載の化合物。
（項目６）
Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、およびＹ^７は水素であり；そしてＸ^４は^１３Ｃである、項目１に記載の化合物。
（項目７）
Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、およびＹ^７は水素であり；そしてＸ^１およびＸ^４は^１３Ｃである、項目１に記載の化合物。
（項目８）
Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、およびＹ^７は水素であり；そしてＸ^３は−^１３Ｃ（Ｏ）−である、項目１に記載の化合物。
（項目９）
Ｙ^１、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、およびＹ^７は水素であり；Ｙ^２はジュウテリウムであり；そしてＸ^４は^１３Ｃである、項目１に記載の化合物。
（項目１０）
Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、およびＹ^４は水素であり；Ｙ^５、Ｙ^６、およびＹ^７はジュウテリウムであり；そしてＸ^１は^１３Ｃである、項目１に記載の化合物。
（項目１１）
Ｙ^１、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、およびＹ^７は水素であり；Ｙ^２はジュウテリウムであり；そしてＸ^１は^１３Ｃである、項目１に記載の化合物。
（項目１２）
Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^５、Ｙ^６、およびＹ^７は水素であり；Ｙ^４はジュウテリウムであり；そしてＸ^１は^１３Ｃである、項目１に記載の化合物。
（項目１３）
Ｙ^１は水素であり； Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、およびＹ^７はジュウテリウムであり；Ｘ^２は^１３Ｃであり；そしてＸ^３は−^１３Ｃ（Ｏ）−である、項目１に記載の化合物。
（項目１４）
式Ｉ−１：

の化合物を調製するためのプロセスであって、式６ｂ：

の化合物を、式１１：

の化合物と、適切な条件下で反応させて、アミド結合を形成する工程を包含する、プロセス。
（項目１５）
式１１：

の化合物を調製する工程であって、式９：

の化合物を、式１０：

の化合物と、適切な金属触媒クロスカップリング条件下で反応させて、保護されたアミン基を含む付加体を形成すること；および
得られた付加体を適切な脱保護条件に供すること
による、工程をさらに包含する、項目１４に記載のプロセス。
（項目１６）
式９：

の化合物を、式８：

の化合物を適切なハロゲン化条件下で反応させることによって調製する工程をさらに包含する、項目１５に記載のプロセス。
（項目１７）
式８：

の化合物を、式７：

の化合物を適切な条件下で反応させて保護されたアミン基を生成することによって調製する工程をさらに包含する、項目１６に記載のプロセス。
（項目１８）
式Ｉ−１：

の化合物の固体形態であって、該形態は、化合物Ｉ−１の無水物遊離塩基、化合物Ｉ−１の水和物、または化合物Ｉ−１酒石酸からなる群より選択される、固体形態。
（項目１９）
前記形態は、結晶性の化合物Ｉ−１の無水物遊離塩基である、項目１８に記載の固体形態。
（項目２０）
Ｃｕ Ｋα放射線を使用して得られるＸ線粉末回折パターンにおいて、２θ±０．２で表される、約９．９°、１２．８°、１５．４°、１７．０°、２３．１°、２７．８°、２９．０°、および３０．１°の１つまたはより多くのピークによって特徴付けられる、項目１９に記載の固体形態。
（項目２１）
図１ａに示されるものと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有すると特徴付けられる、項目１９に記載の固体形態。
（項目２２）
前記形態は、結晶性の化合物Ｉ−１の水和物である、項目１８に記載の固体形態。
（項目２３）
前記結晶性の化合物Ｉ−１の水和物は、１：３の、化合物Ｉ−１対水の比を有する、項目２２に記載の固体形態。
（項目２４）
約４０℃〜約１００℃の温度範囲で約１２．６％からの減量によって特徴付けられる、項目２２に記載の固体形態。
（項目２５）
Ｃｕ Ｋα放射線を使用して得られるＸ線粉末回折パターンにおいて、２θ±０．２で表される、約２７．５°、２０．６°、および９．７°の１つまたはより多くのピークによって特徴付けられる、項目２２に記載の固体形態。
（項目２６）
図１ｂに示されるものと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有すると特徴付けられる、項目２２に記載の固体形態。
（項目２７）
前記形態は、結晶性の化合物Ｉ−１酒石酸である、項目１８に記載の固体形態。
（項目２８）
前記結晶性の化合物Ｉ−１酒石酸は、１：１の、化合物Ｉ−１対酒石酸を有する、項目２７に記載の固体形態。
（項目２９）
Ｃｕ Ｋα放射線を使用して得られるＸ線粉末回折パターンにおいて、２θ±０．２で表される、約７．１°、１８．３°、および１３．２°の１つまたはより多くのピークによって特徴付けられる、項目２７に記載の固体形態。
（項目３０）
図１ｃに示されるものと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有すると特徴付けられる、項目２７に記載の固体形態。

図１ａ：ＸＲＰＤ 化合物Ｉ−Ｉの無水物遊離塩基。 図１ｂ：ＸＲＰＤ 化合物Ｉ−１の水和物。 図１ｃ：ＸＲＰＤ 化合物Ｉ−１酒石酸。 図２ａ：ＴＧＡ 化合物Ｉ−１の無水物遊離塩基。 図２ｂ：ＴＧＡ 化合物Ｉ−１の水和物。 図２ｃ：ＴＧＡ 化合物Ｉ−１酒石酸。 図３ａ：ＤＳＣ 化合物Ｉ−１の無水物遊離塩基。 図３ｂ：ＤＳＣ 化合物Ｉ−１の水和物。 図３ｃ：ＤＳＣ 化合物Ｉ−１酒石酸。

発明の詳細な説明
プロセス
本発明の別の局面は、式Ｉ−１：

の化合物を調製するためのプロセスを提供し、このプロセスは、式６ｂ：

の化合物を、式１１：

の化合物と、適切な条件下で反応させて、アミド結合を形成する工程を包含する。

アミノ結合を形成するための適切な条件は、式６ｂの化合物を、置換３−アミノピリジ
ン１１と、溶媒および有機塩基の存在下で反応させることを包含する。１つの実施形態に
おいて、この溶媒は、ＮＭＰ、ＤＭＦまたはアニソール（好ましい）から選択され得る。
別の実施形態おいて、この有機塩基は、トリエチルアミンまたはＤＩＰＥＡ（好ましい）
から独立して選択される、脂肪族アミンである。

本発明のさらに他の実施形態は、式１１：

の化合物を調製するためのプロセスを包含し、このプロセスは、式９：

の化合物を式１０：

の化合物と、適切な金属触媒クロスカップリング条件下で反応させて、保護されたアミン
基を含む付加体を形成すること；および
得られた付加体を適切な脱保護条件に供すること
による。

適切な金属触媒クロスカップリング条件は、金属触媒、適切な溶媒、および適切な塩基
を含む。いくつかの実施形態において、この金属触媒は、パラジウム触媒である。適切な
パラジウム触媒の例としては、ＰｄＣｌ_２（ＰＰｈ_３）_２、Ｐｄ（Ｐｈ_３）_４、およびＰ
ｄＣｌ_２（ｄｐｐｆ）（ここで各Ｐｈはフェニルであり、そしてｄｐｐｆは、１，１−ビ
ス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンである）が挙げられるが、これらに限定されない
。適切な塩基としては、リン酸カリウム、Ｋ_２ＣＯ_３、ｔＢｕＯＫおよびＮａ_２ＣＯ_３が
挙げられるが、これらに限定されない。適切な溶媒としては、ＤＭＥ、テトラヒドロフラ
ン、トルエン、およびエタノールが挙げられるが、これらに限定されない。

保護基を除去するための適切な脱保護条件は、その保護された種を、強酸（例えば、Ｈ
Ｃｌ（好ましい）、ＨＢｒ、硫酸またはトリフルオロ酢酸）の存在下で反応させることを
包含する。

別の実施形態は、式９：

の化合物を調製するためのプロセスを提供し、このプロセスは、式８：

の化合物を、適切なハロゲン化条件下で反応させることによる。

適切なハロゲン化条件は、化合物８を、非プロトン性溶媒中で、強塩基および求電子性
のハロゲン源の存在下で反応させることを包含する。１つの実施形態において、この溶媒
は、ＤＣＭ、ジエチルエーテルまたはＴＨＦ（好ましい）から選択され得る。別の実施形
態において、この強塩基は、ｔｅｒｔ−ＢｕＬｉ、ｓｅｃ−ＢｕＬｉまたはｎ−ＢｕＬｉ
（好ましい）から選択される。なお別の実施形態において、ハロゲン原子を導入するため
に使用される求電子種は、例えば、Ｉ_２（好ましい）、ＣＦ_３Ｉ、ジヨードエタン、Ｂｒ
_２、ＣＢｒ_４から選択され得る。

本発明のさらに他の実施形態は、式８：

の化合物を調製するためのプロセスを提供し、このプロセスは、式７：

の化合物を適切な条件下で反応させて、保護されたアミン基を生成することによる。

保護基を導入するための適切な条件は、アミノ種７を、非プロトン性溶媒中で、Ｂｏｃ
_２Ｏの存在下で反応させることを包含する。このような反応は、塩基の存在下で行われ得
る。１つの実施形態において、この溶媒は、ジエチルエーテルまたはＴＨＦ（好ましい）
から選択され得る。別の実施形態において、この強塩基は、ＤＭＡＰ、ｎ−ＢｕＬｉ、Ｌ
ＨＭＤＳまたはＮａＨＭＤＳ（好ましい）から選択され得る。
重水素化化合物

同位体原子を含む構築ブロック（市販されているか、または文献に従って調製され得る
かのいずれか）を選択し、そしてこれらの構築ブロックを、非標識物質について報告され
る新規な本発明のプロセス（上記）と類似の順序に参加させることによって、同位体が化
合物Ｉ−１に導入され得る。

本発明の別の局面は、式Ｉ−Ａ：

の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくは誘導体を提供し、式Ｉ−Ａにおいて：
Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、およびＹ^７の各々は独立して、水素またはジュ
ウテリウムであり；ただし、Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、およびＹ^７のうちの
少なくとも１つはジュウテリウムであり；
Ｘ^１、Ｘ^２、およびＸ^４の各々は独立して、^１２Ｃまたは^１３Ｃから選択され；そして
Ｘ^３は独立して、−^１２Ｃ（Ｏ）−または−^１３Ｃ（Ｏ）−から選択される。

以下の標識された構築ブロック（これらは、式Ｉ−Ａの化合物を調製するための合成経
路において使用され得る）は、全て市販されている：
・１，２−ジ^１３Ｃ−２−シアノ酢酸；
・１−^１３Ｃ−２−シアノ（^１３Ｃ）酢酸エチルエステル；
・２−^１３Ｃ−２−シアノ（^１３Ｃ）酢酸エチルエステル；
・１−（トリジュウテロメチル）−１Ｈ−イミダゾール；
・２，４，５−トリジュウテロ−１−（メチル）−１Ｈ−イミダゾール；および
・２，４，５−トリジュウテロ−１−（トリジュウテロメチル）−１Ｈ−イミダゾール。

他の標識された構築ブロック（これらは、式Ｉ−Ａの化合物を調製するための合成経路
において使用され得る）は、当業者に公知である。これらとしては、以下の標識された構
築ブロック：
・２−シアノ（^１３Ｃ）酢酸；Ｔｒｉｐｌｅｔｔら，Ｊ Ｌａｂｅｌｌｅｄ Ｃｏｍｐ
Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ，１９７８，１４（１），３５；
・１−^１３Ｃ−２−シアノ酢酸；Ｍａｔｓｕｍｏｔｏら，Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ，１
９８５，２３（８），２０４１；
・２−^１３Ｃ−２−シアノ酢酸；Ｂａｌｄｗｉｎら，Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ，１９
８９，１１１（９），３３１９；
・１−ジュウテロ−３−（ジエチルアミノ）−２−フルオロアクリルアルデヒド；Ｆｕｎ
ａｂｉｋｉら，Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ，１９９７，（８），７３９；
・２−ジュウテロ−１−（メチル）−１Ｈ−イミダゾール；Ｔｏｒｒｅｇｒｏｓａら，Ｔ
ｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，２００５，６１（４７），１１１４８−１１１５５；
・４，５−ジジュウテロ−１−（メチル）−１Ｈ−イミダゾール；Ｐａｖｌｉｋら，Ｊ．
Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９１，５６（２２），６３１３−６３２０；
・４，５−ジジュウテロ−１−（トリジュウテロメチル）−１Ｈ−イミダゾール；Ｍａｍ
ｅｒら，Ｒａｐｉｄ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏ
ｍｅｔｒｙ，２００５，１９（１２），１７７１−１７７４；
・２−トリチオ−１−（メチル）−１Ｈ−イミダゾール；Ｂｕｎｃｅｌら，Ｃａｎ．Ｊ．
Ｃｈｅｍ．，１９８６，６４（６），１２４０−１２４５；
・２，４，５−トリトリチオ−１−（メチル）−１Ｈ−イミダゾール；Ｇｒｉｍｍｅｔｔ
，Ｓｃｉｅｎ ｏｆ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２００２，３２５−５２８；および
・１−（^１３Ｃ−メチル）−１Ｈ−イミダゾール；Ｖａｎ Ｔｈｕｉｊｌら，Ｏｒｇａｎ
ｉｃ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ，１９７３，７（１０），１１６５−１１７
２
が挙げられ得るが、これらに限定されない。

本発明の１つまたはより多くの実施形態において、Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、およびＹ^４は独
立して、ジュウテリウムまたは水素から選択され；そしてＹ^５、Ｙ^６、およびＹ^７はジュ
ウテリウムである。

いくつかの実施形態において、Ｙ^１およびＹ^２は独立して、ジュウテリウムまたは水素
から選択され；そしてＹ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、およびＹ^７はジュウテリウムである。

別の実施形態において、Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^５、Ｙ^６、およびＹ^７は独立して、ジュウテリ
ウムまたは水素から選択され；そしてＹ^３およびＹ^４はジュウテリウムである。

他の実施形態において、Ｙ^１、Ｙ^３、およびＹ^４は独立して、ジュウテリウムまたは水
素から選択され；そしてＹ^２、Ｙ^５、Ｙ^６、およびＹ^７はジュウテリウムである。

さらに他の実施形態において、Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、およびＹ^７は水
素であり；そしてＸ^４は^１３Ｃである。

なお別の実施形態において、Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、およびＹ^７は水素
であり；そしてＸ^１およびＸ^４は^１３Ｃである。

いくつかの実施形態において、Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、およびＹ^７は水
素であり；そしてＸ^３は−^１３Ｃ（Ｏ）−である。

別の実施形態において、Ｙ^１、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、およびＹ^７は水素であり；Ｙ
^２はジュウテリウムであり；そしてＸ^４は^１３Ｃである。

他の実施形態において、Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、およびＹ^４は水素であり；Ｙ^５、Ｙ^６、お
よびＹ^７はジュウテリウムであり；そしてＸ^１は^１３Ｃである。

さらに他の実施形態において、Ｙ^１、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、およびＹ^７は水素であ
り；Ｙ^２はジュウテリウムであり；そしてＸ^１は^１３Ｃである。

なお別の実施形態において、Ｙ^１、Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^５、Ｙ^６、およびＹ^７は水素であり
；Ｙ^４はジュウテリウムであり；そしてＸ^１は^１３Ｃである。

別の実施形態において、Ｙ１は水素であり；Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５、Ｙ^６、およびＹ
^７はジュウテリウムであり；Ｘ^２は^１３Ｃであり；そしてＸ^３は−^１３Ｃ（Ｏ）−である
。

別の例において、本発明の式Ｉ−Ａの化合物は、表１に表されている。本発明の化合物
は、種々の互変異性形態で表され得ることが、当業者により理解される。

固体形態

本発明の別の局面は、式Ｉ−１：

の化合物の固体形態を提供し、ここでこの形態は、化合物Ｉ−１の無水物遊離塩基、化合
物Ｉ−１の水和物、または化合物Ｉ−１酒石酸からなる群より選択される。
化合物Ｉ−１の無水物遊離塩基

本発明のいくつかの局面において、この固体形態は、化合物Ｉ−１の無水物遊離塩基で
ある。本発明の別の局面において、この固体形態は、結晶性の化合物Ｉ−１の無水物遊離
塩基である。いくつかの実施形態において、この固体形態は、Ｃｕ Ｋα放射線を使用し
て得られるＸ線粉末回折パターンにおいて、２θ±０．２で表される、約９．９°、１２
．８°、１５．４°、１７．０°、２３．１°、２７．８°、２９．０°、および３０．
１°の１つまたはより多くのピークによって特徴付けられる。他の実施形態において、こ
の固体形態は、図１ａに示されるものと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有すると特
徴付けられる。
化合物Ｉ−１の水和物

本発明のいくつかの局面において、この固体形態は、化合物Ｉ−１の水和物である。本
発明の別の局面において、この固体形態は、結晶性の化合物Ｉ−１の水和物である。他の
実施形態において、この結晶性の化合物Ｉ−１の水和物は、１：３の、化合物Ｉ−１対水
の比を有する。さらに他の実施形態において、化合物Ｉ−１の水和物は、約４０℃〜約１
００℃の温度範囲で約１２．６％からの減量によって特徴付けられる。いくつかの実施形
態において、この固体形態は、Ｃｕ Ｋα放射線を使用して得られるＸ線粉末回折パター
ンにおいて、２θ±０．２で表される、約２７．５°、２０．６°、および９．７°の１
つまたはより多くのピークによって特徴付けられる。なお他の実施形態において、この固
体形態は、図１ｂに示されるものと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有すると特徴付
けられる。
化合物Ｉ−１酒石酸

本発明のいくつかの局面において、この固体形態は、化合物Ｉ−１酒石酸である。本発
明の別の局面において、この固体形態は、結晶性の化合物Ｉ−１酒石酸である。他の実施
形態において、この結晶性の化合物Ｉ−１酒石酸は、１：１の、化合物Ｉ−１対酒石酸比
を有する。いくつかの実施形態において、この固体形態は、Ｃｕ Ｋα放射線を使用して
得られるＸ線粉末回折パターンにおいて、２θ±０．２で表される、約７．１°、１８．
３°、および１３．２°の１つまたはより多くのピークによって特徴付けられる。なお他
の実施形態において、この固体形態は、図１ｃに示されるものと実質的に同じＸ線粉末回
折パターンを有すると特徴付けられる。

本願の目的で、用語実施形態、例、および局面は、交換可能に使用されることが理解さ
れる。

本発明の化合物には、本明細書に一般的に記述されるものが含まれ、さらに本明細書で
開示されるクラス、サブクラス、および種によって表わされる。本明細書中で使用される
場合、他に示されない限り、下記の定義が適用される。本発明の目的で、化学元素は、Ｃ
ＡＳ版「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃｓ」第７
５版の元素周期表に従って識別される。さらに、有機化学の一般的原理は「Ｏｒｇａｎｉ
ｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」，Ｔｈｏｍａｓ Ｓｏｒｒｅｌｌ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ Ｂｏｏｋｓ、Ｓａｕｓａｌｉｔｏ：１９９９および「Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａ
ｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」第５版，編者Ｓｍｉｔｈ、Ｍ．
Ｂ．およびＭａｒｃｈ、Ｊ．、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ
：２００１に記載されており、これらの全内容が本明細書中に参考として援用される。

本明細書中で記載される場合、原子の指定された数の範囲は、その中の任意の整数を含
む。例えば、１個〜４個の原子を有する基は、１個、２個、３個、または４個の原子を有
し得る。

本明細書中で使用される場合、本発明の化合物は、本明細書に一般的に示されるように
、または本発明の特定のクラス、サブクラス、および種によって例示されるように、必要
に応じて１個またはより多くの置換基で置換され得る。句「必要に応じて置換された」は
、句「置換されたまたは置換されていない」と交換可能に使用されることが理解される。
一般に、用語「置換された」は、用語「必要に応じて」により先行されるか否かにかかわ
らず、指定されている置換基のラジカルで、与えられた構造中の水素ラジカルを置き換え
ることをいう。他に示されない限り、必要に応じて置換された基は、その基のそれぞれ置
換可能な位置に置換基を有し得、任意の所定の構造における１つより多くの位置が、特定
の基から選択された１つより多くの置換基で置換され得るとき、この置換基はそれぞれの
位置で同じであっても異なっていてもよい。本発明によって想定される置換基の組み合わ
せは、好ましくは、安定化合物、または化学的に実現可能な化合物の形成をもたらすもの
である。

他に示されない限り、環の中心から描かれる結合によって接続される置換基は、この環
の任意の位置に結合し得る。例えば、以下の例ｉにおいて、Ｊ^ｗは、ピリジル環上の任意
の位置に結合し得る。二環式環については、両方の環を通って描かれる結合は、その置換
基が、この二環式環の任意の位置から結合し得ることを示す。例えば、以下の例ｉｉにお
いて、Ｊ^ｗは、５員環（例えば、窒素原子上）に結合しても、６員環に結合してもよい。

用語「安定」とは、本明細書中で使用される場合、化合物の生成、検出、回収、精製、
および本明細書中に開示される目的のうちの１つまたはより多くのための使用を可能にす
る条件に供されるときに、実質的に変化しない化合物をいう。いくつかの実施形態におい
て、安定な化合物または化学的に実行可能な化合物とは、４０℃またはそれ未満の温度で
、水分も他の化学的に反応性の条件も存在しない状態で維持される場合に、少なくとも１
週間にわたり、実質的に変化しない化合物である。

用語「脂肪族」または「脂肪族基」とは、本明細書中で使用される場合、完全飽和であ
るかまたは１個もしくはより多くの不飽和単位を含み、分子の残部への１個の結合点を有
する、直鎖（すなわち、非分枝）、分枝、または環状の、置換または非置換の炭化水素鎖
を意味する。

他に特定されない限り、脂肪族基は、１個〜２０個の脂肪族炭素原子を含む。いくつか
の実施形態において、脂肪族基は、１個〜１０個の脂肪族炭素原子を含む。他の実施形態
において、脂肪族基は、１個〜８個の脂肪族炭素原子を含む。さらに他の実施形態におい
て、脂肪族基は、１個〜６個の脂肪族炭素原子を含み、そしてなお他の実施形態において
、脂肪族基は、１個〜４個の脂肪族炭素原子を含む。脂肪族基は、直鎖または分枝鎖の、
置換または非置換の、アルキル基、アルケニル基、またはアルキニル基であり得る。具体
的な例としては、メチル、エチル、イソプロピル、ｎ−プロピル、ｓｅｃ−ブチル、ビニ
ル、ｎ−ブテニル、エチニル、およびｔｅｒｔ−ブチルが挙げられるが、これらに限定さ
れない。脂肪族基はまた、環状であり得るか、または直鎖基もしくは分枝鎖基と環式基と
の組み合わせを有し得る。このような型の脂肪族基の例としては、シクロプロピル、シク
ロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、−ＣＨ_２−シクロプロ
ピル、ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）−シクロヘキシルが挙げられるが、これらに限定され
ない。

用語「脂環式」（または「炭素環」または「カルボシクリル」）とは、完全飽和である
かまたは１個もしくはより多くの不飽和単位を含むが芳香族ではなく、分子の残部への１
つの結合点を有する、単環式Ｃ_３〜Ｃ_８炭化水素または二環式Ｃ_８〜Ｃ_１２炭化水素であ
って、この二環式環系における任意の個々の環は、３〜７の員を有するものをいう。脂環
式基の例としては、シクロアルキル基およびシクロアルケニル基が挙げられるが、これら
に限定されない。具体的な例としては、シクロヘキシル、シクロプロピル、およびシクロ
ブチルが挙げられるが、これらに限定されない。

用語「複素環」、「ヘテロシクリル」、または「複素環式」とは、本明細書中で使用さ
れる場合、非芳香族の、単環式、二環式、または三環式の環系であって、１個またはより
多くの環員が、独立して選択されるヘテロ原子であるものを意味する。いくつかの実施形
態において、「複素環」基、「ヘテロシクリル」基、または「複素環式」基は、３〜１４
の環員を有し、ここで１個またはより多くの環員は、酸素、硫黄、窒素、またはリンから
独立して選択されるヘテロ原子であり、そしてこの系内の各環は、３〜７の環員を含む。

複素環の例としては、３−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（１−アルキル
）−ベンゾイミダゾール−２−オン、２−テトラヒドロフラニル、３−テトラヒドロフラ
ニル、２−テトラヒドロチオフェニル、３−テトラヒドロチオフェニル、２−モルホリノ
、３−モルホリノ、４−モルホリノ、２−チオモルホリノ、３−チオモルホリノ、４−チ
オモルホリノ、１−ピロリジニル、２−ピロリジニル、３−ピロリジニル、１−テトラヒ
ドロピペラジニル、２−テトラヒドロピペラジニル、３−テトラヒドロピペラジニル、１
−ピペリジニル、２−ピペリジニル、３−ピペリジニル、１−ピラゾリニル、３−ピラゾ
リニル、４−ピラゾリニル、５−ピラゾリニル、１−ピペリジニル、２−ピペリジニル、
３−ピペリジニル、４−ピペリジニル、２−チアゾリジニル、３−チアゾリジニル、４−
チアゾリジニル、１−イミダゾリジニル、２−イミダゾリジニル、４−イミダゾリジニル
、５−イミダゾリジニル、インドリニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキ
ノリニル、ベンゾチオラン、ベンゾジチアン、および１，３−ジヒドロ−イミダゾール−
２−オンが挙げられるが、これらに限定されない。

環式基（例えば、脂環式および複素環）は、直線状に縮合しても、橋架けしても、スピ
ロ環式であってもよい。

用語「ヘテロ原子」とは、酸素、硫黄、窒素、リン、あるいはケイ素（窒素、硫黄、リ
ン、またはケイ素の任意の酸化形態；任意の塩基性窒素または複素環式環の置換可能な窒
素の第四級化形態（例えば、Ｎ（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロリルにおいてのような）
、ＮＨ（ピロリジニルにおいてのような）もしくはＮＲ^＋（Ｎ置換ピロリジニルにおいて
のような））を含めて）のうちの１つあるいは１つより多くを意味する。

用語「不飽和」とは、本明細書中で使用される場合、ある部分が、１つまたはより多く
の不飽和単位を有することを意味する。当業者によって公知であるように、不飽和基は、
部分不飽和であっても完全不飽和であってもよい。部分不飽和基の例としては、ブテン、
シクロヘキセン、およびテトラヒドロピリジンが挙げられるが、これらに限定されない。
完全不飽和基は、芳香族であっても、反芳香族であっても、非芳香族であってもよい。完
全不飽和基の例としては、フェニル、シクロオクタテトラエン、ピリジル、チエニル、お
よび１−メチルピリジン−２（１Ｈ）−オンが挙げられるが、これらに限定されない。

用語「アルコキシ」、または「チオアルキル」とは、本明細書中で使用される場合、酸
素原子（「アルコキシ」）または硫黄原子（「チオアルキル」）を介して結合している、
先に定義されたようなアルキル基をいう。

用語「ハロアルキル」、「ハロアルケニル」、「ハロ脂肪族」、および「ハロアルコキ
シ」とは、１個またはより多くのハロゲン原子で置換されている、場合に応じてアルキル
、アルケニルまたはアルコキシを意味する。この用語は、ペルフルオロ化アルキル基（例
えば、−ＣＦ_３および−ＣＦ_２ＣＦ_３）を包含する。

用語「ハロゲン」、「ハロ」、および「ｈａｌ」とは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩを意
味する。

単独でか、または「アリールアルキル」、「アリールアルコキシ」、もしくは「アリー
ルオキシアルキル」などのより大きい部分の一部として使用される用語「アリール」とは
、合計５〜１４の環員を有する単環式、二環式、および三環式の環系であって、その系内
の少なくとも１個の環は芳香族であり、そしてその系内の各環が３〜７の環員を含むもの
をいう。用語「アリール」は、用語「アリール環」と交換可能に使用され得る。

単独でか、または「ヘテロアリールアルキル」もしくは「ヘテロアリールアルコキシ」
などのより大きい部分の一部として使用される用語「ヘテロアリール」とは、合計５〜１
４の環員を有する単環式、二環式、および三環式の環系であって、その系内の少なくとも
１個の環は芳香族であり、その系内の少なくとも１個の環は、１個またはより多くのヘテ
ロ原子を含み、そしてその系内の各環が３〜７の環員を含むものをいう。用語「ヘテロア
リール」は、用語「ヘテロアリール環」または用語「ヘテロ芳香族」と交換可能に使用さ
れ得る。ヘテロアリール環の例としては、２−フラニル、３−フラニル、Ｎ−イミダゾリ
ル、２−イミダゾリル、４−イミダゾリル、５−イミダゾリル、ベンゾイミダゾリル、３
−イソオキサゾリル、４−イソオキサゾリル、５−イソオキサゾリル、２−オキサゾリル
、４−オキサゾリル、５−オキサゾリル、Ｎ−ピロリル、２−ピロリル、３−ピロリル、
２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２−ピリミジニル、４−ピリミジニル、５
−ピリミジニル、ピリダジニル（例えば、３−ピリダジニル）、２−チアゾリル、４−チ
アゾリル、５−チアゾリル、テトラゾリル（例えば、５−テトラゾリル）、トリアゾリル
（例えば、２−トリアゾリルおよび５−トリアゾリル）、２−チエニル、３−チエニル、
ベンゾフリル、ベンゾチオフェニル、インドリル（例えば、２−インドリル）、ピラゾリ
ル（例えば、２−ピラゾリル）、イソチアゾリル、１，２，３−オキサジアゾリル、１，
２，５−オキサジアゾリル、１，２，４−オキサジアゾリル、１，２，３−トリアゾリル
、１，２，３−チアジアゾリル、１，３，４−チアジアゾリル、１，２，５−チアジアゾ
リル、プリニル、ピラジニル、１，３，５−トリアジニル、キノリニル（例えば、２−キ
ノリニル、３−キノリニル、４−キノリニル）、ならびにイソキノリニル（例えば、１−
イソキノリニル、３−イソキノリニル、または４−イソキノリニル）が挙げられるが、こ
れらに限定されない。

用語「ヘテロアリール」は、２つの異なる形態の間で平衡状態で存在する、特定の型の
ヘテロアリール環を包含することが理解されるべきである。より具体的には、例えば、ヒ
ドロピリジンおよびピリジノン（ならびに同様に、ヒドロキシピリミジンおよびピリミジ
ノン）などの種は、「ヘテロアリール」の定義の範囲に含まれることが意図される。

用語「保護基（ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ ｇｒｏｕｐ）」および「保護基（ｐｒｏｔｅｃ
ｔｉｖｅ ｇｒｏｕｐ）」は、本明細書中で使用される場合、交換可能であり、そして複
数の反応性部位を有する化合物において、１つまたはより多くの所望の官能基を一時的に
遮断するために使用される剤をいう。特定の実施形態において、保護基は、以下の特徴の
うちの１つもしくはより多く、または全てを有する：ａ）保護された基材を与えるために
良好な収率で官能基に選択的に富化される、すなわち、ｂ）他の反応性部位のうちの１つ
またはより多くにおいて起こる反応に対して安定である；およびｃ）再生された脱保護さ
れた官能基を攻撃しない試薬によって、良好な収率で選択的に除去可能である。当業者に
よって理解されるように、いくつかの場合において、これらの試薬は、その化合物中の他
の反応性基を攻撃しない。他の場合において、これらの試薬はまた、その化合物中の他の
反応性基と反応しないかもしれない。保護基の例は、Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．，Ｗｕｔｓ
，Ｐ．Ｇ「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅ
ｓｉｓ」，第３版，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：１９９９
（およびこの書籍の他の版）に詳述されており、その全内容は、本明細書中に参考として
援用される。用語「窒素保護基」とは、本明細書中で使用される場合、多官能性化合物中
の１つまたはより多くの所望の窒素反応性部位を一時的に遮断するために使用される剤を
いう。好ましい窒素保護基もまた、上で保護基について例示された特徴を有し、そして特
定の例示的な窒素保護基もまた、Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．，Ｗｕｔｓ，Ｐ．Ｇ「Ｐｒｏｔ
ｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」，第３版，
Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：１９９９の第７章に詳述され
ており、その全内容は、本明細書中に参考として援用される。

いくつかの実施形態において、アルキル鎖または脂肪族鎖のメチレン単位は、別の原子
または基で必要に応じて置き換えられる。このような原子または基の例としては、窒素、
酸素、硫黄、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｎ−ＣＮ）−、−Ｃ（＝ＮＲ）−、−Ｃ（＝ＮＯＲ
）−、−ＳＯ−、および−ＳＯ_２−が挙げられるが、これらに限定されない。これらの原
子または基は、一緒になって、より大きい基を形成し得る。このようなより大きい基の例
としては、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＣＯ−、−ＣＯ_２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｃ（
＝Ｎ−ＣＮ）、−ＮＲＣＯ−、−ＮＲＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＳＯ_２ＮＲ−、−ＮＲＳＯ_２−、
−ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲ−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ−、および−ＮＲＳＯ_２ＮＲ−が挙げられるが
、これらに限定されず、ここでＲは、例えば、ＨまたはＣ_１〜６脂肪族である。これらの
基は、脂肪族鎖のメチレン単位に、単結合、二重結合、または三重結合を介して結合し得
ることが理解されるべきである。脂肪族鎖に二重結合を介して結合する必要に応じた置き
換えの例（この場合には、窒素原子）は、−ＣＨ_２ＣＨ＝Ｎ−ＣＨ_３である。いくつかの
場合において、特に末端において、必要に応じた置き換えは、脂肪族基に三重結合を介し
て結合し得る。これの一例は、ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ≡Ｎである。この状況において、末
端窒素は別の原子に結合しないことが理解されるべきである。

用語「メチレン単位」はまた、分枝メチレン単位または置換メチレン単位をいい得るこ
ともまた理解されるべきである。例えば、イソプロピル部分［−ＣＨ（ＣＨ_３）_２］にお
いて、最初に記載される「メチレン単位」を置き換える窒素原子（例えば、ＮＲ）は、ジ
メチルアミン［−Ｎ（ＣＨ_３）_２］をもたらす。これらのような例において、当業者は、
この窒素原子にはいかなるさらなる原子も結合していないこと、および「ＮＲ」由来の「
Ｒ」はこの場合には存在しないことを理解する。

他に示されない限り、必要に応じた置き換えは、化学的に安定な化合物を形成する。必
要に応じた置き換えは、その鎖の鎖中および／またはいずれかの端部の両方で；すなわち
、結合点で、および／または末端でもの両方で、起こり得る。２つの必要に応じた置き換
えはまた、それが化学的に安定な化合物をもたらす限り、鎖中で互いに隣接し得る。例え
ば、Ｃ_３脂肪族は、２個の窒素原子により必要に応じて置き換えられて、−Ｃ−Ｎ≡Ｎを
形成し得る。これらの必要に応じた置き換えはまた、鎖中の炭素原子の全てを完全に置き
換え得る。例えば、Ｃ_３脂肪族は、−ＮＲ−、−Ｃ（Ｏ）−、および−ＮＲ−により必要
に応じて置き換えられて、−ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲ−（尿素）を形成し得る。

他に示されない限り、この置き換えが末端で起こる場合、この置き換え原子は、その末
端の水素原子に結合する。例えば、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３のメチレン単位が−Ｏ−で必要
に応じて置き換えられる場合、得られる化合物は、−ＯＣＨ_２ＣＨ_３、−ＣＨ_２ＯＣＨ_３
、または−ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨであり得る。末端原子が自由原子価電子を含まない場合、水
素原子はその末端に必要とされない（例えば、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ＝Ｏまたは−ＣＨ_２Ｃ
Ｈ_２Ｃ≡Ｎ）ことが理解されるべきである。

用語「クロスカップリング反応」とは、本明細書中で使用される場合、炭素−炭素結合
が、金属触媒の補助によって形成される、反応をいう。通常、これらの炭素原子のうちの
一方は、官能基（「クロスカップリング基」）と結合しており、一方で、他方の炭素原子
は、ハロゲンと結合している。クロスカップリング反応の例としては、Ｓｕｚｕｋｉカッ
プリング、Ｓｔｉｌｌｅカップリング、およびＮｅｇｉｓｈｉカップリングが挙げられる
が、これらに限定されない。

用語「クロスカップリング基」とは、本明細書中で使用される場合、クロスカップリン
グ反応において別の官能基（例えば、ハロ）と反応して、炭素−炭素（「Ｃ−Ｃ」）結合
を形成することができる、官能基をいう。いくつかの実施形態において、このＣ−Ｃ結合
は、２個の芳香族基間に形成される。

用語「クロスカップリング条件」とは、本明細書中で使用される場合、クロスカップリ
ング反応が起こることを可能にするために必要とされる、化学的条件（例えば、温度、反
応時間の長さ、必要とされる溶媒の体積）をいう。

クロスカップリング基およびそれらのぞれぞれのクロスカップリング条件の例としては
、Ｓｕｚｕｋｉカップリング条件を用いてボロン酸およびボロン酸エステル、Ｓｔｉｌｌ
ｅカップリング条件を用いてＳｎＢｕ_３（Ｂｕ：ブチル）、ならびにＮｅｇｉｓｈｉカッ
プリング条件を用いてＺｎＸ（Ｘ：ハロゲン）が挙げられるが、これらに限定されない。

これらの３つ全てのカップリング条件は代表的に、触媒、適切な溶媒、および必要に応
じて塩基の使用を包含する。Ｓｕｚｕｋｉカップリング条件は、パラジウム触媒および適
切な溶媒の使用を包含する。適切なパラジウム触媒の例としては、ＰｄＣｌ_２（ＰＰｈ_３
）_２、Ｐｄ（Ｐｈ_３）_４、およびＰｄＣｌ_２（ｄｐｐｆ）（ここで各Ｐｈはフェニルであ
り、そしてｄｐｐｆは、１，１−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンである）が挙
げられるが、これらに限定されない。適切な塩基としては、Ｋ_２ＣＯ_３およびＮａ_２ＣＯ
_３が挙げられるが、これらに限定されない。適切な溶媒としては、テトラヒドロフラン、
トルエン、およびエタノールが挙げられるが、これらに限定されない。

Ｓｔｉｌｌｅカップリング条件は、触媒（通常はパラジウムであるが、ニッケルの場合
もある）、適切な溶媒、および他の必要に応じての試薬の使用を包含する。適切な触媒の
例としては、ＰｄＣｌ_２（ＰＰｈ_３）_２、Ｐｄ（Ｐｈ_３）_４、およびＰｄＣｌ_２（ｄｐｐ
ｆ）が挙げられるが、これらに限定されない。適切な溶媒としては、テトラヒドロフラン
、トルエン、およびジメチルホルムアミドが挙げられるが、これらに限定されない。

Ｎｅｇｉｓｈｉカップリング条件は、触媒（パラジウムまたはニッケル）および適切な
溶媒の使用を包含する。適切な触媒の例としては、Ｐｄ_２（ｄｂａ）_３、Ｎｉ（ＰＰｈ_３
）_２Ｃｌ_２、ＰｄＣｌ_２（ＰＰｈ_３）_２、およびＰｄ（Ｐｈ_３）_４（ここで「ｄｂａ」は
、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウムである）が挙げられるが、これらに限
定されない。適切な溶媒としては、テトラヒドロフラン、トルエン、およびジメチルホル
ムアミドが挙げられるが、これらに限定されない。

Ｓｕｚｕｋｉ条件、Ｓｔｉｌｌｅ条件、およびＮｅｇｉｓｈｉ条件は、当業者に公知で
あり、そして種々の参考文献（「Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」が挙げられる）により詳細に記載されている。

当業者によって理解されるように、クロスカップリング基は、カップリング基前駆体か
ら形成される。カップリング基前駆体とは、クロスカップリング基を形成するために使用
される試薬または試薬群である。例としては、ボロン酸エステル形成のためのビス（ピナ
コラト）ジボラン、ボロン酸形成のためのトリメチルボレート、スタンナン形成のための
Ｂｕ_３ＳｎＣｌ、およびＮｅｇｉｓｈｉカップリング反応における亜鉛酸塩形成のための
ＺｎＣｌ_２が挙げられるが、これらに限定されない。適切なカップリング基形成条件の例
としては、パラジウムにより媒介される触媒作用によりボロン酸エステルを作製すること
；ボロン酸エステルを加水分解することによりボロン酸を作製すること；２工程プロセス
、すなわち１）ハロゲン金属交換の後、２）Ｂｕ_３ＳｎＣｌでの金属交換反応により、ス
タンナンを作製すること、および２工程プロセス、すなわち１）ハロゲン金属交換の後、
２）ＺｎＣｌ_２の添加により、亜鉛酸塩を作製することが挙げられるが、これらに限定さ
れない。

他に示されない限り、本明細書中に図示される構造はまた、その構造の全ての異性（例
えば、エナンチオマー、ジアステレオマー、幾何、配座、および回転）形態を含むことが
意図される。例えば、各不斉中心についてのＲ配置およびＳ配置、（Ｚ）および（Ｅ）の
二重結合異性体、ならびに（Ｚ）および（Ｅ）の配座異性体は、本発明に含まれる。当業
者に理解されるように、ある置換基は、任意の回転可能な結合の周りで自由に回転し得る
。例えば、

と描かれる置換基は、

もまた表す。

従って、本化合物の単一の立体化学的異性体、ならびにエナンチオマー、ジアステレオ
マー、幾何、配座、および回転混合物は、本発明の範囲内である。

他に示されない限り、本発明の化合物の全ての互変異性形態は、本発明の範囲内である
。

本発明の化合物において、特定の同位体として具体的に指定されていない任意の原子は
、その原子の任意の安定な同位体を表すことが意図される。他に記載されない限り、ある
位置が「Ｈ」または「水素」と具体的に指定されている場合、その位置は、水素を、その
天然の存在量の同位体組成で有すると理解される。同様に、他に記載されない限り、ある
位置が「Ｄ」または「ジュウテリウム」と具体的に指定される場合、その位置は、ジュウ
テリウムを、ジュウテリウムの天然の存在量（これは、０．０１５％である）よりも少な
くとも３３４０倍多い存在量で有する（すなわち、少なくとも５０．１％のジュウテリウ
ムの組み込み）と理解される。

「Ｄ」と「ｄ」とは両方、ジュウテリウムをいう。

さらに、他に示されない限り、本明細書中に図示される構造はまた、１つまたはより多
くの同位体富化された原子の存在のみが異なる化合物を包含することを意図される。例え
ば、ジュウテリウムもしくはトリチウムによる水素の置き換え、または^１３Ｃ富化炭素も
しくは^１４Ｃ富化炭素による炭素の置き換え以外には、本構造を有する化合物は、本発明
の範囲内である。このような化合物は、例えば、生物学的アッセイにおけるプローブまた
は分析用ツールとして、有用である。

本明細書中で使用される場合、「結晶性」とは、その結晶格子中に特定の配置および／
または配座の分子を有する固体をいう。

本明細書中で使用される場合、用語「非晶質」とは、分子の無秩序な配置からなり、そ
して区別可能な結晶格子を有さない、固体形態をいう。

本明細書中で使用される場合、用語「溶媒和物」とは、その結晶構造に組み込まれた、
化学量論的量または非化学量論的量のいずれかの溶媒を含む、結晶性固体付加体をいう。
この組み込まれる溶媒が水である場合、このような付加体は、「水和物」と称される。
略語

以下の略語が使用される：
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＡＴＰ アデノシン三リン酸
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
^１ＨＮＭＲ プロトン核磁気共鳴
ＨＰＬＣ 高速液体クロマトグラフィー
ＬＣＭＳ 液体クロマトグラフィー−質量分析
Ｒｔ 保持時間
ＸＲＰＤ Ｘ線粉末回折
ＤＳＣ 示差走査熱量分析
ＴＧＡ 熱重量分析
ＲＴ 室温
ＮＭＰ Ｎ−メチル−２−ピロリドン
Ｂｐ 沸点
ＤＭＦ ジメチルホルムアミド
ＰＴＳＡ ｐ−トルエンスルホン酸
ＤＩＰＥＡ Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＨＯＢＴ ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＡＴＵ １−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾ
ロ［４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキシドヘキサフルオロホスフェート
ＴＢＴＵ ２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラ
メチルウロニウムテトラフルオロボレート
Ｔ３Ｐ プロピルホスホン酸無水物
ＣＯＭＵ １−［（１−（シアノ−２−エトキシ−２−オキソエチリデンアミノオキ
シ）−ジメチルアミノ−モルホリノ）］ウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＴＣＴＵ ［（６−クロロベンゾトリアゾール−１−イル）オキシ−（ジメチルアミ
ノ）メチレン］−ジメチル−アンモニウムテトラフルオロボレート
ＨＢＴＵ Ｏ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウ
ム−ヘキサフルオロ−ホスフェート
ＤＭＥ ジメトキシエタン
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
ＴＭＥＤＡ テトラメチルエチレンジアミン
ＮａＨＭＤＳ ヘキサメチルジシラザンナトリウム
ＬＨＭＤＳ リチウムビス（トリメチルシリル）アミド
プロセス

本明細書中に記載されるプロセスおよび化合物は、アミノピラゾロピリミジンコアを含
むＡＴＲ阻害剤を生成するために有用である。本明細書中のスキームに示される一般合成
手順は、薬学的化合物の製造において使用され得る、化学種の広範なアレイを生成するた
めに有用である。
スキームＡ

本発明の化合物を、スキームＡに図示される方法と類似の方法に従って、合成し得る。
工程１

市販のシアノ酢酸アリル１の陰イオンは、トリクロロアセトニトリルと反応して、中間
体２を与え得る。この陰イオン縮合工程において、市販のシアノ酢酸アリル１の陰イオン
は、塩基（例えば、酢酸カリウム）を用いて、適切な溶媒（例えば、アルコール（例えば
、イソプロピルアルコール））中で生成し得る。次いで、この陰イオンは、トリクロロア
セトニトリルと室温で反応する。
工程２

次いで、中間体２はヒドラジンと反応して、ジアミノピラゾール３を形成する。このピ
ラゾール形成工程において、中間体２は、ヒドラジン（またはその水和物）と、非プロト
ン性溶媒（例えば、ＤＭＦ）中で反応して、ジアミノピラゾール３を与える。この反応は
、塩基性条件下（例えば、酢酸カリウムまたはＡｃＯＮａの存在下）で加熱しながら（例
えば、１１０℃以上）行われて、完全な環化を確実にする。
工程３

中間体３は、ジ求電子カップリングパートナーとさらに縮合して、ピリミジン４を形成
し得る。このピリミジン形成工程において、中間体３は、１，３−二求電子種（例えば、
１，３−ジアルデヒドまたは３−（ジアルキルアミノ）−プロパ−２−エナール）と、種
々の型の溶媒（例えば、ＤＭＦまたはＤＭＳＯ／水）中で反応して、二環式コア４を与え
る。その求電子中心のうちの１個または２個が保護／マスクされている場合（例えば、ケ
タールとしてマスクされたアルデヒド）、スルホン酸（例えば、ＰＴＳＡ）の導入が、そ
の反応性官能基を遊離させるために必要とされる。
工程４

アリルエステルの脱保護（例えば、加水分解による）は、カルボン酸５をもたらす。こ
の脱保護工程において、化合物４は、当業者に公知である加水分解条件に供される。例え
ば、４の、フェニルシランまたは４−メチルベンゼンスルフィネートでの、触媒量のパラ
ジウム（例えば、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４）の存在下での処理は、対応するカルボン酸５の形
成をもたらす。あるいは、化合物４を水性アルカリ（例えば、ＮａＯＨ、ＬｉＯＨ、また
はＫＯＨ）で処理して、酸５を生成し得る。
工程５

代替のエステル形成工程において、カルボン酸５は、当業者に公知であるアミドカップ
リング剤と反応させられる。適切なアミドカップリングパートナーとしては、ＴＢＴＵ、
ＴＣＴＵ、ＨＡＴＵ、Ｔ３Ｐ、およびＣＯＭＵが挙げられるが、これらに限定されない。
このカップリング剤が適切に選択される場合、これらの反応は、室温で有機塩基（例えば
、脂肪族アミン（例えば、トリエチルアミン、ＤＩＰＥＡ））の存在下で迅速に（約１時
間）進行して、活性化エステル６ａ−ｂを与え得る。例えば、アミドカップリング剤ＴＢ
ＴＵ［Ｊ＝Ｈ］またはＴＣＴＵ［Ｊ＝Ｃｌ］が使用される場合、化合物６ａ−ｂは、この
反応混合物の濾過によって、容易に得られる。

Ｉ−Ａを調製するための、アミド結合形成の前の活性化エステル６ａ−ｂの形成は、一
般に好ましいが、５の、本発明の式Ｉ−Ａの化合物への直接の転換もまた可能である。代
替の活性化エステルもまた利用され得（単離またはインサイチュで形成される）、そして
当業者に公知である（例えば、ＴＢＴＵ、ＴＣＴＵ、ＨＡＴＵ、Ｔ３Ｐ、ＣＯＭＵカップ
リング剤を使用する）。
工程６

このアミド結合形成工程において、活性化エステル６ａ−ｂは、置換３−アミノピリジ
ン１１と反応させられて、本発明の化合物Ｉ−１を提供し得る。このアミドカップリング
のための反応条件は、溶媒（例えば、アニソール、ＮＭＰ、ピリジン、ＤＭＦなど）中で
、加熱（例えば、９０℃以上）を伴う。

あるいは、上記２つの工程は、合わせられ得る。すなわち、カルボン酸５が、アミド結
合形成のための出発点として使用され得、そして活性化エステルが、上に記載されたもの
と同じアミドカップリング剤を使用してインサイチュで生成される。本発明の化合物は、
上に記載された様式と類似の様式で、単離される。

調製および実施例
全ての市販の溶媒および試薬を、そのまま使用した。マイクロ波反応を、ＣＥＭ Ｄｉ
ｓｃｏｖｅｒｙマイクロ波を使用して行った。フラッシュクロマトグラフィーを、例えば
、ＩＳＣＯ^（Ｃ）Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ^Ｒ Ｃｏｍｐａｎｉｏｎ^ＴＭシステムで、０％か
ら１００％のＥｔＯＡｃ／石油エーテルの勾配で溶出して行った。当該分野において公知
である他の方法もまた、フラッシュクロマトグラフィーを実施するために利用した。サン
プルを、シリカに予め吸収させて用いた。記載される場合、超臨界流体クロマトグラフィ
ー（ＳＦＣ）を、Ｂｅｒｇｅｒ Ｍｉｎｉｇｒａｍ ＳＦＣ機で行った。全ての^１Ｈ Ｎ
ＭＲスペクトルを、Ｂｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ＩＩＩ ５００機器を使用して、５０
０ＭＨｚで記録した。ＭＳサンプルを、Ｗａｔｅｒｓ ＳＱＤ質量分析計で、正イオンモ
ードと負イオンモードとで動作するエレクトロスプレーイオン化操作を用いて分析した。
クロマトグラフィーを使用して、サンプルをこの質量分析計に導入した。実験の詳細に他
に記載されない限り、全ての最終生成物は、９５％以上の純度を有した。ＨＰＬＣ純度を
、Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣシステムで、Ｗａｔｅｒｓ ＵＰＬＣ ＢＥ
Ｈ Ｃ８ １．７μｍ，２．１×５０ｍｍカラムおよびＶａｎｇｕａｒｄ ＢＥＨ Ｃ８
１．７μｍ，２．１×５ｍｍ保護カラムを備え付けたＷａｔｅｒｓ ＳＱＤ ＭＳ機器
を用いて測定した。

本明細書中で使用される場合、用語「Ｒｔ（ｍｉｎ）」とは、その化合物に関連する、
分の単位でのＨＰＬＣの保持時間をいう。他に示されない限り、報告される保持時間を得
るために利用したＨＰＬＣ方法は、以下に記載されるとおりである：
ＨＰＬＣ方法Ｂ
機器：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ−ＭＳ；
カラム：Ｖａｎｇｕａｒｄ ＢＥＨ Ｃ８ １．７μｍ，２．１×５ｍｍ保護カラムを
備えるＷａｔｅｒｓ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ８ １．７μｍ，２．１×５０ｍｍ；
カラム温度：４５℃；
移動相Ａ：水中１０ｍＭのギ酸アンモニウム：アセトニトリル９５：５，ｐＨ９；
移動相Ｂ：アセトニトリル；
検出：２１０〜４００ｎｍ；
勾配：０〜０．４０分間：２％のＢ，０．４０〜４．８５分間：２％のＢから９８％の
Ｂ，４．８５〜４．９０分間：９８％のＢから２％のＢ，４．９０〜５．００分間：２％
のＢで保持；
流量：０．６ｍＬ／分。
調製１：３，５−ジアミノ−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アリル

工程１：３−アミノ−４，４，４−トリクロロ−２−シアノブタ−２−エン酸アリル２

ＫＯＡｃ（５８９．４ｇ，６．００６ｍｏｌ）のイソプロパノール（３Ｌ）中の溶液に
、シアノ酢酸アリル（４２９．４ｇ，４０３．２ｍＬ，３．４３２ｍｏｌ）を添加し、そ
してこの反応混合物を５℃まで冷却した。トリクロロアセトニトリル（４９５．５ｇ，３
．４３２ｍｏｌ）を５０ｍＬずつ、温度を１５℃未満に維持しながら添加した。次いで、
この反応混合物を２０℃まで温め、そして３時間撹拌した。水（約４Ｌ）を添加してその
無機物質を溶解させ、そして所望の生成物を析出させた。この混合物を２０分間撹拌し、
そしてその固体を減圧下での濾過により単離した。この固体を濾過し、水（２×０．５Ｌ
）で洗浄し、そして真空オーブン中４０℃で一晩乾燥させて、３−アミノ−４，４，４−
トリクロロ−２−シアノブタ−２−エン酸アリル２をオフホワイトの粉末として得た（７
８７ｇ，８５％）。
工程２：３，５−ジアミノ−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アリル３

３−アミノ−４，４，４−トリクロロ−２−シアノ−ブタ−２−エン酸アリル２（６１
９ｇ，２．２９７ｍｏｌ）およびＫＯＡｃ（６７６．３ｇ，６．８９１ｍｏｌ）のＤＭＦ
（２．４７６Ｌ）中の懸濁物に、０℃でヒドラジン水和物（１７２．５ｇ，１６７．６ｍ
Ｌ，３．４４６ｍｏｌ）を１５分間かけてゆっくりと添加した。次いで、この反応混合物
を周囲温度で２時間撹拌した。この段階で、^１Ｈ ＮＭＲは、出発物質の完全な消費を示
す。次いで、反応混合物を１１０℃で一晩加熱し、その後、室温まで冷却し、そしてさら
に４８時間撹拌した。この混合物を半融ガラス漏斗で濾過して沈殿した固体を除去し、そ
してその濾液を減圧下でエバポレートして、濃厚な液体を得た。ＤＣＭ（およそ２Ｌ）を
添加し、そしてこの混合物を再度濾過して、沈殿したさらなる固体を除去した。その濾液
を１ｋｇのシリカゲルプラグに通して（溶出液としてＤＣＭ／ＭｅＯＨの勾配）精製し、
そしてその溶媒を除去して、橙色固体を得、これをアセトニトリルに懸濁させ、そして全
ての固体が溶液になるまで約７０℃で加熱し、この時点で、この溶液を周囲温度まで冷却
し、次いで２℃まで冷却した。形成した沈殿物を減圧下での濾過により単離し、冷ＭｅＣ
Ｎ（約５０ｍＬ）で洗浄し、そして真空オーブン中で一定質量になるまで乾燥させて、表
題化合物をオフホワイトの粉末として得た（１７１．２ｇ，４１％）。
調製２ａ：２−アミノ−６−フルオロピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−カルボ
ン酸１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イル

工程１：２−アミノ−６−フルオロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−カルボ
ン酸アリル４

３，５−ジアミノ−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アリル３（４２．７２ｇ，２３
４．５ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（２７０．８ｍＬ）／水（２７０．８ｍＬ）中の懸濁物に、
ｐ−ＴｓＯＨ水和物（４６．７２ｇ，２４５．６ｍｍｏｌ）および３−（ジイソプロピル
アミノ）−２−フルオロ−プロパ−２−エナール（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅ
ｒｓ，３３（３），３５７−６０；１９９２に記載される）（３８．６９ｇ，２２３．３
ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を１００℃で３時間加熱し、この時間の間に、固
体が溶液からゆっくりと析出した。その橙色懸濁物を一晩で室温まで冷却した。その固体
を濾過し、水で洗浄し、そして減圧下で乾燥させて、２−アミノ−６−フルオロ−ピラゾ
ロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸アリル４を砂色固体として得た（４５．０
５ｇ，収率８５％）。
工程２：２−アミノ−６−フルオロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−カルボ
ン酸５

２−アミノ−６−フルオロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸アリ
ル４（４５ｇ，１９０．５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１．３５Ｌ）中の懸濁物に、フェニルシ
ラン（４１．２３ｇ，４６．９６ｍＬ，３８１．０ｍｍｏｌ）を添加し、その後、Ｐｄ（
ＰＰｈ_３）_４（８．８０５ｇ，７．６２０ｍｍｏｌ）を添加した。この反応物を室温で２
時間３０分撹拌した。この反応混合物を濾過し、そしてその固体をＤＣＭで洗浄して、薄
黄色固体（４３．２ｇ）を得た。この固体をＤＣＭ（２２５ｍＬ）中室温で４５分間さら
に摩砕し、次いで濾過し、そして減圧下で一晩乾燥させて、２−アミノ−６−フルオロ−
ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸５を薄黄色固体として得た（３７．
７７ｇ，収率１００％）。

代替の方法において、４−メチルベンゼンスルフィネート（無水物，１．２当量，２２
．６ｇ，１２７ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＳＯ（２０倍体積，５００ｍｌ）に懸濁させた。こ
の撹拌混合物を窒素雰囲気下で３０℃まで温めた。完全に溶解したら、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）
_４（２ｍｏｌ％，２．４ｇ，２．１ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を２５℃〜３０℃
で１０分間撹拌し、この時間の後に、濁った黄色溶液が存在した。２−アミノ−６−フル
オロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸アリル４（２５ｇ，１０５．
８ｍｍｏｌ）を、その温度を２５℃〜３０℃で維持しながら少しずつ添加した。一旦、添
加が完了したら、ＨＰＬＣにより判断してこの反応が完了するまで（２〜３時間）、この
曇った溶液を撹拌した。この基質の添加の１５分後に、多量の沈殿物が形成された。この
反応が進行するにつれて、この混合物は濃厚になった。この反応混合物を水（１２５ｍｌ
）で希釈し、そして２ＭのＨＣｌ（６６ｍｌ）を、その温度を２５℃〜３０℃で維持しな
がらゆっくりと添加した。このスラリーを３０分間撹拌し、次いで濾過した。この濾過は
遅かった（２時間）。得られた固体を水で洗浄し、次いで焼結製品上で乾燥させた。この
固体をＤＣＭ（８倍体積）で１時間スラリー化した。その固体を濾過し（速い濾過）そし
てＤＣＭで洗浄した。その固体をクロロホルム（８倍体積）で１時間再度スラリー化した
。この酸を濾過し、そして焼結製品上で乾燥させた。これを真空オーブン中５０℃で２４
時間さらに乾燥させた。その生成物５をオフホワイトの固体として得た（１８．６ｇ，８
５％）； １Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １２．１４ （
１Ｈ， ｂｒｓ）， ９．３１ （１Ｈ， ｄｄ）， ８．６９ （１Ｈ， ｍ）， ６
．４７ （２Ｈ， ｂｒＳ）； １９Ｆ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６
） δ −１５３．６５； ＭＳ（ＥＳ＋） １９７．１。
工程３：２−アミノ−６−フルオロピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−カルボン
酸１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イル６ａ

２−アミノ−６−フルオロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸５（
２０ｇ，１０２．０ｍｍｏｌ）のクロロホルム（３００ｍＬ）中の懸濁物に、Ｅｔ_３Ｎ（
１１．３５ｇ，１５．６３ｍＬ，１１２．２ｍｍｏｌ）を添加した。この懸濁物を約５分
間撹拌し、次いで（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−ジメチルアミノ−メチレン）
−ジメチル−アンモニウムボロンテトラフルオリド（３２．７５ｇ，１０２．０ｍｍｏｌ
）を添加した。この懸濁物を６０℃で１時間加熱し、その後、その濃厚な懸濁物を室温ま
で冷却した。得られた懸濁物を濾過し、クロロホルム（２００ｍＬ）で洗浄し、そして減
圧中で一晩乾燥させて、表題化合物６ａを薄黄色粉末として得た（３２．５ｇ，８８％）
。
調製２ｂ：（６−クロロベンゾトリアゾール−１−イル）−２−アミノ−６−フルオロ
−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−カルボキシレート６ｂ

撹拌棒、冷却器、窒素ラインおよびＨａｎｎａ温度プローブを備え付けた２．５Ｌの三
つ口フラスコに、２−アミノ−６−フルオロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−
カルボン酸５（６０ｇ，３０５．９ｍｍｏｌ）、クロロホルム（９００．０ｍＬ）および
トリエチルアミン（３２．４４ｇ，４４．６８ｍＬ，３２０．６ｍｍｏｌ）を入れた。［
（６−クロロベンゾトリアゾール−１−イル）オキシ−（ジメチルアミノ）メチレン］−
ジメチル−アンモニウム（四フッ化ホウ素イオン（１））（８７．００ｇ，２４４．７ｍ
ｍｏｌ）を５分間かけて少しずつ添加した（添加の完了時に内部が２２．７℃から２１．
５℃に低下した）。混合物を６０℃（内部温度）で２時間加熱し、依然としてクリーム色
の懸濁物であった。混合物を室温まで冷却し、次いで固体を濾過により集め、クロロホル
ムで（濾液が本質的に無色で流れるまで）よく洗浄し、そして吸引により乾燥させると、
生成物６ｂがクリーム色の固体として残った（８２．２ｇ，収率７７％）。^１Ｈ ＮＭＲ
（５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ ９．５５ （ｄｄ， １Ｈ）， ８．９
１ （ｄ， １Ｈ）， ８．２２ （ｄｄ， １Ｈ）， ８．０９ （ｄｄ， １Ｈ），
７．５７ （ｄｄ， １Ｈ）および６．８７ （ｓ， ２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋） ３４
８．１。

代替の方法において、２−アミノ−６−フルオロピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−
３−カルボン酸５（３０ｇ，１５３ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（５４０ｍｌ）でスラリ
ー化した。トリエチルアミン（２２．５ｍｌ，１５３ｍｍｏｌ）を添加し、その後、［（
６−クロロベンゾトリアゾール−１イル）オキシ−（ジメチルアミノ）メチレン］−ジメ
チルアンモニウムテトラフルオロボレート（ＴＣＴＵ，５４．４ｇ，１５３ｍｍｏｌ）を
添加した。この混合物を室温で２時間撹拌した。その生成物を濾過により単離した。その
フィルターケーキをアセトニトリル（２×６０ｍｌ）で洗浄した。その生成物を褐色固体
として得た（４９．３ｇ，９３％）； ^１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−
ｄ_６） δ ９．５５ （ｄｄ， １Ｈ）， ８．９１ （ｄ， １Ｈ）， ８．２２
（ｄｄ， １Ｈ）， ８．０９ （ｄｄ， １Ｈ）， ７．５７ （ｄｄ， １Ｈ）およ
び６．８７ （ｓ， ２Ｈ）； １９Ｆ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６
） δ −１５０．１；ＭＳ（ＥＳ＋） ３４８．１。
実施例１：２−アミノ−６−フルオロ−Ｎ−（５−フルオロ−４−（１−メチル−１Ｈ
−イミダゾール−５−イル）ピリジン−３−イル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−
３−カルボキサミド（化合物Ｉ−１）の合成

工程１：（５−フルオロピリジン−３−イル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル

５０Ｌのジャケット付き容器に、ＴＨＦ（２．５Ｌ）、５−フルオロピリジン−３−ア
ミン１（５００ｇ，４．４６０ｍｏｌ）を入れ、次いでさらなるＴＨＦ（５Ｌ）を入れた
。この撹拌混合物に、炭酸ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルｔｅｒｔ−ブチル（１．１１９
ｋｇ，５．１２９ｍｏｌ）のＴＨＦ（２．５Ｌ）中の溶液を、真空ラインでくみ上げて添
加した。次いで、このラインをＴＨＦ（１Ｌ）ですすいで、この反応容器に入れた。その
反応温度を０℃まで冷却し、その後、ＮａＨＭＤＳ（４．７９４ＬのＴＨＦ中２Ｍ，９．
５８９ｍｏｌ）を１２回に分けて４００ｍＬずつ添加した（各添加後に約５℃の発熱、内
部を一旦０℃まで冷却してから添加を続けた）。添加は、１時間後に完了した。その内部
温度を５℃まで上昇させ、そしてこの温度で１時間撹拌した。この反応を、飽和塩化アン
モニウム水溶液（１Ｌ）の添加により注意深くクエンチした（発熱）。その内部を１０℃
まで上昇させ、そしてさらなる飽和塩化アンモニウム水溶液（３Ｌ）を添加した。その内
部を２５℃まで上昇させ、そしてこの反応混合物をＥｔＯＡｃで抽出した（１×５Ｌ、次
いで１×２．５Ｌ）。合わせた有機層を水（１×５．５Ｌ、次いで１×３Ｌ）で洗浄し、
次いでブライン（３Ｌ）で洗浄した。

その有機相を減圧中で、約６Ｌの総体積まで濃縮し、乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、濾紙で
濾過し、そして減圧中（ロータリーエバポレーターで、４０℃の浴温度）で、生成物が晶
出するまで濃縮した（約２Ｌの溶媒が残った）。ヘプタン（２．５Ｌ）を添加し、そして
この混合物をロータリーエバポレーターで４０℃で回転させた。この溶液を減圧中（ロー
タリーエバポレーターで、４０℃の浴温度）で濃縮して、生成物が溶液から晶出するまで
、より多くのＥｔＯＡｃを除去した。次いで、この混合物を放冷し、そして周囲温度で一
晩静置した。その固体を、Ｗｈａｔｍａｎ Ｎｏ．１濾紙での濾過により集め、濾液が本
質的に無色になるまで、ヘプタンで洗浄した。その固体を約５時間乾燥させると、生成物
の収穫物１がオフホワイトの固体として、３８２．５１ｇが残った。

その母液を減圧中（ロータリーエバポレーターで、４０℃の浴温度）で、固体が晶出す
るまでゆっくりと濃縮した。この混合物を周囲温度で静置し、そしてその固体を濾過によ
り集め、ヘプタンで洗浄し、そして吸引により乾燥させると、生成物８の収穫物２がオフ
ホワイトの固体として、２０３．５ｇが残った。このプロセスをその母液に対して繰り返
して、収穫物３をオフホワイトの固体として、１７８．７ｇを得た。生成物の全収量は、
７６４．７１ｇ、８１％である。^１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）
δ ９．８６ （ｓ， １Ｈ）， ８．４４ （ｓ， １Ｈ）， ８．１７ （ｄ，
Ｊ ＝ ２．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８３ （ｄ， Ｊ ＝ １１．６ Ｈｚ， １
Ｈ）， ３．３０ （ｓ， １Ｈ）。ＭＳ （ＥＳ＋） ２１３．０。
工程２：（５−フルオロ−４−ヨードピリジン−３−イル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブ
チル

５０Ｌのジャケット付き容器に、ＴＨＦ（２．５Ｌ）、ＴＨＦ（２．５Ｌ）中のＮ−（
５−フルオロ−３−ピリジル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル８（４００ｇ，１．８８５
ｍｏｌ）、さらなるＴＨＦ（３Ｌ）およびＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルエタン−１
，２−ジアミン（５４７．６ｇ，７１１．２ｍＬ，４．７１２ｍｏｌ）を入れた。この反
応混合物を−２８℃（内部温度）まで冷却し、次いでｎ−ＢｕＬｉ（１．８８５Ｌのヘキ
サン中２．５Ｍ，４．７１２ｍｏｌ）を、カニューレを介して、内部温度を−２０℃未満
に維持するような速度で（すなわち、２時間かけて）添加した。添加が完了したら、この
反応混合物を−３０〜−２０℃（内部温度）でさらに５０分間撹拌した。固体の分子状ヨ
ウ素（７６５．５ｇ，３．０１６ｍｏｌ）を、およそ同じ量で１２回に分けて、その内部
温度を−２０℃未満に維持しながら、１時間かけてゆっくりと添加した（各部分の添加の
後に、およそ約２／３℃の遅れた発熱）。ヨウ素の添加が完了したら、この反応混合物を
−３０℃（内部温度）でさらに４５分間撹拌した。

次いで、この反応を、飽和塩化アンモニウム水溶液（２Ｌ）をゆっくりと添加すること
によりクエンチした（発熱）。次いで、水（２Ｌ）を添加し、そしてこの反応混合物を２
０℃（内部温度）まで温め、そして一晩静置した。この反応混合物にＥｔＯＡｃ（５Ｌ）
を添加し、そして撹拌を１０分間続けた。その水相を除去し、次いで飽和チオ硫酸ナトリ
ウム水溶液（２Ｌ）をその有機相に添加し、１０分間激しく撹拌した。さらなるＥｔＯＡ
ｃ（２．５Ｌ）および水（２Ｌ）を添加し、そして撹拌を１０分間続けた。その水相を除
去し、そしてその有機相を、飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液（２Ｌ）および水（１×２Ｌ
、次いで１×２．５Ｌ）、次いでブライン（２Ｌ）でさらに洗浄した。その有機相を減圧
中（ロータリーエバポレーター）で、その生成物が晶出し始めて濃厚な懸濁物を与えるま
で、濃縮した。この混合物を室温で一晩静置した。

その固体を濾過により集め、最小量のＥｔＯＡｃ（数百ｍＬ）で洗浄し、次いでヘプタ
ンでよく洗浄し、吸引により３時間乾燥させると、生成物９の収穫物１が白色固体として
、３１１．９９ｇが残った。その母液を減圧中（ロータリーエバポレーター）で濃縮乾固
させると、暗緑色固体が残り（約２００ｇ）、これを還流下で加熱することによって、Ｅ
ｔＯＡｃ（７５０ｍＬ）に溶解させた。次いで、活性炭（２０ｇ）を添加し、そしてこの
混合物を還流下で１０分間撹拌した。この混合物を濾紙で濾過し、次いでロータリーエバ
ポレーターで、濃厚な懸濁物が形成されるまで濃縮した。得られた固体を濾過により集め
、最小量のＥｔＯＡｃ、次いでヘプタンで洗浄し、吸引により乾燥させ、次いで真空オー
ブン内４０℃で２時間乾燥させると、収穫物２が白色固体として、１０３．９ｇが残った
。その母液を再度、濃厚な懸濁物が形成されるまで濃縮した。その固体を濾過により集め
、ヘプタンで洗浄し、そして減圧中での吸引（ロータリーエバポレーター）により乾燥さ
せ、次いで、真空オーブン内４０℃で数時間乾燥させると、収穫物３が白色固体として、
３９．４ｇが残った。全収量＝４５５．２９ｇ、７１％。^１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨ
ｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ８．９８ （ｓ， １Ｈ）， ８．２７ （ｄｄ， Ｊ
＝ １．２， ０．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．４７ （ｓ， ９Ｈ）。ＭＳ （ＥＳ＋
） ３３８．９。
工程３：５−フルオロ−４−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）ピリジン
−３−アミン二塩酸塩

Ｎ−（５−フルオロ−４−ヨード−３−ピリジル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル９（
１９０ｇ，５６１．９ｍｍｏｌ）、１−メチル−５−（４，４，５，５−テトラメチル−
１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）イミダゾール１０（１７５．４ｇ，８４２．
８ｍｍｏｌ）およびリン酸カリウム（２２６．０ｇ，１．６８６ｍｏｌ）のＤＭＥ（２．
２８Ｌ）中の脱気（３回の減圧／窒素サイクル）混合物に、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（６４．
９３ｇ，５６．１９ｍｍｏｌ）を添加した。この反応容器を再度、減圧／窒素サイクル（
３回）により窒素でフラッシュした。この混合物を還流下で、窒素雰囲気下で４８時間加
熱した。この混合物を室温まで冷却し、次いでセライトのパッドに通して、濾液がほぼ無
色になるまで、ＥｔＯＡｃ（約１．５Ｌ）ですすいだ。その濾液を減圧中で濃縮すると、
粘着性の褐色固体が３３９．７ｇ残った。

この粗製生成物をジオキサン（９５０ｍＬ）およびメタノール（４３１．１ｍＬ）に溶
解させ、そしてこの溶液を氷浴（１０℃の内部）で冷却し、次いでＨＣｌ（１，４−ジオ
キサン中４Ｍ）（８４２．８ｍＬの４Ｍ，３．３７１ｍｏｌ）を８回に分けて、およそ等
しい量で２０分間かけて添加した（約３〜４℃の発熱が、各添加のときに観察された）。
添加が完了したら、この混合物を４０℃まで温め、そしてこの温度で３時間撹拌し、次い
で撹拌しながら室温まで一晩放冷した。その固体を濾過により集め、１，４−ジオキサン
で洗浄し、そして減圧下で１時間乾燥させると、生成物１１が砂色／褐色固体として残っ
た（１０７．９ｇ，収率７２％）。^１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， Ｄｅｕｔｅｒｉ
ｕｍ Ｏｘｉｄｅ） δ ９．０９ （ｓ， １Ｈ）， ８．２４ （ｓ， １Ｈ），
８．１５ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ７．９１ − ７．９０ （１Ｈ， ｂｒ ｓ），
７．８８ （ｍ， １Ｈ）， ３．８５ （ｓ， ３Ｈ）。ＭＳ （ＥＳ＋） １９３
．１。
工程４：２−アミノ−６−フルオロ−Ｎ−（５−フルオロ−４−（１−メチル−１Ｈ−
イミダゾール−５−イル）ピリジン−３−イル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３
−カルボキサミド（化合物Ｉ−１）

５−フルオロ−４−（３−メチルイミダゾール−４−イル）ピリジン−３−アミン二塩
酸塩１１（８．００６ｇ，３０．２ｍｍｏｌ）と２−アミノ−６−フルオロ−ピラゾロ［
１，５−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸（６−クロロベンゾトリアゾール−１−イル）
６ｂ（１０ｇ，２８．７６ｍｍｏｌ）との混合物をアニソール（１００ｍＬ）に懸濁させ
た。この懸濁物にＤＩＰＥＡ（８．１７７ｇ，１１．０２ｍＬ，６３．２７ｍｍｏｌ）を
添加し、そしてこの混合物を９５℃（内部温度）で４４時間加熱し、次いで一晩で室温ま
で放冷した。その固体を濾過により集め、最小量のアニソール（約２０ｍＬ）で洗浄し、
減圧下で１時間乾燥させ、次いで、その固体を真空オーブン内４５℃（内部温度）で２時
間乾燥させると、生成物が明黄色固体として、７．８ｇが残った。この固体を水（７８ｍ
Ｌ）およびＭｅＣＮ（１１７ｍＬ）に懸濁させ、そしてＴＦＡ（２．４ｇ，１．６２ｍＬ
，１ｅｑ．）を添加した。この反応混合物を室温で１０分間撹拌し、次いで濾紙で濾過し
、少量の水で洗浄した。その濾液を、２Ｍの炭酸ナトリウムを撹拌しながら添加すること
によって、ｐＨ＝８まで塩基性にした。その固体を濾過により集め、水で洗浄し、次いで
減圧下で１時間乾燥させた。次いで、その固体を真空オーブン４５℃（内部温度）で一晩
乾燥させると、生成物Ｉ−１が単黄色固体として、５．２９ｇが残った。^１Ｈ ＮＭＲ
（５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ９．６８ （ｓ， ２Ｈ）， ９．４２
（ｄｄ， Ｊ ＝ ４．８， ２．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．４６ （ｓ， １Ｈ），
８．３１ （ｄ， Ｊ ＝ ２．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０７ （ｓ， １Ｈ），
７．２５ （ｄ， Ｊ ＝ １．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．７１ （ｓ， ２Ｈ），
３．４６ （ｓ， ３Ｈ）。ＭＳ （ＥＳ＋） ３７１．０。

化合物Ｉ−１の固体形態

化合物Ｉ−１を、種々の固体形態（無水物形態を含めて）で調製した。本発明の固体形
態は、がんの処置のための医薬の製造において、有用である。１つの実施形態は、がんを
処置するための、本明細書中に記載される固体形態の使用を提供する。いくつかの実施形
態において、このがんは、トリプルネガティブ乳がん、膵臓がん、小細胞肺がん、結腸直
腸がん、卵巣がん、または非小細胞肺がんである。別の実施形態は、本明細書中に記載さ
れる固体形態および薬学的に受容可能なキャリアを含有する、薬学的組成物を提供する。

本出願人は、本明細書中に、化合物Ｉ−１の新規な固体形態を記載する。この固体形態
の名称および化学量論を、以下の表２に与える：

実施例２：化合物Ｉ−１（無水物遊離塩基）

化合物Ｉ−１の無水物遊離塩基を、実施例１の工程４に記載される方法に従って調製し
得る。
化合物Ｉ−１（無水物遊離塩基）のＸＲＰＤ

化合物Ｉ−１の無水物遊離塩基のＸＲＰＤパターンを、室温で、反射モードで、Ｅｍｐ
ｙｒｅａｎ管球およびＰＩＸｃｅｌ １Ｄ検出器を備え付けたＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ回
折計（ＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して記録した
。Ｘ線発生機を、４５ｋＶの電圧および４０ｍＡの電流で運転した。この粉末サンプルを
シリコンホルダに配置した。そのデータを、３°〜３９°の２θの範囲にわたって記録し
、ステップサイズは０．０１３°であり、そして滞留時間は１ステップあたり０．５秒で
あった。図１ａは、このサンプルのＸ線粉末回折を示す。これは、結晶性の薬物物質に特
徴的である。

化合物Ｉ−１の無水物遊離塩基から得られる代表的なＸＲＰＤピーク：

化合物Ｉ−１（無水物遊離塩基）の熱分析

化合物Ｉ−１の無水物遊離塩基の熱重量分析を、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ＴＧＡ（ＴＡ
Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｔｒｉｏｓ）を使用して行って、減量の百分率を、温度の関数
として決定した。サンプル（２．８４ｍｇ）を、風袋重量を予め測定したアルミニウムパ
ンに添加し、そして周囲温度から４００℃まで１０℃／ｍｉｎで加熱した。図２ａに見ら
れるＴＧＡ結果は、融解または熱分解の前に観察される非常に小さい減量を示す。周囲温
度から２６１℃までに、その減量は０．６０％である。融解／分解の開始温度は、２９９
℃である。
化合物Ｉ−１（無水物遊離塩基）の示差走査熱量分析

化合物Ｉ−１の無水物遊離塩基の示差走査熱量分析を、ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ
ＤＳＣ Ｑ２０００を使用して測定した。サンプル（１．７１ｍｇ）を、ピンホールを開
けた密封アルミニウムパン内に秤量し、そして周囲温度から４００℃まで１０℃／ｍｉｎ
で加熱した。図３ａに見られるＤＳＣ結果は、３０２℃（開始）に１つの融解吸熱を示す
。
実施例３：化合物Ｉ−１（水和物）

化合物Ｉ−１の無水物遊離塩基（実施例１の工程４に記載される方法に従って調製され
る）を、水中または有機溶媒と水との混合物中でスラリー化して、化合物Ｉ−１の水和物
を生成した。
化合物Ｉ−１（水和物）のＸＲＰＤ

化合物Ｉ−１の水和物のＸＲＰＤパターンを、室温で、反射モードで、Ｅｍｐｙｒｅａ
ｎ管球およびＰＩＸｃｅｌ １Ｄ検出器を備え付けたＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ回折計（Ｐ
ＡＮａｌｙｔｉｃａｌ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して記録した。Ｘ線発
生機を、４５ｋＶの電圧および４０ｍＡの電流で運転した。この粉末サンプルをシリコン
ホルダに配置した。そのデータは、３°〜３９°の２θの範囲にわたり、ステップサイズ
は０．０１３°であり、そして滞留時間は１ステップあたり０．５秒であった。図１ｂは
、このサンプルのＸ線粉末回折を示す。これは、結晶性薬物物質に特徴的である。

化合物Ｉ−１の水和物から得られる代表的なＸＲＰＤピーク：

化合物Ｉ−１（水和物）の熱分析

化合物Ｉ−１の水和物の熱重量分析（ＴＧＡ）を、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ＴＧＡ（ＴＡ
Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｔｒｉｏｓ）を使用して行って、減量の百分率を、温度の関
数として決定した。サンプル（４．７４ｍｇ）を、風袋重量を予め測定したアルミニウム
パンに添加し、そして周囲温度から４００℃まで１０℃／ｍｉｎで加熱した。図２ｂに見
られるＴＧＡ結果は、１００℃未満で１２．６％の大きい減量を示す。この減量は、およ
そ３モル当量の水に対応する。その後の２５０℃より高温での減量は、融解および分解の
結果である。
化合物Ｉ−１（水和物）の示差走査熱量分析

化合物Ｉ−１の水和物の示差走査熱量分析（ＤＳＣ）を、ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ
ＤＳＣ Ｑ２０００を使用して測定した。サンプル（２．７８ｍｇ）を、ピンホールを
開けたアルミニウム密封パン内に秤量し、そして周囲温度から３７０℃まで１０℃／ｍｉ
ｎで加熱した。図３ｂに見られるＤＳＣ結果は、１００℃未満での広範な脱溶媒和吸熱、
その後、１００〜１５０℃での化合物Ｉ−１の無水物遊離塩基への発熱再結晶を示す。３
００〜３０５℃の吸熱ピークは、化合物Ｉ−１の無水物遊離塩基の融解を示す。
実施例４：化合物Ｉ−１（酒石酸）

化合物Ｉ−１の無水物遊離塩基（実施例１の工程４に記載される方法に従って調製され
る）を酒石酸およびエタノールでスラリー化して、化合物Ｉ−１酒石酸を生成した。
化合物Ｉ−１（酒石酸）のＸＲＰＤ

化合物Ｉ−１酒石酸形態のＸＲＰＤパターンを、室温で、反射モードで、Ｅｍｐｙｒｅ
ａｎ管球およびＰＩＸｃｅｌ １Ｄ検出器を備え付けたＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ回折計（
ＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して記録した。Ｘ線
発生機を、４５ｋＶの電圧および４０ｍＡの電流で運転した。この粉末サンプルをシリコ
ンホルダに配置した。そのデータは、４．５°〜３９°の２θの範囲にわたり、０．０１
３°のステップサイズおよび１ステップあたり２９９．６秒の滞留時間を用いた。図１ｃ
は、このサンプルのＸ線粉末回折を示す。これは、結晶性の薬物物質に特徴的である。

化合物Ｉ−１酒石酸から得られる代表的なＸＲＰＤピーク：

化合物Ｉ−１（酒石酸）の熱分析

化合物Ｉ−１酒石酸形態の熱重量分析（ＴＧＡ）を、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ＴＧＡ（Ｔ
Ａ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｔｒｉｏｓ）を使用して行って、減量の百分率を、温度の
関数として決定した。サンプル（３．３５ｍｇ）を、風袋重量を予め測定したアルミニウ
ムパンに添加し、そして周囲温度から３３０℃まで１０℃／ｍｉｎで加熱した。図２ｃに
見られるＴＧＡ結果は、１５０〜３３０℃で、１２．４％、１２．６％、および８．５％
の３段階の減量を示す。
化合物Ｉ−１（酒石酸）の示差走査熱量分析

化合物Ｉ−１酒石酸の示差走査熱量分析（ＤＳＣ）を、ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ
ＤＳＣ Ｑ２０００を使用して測定した。サンプル（１．０８ｍｇ）を、ピンホールを開
けたアルミニウム密封パン内に秤量し、そして周囲温度から３５０℃まで１０℃／ｍｉｎ
で加熱した。図３ｃに見られるＤＳＣ結果は、２００〜２７５℃での最初の２つの発熱ピ
ーク（ＴＧＡでの最初の２段階の減量に対応する）、および２７５℃より高温での最後の
吸熱ピーク（ＴＧＡでの最終工程の減量に対応する）を示す。
実施例５：細胞ＡＴＲ阻害アッセイ：

化合物を、ヒドロキシウレアで処理した細胞において、ＡＴＲ基質ヒストンＨ２ＡＸの
リン酸化を検出する免疫蛍光顕微鏡アッセイを使用して、細胞内ＡＴＲを阻害する能力に
ついてスクリーニングし得る。ＨＴ２９細胞を、９６ウェルの黒色撮像プレート（ＢＤ
３５３２１９）中で、１０％のウシ胎仔血清（ＪＲＨ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ １２０
０３）、１：１００に希釈したペニシリン／ストレプトマイシン溶液（Ｓｉｇｍａ Ｐ７
５３９）、および２ｍＭのＬ−グルタミン（Ｓｉｇｍａ Ｇ７５１３）を補充したＭｃＣ
ｏｙの５Ａ培地（Ｓｉｇｍａ Ｍ８４０３）中で、１個のウェルあたり１４，０００個の
細胞でプレートし、そして５％ ＣＯ_２中、３７℃で一晩付着させる。次いで、２５μＭ
の最終濃度から３倍連続希釈で、細胞培地に化合物を加え、そしてこれらの細胞を５％
ＣＯ_２中、３７℃で培養する。１５分後、ヒドロキシウレア（Ｓｉｇｍａ Ｈ８６２７）
を加えて、最終濃度を２ｍＭにする。

ヒドロキシウレアでの処理の４５分後、細胞をＰＢＳで洗い、ＰＢＳに希釈した４％の
ホルムアルデヒド（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ １８８１４）で１０分間固定し
、ＰＢＳ中０．２％のＴｗｅｅｎ−２０（洗浄緩衝液）で洗浄し、ＰＢＳ中０．５％のＴ
ｒｉｔｏｎ Ｘ−１００で１０分間透過性にする（これらを全て、室温で行う）。次いで
、細胞を洗浄緩衝液で１回洗い、そして室温で３０分間、洗浄緩衝液で希釈液した１０％
のヤギ血清（Ｓｉｇｍａ Ｇ９０２３）（ブロック緩衝液）中でブロックする。Ｈ２ＡＸ
リン酸化レベルを検出するために、細胞を次いで、ブロック緩衝液で１：２５０に希釈し
た一次抗体（マウスモノクローナル抗リン酸化ヒストンＨ２ＡＸ Ｓｅｒ１３９抗体；Ｕ
ｐｓｔａｔｅ ０５−６３６）中でさらに１時間室温でインキュベートする。次いで、細
胞を洗浄緩衝液で５回洗浄し、その後、洗浄緩衝液でそれぞれ１：５００および１：５０
００に希釈した二次抗体（ヤギ抗マウスＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８結合抗体；Ｉｎ
ｖｉｔｒｏｇｅｎ Ａ１１０２９）とＨｏｅｃｈｓｔ染料（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｈ３
５７０）との混合物中で、暗所室温で１時間インキュベートする。次いで、細胞を洗浄緩
衝液で５回洗浄し、そして最後に、１００μｌのＰＢＳを各ウェルに添加し、その後、撮
像を行う。

細胞を、ＢＤ Ｐａｔｈｗａｙ ８５５ ＢｉｏｉｍａｇｅｒおよびＡｔｔｏｖｉｓｉ
ｏｎソフトウェア（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、バージョン１．６／８５５）を使用
して、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８およびＨｏｅｃｈｓｔの強度について撮像して、
それぞれリン酸化Ｈ２ＡＸ Ｓｅｒ１３９およびＤＮＡ染色を定量する。次いで、倍率２
０倍での９枚の画像のモンタージュで、ＢＤ Ｉｍａｇｅ Ｄａｔａ Ｅｘｐｌｏｒｅｒ
ソフトウェア（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、バージョン２．２．１５）を使用して、
各ウェルについてリン酸化Ｈ２ＡＸ陽性の核の百分率を計算する。リン酸化Ｈ２ＡＸ陽性
の核は、ヒドロキシウレアで処理されていない細胞の平均Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８
８強度の１．７５倍であるＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８強度を含む目的のＨｏｅｃｈ
ｓｔ陽性領域として定義される。Ｈ２ＡＸ陽性の核の百分率を、最終的に各化合物の濃度
に対してプロットし、そして細胞内ＡＴＲ阻害のＩＣ５０を、Ｐｒｉｓｍソフトウェア（
ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ、バージョン３．０ｃｘ（Ｍａｃｉｎｔｏｓｈ用）、Ｇｒ
ａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、ＵＳＡ
）を用いて決定する。

本明細書中に記載される化合物をまた、当該分野において公知である他の方法に従って
試験し得る（Ｓａｒｋａｒｉａら，「Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＡＴＭ ａｎｄ Ａ
ＴＲ Ｋｉｎａｓｅ Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｂｙ ｔｈｅ Ｒａｄｉｏｓｅｎｓｉｔｉ
ｚｉｎｇ Ａｇｅｎｔ」，Ｃａｆｆｅｉｎｅ：Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５９：
４３７５〜５３８２（１９９９）；Ｈｉｃｋｓｏｎら，「Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｎｏｖｅｌ ａｎｄ Ｓｐｅ
ｃｉｆｉｃ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｔｈｅ Ａｔａｘｉａ−Ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔ
ａｓｉａ Ｍｕｔａｔｅｄ Ｋｉｎａｓｅ ＡＴＭ」Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ
６４：９１５２〜９１５９（２００４）；Ｋｉｍら，「Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｓｐｅｃｉ
ｆｉｃｉｔｉｅｓ ａｎｄ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｕｔａｔｉｖｅ
Ｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ ｏｆ ＡＴＭ Ｋｉｎａｓｅ Ｆａｍｉｌｙ Ｍｅｍｂｅｒｓ」
Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２７４（
５３）：３７５３８〜３７５４３（１９９９）；およびＣｈｉａｎｇら，「Ｄｅｔｅｒｍ
ｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃａｔａｌｙｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｍ
ＴＯＲ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｍｅｍｂｅｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐｈｏｓｐｈｏｉｎｏｓ
ｉｔｉｄｅ−３−ｋｉｎａｓｅ−ｒｅｌａｔｅｄ ｋｉｎａｓｅ ｆａｍｉｌｙ」Ｍｅｔ
ｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８１：１２５〜４１（２００４）を参照のこと）。
実施例６：ＡＴＲ阻害アッセイ：

化合物を、放射性同位体リン酸塩取込みアッセイを用いて、これらの化合物がＡＴＲキ
ナーゼを阻害する能力についてスクリーニングし得る。アッセイを、５０ｍＭのＴｒｉｓ
／ＨＣｌ（ｐＨ ７．５）、１０ｍＭのＭｇＣｌ_２および１ｍＭのＤＴＴの混合物中で実
施する。最終的な基質濃度は１０μＭの［γ−３３Ｐ］ＡＴＰ（３ｍＣｉ ３３Ｐ ＡＴ
Ｐ／ｍｍｏｌ ＡＴＰ、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）および８００μＭの標的ペプチド（
ＡＳＥＬＰＡＳＱＰＱＰＦＳＡＫＫＫ）である。

アッセイを、５ｎＭの全長ＡＴＲの存在下で、２５℃で実施する。アッセイ用ストック
緩衝液を、ＡＴＰおよび目的の試験化合物を除いて、上で列挙された全ての試薬を含めて
調製する。１３．５μＬのストック溶液を９６ウェルプレートに入れ、その後、試験化合
物の連続希釈物（代表的には最終濃度１５μＭから開始して、３倍連続希釈）を含むＤＭ
ＳＯストック２μＬを２連で添加する（最終ＤＭＳＯ濃度７％）。プレートを２５℃で１
０分間予めインキュベーションし、そして１５μＬの［γ−３３Ｐ］ＡＴＰを添加するこ
とによって反応を開始させる（最終濃度１０μＭ）。

２４時間後に、２ｍＭのＡＴＰを含む０．１Ｍのリン酸３０μＬを添加することによっ
て、反応を停止させる。マルチスクリーンリン酸セルロースフィルター９６ウェルプレー
ト（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、カタログ番号ＭＡＰＨＮ０Ｂ５０）を０．２Ｍのリン酸１００
μＬで前処理し、その後、４５μＬの停止したアッセイ混合物を添加する。プレートを５
×２００μＬの０．２Ｍのリン酸で洗浄する。乾燥後、１００μＬのＯｐｔｉｐｈａｓｅ
「ＳｕｐｅｒＭｉｘ」液体シンチレーションカクテル（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）をウ
ェルに添加し、その後、シンチレーション計数を行う（１４５０ Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ
Ｌｉｑｕｉｄ Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ Ｃｏｕｎｔｅｒ、Ｗａｌｌａｃ）。

全てのデータ点について平均バックグラウンド値を差し引いた後、Ｐｒｉｓｍソフトウ
ェアパッケージ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ、バージョン３．０ｃｘ（Ｍａｃｉｎｔ
ｏｓｈ用）、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆｏ
ｒｎｉａ、ＵＳＡ）を使用して、初速度データの非線形回帰分析から、Ｋｉ（ａｐｐ）デ
ータを計算する。

一般に、本発明の化合物は、ＡＴＲを阻害するのに効果的である。化合物Ｉ−１は、Ａ
ＴＲを、１μＭ未満のＫｉ値で阻害する。
実施例７：シスプラチン感作アッセイ

化合物を、９６ｈ細胞バイアビリティ（ＭＴＳ）アッセイを使用して、シスプラチンに
対してＨＣＴ１１６結腸直腸がん細胞をこれらの化合物が感作する能力に関してスクリー
ニングし得る。シスプラチンに対するＡＴＭシグナル伝達の欠陥を有するＨＣＴ１１６細
胞（Ｋｉｍら；Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２１：３８６４（２００２）を参照のこと；またＴａ
ｋｅｍｕｒａら；ＪＢＣ ２８１：３０８１４（２００６）も参照のこと）を、９６ウェ
ルのポリスチレンプレート（Ｃｏｓｔａｒ ３５９６）中で、１０％のウシ胎仔血清（Ｊ
ＲＨ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ １２００３）、１：１００に希釈したペニシリン／スト
レプトマイシン溶液（Ｓｉｇｍａ Ｐ７５３９）、および２ｍＭのＬ−グルタミン（Ｓｉ
ｇｍａ Ｇ７５１３）を補充した１５０μｌのＭｃＣｏｙの５Ａ培地（Ｓｉｇｍａ Ｍ８
４０３）中で、１個のウェルあたり４７０個の細胞でプレートし、５％ ＣＯ_２中、３７
℃で一晩付着させる。次いで、最終細胞体積２００μｌ中の濃度のフルマトリックスとし
て、トップ最終濃度１０μＭから２倍連続希釈で、化合物とシスプラチンとを同時に細胞
培地に添加し、次いで細胞を、５％ ＣＯ_２中、３７℃でインキュベートする。９６時間
後、４０μｌのＭＴＳ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｇ３５８ａ）を各ウェルに添加し、そして
細胞を５％ ＣＯ_２中、３７℃で１時間インキュベートする。最後に、ＳｐｅｃｔｒａＭ
ａｘ Ｐｌｕｓ ３８４測定器（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して、吸
光度を４９０ｎｍで測定し、そしてシスプラチンのＩＣ_５０を単独で少なくとも３分の１
（小数点以下１桁）に低減するために必要な化合物の濃度を報告し得る。

一般に、本発明の化合物は、がん細胞をシスプラチンに対して感作するのに効果的であ
る。化合物Ｉ−１は、０．２μＭ未満のシスプラチン感作値を有する。
実施例８：単剤ＨＣＴ１１６活性

化合物を、９６ｈ細胞バイアビリティ（ＭＴＳ）アッセイを使用して、ＨＣＴ１１６結
腸直腸がん細胞に対する単剤活性に関してスクリーニングし得る。ＨＣＴ１１６を、９６
ウェルのポリスチレンプレート（Ｃｏｓｔａｒ ３５９６）中で、１０％のウシ胎仔血清
（ＪＲＨ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ １２００３）、１：１００に希釈したペニシリン／
ストレプトマイシン溶液（Ｓｉｇｍａ Ｐ７５３９）、および２ｍＭのＬ−グルタミン（
Ｓｉｇｍａ Ｇ７５１３）を補充した１５０μｌのＭｃＣｏｙの５Ａ培地（Ｓｉｇｍａ
Ｍ８４０３）中で、１個のウェルあたり４７０個の細胞でプレートし、５％ ＣＯ_２中、
３７℃で一晩付着させる。次いで、最終細胞体積２００μｌ中の濃度のフルマトリックス
として、トップ最終濃度１０μＭから２倍連続希釈で、化合物を細胞培地に添加し、次い
で細胞を、５％ ＣＯ_２中、３７℃でインキュベートする。９６時間後、４０μｌのＭＴ
Ｓ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｇ３５８ａ）を各ウェルに添加し、そして細胞を５％ ＣＯ_２
中、３７℃で１時間インキュベートする。最後に、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｐｌｕｓ ３
８４測定器（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して、吸光度を４９０ｎｍで
測定し、そしてＩＣ５０値を計算し得る。
実施例９：ＡＴＲ複合体阻害アッセイ

化合物を、パートナータンパク質ＡＴＲＩＰ、ＣＬＫ２およびＴｏｐＢＰ１の存在下で
、放射性同位体リン酸塩取込みアッセイを用いて、これらの化合物がＡＴＲキナーゼを阻
害する能力についてスクリーニングした。アッセイを、５０ｍＭのＴｒｉｓ／ＨＣｌ（ｐ
Ｈ ７．５）、１０ｍＭのＭｇＣｌ_２および１ｍＭのＤＴＴの混合物中で実施した。最終
的な基質濃度は１０μＭの［ｇ−３３Ｐ］ＡＴＰ（３．５μＣｉ ３３Ｐ ＡＴＰ／ｎｍ
ｏｌ ＡＴＰ，Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ，ＵＳＡ）およ
び８００μＭの標的ペプチド（ＡＳＥＬＰＡＳＱＰＱＰＦＳＡＫＫＫ，Ｉｓｃａ Ｂｉｏ
ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅｓｈｉｒｅ，ＵＫ）であった。

アッセイを、４ｎＭの全長ＡＴＲ、４０ｎＭの全長ＡＴＲＩＰ、４０ｎＭの全長ＣＬＫ
２および６００ｎＭのＴｏｐＢＰ１（Ａ８９１−Ｓ１１０５）の存在下で、２５℃で実施
した。酵素ストック緩衝液を、標的ペプチド、ＡＴＰおよび目的の試験化合物を除いて、
上で列挙された全ての試薬を含めて調製した。この酵素ストックを、２５℃で３０分間予
めインキュベートした。８．５μＬの酵素ストック溶液を９６ウェルプレートに入れ、そ
の後、試験化合物の連続希釈物（代表的には最終濃度１．５μＭから開始して、２．５倍
連続希釈）を含むＤＭＳＯストック２μＬおよび５μｌの標的ペプチドを２連で添加した
（最終ＤＭＳＯ濃度７％）。プレートを２５℃で１０分間予めインキュベーションし、そ
して１５μＬの［ｇ−３３Ｐ］ＡＴＰを添加することによって反応を開始させた（最終濃
度１０μＭ）。

２０時間後に、２ｍＭのＡＴＰを含む０．３Ｍのリン酸３０μＬを添加することによっ
て、反応を停止させた。リン酸セルロースフィルター９６ウェルプレート（Ｍｕｌｔｉｓ
ｃｒｅｅｎ ＨＴＳ ＭＡＰＨＮＯＢ５０，Ｍｅｒｃｋ−Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｍａｓｓ
ａｃｈｕｓｅｔｔｓ，ＵＳＡ）を０．１Ｍのリン酸１００μＬで前処理し、その後、４５
μＬの停止したアッセイ混合物を添加した。プレートを５×２００μＬの０．１Ｍのリン
酸で洗浄した。乾燥後、５０μＬのＯｐｔｉｐｈａｓｅ「ＳｕｐｅｒＭｉｘ」液体シンチ
レーションカクテル（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ，ＵＳＡ
）をウェルに添加し、その後、シンチレーション計数を行った（Ｗａｌｌａｃ １４５０
Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ Ｌｉｑｕｉｄ Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ Ｃｏｕｎｔｅｒ，
Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ，ＵＳＡ）。

全てのデータ点について平均バックグラウンド値を差し引いた後、Ｐｒｉｓｍソフトウ
ェアパッケージ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ、バージョン６．０ｃ（Ｍａｃｉｎｔｏ
ｓｈ用）、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＵＳ
Ａ）を使用して、初速度データの非線形回帰分析から、Ｋｉ（ａｐｐ）データを計算した
。

本発明の多くの実施形態を記載したが、本発明の化合物、方法、およびプロセスを利用
する他の実施形態を提供するために、これらの基本的な例を変化させることができること
が明らかである。従って、本発明の範囲は、本明細書で実施例として提示された特定の実
施形態によってではなく、添付の特許請求の範囲によって定義されるべきであることが理
解される。

Claims (1)

1. 明細書中に記載の発明。

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