JP2015512621A5

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Publication number: JP2015512621A5
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Filing date: 2013-02-25
Publication date: 2016-04-14
Anticipated expiration: 2033-02-25

Description

第11の局面によると、本発明は、標的細胞表面上の所望のレセプター分子の組換え発現について標的細胞をスクリーニングする方法を提供し、前記所望のレセプター分子は、標的細胞表面上に発現され、前記方法は、
サンプルを提供する工程であって、前記サンプルは、所望の標的レセプターの組換え発現の可能性がある標的細胞を含む、工程、
結合部位Bおよび結合パートナーCを含むレセプター結合試薬を提供する工程であって、
レセプター結合試薬に含まれる結合部位Bは、標的細胞表面上の所望のレセプター分子に特異的に結合することができ、レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCは、親和性試薬の結合部位Zに可逆的に結合することができる、工程、および
サンプルを好適な固定相でのクロマトグラフィーにかける工程であって、前記固定相上には親和性試薬が固定化されており、前記親和性試薬は、結合部位Zを含み、前記結合部位Zは、レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCと可逆的結合を形成し、レセプター結合試薬の結合部位Bは、標的細胞表面上のレセプター分子に結合し、それにより、標的細胞が固定相上に可逆的に固定化される、工程
を含む。
[本発明1001]
標的細胞を単離する方法であって、該標的細胞は、標的細胞表面上にレセプター分子を有し、該方法は、
該標的細胞を含むサンプルを提供する工程、
結合部位Bおよび結合パートナーCを含むレセプター結合試薬を提供する工程であって、
該レセプター結合試薬に含まれる結合部位Bは、標的細胞表面上のレセプター分子に特異的に結合することができ、該結合部位Bを介したレセプター結合試薬と該レセプター分子との結合に対する解離定数（K _D ）は、低親和性であるか、または該結合部位Bを介したレセプター結合試薬と該レセプター分子との結合に対する解離速度定数（koff）は、約3×10 ^-5 sec ^-1 以上の値を有し、該レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCは、親和性試薬の結合部位Zに可逆的に結合することができる、工程、および
該サンプルを好適な固定相でのクロマトグラフィーにかける工程であって、該固定相上には親和性試薬が固定化されており、
該親和性試薬は、結合部位Zを含み、該結合部位Zは、該レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCと可逆的結合を形成し、かつ該レセプター結合試薬の結合部位Bは、標的細胞表面上のレセプター分子に結合し、それにより、固定相上に該標的細胞が可逆的に固定化される、工程
を含む、方法。
[本発明1002]
親和性試薬が、レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCに可逆的に結合することができる2つ以上の結合部位Zを含む、本発明1001の方法。
[本発明1003]
固定相上に競合試薬をロードする工程をさらに含み、競合作用物質は、レセプター結合試薬のパートナーCと親和性試薬の結合部位Zとの結合を破壊することができ、それにより、レセプター結合作用物質に取って代わる、本発明1001の方法。
[本発明1004]
競合試薬が、親和性試薬の結合部位Zに競合的に結合することができる、本発明1003の方法。
[本発明1005]
標的細胞を含むサンプルを固定相に適用する前に、レセプター結合試薬が、固定相上に固定化される、本発明1001〜1004のいずれかの方法。
[本発明1006]
サンプルが、標的細胞とさらなる細胞との混合物を含み、該さらなる細胞は、その細胞表面上に前記レセプター分子を欠き、かつ、該方法は、該さらなる細胞から該標的細胞を分離する工程を含む、本発明1001〜1005のいずれかの方法。
[本発明1007]
レセプター結合試薬とレセプター分子との低親和性の相互作用が、約10 ^-3 〜約10 ^-7 Mの範囲内のK _D を有する、本発明1001〜1006のいずれかの方法。
[本発明1008]
標的細胞を単離する方法であって、該標的細胞は、標的細胞表面上にレセプター分子を有し、該方法は、
サンプルを提供する工程であって、該サンプルは、標的細胞およびレセプター結合試薬を含み、
該レセプター結合試薬は、結合部位Bおよび結合パートナーCを含み、該レセプター結合試薬に含まれる結合部位Bは、該レセプター分子に特異的に結合することができる、工程、および
該サンプルを好適な固定相でのクロマトグラフィーにかける工程であって、該固定相は、ゲル濾過マトリックスおよび/またはアフィニティークロマトグラフィーマトリックスであり、該ゲル濾過および/またはアフィニティークロマトグラフィーマトリックスは、親和性試薬を含み、該親和性試薬は、該レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCに特異的に結合する結合部位Zを含み、それにより、該標的細胞が単離される、工程
を含む、方法。
[本発明1009]
クロマトグラフィーが、カラムクロマトグラフィーまたは平面クロマトグラフィーである、本発明1001〜1008のいずれかの方法。
[本発明1010]
サンプルをクロマトグラフィーにかける工程が、レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCが、それに特異的に結合する固定相の親和性試薬の結合部位Zと複合体を形成することを可能にし、それにより、該レセプター結合試薬が該固定相上に固定化されることを含む、本発明1008の方法。
[本発明1011]
レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCが、親和性試薬の結合部位Zに特異的に結合することができ、該親和性試薬は、該レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCに特異的に結合することができる2つ以上の結合部位Zを含む、本発明1008または1010の方法。
[本発明1012]
アフィニティークロマトグラフィーマトリックスおよび/またはゲル濾過マトリックス上に親和性試薬が共有結合的に固定化されている、本発明1010または1011の方法。
[本発明1013]
サンプルが、競合試薬をさらに含み、該競合試薬は、レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCに特異的に結合する親和性試薬の結合部位Zに結合し、それにより、固定相上に該競合試薬が固定化される、本発明1008〜1012のいずれかの方法。
[本発明1014]
サンプルを形成する工程をさらに含み、
該サンプルを形成する工程は、
標的細胞を含む供給源サンプルを提供すること、および
該供給源サンプルにレセプター結合試薬を加えること
を含む、本発明1001〜1004のいずれかの方法。
[本発明1015]
供給源サンプルが、複数の標的細胞を含むと予想され、かつ該供給源サンプルは、複数のレセプター結合試薬と接触され、予想される数の標的細胞に対して過剰量のレセプター結合試薬が提供される、本発明1014の方法。
[本発明1016]
サンプルが、流体であるかまたは流体を含む、本発明1001〜1015のいずれかの方法。
[本発明1017]
サンプルが、体液を含む、本発明1001〜1016のいずれかの方法。
[本発明1018]
体液が、血液または血液成分である、本発明1017の方法。
[本発明1019]
サンプルをクロマトグラフィーにかける工程が、該サンプルをクロマトグラフィーカラムの固定相に通させることおよび該固定相を流体移動相で洗浄することを含み、該流体移動相は、レセプター結合試薬を少なくとも本質的に欠く、本発明1001〜1018のいずれかの方法。
[本発明1020]
サンプルをクロマトグラフィーにかける工程が、クロマトグラフィーマトリックスから標的細胞を溶出することを含む、本発明1001〜1019のいずれかの方法。
[本発明1021]
標的細胞を回収する工程をさらに含む、本発明1020の方法。
[本発明1022]
サンプルから標的細胞をクロマトグラフィー的に単離する方法であって、該標的細胞は、標的細胞表面上にレセプター分子を有し、該方法は、
該標的細胞を含むサンプルを提供する工程、
結合部位Bおよび結合パートナーCを含むレセプター結合試薬を提供する工程であって、
該レセプター結合試薬に含まれる結合部位Bは、標的細胞表面上のレセプター分子に特異的に結合することができ、
該レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCは、親和性試薬の結合部位Zに可逆的に結合することができる、工程、および
該サンプルを好適な固定相でのクロマトグラフィーにかける工程であって、該固定相上には親和性試薬が固定化されており、
該親和性試薬は、結合部位Zを含み、該結合部位Zは、該レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCと可逆的結合を形成し、かつ該レセプター結合試薬の結合部位Bは、標的細胞表面上のレセプター分子に結合し、それにより、該標的細胞が該固定相上に可逆的に固定化される、工程、
該親和性試薬の結合部位Zに特異的に結合する結合部位を含む競合試薬を提供する工程;
該競合試薬を第1固定相上にロードする工程であって、
それにより、（複数の）レセプター結合試薬と該レセプター分子と該親和性試薬との間に形成される非共有結合的な可逆的複合体が破壊される、工程;
該第1固定相の溶出液から溶出サンプルを回収する工程であって、該溶出サンプルは、該標的細胞を含む、工程;
該溶出サンプルを好適な第2固定相でのクロマトグラフィーにかける工程であって、該第2固定相は、ゲル濾過マトリックスおよび/またはアフィニティークロマトグラフィーマトリックスであり、該ゲル濾過および/またはアフィニティークロマトグラフィーマトリックスは、該レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCに特異的に結合する結合部位Zを有する親和性試薬を含む、工程、ならびに
該溶出サンプルを第2クロマトグラフィーカラムに通す工程
を含む、方法。
[本発明1023]
第2固定相であるアフィニティークロマトグラフィーマトリックスおよび/またはゲル濾過マトリックス上に親和性試薬が固定化されている、本発明1022の方法。
[本発明1024]
溶出サンプルを第2固定相に通す工程が、競合試薬が親和性試薬の結合部位Zと複合体を形成することを可能にすることにより、該競合試薬が第2クロマトグラフィーカラムの固定相上に固定化される工程を含む、本発明1022または1023の方法。
[本発明1025]
第1および第2固定相の各々が、カラムに含まれているか、または平面固定相である、本発明1022〜1024のいずれかの方法。
[本発明1026]
レセプター結合試薬の結合部位Bとレセプター分子との結合が、約10 ^-2 M〜約10 ^-10 Mの範囲内の解離定数（K _D ）を有する、本発明1022〜1025のいずれかの方法。
[本発明1027]
結合部位Bを介したレセプター結合試薬とレセプター分子との結合に対する解離定数（K _D ）が、低親和性であるか、または結合部位Bを介したレセプター結合試薬とレセプター分子との結合に対する解離速度定数（koff）が、約3×10 ^-5 sec ^-1 以上の値を有する、本発明1026の方法。
[本発明1028]
レセプター結合試薬の結合パートナーCと親和性試薬の結合部位Zとの可逆的結合が、約10 ^-2 〜約10 ^-13 Mの範囲内の解離定数（K _D ）を有する、本発明1001〜1027のいずれかの方法。
[本発明1029]
固定相が、非磁性材料または非磁化性材料である、本発明1001〜1028のいずれかの方法。
[本発明1030]
固定相が、セルロース膜、プラスチック膜、多糖ゲル、ポリアクリルアミドゲル、アガロースゲル、多糖グラフトシリカ、ポリビニルピロリドングラフトシリカ、ポリエチレンオキシドグラフトシリカ、ポリ（2-ヒドロキシエチルアスパルトアミド）シリカ、ポリ（N-イソプロピルアクリルアミド）グラフトシリカ、スチレン-ジビニルベンゼンゲル、アクリレートまたはアクリルアミドとジオールとのコポリマー、多糖とN,N'-メチレンビスアクリルアミドとのコポリマー、およびそれらのいずれか2つ以上の組み合わせのうちの一つを含むかまたはそれらのうちの一つからなる、本発明1029の方法。
[本発明1031]
アフィニティークロマトグラフィーマトリックスおよび/またはゲル濾過マトリックスが、モノリシックなマトリックス、粒状のマトリックス、または平面のマトリックスを含むかまたはそれらのいずれかからなる、本発明1001〜1030のいずれかの方法。
[本発明1032]
粒状のマトリックスが、約5μm〜約200μmまたは約5μm〜600μmまたは約5μm〜1500μmの平均粒径を有する、本発明1031の方法。
[本発明1033]
アフィニティークロマトグラフィーマトリックスおよび/またはゲル濾過マトリックスが、0〜約500nmの平均ポアサイズを有する、本発明1001〜1032のいずれかの方法。
[本発明1034]
レセプター結合試薬が、免疫グロブリン、免疫グロブリンの機能的断片、免疫グロブリン様機能を有するタンパク質性結合分子、アプタマー、およびMHC分子の群から選択される、本発明1001〜1033のいずれかの方法。
[本発明1035]
レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCが、ビオチン、ビオチンアナログ、ストレプトアビジン結合ペプチド、およびアビジン結合ペプチドのうちの一つを含み、かつ親和性試薬が、ストレプトアビジン、ストレプトアビジンムテイン、アビジン、アビジンムテイン、またはそれらの混合物を含む、本発明1001〜1034のいずれかの方法。
[本発明1036]
標的細胞が、哺乳動物細胞である、本発明1001〜1035のいずれかの方法。
[本発明1037]
標的細胞が、細胞核を有する細胞である、本発明1001〜1036のいずれかの方法。
[本発明1038]
標的細胞が、白血球または幹細胞である、本発明1037の方法。
[本発明1039]
白血球が、リンパ球である、本発明1038の方法。
[本発明1040]
固定相を使用するクロマトグラフィーを介して標的細胞を単離するためのレセプター結合試薬および/または親和性試薬の使用であって、該標的細胞は、標的細胞表面上にレセプター分子を有し、該レセプター結合試薬は、結合部位Bおよび結合パートナーCを含み、該レセプター結合試薬の結合部位は、該標的細胞のレセプター分子に特異的に結合することができ、該結合部位Bを介したレセプター結合試薬と該レセプター分子との結合に対する解離定数（K _D ）は、低親和性であるか、または該結合部位Bを介したレセプター結合試薬と該レセプター分子との結合に対する解離速度定数（koff）は、約3×10 ^-5 sec ^-1 以上の値を有し、かつ該レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCは、該親和性試薬の結合部位Zに可逆的に結合することができる、使用。
[本発明1041]
親和性試薬が、レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCに可逆的に結合する2つ以上の結合部位Zを含む、本発明1040の使用。
[本発明1042]
レセプター結合試薬が、免疫グロブリン、免疫グロブリンの機能的断片、免疫グロブリン様機能を有するタンパク質性結合分子、アプタマー、およびMHC分子のうちの一つである、本発明1040または1041の使用。
[本発明1043]
レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーが、ビオチン、ビオチンアナログ、ストレプトアビジン結合ペプチド、およびアビジン結合ペプチドのうちの一つを含み、かつ親和性試薬が、ストレプトアビジン、ストレプトアビジンアナログ、アビジン、およびアビジンアナログのうちの一つを含む、本発明1040〜1042のいずれかの使用。
[本発明1044]
クロマトグラフィーを介して標的細胞を単離するためのストレプトアビジン、ストレプトアビジンムテイン、アビジン、アビジンムテイン、またはそれらの混合物の使用であって、該クロマトグラフィーは、ゲル濾過クロマトグラフィーである、使用。
[本発明1045]
クロマトグラフィーが、カラムクロマトグラフィーまたは平面クロマトグラフィーである、本発明1044の使用。
[本発明1046]
ゲル濾過クロマトグラフィーが、その上にストレプトアビジン、ストレプトアビジンムテイン、アビジン、アビジンムテイン、またはそれらの混合物が固定化されている固定相で行われる、本発明1044または1045の使用。
[本発明1047]
標的細胞が、細胞核を有する細胞である、本発明1044〜1046のいずれかの使用。
[本発明1048]
細胞核を有する細胞が、リンパ球である、本発明1047の使用。
[本発明1049]
細胞核を含む細胞を分離するための、セルロース膜、プラスチック膜、多糖ゲル、ポリアクリルアミドゲル、アガロースゲル、多糖グラフトシリカ、ポリビニルピロリドングラフトシリカ、ポリエチレンオキシドグラフトシリカ、ポリ（2-ヒドロキシエチルアスパルトアミド）シリカ、ポリ（N-イソプロピルアクリルアミド）グラフトシリカ、スチレン-ジビニルベンゼンゲル、アクリレートまたはアクリルアミドとジオールとのコポリマー、多糖とN,N'-メチレンビスアクリルアミドとのコポリマー、およびそれらのいずれか2つ以上の組み合わせのうちの一つのクロマトグラフィーマトリックスの使用。
[本発明1050]
細胞核を含む細胞が、リンパ球である、本発明1049の使用。
[本発明1051]
多糖とN,N'-メチレンビスアクリルアミドとのコポリマーが、Sephacryl（登録商標）である、本発明1049または1050の使用。
[本発明1052]
多糖ゲルが、Sepharose（登録商標）である、本発明1049または1050の使用。
[本発明1053]
アガロースゲルが、Sephadex（登録商標）などの架橋デキストランゲルである、本発明1049または1050の使用。
[本発明1054]
アクリレートとジオールとのコポリマーが、Toyopearl（登録商標）である、本発明1049または1050の使用。
[本発明1055]
ポリアクリルアミドゲルが、Fractogel（登録商標）およびBio-Gel（登録商標）のうちの一つである、本発明1049または1050の使用。
[本発明1056]
クロマトグラフィーゲルが、カラムに含まれている、本発明1049〜1055のいずれかの使用。
[本発明1057]
カラムが、カートリッジである、本発明1056の使用。
[本発明1058]
クロマトグラフィー用の第1および第2固定相の配置であって、該第1固定相は、細胞分離に適しており、該第1固定相は、アフィニティークロマトグラフィーマトリックスによって定義され、該アフィニティークロマトグラフィーマトリックス上には親和性試薬が固定化されており、
該親和性試薬は、レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCに可逆的に結合することができる少なくとも一つの結合部位Zを有し、
該第2固定相は、細胞分離に適しており、該第2固定相は、ゲル濾過マトリックスおよび/またはアフィニティークロマトグラフィーマトリックスであり、該アフィニティークロマトグラフィーマトリックスまたは該ゲル濾過およびアフィニティークロマトグラフィーマトリックスは、該レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCに特異的に結合する結合部位Zを有する親和性試薬を含む、配置。
[本発明1059]
少なくとも、第1固定相のアフィニティークロマトグラフィーマトリックス上に固定化された親和性試薬が、レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCに可逆的に結合することができる2つ以上の結合部位Zを含む、本発明1058の配置。
[本発明1060]
第1および第2固定相の各々が、クロマトグラフィーカラムに含まれるか、または平面固定相である、本発明1058または1059の配置。
[本発明1061]
複数の第1および第2固定相を含む、本発明1058〜1060のいずれかの配置。
[本発明1062]
標的細胞を単離するための部品のキットであって、該標的細胞は、標的細胞表面上にレセプター分子を有し、該キットは、
（a）結合部位Bおよび結合パートナーCを含むレセプター結合試薬であって、該レセプター結合試薬に含まれる結合部位Bは、標的細胞表面のレセプター分子に特異的に結合することができ、かつ該レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCは、多量体化試薬上の結合部位Zに可逆的に結合することができる、レセプター結合試薬;および
（b）細胞分離に適した固定相であって、該固定相は、ゲル濾過マトリックスおよび/またはアフィニティークロマトグラフィーマトリックスによって定義され、該アフィニティークロマトグラフィーマトリックスまたは該ゲル濾過およびアフィニティークロマトグラフィーマトリックスは、該レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCに可逆的に結合することができる結合部位Zを有する親和性試薬を含む、固定相
を備える、キット。
[本発明1063]
固定相が、クロマトグラフィーカラムに含まれるか、または平面固定相である、本発明1062の部品のキット。
[本発明1064]
サンプル中の他の成分からの細胞分離/標的細胞分離に適した第2固定相を備え、該第2固定相は、アフィニティークロマトグラフィーマトリックスによって定義され、該アフィニティークロマトグラフィーマトリックス上には親和性試薬が固定化されており、該親和性試薬は、該レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCに特異的に結合することができる結合部位Zを含む、本発明1062または1063の部品のキット。
[本発明1065]
第2固定相が、クロマトグラフィーカラムに含まれるか、または平面固定相である、本発明1064の部品のキット。
[本発明1066]
標的細胞を単離する方法であって、該標的細胞は、標的細胞表面上にレセプター分子を有し、該方法は、
該標的細胞を含むサンプルを提供する工程、
一価の結合部位Bおよび結合パートナーCを含むレセプター結合試薬を提供する工程であって、該レセプター結合試薬は、一価の抗体断片、免疫グロブリン様機能を有するタンパク質性結合分子、アプタマー、およびMHC分子の群から選択され、
該レセプター結合試薬に含まれる一価の結合部位Bは、標的細胞表面上のレセプター分子に特異的に結合することができ、該レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCは、親和性試薬の結合部位Zに可逆的に結合することができる、工程、および
該サンプルを好適な固定相でのクロマトグラフィーにかける工程であって、該固定相上には親和性試薬が固定化されており、該親和性試薬は、結合部位Zを含み、該結合部位Zは、該レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCと可逆的結合を形成し、かつ該レセプター結合試薬の結合部位Bは、標的細胞表面上のレセプター分子に結合し、それにより、該固定相上に該標的細胞が可逆的に固定化される、工程
を含む、方法。
[本発明1067]
一価の抗体断片が、Fab断片、Fv断片、または一本鎖Fv断片である、本発明1066の方法。
[本発明1068]
免疫グロブリン様機能を有するタンパク質性結合分子が、リポカリンファミリーのポリペプチドに基づくムテイン、グルボディ、アンキリン骨格に基づくタンパク質、結晶骨格に基づくタンパク質、アドネクチン、およびアビマーからなる群より選択される、本発明1066の方法。
[本発明1069]
固定相を使用するクロマトグラフィーを介して標的細胞を単離するためのレセプター結合試薬および/または親和性試薬の使用であって、該標的細胞は、標的細胞表面上にレセプター分子を有し、
該レセプター結合試薬は、一価の抗体断片、免疫グロブリン様機能を有するタンパク質性結合分子、アプタマー、およびMHC分子の群から選択され、
該レセプター結合試薬は、結合部位Bおよび結合パートナーCを含み、該レセプター結合試薬の結合部位は、該標的細胞のレセプター分子に特異的に結合することができ、
該レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCは、該親和性試薬の結合部位Zに可逆的に結合することができる、使用。
[本発明1070]
標的細胞を精製するための装置であって、本発明1058〜1061において定義されたクロマトグラフィー用の第1および第2固定相の少なくとも一つの配置を備える、装置。
[本発明1071]
直列で流体連結されている第1および第2固定相の複数の配置をさらに備える、本発明1070の装置。
[本発明1072]
クロマトグラフィー用の第1および第2固定相の第1配置の第1固定相に流体連結されているサンプル入口を備える、本発明1071の装置。
[本発明1073]
精製された標的細胞用のサンプル出口を備え、該サンプル出口は、クロマトグラフィー用の第1および第2固定相の少なくとも一つの配置の最後の配置の第2固定相に流体連結されている、本発明1072の装置。
[本発明1074]
クロマトグラフィー用の第1および第2固定相の配置の第1固定相の少なくとも一つに流体連結されている競合試薬容器を備える、本発明1070〜1073のいずれかの装置。
[本発明1075]
標的細胞表面上の所望のレセプター分子の組換え発現についての標的細胞のスクリーニング方法であって、ここで該所望のレセプター分子は、標的細胞表面上に発現され、該方法は、
サンプルを提供する工程であって、該サンプルは、該所望の標的レセプターの組換え発現の可能性がある標的細胞を含む、工程、
結合部位Bおよび結合パートナーCを含むレセプター結合試薬を提供する工程であって、
該レセプター結合試薬に含まれる結合部位Bは、標的細胞表面上の該所望のレセプター分子に特異的に結合することができ、該レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCは、親和性試薬の結合部位Zに可逆的に結合することができる、工程、および
該サンプルを好適な固定相でのクロマトグラフィーにかける工程であって、該固定相上には親和性試薬が固定化されており、
該親和性試薬は、結合部位Zを含み、該結合部位Zは、該レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCと可逆的結合を形成し、かつ該レセプター結合試薬の結合部位Bは、標的細胞表面上のレセプター分子に結合し、それにより、固定相上に該標的細胞が可逆的に固定化される、工程
を含む、方法。
[本発明1076]
所望のレセプター分子が、標的細胞にとって内因性または外来性である、本発明1075のスクリーニング方法。
[本発明1077]
標的細胞が、所望のレセプター分子をコードする核酸でトランスフェクトされている、本発明1075または1076のスクリーニング方法。

Claims

標的細胞を単離する方法であって、該標的細胞は、標的細胞表面上にレセプター分子を有し、該方法は、
該標的細胞を含むサンプルを提供する工程、
一価の結合部位Bおよび結合パートナーCを含むレセプター結合試薬を提供する工程であって、該レセプター結合試薬は、一価の抗体断片、免疫グロブリン様機能を有するタンパク質性結合分子、アプタマー、およびMHC分子の群から選択され、
該レセプター結合試薬に含まれる一価の結合部位Bは、標的細胞表面上のレセプター分子に特異的に結合することができ、該レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCは、親和性試薬の結合部位Zに可逆的に結合することができる、工程、および
該サンプルを好適な固定相でのクロマトグラフィーにかける工程であって、該固定相は、非磁性材料または非磁化性材料であり、該固定相上には親和性試薬が固定化されており、該親和性試薬は、結合部位Zを含み、該結合部位Zは、該レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCと可逆的結合を形成し、かつ該レセプター結合試薬の結合部位Bは、標的細胞表面上のレセプター分子に結合し、それにより、該固定相上に該標的細胞が可逆的に固定化される、工程
を含む、方法。
親和性試薬が、レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCに可逆的に結合することができる2つ以上の結合部位Zを含む、請求項1記載の方法。
固定相上に競合試薬をロードする工程をさらに含み、競合作用物質は、レセプター結合試薬のパートナーCと親和性試薬の結合部位Zとの結合を破壊することができ、それにより、レセプター結合作用物質に取って代わる、請求項1記載の方法。
競合試薬が、親和性試薬の結合部位Zに競合的に結合することができる、請求項3記載の方法。
標的細胞を含むサンプルを固定相に適用する前に、レセプター結合試薬が、固定相上に固定化される、請求項1〜4のいずれか一項記載の方法。
サンプルが、標的細胞とさらなる細胞との混合物を含み、該さらなる細胞は、その細胞表面上に前記レセプター分子を欠き、かつ、該方法は、該さらなる細胞から該標的細胞を分離する工程を含む、請求項1〜5のいずれか一項記載の方法。
レセプター結合試薬とレセプター分子との低親和性の相互作用が、約10^-3〜約10^-7Mの範囲内のK_Dを有する、請求項1〜6のいずれか一項記載の方法。
標的細胞を単離する方法であって、該標的細胞は、標的細胞表面上にレセプター分子を有し、該方法は、
サンプルを提供する工程であって、該サンプルは、標的細胞およびレセプター結合試薬を含み、
該レセプター結合試薬は、結合部位Bおよび結合パートナーCを含み、該レセプター結合試薬に含まれる結合部位Bは、該レセプター分子に特異的に結合することができる、工程、および
該サンプルを好適な固定相でのクロマトグラフィーにかける工程であって、該固定相は、ゲル濾過マトリックスおよび/またはアフィニティークロマトグラフィーマトリックスであり、該ゲル濾過および/またはアフィニティークロマトグラフィーマトリックスは、親和性試薬を含み、該親和性試薬は、該レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCに特異的に結合する結合部位Zを含み、それにより、該標的細胞が単離される、工程
を含み、かつ
該サンプルは、競合試薬をさらに含み、該競合試薬は、該レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCに特異的に結合する該親和性試薬の結合部位Zに結合し、それにより、該固定相上に該競合試薬が固定化される、方法。
クロマトグラフィーが、カラムクロマトグラフィーまたは平面クロマトグラフィーである、請求項1〜8のいずれか一項記載の方法。
サンプルをクロマトグラフィーにかける工程が、レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCが、それに特異的に結合する固定相の親和性試薬の結合部位Zと複合体を形成することを可能にし、それにより、該レセプター結合試薬が該固定相上に固定化されることを含む、請求項8記載の方法。
レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCが、親和性試薬の結合部位Zに特異的に結合することができ、該親和性試薬は、該レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCに特異的に結合することができる2つ以上の結合部位Zを含む、請求項8または10記載の方法。
アフィニティークロマトグラフィーマトリックスおよび/またはゲル濾過マトリックス上に親和性試薬が共有結合的に固定化されている、請求項10または11記載の方法。
サンプルを形成する工程をさらに含み、
該サンプルを形成する工程は、
標的細胞を含む供給源サンプルを提供すること、および
該供給源サンプルにレセプター結合試薬を加えること
を含む、請求項1〜4のいずれか一項記載の方法。
供給源サンプルが、複数の標的細胞を含むと予想され、かつ該供給源サンプルは、複数のレセプター結合試薬と接触され、予想される数の標的細胞に対して過剰量のレセプター結合試薬が提供される、請求項13記載の方法。
サンプルが、流体であるかまたは流体を含む、請求項1〜14のいずれか一項記載の方法。
サンプルが、体液を含む、請求項1〜15のいずれか一項記載の方法。
体液が、血液または血液成分である、請求項16記載の方法。
サンプルをクロマトグラフィーにかける工程が、該サンプルをクロマトグラフィーカラムの固定相に通させることおよび該固定相を流体移動相で洗浄することを含み、該流体移動相は、レセプター結合試薬を少なくとも本質的に欠く、請求項1〜17のいずれか一項記載の方法。
サンプルをクロマトグラフィーにかける工程が、クロマトグラフィーマトリックスから標的細胞を溶出することを含む、請求項1〜18のいずれか一項記載の方法。
標的細胞を回収する工程をさらに含む、請求項19記載の方法。
サンプルから標的細胞をクロマトグラフィー的に単離する方法であって、該標的細胞は、標的細胞表面上にレセプター分子を有し、該方法は、
該標的細胞を含むサンプルを提供する工程、
結合部位Bおよび結合パートナーCを含むレセプター結合試薬を提供する工程であって、
該レセプター結合試薬に含まれる結合部位Bは、標的細胞表面上のレセプター分子に特異的に結合することができ、
該レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCは、親和性試薬の結合部位Zに可逆的に結合することができる、工程、および
該サンプルを好適な固定相でのクロマトグラフィーにかける工程であって、該固定相上には親和性試薬が固定化されており、
該親和性試薬は、結合部位Zを含み、該結合部位Zは、該レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCと可逆的結合を形成し、かつ該レセプター結合試薬の結合部位Bは、標的細胞表面上のレセプター分子に結合し、それにより、該標的細胞が該固定相上に可逆的に固定化される、工程、
該親和性試薬の結合部位Zに特異的に結合する結合部位を含む競合試薬を提供する工程;
該競合試薬を第1固定相上にロードする工程であって、
それにより、（複数の）レセプター結合試薬と該レセプター分子と該親和性試薬との間に形成される非共有結合的な可逆的複合体が破壊される、工程;
該第1固定相の溶出液から溶出サンプルを回収する工程であって、該溶出サンプルは、該標的細胞を含む、工程;
該溶出サンプルを好適な第2固定相でのクロマトグラフィーにかける工程であって、該第2固定相は、ゲル濾過マトリックスおよび/またはアフィニティークロマトグラフィーマトリックスであり、該ゲル濾過および/またはアフィニティークロマトグラフィーマトリックスは、該レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCに特異的に結合する結合部位Zを有する親和性試薬を含む、工程、ならびに
該溶出サンプルを第2クロマトグラフィーカラムに通す工程であって、該競合試薬が該親和性試薬の結合部位Zと複合体を形成することを可能にすることにより、該競合試薬が第2クロマトグラフィーカラムの固定相上に固定化されることを含む、工程
を含む、方法。
第2固定相であるアフィニティークロマトグラフィーマトリックスおよび/またはゲル濾過マトリックス上に親和性試薬が固定化されている、請求項21記載の方法。
第1および第2固定相の各々が、カラムに含まれているか、または平面固定相である、請求項21〜22のいずれか一項記載の方法。
レセプター結合試薬の結合部位Bとレセプター分子との結合が、約10^-2M〜約10^-10Mの範囲内の解離定数（K_D）を有する、請求項21〜23のいずれか一項記載の方法。
結合部位Bを介したレセプター結合試薬とレセプター分子との結合に対する解離定数（K_D）が、低親和性であるか、または結合部位Bを介したレセプター結合試薬とレセプター分子との結合に対する解離速度定数（koff）が、約3×10^-5sec^-1以上の値を有する、請求項24記載の方法。
レセプター結合試薬の結合パートナーCと親和性試薬の結合部位Zとの可逆的結合が、約10^-2〜約10^-13Mの範囲内の解離定数（K_D）を有する、請求項1〜25のいずれか一項記載の方法。
固定相が、非磁性材料または非磁化性材料である、請求項1〜26のいずれか一項記載の方法。
固定相が、セルロース膜、プラスチック膜、多糖ゲル、ポリアクリルアミドゲル、アガロースゲル、多糖グラフトシリカ、ポリビニルピロリドングラフトシリカ、ポリエチレンオキシドグラフトシリカ、ポリ（2-ヒドロキシエチルアスパルトアミド）シリカ、ポリ（N-イソプロピルアクリルアミド）グラフトシリカ、スチレン-ジビニルベンゼンゲル、アクリレートまたはアクリルアミドとジオールとのコポリマー、多糖とN,N'-メチレンビスアクリルアミドとのコポリマー、およびそれらのいずれか2つ以上の組み合わせのうちの一つを含むかまたはそれらのうちの一つからなる、請求項27記載の方法。
アフィニティークロマトグラフィーマトリックスおよび/またはゲル濾過マトリックスが、モノリシックなマトリックス、粒状のマトリックス、または平面のマトリックスを含むかまたはそれらのいずれかからなる、請求項1〜28のいずれか一項記載の方法。
粒状のマトリックスが、約5μm〜約200μmまたは約5μm〜600μmまたは約5μm〜1500μmの平均粒径を有する、請求項29記載の方法。
アフィニティークロマトグラフィーマトリックスおよび/またはゲル濾過マトリックスが、0〜約500nmの平均ポアサイズを有する、請求項1〜30のいずれか一項記載の方法。
レセプター結合試薬が、免疫グロブリン、免疫グロブリンの機能的断片、免疫グロブリン様機能を有するタンパク質性結合分子、アプタマー、およびMHC分子の群から選択される、請求項21記載の方法。
レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCが、ビオチン、ビオチンアナログ、ストレプトアビジン結合ペプチド、およびアビジン結合ペプチドのうちの一つを含み、かつ親和性試薬が、ストレプトアビジン、ストレプトアビジンムテイン、アビジン、アビジンムテイン、またはそれらの混合物を含む、請求項1〜32のいずれか一項記載の方法。
標的細胞が、哺乳動物細胞である、請求項1〜33のいずれか一項記載の方法。
標的細胞が、細胞核を有する細胞である、請求項1〜34のいずれか一項記載の方法。
標的細胞が、白血球または幹細胞である、請求項35記載の方法。
白血球が、リンパ球である、請求項36記載の方法。
クロマトグラフィー用の第1および第2固定相の配置であって、該第1固定相は、細胞分離に適しており、該固定相は、非磁性材料または非磁化性材料であり、かつ該第1固定相は、アフィニティークロマトグラフィーマトリックスによって定義され、該アフィニティークロマトグラフィーマトリックス上には親和性試薬が固定化されており、
該親和性試薬は、レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCに可逆的に結合することができる少なくとも一つの結合部位Zを有し、
該第2固定相は、細胞分離に適しており、該第2固定相は、ゲル濾過マトリックスおよびアフィニティークロマトグラフィーマトリックスであり、該アフィニティークロマトグラフィーマトリックスまたは該ゲル濾過およびアフィニティークロマトグラフィーマトリックスは、該レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCに特異的に結合する結合部位Zを有する親和性試薬を含む、配置。
少なくとも、第1固定相のアフィニティークロマトグラフィーマトリックス上に固定化された親和性試薬が、レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCに可逆的に結合することができる2つ以上の結合部位Zを含む、請求項38記載の配置。
第1および第2固定相の各々が、クロマトグラフィーカラムに含まれるか、または平面固定相である、請求項38または39記載の配置。
複数の第1および第2固定相を含む、請求項38〜40のいずれか一項記載の配置。
標的細胞を単離するための部品のキットであって、該標的細胞は、標的細胞表面上にレセプター分子を有し、該キットは、
（a）一価の結合部位Bおよび結合パートナーCを含むレセプター結合試薬であって、該レセプター結合試薬は、一価の抗体断片、免疫グロブリン様機能を有するタンパク質性結合分子、アプタマー、およびMHC分子の群から選択され、該レセプター結合試薬に含まれる結合部位Bは、標的細胞表面のレセプター分子に特異的に結合することができ、かつ該レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCは、多量体化試薬上の結合部位Zに可逆的に結合することができる、レセプター結合試薬;および
（b）細胞分離に適した固定相であって、該固定相は、ゲル濾過マトリックスおよび/またはアフィニティークロマトグラフィーマトリックスによって定義され、該アフィニティークロマトグラフィーマトリックスまたは該ゲル濾過およびアフィニティークロマトグラフィーマトリックスは、該レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCに可逆的に結合することができる結合部位Zを有する親和性試薬を含む、固定相
を備える、キット。
固定相が、クロマトグラフィーカラムに含まれるか、または平面固定相である、請求項42記載の部品のキット。
サンプル中の他の成分からの細胞分離/標的細胞分離に適した第2固定相を備え、該第2固定相は、アフィニティークロマトグラフィーマトリックスによって定義され、該アフィニティークロマトグラフィーマトリックス上には親和性試薬が固定化されており、該親和性試薬は、該レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCに特異的に結合することができる結合部位Zを含む、請求項42または43記載の部品のキット。
第2固定相が、クロマトグラフィーカラムに含まれるか、または平面固定相である、請求項44記載の部品のキット。
一価の抗体断片が、Fab断片、Fv断片、または一本鎖Fv断片である、請求項1記載の方法。
免疫グロブリン様機能を有するタンパク質性結合分子が、リポカリンファミリーのポリペプチドに基づくムテイン、グルボディ、アンキリン骨格に基づくタンパク質、結晶骨格に基づくタンパク質、アドネクチン、およびアビマーからなる群より選択される、請求項1記載の方法。
固定相を使用するクロマトグラフィーを介して標的細胞を単離するためのレセプター結合試薬および/または親和性試薬の使用であって、該固定相は、非磁性材料または非磁化性材料であり、該標的細胞は、標的細胞表面上にレセプター分子を有し、
該レセプター結合試薬は、一価の抗体断片、免疫グロブリン様機能を有するタンパク質性結合分子、アプタマー、およびMHC分子の群から選択され、
該レセプター結合試薬は、結合部位Bおよび結合パートナーCを含み、該レセプター結合試薬の結合部位は、該標的細胞のレセプター分子に特異的に結合することができ、
該レセプター結合試薬に含まれる結合パートナーCは、該親和性試薬の結合部位Zに可逆的に結合することができる、使用。
標的細胞を精製するための装置であって、請求項38〜41において定義されたクロマトグラフィー用の第1および第2固定相の少なくとも一つの配置を備える、装置。
直列で流体連結されている第1および第2固定相の複数の配置をさらに備える、請求項49記載の装置。
クロマトグラフィー用の第1および第2固定相の第1配置の第1固定相に流体連結されているサンプル入口を備える、請求項50記載の装置。
精製された標的細胞用のサンプル出口を備え、該サンプル出口は、クロマトグラフィー用の第1および第2固定相の少なくとも一つの配置の最後の第2固定相に流体連結されている、請求項51記載の装置。
クロマトグラフィー用の第1および第2固定相の配置の第1固定相の少なくとも一つに流体連結されている競合試薬容器を備える、請求項49〜52のいずれか一項記載の装置。