JP2015143689A5 - 免疫基盤ボツリヌス毒素血清ａ型活性アッセイ - Google Patents

Description

本発明は、免疫基盤ボツリヌス毒素血清Ａ型活性アッセイに関する。

本発明により、免疫基盤ボツリヌス毒素血清Ａ型活性アッセイが提供され得る。

Claims (5)

1. ａ．哺乳動物から得られた被験試料に既知の量のＢｏＮＴ／Ａを添加すること、ここで該哺乳動物は、抗ＢｏＮＴ／Ａ活性中和抗体の存在または不在に関して試験されており、該被験試料は、該哺乳動物由来の血液試料または血清試料である；
   ｂ．ＳＮＡＰ−２５を発現する確立された細胞株からの細胞を被験試料に接触させること、ここで確立された細胞株からの細胞はＢｏＮＴ／Ａ中毒に感受性が高い；
   ｃ．該細胞から配列番号：３８のカルボキシル末端グルタミンを含むＳＮＡＰ−２５切断生成物を単離すること；
   ｄ．ＳＮＡＰ−２５切断生成物を固相支持体に連結された抗ＳＮＡＰ−２５抗体に接触させること、
   ここで抗ＳＮＡＰ−２５抗体は配列番号：３８のカルボキシル末端グルタミンを含んでなるエピトープに結合し、抗ＳＮＡＰ−２５抗体はインタクトなＳＮＡＰ−２５に関して１×１０^１Ｍ^−１ｓ^−１未満の会合速度定数を有し；そして抗ＳＮＡＰ−２５抗体は該エピトープに関して０.４５０ｎＭ未満の平衡解離定数を有する；
   ｅ．抗ＳＮＡＰ−２５抗体および配列番号：３８のカルボキシル末端グルタミンを含むＳＮＡＰ−２５切断生成物を含んでなる抗体−抗原複合体の存在を検出すること；
   ｆ．被験試料の代わりに陰性対照試料で工程ａ−ｅを行うこと、ここで陰性対照試料は、既知の量のＢｏＮＴ／Ａ、および抗ＢｏＮＴ／Ａ活性中和抗体を含有しないことが解っている血清を含んでなる；ならびに
   ｇ．工程ｅで検出された抗体−抗原複合体の量を陰性対照試料において検出された抗体−抗原複合体の量と比較すること、
   ここで陰性対照試料に比べての工程ｅにおける抗体−抗原複合体の検出の減少は被験試料における抗ＢｏＮＴ／Ａ活性中和抗体の存在を示す；
   の工程を含んでなる、哺乳動物における抗ＢｏＮＴ／Ａ活性中和抗体を検出する方法。
2. 既知の量のＢｏＮＴ／Ａが１０ｐＭである、請求項１記載の方法。
3. 抗体−抗原複合体の存在の検出がサンドイッチイムノアッセイの使用により行われる請求項１または２に記載の方法。
4. サンドイッチイムノアッセイが電気化学発光基質または化学発光基質を含む、請求項３記載の方法。
5. (i)該抗ＳＮＡＰ−２５抗体が、配列番号：９５、９９および１０１の少なくとも１つのアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む重鎖可変領域、ならびに配列番号：１０３、１０８および１１３の少なくとも１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む、または
   (ii)該抗ＳＮＡＰ−２５抗体が、配列番号：９３、９６および１００の少なくとも１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む重鎖可変領域、ならびに配列番号：１０５、１１０および１１５の少なくとも１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む、
   請求項１〜４いずれかに記載の方法。