JP2014503068A - 分子生物学用の試料を採取して移動させるための装置を実現するためのプロセス - Google Patents
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Abstract
分子生物学用の試料を採取して移動させるための装置（１）を実現するためのプロセスであって、前記装置が、第１の部分（２ａ）を少なくとも有する支持本体（２）と、分子ある量の生物学用の試料を採取部（３）で採取することになるフロック加工された前記採取部（３）を構成するように、フロック加工によって前記支持本体（２）の前記第１の部分（２ａ）に付着されて配置された複数の繊維（６）を少なくとも有し、前記プロセスが、界面活性剤を用いて前記複数の繊維（６）を前処理するステップを少なくとも備え、界面活性剤を用いて前記複数の繊維（６）を前処理する前記ステップが、フロック加工によって前記繊維を前記支持本体（２）に付けた後及び／又はフロック加工によって前記繊維（６）を前記本体（２）に付ける前に実施され、及び／又は前記界面活性剤が前記繊維（６）の製造の間に前記繊維（６）に添加される、プロセス。
【選択図】図１
【選択図】図１
Description
本発明は分子生物学用の試料を採取して移動させるための装置を実現するためのプロセスに関する。
本発明はまた、上記プロセスを使用して実現される分子学生物学用の試料を採取して移動させるための装置、及び該装置を使用することにより分子生物学用の試料を採取して移動させるための方法に関する。
本発明は、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ並びにＤＮＡ及びＲＮＡを含有する細胞などの分子生物学用の試料を採取して移動させるのに適用可能である。
本発明は、他の種類の検体又は生物試料又は生物起源の試料を採取して移動させるのにさらに有用に適用できる。
従来技術には、例えば分析的又は診断的種類の研究室での検査に後で供される、有機又は生物物質などの検体を採取して移動させるための種々の種類の装置が含まれる。従来技術は、細長い支持本体と、回収される試料を内部に吸収することになる採取部を構成（ｄｅｆｉｎｅ）するように本体の端部周囲に巻かれる細長い繊維（一般に綿）と、を備える従来の採取装置の使用を特に記載している。
これらの装置は様々な欠点を示し、その欠点の中には、生物試料が採取部内部に保持される傾向があり、それ故、必要なときに採取部から抽出することが難しいという事実がある。それ故、最初に入手可能な試料から取り戻され得る試料の量はしばしば非常に制限され、その結果、多数の欠点が生じる。ある場合には、採取される物質の実際量が最初の段階で非常に制限されることがあるため、最初に採取する物質をできるだけ最大の割合で採取できることが根本的に重要である。この欠点を取り除くために、フロックスワブ（ｆｌｏｃｋｅｄ ｓｗａｂ）として従来から知られており、細長い支持本体と、検体又は生物試料のための採取部を構成（ｄｅｆｉｎｅ）するように支持本体の端部における複数のフロック加工された繊維と、を備える装置が提供されている。繊維は磁場中でフロック加工されること（ｆｌｏｃｋｉｎｇ）により本体上に集まり（ｆｌｏｃｋｅｄ）、適切な膠（ｇｌｕｅ）を用いて、又は接着剤を使用しなくても支持本体に接着できる。繊維は、採取、輸送及び採取した試料の選択的リリース（ｒｅｌｅａｓｅ）のための最適形態を構成（ｄｅｆｉｎｅ）するように、支持本体に対して規則的に且つ実質的に垂直に配置できる。この種の装置は、例えば本出願人が所有している特許であるＥＰ１６０８２６８Ｂ１から知られる。支持本体に平行した繊維の規則的な配置に起因して、これらの装置は上記の従来の装置と少なくとも同等である量の検体又は試料を吸収できるが、容易に回収された元の試料の８０％まで又はさらにそれ以上で、非常に多量の検体又は試料を採取部から適切な時に取り外すこと（ｒｅｌｅａｓｅ）ができる大きな利点を示す。上記のフロック加工された装置は、ＤＮＡ、ＲＮＡ及びそれらの試料を含有する細胞などの分子生物学用の試料を採取して移動させるのにも有益に使用できるが、重合又は増幅などの分子生物学操作を実施するために効果的に使用できるＤＮＡ及びＲＮＡの装置によるリリースの量は、試料に対して実施されるプロセスの実施の結果として起こる全ての困難性により、時々満足できるものではなく、又は不十分であることを出願人は見出した。
本発明の主な目的は、従来技術において遭遇する問題の１つ又は複数を解決することである。本発明の目的は、公知の装置と比較して、分子生物学操作に使用可能なより多量の分子生物学用の試料を採取装置から取り出すことができる、分子生物学用の試料を採取して移動させるための方法及び装置を提供することである。本発明のさらなる目的は、装置で最初に採取したＤＮＡ又はＲＮＡを、できる限り最大の割合で、全てのさらなる使用のための最適な形態及び条件で、採取装置から取り出すことができる、分子生物学用の試料を採取して移動させるための方法及び装置を提供することである。本発明のさらなる目的は、装置で採取したＤＮＡ又はＲＮＡ試料の完全性を効果的に保存できる、分子生物学用の試料を採取して移動させるための方法及び装置を提供することである。本発明のさらなる目的は、装置によりリリースされたＤＮＡ又はＲＮＡのポリメラーゼの重合反応又は連鎖反応を実施に必要なサイクル数を減少できる、分子生物学用の試料を採取して移動させるための方法及び装置を提供することである。本発明のさらなる目的は、簡単に且つ経済的に実現される、分子生物学用の試料を採取して移動させるための方法及び装置を提供することである。以下の説明からより十分に明らかになる、これらの目的及びそれ以外の他の目的は、単独若しくは組み合わせて考慮される添付の請求項の１つ若しくは複数に記載されているものに係る、又は以下の本明細書に記載されているさらなる態様の１つ若しくは複数を任意に組み合わせた、分子生物学用の試料を採取して移動させるための方法及び装置、並びに分子生物学用の試料を採取して移動させるための装置を実現するためのプロセスにより実質的に達成される。さらなる態様において、本発明はさらに、添付の請求項のいずれか一つ、又は本明細書に示されるさらなる態様に係るプロセスであって、少なくとも第１の部分を有する装置の支持本体を製造するステップと、フロック加工によって、第１の部分に複数の繊維を付ける（ａｐｐｌｙ）ステップと、を少なくともさらに備える、プロセスに関する。
さらなる態様において、本発明はさらに、添付のプロセスの請求項のいずれか一つ、又は本明細書に示されるさらなる態様に係るプロセスであって、繊維を前処理するステップの後に繊維を乾燥するステップをさらに備える、プロセスに関する。さらなる態様において、本発明はさらに、添付のプロセスの請求項のいずれか一つ、又は本明細書に示されるさらなる態様に係るプロセスであって、界面活性剤が、カチオン性又は塩化ベンザルコニウム（ＢＡＣ又はアルキル−ジメチル−ベンジルアンモニウムクロリド又はＡＤＢＡＣ）であり、繊維がナイロンから作製される、プロセスに関する。さらなる態様において、本発明はさらに、添付の請求項のいずれか１つに係る分子生物学用の試料を採取して移動させるための装置を実現するためのプロセスにより実現される分子生物学用の試料を採取して移動させるための装置に関する。さらなる態様において、本発明はさらに、添付の方法の請求項のいずれか一つ、又は本明細書に示されるさらなる態様に係る方法であって、溶液を事前に用意する段階（ｔｈｅ ｓｔａｇｅ ｏｆ ｐｒｅｄｉｓｐｏｓｉｎｇ ｔｈｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）が、所定量の界面活性剤（好ましくはカチオン性）を事前に用意するステップ、所定量の界面活性剤を水に溶解して溶液を得るステップ、及び／又は溶液を実質的に均一にするステップを有する、方法に関する。さらなる態様において、本発明はさらに、添付の方法の請求項のいずれか一つ、又は本明細書に示されるさらなる態様に係る方法であって、試料が供された採取部を少なくとも乾燥するステップをさらに備え、及び／又は乾燥するステップの間に若しくは乾燥するステップとは独立して、採取部を密封容器中に挿入するステップをさらに備える、方法に関する。さらなる態様において、本発明はさらに、添付の方法の請求項のいずれか一つ、又は本明細書に示されるさらなる態様に係る方法であって、少なくとも８０％、又は少なくとも８６％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９５％の採取された試料を、例えば液状媒質中での希釈、緩衝材若しくは緩衝溶液中での懸濁によって、採取部からリリースするステップをさらに備える、方法に関する。本発明のさらなる好ましい態様において、本発明はさらに、前処理されていない装置の繊維から得られる分子生物学操作のためにリリース可能で使用可能な量と比較して、採取装置でリリース可能であって分子生物学操作に使用できるＤＮＡ又はＲＮＡの量を増加させるために、分子生物学用の試料を採取して移動させるための装置の支持本体にフロック加工で付された又は付されるべき繊維を前処理するための界面活性剤又はカチオン性界面活性剤の使用に関する。本発明のさらなる好ましい態様において、本発明はさらに、採取して移動させる装置によるリリース可能な量と比較して、分子生物学操作に使用可能なＤＮＡ又はＲＮＡの割合を増加させるために、分子生物学用の試料を採取して移動させる装置の支持本体にフロック加工で付された、又は付されるべきナイロン繊維を前処理するためのカチオン性界面活性剤（特に塩化ベンザルコニウム）の使用に関する。さらなる態様において、本発明はさらに、分子生物学用の試料を採取して移動させる装置の支持本体にフロック加工で付される繊維を製造するためのカチオン性界面活性剤の使用であって、カチオン性界面活性剤が、繊維の製造の間に繊維の実現に伴う材料に添加される、使用に関する。ここで、図面の図を用いて、本発明の１つ若しくは複数の好ましい実施形態の詳細な説明を非限定的な例として与える。
これから、本発明の１つ又は複数の実施形態に係る、分子生物学用の試料を採取して移動する装置１を以下に説明する。本文において、「分子生物学」という用語は、核酸（ＤＮＡ及びＲＮＡ）の検出、分析、操作、増幅（ＰＣＲ）及び複製（クローニング）を可能にする技術を意味することを意図する。
「分子生物学操作に使用可能なＤＮＡ又はＲＮＡ」という表現は、ＤＮＡ又はＲＮＡが完全であり、損傷しておらず、又は使用できない状態ではなく、いずれの場合でも、種々の分子生物学操作、例えば重合反応を実施するのに十分に良好な状態であることを意味することを意図する。
添付の図面の図を参照すると、１は、分子生物学用の試料を採取して移動させるための装置の全体を示す。装置１は、細長い構造及び／又は実質的に棒状の構造を有することができる支持本体２を備える。支持本体２は、その長手方向の延びに沿った可変の部分を含む、任意の部分を有してもよい。支持本体には、試料のための採取部３を構成（ｄｅｆｉｎｅ）する第１の部分２ａ（例えば端部部分）、実質的に棒形状である中央の第２の部分２ｂ、及び端部の第３の部分２ｃが設けられ、その端部の第３の部分２ｃにおいて、支持本体を操作者が手で把持でき、又は支持本体を試験管などのためのキャップ５などのさらなる把持要素４に接続できる。
試料のための採取部３は綿球（ｓｗａｂ）のような形態をとってもよい。採取部３はフロック加工され、本体の第１の端部２ａ上で複数の繊維６をフロック加工することにより実現される。第１の端部上でフロック加工された繊維６は親水性又は非親水性材料から作製されてもよいが、採取部３は、いずれの場合でも、繊維６の性質及び支持本体２上の繊維６の分布に起因する毛管効果により親水性である。フロック加工された繊維６は好ましくはナイロンから作製される。言い換えると、採取部３は、試料に対して実質的に吸着性又は非吸着性材料から作製される繊維６の連続層を示すことができるが、吸収・膨潤（ｉｍｂｉｂｉｔｉｏｎ）により所定量の試料（例えば液体試料）を保持できる規則的な複数の毛管間隙９の形態をとり、例えば特別なリリース面で採取部３を擦ることにより適切な時にその毛管間隙９から試料が定量的にリリースされうる。この種類のフロック加工されたスワブ（ｆｌｏｃｋｅｄ ｓｗａｂ）の例は、本出願人に属するＥＰ１．６０８．２６８に例示されており、フロックスワブの構造に関連するその内容は本願の説明に参照により組み込まれる。上記の特許に記載されているように、生成物のフロック加工による堆積により、採取装置１の関連端部上において、規則的に配置された複数の繊維６の連続的で均質な層は、その繊維６が支持本体２の第１の部分２ａのあらゆる点において実質的に垂直であり、その繊維６の各々は隣接する繊維６に実質的に平行である。対応する規則的な複数の毛管隙間９は、繊維６の間に構成（ｄｅｆｉｎｅ）され、所定量の試料は、場合により毛管効果に起因する吸収により、毛管隙間９に採取されて保持される。その後、フロック加工された層は、例えば特別な面で擦ることによって、又は適切な希釈剤中に試料を希釈することによって、採取した試料を効果的にリリースできる。フロック加工された採取部３は、適切な量の試料を採取するように、又は例えば５〜１０００マイクロリットルの間、１０マイクロリットル〜５００マイクロリットルの間又は５０〜２００マイクロリットルの間、又は８０〜１２０マイクロリットルの間を含む量の試料を採取するように、構成され、寸法決めされてもよい。繊維６は、実質的に規則的な方向で、及び採取部３上に実質的に連続的な層を形成するように、支持本体２上に配置されてもよく、並びに／又、繊維６は、毛管作用により液体試料を吸着することになる複数の毛管間隙９を構成（ｄｅｆｉｎｅ）するように採取部３上に配置されてもよい。繊維６は、１〜１０デシテックス（Ｄｔｅｘ）の間、若しくは好ましくは１．７〜３．３デシテックスの間を含む番手（ｙａｒｎ ｃｏｕｎｔ）を示してもよく、及び／又は、繊維６は、０．６〜３ｍｍの間を含む長さを示してもよい。繊維６は、支持本体２の第１の部分２の表面上で、例えば１ｍｍ２当たり５０〜５００本の間の繊維又は１ｍｍ２当たり１００〜２００本の間の繊維を含む表面密度で、支持本体２の採取部３上にフロック加工で配置されてもよい。繊維の層は、支持本体２の表面上で、例えば１ｍｍ２当たり少なくとも０．５μｌ、又は１ｍｍ２当たり少なくとも０．６μｌ、又は１ｍｍ２当たり少なくとも０．７μｌ、又は１ｍｍ２当たり少なくとも０．７５μｌの吸収能を構成（ｄｅｆｉｎｅ）できる。繊維６は、実質的に親水性でない材料、若しくは試料を吸着しない材料、及び／又は実質的に親水性である材料若しくは試料を吸着する材料、及び／又はポリアミド、ナイロン、レーヨン、ポリエステル、炭素繊維、アルギン酸塩、天然繊維、若しくは引用した材料の混合物から選択される材料から作製されてもよい。繊維は好ましくはナイロンから作製される。支持本体２は、２ｃｍ〜２０ｃｍの間、若しくは３ｃｍ〜１８ｃｍの間、若しくは６ｃｍ〜１６ｃｍの間を含む長手方向の延び、及び／又は０．５ｍｍ〜５ｍｍの間、若しくは１ｍｍ〜３ｍｍの間、若しくは１．５〜２．５ｍｍの間を含む、支持本体２の中心軸に対して垂直である断面の厚さ若しくは直径を示してもよい。採取部３は、８ｃｍ〜０．５ｃｍの間若しくは５ｃｍ〜１ｃｍの間を含む長手方向の延び、及び／又は１０ｍｍ〜１ｍｍの間若しくは８ｍｍ〜２ｍｍの間若しくは５ｍｍ〜２，５ｍｍの間にある繊維６を含めた直径若しくは厚さを示してもよい。採取部３は、採取される試料の種類に適した又は採取収容部に適した任意の形状（例えば円形）を示してもよく、又は１つ若しくは複数のライブエッジ（ｌｉｖｅ ｅｄｇｅ）を有してもよい。例えば輸送用の容器７への採取部３の挿入が容易となるように、支持本体２には、第１の端部と第２の端部との間の中間位置での本体自体の選択的破壊を容易にすることになる中間の弱い部分が設けられてもよい。採取装置１は複数の支持本体２を備えてもよく、各々には、特定の収容部中に試料を採取するように、又は特定量の試料を採取するように、特別に構成された異なる構造又は形を有する採取部３が設けられてもよい。本発明において、試料の採取の使用前、及び例えば装置１の製造段階の間に、繊維６は界面活性剤を用いて前処理される。界面活性剤は、カチオン性、アニオン性、非イオン性又は両性であってもよい。本発明において、界面活性剤は好ましくはカチオン性である。本発明において、カチオン性界面活性剤（例えば特に塩化ベンザルコニウム）の使用により、驚くべきことに、特に顕著な方法で、上記の目的を達成することができる。本発明においてカチオン性界面活性剤（例えば特に塩化ベンザルコニウム）の使用により、特にナイロン繊維と併せた使用において驚くべきことに顕著な方法で、上記の目的を達成することができる。本発明において、カチオン性界面活性剤は、好ましくは塩化ベンザルコニウム（ＢＡＣ又はアルキル−ジメチル−塩化ベンジルアンモニウム又はＡＤＢＡＣ）である。カチオン性界面活性剤は、第四級アンモニア基を有する少なくとも１つの炭素原子鎖により構成される陽性部を有する塩、及び／又は第四級アンモニア塩であってもよく、又はアンモニア塩の混合物を含んでもよい。カチオン性界面活性剤は、アルキル基がオクチル（ｏｃｔｉｌｅ）（Ｃ８Ｈ１７−）からオクタデシル(ｏｃｔａｄｅｃｙｌ)（Ｃ１８Ｈ３７−）まで異なる、アルキル−ベンジル−ジメチルアンモニウムの塩化物の混合物であってもよい。代替の実施形態において、カチオン性界面活性剤は臭化セチルトリメチルアンモニウム（ＣＴＡＢ又は臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム）であってもよい。さらなる代替の実施形態において、カチオン性界面活性剤は、例えば塩化ベンゼトニウム、塩化セタルコニウム、臭化ラウルトリモニウム（ｌａｕｒｔｒｉｍｏｎｉｕｍ ｂｒｏｍｉｄｅ）、臭化ミリスチルトリメチルアンモニウム(ｍｙｒｉｓｔｙｌｔｒｉｍｅｔｈｌａｍｍｏｎｉｕｍ ｂｒｏｍｉｄｅ)、セトリミド、臭化セトリモニウム、塩化セチルピリジニウム又は塩化ステアラルコニウム(ｓｔｅａｒａｌｋｏｎｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ)であってもよい。採取装置１は、内部閉じ込め収容部１０及びアクセス開口１１を有する、試料の輸送のための容器７をさらに備えてもよい。容器７は生体物質又は生物起源の試料を輸送するための試験管であってもよい。採取装置１は、容器７を選択的に閉鎖するためにアクセス開口に着脱可能に取り付けることができる閉鎖キャップ５をさらに備えてもよい。採取装置１は、容器７又は別の有用な位置に入れられる、少なくとも１つの乾燥又は除湿要素（例えばシリカゲルを含有する袋）をさらに備えてもよい。容器７及び／又は閉鎖キャップ５及び／又は支持本体２は、プラスチック材料、例えばポリスチロール若しくはポリスチレン若しくはポリプロピレン、及び／又は採取される特別な試料と共に使用するのに適した材料若しくは生体物質若しくは生物起源の材料と共に使用するのに一般的に適した材料から作製されてもよい。容器７及び／又は閉鎖キャップ５及び／又は支持本体２は滅菌されてもよい。採取装置１は、試料の採取に使用する前に支持本体２及び／又は容器７及び閉鎖キャップ５を入れておくことができる密封されたパッケージング（公知の種類のものであるため図に例示せず）をさらに備えてもよい。支持本体２、パッキング、容器７及びキャップ５は滅菌されてもよい。本発明はさらに、上記の種類の分子生物学用の試料を採取して移動させるための装置１を実現するためのプロセスに関する。プロセスは、例えば、それ自体公知の種類であるので、より詳細には記載していない以下のステップ：例えばプラスチック材料の押出により支持本体２を実現するステップ、適切な膠を本体２の第１の部分２ａに付けるステップ、電磁場中でフロック加工によって繊維６を第１の部分２ａに付けるステップ、従来の種類の適切な炉において膠を順に乾燥させて、膠を少なくとも部分的に重合するステップを備えてもよい。本発明において、プロセスは、上記の種類のカチオン性界面活性剤を用いて複数の繊維６を前処理するステップをさらに備える。プロセスは、少なくとも繊維の前処理ステップの後に、例えば炉において繊維を乾燥するステップをさらに備えてもよい。フロック加工によって繊維を支持本体２に付けた後に、カチオン性界面活性剤を用いて複数の繊維６を前処理するステップを実施してもよく、その複数の繊維６を前処理するステップは、カチオン性界面活性剤を含有する溶液中に採取部を直接浸漬することによって行われてもよい。或いは、フロック加工によって繊維６を本体に付ける前に、上記のカチオン性界面活性剤を用いて複数の繊維６を前処理するステップを実施してもよく、それ故、繊維６をフロック加工の前に繊維６を処理する。さらなる代替において、繊維６の製造の間にカチオン性界面活性剤が繊維６に添加されてもよく、所定量のカチオン性界面活性剤を、繊維を構成する公知の種類の材料に添加する。プロセスは、溶液中に体積又は質量で０．１％〜１５％、又は０．２％〜１０％、又は０．５％〜５％、又は０．８％〜１．５％又は０．４％〜１，２％の割合、濃度値又は量の、界面活性剤（好ましくはカチオン性）を含む水性溶液を事前に用意するステップをさらに備えてもよい。例えば好ましい濃度は、１００ｍｌの溶液当たり０．４グラム〜１００ｍｌの溶液当たり１，２ｇの塩化ベンザルコニウムである。同様の好ましい濃度を他のカチオン性界面活性剤に適用してもよい。溶液を事前に用意するステップは、所定量のカチオン性界面活性剤を事前に用意するステップ、所定量のカチオン性界面活性剤を水若しくは水性溶液に溶解して溶液を得るステップ、及び／又は溶液を実質的に均質にするステップを有してもよい。カチオン性界面活性剤を用いて複数の繊維６を処理するステップを、溶液中での繊維の膨潤により実施してもよい。フロック加工によって繊維を本体の採取部に付けた後又はフロック加工によって繊維を本体の採取部に付ける前に、溶液中での繊維６の膨潤を実施してもよい。本発明はさらに、上記の種類の装置１によって分子生物学用の試料を採取して移動させるための方法に関する。方法は、採取装置１の少なくとも１つのフロック加工された採取部３に分子生物学用の試料を採取するステップであって、上記の種類のカチオン性界面活性剤を用いて複数の繊維６が前処理される、ステップを少なくとも備える。方法は、ＤＮＡ若しくはＲＮＡの試料、及び／又はＤＮＡ若しくはＲＮＡの試料を含む細胞の採取及び移動に使用されてもよい。方法はまた、所定の期間、試料を採取部３に保存するステップを備えてもよい。方法はまた、採取された試料が備わっている、少なくとも採取部３を脱水又は乾燥するステップを備えてもよい。乾燥するステップを、例えば、強制換気オーブン中で乾燥すること、又は試料の処理に適した公知の種類の別の方法により実施してもよい。
方法は、真空容器（公知の種類のものであるため図に例示せず）中に採取部３を挿入するステップ、及び真空容器中に実質的に真空を生成するステップをさらに備えてもよい。真空を生成するステップを、乾燥するステップの間、又は乾燥するステップとは分けて別の時に実施してもよい。方法は、所定量の再水和した試料を採取部３において得るために、例えば少なくとも１つの水和溶液を用いて、採取部３上で試料を再水和するステップをさらに備えてもよい。方法は、試料を含有する採取部３を例えば試験管などの容器７中に挿入するステップ、キャップ５若しくは閉鎖カバーを用いて容器７を閉鎖するステップ、及び採取部３を有する容器７を移動させるステップ、及び／又は液化することを目的とする所定量の物質８を容器７に事前に用意するステップ、及び／又は試料を保存するステップ、及び／又は試料を有する採取部３を含む容器７を、試料を液化する目的の所定の速度で、揺り動かすステップ、振るステップ若しくは回転するステップをさらに備えてもよい。方法は、試料に対する分子生物学操作を可能にするために、採取部から分子生物学用の試料をリリースするステップをさらに備えてもよい。方法は、試料に対する更なる操作の実施を可能にするために、液状媒質又は希釈緩衝材中での希釈により、採取された分子生物学用の試料の少なくとも８０％、又は少なくとも８５％、又は少なくとも９０％の量をリリースするステップを特に備えてもよい。リリースは従来の擦る操作により容易にできる。本発明はさらに、フロック加工によって採取装置の支持本体２に付されたか又は付されるべき繊維６を前処理し、分子生物学用の試料を移動させるための、上記の種類のカチオン性界面活性剤の使用に関連する。以下に、我々は、１００ｍｌの液体当たり約１グラムの塩化ベンザルコニウムの濃度を有する溶液で処理した、フロック加工されたナイロン繊維を有するフロックスワブを処理することによって実施した試験の結果を報告する。事件現場でのＤＮＡ採取を模倣するために、１００ｕｌの滅菌脱塩水を使用して、唾液スポット（事件現場でのＤＮＡ採取を再現するために硬表面上で事前に乾燥させたもの）を湿らせ、それらの各々一つを単一のスワブで採取した。回収したＤＮＡの平均濃度及び割合を計算した。異なる種類のスワブを試験した：コーティングされていない（処理されていない）フロック加工されたナイロン繊維スワブ、及びコーティングされた（処理された）ナイロン繊維スワブ。試験の間、臨界的環境条件下においてもまた、スワブ上でのＤＮＡ保存の最適化を研究した。特に試験は、例えば事件現場から一旦試料が採取されて法医学研究所に到着するまでの、スワブ上での試料の正確な保存を評価した。以下の２つの試験を実施した：
１）コーティングされたフロックスワブの、事件現場で採取したＤＮＡを維持する能力を検証するために、唾液をスワブに接種し、ＤＮＡを抽出し、室温にてゼロ時点及び１週間後にリアルタイムＰＣＲで定量した。
以下の表は、異なる時点（ゼロ時点、２４時間後、４８時間後、及び１週間後）においてコーティングされたスワブから回収されたＤＮＡの割合を示す：
２）大量の環境汚染物が存在する事件現場での採取を模倣するため、並びに温度変化及びその結果として生じる汚染物質の異常増殖がスワブ上でのヒトＤＮＡ保存にとって実際の問題となり得る臨界温度条件における（例えば夏季又は非常に高温地域における）スワブの輸送を模倣するために、別の試験を行って、環境汚染物質因子及びヒト唾液の０，５ＭｃＦ混合物１００ｕｌを全てのスワブに接種した。全てのスワブからＤＮＡを抽出し、室温（ＲＴ）及び＋３７℃にてゼロ時点、３日の時点、室温及び＋３７℃にて５日の時点において、リアルタイムＰＣＲで定量した。以下のグラフは、試験した２つの異なる温度におけるスワブ上でのヒトＤＮＡ保存の傾向を表す：
リアルタイムＰＣＲに必要なサイクル数に関して、コーティングされたスワブは、試験した異なる条件において、約２７．２７（ゼロ時点）の最小から約２７．２７（３７℃にて５日後）の最大までのサイクル数を必要としたが、コーティングされていないスワブは、２７．３８（ゼロ時点）の最小から約３３．３３（３７℃にて５日後）の最大までのサイクル数を必要とした。コーティングされたスワブが、シリカゲル装置を使用してスワブを乾燥することを必要とせずに、室温（最適条件）においてのみならず臨界インキュベーション温度（＋３７℃）においても、採取されたＤＮＡの約１００％を５日後でも保存できること、及びコーティングされていないスワブと比較して、試験感度を１００倍まで改善できること、を上記の試験は実証している。本発明は以下の利点の１つ又は複数を与える。まず第一に、本発明は、従来技術において遭遇する問題を取り除く、プロセス及びそのプロセスに従って実現される装置、並びにその装置を使用する方法を可能にする。本発明は、ＤＮＡ又はＲＮＡなどの分子生物学用の試料の関連する量（採取される量に関して）を、採取装置から取り出すことをさらに可能にし、特に従来技術と比較して、より丁寧に、より良い全体的状態で、試料を保存することを可能にし、それ故、いかなる後の実験室での使用も可能となる。本発明は、従来技術と比較して、採取及び移動を含む分子生物学操作に利用可能なＤＮＡ又はＲＮＡの割合の増加を可能にする。このことは、ヒト細胞の完全性を保存し、それらのヒト細胞の溶解を回避し、その結果として核酸の完全性も維持する、処理能力に起因して可能となる。上記のことに加えて、本発明は、分析される他の生物学的試料又は化学的試料の採取にも有益に使用されてもよい。本発明はさらに、公知の装置と比較して、大量の生物学的試料の採取、移動、分析及びさらなる操作への利用を可能とする。本発明は、ＤＮＡ又はＲＮＡの量を、分子生物学の操作を実施に利用可能及び使用可能にすることができ、その量は公知の装置と比較して、１０倍までにも、かなり大きくなる。本発明は、ＤＮＡ又はＲＮＡの操作に利用可能な多量のＤＮＡ又はＲＮＡを採取装置からリリースでき、装置によりリリースされるＤＮＡ又はＲＮＡの試料に対する重合反応又はポリメラーゼ連鎖反応を実施するのに必要とされるサイクル数の減少をさらに可能にする。最後に、本発明は実現することが簡単で、経済的である。
Claims (20)
- 分子生物学用の試料を採取して移動させるための装置を実現するためのプロセスであって、前記装置が、第１の部分（２ａ）を少なくとも有する支持本体（２）と、ある量の分子生物学用の試料を採取部（３）に採取することになるフロック加工された前記採取部（３）を構成するように、フロック加工によって前記支持本体（２）の前記第１の部分（２ａ）に付着されて配置された複数の繊維（６）と、を少なくとも有し、前記プロセスが、界面活性剤を用いて前記複数の繊維（６）を前処理するステップを少なくとも備え、界面活性剤を用いて前記複数の繊維（６）を前処理する前記ステップが、フロック加工によって前記繊維を前記支持本体（２）に付けた後及び／又はフロック加工によって前記繊維（６）を前記本体（２）に付ける前に実施され、及び／又は前記界面活性剤が前記繊維（６）の製造の間に前記繊維（６）に添加される、プロセス。
- 前記界面活性剤が、カチオン性界面活性剤、及び／又は第四級アンモニウム化合物、及び／又は第四級アンモニア基で終端する少なくとも１つの炭素原子鎖により構成される陽性部を有する塩である、請求項１に記載のプロセス。
- 前記界面活性剤が、塩化ベンザルコニウム（ＢＡＣ又はアルキル−ジメチル−ベンジルアンモニウムクロリド又はＡＤＢＡＣ）である、請求項１に記載のプロセス。
- 前記界面活性剤が、第四級アンモニア塩であり、又は第四級アンモニウム塩の混合物を含み、又はそれが、アルキル基がオクチル（Ｃ８Ｈ１７−）からオクタデシル（Ｃ１８Ｈ３７−）まで異なるアルキル−ベンジル−ジメチルアンモニウムの塩化物の混合物である、請求項１に記載のプロセス。
- 前記界面活性剤が、塩化ベンザルコニウム、臭化セチルトリメチルアンモニウム（ＣＴＡＢ又は臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム）、塩化ベンゼトニウム、塩化セタルコニウム、臭化ラウルトリモニウム、臭化ミリスチルトリメチルアンモニウム、セトリミド、臭化セトリモニウム、塩化セチルピリジニウム及び塩化ステアラルコニウムを含む群において選択される、請求項１に記載のプロセス。
- 溶液中に体積又は重量で０．１％〜１５％、又は０．２％〜１０％、又は０．５％〜５％、又は０．８％〜１．５％又は０．４％〜１，２％の割合、濃度値又は量の界面活性剤を含む水性溶液を事前に用意するステップをさらに備え、界面活性剤を用いて前記複数の繊維（６）を処理するステップが、前記溶液中での前記繊維（６）の膨潤によって実施され、前記溶液中での前記繊維（６）の膨潤が、フロック加工によって前記繊維（６）を前記本体（２）の前記第１の部分（２ａ）に付けた後に実施される、請求項１に記載のプロセス。
- 溶液中に体積又は重量で０．１％〜１５％、又は０．２％〜１０％、又は０．５％〜５％、又は０．８％〜１．５％、又は０．４％〜１，２％の割合、濃度値又は量の界面活性剤を含む水性溶液を事前に用意するステップをさらに備え、界面活性剤を用いて前記複数の繊維（６）を処理するステップが、前記溶液中での前記繊維（６）の膨潤によって実施され、前記溶液中での前記繊維（６）の膨潤が、フロック加工によって前記繊維（６）を前記本体（２）の前記第１の部分（２ａ）に付ける前に実施される、請求項１に記載のプロセス。
- 第１の部分（２ａ）を少なくとも有する支持本体（２）と、ある量の分子生物学用の試料を採取部（３）に採取することになるフロック加工された前記採取部（３）を構成するように、フロック加工によって前記支持本体（２）の前記第１の部分（２ａ）に付着されて配置された複数の繊維（６）と、を少なくとも備える、分子生物学用の試料を採取して移動させるための装置（１）であって、前記採取装置によりリリース可能であって分子生物学操作に使用可能であるＤＮＡ又はＲＮＡの量を増加させるように前記複数の繊維（６）が界面活性剤を用いて前処理されることを特徴とする、装置（１）。
- 前記界面活性剤が、カチオン性であり、及び／又は塩化ベンザルコニウム（ＢＡＣ）である、請求項８に記載の装置（１）。
- 前記界面活性剤が、カチオン性であって第四級アンモニウム基で終端する少なくとも１つの炭素原子鎖により構成される陽性部を有する塩であり、及び／又は前記界面活性剤が第四級アンモニウム塩であり、若しくはそれが第四級アンモニウム塩の混合物を含む、請求項８に記載の装置（１）。
- 前記界面活性剤が、アルキル基がオクチル（Ｃ８Ｈ１７−）からオクタデシル（Ｃ１８Ｈ３７−）まで異なるアルキル−ベンジル−ジメチルアンモニウムの塩化物の混合物であり、及び／又は前記界面活性剤がカチオン性である、請求項８に記載の装置（１）。
- 前記界面活性剤が、第四級アンモニウム化合物であり、並びに／又は塩化ベンザルコニウム、臭化セチルトリメチルアンモニウム（ＣＴＡＢ又は臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム）、塩化ベンゼトニウム、塩化セタルコニウム、臭化ラウルトリモニウム、臭化ミリスチルトリメチルアンモニウム、セトリミド、臭化セトリモニウム、塩化セチルピリジニウム及び塩化ステアラルコニウムを含む群において選択される、請求項８に記載の装置（１）。
- フロック加工された前記採取部（３）が、実質的に既知の量の前記試料を採取するように、又は５〜１０００マイクロリットルの間、若しくは１０マイクロリットル〜５００マイクロリットルの間、若しくは５０〜２００マイクロリットルの間、若しくは８０〜１２０マイクロリットルの間を含む量の試料を採取するように、及び／又はｍｍ２当たり少なくとも０．５μｌ、若しくはｍｍ２当たり少なくとも０．６μｌ、若しくはｍｍ２当たり少なくとも０．７μｌ、若しくはｍｍ２当たり少なくとも０．７５μｌの量の試料を採取するように構成される、請求項８に記載の装置（１）。
- 前記繊維（６）が、実質的に規則的な方法で、前記採取部（３）上に実質的に連続的な層を形成するように前記支持本体（２）の前記第１の部分（２ａ）に配置され、及び／又は前記繊維（６）が、毛管作用により前記試料を吸収することになる複数の毛管間隙（９）を構成するような方法で前記採取部（３）に配置される、請求項８に記載の装置（１）。
- 前記繊維（６）が、１．７〜３．３の間のデシテックスを含む番手、及び／又は０．６〜３ｍｍの間を含む長さを示す、請求項８に記載の装置（１）。
- 前記繊維（６）が、ナイロン、又はポリアミド、レーヨン、ポリエステル、炭素繊維、アルギン酸塩、天然繊維から選択される材料、又は前記材料の混合物から作製される、請求項８に記載の装置（１）。
- 前記採取部（３）が、ｍｍ２当たり５０〜５００本の間の繊維又はｍｍ２当たり１００〜２００本の間の繊維を含む、前記採取部（３）上の前記繊維（６）の表面密度を示す、請求項８に記載の装置（１）。
- 請求項８に係る装置（１）によって分子生物学用の試料を採取して移動させるための方法であって、前記方法が、支持本体（２）を有する前記採取装置（１）の少なくとも１つのフロック加工された採取部（３）に分子生物学用の試料を採取するステップを少なくとも備え、前記採取部（３）が、前記支持本体（２）の第１の部分（２ａ）と、フロック加工によって前記支持本体（２）の前記第１の部分（２ａ）上に付着されて配置された複数の繊維（６）とを有し、前記複数の繊維（６）が界面活性剤又はカチオン性界面活性剤を用いて前処理され、前記方法が、ある期間前記採取部に前記試料を保存するステップをさらに備える、方法。
- ＤＮＡ若しくはＲＮＡの試料、及び／又はＤＮＡ若しくはＲＮＡの試料を含む細胞を採取して移動させるための請求項１８に記載の方法。
- 分子生物学用の前記試料を前記採取部（３）からリリースして、前記試料への分子生物学操作の実施を可能にするステップをさらに備える、請求項１８に記載の方法。
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