ITMI20110004A1 - Procedimento per realizzare un dispositivo per il prelievo ed il trasferimento di campioni per biologia molecolare - Google Patents

Procedimento per realizzare un dispositivo per il prelievo ed il trasferimento di campioni per biologia molecolare Download PDF

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ITMI20110004A1 IT000004A ITMI20110004A ITMI20110004A1 IT MI20110004 A1 ITMI20110004 A1 IT MI20110004A1 IT 000004 A IT000004 A IT 000004A IT MI20110004 A ITMI20110004 A IT MI20110004A IT MI20110004 A1 ITMI20110004 A1 IT MI20110004A1
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Description

DESCRIZIONE
Annessa a domanda di brevetto per INVENZIONE avente per titolo:
“Procedimento per realizzare un dispositivo per il prelievo ed il trasferimento di campioni per biologia molecolareâ€
La presente invenzione riguarda un procedimento per realizzare un dispositivo per il prelievo ed il trasferimento di campioni per biologia molecolare. L’invenzione riguarda inoltre un dispositivo per il prelievo ed il trasferimento di campioni per biologia molecolare realizzato mediante tale procedimento ed un metodo per il prelievo ed il trasferimento di campioni per biologia molecolare mediante l'impiego di tale dispositivo. L’invenzione trova ad esempio applicazione per il prelievo ed il trasferimento di campioni per biologia molecolare, quali DNA, RNA, e cellule contenenti DNA ed RNA. L'invenzione può trovare inoltre vantaggiosa applicazione per il prelievo ed il trasferimento di altre tipologie di analiti o di campioni biologici o di origine biologica. Nello stato dell'arte à ̈ noto l’impiego di diverse tipologie di dispositivi di prelievo e di trasferimento per analiti quali sostanze organiche o biologiche ad esempio da sottoporre successivamente ad esami di laboratorio di tipo analitico o diagnostico. E’ noto anzitutto l’impiego di convenzionali dispositivi di prelievo comprendenti un corpo allungato di supporto ed una fibra allungata, generalmente di cotone, avvolta attorno ad una estremità del corpo, fino a definire una porzione di raccolta atta ad assorbire al suo interno i campioni da prelevare. Tali dispositivi presentano vari inconvenienti, tra i quali va citato quanto meno il fatto che i campioni biologici tendono ad essere trattenuti alTintemo della porzione di raccolta, e quindi sono difficilmente estraibili dalla porzione di raccolta stessa quando à ̈ necessario. Spesso quindi la quantità di campione che à ̈ possibile recuperare da tali dispositivi à ̈ alquanto ridotta rispetto a quella inizialmente disponibile, con tutti gli inconvenienti del caso. Dato infatti che in alcuni casi la quantità di sostanza inizialmente prelevata può essere molto limitata, risulta spesso fondamentale poter recuperare dal dispositivo di prelievo la maggior percentuale possibile di sostanza raccolta. Per risolvere tale inconveniente, sono stati proposti dispositivi denominati convenzionalmente “tamponi fioccati†e comprendenti un corpo allungato di supporto ed una pluralità di fibre fioccate in corrispondenza di una estremità del corpo di supporto per definire una porzione di raccolta per i citati analiti o campioni biologici. Le fibre possono essere fioccate sul corpo mediante floccatura in un campo magnetico, e possono aderire al corpo di supporto mediante un opportuno collante o anche senza l’impiego di collanti. Le fibre possono essere disposte in modo ordinato e sostanzialmente perpendicolare al corpo di supporto, per definire una configurazione ottimale per la raccolta, il trasporto ed il rilascio selettivo dei campioni raccolti. Tale tipologia di dispositivi à ̈ nota ad esempio dal breveto della stessa richiedente EP 1608268 Bl. Tali dispositivi, grazie alla disposizione ordinata delle fibre parallelamente al corpo di supporto, sono in grado di assorbire quantità di analiti o campioni almeno equivalenti a quelle dei dispositivi convenzionali sopra descritti, ma presentano il grosso vantaggio di consentire il rilascio, al momento opportuno, di quantità molto maggiori di tali analiti o campioni dalla porzione di raccolta, con la possibilità di recuperare agevolmente almeno l’80%, o anche più, del campione inizialmente raccolto. La richiedente ha rilevato che benché i dispositivi di tipo fioccato sopra citati possano essere vantaggiosamente impiegati anche per la raccolta ed il trasferimento di campioni per biologia molecolare quali DNA, RNA e cellule contenenti tali campioni, le quantità di DNA ed RNA rilasciate dal dispositivo ed effetivamente utilizzabili per l’esecuzione di operazioni di biologia molecolare quali polimerizzazione o amplificazione risultano talvolta insoddisfacenti o insufficienti, con tute le conseguenti difficoltà del caso nell'esecuzione dei procedimenti da svolgere su tali campioni.
Scopo principale della presente invenzione à ̈ quello di risolvere uno o più dei problemi riscontrati nella tecnica nota. Uno scopo della presente invenzione à ̈ quello di proporre un metodo ed un dispositivo per il prelievo ed il trasferimento di campioni per biologia molecolare che consentano di estrarre dal dispositivo di raccolta stesso una quantità maggiore di campioni per biologia molecolare utilizzabili per operazioni di biologia molecolare, rispeto ai dispositivi noti. E’ inoltre scopo della presente invenzione proporre un metodo ed un dispositivo per il prelievo ed il trasferimento di campioni per biologia molecolare che consentano di estrarre dal dispositivo di prelievo la maggiore percentuale possibile di DNA o RNA inizialmente raccolto dal dispositivo, nella forma e nella condizione migliore per ogni ulteriore impiego. E’ un ulteriore scopo della presente invenzione mettere a disposizione un metodo ed un dispositivo per il prelievo ed il trasferimento di campioni per biologia molecolare che consenta di preservare efficacemente l’integrità dei campioni di DNA o RNA raccolti dal dispositivo. E’ inoltre scopo della presente invenzione mettere a disposizione un metodo ed un dispositivo per il prelievo ed il trasferimento di campioni per biologia molecolare che consentano di ridurre il numero di cicli necessari per l’esecuzione di reazioni di polimerizzazione o reazioni a catena della polimerasi sui campioni di DNA o RNA rilasciati dal dispositivo. E’ inoltre scopo della presente invenzione mettere a disposizione un metodo ed un dispositivo per il prelievo ed il trasferimento di campioni per biologia molecolare che risultino di semplice ed economica realizzazione.
Questi scopi ed altri ancora, che appariranno maggiormente dalla seguente descrizione, sono sostanzialmente raggiunti da un metodo ed un dispositivo per il prelievo ed il trasferimento di campioni per biologia molecolare, e da un procedimento per realizzare un dispositivo per il prelievo ed il trasferimento di campioni per biologia molecolare, secondo quanto espresso in una o più delle unite rivendicazioni, prese da sole o in combinazione tra loro, o in qualsiasi combinazione con uno o più degli ulteriori aspetti di seguito descritti. In un suo ulteriore aspetto, l'invenzione riguarda inoltre un procedimento in accordo con una qualsiasi delle annesse rivendicazioni di procedimento, o degli ulteriori aspetti qui indicati, comprendente inoltre almeno la fase di produrre il corpo di supporto del dispositivo avente almeno detta prima porzione e la fase di applicare mediante floccatura la pluralità di fibre su tale prima porzione. In un suo ulteriore aspetto, l'invenzione riguarda inoltre un procedimento in accordo con una qualsiasi delle annesse rivendicazioni di procedimento, o degli ulteriori aspetti qui indicati, comprendente inoltre la fase di asciugare le fibre dopo la fase di pre-trattare le fibre. In un suo ulteriore aspetto, l'invenzione riguarda inoltre un procedimento in accordo con una qualsiasi delle annesse rivendicazioni di procedimento, o degli ulteriori aspetti qui indicati, in cui il tensioattivo à ̈ cationico o cloruro di benzalconio (BAC o benzalconio cloruro) e in cui le fibre sono realizzate in nylon. In un suo ulteriore aspetto, l'invenzione riguarda inoltre un dispositivo per il prelievo ed il trasferimento di campioni per biologia molecolare realizzato mediante un procedimento per realizzare un dispositivo per il prelievo ed il trasferimento di campioni per biologia molecolare in accordo con una qualsiasi delle rivendicazioni annesse. In un suo ulteriore aspetto, l'invenzione riguarda inoltre un metodo in accordo con una qualsiasi delle annesse rivendicazioni di metodo, o degli ulteriori aspetti qui indicati, in cui la fase di predisporre la soluzione comprende le fasi di predisporre una predeterminata quantità di tensioattivo, preferibilmente cationico; sciogliere tale predeterminata quantità di tensioattivo in acqua per ottenere la soluzione, e/o la fase di rendere sostanzialmente omogenea la soluzione. In un suo ulteriore aspetto, l'invenzione riguarda inoltre un metodo in accordo con una qualsiasi delle annesse rivendicazioni di metodo, o degli ulteriori aspetti qui indicati, comprendente inoltre la fase di essiccare almeno la porzione di raccolta, provvista del campione e/o comprendente inoltre le fasi di inserire la porzione di raccolta in un contenitore per il vuoto e di generare una condizione di sostanziale vuoto nel contenitore per il vuoto, durante la fase di essiccare o indipendentemente dalla fase di essiccare. In un suo ulteriore aspetto, l'invenzione riguarda inoltre un metodo in accordo con una qualsiasi delle annesse rivendicazioni di metodo, o degli ulteriori aspetti qui indicati comprendente inoltre la fase di rilasciare almeno l80%, o almeno l85%, o almeno il 90%, o almeno il 95% del campione raccolto dalla porzione di raccolta, ad esempio mediante diluizione in terreno liquido, sospensione in un buffer o soluzione tampone. In un suo ulteriore aspetto preferito, l'invenzione riguarda inoltre l’uso di un tensioattivo cationico, in particolare cloruro di benzalconio, per pretrattare fibre in nylon applicate o da applicare mediante floccaggio su un corpo di supporto di un dispositivo di prelievo e trasferimento di campioni per biologia molecolare, per incrementare la percentuale di DNA o RNA utilizzabile per operazioni di biologia molecolare rispetto alla quantità rilasciabile dal dispositivo di prelievo e trasferimento. In un suo ulteriore aspetto, l'invenzione riguarda inoltre l’uso di un tensioattivo cationico per la produzione di fibre da applicare mediante floccatura su un corpo di supporto di un dispositivo di prelievo e trasferimento di campioni per biologia molecolare, in cui il tensioattivo cationico viene aggiunto ai materiali con cui vengono realizzate le fibre durante la produzione delle fibre stesse. Viene ora riportata, a titolo esemplificativo e non limitativo, la descrizione dettagliata di una o più forme di esecuzione preferite dell'invenzione, in cui:
la figura 1 Ã ̈ una vista laterale di un dispositivo in accordo con una forma di realizzazione della presente invenzione;
la figura 2 Ã ̈ una vista di un particolare del dispositivo di figura 2 relativo ad una porzione di raccolta;
la figura 3 mostra un contenitore in accordo con una forma di realizzazione della presente invenzione.
Verrà ora descritto un dispositivo 1 di prelievo e di trasferimento di campioni per biologia molecolare in accordo con una o più forme di realizzazione dell’invenzione. Con il termine “biologia molecolare†si intendono nel presente testo le tecniche che consentono la rilevazione, l'analisi, la manipolazione, l'amplificazione (PCR) e la copia (clonaggio) degli acidi nucleici (DNA ed RNA). Con l’espressione “DNA o RNA utilizzabile per operazioni di biologia molecolare†si intende che il DNA o RNA à ̈ integro, non danneggiato o reso inutilizzabile e comunque si trova in condizioni sufficienti ed adatte all’esecuzione di varie operazioni di biologia molecolare, ad esempio l’esecuzione di reazioni di polimerizzazione. Con riferimento alle unite figure, con 1 à ̈ complessivamente indicato un dispositivo per il prelievo ed il trasferimento di campioni per biologia molecolare. Il dispositivo 1 comprende un corpo di supporto 2 che può avere conformazione allungata e/o sostanzialmente astiforme. Il corpo di supporto 2 può avere una sezione qualsiasi, anche variabile lungo la sua estensione longitudinale. Il corpo di supporto 2 à ̈ provvisto di una prima porzione 2a, ad esempio di estremità, definente una porzione di raccolta 3 per il campione, di una seconda porzione 2b centrale sostanzialmente astiforme e di una terza porzione 2c di estremità, in corrispondenza della quale può essere impugnabile manualmente da un operatore o collegabile ad un altro elemento di presa 4 quale un tappo 5 per provette o simile. La porzione di raccolta 3 per il campione può essere conformata come un tampone. La porzione di raccolta 3 à ̈ di tipo fioccato, realizzata mediante floccaggio o floccatura di una pluralità di fibre 6 sulla prima estremità 2a del corpo. Le fibre 6 fioccate sulla prima estremità possono essere realizzate in materiale idrofilo o non idrofilo, ma la porzione di raccolta 3 risulta comunque idrofila per effetto di capillarità grazie alle caratteristiche delle fibre 6 ed alla distribuzione delle stesse sul corpo di supporto 2. Le fibre 6 fioccate sono preferibilmente realizzate in nylon. In altri termini, la porzione di raccolta 3 può presentare uno strato continuo di fibre 6 in un materiale sostanzialmente adsorbente o non absorbente verso il campione, ma conformato secondo una pluralità ordinata di interstizi capillari 9 entro i quali una quantità predeterminata del campione stesso può essere trattenuta per imbibizione, e da cui essere in seguito rilasciata quantitativamente al momento opportuno, ad esempio per sfregamento della porzione di raccolta 3 su un apposita superficie di rilascio. Un esempio di tale tipologia di tampone fioccato à ̈ illustrato nel brevetto EP 1.608.268 della stessa Richiedente, il cui contenuto, relativamente alla struttura del tampone fioccato, à ̈ incorporato per riferimento nella presente descrizione. Come descritto in tale brevetto, la deposizione per floccaggio produce infatti sull’estremità interessata del dispositivo di prelievo 1 uno strato continuo ed omogeneo di una pluralità di fibre 6 con disposizione ordinata, sostanzialmente perpendicolare in ogni punto alla prima porzione 2a del corpo di supporto 2 e ciascuna delle quali sostanzialmente parallela alle fibre 6 adiacenti. Tra tali fibre 6 viene definita una corrispondente pluralità ordinata di interstizi capillari 9, entro i quali può essere raccolta e trattenuta, anche per imbibizione dovuta all’effetto di capillarità, una quantità predeterminata del campione. Tale strato fioccato può in seguito rilasciare efficacemente il campione raccolto, ad esempio per sfregamento su una opportuna superficie o mediante diluizione del campione in un opportuno diluente. La porzione di raccolta 3 fioccata può configurata e dimensionata per raccogliere una quantità opportuna di campione, o per raccogliere una quantità di campione compresa ad esempio tra 5 e 1000 microlitri, tra 10 microlitri e 500 microlitri, o tra 50 e 200 microlitri, o tra 80 e 120 microlitri. Le fibre 6 possono essere disposte sul corpo di supporto 2 in modo sostanzialmente ordinato ed in modo da formare uno strato sostanzialmente continuo sulla porzione di raccolta 3 e/o possono essere disposte sulla porzione di raccolta 3 in modo da definire una pluralità di interstizi capillari 9 atti ad adsorbire per capillarità il campione. Le fibre 6 possono presentare un titolo compreso tra 1,7 e 3,3 Dtex, e/o una lunghezza compresa tra 0,6 e 3 mm. Le fibre 6 possono essere disposte mediante floccaggio sulla porzione di raccolta 3 del corpo di supporto 2 con una densità superficiale ad esempio compresa tra 50 e 500 fibre per mm<2>o tra 100 e 200 fibre per mm<2>di superficie della prima porzione 2a del corpo di supporto 2. Lo strato di fibre può definire una capacità di assorbimento ad esempio almeno di 0.5 Î1⁄4l per mm , o di almeno 0.6 Î1⁄4l per mm , o di almeno 0.7 Î1⁄4l per mm , o di almeno 0.75 Î1⁄4l per mm di superficie del corpo di supporto 2. Le fibre 6 possono essere sono realizzate in un materiale sostanzialmente non idrofilo o non adsorbente verso il campione, e/o in un materiale sostanzialmente idrofilo o adsorbente verso il campione e/o in un materiale scelto tra: poliammide, nylon, rayon, poliestere, fibra di carbonio, alginato, fibra naturale, o una miscela di tali materiali. Le fibre 6 sono preferibilmente realizzate in nylon. Il corpo di supporto 2 può presentare un’estensione longitudinale compresa tra 2 cm e 20 cm, o tra 3 cm e 18 cm, o tra 6 cm e 16 cm e/o uno spessore o diametro in una sezione perpendicolare al suo asse centrale, compreso tra 0.5 mm e 5 mm, o tra 1 mm e 3 mm, o tra 1,5 e 2,5 mm. La porzione di raccolta 3 può presentare un’estensione longitudinale compresa tra 8 cm e 0,5 cm o tra 5 cm e 1 cm e/o un diametro o spessore, comprese le fibre 6, tra 10 mm e 1 mm o tra 8 mm e 2 mm o tra 5 mm e 2,5 mm. La porzione di raccolta 3 può presentare una forma qualsiasi adatto alla tipologia di campione da prelevare o alla sede di raccolta, ad esempio arrotondata o con uno o più spigoli vivi. Il corpo di supporto 2 può essere provvisto di una porzione intermedia di indebolimento atta a facilitare una rottura selettiva del corpo stesso in una posizione intermedia tra la prima estremità e la seconda estremità, ad esempio per facilitare l inserimento della porzione di raccolta 3 in un contenitore 7 per il trasporto. Il dispositivo di prelievo 1 può comprendere una pluralità di corpi 2 di supporto, ciascuno provvisto di una porzione di raccolta 3 avente una conformazione o forma differente e specificamente configurata per la raccolta di un campione in una specifica sede, o per la raccolta di una specifica quantità di campione. In accordo con la presente invenzione le fibre 6 sono pre-trattate, prima dell'utilizzo per la raccolta del campione, e ad esempio in fase di produzione del dispositivo 1, con un tensioattivo. Il tensioattivo potrebbe essere cationico, anionico, non ionico o anfotero. In accordo con la presente invenzione, il tensioattivo à ̈ preferibilmente cationico. In accordo con l’invenzione l’impiego di un tensioattivo cationico, ad esempio ed in particolare di cloruro di benzalconio, consente di ottenere gli scopi sopra indicati in misura sorprendente e particolarmente significativa. In accordo con l’invenzione l’impiego di un tensioattivo cationico, ad esempio ed in particolare di cloruro di benzalconio, consente di ottenere gli scopi sopra indicati in misura sorprendente e particolarmente significativa nell’impiego con fibre di nylon. In accordo con la presente invenzione, il tensioattivo cationico à ̈ preferibilmente cloruro di benzalconio (BAC o benzalconio cloruro). Il tensioattivo cationico può essere un sale avente una parte positiva, costituita da almeno una catena di atomi di carbonio terminante con un gruppo ammonico quaternario e/o può essere un sale di ammonio quaternario o può comprendere una miscela di sali di ammonio quaternari. Il tensioattivo cationico può essere una miscela di cloruri di alchilbenzil-dimetilammonio, in cui il gruppo alchile varia dall'ottile (C8H17-) all'ottadecile (C18H37-). In una forma alternativa il tensioattivo cationico potrebbe essere bromuro di cetil-trimetilammonio (CTAB o bromuro di esadeciltrimetilammonio). Il dispositivo di prelievo 1 può comprendere inoltre un contenitore 7 per il trasporto del campione avente una sede interna di contenimento 10 ed un'apertura di accesso 11. Il contenitore 7 può essere una provetta per il trasporto di campioni di materiale biologico o di origine biologica. Il dispositivo di prelievo 1 può comprendere inoltre un tappo 5 di chiusura removibilmente montabile in corrispondenza dell’apertura di accesso per chiudere selettivamente il contenitore 7. Il dispositivo di prelievo 1 può comprendere inoltre almeno un elemento essiccante o deumidificante, ad esempio un sacchetto contenente gel di silice, alloggiato nel contenitore 7 o in altra posizione utile. Il contenitore 7 e/o il tappo 5 di chiusura e/o il corpo di supporto 2 possono essere realizzati in materiale plastico, ad esempio polistirolo o polistirene o polipropilene e/o in materiale adatto all'impiego con lo specifico campione da raccogliere, o in generale adatto all'impiego con materiali biologici o di origine biologica. Il contenitore 7 e/o il tappo 5 di chiusura e/o il corpo di supporto 2 possono essere sterilizzati. Il dispositivo di prelievo 1 può comprendere inoltre una confezione sigillata (non illustrata nelle figure in quanto di per sé di tipo noto) in cui il corpo di supporto 2 e/o il contenitore 7 ed il tappo 5 di chiusura possono essere alloggiati prima dell'utilizzo per prelevare un campione. Il corpo di supporto 2, la confezione, il contenitore 7 ed il tappo 5 possono essere sterili.
L'invenzione riguarda inoltre un procedimento per realizzare un dispositivo 1 per il prelievo ed il trasferimento di campioni per biologia molecolare del tipo sopra descritto. Il procedimento può comprendere ad esempio le seguenti fasi, di per sé note e quindi non descritte in maggior dettaglio: realizzare il corpo di supporto 2, ad esempio mediante estrusione di un materiale plastico; applicare un'opportuna colla alla prima porzione 2a del corpo 2; applicare le fibre 6 alla prima porzione 2a mediante floccaggio in un campo elettromagnetico; asciugare la colla in un opportuno forno di tipo convenzionale per polimerizzare almeno parzialmente la colla stessa. In accordo con la presente invenzione il procedimento comprende inoltre la fase di pre-trattare la pluralità di fibre 6 con un tensioattivo cationico, del tipo sopra descritto. Il procedimento può comprendere inoltre una fase di asciugatura, ad esempio in un forno, almeno delle fibre dopo la fase di pre-trattare le fibre. Tale fase di pre-trattare la pluralità di fibre 6 con un tensioattivo cationico può essere svolta dopo T applicazione delle fibre sul corpo di supporto 2 mediante floccaggio, e quindi può ad esempio essere svolta immergendo direttamente la porzione di raccolta in una soluzione contenente il tensioattivo cationico. In alternativa, tale fase di pre-trattare la pluralità di fibre 6 con il sopra citato tensioattivo cationico può essere svolta prima dell’applicazione delle fibre 6 sul corpo mediante floccaggio, trattando quindi le fibre 6 prima del floccaggio delle stesse. In una ulteriore alternativa il tensioattivo cationico può essere aggiunto alla fibra 6 durante la produzione della fibra 6, aggiungendo una predeterminata quantità di tensioattivo cationico ai materiali di per sé noti con i quali la fibra viene realizzata. Il procedimento può comprendere inoltre la fase di predisporre una soluzione a base acquosa comprendente una percentuale, un valore di concentrazione o un titolo del tensioattivo, preferibilmente cationico, nella soluzione dal 0.1% al 15%, o dal 0.2% al 10%, o dal 0.5% al 5%, o dal 0.8% al 1.5% in volume o in peso. La fase di predisporre la soluzione può comprendere le fasi di predisporre una predeterminata quantità di tensioattivo cationico; sciogliere tale predeterminata quantità di tensioattivo cationico in acqua o soluzione acquosa per ottenere la soluzione, e/o la fase di rendere sostanzialmente omogenea la soluzione. La fase di trattare la pluralità di fibre 6 con un tensioattivo cationico può essere svolta mediante imbibizione delle fibre nella soluzione. Tale imbibizione delle fibre 6 nella soluzione può essere svolta dopo l’applicazione delle fibre sulla porzione di raccolta del corpo mediante floccaggio o prima dell’applicazione delle fibre sulla porzione di raccolta del corpo mediante floccaggio. L'invenzione riguarda inoltre un metodo per il prelievo ed il trasferimento di campioni per biologia molecolare mediante un dispositivo 1 del tipo sopra descritto. Il metodo comprende almeno la fase di raccogliere un campione per biologia molecolare su almeno una porzione di raccolta 3 fioccata del dispositivo 1 di prelievo, in cui la pluralità di fibre 6 à ̈ pre-trattata con un tensioattivo cationico del tipo sopra descritto. Il metodo può essere rivolto al prelievo ed al trasferimento di campioni di DNA o di RNA e/o di cellule comprendenti campioni di DNA o di RNA. Il metodo può comprendere inoltre la fase di conservare il campione sulla porzione di raccolta 3 per un intervallo di tempo predeterminato. Il metodo può comprendere inoltre la fase di disidratare o essiccare almeno la porzione di raccolta 3, provvista del campione raccolto. La fase di essiccare può essere svolta, ad esempio, mediante essiccazione in stufa a ventilazione forzata, o mediante altra metodologia di per sé nota e adatta al trattamento del campione. Il metodo può comprendere inoltre le fasi di inserire la porzione di raccolta 3 in un contenitore per il vuoto (di tipo di per sé noto e pertanto non illustrato nelle figure) e di generare una condizione di sostanziale vuoto nel contenitore per il vuoto. Tale fase di generare il vuoto può essere svolta durante la fase di essiccare, o in un altro momento, separatamente dalla fase di essiccare. Il metodo può comprendere inoltre la fase di reidratare il campione sulla porzione di raccolta 3, ad esempio mediante almeno una soluzione idratante, per ottenere una predeterminata quantità di campione reidratato sulla porzione di raccolta 3. Il metodo può comprendere inoltre le fasi di inserire la porzione di raccolta 3, provvista del campione, in un contenitore 7 quale ad esempio una provetta, chiudere il contenitore 7 mediante un tappo 5 o coperchio di chiusura e trasferire il contenitore 7 comprendente la porzione di raccolta 3 e/o la fase di predisporre nel contenitore 7 una quantità predeterminata di una sostanza 8 atta alla liquefazione e/o alla conservazione del campione e/o la fase di agitare, scuotere o roteare il contenitore 7 comprendente la porzione di raccolta 3 con il campione ad una velocità predeterminata ed atta a liquefare il campione. Il metodo può comprendere inoltre la fase di rilasciare il campione per biologia molecolare dalla porzione di raccolta per consentire operazioni di biologia molecolare sul campione. Il metodo può comprendere in particolare la fase di rilasciare almeno l'80%, o almeno l85%, o almeno il 90% della quantità di campione per biologia molecolare raccolto, mediante diluizione in un terreno liquido o buffer di diluizione per consentire l’esecuzione di ulteriori operazioni sul campione. Il rilascio può essere facilitato mediante convenzionali operazioni di sfregamento. L'invenzione riguarda inoltre l'uso di un tensioattivo cationico, del tipo sopra indicato, per pre-trattare fibre 6 applicate o da applicare mediante floccaggio su un corpo di supporto 2 di un dispositivo di prelievo e trasferimento di campioni per biologia molecolare. La presente invenzione consente di ottenere uno o più dei seguenti vantaggi. Innanzitutto, l’invenzione consente di realizzare un procedimento, un dispositivo realizzato in accordo con tale procedimento, ed un metodo per utilizzare tale dispositivo, in grado di superare i problemi riscontrati nella tecnica nota. L'invenzione consente inoltre di estrarre dal dispositivo di raccolta ima quantità rilevante di campioni per biologia molecolare, quali DNA o RNA, rispetto alla quantità raccolta, ed in particolare consente di conservare tali campioni in modo più accurato ed integro rispetto alla tecnica nota, per consentirne qualsiasi successivo impiego in laboratorio. L'invenzione consente di incrementare la percentuale di DNA o RNA utilizzabile per operazioni di biologia molecolare sulla quantità complessiva rilasciabile dal dispositivo di prelievo e trasferimento, rispetto alla tecnica nota. L'invenzione consente di mettere a disposizione quantità di DNA o RNA utilizzabile per l'esecuzione di operazioni di biologia molecolare, significativamente maggiori, anche 10 volte maggiori, rispetto ai dispositivi noti. L’invenzione consente inoltre di ridurre il numero di cicli necessari per l’esecuzione di reazioni di polimerizzazione o reazioni a catena della polimerasi sui campioni di DNA o RNA rilasciati dal dispositivo, in quanto consente di rilasciare dal dispositivo di prelievo una maggiore quantità di DNA o RNA disponibile per tali operazioni. L'invenzione risulta infine di semplice ed economica attuazione.

Claims (10)

  1. RIVENDICAZIONI 1. Procedimento per realizzare un dispositivo (1) per il prelievo ed il trasferimento di campioni per biologia molecolare in cui il dispositivo comprende almeno: un corpo di supporto (2) avente almeno una prima porzione (2a), ed una pluralità di fibre (6) attaccate e disposte su detta prima porzione (2a) di detto corpo di supporto (2) mediante floccaggio, per definire una porzione di raccolta (3) fioccata atta a raccogliere su detta porzione di raccolta (3) una quantità di detto campione per biologia molecolare, il procedimento comprendendo almeno la fase di pre-trattare detta pluralità di fibre (6) con un tensioattivo, detta fase di pre-trattare detta pluralità di fibre (6) con un tensioattivo essendo svolta dopo l’applicazione di dette fibre su detto corpo di supporto (2) mediante floccaggio e/o prima dell’applicazione di dette fibre (6) su detto corpo (2) mediante floccaggio e/o in cui detto tensioattivo viene aggiunto a detta fibra (6) durante la produzione di detta fibra (6).
  2. 2. Procedimento secondo la rivendicazione 1 in cui detto tensioattivo à ̈ cationico; e/o in cui detto tensioattivo à ̈ cloruro di benzalconio (BAC o benzalconio cloruro); e/o in cui detto tensioattivo à ̈ cationico ed à ̈ un sale avente una parte positiva, costituita da almeno una catena di atomi di carbonio terminante con un gruppo ammonico quaternario; e/o in cui detto tensioattivo à ̈ un sale di ammonio quaternario; o in cui comprende una miscela di sali di ammonio quaternari; o in cui à ̈ una miscela di cloruri di alchil-benzildimetilammonio, in cui il gruppo alchile varia dall'ottile (C8H17-) all'ottadecile (C18H37-); e/o in cui detto tensioattivo cationico à ̈ bromuro di cetiltrimetilammonio (CTAB o bromuro di esadeciltrimetilammonio).
  3. 3. Procedimento secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti comprendente inoltre la fase di predisporre una soluzione a base acquosa comprendente una percentuale, un valore di concentrazione o un titolo di detto tensioattivo in detta soluzione dal 0.1% al 15%, o dal 0.2% al 10%, o dal 0.5% al 5%, o dal 0.8% al 1.5% in volume o in peso, ed in cui detta fase di trattare detta pluralità di fibre (6) con un tensioattivo viene svolta mediante imbibizione di dette fibre (6) in detta soluzione, detta imbibizione di dette fibre (6) in detta soluzione essendo svolta dopo l’applicazione di dette fibre (6) su detta prima porzione (2a) di detto corpo (2) mediante floccaggio o prima dell’applicazione di dette fibre (6) su detta prima porzione (2a) di detto corpo (2) mediante floccaggio.
  4. 4. Dispositivo (1) per il prelievo ed il trasferimento di campioni per biologia molecolare comprendente almeno un corpo di supporto (2), avente almeno una prima porzione (2a), ed una pluralità di fibre (6) attaccate e disposte su detta prima porzione (2a) di detto corpo di supporto (2) mediante floccaggio, per definire una porzione di raccolta (3) fioccata atta a raccogliere su detta porzione di raccolta (3) una quantità di campione per biologia molecolare, caratterizzato dal fatto che detta pluralità di fibre (6) sono pre-trattate con un tensioattivo, per incrementare la quantità di DNA o RNA rilasciabile dal dispositivo di prelievo ed utilizzabile per operazioni di biologia molecolare. 5. Dispositivo (1) secondo la rivendicazione 4 in cui detto tensioattivo à ̈ di tipo cationico; e/o in cui à ̈ cloruro di benzalconio (BAC o benzalconio cloruro); e/o in cui detto tensioattivo à ̈ cationico ed à ̈ un sale avente una parte positiva, costituita da almeno una catena di atomi di carbonio terminante con un gruppo ammonico quaternario; e/o in cui detto tensioattivo à ̈ un sale di ammonio quaternario o in cui comprende una miscela di sali di ammonio quaternari; o in cui à ̈ una miscela di cloruri di alchil-benzil-dimetilammonio, in cui il gruppo alchile varia dall'ottile (C8H17-) all'ottadecile (C18H37-); e/o in cui à ̈ detto tensioattivo cationico à ̈ bromuro di cetil-trimetilammonio (CTAB o bromuro di esadeciltrimetilammonio) . 6. Dispositivo (1) secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 4 o 5 in cui detta porzione di raccolta (3) fioccata à ̈ configurata per raccogliere una quantità sostanzialmente nota di detto campione, o per raccogliere una quantità compresa tra 5 e 1000 microlitri, o tra 10 microlitri e 500 microlitri, o tra 50 e 200 microlitri, o tra 80 e 120 microlitri, di detto campione, e/o per raccogliere una quantità di campione di almeno 0.
  5. 5 Î1⁄4l per mm<2>, o di almeno 0.
  6. 6 Î1⁄4l per mm<2>, o di almeno 0.7 Î1⁄4l per mm<2>, o di almeno 0.75 Î1⁄4l per mm<2>, e/o in cui dette fibre (6) sono disposte su detta prima porzione (2a) di detto corpo di supporto (2) in modo sostanzialmente ordinato ed in modo da formare uno strato sostanzialmente continuo su detta porzione di raccolta (3) e/o sono disposte su detta porzione di raccolta (3) in modo da definire una pluralità di interstizi capillari (9) atti ad adsorbire per capillarità detto campione.
  7. 7. Dispositivo (1) secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 4 a 6 in cui dette fibre (6) presentano un titolo compreso tra 1,7 e 3,3 Dtex, e/o una lunghezza compresa tra 0,6 e 3 mm e/o sono realizzate in nylon o in un materiale scelto tra: poliammide, rayon, poliestere, fibra di carbonio, alginato, fibra naturale, o una miscela di tali materiali e/o in cui detta porzione di raccolta (3) presenta una densità superficiale di dette fibre (6) su detta porzione di raccolta (3) compresa tra 50 e 500 fibre per mm<2>o tra 100 e 200 fibre per mm<2>.
  8. 8. Metodo per il prelievo ed il trasferimento di campioni per biologia molecolare mediante un dispositivo (1) in accordo con una qualsiasi delle rivendicazioni da 4 a 7, il metodo comprendendo almeno la fase di raccogliere un campione per biologia molecolare su almeno una porzione di raccolta (3) fioccata del dispositivo (1) di prelievo avente un corpo di supporto (2), detta porzione di raccolta (3) comprendendo una prima porzione (2a) di detto corpo di supporto (2) ed una pluralità di fibre (6) attaccate e disposte su detta prima porzione (2a) di detto corpo di supporto (2) mediante floccaggio, detta pluralità di fibre (6) essendo pre-trattata con un tensioattivo o con un tensioattivo cationico e detto metodo comprendendo inoltre la fase di conservare detto campione su detta porzione di raccolta per un intervallo di tempo,
  9. 9. Metodo secondo la rivendicazione 8 per il prelievo ed il trasferimento di campioni di DNA o di RNA e/o di cellule comprendenti campioni di DNA o di RNA e/o comprendente inoltre la fase di rilasciare detto campione per biologia molecolare da detta porzione di raccolta (3) per consentire l'esecuzione di operazioni di biologia molecolare su detto campione.
  10. 10. Uso di un tensioattivo o di un tensioattivo cationico per pre-trattare fibre (6) applicate o da applicare mediante floccaggio su un corpo di supporto (2) di un dispositivo (1) di prelievo e trasferimento di campioni per biologia molecolare, per incrementare la quantità di DNA o RNA rilasciabile dal dispositivo di prelievo ed utilizzabile per operazioni di biologia molecolare rispetto alla quantità rilasciabile ed utilizzabile per operazioni di biologia molecolare ottenibile da fibre (6) non pre-trattate del dispositivo (1).
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