JP2013507979A - グリコシル化された免疫グロブリンの調製方法 - Google Patents
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Abstract
本明細書には、下記の工程を含む、免疫グロブリンの調製方法を記述する：ａ）免疫グロブリンをコードする核酸を含む真核細胞を用意し、ｂ）培地中の単位時間当たり利用できるグルコースの量が一定に維持され、かつ単位時間当たりその培地中でその細胞が最大限に利用できる量の８０％未満に制限された培地中で、前記の真核細胞を培養し、そしてｃ）培養物から免疫グロブリンを回収する。
【選択図】図１
【選択図】図１
Description
本明細書には、細胞における免疫グロブリン調製の分野の方法であって、調製される免疫グロブリンのグリコシル化パターンを培養条件に基づいて改変できる方法を記述する。
近年、免疫グロブリンの生産は常に増加しており、近い将来に免疫グロブリンは各種疾患の処置に利用できる最大グループの療法薬となるであろうと思われる。免疫グロブリンの影響はそれらの特異性から生じる；それには、それらの特異的な標的認識および結合の機能、ならびに抗原／Ｆｃ受容体の結合と同時または結合後の特異的作用の活性化が含まれる。
特異的な標的認識および結合は、免疫グロブリンの可変部により仲介される。作用が生じる他の免疫グロブリン分子部分は、翻訳後修飾、たとえばグリコシル化パターンである。翻訳後修飾は実際に、免疫グロブリンの有効性、安定性、免疫原力潜在性、結合などに対して影響をもつ。それに関連して、補体依存性細胞傷害性（complement-dependent cytotoxicity）（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞性細胞傷害性（antibody-dependent cellular cytotoxicity）（ＡＤＣＣ）、およびアポトーシス誘導に対処しなければならない。
免疫グロブリンのグリコシル化パターン、すなわち結合した糖構造体の糖の組成および数が生物学的特性に強い影響をもつことが報告された(たとえば、Jefferis, R., Biotechnol. Prog. 21 (2005) 11-16を参照)。哺乳動物細胞により産生される免疫グロブリンは２〜３質量％の炭水化物を含有する(Taniguchi, T., et al., Biochem. 24 (1985) 5551-5557)。これは、たとえばクラスＧの免疫グロブリン（ＩｇＧ）において、マウス由来のＩｇＧにおける２．３個のオリゴ糖残基(Mizuochi, T., et al., Arch. Biochem. Biophys. 257 (1987) 387-394)、およびヒト由来のＩｇＧにおける２．８個のオリゴ糖残基と同等であり(Parekh, R.B., et al., Nature 316 (1985) 452-457)、これらのうち一般に２個はＦｃ領域、残りは可変部に位置する(Saba, J.A., et al., Anal. Biochem. 305 (2002) 16-31)。
クラスＧの免疫グロブリンのＦｃ領域において、オリゴ糖残基はアミノ酸残基２９７、すなわちアスパラギン残基（Ａｓｎ２９７と表記される）にＮ−グリコシル化により導入される可能性がある。Youingsらは、ポリクローナルＩｇＧ分子の１５％〜２０％でＦｃ領域にさらに他のＮ−グリコシル化部位が存在することを示した(Youings, A., et al., Biochem. J., 314 (1996) 621-630;たとえば、Endo, T., et al., Mol. Immunol. 32 (1995) 931-940も参照)。不均一な、すなわち非対称的なオリゴ糖プロセシングのため、異なるグリコシル化パターンをもつ多数のイソ形免疫グロブリンが存在する(Patel, T.P., et al., Biochem. J. 285 (1992) 839-845; Ip, C.C., et al., Arch. Biochem. Biophys. 308 (1994) 387-399; Lund, J., et al., Mol. Immunol. 30 (1993) 741-748)。同時に、オリゴ糖の構造および分布は高度に再現性があり（すなわち、非ランダム）、かつ部位特異的である(Dwek, R.A., et al., J. Anat. 187 (1995) 279-292)。
免疫グロブリンの幾つかの特性はＦｃ領域のグリコシル化に直接関連する(たとえば、Dwek, R.A., et al., J. Anat. 187 (1995) 279-292; Lund, J., et al., J. Immunol. 157 (1996) 4963-4969; Lund, J., FASEB J. 9 (1995) 115-119; Wright, A. and Morrison, S.L., J. Immunol. 160 (1998) 3393-3402を参照)；たとえば、熱安定性および溶解性(West, C.M., Mol. Cell. Biochem. 72 (1986) 3-20)、抗原性(Turco, S.J., Arch. Biochem. Biophys. 205 (1980) 330-339)、免疫原性(Bradshaw, J.P., et al., Biochim. Biophys. Acta 847 (1985) 344-351; Feizi, T. and Childs, R.A., Biochem. J. 245 (1987) 1-11; Schauer, R., Adv. Exp. Med. Biol. 228 (1988) 47-72)、クリアランス速度／循環半減期(Ashwell, G. and Harford, J., Ann. Rev. Biochem. 51 (1982) 531-554; McFarlane, I.G., Clin. Sci. 64 (1983) 127-135; Baenziger, J.U., Am. J. Path. 121 (1985) 382-391; Chan, V.T. and Wolf, G., Biochem. J. 247 (1987) 53-62; Wright, A., et al., Glycobiology 10 (2000) 1347-1355; Rifai, A., et al., J. Exp. Med. 191 (2000) 2171-2182; Zukier, L.S., et al., Cancer Res. 58 (1998) 3905-3908)、ならびに特異的生物活性(Jefferis, R. and Lund, J., Antibody Engineering, ed. by Capra, J.D., Chem. Immunol. Basel, Karger, 65 (1997) 111-128)。
グリコシル化パターンに影響を及ぼす要因が調べられた：たとえば、発酵培地中のウシ胎仔血清の存在(Gawlitzek, M., et al., J. Biotechnol. 42(2) (1995) 117-131)、緩衝作用条件(Muething, J., et al., Biotechnol. Bioeng. 83 (2003) 321-334)、溶存酸素濃度(Saba, J.A., et al., Anal. Biochem. 305 (2002) 16-31; Kunkel, J.P., et al., J. Biotechnol. 62 (1998) 55-71; Lin, A.A., et al., Biotechnol. Bioeng. 42 (1993) 339-350)、オリゴ糖の位置およびコンホメーション、ならびに宿主細胞タイプおよび細胞増殖状態(Hahn, T.J. and Goochee, C.F., J. Biol. Chem. 267 (1992) 23982-23987; Jenkins, N., et al., Nat. Biotechnol. 14 (1996) 975-981)、細胞のヌクレオチド−糖代謝(Hills, A.E., et al., Biotechnol. Bioeng. 75 (2001) 239-251)、栄養素制限(Gawlitzek, M., et al., Biotechnol. Bioeng. 46 (1995) 536-544; Hayter, P.M., et al., Biotechnol. Bioeng. 39 (1992) 327-335)、特にグルコース制限(Tachibana, H., et al., Cytotechnology 16 (1994) 151-157)、ならびに細胞外ｐＨ(Borys, M.C., et al., Bio/Technology 11 (1993) 720-724)。
たとえばＮＳ０骨髄腫細胞における免疫グロブリンの組換え発現により、オリゴマンノース構造体およびトランケート型オリゴ糖構造体の増加が観察された(Ip, C.C., et al., Arch. Biochem. Biophys. 308 (1994) 387-399; Robinson, D.K., et al., Biotechnol. Bioeng. 44 (1994) 727-735)。グルコース飢餓条件下で、グリコシル化の変動、たとえばより小さな前駆オリゴ糖の結合またはオリゴ糖部分の完全な不存在が、ＣＨＯ細胞、ネズミ３Ｔ３細胞、ラット肝癌細胞、ラット腎細胞およびネズミ骨髄腫細胞において観察された(Rearick, J.I., et al., J. Biol. Chem. 256 (1981) 6255-6261; Davidson, S.K. and Hunt, L.A., J. Gen. Virol. 66 (1985) 1457-1468; Gershman, H. and Robbins, P.W., J. Biol. Chem. 256 (1981) 7774-7780; Baumann, H. and Jahreis, G.P., J. Biol. Chem. 258 (1983) 3942-3949; Strube, K.-H., et al., J. Biol. Chem. 263 (1988) 3762-3771; Stark, N.J. and Heath, E.C., Arch. Biochem. Biophys. 192 (1979) 599-609)。低グルタミン／グルコース濃度に基づく方法がWong, D.C.F., et al., Biotechnol. Bioeng. 89 (2005) 164-177により報告された。
日本国特許出願JP 62-258252には哺乳動物細胞の潅流培養が記述され、一方、US 5,443,968にはタンパク質分泌細胞のフェドバッチ（fed-batch）培養法（流加培養法）が報告されている。WO 98/41611には、低い乳酸産生を特徴とする代謝状態に細胞を適応させるのに有効な細胞培養法が報告されている。物質を産生させるために細胞を培養する方法がWO 2004/048556に報告されている。Elbein, A.D., Ann. Rev. Biochem. 56 (1987) 497-534には、グルコースの不存在下でインキュベートした哺乳動物細胞はマンノース−９含有構造体の代わりにマンノース−５含有構造体をタンパク質へ伝達することが報告されている。ｐＣＯ２の依存性は、グルコース制限に際してＣＨＯ細胞の増殖、代謝およびＩｇＧ産生に影響を及ぼすことがTakuma, S., et al. in Biotechnol. Bioeng. 97 (2007) 1479-1488により報告されている。
Jefferis, R., Biotechnol. Prog. 21 (2005) 11-16
Taniguchi, T., et al., Biochem. 24 (1985) 5551-5557
Mizuochi, T., et al., Arch. Biochem. Biophys. 257 (1987) 387-394
Parekh, R.B., et al., Nature 316 (1985) 452-457
Saba, J.A., et al., Anal. Biochem. 305 (2002) 16-31
Youings, A., et al., Biochem. J., 314 (1996) 621-630
Endo, T., et al., Mol. Immunol. 32 (1995) 931-940
Patel, T.P., et al., Biochem. J. 285 (1992) 839-845
Ip, C.C., et al., Arch. Biochem. Biophys. 308 (1994) 387-399
Lund, J., et al., Mol. Immunol. 30 (1993) 741-748
Dwek, R.A., et al., J. Anat. 187 (1995) 279-292
Lund, J., et al., J. Immunol. 157 (1996) 4963-4969
Lund, J., FASEB J. 9 (1995) 115-119
Wright, A. and Morrison, S.L., J. Immunol. 160 (1998) 3393-3402
West, C.M., Mol. Cell. Biochem. 72 (1986) 3-20
Turco, S.J., Arch. Biochem. Biophys. 205 (1980) 330-339
Bradshaw, J.P., et al., Biochim. Biophys. Acta 847 (1985) 344-351
Feizi, T. and Childs, R.A., Biochem. J. 245 (1987) 1-11
Schauer, R., Adv. Exp. Med. Biol. 228 (1988) 47-72
Ashwell, G. and Harford, J., Ann. Rev. Biochem. 51 (1982) 531-554
McFarlane, I.G., Clin. Sci. 64 (1983) 127-135
Baenziger, J.U., Am. J. Path. 121 (1985) 382-391
Chan, V.T. and Wolf, G., Biochem. J. 247 (1987) 53-62
Wright, A., et al., Glycobiology 10 (2000) 1347-1355
Rifai, A., et al., J. Exp. Med. 191 (2000) 2171-2182
Zukier, L.S., et al., Cancer Res. 58 (1998) 3905-3908
Jefferis, R. and Lund, J., Antibody Engineering, ed. by Capra, J.D., Chem. Immunol. Basel, Karger, 65 (1997) 111-128
Gawlitzek, M., et al., J. Biotechnol. 42(2) (1995) 117-131
Muething, J., et al., Biotechnol. Bioeng. 83 (2003) 321-334
Kunkel, J.P., et al., J. Biotechnol. 62 (1998) 55-71
Lin, A.A., et al., Biotechnol. Bioeng. 42 (1993) 339-350
Hahn, T.J. and Goochee, C.F., J. Biol. Chem. 267 (1992) 23982-23987
Jenkins, N., et al., Nat. Biotechnol. 14 (1996) 975-981
Hills, A.E., et al., Biotechnol. Bioeng. 75 (2001) 239-251
Gawlitzek, M., et al., Biotechnol. Bioeng. 46 (1995) 536-544
Hayter, P.M., et al., Biotechnol. Bioeng. 39 (1992) 327-335
Tachibana, H., et al., Cytotechnology 16 (1994) 151-157
Borys, M.C., et al., Bio/Technology 11 (1993) 720-724
Robinson, D.K., et al., Biotechnol. Bioeng. 44 (1994) 727-735
Rearick, J.I., et al., J. Biol. Chem. 256 (1981) 6255-6261
Davidson, S.K. and Hunt, L.A., J. Gen. Virol. 66 (1985) 1457-1468
Gershman, H. and Robbins, P.W., J. Biol. Chem. 256 (1981) 7774-7780
Baumann, H. and Jahreis, G.P., J. Biol. Chem. 258 (1983) 3942-3949
Strube, K.-H., et al., J. Biol. Chem. 263 (1988) 3762-3771
Stark, N.J. and Heath, E.C., Arch. Biochem. Biophys. 192 (1979) 599-609
Wong, D.C.F., et al., Biotechnol. Bioeng. 89 (2005) 164-177
Elbein, A.D., Ann. Rev. Biochem. 56 (1987) 497-534
Takuma, S., et al. in Biotechnol. Bioeng. 97 (2007) 1479-1488
真核細胞が産生するポリペプチドのグリコシル化パターンにおけるマンノース−５糖構造体の量を、培養プロセスで細胞に流加するグルコースの量に基づいて改変できることが見出された。利用できるグルコースの量を減らすことによって、たとえばＤＧＬ値を１．０からより小さな、たとえば０．８、０．６、０．５、０．４または０．２の値に変化させることによって、グリコシル化パターンにおけるマンノース−５糖構造体の量の改変を達成できる。ＤＧＬ値またはそれぞれ単位時間当たり利用できるグルコースの量を、一定にかつ単位時間当たり規定した低い値に維持しなければならない。
本明細書に記述する第一観点は、真核細胞においてポリペプチド（一態様においては免疫グロブリン）を調製するための下記の工程を含む方法である：
ａ）ポリペプチドをコードする核酸を含む真核細胞を用意し、
ｂ）グルコース制限度（degree of glucose limitation）（ＤＧＬ）が一定に維持され、かつＤＧＬが０．８未満である条件下で、その細胞を培養し、そして
ｃ）培養物からポリペプチドを回収する；
その際、マンノース−５糖構造体を含むポリペプチドの画分は、マンノース−５糖構造体を含むポリペプチドの量、ポリペプチドＧ（０）イソ型の量、ポリペプチドＧ（１）イソ型の量、およびポリペプチドＧ（２）イソ型の量を含めた合計の１０％以下である。
ａ）ポリペプチドをコードする核酸を含む真核細胞を用意し、
ｂ）グルコース制限度（degree of glucose limitation）（ＤＧＬ）が一定に維持され、かつＤＧＬが０．８未満である条件下で、その細胞を培養し、そして
ｃ）培養物からポリペプチドを回収する；
その際、マンノース−５糖構造体を含むポリペプチドの画分は、マンノース−５糖構造体を含むポリペプチドの量、ポリペプチドＧ（０）イソ型の量、ポリペプチドＧ（１）イソ型の量、およびポリペプチドＧ（２）イソ型の量を含めた合計の１０％以下である。
一態様において、ＤＧＬを０．８から０．２までの範囲で一定に維持する。さらに他の態様において、ＤＧＬを０．６から０．４までの範囲で一定に維持する。他の態様において、マンノース−５糖構造体を含むポリペプチドの画分は、マンノース−５糖構造体を含むポリペプチド、ポリペプチドＧ（０）イソ型、ポリペプチドＧ（１）イソ型、およびポリペプチドＧ（２）イソ型を含めた合計の８％以下である。さらに他の態様においてポリペプチドは免疫グロブリンであり、一態様においてクラスＧまたはＥの免疫グロブリンである。
本明細書に記述する他の観点は、免疫グロブリンを調製するための下記の工程を含む方法である：
ａ）免疫グロブリンをコードする核酸を含む哺乳動物細胞を用意し、
ｂ）培地中の単位時間当たり利用できるグルコースの量が一定に維持され、かつ単位時間当たりその培地中でその細胞が最大限に利用できる量の８０％未満に制限された培地中で、前記の真核細胞を培養し、そして
ｃ）細胞または培地から免疫グロブリンを回収する。
ａ）免疫グロブリンをコードする核酸を含む哺乳動物細胞を用意し、
ｂ）培地中の単位時間当たり利用できるグルコースの量が一定に維持され、かつ単位時間当たりその培地中でその細胞が最大限に利用できる量の８０％未満に制限された培地中で、前記の真核細胞を培養し、そして
ｃ）細胞または培地から免疫グロブリンを回収する。
一態様において、培地中の単位時間当たり利用できるグルコースの量は一定に維持され、かつ８０％から２０％までの範囲の値に制限される。さらに他の態様において、この範囲は６０％から４０％までである。他の態様において、培地中の細胞はその培地中で生存可能な細胞である。
本明細書に記述する観点の一態様において、真核細胞はＣＨＯ細胞、ＮＳ０細胞、ＨＥＫ細胞、ＢＨＫ細胞、ハイブリドーマ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞、昆虫細胞、またはＳｐ２／０細胞から選択される。一態様において、真核細胞はチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。本明細書に記述する観点の他の態様において、培養は約ｐＨ７．０から約ｐＨ７．２までの範囲のｐＨ値で行なわれる。
本明細書に記述する観点のさらに他の態様において、培養は連続培養またはフェドバッチ培養である。本方法は、他の態様において、ポリペプチドを精製する最終工程を含むことができる。さらに他の態様において、細胞を６〜２０日間、または６〜１５日間、培養する。さらに他の態様において、細胞を６〜８日間培養する。
本明細書に記述する他の観点は免疫グロブリンを含む組成物であり、その際、組成物は本明細書に記述する方法で調製されたものである。
一態様において、免疫グロブリンは抗ＩＬ−６Ｒ抗体である。さらに他の態様において、抗ＩＬ−６Ｒ抗体はトシリズマブ（Tocilizumab）を含む。他の態様において、抗ＩＬ−６Ｒ抗体に結合したマンノース−５糖構造体は８％以下である。さらに他の態様において、マンノース−５糖構造体は６％以下である。他の態様において、マンノース−５糖構造体は４％以下である。さらに他の態様において、抗ＩＬ−６Ｒ抗体に結合したＧ（０）糖構造体は４０％から４６％までの範囲であり、抗ＩＬ−６Ｒ抗体に結合したＧ（２）糖構造体は９％から１１％までの範囲である。
一態様において、免疫グロブリンは抗ＩＬ−６Ｒ抗体である。さらに他の態様において、抗ＩＬ−６Ｒ抗体はトシリズマブ（Tocilizumab）を含む。他の態様において、抗ＩＬ−６Ｒ抗体に結合したマンノース−５糖構造体は８％以下である。さらに他の態様において、マンノース−５糖構造体は６％以下である。他の態様において、マンノース−５糖構造体は４％以下である。さらに他の態様において、抗ＩＬ−６Ｒ抗体に結合したＧ（０）糖構造体は４０％から４６％までの範囲であり、抗ＩＬ−６Ｒ抗体に結合したＧ（２）糖構造体は９％から１１％までの範囲である。
本明細書には下記の工程を含む、免疫グロブリンの調製方法を記述する：
ａ）免疫グロブリンをコードする核酸を含む哺乳動物細胞を、０．８未満の一定のＤＧＬ（すなわち、単位時間当たり利用できるグルコースの量が一定であり、かつ単位時間当たりその細胞が最大限に利用できるグルコースの量の８０％以下である）の培地中で培養し、そして
ｂ）細胞または培地から免疫グロブリンを回収する。
ａ）免疫グロブリンをコードする核酸を含む哺乳動物細胞を、０．８未満の一定のＤＧＬ（すなわち、単位時間当たり利用できるグルコースの量が一定であり、かつ単位時間当たりその細胞が最大限に利用できるグルコースの量の８０％以下である）の培地中で培養し、そして
ｂ）細胞または培地から免疫グロブリンを回収する。
本明細書に記述する方法で免疫グロブリンを得ることができ、その際、マンノース−５糖構造体を含む免疫グロブリンの量は調整したＤＧＬ値に依存し、その量はマンノース−５糖構造体を含む免疫グロブリンの量、および免疫グロブリンＧ（０）イソ型の量、および免疫グロブリンＧ（１）イソ型の量、および免疫グロブリンＧ（２）イソ型の量の合計のうちの画分である。一態様において、ＤＧＬは０．８から０．２までである。この態様において、画分は１０％以下である。他の態様において、ＤＧＬは０．６から０．４までである。この態様において、画分は６％以下である。本明細書に記述する方法で、マンノース−５糖構造体をもつ免疫グロブリンの画分が、マンノース−５糖構造体を含む免疫グロブリンの量、免疫グロブリンＧ（０）イソ型の量、免疫グロブリンＧ（１）イソ型の量、および免疫グロブリンＧ（２）イソ型の量を含む合計の１０％以下である免疫グロブリンを得ることができる。他の態様において、画分は液体クロマトグラフィー法で測定した面積％画分である。一態様において、ＤＧＬは０．８から０．２までの範囲に維持される。他の態様において、ＤＧＬは０．６から０．２までの範囲に維持される。さらに他の態様において、ＤＧＬは０．６から０．４までの範囲に維持される。一態様において、単位時間当たり細胞が最大限に利用できるグルコースの量は、すべての化合物が過剰にある（すなわち、細胞の増殖を制限する化合物がない）培養に際して利用されるグルコースの平均量であり、少なくとも５回の培養に基づいて決定される。一態様において、この画分は培養７日目に測定される。
本発明を実施するのに有用な、当業者に既知の方法および技術は、たとえば下記に記載されている：Ausubel, F.M. (ed.), Current Protocols in Molecular Biology, Volumes I to III (1997), Wiley and Sons; Sambrook, J., et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Third Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (2001); Glover, N.D. (ed.), DNA Cloning: A Practical Approach, Volumes I and II (1985); Freshney, R.I. (ed.), Animal Cell Culture (1986); Miller, J.H. and Calos, M.P. (eds.), Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1987); Watson, J.D., et al., Recombinant DNA, Second Edition, N.Y., W.H. Freeman and Co (1992); Winnacker, E.L., From Genes to Clones, N.Y., VCH Publishers (1987); Celis, J. (ed.), Cell Biology, Second Edition, Academic Press (1998); Freshney, R.I., Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Techniques, Second Edition, Alan R. Liss, Inc., N.Y. (1987)。
組換えＤＮＡ技術を用いてポリペプチドの多数の誘導体を製造することができる。そのような誘導体は、たとえば個々のまたは数個のアミノ酸位置において、置換、変更または交換により修飾されたものであってもよい。誘導体化は、たとえば部位特異的変異誘発により実施できる。そのようなバリエーションは当業者が容易に実施できる(Sambrook, J., et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Third Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, USA (2001); Hames, B.D. and Higgins, S.G., Nucleic acid hybridization - a practical approach (1985) IRL Press, Oxford, England)。
用語“核酸”は、天然に存在するか、または一部もしくは全体が天然に存在しない核酸分子であって、ポリペプチドをコードするものを表わす。核酸は、単離されるかあるいは化学的手段で合成できるＤＮＡフラグメントの構築体（build up）であってもよい。核酸は、たとえば発現プラスミドにおいて、または真核細胞のゲノム／染色体において、他の核酸に組み込むことができる。用語“プラスミド”には、シャトルプラスミドおよび発現プラスミドが含まれる。一般にプラスミドは、それぞれ原核細胞におけるプラスミドの複製および選択のための複製起点（たとえば、ＣｏｌＥ１複製起点）および選択マーカー（たとえば、アンピシリンまたはテトラサイクリン耐性遺伝子）を含めた、原核細胞増殖ユニットをも含むであろう。当業者には、たとえばポリペプチドのアミノ酸配列を、各アミノ酸配列をコードする対応する核酸に変換するための手順および方法が周知である。したがって核酸は、個々のヌクレオチドからなるその核酸配列によっても、またそれによりコードされるポリペプチドのアミノ酸配列によっても特徴付けられる。
用語“発現カセット”は、少なくとも含まれる構造遺伝子が細胞において発現し、場合により細胞から分泌されるのに必要なエレメント、たとえばプロモーター、ポリアデニル化部位、ならびに３’側および５’側−非翻訳領域を含む核酸を表わす。
用語“遺伝子”は、たとえば染色体上またはプラスミド上のセグメントであって、ポリペプチドの発現に必要なものを表わす。遺伝子は、コード領域のほかに、プロモーター、イントロン、および１以上の転写ターミネーターを含めた、他の機能性エレメントを含む。“構造遺伝子”は、遺伝子のシグナル配列を含まないコード領域を表わす。
用語“発現”は、細胞内での構造遺伝子の転写および翻訳を表わす。細胞内での構造遺伝子の転写のレベルは、細胞内に存在する対応するｍＲＮＡの量に基づいて測定できる。たとえば、選択した核酸から転写されるｍＲＮＡは、ＰＣＲにより、またはノーザンハイブリダイゼーションにより定量できる(たとえば、Sambrook et al. (前掲)を参照)。核酸によりコードされるポリペプチドは、種々の方法により定量できる；たとえば、ＥＬＩＳＡによるか、そのポリペプチドの生物活性の測定によるか、またはそのような活性とは無関係な方法、たとえばウェスタンブロット法もしくはラジオイムノアッセイの使用、そのポリペプチドを認識してそれに結合する抗体の使用による(たとえば、Sambrook et al. (前掲)を参照)。
用語“細胞”は、ポリペプチドをコードする核酸（一態様においては異種ポリペプチド）が導入された細胞を表わす。用語“細胞”は、プラスミド／ベクターの増殖のために用いる原核細胞と、構造遺伝子の発現のために用いる真核細胞の両方を含む。一態様において、免疫グロブリンの発現のための真核細胞は哺乳動物細胞である。他の態様において、哺乳動物細胞はＣＨＯ細胞、ＮＳ０細胞、Ｓｐ２／０細胞、ＣＯＳ細胞、ＨＥＫ細胞、ＢＨＫ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞、およびハイブリドーマ細胞から選択される。真核細胞はさらに昆虫細胞、たとえば毛虫の細胞（ヨトウガ（Spodoptera frugiperda）、ｓｆ細胞）、ショウジョウバエの細胞（キイロショウジョウバエ（Drosophila melanogaster））、蚊の細胞（ネッタイシマカ（Aedes aegypti）、セスジヤブカ（ヒトスジシマカ）（Aedes albopictus））、およびカイコの細胞（カイコガ（Bombyx Mori））などから選択できる。
用語“ポリペプチド”は、自然界または合成のいずれで生成したかにかかわらず、ペプチド結合により連結したアミノ酸残基のポリマーを表わす。約２０アミノ酸残基未満のポリペプチドを“ペプチド”と呼ぶことができる。１００アミノ酸残基を超えるポリペプチド、または１より多いポリペプチドを含む共有結合および非共有結合した凝集物を“タンパク質”と呼ぶことができる。ポリペプチドは非アミノ酸成分、たとえば炭水化物基を含む場合がある。非アミノ酸成分はそのポリペプチドを産生する細胞によってポリペプチドに付加される可能性があり、細胞のタイプに応じて異なる可能性がある。本明細書中でポリペプチドはそれらのアミノ酸配列によりＮ末端からＣ末端方向に規定される。それらへの炭水化物基などの付加物は一般に明記されないが、それにもかかわらず存在する可能性がある。
用語“異種ＤＮＡ”または“異種ポリペプチド”は、その細胞内に自然界では存在しないＤＮＡ分子もしくはポリペプチドまたはＤＮＡ分子の集団もしくはポリペプチドの集団を表わす。細胞種に由来するＤＮＡ（すなわち内在性ＤＮＡ）が宿主のものではないＤＮＡ（すなわち外来ＤＮＡ）と結合するならば、特定の細胞にとって異種であるＤＮＡ分子はその細胞種に由来するＤＮＡを含む可能性がある。たとえば、細胞のものではないＤＮＡセグメント（たとえば、ポリペプチドをコードするもの）が細胞のＤＮＡセグメント（たとえば、プロモーターを含む）に作動可能な状態で連結したものを含むＤＮＡ分子は、異種ＤＮＡ分子とみなすことができる。同様に、異種ＤＮＡ分子は外来プロモーターに作動可能な状態で連結した内在性構造遺伝子を含むことができる。異種ＤＮＡ分子によりコードされるポリペプチドは“異種”ポリペプチドである。
用語“発現プラスミド”は、発現させるべきポリペプチドをコードする少なくとも１つの構造遺伝子を含む核酸を表わす。一般に、発現プラスミドは下記のものを含む；原核細胞プラスミド増殖ユニット：これには、複製起点、および選択マーカー、たとえば大腸菌（E. coli）については真核細胞選択マーカーが含まれる；ならびに目的とする構造遺伝子（単数または複数）の発現のための１以上の発現カセット：これらはそれぞれ、プロモーター、少なくとも１つの構造遺伝子、および転写ターミネーター（ポリアデニル化シグナルを含む）を含む。遺伝子発現は通常はプロモーターの制御下に置かれ、そのような構造遺伝子はプロモーターに“作動可能な状態で連結”しているべきである。同様に、調節エレメントとコアプロモーターは、その調節エレメントがそのコアプロモーターの活性を調節するならば、作動可能な状態で連結している。
用語“単離されたポリペプチド”は、付随する細胞成分、たとえばそのポリペプチドと共有結合していない炭水化物、脂質、または他のタンパク性もしくは非タンパク性の不純物を本質的に含まないポリペプチドを表わす。一般に、単離されたポリペプチドの調製物は、ある態様においてはそのポリペプチドを高純度形態で、すなわち少なくとも約８０％の純度、少なくとも約９０％の純度、少なくとも約９５％の純度、９５％を超える純度、または９９％を超える純度で含有する。特定のタンパク質調製物が単離されたポリペプチドを含有することを示すための１方法は、調製物のドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ｐａｇｅ）およびそのゲルのクーマシーブリリアントブルー染色の後に単一バンドが出現することによる。しかし、用語“単離された”は、同じポリペプチドが別の物理的形態、たとえば二量体で、または別のグリコシル化もしくは誘導体化形態で存在するのを除外しない。
免疫グロブリンは一般に５つの異なるクラスに配属される：ＩｇＡ（クラスＡの免疫グロブリン）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭ。これらのクラス間で、免疫グロブリンはそれらの全体的構造および／またはアミノ酸配列が異なるが、同じ構築ブロックをもつ。完全な免疫グロブリンは２対のポリペプチド鎖から構成される：それぞれ、免疫グロブリン軽ポリペプチド鎖（短い：軽鎖）および免疫グロブリン重ポリペプチド鎖（短い：重鎖）を含む。これらの鎖は可変部と定常部を含む。軽鎖においては両領域とも１ドメインからなり、これに対し重鎖においては可変部は１ドメインからなり、定常部は最高５つのドメインからなる（Ｎ末端からＣ末端方向へ）：ＣＨ１ドメイン、場合によりヒンジ部ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、および場合によりＣＨ４ドメイン。免疫グロブリンはＦａｂ領域とＦｃ領域に分けることができる。軽鎖全体、重鎖可変ドメイン、およびＣＨ１ドメインをＦａｂ領域（フラグメント抗原結合領域）と呼ぶ。Ｆｃ領域は、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、および場合によりＣＨ４ドメインを含む。
本明細書中で用いる用語“免疫グロブリン”は、１以上のポリペプチドからなるタンパク質を表わす。エンコーディング免疫グロブリン遺伝子は、種々の定常部遺伝子および無数の免疫グロブリン可変部遺伝子を含む。“免疫グロブリン”には、一態様において、モノクローナル抗体、およびそのフラグメント、たとえば単離された重鎖、または重鎖定常部、ならびに融合ポリペプチドであって少なくとも免疫グロブリン重鎖ＣＨ２ドメインを含むものが含まれる。本明細書に記述する方法の一態様において免疫グロブリンは完全な免疫グロブリンであり、他の態様において免疫グロブリンは完全な免疫グロブリンのＦｃ領域である。他の態様において、免疫グロブリンは免疫グロブリン、または免疫グロブリンフラグメント、または免疫グロブリンコンジュゲートである。
用語“免疫グロブリンフラグメント”は、少なくとも免疫グロブリン デルタ、イプシロンもしくはアルファ重鎖のＣＨ２ドメイン、および／または免疫グロブリン イプシロンもしくはデルタ重鎖のＣＨ３ドメインを含む、ポリペプチドを表わす。その誘導体およびバリアントであって、ＣＨ２ドメインまたはＣＨ３ドメイン中のＮ−グリコシル化モチーフＡｓｎ−Ｘａａ−Ｓｅｒ／Ｔｈｒが変化していないものも包含される。
用語“免疫グロブリンコンジュゲート”は、少なくとも免疫グロブリン デルタ、イプシロンもしくはアルファ重鎖のＣＨ２ドメインおよび／または免疫グロブリン イプシロンもしくはデルタ重鎖のＣＨ３ドメインが、非免疫グロブリンポリペプチドに融合したものを含むポリペプチドを表わす。それらにおいて、ＣＨ２ドメインまたはＣＨ３ドメイン中のＮ−グリコシル化モチーフＡｓｎ−Ｘａａ−Ｓｅｒ／Ｔｈｒは変化していない。
免疫グロブリン重鎖のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７（ＩｇＧ、ＩｇＥ）もしくはＡｓｎ２６３（ＩｇＡ）に、および／またはＣＨ３ドメインのＡｓｎ３９４、Ａｓｎ４４５、またはＡｓｎ４９６（ＩｇＥ、ＩｇＤ）に結合したオリゴ糖は、二分岐（biantennary）構造をもつ(Mizuochi, T., et al., Arch. Biochem. Biophys. 257 (1987) 387-394)、すなわちそれらはコア構造
Man(α1-4)GlcNAc(β1-4)GlcNAc→Asn
からなり、末端ＧｌｃＮＡｃ残基に任意選択的Ｆｕｃ（α１−６）結合をもつ。このコア構造の末端マンノースに次式をもつ２つの外側アームが結合している：
Gal(β1-4)GlcNAc(β1-2)Man(α1-6)→Man、および
Gal(β1-4)GlcNAc(β1-2)Man(α1-3)→Man
これらにおいて末端ガラクトース残基は任意選択的である（Ｍａｎ＝マンノース、ＧｌｃＮＡｃ＝Ｎ−アセチルグルコース、Ｇａｌ＝ガラクトース；Ｆｕｃ＝フコース）。
Man(α1-4)GlcNAc(β1-4)GlcNAc→Asn
からなり、末端ＧｌｃＮＡｃ残基に任意選択的Ｆｕｃ（α１−６）結合をもつ。このコア構造の末端マンノースに次式をもつ２つの外側アームが結合している：
Gal(β1-4)GlcNAc(β1-2)Man(α1-6)→Man、および
Gal(β1-4)GlcNAc(β1-2)Man(α1-3)→Man
これらにおいて末端ガラクトース残基は任意選択的である（Ｍａｎ＝マンノース、ＧｌｃＮＡｃ＝Ｎ−アセチルグルコース、Ｇａｌ＝ガラクトース；Ｆｕｃ＝フコース）。
用語“免疫グロブリンＧ（０）イソ型の量、免疫グロブリンＧ（１）イソ型の量、および免疫グロブリンＧ（２）イソ型の量”は、免疫グロブリンのアスパラギン（Ａｓｎ）にＮ−結合した種々の異種二分岐オリゴ糖の量の合計を表わす。Ｇ（２）イソ型はオリゴ糖構造体の外側アームそれぞれに末端ガラクトース残基をもち、Ｇ（１）イソ型は（α１−６）または（α１−３）結合した外側アームのいずれかのみにガラクトース残基を保有し、Ｇ（０）イソ型は両方の外側アームにガラクトース残基を保有しない。
用語“マンノース−５糖構造体”は、ポリペプチドのＡｓｎ残基に連結して、５つのマンノース残基および２つのＮ−アセチルグルコースコア残基を含むかあるいはそれらからなる三分岐（triantennary）構造を形成した、オリゴマンノース構造体を表わす。
本明細書に記述する１観点は、下記の工程を含む免疫グロブリンの調製方法である：
ａ）免疫グロブリンをコードする１以上の核酸を含む真核細胞、好ましくは哺乳動物細胞を、培地中の単位時間当たり利用できるグルコースの量が一定に維持され、かつ単位時間当たりその培地中でその細胞が最大限に利用できる量の８０％未満の値に制限された培地中で培養し、そして
ｂ）細胞または培地から免疫グロブリンを回収し、これにより免疫グロブリンを調製する。
ａ）免疫グロブリンをコードする１以上の核酸を含む真核細胞、好ましくは哺乳動物細胞を、培地中の単位時間当たり利用できるグルコースの量が一定に維持され、かつ単位時間当たりその培地中でその細胞が最大限に利用できる量の８０％未満の値に制限された培地中で培養し、そして
ｂ）細胞または培地から免疫グロブリンを回収し、これにより免疫グロブリンを調製する。
この方法で、マンノース−糖５構造体を含む免疫グロブリンを最大で１０％含む免疫グロブリンが得られる。この１０％は、マンノース−５糖構造体を含む免疫グロブリンの量、免疫グロブリンＧ（０）イソ型の量、免疫グロブリンＧ（１）イソ型の量、および免疫グロブリンＧ（２）イソ型の量の合計に基づいて計算される。
用語“グルコース制限度”とそれの略号“ＤＧＬ”は、本明細書中で互換性をもって使用でき、培養物中の単一細胞の現時点のグルコース比消費速度−対−その単一細胞または同じ種類の単一細胞の既知の最大グルコース比消費速度の比を表わす。グルコース制限度は下記のとおり定義される：
ここで、
ｑＧｌｃ＝単一細胞の現時点のグルコース比消費速度；
ｑＧｌｃｍａｘ＝その単一細胞または同じ種類の単一細胞について既知の最大グルコース比消費速度。
ｑＧｌｃ＝単一細胞の現時点のグルコース比消費速度；
ｑＧｌｃｍａｘ＝その単一細胞または同じ種類の単一細胞について既知の最大グルコース比消費速度。
ＤＧＬはＤＧＬｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅと１の間で変動させることができ、ここでＤＧＬｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ（＜１および＞０）は完全な増殖制限を表わし、１は無制限または完全なグルコース過剰を表わす。
ポリペプチド、たとえば免疫グロブリンへの糖構造体の導入は翻訳後修飾である。各細胞のグリコシル化操作は不完全であるため、発現した各ポリペプチドは、種々の糖構造体を含むグリコシル化パターンで得られる。したがって、ポリペプチドはそれを発現する細胞から、同一ポリペプチド、すなわち同一アミノ酸配列をもつものの、異なるグリコシル化形態を含む組成物の形態で得られる。個々の糖構造体の合計はグリコシル化パターンとして表わされ、これには糖構造体を全く含まないポリペプチド、異なるプロセシングを受けた糖構造体および／または異なる組成の糖構造体を含むポリペプチドが含まれる。
糖構造体のひとつはマンノース−５糖構造体（高マンノース、Ｍａｎ５、Ｍ５、またはオリゴ−マンノースとも表記される）である。培養時間の長期化に伴って、またはグルコース飢餓状態で、マンノース−５糖構造体を含む組換え産生されたポリペプチドの画分が増加すると報告されている(Robinson, D.K., et al., Biotechnol. Bioeng. 44 (1994) 727-735; Elbein, A.D., Ann. Rev. Biochem. 56 (1987) 497-534)。
真核細胞が産生するポリペプチドのグリコシル化パターンにおけるマンノース−５糖構造体の量を、培養プロセスで細胞に流加するグルコースの量に基づいて改変できることが見出された。グルコースの量を減らすことによって、すなわちＤＧＬ値を１．０からより小さな、たとえば０．８、０．６、０．５、０．４または０．２の値に変化させることによって、グリコシル化パターンにおけるマンノース−５糖構造体の量の改変を達成できることが見出された。一態様において、ＤＧＬ値は０．８から０．２まで、または０．６から０．４までの範囲内の値で一定に維持される。すなわち、ポリペプチド、一態様において免疫グロブリンの調製は、グリコシル化パターンにおいて規定量のマンノース−５糖構造体を含むポリペプチドを得るために、培養細胞が利用できるグルコースの量を制限した条件下で実施できる。細胞が（一態様においては、対数増殖している細胞が）単位時間当たり最大限に利用できるグルコースの量の８０％以下の量のグルコースを単位時間当たり利用できる（すなわち、０．８以下のＤＧＬをもつ）培養により、１．０のＤＧＬをもつ培養と比較してマンノース−５糖構造体の量が変化したグリコシル化パターンをもつポリペプチドが得られることが見出された。一態様において、細胞密度は生細胞密度である。さらに、得られるポリペプチド収率が増大する。
用語“細胞が単位時間当たり最大限に利用できるグルコースの量”は、単一細胞が最適増殖条件下で対数増殖期に何ら栄養素制限のない培養において単位時間当たり最大限に消費または利用または代謝できるグルコースの量を表わす。したがって、細胞が単位時間当たり最大限に利用できるグルコースの量は、何ら栄養素制限のない培養において細胞が最適増殖条件下で対数増殖期に単位時間当たり代謝するグルコースの量を測定することにより決定できる。利用できるグルコースの量をそれ以上増加させても、細胞が単位時間当たり最大限に利用できるグルコースの量はそれ以上は増加しない、すなわち変化しないであろう。この量が単一細胞の最大グルコース消費レベルを規定する。これは、遺伝子修飾した形の細胞がよりいっそう高い最大グルコース消費レベルをもつ可能性がないことを意味するものではない。あるいは、細胞が単位時間当たり最大限に利用できるグルコースの量は、これまでの培養およびモニターされたデータに基づいて決定できる。
本明細書に記述する方法は、測定および制御のための努力が最小限に抑えられることに関連して特に実施するのが簡単であり、特に経済的である。
限定ではないが、たとえば栄養素供給が不十分であると、培養細胞は不経済な状態で増殖して栄養素を最大速度で消費する。消費される培地栄養素のひとつはグルコースであり、これは培養細胞が細胞の代謝のためのエネルギーおよび構築ブロックを産生するために代謝する。過剰のグルコースの存在下では、細胞の代謝はグルコースについて最大の代謝回転速度で進行している。細胞が単位時間当たり最大限に利用できるグルコースの量は、たとえば、制限されたグルコースでの、すなわちその細胞が単位時間当たり利用できる量より少ないグルコース量での培養にも用いられる同じ培養条件を用いてまたは同じ培養条件下で培養された、過剰のグルコースの存在下で対数増殖している細胞のグルコース消費量から決定できる。この最大量は、固定した時間範囲の最初と最後の細胞密度およびグルコース濃度を測定することによって、容易に計算できる。この値は、普通は０．００６から１９０ｍｍｏｌ／時間／１０９細胞までの範囲にある(Baker, K.N., et al., Biotechnol. Bioeng. 73 (2001) 188-202; WO 98/41611; Muething, J., et al., Biotechnol. Bioeng. 83 (2003) 321-334; WO 2004/048556)。一態様において、標準的なプロセス条件下にｐＨ７．０で、ｑＧｌｃｍａｘは約０．１４２ｍｍｏｌ／時間／１０９細胞である。
限定ではないが、たとえば栄養素供給が不十分であると、培養細胞は不経済な状態で増殖して栄養素を最大速度で消費する。消費される培地栄養素のひとつはグルコースであり、これは培養細胞が細胞の代謝のためのエネルギーおよび構築ブロックを産生するために代謝する。過剰のグルコースの存在下では、細胞の代謝はグルコースについて最大の代謝回転速度で進行している。細胞が単位時間当たり最大限に利用できるグルコースの量は、たとえば、制限されたグルコースでの、すなわちその細胞が単位時間当たり利用できる量より少ないグルコース量での培養にも用いられる同じ培養条件を用いてまたは同じ培養条件下で培養された、過剰のグルコースの存在下で対数増殖している細胞のグルコース消費量から決定できる。この最大量は、固定した時間範囲の最初と最後の細胞密度およびグルコース濃度を測定することによって、容易に計算できる。この値は、普通は０．００６から１９０ｍｍｏｌ／時間／１０９細胞までの範囲にある(Baker, K.N., et al., Biotechnol. Bioeng. 73 (2001) 188-202; WO 98/41611; Muething, J., et al., Biotechnol. Bioeng. 83 (2003) 321-334; WO 2004/048556)。一態様において、標準的なプロセス条件下にｐＨ７．０で、ｑＧｌｃｍａｘは約０．１４２ｍｍｏｌ／時間／１０９細胞である。
本明細書に記述する方法は、一態様において、単位時間当たり利用できるグルコースの量が一定に、かつ単位時間当たりその細胞が最大限に利用できるグルコースの量の８０％以下（０．８≧ＤＧＬ＞０）に維持される条件下で実施され、一態様においては利用できるグルコースの量は一定に、かつ６０％以下（０．６≧ＤＧＬ＞０）に、他の態様においては５０％以下（０．５≧ＤＧＬ＞０）に、さらに他の態様においては約４０％に維持される。本出願で用いる用語“約”は、その数値が厳密な数値ではなく、それはある範囲の中央点にすぎないことを表わし、その際、その数値は最大１０％変動できる；すなわち、用語“約４０％”は４４％から３６％までの範囲（ＤＧＬ＝０．４４〜０．３６）を表わす。
一態様において、培養は、単位時間当たりその細胞が最大限に利用できるグルコースの量の８０％〜１０％の範囲で一定に維持される量のグルコースを単位時間当たり利用できる状態で行なわれる（０．８≧ＤＧＬ≧０．１）。他の態様において、利用できるグルコースの量は６０％〜１０％の範囲で一定に維持される（０．６≧ＤＧＬ≧０．１）。さらに他の態様において、利用できるグルコースの量は５０％〜１０％の範囲で一定に維持される（０．５≧ＤＧＬ≧０．１）。他の態様において、利用できるグルコースの量は４５％〜２０％の範囲で一定に維持される（０．４５≧ＤＧＬ≧０．２）。同様に、ある態様において、利用できるグルコースの量は８０％〜６０％の範囲で一定に維持される（０．８≧ＤＧＬ≧０．６）。
一態様において本方法は、ＤＧＬが一定に約０．４の値に維持される条件下で細胞を培養する工程を含み、これによれば培養は１．０〜０．５のＤＧＬで開始され、ＤＧＬを約０．４の値に低下させ、その後はこのＤＧＬを一定に維持することを含む。一態様において、ＤＧＬの低下は１００時間以内の期間である。用語“ＤＧＬを一定に維持する”および文法的にそれの均等物は、そのＤＧＬ値がある期間維持されること、すなわちＤＧＬ値の変動がその数値の１０％以内であることを表わす（たとえば、図２を参照）。
免疫グロブリンは、産生後に、直接または細胞を破壊した後に回収される。回収された免疫グロブリンは、一態様において、当業者に既知の方法で精製される。タンパク質精製のために種々の方法が十分に確立され、広く使用されている；たとえば、微生物タンパク質によるアフィニティークロマトグラフィー（たとえば、プロテインＡまたはプロテインＧアフィニティークロマトグラフィー）、イオン交換クロマトグラフィー（たとえば、陽イオン交換（カルボキシメチル樹脂）、陰イオン交換（アミノエチル樹脂）および混合型交換）、チオ親和性（thiophilic）吸着（たとえば、ベータ−メルカプトエタノールその他のＳＨリガンドによる）、疎水性相互作用または芳香族吸着クロマトグラフィー（たとえば、フェニル−セファロース、アザ−アレン親和性（aza-arenophiliｃ）樹脂、またはｍ−アミノフェニルボロン酸による）、金属キレートアフィニティークロマトグラフィー（たとえば、Ｎｉ（ＩＩ）−およびＣｕ（ＩＩ）−アフィニティー材料による）、サイズ排除クロマトグラフィー、および電気泳動法（たとえば、ゲル電気泳動、毛細管電気泳動）(Vijayalakshmi, M.A., Appl. Biochem. Biotech. 75 (1998) 93-102)。
たとえば、免疫グロブリンの精製法は一般に多工程クロマトグラフィー部分を含む。第１工程で、たとえば、プロテインＡまたはプロテインＧによるアフィニティークロマトグラフィーにより、免疫グロブリンではないポリペプチドを免疫グロブリン画分から分離する。その後、たとえばイオン交換クロマトグラフィーを実施して、個々のクラスの免疫グロブリンを分離し、かつ第１カラムから共溶出した痕跡量のプロテインＡを除去する。最後に、クロマトグラフィー工程を用いて免疫グロブリン単量体を同じクラスの多量体およびフラグメントから分離する。
一般的なクロマトグラフィー法およびそれらの使用は当業者に既知である。たとえば下記を参照：Heftmann, E. (ed.), Chromatography, 5th edition, Part A: Fundamentals and Techniques, Elsevier Science Publishing Company, New York, (1992); Deyl, Z. (ed.), Advanced Chromatographic and Electromigration Methods in Biosciences, Elsevier Science BV, Amsterdam, The Netherlands, (1998); Poole, C. F. and Poole, S. K., Chromatography Today, Elsevier Science Publishing Company, New York (1991); Scopes, R.K., Protein Purification: Principles and Practice (1982); Sambrook, J., et al. (eds.), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Third Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (2001);またはAusubel, F. M., et al. (eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc., New York (1990)。
一態様において、回収した免疫グロブリンを、集団の量、すなわちマンノース−５糖構造体を含む免疫グロブリン、免疫グロブリンＧ（０）イソ型、免疫グロブリンＧ（１）イソ型、および免疫グロブリンＧ（２）イソ型の量の合計に対する、マンノース−５糖構造体を含む免疫グロブリンの量により特性分析する。本明細書に記述する方法によれば、マンノース−５糖構造体を含む免疫グロブリンの量は集団の１０％以下であり、他の態様においては集団の８％以下であり、さらに他の態様においては集団の６％以下である。
本明細書に記述する方法は、ある態様において、連続培養として、フェドバッチ培養として、またはその組合わせとして、たとえばフェドバッチ培養として開始した後に連続培養に切り換えて、実施できる。さらに、本明細書に記述する方法は種々の様式で実施できる。たとえば一態様においては、ＤＧＬ値が１．０未満の条件下で、すなわちたとえば利用できるグルコースの量が単位時間当たりその細胞がその培養で最大限に利用できるグルコースの量の８０％以下である条件下で培養する前に、過剰のグルコース、すなわちＤＧＬ値が１．０の状態で培養する。他の態様において、たとえば前規定した細胞密度（たとえば、一態様において１０５細胞／ｍｌ）を得るために、標準培地に含有される量のグルコース、たとえば１〜１０ｇ／ｌ（培地）で培養を開始する。さらに他の態様において、培養の開始を過剰量のグルコースの存在下で、すなわち１．０のＤＧＬで行ない、そして単位時間当たりある量のグルコースを添加する；これは単位時間当たりその細胞がその培養で最大限に利用できるグルコースの量の８０％以下である。他の態様においては、培地中に存在するグルコースの量がその培養に際して前設定した値以下に低下した時点で流加を開始する。最後の２例では、培養に際して利用できるグルコースの量は培養における細胞の代謝によって減少する。
一態様において、本明細書に記述する方法では単位時間当たり利用できるグルコースの量または添加するグルコースの量（最大限に利用できるグルコースの量より少ない）を同じ値に、すなわち一定に維持する。たとえば、単位時間当たり最大限に利用できるグルコースの量の５０％の量を利用できるように制御する場合、この制御量（ＤＧＬ値に基づく）はグルコース制限流加を実施しているすべての期間に適用される。ただし、この数値は生細胞の絶対密度に依存した相対値であるので、生細胞密度が培養中に変化する（すなわち、それは初期に増加し、最大に達し、その後、再び低下する）のに伴って、利用できるグルコースの絶対量は変化する。相対値は一定に（すなわち、たとえば８０％に）維持されるけれども絶対基準値が変化する（すなわち、生細胞密度が増大する）ので、相対的な絶対値も変化する（すなわち、増加する数値の８０％も増加する）。
用語“単位時間当たり”は、固定した時間範囲、たとえば１分、１時間、６時間、１２時間、または２４時間を表わす。一態様において、単位時間は１２時間または２４時間である。本出願で用いる用語“単位時間当たり利用できるグルコースの量”は、下記のものの合計を表わす：１）固定した時間範囲の開始時の培養の培地中に含有されるグルコースの量、および２）その単位時間中に添加した、すなわち流加したグルコースの量。したがって、ある量のグルコースを細胞培養培地に、たとえば培養容器に添加すると、これは固定した時間範囲の開始時の培地中のグルコースの量を前決定量まで増加させる。この量のグルコースは、固体として、水に溶解して、緩衝液に溶解して、または栄養培地に溶解して添加することができ、その際、水および緩衝液はグルコースを含有すべきではない。添加されるグルコースの量は、利用できるグルコースの量から培養容器内の培地中に存在するグルコースの量を差し引いたものに相当する。この量のグルコースを添加するプロセスは、前記の単位時間中に１回添加として、少量の等分の多数回添加として、または連続添加として実施できる。
本明細書に記述する方法はいかなる種類の培養にも、またいかなる培養規模にも適切である。たとえば、一態様において、この方法は連続法またはフェドバッチ法に用いられる；他の態様において培養容量は１００ｍｌから５０，０００ｌまでであり、他の態様においては１００ｌから１０，０００ｌまでである。本明細書に記述する方法は、マンノース−５糖構造体をもつ免疫グロブリンが１０％以下、または８％以下、または６％以下である免疫グロブリンの調製に有用である。一態様において、免疫グロブリンは免疫グロブリンＧまたはＥである。本明細書に記述する方法は真核細胞を含み、この細胞は免疫グロブリンの重鎖またはそのフラグメントをコードする核酸、および免疫グロブリンの軽鎖またはそのフラグメントをコードする核酸を含む。真核細胞は、一態様においてＣＨＯ細胞、ＮＳ０細胞、ＢＨＫ細胞、ハイブリドーマ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞、Ｓｐ２／０細胞、ＨＥＫ細胞、および昆虫細胞から選択される。
当業者はグルコースの量のほか、種々の細胞が最適増殖のために要求する培地の組成および成分ならびに栄養素濃度を周知しており、その細胞の培養に適切な培地を選択するであろう(たとえば、Mather, J.P., et al., Encyclopedia of Bioprocess Technology: Fermentation, Biocatalysis, and Bioseparation, Vol. 2 (1999) 777-785を参照)。
一態様において、本明細書に記述する方法に従った培養に際して細胞が利用できるはずのグルコースの量は、培養容器内において特定の培養時点でその容量の培養容器および最大限に利用できるグルコースの量で普通に達成できる生細胞密度に、単位時間当たりの対数増殖中の細胞数、および意図するＤＧＬを掛けることにより計算される。より詳細には、その実際の時点以前の培養中のグルコース濃度の経過および培養中の細胞密度の経過から、将来のグルコース濃度および細胞密度の経過を推定する。この推定を用いて、意図するＤＧＬを達成するために添加しなければならないグルコースの量を、次式により計算する：
(グルコース添加量[グルコースpg/ml/時間])＝
(現時点の細胞密度[細胞/ml])×(細胞の最大グルコース消費速度[グルコースpg/細胞/時間])×(DGL値)−培養容器内の培地中に存在するグルコースの量
一態様において、培養のｐＨ値はｐＨ６．５〜ｐＨ７．８である。他の態様において、ｐＨ値はｐＨ６．９〜ｐＨ７．３である。さらに態様において、ｐＨ値はｐＨ７．０〜７．２である。実施例１に概説するように、一定流加法で制限グルコース流加とｐＨ値７．０を組み合わせると、ｐＨ値７．２と比較してＭ５含量を規定値、すなわち８％未満に効率的に調節できることが見出された。それぞれ７．０または７．２のｐＨ値でフェドバッチ法での培養に際して、ＤＧＬ制御法を用いるとＭ５含量を５．５％未満に調節できることが見出された。培養のｐＨ値を低下させるとＤＧＬ値の低下によるＭ５量の増加に対抗できることが見出された。
(グルコース添加量[グルコースpg/ml/時間])＝
(現時点の細胞密度[細胞/ml])×(細胞の最大グルコース消費速度[グルコースpg/細胞/時間])×(DGL値)−培養容器内の培地中に存在するグルコースの量
一態様において、培養のｐＨ値はｐＨ６．５〜ｐＨ７．８である。他の態様において、ｐＨ値はｐＨ６．９〜ｐＨ７．３である。さらに態様において、ｐＨ値はｐＨ７．０〜７．２である。実施例１に概説するように、一定流加法で制限グルコース流加とｐＨ値７．０を組み合わせると、ｐＨ値７．２と比較してＭ５含量を規定値、すなわち８％未満に効率的に調節できることが見出された。それぞれ７．０または７．２のｐＨ値でフェドバッチ法での培養に際して、ＤＧＬ制御法を用いるとＭ５含量を５．５％未満に調節できることが見出された。培養のｐＨ値を低下させるとＤＧＬ値の低下によるＭ５量の増加に対抗できることが見出された。
培養は、一態様において２７℃〜３９℃で、他の態様において３５℃〜３７．５℃で実施される。
本明細書に記述する方法では、糖構造体を含むいずれかのポリペプチド、たとえば免疫グロブリン、インターフェロン、サイトカイン、増殖因子、ホルモン、プラスミノーゲンアクチベーター、エリスロポエチンなどを調製できる。
本明細書に記述する方法では、糖構造体を含むいずれかのポリペプチド、たとえば免疫グロブリン、インターフェロン、サイトカイン、増殖因子、ホルモン、プラスミノーゲンアクチベーター、エリスロポエチンなどを調製できる。
本明細書に記述する方法における培養は、哺乳動物細胞培養のためのいずれかの撹拌式または振とう式装置、たとえば発酵槽タイプのタンク培養装置、エアリフト（air lift）タイプの培養装置、培養フラスコタイプの培養装置、スピナーフラスコタイプの培養装置、マイクロキャリヤータイプの培養装置、流動床タイプの培養装置、中空繊維タイプの培養装置、ローラーボトルタイプの培養装置、または充填床タイプの培養装置を用いて実施できる。
本明細書に記述する方法は、一態様において最高１５日間実施される。他の態様において、培養は６〜１５日間行なわれる。一態様において、免疫グロブリンは抗ＩＬ−６Ｒ抗体である。
本明細書に記述する方法を、たとえばEP 0 409 607、EP 0 628 639、US 5,670,373、またはUS 5,795,965（本明細書にそれらの全体を援用する）に記述されたヒトインターロイキン−６受容体に対する抗体について例示する；この抗体およびそれを発現する細胞系は本発明の時点で我々の実験室において十分な量で入手できたからである。これは本発明の範囲を限定するものではない。
以下の実施例および図面は本発明の理解を補助するために示すものであり、本発明の真の範囲は特許請求の範囲に示される。ここに示す方法において本発明の精神から逸脱することなく改変をなしうることを理解すべきである。
材料および方法
細胞系：
組換え産生される免疫グロブリンのマンノース−５糖構造体の量を改変できるＣＨＯ細胞系の例は、EP 0 409 607およびUS 5,795,965による抗ＩＬ−６Ｒ抗体をコードする核酸を含むＣＨＯ細胞系である。この組換えＣＨＯ細胞の培養のためには、本発明の方法によるグルコース補給を実施できる限り、いかなる培地も使用できる。培地の例はＩＭＤＭ、ＤＭＥＭもしくはＨａｍのＦ１２培地、またはその組合わせであり、それらを培地成分とグルコースの質量比が受け継がれるように本明細書に記述する方法に適合させた。培地からグルコースを排除し、それを別個に培養に添加することもできる。
細胞系：
組換え産生される免疫グロブリンのマンノース−５糖構造体の量を改変できるＣＨＯ細胞系の例は、EP 0 409 607およびUS 5,795,965による抗ＩＬ−６Ｒ抗体をコードする核酸を含むＣＨＯ細胞系である。この組換えＣＨＯ細胞の培養のためには、本発明の方法によるグルコース補給を実施できる限り、いかなる培地も使用できる。培地の例はＩＭＤＭ、ＤＭＥＭもしくはＨａｍのＦ１２培地、またはその組合わせであり、それらを培地成分とグルコースの質量比が受け継がれるように本明細書に記述する方法に適合させた。培地からグルコースを排除し、それを別個に培養に添加することもできる。
培養：
抗ＩＬ−６Ｒ抗体を発現するＣＨＯ細胞を１ｌまたは２ｌの発酵容器で培養した。流加培地は１５〜４０ｇ／ｌのグルコースを含有していた。グルコースは、たとえば４００ｇ／ｌのグルコースを含有する別個の濃厚溶液で流加することができた。ｐＨ７．０から７．２までの範囲のｐＨ値で培養を実施した。
抗ＩＬ−６Ｒ抗体を発現するＣＨＯ細胞を１ｌまたは２ｌの発酵容器で培養した。流加培地は１５〜４０ｇ／ｌのグルコースを含有していた。グルコースは、たとえば４００ｇ／ｌのグルコースを含有する別個の濃厚溶液で流加することができた。ｐＨ７．０から７．２までの範囲のｐＨ値で培養を実施した。
糖構造体の決定：
ＩｇＧグリコシル化パターンの分析のために、Kondoらによる方法(Kondo, A., et al., Agric. Biol. Chem. 54 (1990) 2169-2170)を用いた。ＩｇＧを、培地の遠心上清から小規模プロテインＡカラムを用いて精製した。精製ＩｇＧのオリゴ糖をＮ−グリコシダーゼＦ(Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Germany)により放出させ、還元末端を２−アミノピリジンで標識した。標識したオリゴ糖を逆相クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により分析した。質量分析およびオリゴ糖の標準品の両方により、各ピークの帰属を判定した。
ＩｇＧグリコシル化パターンの分析のために、Kondoらによる方法(Kondo, A., et al., Agric. Biol. Chem. 54 (1990) 2169-2170)を用いた。ＩｇＧを、培地の遠心上清から小規模プロテインＡカラムを用いて精製した。精製ＩｇＧのオリゴ糖をＮ−グリコシダーゼＦ(Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Germany)により放出させ、還元末端を２−アミノピリジンで標識した。標識したオリゴ糖を逆相クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により分析した。質量分析およびオリゴ糖の標準品の両方により、各ピークの帰属を判定した。
グルコースの測定：
YSI 2700 SELECT（商標）分析計(YSI, Yellow Springs, OH, USA)を用い、製造業者のマニュアルに従った方法でグルコース濃度を測定した。
YSI 2700 SELECT（商標）分析計(YSI, Yellow Springs, OH, USA)を用い、製造業者のマニュアルに従った方法でグルコース濃度を測定した。
生細胞密度の測定：
自動イメージプロセシングおよび分析システム(CEDEX（登録商標）; Innovatis, Germany)、ならびにトリパンブルー色素排除法を用いて、生細胞密度を測定した。
自動イメージプロセシングおよび分析システム(CEDEX（登録商標）; Innovatis, Germany)、ならびにトリパンブルー色素排除法を用いて、生細胞密度を測定した。
実施例１
ＤＧＬ制御およびｐＨが抗体産生およびマンノース−５糖構造体（Ｍ５）含量に及ぼす影響
ヒト化した抗ＩＬ−６受容体抗体（トシリズマブ(Tocilizumab）, RoACTEMRA（登録商標）)を産生するＣＨＯ細胞株を用いて試験を実施した；これは、日本国公開特許公報第99902/1996の参考例２に記載された方法に従い、国際特許出願公開No. WO 92/19759 (US 5,795,965、US 5,817,790、およびUS 7,479,543に対応する)の例１０に記述されたヒト伸長因子Ｉαプロモーターを用いて調製された。
ＤＧＬ制御およびｐＨが抗体産生およびマンノース−５糖構造体（Ｍ５）含量に及ぼす影響
ヒト化した抗ＩＬ−６受容体抗体（トシリズマブ(Tocilizumab）, RoACTEMRA（登録商標）)を産生するＣＨＯ細胞株を用いて試験を実施した；これは、日本国公開特許公報第99902/1996の参考例２に記載された方法に従い、国際特許出願公開No. WO 92/19759 (US 5,795,965、US 5,817,790、およびUS 7,479,543に対応する)の例１０に記述されたヒト伸長因子Ｉαプロモーターを用いて調製された。
定速流加法で、ｐＨ制御が免疫グロブリン産生に及ぼす影響を観察した。表２は、定速流加法でｐＨ制御が抗体オリゴ糖産生およびＭ５含量に及ぼす影響を示す。
ｐＨ７．０では、マンノース−５糖構造体（Ｍ５）の量は５．５％未満に調節された。ＤＧＬ値は細胞密度の変化のため０．８０から０．２１まで低下した。他方、ｐＨ７．２ではＭ５の量は８．７％と２５．２％の間で変動し、ｐＨ７．０の場合より高かった。ｐＨ７．２におけるＤＧＬ値は０．７３から０．２５までの範囲であった。さらに、この場合、ｐＨ７．２での免疫グロブリン産生は１２０％を超えた（ｐＨ７．０に比較した相対値）。定速流加法で免疫グロブリン産生がより高いと、より高い８％を超えるＭ５含量が誘導される。したがって、定速流加法でｐＨ７．０に制御して、ｐＨ７．２に制御した方法と比較してＭ５含量をより低い値、すなわち８％未満に効率的に調節できた。
種々のｐＨでのフェドバッチ方式による免疫グロブリン産生のために、ＤＧＬ制御法（＝一定相対量流加法）も採用し、Ｍ５含量を分析した。表３は、流加開始後２〜３日目のＤＧＬ制御およびｐＨが免疫グロブリン産生およびＭ５含量に及ぼす影響を示す。
ｐＨ７．０において、０．２から０．８までの範囲のＤＧＬでＤＧＬ制御法を適用した。その結果、Ｍ５含量は４．０％以下に調節された。他方、ｐＨ７．２ではＤＧＬ値を０．４から０．６までの範囲で操作した。この場合、Ｍ５含量を５．５％未満に制御できた。
実施例２
種々のＤＧＬ値での培養
抗ＩＬ−６Ｒ抗体をコードする核酸を含むＣＨＯ細胞の培養を種々のＤＧＬ値で実施した。結果を下記の表４にまとめる。
種々のＤＧＬ値での培養
抗ＩＬ−６Ｒ抗体をコードする核酸を含むＣＨＯ細胞の培養を種々のＤＧＬ値で実施した。結果を下記の表４にまとめる。
定速流加法と比較して、ＤＧＬ値０．４〜０．６での制御ＤＧＬ法はマンノース−５含量の低下を示す。
実施例３
種々の流加法での培養
抗ＩＬ−６Ｒ抗体をコードする核酸を含むＣＨＯ細胞の培養を１種類のＤＧＬ値で、ただし種々の流加法を用いて実施した。結果を下記の表５にまとめる。
実施例３
種々の流加法での培養
抗ＩＬ−６Ｒ抗体をコードする核酸を含むＣＨＯ細胞の培養を１種類のＤＧＬ値で、ただし種々の流加法を用いて実施した。結果を下記の表５にまとめる。
単一流加培地流加実験では、すべての栄養素およびグルコースを含有する単一の流加物を用いた。二種培地流加実験では、すべての栄養素およびグルコースを含有する２種類の流加物を用いた：第１流加物はすべての栄養素および１５ｇ／ｌの低濃度のグルコースを含有し、第２流加物は高濃度のグルコースを含有する。これらの種々の流加実験を、一方の設定では流加速度を毎日調整して実施し、他方の設定では以前の培養における生細胞密度変化記録計に基づく前決定プロフィールに従って実施した。表５から分かるように、生存率および生細胞密度は採用した流加法とは無関係に類似する。
実施例４
フェドバッチ方式による免疫グロブリン調製のためのグルコース制限度（ＤＧＬ）制御
ＣＨＯ細胞（８．０〜１２×１０５細胞／ｍｌ）を前記の無血清培地に接種した。細胞を３７℃、９８％相対湿度、および１０％ ＣＯ２の雰囲気で増殖させた。フェドバッチ培養で、主発酵槽へ培養開始から２日目または３日目に流加するように、グルコースを含有する培地の流加を開始した。流加法はグルコース制限度（ＤＧＬ）を制御するための米国特許出願公開公報 US 2006/0127975 A1による方法に従った。ＤＧＬは、観察されたグルコース比消費速度−対−これらの細胞が自由にグルコースを利用できる場合の既知の最大グルコース比消費速度の比として定義できる（ＤＧＬ＝Ｑ（ｇｌｃ）／Ｑ（ｇｌｃ）ｍａｘ，ここで、Ｑ（ｇｌｃ）＝現時点で観察されたグルコース比消費速度；Ｑ（ｇｌｃ）ｍａｘ＝これらの細胞についての既知の最大グルコース比消費速度）。
フェドバッチ方式による免疫グロブリン調製のためのグルコース制限度（ＤＧＬ）制御
ＣＨＯ細胞（８．０〜１２×１０５細胞／ｍｌ）を前記の無血清培地に接種した。細胞を３７℃、９８％相対湿度、および１０％ ＣＯ２の雰囲気で増殖させた。フェドバッチ培養で、主発酵槽へ培養開始から２日目または３日目に流加するように、グルコースを含有する培地の流加を開始した。流加法はグルコース制限度（ＤＧＬ）を制御するための米国特許出願公開公報 US 2006/0127975 A1による方法に従った。ＤＧＬは、観察されたグルコース比消費速度−対−これらの細胞が自由にグルコースを利用できる場合の既知の最大グルコース比消費速度の比として定義できる（ＤＧＬ＝Ｑ（ｇｌｃ）／Ｑ（ｇｌｃ）ｍａｘ，ここで、Ｑ（ｇｌｃ）＝現時点で観察されたグルコース比消費速度；Ｑ（ｇｌｃ）ｍａｘ＝これらの細胞についての既知の最大グルコース比消費速度）。
図１は、この培養の生細胞密度および細胞生存率プロフィールを示す。図２に示すように、種々の細胞密度でＤＧＬを０．４〜０．５の値になるように制御した。その時点の細胞密度に応じて流加速度を１日１回または２回変化させた。図３は、フェドバッチ方式によるＤＧＬに基づく流加プロフィールを示す。細胞密度に応じて流加速度を０．８〜１．６ｍｌ／時間で変化させた。この流加法を適用して、図４に示す免疫グロブリン産生プロフィールが得られた。表６に示すように１０×１０５細胞／ｍｌおよび１２×１０５細胞／ｍｌの接種サイズを用いると、７日目に免疫グロブリン産生はほぼ同じであり、一定流加法（グルコース０．０２ｇ／時間の流加速度）での免疫グロブリン産生の１２０％を超えた。初期細胞密度の差２０％にもかかわらず、ＤＧＬ制御法ではほぼ同等の免疫グロブリン力価を得ることができた。さらに、接種サイズを８．０×１０５細胞／ｍｌに設定した場合、流加開始点の２０時間の遅れにもかかわらず、得られた免疫グロブリンは７日目に１１０％（相対値）を超えた。これらの結果において、ＤＧＬ制御法は種々の接種サイズで安定な免疫グロブリン産生を達成できた。
実施例５
ＤＧＬ制御がオリゴ糖のマンノース−５糖構造体およびガラクトシル化に及ぼす影響
ＤＧＬ制御を用いるフェドバッチ培養により産生された免疫グロブリンについて、グリコシル化パターンを分析した。表６は、ＤＧＬ制御フェドバッチ培養から得られた免疫グロブリンについてのオリゴ糖分析の結果を、一定流加法（流加速度：グルコース０．０２ｇ／時間）と比較して示す。８．０×１０５細胞／ｍｌの接種サイズでは、マンノース−５糖構造体（Ｍ５）の含量は２．８％であった。１０×１０５細胞／ｍｌおよび１２×１０５細胞／ｍｌの接種サイズでは、Ｍ５含量はそれぞれ４．１％および３．８％であった。すべての培養条件で、ＤＧＬ制御法はＭ５含量を５．０％未満に調節できた。
ＤＧＬ制御がオリゴ糖のマンノース−５糖構造体およびガラクトシル化に及ぼす影響
ＤＧＬ制御を用いるフェドバッチ培養により産生された免疫グロブリンについて、グリコシル化パターンを分析した。表６は、ＤＧＬ制御フェドバッチ培養から得られた免疫グロブリンについてのオリゴ糖分析の結果を、一定流加法（流加速度：グルコース０．０２ｇ／時間）と比較して示す。８．０×１０５細胞／ｍｌの接種サイズでは、マンノース−５糖構造体（Ｍ５）の含量は２．８％であった。１０×１０５細胞／ｍｌおよび１２×１０５細胞／ｍｌの接種サイズでは、Ｍ５含量はそれぞれ４．１％および３．８％であった。すべての培養条件で、ＤＧＬ制御法はＭ５含量を５．０％未満に調節できた。
一方、各条件で、免疫グロブリンＧ（０）イソ型および免疫グロブリンＧ（２）イソ型は、それぞれ４０％から４６％まで、および９．０％から１１％までの範囲で制御された。
Claims (23)
- ａ）免疫グロブリンをコードする核酸を含む真核細胞を、培地中での単一細胞の現時点のグルコース比消費速度−対−その種類の細胞の既知の最大グルコース比消費速度の比が一定に維持された培地中で培養し、そして
ｂ）培養物から免疫グロブリンを回収する
ことを含む、免疫グロブリンの調製方法。 - 比が０．８から０．２までであることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
- 比が０．６から０．４までであることを特徴とする、請求項２に記載の方法。
- ａ）免疫グロブリンをコードする核酸を含む真核細胞を、培地中の単位時間当たり利用できるグルコースの量が一定に維持され、かつ単位時間当たりその培地中でその細胞が最大限に利用できる量の８０％未満の一定値に制限された培地中で培養し、そして
ｂ）培養物から免疫グロブリンを回収する
ことを含む、免疫グロブリンの調製方法。 - 一定値が８０％未満であって２０％を超えることを特徴とする、請求項４に記載の方法。
- 培養がフェドバッチ培養であることを特徴とする、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
- 培養がフェドバッチ培養であり、その際、流加を培養２日目または３日目に開始することを特徴とする、請求項６に記載の方法。
- 培養をｐＨ６．５から７．５までのｐＨ値で行なうことを特徴とする、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
- 培養をｐＨ６．９から７．３までのｐＨ値で行なうことを特徴とする、請求項８に記載の方法。
- 培養をｐＨ６．９５からｐＨ７．０５までのｐＨ値、またはｐＨ７．１５からｐＨ７．２５までのｐＨ値で行なうことを特徴とする、請求項９に記載の方法。
- 免疫グロブリンがクラスＧまたはクラスＥの免疫グロブリンであることを特徴とする、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
- 真核宿主細胞がＣＨＯ細胞、ＮＳ０細胞、ＨＥＫ細胞、ＢＨＫ細胞、ハイブリドーマ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞、昆虫細胞、およびＳｐ２／０細胞を含む群から選択されることを特徴とする、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
- 真核細胞がチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞であることを特徴とする、請求項１２に記載の方法。
- 宿主細胞の培養を６〜２０日間実施することを特徴とする、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
- 免疫グロブリンが抗ＩＬ−６Ｒ抗体であることを特徴とする、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
- 免疫グロブリン調製物中におけるマンノース−５糖構造体を含む免疫グロブリンの量を減少させるための、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法の使用。
- 免疫グロブリンを含む組成物であって、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法で調製されたことを特徴とする組成物。
- 免疫グロブリンが抗ＩＬ−６Ｒ抗体であることを特徴とする、請求項１７に記載の組成物。
- 抗ＩＬ−６Ｒ抗体がトシリズマブを含むことを特徴とする、請求項１７に記載の組成物。
- 抗ＩＬ−６Ｒ抗体に結合したマンノース−５糖構造体が８％以下であることを特徴とする、請求項１７〜１９のいずれか１項に記載の組成物。
- マンノース−５糖構造体が６％以下であることを特徴とする、請求項２０に記載の組成物。
- マンノース−５糖構造体が４％以下であることを特徴とする、請求項２１に記載の組成物。
- 抗ＩＬ−６Ｒ抗体に結合したＧ（０）糖構造体が４０％から４６％までの範囲であり、抗ＩＬ−６Ｒ抗体に結合したＧ（２）糖構造体が９％から１１％までの範囲であることを特徴とする、請求項１８〜２２のいずれか１項に記載の組成物。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2017038986A1 (ja) * | 2015-09-03 | 2017-03-09 | 持田製薬株式会社 | 組換えタンパク質の製造方法 |
| JP2017519497A (ja) * | 2014-06-04 | 2017-07-20 | アムジエン・インコーポレーテツド | 哺乳類細胞培養物を回収するための方法 |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2312184T3 (es) | 1997-03-21 | 2009-02-16 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Agentes preventivos terapeuticos para el tratamiento de esclerosis multiple, que contienen anticuerpos anti-receptores de il-6 antagonistas. |
| UA80091C2 (en) | 2001-04-02 | 2007-08-27 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Remedies for infant chronic arthritis-relating diseases and still's disease which contain an interleukin-6 (il-6) antagonist |
| EP3192528A1 (en) | 2002-02-14 | 2017-07-19 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Formulation of anti-il6r antibody-containing solutions comprising a sugar as a stabilizer |
| GB2401040A (en) * | 2003-04-28 | 2004-11-03 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Method for treating interleukin-6 related diseases |
| US8398980B2 (en) * | 2004-03-24 | 2013-03-19 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Subtypes of humanized antibody against interleuken-6 receptor |
| PE20091174A1 (es) | 2007-12-27 | 2009-08-03 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Formulacion liquida con contenido de alta concentracion de anticuerpo |
| DK2493922T3 (en) * | 2009-10-26 | 2017-04-24 | Hoffmann La Roche | Process for preparing a glycosylated immunoglobulin |
| CN103476793A (zh) | 2010-11-08 | 2013-12-25 | 基因技术公司 | 皮下施用的抗-il-6受体抗体 |
| JP6271251B2 (ja) * | 2011-10-05 | 2018-01-31 | 中外製薬株式会社 | 糖鎖受容体結合ドメインを含む抗原の血漿中からの消失を促進する抗原結合分子 |
| EP2970916B1 (en) | 2013-03-13 | 2021-04-14 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Adapted lepidopteran insect cells for the production of recombinant proteins |
| BR112015032960B1 (pt) | 2013-07-04 | 2021-01-05 | F. Hoffmann-La Roche Ag | imunoensaio suprimido por interferência para detectar anticorpos anti-fármaco em amostras de soro |
| AR104050A1 (es) * | 2015-03-26 | 2017-06-21 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Proceso de producción con iones de cobre controlados |
| US11484591B2 (en) | 2016-02-22 | 2022-11-01 | Ohio State Innovation Foundation | Chemoprevention using controlled-release formulations of anti-interleukin 6 agents, synthetic vitamin A analogues or metabolites, and estradiol metabolites |
| US11033496B2 (en) | 2017-03-17 | 2021-06-15 | The Regents Of The University Of Michigan | Nanoparticles for delivery of chemopreventive agents |
| JP2022527972A (ja) | 2019-04-02 | 2022-06-07 | アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル | 前悪性病変を有する患者において癌を予測及び予防する方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH06292592A (ja) * | 1993-02-09 | 1994-10-21 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | 糖蛋白質の生産方法 |
| WO2002002793A1 (fr) * | 2000-07-05 | 2002-01-10 | Japan As Represented By Secretary Of Osaka University | Processus de production de glycoproteine |
| WO2004104186A1 (en) * | 2003-05-15 | 2004-12-02 | Wyeth | Restricted glucose feed for animal cell culture |
| JP2006507821A (ja) * | 2002-11-27 | 2006-03-09 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | 物質を生産するために細胞を培養する方法 |
Family Cites Families (184)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3926723A (en) | 1974-08-08 | 1975-12-16 | Massachusetts Inst Technology | Method of controllably releasing glucose to a cell culture medium |
| US4657863A (en) * | 1982-07-02 | 1987-04-14 | Celanese Corporation | Stabilization of a mutant microorganism population |
| JPS63502716A (ja) | 1986-03-07 | 1988-10-13 | マサチューセッツ・インステチュート・オブ・テクノロジー | 糖タンパク安定性の強化方法 |
| JPS62258252A (ja) | 1986-04-30 | 1987-11-10 | Koyo Seiko Co Ltd | ベルト用オ−トテンシヨナ |
| JPH066054B2 (ja) | 1987-10-15 | 1994-01-26 | 帝人株式会社 | 動物細胞の培養方法 |
| US5202238A (en) | 1987-10-27 | 1993-04-13 | Oncogen | Production of chimeric antibodies by homologous recombination |
| US5204244A (en) | 1987-10-27 | 1993-04-20 | Oncogen | Production of chimeric antibodies by homologous recombination |
| CA1312030C (en) | 1987-11-18 | 1992-12-29 | Brian Maiorella | Method to increase antibody titer |
| US6238891B1 (en) | 1987-11-18 | 2001-05-29 | Cetus Oncology Corporation | Method of increasing product expression through solute stress |
| US5670373A (en) | 1988-01-22 | 1997-09-23 | Kishimoto; Tadamitsu | Antibody to human interleukin-6 receptor |
| US6428979B1 (en) | 1988-01-22 | 2002-08-06 | Tadamitsu Kishimoto | Receptor protein for human B cell stimulatory factor-2 |
| CA1341152C (en) | 1988-01-22 | 2000-12-12 | Tadamitsu Kishimoto | Receptor protein for human b cell stimulatory factor-2 |
| KR0132666B1 (en) | 1989-03-14 | 1998-04-14 | Hitachi Kk | Method for controlling cultivation conditions for animal cells |
| SG42954A1 (en) | 1989-07-20 | 1997-10-17 | Tadamitsu Kishimoto | Antibody to human interleukin-6 receptor |
| HUT60768A (en) | 1990-03-16 | 1992-10-28 | Sandoz Ag | Process for producing cd25 fixing molecules |
| AU647108B2 (en) | 1990-04-03 | 1994-03-17 | Genentech Inc. | Methods and compositions for vaccination against HIV |
| US5770429A (en) | 1990-08-29 | 1998-06-23 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
| US5122469A (en) | 1990-10-03 | 1992-06-16 | Genentech, Inc. | Method for culturing Chinese hamster ovary cells to improve production of recombinant proteins |
| GB9022545D0 (en) * | 1990-10-17 | 1990-11-28 | Wellcome Found | Culture medium |
| DE4037325A1 (de) | 1990-11-23 | 1992-05-27 | Karl Mueller U Co Kg | Verfahren zur erzeugung von zellmasse und/oder fermentierungsprodukten unter sterilen bedingungen sowie vorrichtung zur durchfuehrung des verfahrens |
| WO1992019759A1 (en) | 1991-04-25 | 1992-11-12 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Reconstituted human antibody against human interleukin 6 receptor |
| JPH05227970A (ja) | 1992-02-19 | 1993-09-07 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | ヒトインターロイキン−６受容体に対する再構成ヒト抗体 |
| US5821121A (en) | 1991-06-24 | 1998-10-13 | Pacific Biomedical Research, Inc. | Hormone-secreting cells maintained in long-term culture |
| EP0605428B9 (en) | 1991-06-24 | 2003-01-02 | hCell Technology, Inc. | Hormone-secreting pancreatic cells maintained in long-term culture |
| US5610297A (en) | 1991-12-27 | 1997-03-11 | Georgia Tech Research Corp. | Peptides ketoamides |
| US5252216A (en) * | 1992-03-24 | 1993-10-12 | Smithkline Beecham Corporation | Protein purification |
| EP0567738A3 (en) | 1992-05-01 | 1995-09-06 | American Cyanamid Co | Controlling perfusion rates in continuous bioreactor culture of animal cells |
| DE69311873T2 (de) | 1992-05-01 | 1998-02-12 | Teijin Ltd | Fed-batch-Verfahren für Proteine sekretierende Zellen |
| EP0752248B1 (en) | 1992-11-13 | 2000-09-27 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma |
| WO1994026087A2 (en) | 1993-05-14 | 1994-11-24 | Connor Kim C O | Recombinant protein production and insect cell culture and process |
| US5888510A (en) | 1993-07-21 | 1999-03-30 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Chronic rheumatoid arthritis therapy containing IL-6 antagonist as effective component |
| USH1532H (en) | 1993-11-03 | 1996-05-07 | Genetics Institute, Inc. | Adaption of mammalian cell lines to high cell densities |
| AU698975B2 (en) | 1993-11-23 | 1998-11-12 | Genentech Inc. | Kinase receptor activation assay |
| US20030108545A1 (en) | 1994-02-10 | 2003-06-12 | Patricia Rockwell | Combination methods of inhibiting tumor growth with a vascular endothelial growth factor receptor antagonist |
| WO1995022599A1 (fr) | 1994-02-18 | 1995-08-24 | Teijin Limited | Procede de mise en culture de cellules animales |
| US5856179A (en) | 1994-03-10 | 1999-01-05 | Genentech, Inc. | Polypeptide production in animal cell culture |
| AU701302B2 (en) | 1994-05-13 | 1999-01-21 | Merck Patent Gesellschaft Mit Beschrankter Haftung | Improvements in or relating to peptide delivery |
| US8017121B2 (en) * | 1994-06-30 | 2011-09-13 | Chugai Seiyaku Kabushika Kaisha | Chronic rheumatoid arthritis therapy containing IL-6 antagonist as effective component |
| JP3630453B2 (ja) | 1994-09-30 | 2005-03-16 | 中外製薬株式会社 | Ｉｌ−６レセプター抗体を有効成分とする未熟型骨髄腫細胞治療剤 |
| EP0791359A4 (en) | 1994-10-21 | 2002-09-11 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | MEDICINE AGAINST IL-6 PRODUCTION IN DISEASES |
| KR100252743B1 (ko) | 1994-12-29 | 2000-09-01 | 나가야마 오사무 | Il-6 안타고니스트를 함유하는 항종양제의 작용증강제 |
| ES2264135T3 (es) | 1995-02-13 | 2006-12-16 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Inhibidor de la descomposicion de proteinas musculares que contienen anticuerpos frente al receptor de il-6. |
| GB9506249D0 (en) * | 1995-03-27 | 1995-05-17 | Karobio Ab | Media for insect cell cultures |
| US5705364A (en) | 1995-06-06 | 1998-01-06 | Genentech, Inc. | Mammalian cell culture process |
| JP3596108B2 (ja) | 1995-08-30 | 2004-12-02 | 株式会社デンソー | 車両用空調装置 |
| US6087129A (en) | 1996-01-19 | 2000-07-11 | Betagene, Inc. | Recombinant expression of proteins from secretory cell lines |
| EP0923941B1 (en) | 1996-06-27 | 2006-05-17 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Remedies for myeloma to be used together with nitrogen mustard antitumor agents |
| US7147851B1 (en) | 1996-08-15 | 2006-12-12 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Humanized immunoglobulin reactive with α4β7 integrin |
| EP0852951A1 (de) | 1996-11-19 | 1998-07-15 | Roche Diagnostics GmbH | Stabile lyophilisierte pharmazeutische Zubereitungen von mono- oder polyklonalen Antikörpern |
| WO1998041611A1 (en) | 1997-03-20 | 1998-09-24 | Regents Of The University Of Minnesota | Process for the continuous culture of cells |
| ES2312184T3 (es) | 1997-03-21 | 2009-02-16 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Agentes preventivos terapeuticos para el tratamiento de esclerosis multiple, que contienen anticuerpos anti-receptores de il-6 antagonistas. |
| JP3707583B2 (ja) | 1997-06-06 | 2005-10-19 | 株式会社ブリヂストン | 金属線用ガイド |
| US20020187150A1 (en) | 1997-08-15 | 2002-12-12 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Preventive and/or therapeutic agent for systemic lupus erythematosus comprising anti-IL-6 receptor antibody as an active ingredient |
| CN100374159C (zh) | 1998-03-17 | 2008-03-12 | 中外制药株式会社 | 一种包含il-6拮抗剂活性成分的炎性肠道疾病的预防或治疗剂 |
| EP1068241B1 (en) | 1998-04-02 | 2007-10-10 | Genentech, Inc. | Antibody variants and fragments thereof |
| PT1071700E (pt) | 1998-04-20 | 2010-04-23 | Glycart Biotechnology Ag | Modificação por glicosilação de anticorpos para melhorar a citotoxicidade celular dependente de anticorpos |
| US6537782B1 (en) | 1998-06-01 | 2003-03-25 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Media for culturing animal cells and process for producing protein by using the same |
| US6406909B1 (en) * | 1998-07-10 | 2002-06-18 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Serum-free medium for culturing animal cells |
| ES2276525T3 (es) * | 1998-08-24 | 2007-06-16 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Preventivos o remedios para la pancreatitis que contienen anticuerpos anti-receptor il-6 como ingrediente activo. |
| ES2571230T3 (es) | 1999-04-09 | 2016-05-24 | Kyowa Hakko Kirin Co Ltd | Procedimiento para controlar la actividad de una molécula inmunofuncional |
| PT1178999E (pt) | 1999-05-04 | 2007-06-26 | Santaris Pharma As | Análogos de l-ribo-lna |
| US6338964B1 (en) | 1999-05-07 | 2002-01-15 | Bayer Corporation | Process and medium for mammalian cell culture under low dissolved carbon dioxide concentration |
| MXPA02001911A (es) | 1999-08-24 | 2003-07-21 | Medarex Inc | Anticuerpos ctla-4 humanos y sus usos. |
| JP2001101882A (ja) | 1999-09-29 | 2001-04-13 | Sony Corp | 不揮発性半導体記憶装置 |
| US6284453B1 (en) | 1999-09-29 | 2001-09-04 | Steven Anthony Siano | Method for controlling fermentation growth and metabolism |
| WO2001077140A2 (en) | 1999-10-19 | 2001-10-18 | Srienc Friederich | Measurement of nutrient uptake in cells and methods based thereon |
| GB0001448D0 (en) | 2000-01-21 | 2000-03-08 | Novartis Ag | Organic compounds |
| NZ523459A (en) | 2000-05-30 | 2004-08-27 | Lactascan Aps | Method for producing lactic acid |
| US20030165502A1 (en) | 2000-06-13 | 2003-09-04 | City Of Hope | Single-chain antibodies against human insulin-like growth factor I receptor: expression, purification, and effect on tumor growth |
| JP4812228B2 (ja) | 2000-08-10 | 2011-11-09 | 中外製薬株式会社 | 抗体含有溶液の凝集物生成または白濁抑制方法 |
| JP5485489B2 (ja) * | 2000-08-11 | 2014-05-07 | 中外製薬株式会社 | 抗体含有安定化製剤 |
| GB0020685D0 (en) | 2000-08-22 | 2000-10-11 | Novartis Ag | Organic compounds |
| EP1333032A4 (en) | 2000-10-06 | 2005-03-16 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | METHOD FOR PURIFYING ANTIBODIES |
| US6946292B2 (en) | 2000-10-06 | 2005-09-20 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity |
| DE60139944D1 (de) * | 2000-10-12 | 2009-10-29 | Genentech Inc | Niederviskose konzentrierte proteinformulierungen |
| US8703126B2 (en) | 2000-10-12 | 2014-04-22 | Genentech, Inc. | Reduced-viscosity concentrated protein formulations |
| PT1356073E (pt) | 2000-10-20 | 2010-02-15 | Bioneer As | Método de fermentação aperfeiçoado para a produção de produtos genéticos heterólogos em bactérias do ácido láctico |
| US20040242847A1 (en) | 2000-10-20 | 2004-12-02 | Naoshi Fukushima | Degraded agonist antibody |
| CN1259973C (zh) | 2000-10-25 | 2006-06-21 | 中外制药株式会社 | 含有il－6拮抗剂作为有效成分的牛皮癣的预防或治疗剂 |
| WO2002036164A1 (fr) * | 2000-10-27 | 2002-05-10 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Agent abaissant le taux sanguin de vegf contenant un antagoniste de il-6 en tant que principe actif |
| AU2000279625A1 (en) | 2000-10-27 | 2002-05-15 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Blood mmp-3 level-lowering agent containing il-6 antgonist as the active ingredient |
| ATE426674T1 (de) | 2000-11-03 | 2009-04-15 | Genentech Inc | Stoffwechselanderungen in garungen zur produktion rekombinanter proteine |
| CN1955299A (zh) | 2000-11-22 | 2007-05-02 | 内特尔沃克公司 | 合成有机产物的方法和材料 |
| DZ3494A1 (fr) | 2001-01-05 | 2002-07-11 | Pfizer | Anticorps anti-recepteur du facteur de croissance i analogue a l'insuline |
| CN100529068C (zh) | 2001-01-19 | 2009-08-19 | 巴斯福股份公司 | 用于提高泛酸产量的微生物和方法 |
| US7332289B2 (en) | 2001-03-09 | 2008-02-19 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Method of purifying protein |
| WO2002076578A1 (en) | 2001-03-27 | 2002-10-03 | Smithkline Beecham Corporation | Control of glycoforms in igg |
| UA80091C2 (en) | 2001-04-02 | 2007-08-27 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Remedies for infant chronic arthritis-relating diseases and still's disease which contain an interleukin-6 (il-6) antagonist |
| US7531358B2 (en) | 2001-04-17 | 2009-05-12 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Method of quantifying surfactant |
| KR20020088848A (ko) | 2001-05-21 | 2002-11-29 | (주)코아바이오텍 | 세포배양관 및 이를 이용한 대량 세포배양기 |
| AU2002316230A1 (en) | 2001-06-13 | 2002-12-23 | Genentech, Inc. | Methods of culturing animal cells and polypeptide production in animal cells |
| IL159856A0 (en) | 2001-07-23 | 2004-06-20 | Zymogenetics Inc | Fermentation medium and method |
| US7241444B2 (en) | 2002-01-18 | 2007-07-10 | Pierre Fabre Medicament | Anti-IGF-IR antibodies and uses thereof |
| DK1461359T3 (da) | 2002-01-18 | 2007-07-09 | Pf Medicament | Hidtil ukendte anti-IGF-IR-antistoffer og anvendelser deraf |
| US7553485B2 (en) | 2002-01-18 | 2009-06-30 | Pierre Fabre Medicament | Anti-IGF-IR and/or anti-insulin/IGF-I hybrid receptors antibodies and uses thereof |
| DK1581617T3 (da) | 2002-02-08 | 2011-05-16 | Danisco Us Inc | Fremgangsmåder til fremstilling af slut-produkter fra kulstof-substrater |
| EP3192528A1 (en) | 2002-02-14 | 2017-07-19 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Formulation of anti-il6r antibody-containing solutions comprising a sugar as a stabilizer |
| CA2417689C (en) | 2002-03-05 | 2006-05-09 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Improved methods for growing mammalian cells in vitro |
| JP3958089B2 (ja) | 2002-03-26 | 2007-08-15 | 有限会社新世紀発酵研究所 | 嫌気性菌の連続培養法 |
| JP3822137B2 (ja) | 2002-05-20 | 2006-09-13 | 中外製薬株式会社 | 動物細胞培養用培地の添加剤およびそれを用いたタンパク質の製造方法 |
| US7217796B2 (en) | 2002-05-24 | 2007-05-15 | Schering Corporation | Neutralizing human anti-IGFR antibody |
| US8142810B2 (en) | 2002-05-30 | 2012-03-27 | The Procter & Gamble Company | Dietary method for modulating glucose metabolism and associated conditions and increasing longevity |
| US7538195B2 (en) | 2002-06-14 | 2009-05-26 | Immunogen Inc. | Anti-IGF-I receptor antibody |
| EP1520030B1 (en) | 2002-07-03 | 2011-10-26 | Basf Se | Microorganisms and processes for enhanced production of pantothenate |
| CN1788089A (zh) | 2002-07-03 | 2006-06-14 | 巴斯福股份公司 | 用于提高泛酸产量的微生物和方法 |
| CN1470632A (zh) | 2002-07-25 | 2004-01-28 | 谢良志 | 一种动物细胞的优化流加悬浮培养方法 |
| AU2003262087B2 (en) | 2002-09-11 | 2010-11-11 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Protein purification method |
| US20040209930A1 (en) | 2002-10-02 | 2004-10-21 | Carboni Joan M. | Synergistic methods and compositions for treating cancer |
| AU2003291254A1 (en) | 2002-11-05 | 2004-06-07 | Mount Sinai School Of Medicine Of New York University ; | Ptpn11 (shp-2) mutations and cancer |
| AU2004205802B2 (en) | 2003-01-22 | 2009-11-05 | Roche Glycart Ag | Fusion constructs and use of same to produce antibodies with increased Fc receptor binding affinity and effector function |
| PL378812A1 (pl) | 2003-02-13 | 2006-05-29 | Pfizer Products Inc. | Zastosowania przeciwciał przeciw receptorowi insulinopodobnego czynnika wzrostowego I |
| CN100340294C (zh) | 2003-02-24 | 2007-10-03 | 中外制药株式会社 | 含有白介素6拮抗剂的脊髓损伤治疗剂 |
| JP2007528201A (ja) | 2003-03-14 | 2007-10-11 | ファルマシア・コーポレーション | 癌治療のためのｉｇｆ−ｉ受容体に対する抗体 |
| WO2004087756A2 (en) | 2003-04-02 | 2004-10-14 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Antibodies against insulin-like growth factor i receptor and uses thereof |
| JP4869064B2 (ja) | 2003-04-04 | 2012-02-01 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | 高濃度抗体及びタンパク質製剤 |
| US20050158303A1 (en) | 2003-04-04 | 2005-07-21 | Genentech, Inc. | Methods of treating IgE-mediated disorders comprising the administration of high concentration anti-IgE antibody formulations |
| GB2401040A (en) | 2003-04-28 | 2004-11-03 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Method for treating interleukin-6 related diseases |
| ES2527871T3 (es) | 2003-05-01 | 2015-02-02 | Imclone Llc | Anticuerpos completamente humanos dirigidos contra el receptor del factor de crecimiento 1 similar a la insulina humana |
| US7579157B2 (en) | 2003-07-10 | 2009-08-25 | Hoffmann-La Roche Inc. | Antibody selection method against IGF-IR |
| JP4638870B2 (ja) | 2003-08-13 | 2011-02-23 | ファイザー・プロダクツ・インク | 修飾ヒトｉｇｆ−１ｒ抗体 |
| GB0321100D0 (en) | 2003-09-09 | 2003-10-08 | Celltech R&D Ltd | Biological products |
| AR045614A1 (es) | 2003-09-10 | 2005-11-02 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos contra el recepctor de la interleuquina- 1 y los usos de los mismos |
| NZ546557A (en) | 2003-10-17 | 2010-01-29 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Therapeutic agent for mesothelioma comprising interleukin-6 |
| FR2861080B1 (fr) | 2003-10-20 | 2006-02-17 | Lab Francais Du Fractionnement | Anticorps presentant un taux de fucose et de galactose optimise |
| WO2005058967A2 (en) | 2003-12-16 | 2005-06-30 | Pierre Fabre Medicament | Novel anti-insulin/igf-i hybrid receptor or anti-insulin/igf-i hybrid receptor and igf-ir antibodies and uses thereof |
| US8617550B2 (en) | 2003-12-19 | 2013-12-31 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Treatment of vasculitis with IL-6 antagonist |
| AR048210A1 (es) | 2003-12-19 | 2006-04-12 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Un agente preventivo para la vasculitis. |
| US7781393B2 (en) | 2004-02-25 | 2010-08-24 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Methods for inhibiting tumor cell growth |
| AR048335A1 (es) * | 2004-03-24 | 2006-04-19 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Agentes terapeuticos para trastornos del oido interno que contienen un antagonista de il- 6 como un ingrediente activo |
| US8398980B2 (en) * | 2004-03-24 | 2013-03-19 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Subtypes of humanized antibody against interleuken-6 receptor |
| BRPI0509412A (pt) | 2004-04-16 | 2007-09-04 | Genentech Inc | método de tratamento de policondrite ou mononeurite multiplex em mamìferos e artigo industrializado |
| MX2007000610A (es) | 2004-07-16 | 2007-03-07 | Pfizer Prod Inc | Tratamiento de combinacion para enfermedades malignas no hematologicas usando un anti-cuerpo de receptor de factor i de crecimiento de tipo anti-insulina. |
| FR2873699B1 (fr) | 2004-07-29 | 2009-08-21 | Pierre Fabre Medicament Sa | Nouveaux anticorps anti igf ir rt leurs utilisations |
| US7432359B2 (en) | 2004-09-06 | 2008-10-07 | Kirin Pharma Kabushiki Kaisha | Anti-A33 antibody |
| KR20130101161A (ko) | 2005-01-05 | 2013-09-12 | 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 | 세포의 배양 방법 및 그 이용 |
| WO2007043641A1 (ja) * | 2005-10-14 | 2007-04-19 | Fukuoka University | 膵島移植における移植膵島障害抑制剤 |
| JP5328019B2 (ja) | 2005-10-21 | 2013-10-30 | レヴォ バイオロジクス インコーポレイテッド | 抗体依存性細胞障害活性を増強させた抗体、その調製法および使用法 |
| BRPI0617664B8 (pt) | 2005-10-21 | 2021-05-25 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | uso de um anticorpo que reconhece a il-6 para a produção de uma composição farmacêutica para tratar o enfarte do miocárdio ou suprimir a remodelagem ventricular esquerda depois do enfarte do miocárdio |
| AR057582A1 (es) | 2005-11-15 | 2007-12-05 | Nat Hospital Organization | Agentes para suprimir la induccion de linfocitos t citotoxicos |
| AU2006316629A1 (en) | 2005-11-17 | 2007-05-31 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Humanized immunoglobulin reactive with alpha 4 beta 7 integrin |
| AR057941A1 (es) | 2005-11-25 | 2007-12-26 | Univ Keio | Agentes terapeuticos para el cancer de prostata |
| US9084777B2 (en) | 2005-12-28 | 2015-07-21 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Stabilized antibody-containing formulations |
| US20070190057A1 (en) | 2006-01-23 | 2007-08-16 | Jian Wu | Methods for modulating mannose content of recombinant proteins |
| EP3135298B1 (en) | 2006-01-27 | 2018-06-06 | Keio University | Therapeutic agents for diseases involving choroidal neovascularization |
| US20090061466A1 (en) | 2006-03-09 | 2009-03-05 | Wolfgang Hoesel | Anti-drug antibody assay |
| MX2008012146A (es) | 2006-03-28 | 2008-10-03 | Biogen Idec Inc | Anticuerpos anti-receptor 1 de factor de crecimiento tipo insulina (igf-1r) y uso de los mismos. |
| CN101495146B (zh) | 2006-04-07 | 2012-10-17 | 国立大学法人大阪大学 | 肌肉再生促进剂 |
| US7846724B2 (en) * | 2006-04-11 | 2010-12-07 | Hoffmann-La Roche Inc. | Method for selecting CHO cell for production of glycosylated antibodies |
| US20080014203A1 (en) | 2006-04-11 | 2008-01-17 | Silke Hansen | Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof |
| MX2008014804A (es) * | 2006-06-02 | 2009-01-27 | Regeneron Pharma | Anticuerpos de afinidad elevada a receptor de il-6 humano. |
| WO2008016134A1 (fr) | 2006-08-04 | 2008-02-07 | Norihiro Nishimoto | PROCÉDÉ POUR PRÉDIRE LE PRONOSTIC DES PATIENTS ATTEINTS DE POLYARTHRITE rhumatoïde |
| US10982250B2 (en) | 2006-09-18 | 2021-04-20 | Genentech, Inc. | Methods of protein production |
| JP4355743B2 (ja) * | 2006-12-04 | 2009-11-04 | 株式会社神戸製鋼所 | Ｃｕ合金配線膜とそのＣｕ合金配線膜を用いたフラットパネルディスプレイ用ＴＦＴ素子、及びそのＣｕ合金配線膜を作製するためのＣｕ合金スパッタリングターゲット |
| JP2010095445A (ja) | 2006-12-27 | 2010-04-30 | Tokyo Medical & Dental Univ | Ｉｌ−６アンタゴニストを有効成分とする炎症性筋疾患治療剤 |
| TWI438208B (zh) | 2007-01-23 | 2014-05-21 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | 抑制慢性排斥反應之藥劑 |
| PL2164514T3 (pl) * | 2007-05-21 | 2017-08-31 | Alderbio Holdings Llc | Przeciwciała przeciwko IL-6 i ich zastosowanie |
| JP5424330B2 (ja) | 2007-07-26 | 2014-02-26 | 国立大学法人大阪大学 | インターロイキン６受容体阻害剤を有効成分とする眼炎症疾患治療剤 |
| CL2008002885A1 (es) | 2007-09-26 | 2010-07-02 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Anticuerpo anti-receptor de interleucina-6 (il-6); y composicion farmaceutica que lo comprende |
| KR101601986B1 (ko) | 2007-10-02 | 2016-03-17 | 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 | 인터류킨 6 수용체 저해제를 유효 성분으로 하는 이식편대숙주병 치료제 |
| JP2009092508A (ja) | 2007-10-09 | 2009-04-30 | Norihiro Nishimoto | リウマチ治療剤の効果の予測方法 |
| MX2010004007A (es) | 2007-10-15 | 2010-06-15 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Metodo para la produccion de un anticuerpo. |
| GB2453939A (en) | 2007-10-22 | 2009-04-29 | Ubidyne Inc | Clockless analogue band-pass delta-sigma modulator |
| US8227195B2 (en) * | 2007-12-15 | 2012-07-24 | Hoffman-La Roche Inc. | Distinguishing assay |
| PE20091174A1 (es) | 2007-12-27 | 2009-08-03 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Formulacion liquida con contenido de alta concentracion de anticuerpo |
| CA2717614A1 (en) | 2008-03-11 | 2009-09-17 | Genentech, Inc. | Antibodies with enhanced adcc function |
| DE102008013899A1 (de) * | 2008-03-12 | 2009-09-17 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Verfahren zur Herstellung rekombinanter Proteine bei konstantem Gehalt von pCO2 im Medium |
| KR101665729B1 (ko) * | 2008-06-05 | 2016-10-12 | 국립연구개발법인 고쿠리츠간켄큐센터 | 신경침윤 억제제 |
| TWI440469B (zh) | 2008-09-26 | 2014-06-11 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Improved antibody molecules |
| US8323649B2 (en) | 2008-11-25 | 2012-12-04 | Alderbio Holdings Llc | Antibodies to IL-6 and use thereof |
| MY161541A (en) | 2009-07-31 | 2017-04-28 | Shin Maeda | Cancer metastasis inhibitor |
| WO2011019622A1 (en) * | 2009-08-14 | 2011-02-17 | Genentech, Inc. | Cell culture methods to make antibodies with enhanced adcc function |
| DK2493922T3 (en) * | 2009-10-26 | 2017-04-24 | Hoffmann La Roche | Process for preparing a glycosylated immunoglobulin |
| TWI609698B (zh) | 2010-01-20 | 2018-01-01 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | 穩定化的含抗體溶液製劑 |
| WO2011128096A1 (en) * | 2010-04-16 | 2011-10-20 | Roche Diagnostics Gmbh | Polymorphism markers for predicting response to interleukin-6 receptor-inhibiting monoclonal antibody drug treatment |
| WO2011149046A1 (ja) | 2010-05-28 | 2011-12-01 | 独立行政法人国立がん研究センター | 膵癌治療剤 |
| DK2578231T3 (da) | 2010-05-28 | 2022-12-12 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Antitumor-t-celle-reaktionsforstærker |
| EP2576824A2 (en) * | 2010-06-07 | 2013-04-10 | Roche Diagnostics GmbH | Gene expression markers for predicting response to interleukin-6 receptor-inhibiting monoclonal antibody drug treatment |
| US9422329B2 (en) | 2010-11-05 | 2016-08-23 | Hoffmann-La Roche Inc. | Optimized method for antibody capturing by mixed mode chromatography |
| CN103476793A (zh) | 2010-11-08 | 2013-12-25 | 基因技术公司 | 皮下施用的抗-il-6受体抗体 |
| MY182178A (en) | 2011-09-01 | 2021-01-18 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Method for preparing a composition comprising highly concentrated antibodies by ultrafiltration |
| BR112015024926A2 (pt) | 2013-04-16 | 2017-10-10 | Genentech Inc | composições, artigo de fabricação, métodos para tratar um paciente com câncer, para avaliar uma composição, para avaliar a atividade biológica, para produzir uma composição e para avaliar a fragmentação de uma composição e variante de pertuzumabe |
| BR112015032960B1 (pt) | 2013-07-04 | 2021-01-05 | F. Hoffmann-La Roche Ag | imunoensaio suprimido por interferência para detectar anticorpos anti-fármaco em amostras de soro |
| TWI805046B (zh) | 2015-02-27 | 2023-06-11 | 日商中外製藥股份有限公司 | Il-6受體抗體用於製備醫藥組成物的用途 |
| AR104050A1 (es) | 2015-03-26 | 2017-06-21 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Proceso de producción con iones de cobre controlados |
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH06292592A (ja) * | 1993-02-09 | 1994-10-21 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | 糖蛋白質の生産方法 |
| WO2002002793A1 (fr) * | 2000-07-05 | 2002-01-10 | Japan As Represented By Secretary Of Osaka University | Processus de production de glycoproteine |
| JP2006507821A (ja) * | 2002-11-27 | 2006-03-09 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | 物質を生産するために細胞を培養する方法 |
| WO2004104186A1 (en) * | 2003-05-15 | 2004-12-02 | Wyeth | Restricted glucose feed for animal cell culture |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2017519497A (ja) * | 2014-06-04 | 2017-07-20 | アムジエン・インコーポレーテツド | 哺乳類細胞培養物を回収するための方法 |
| WO2017038986A1 (ja) * | 2015-09-03 | 2017-03-09 | 持田製薬株式会社 | 組換えタンパク質の製造方法 |
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