JP2011505011A - 生体試料の採取、刺激、安定化及び分析のためのデバイス、システム及び方法 - Google Patents
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Abstract
Description
(参照による組込み)
本明細書で提供されるのは、採取の時点における患者試料、特に全血の刺激、その後の迅速に実施される第二のステップでの試料の安定化に好適なデバイスである。図1は試料採取チューブ又は容器、即ち、Smart Tubeの一実施形態の複数の図を示す。デバイスの本体106は柔軟で弾力性のある弾性的に変形可能な材料で作られ得る。多くのそのような材料及びそれらを加工する方法は当技術分野において公知であり、例えば、射出成形直鎖状低密度ポリエチレン及び他の同様に耐久性のある軟質プラスチック、繊維複合体、金属組成物などが含まれる。アンプルの薄壁圧潰性ガラス壁部105はアンプルを画定し、デバイスの柔軟壁部106に対する外力が圧潰性壁部105を粉砕するのに十分な力で圧潰性壁部105を圧迫するまでチャンバ102及び103を流体分離する。次に、アンプル103の内容物はチャンバ102に放出され得る。一部の実施形態では、ホールピペット又は類似の液体取扱いデバイスによって1ミリリットルの患者試料がチャンバ102に加えられ得、次に、チャンバ102はデバイス上のネジ山107とインターフェースをとるネジ込みキャップ101で密閉され得る。デバイスは自動装置の相補的なカップリング、例えば、ベースステーションと結合され得る円筒状領域108をもって設計される。Oリングが溝部104に嵌合され得、カップリングの内径よりわずかに径が大きくてよく、円筒状領域108がベースステーションのカップリングに挿入されると、わずかに変形する。デバイスは、ベースステーションのカップリングに存在する保持クリップがデバイスをカップリングに固定することを可能にする第二の溝部109も有し得る。104におけるOリングとカップリングとの間の静止摩擦係数はカップリングの回転を可能にし得、これにより、デバイスをその長軸に沿って回転させる(軸回転)。これはチャンバ102の内容物の混合を容易にし得る。デバイスのそれぞれ遠位端及び近位端におけるテーパ状の六角形面部110及び111は、自動装置の相補面部とインターフェースをとり、デバイスにより大きな回転トルクを与え、軸回転のより良い制御を確実にし得る。チャンバ102の頂部に組み込まれた、LLDPE(直鎖状低密度ポリエチレン)又は類似の材料で作られた柔軟なアンプル保持インサート112は、その内容物がデカントされる際に圧潰アンプルの大きな断片がデバイスから離れることを阻止する。このインサート112は偶発的又は意図的に無傷のアンプルが102から除去されることも阻止するが、インサートにおける下向きの柔軟なフランジは必要に応じて小ピペットが102に進入することを可能にする。デバイス101の底部におけるチャンバ113が図1Dに示されている。チャンバ113はデバイスの製造可能性を高めることができ、接着剤又は他の手段によって付加されるRFIDタグの配置のためにチャンバを提供する。一部の実施形態では、患者の静脈に既に挿入された別の中空針に可撓性チューブによって連結された使い捨て採血チューブに連結された中空針で閉鎖部材を穿孔することによって、生体試料は刺激チャンバ102に引き入れられ得る。上部チャンバは所定量の血液又は流体約1ml〜5mlが引き入れられることを誘発する圧力まで真空排気され得る。図1Eはデバイスの分解図を示す。チャンバ102は生体試料を受け取り、且つアンプルを保持することができる。
本明細書で更に提供されるのは、生体試料を採取し、アッセイし、安定化するシステムである。一態様では、システムは上述の採取装置、加えて、本明細書でベースステーションとも称される自動装置を含み、自動装置は採取装置を用いる一部の態様を自動化し、複数の生体試料を刺激し、安定化し、保管し、且つ各使用に関する情報を保管及び追跡することに並行して複数の採取装置の使用を容易にすることができる。
本明細書で開示される容器装置及び自動システムを用いる方法が提供される。これを用いて生体試料を採取し、刺激し、安定化する方法が開示される。一態様では、その方法は、内部コンパートメントを画定する側壁部、底壁部(少なくとも1つの壁部は弾性的に変形可能な材料で構成される)及び閉鎖部材を含む試料採取容器(内部コンパートメントは内部コンパートメントにおける第一及び第二のチャンバを画定し、流体分離する隔壁をそこに配置し、第一のチャンバは生体試料を受け取るように閉鎖部材と関連して配置される)、生体試料を刺激するのに効果的な量での第一のチャンバにおける少なくとも1つの刺激剤並びに生体試料を安定化するのに効果的な量での第二のチャンバにおける少なくとも1つの安定化剤を提供するステップと、患者から生体試料を採取し、生体試料を刺激剤に晒すために生体試料を第一のチャンバに導入するステップと、刺激を受けた生体試料を生成するために予め選択された時間、第一のチャンバにおける生体試料を刺激するステップと、隔壁を損傷させて第一及び第二のチャンバの内容物を混合することによって予め選択された時間後に刺激を受けた生体試料を安定化するステップとを含む。
本発明の方法に従って生体試料を採取し、アッセイし、安定化し、分析するためのキットも提供される。一態様では、そのようなキットは上述の採取チューブを含む。
(V.実施例)
リン酸特異的フローサイトメトリーによる分析の1つのプロセスは以下のステップを含む。生体試料が血液である場合、残留赤血球を溶解する作用物質を含み得るddH2Oで生理的pHにて凍結試料を2回洗浄することができる。任意に、赤血球を溶解するために用いられ、赤血球を溶解するのに効果的であることが示されている洗浄剤である0.1%Triton X100又は0.1%サポニンをddH2Oに加えることができる。次に、リン酸緩衝食塩水で細胞を洗浄し、4℃に冷却された80%メタノール及び20%リン酸緩衝食塩水の2ミリリットルの溶液中にペレットを再懸濁させる。次に、メタノール固定された細胞懸濁液を−80℃にて保管することができる。処理を継続するには、リン酸緩衝食塩水中に溶解した0.5%ウシ血清アルブミンからなる染色媒体でメタノール固定された細胞懸濁液を2回洗浄し、次に、当技術分野において公知であるように、染色し、ホスホFACSによって解析する。
以下のプロトコルでは、リン酸特異的フローサイトメトリーによるその後の解析のためにSmart Tube内に凍結された試料を処理するための上述の容器装置及びキットを用いる。
i.フィルタキャップ(フィルタメッシュ開口部のサイズは500ミクロン〜2000ミクロン)
ii.溶解バッファ1:再蒸留H2O(ddH2O)中0.03%Tween 20
iii.溶解バッファ2:2倍リン酸緩衝食塩水(2X PBS)中0.03%Tween 20
iv.1リットルの2X PBS=NaCl 16g,KCl 0.4g,Na2HPO4 2.88g,KH2PO4 0.48g(pH7.4)
v.透過バッファ1:20%PBSを含む80%メタノール(使用前に氷上で予冷却)
vi.染色バッファ1:PBS中0.5%ウシ血清アルブミン
37℃水浴にて10分間試料を解凍する。キャップを取り外し、2mlの溶解バッファ1を加え、キャップを再び取り付け、10秒間ボルテックスする。キャップをフィルタキャップに交換し、15ml円錐形チューブ内にデカントする。任意に、細胞集塊を除去するために細胞ストレーナが配置された50ml円錐形チューブに交換することができる。溶解バッファ1で円錐形チューブを充填し、37℃水浴(42℃は独特の利点を有する代替温度である)にて10分間インキュベートする。800xgで5分間遠心分離する。上清を廃棄する。結果として生じたペレットが白色である場合(未溶解赤血球がない)、次のセクション、リン酸特異的フローサイトメトリーによる解析のための染色に進む。結果として生じたペレットが赤色である場合(未溶解赤血球を有する)、ペレットを10mlの溶解バッファ2中に再懸濁させ、37℃水浴(42℃は独特の利点を有する代替温度である)にて10分間インキュベートする。800xgで5分間チューブを遠心分離し、デカントし、溶解バッファ1でペレットを洗浄する。結果として生じたペレットは完全な赤血球溶解に対応して白色であるはずである。リン酸特異的フローサイトメトリーによる解析のための染色に関するセクションに進む。
上記のペレットを含むチューブをボルテックスし、ペレットをほぐす。各チューブに1mlの透過バッファを加え、5秒間ボルテックスしてペレットをバッファ中に再懸濁させる。チューブを−80℃に移す。試料は更なる処理の前に少なくとも30日間−80℃で保管され得る。更なる処理のため、各チューブに少なくとも4mlの染色バッファを加え、4℃で5分間、800xgで遠心分離する。デカントし、4ml洗浄の染色バッファで更に2回ペレットを洗浄する。各ペレットを100ulの染色バッファ中に再懸濁させ、抗体染色のために100ulの細胞懸濁液を新たなFACSチューブ(又はプレート)に移す。各試料に抗体カクテルを加え、室温で30分間、暗室で染色する。通常、この用途のための抗体カクテルには、1つ以上の蛍光標識リン酸特異的抗体、例えば、STAT5(pY694)に特異的なクローン47(Becton Dickinson社カタログ番号612598)及び細胞型限定表面エピトープに特異的な1つ以上の蛍光標識リン酸特異的抗体、例えば、CD33に特異的なP67.6(Becton Dickinson社カタログ番号341640)が含まれる。染色バッファでチューブを充填し、800xgで遠心分離し、デカントする。用途に適切なフローサイトメトリー・プラットフォーム、例えば、Becton Dickinson社製のFACSCalibur又はLSRIIで解析する。推奨されるように1mlの患者血液がSmart Tubeに採取され、刺激される場合、試料は異なる染色カクテルでの解析のために少なくとも4つの異なるFACSチューブに分割され得ることに留意する。
Claims (76)
- 生体試料を採取し、アッセイし、安定化するための装置であって、
内部コンパートメントを画定する側壁部、底壁部及び閉鎖部材を有する容器を含み、前記内部コンパートメントが、前記内部コンパートメントにおける第一及び第二のチャンバを画定し、且つ流体分離する隔壁を内部に構成し、前記第一のチャンバが、前記生体試料を受け取るように前記閉鎖部材と関連して配置され、
少なくとも1つの前記壁部が弾性的に変形可能な材料で構成され、
前記第一のチャンバが少なくとも1つの刺激剤を含み、
前記第二のチャンバが少なくとも1つの安定化剤を含み、
前記第一及び第二のチャンバが、前記内部コンパートメントの流体一体性を開放或いは損ねることなく、前記少なくとも1つの壁部を変形させることによって流体連通され得る、装置。 - 前記隔壁が、前記第一及び第二のチャンバを流体連通させるために前記壁部の変形によってその流体一体性が損ねられ得る材料で構成された、請求項1に記載の装置。
- 前記隔壁が、破断性及び吸収性のうち1つ以上の性質を有する材料で構成された、請求項2に記載の装置。
- メッシュ及び開口部のうち1つを更に含み、これを通して前記内部コンパートメントに対して液体が付加又は除去され得ると同時に、前記内部コンパートメント内に損傷した前記隔壁の断片を保持する、請求項2に記載の装置。
- 前記隔壁が前記第二のチャンバを画定するアンプルを形成する、請求項3に記載の装置。
- 前記アンプルがホウケイ酸ガラスで構成された、請求項5に記載の装置。
- 前記壁部が前記内部コンパートメントの内部において支持リングを更に含み、
前記隔壁が、破断可能な接着剤によって前記支持リングに取り付けられたディスク部材を含み、前記取付けディスク部材が、前記内部コンパートメントにおける前記第一及び第二のチャンバを画定し、且つ流体分離し、
前記ディスク部材が、前記第一及び第二のチャンバを流体連通させるため、前記ディスク部材が前記壁部及び支持リングの変形によってずれるように、前記壁部より実質的に弾性度が低い変形可能な材料で構成された、請求項1に記載の装置。 - 前記支持リングが一体式支持リングであり、前記装置の長軸に対して非垂直角度にある、請求項7に記載の装置。
- 前記角度が約45度である、請求項8に記載の装置。
- 前記第一のチャンバに存在する抗凝固剤を更に含む、請求項1に記載の装置。
- 前記刺激剤が生物学的物質である、請求項1に記載の装置。
- 前記刺激剤が抗体である、請求項11に記載の装置。
- 前記刺激剤が低分子である、請求項11に記載の装置。
- 前記刺激剤がサイトカインである、請求項11に記載の装置。
- 前記刺激剤が免疫調節サイトカインである、請求項14に記載の装置。
- 前記刺激剤がToll様受容体リガンドである、請求項11に記載の装置。
- 前記安定化剤が固定剤を含む、請求項1に記載の装置。
- 前記安定化剤が細胞溶解バッファを含む、請求項1に記載の装置。
- 前記安定化剤が、細胞表面抗原を維持すると同時に、タンパク質合成、タンパク質分解、核酸合成、核酸分解、エンドサイトーシス、分泌、リン酸化、脱リン酸化、ユビキチン化及びメチル化からなる群より選択される少なくとも1つの細胞プロセスを阻止する、請求項1に記載の装置。
- 前記安定化剤が核酸を保存する、請求項1に記載の装置。
- 前記安定化剤が、細胞溶解バッファ又は赤血球特異的細胞溶解バッファを含む、請求項1に記載の装置。
- 前記安定化剤が固定剤及び赤血球細胞溶解バッファを含む、請求項1に記載の装置。
- 前記安定化剤がタンパク質及び細胞内シグナル伝達を安定化する、請求項1に記載の装置。
- 前記安定化剤が、特に転写物存在量を定量する目的で、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)、リアルタイムPCR、オリゴヌクレオチドマイクロアレイ、cDNAマイクロアレイ、マクロアレイによるその後の解析のために核酸を保存する、請求項1に記載の装置。
- 前記安定化剤が、単一細胞選別及び又はフローサイトメトリー解析を可能にするために細胞表面を好適に保存する、請求項1に記載の装置。
- 前記単一細胞選別が蛍光活性化細胞選別である、請求項25に記載の装置。
- 前記蛍光活性化細胞選別及び又はフローサイトメトリー解析が、リン酸特異的抗体を用いる、請求項26に記載の装置。
- 前記安定化剤が、約0.1%〜10%ホルムアルデヒド、0.001%〜10%ジエチレングリコールの前記生体試料中の最終濃度を含む水性溶液である、請求項22に記載の装置。
- 前記安定化剤が、約0.1%〜5%ホルムアルデヒド、1%〜10%ジメチルスルホキシド(DMSO)、5〜50mM 2,4−ジニトロベンゼンスルホン酸ナトリウム塩(DNBS)、0.001%〜1.0%Tween 20洗浄剤の前記生体試料中の最終濃度を含む水性溶液である、請求項22に記載の装置。
- 前記安定化剤が、1%〜3%ホルムアルデヒド及び1%〜3%ジエチレングリコールの前記生体試料中の最終濃度を含む水性溶液である、請求項22に記載の装置。
- 前記安定化剤が、0.7%〜1%ホルムアルデヒド、6%〜7%DMSO、20%〜30%DNBS、0.07%〜0.2%Tween 20洗浄剤の前記生体試料中の最終濃度を含む水性溶液である、請求項22に記載の装置。
- 前記第一のチャンバが大気圧より低い内圧を有する、請求項1に記載の装置。
- 前記内圧が、所定量の前記生体試料を前記第一のチャンバに引き込むように設定された、請求項32に記載の装置。
- 前記生体試料が、全血、滑液、脳脊髄液、羊水及び腫瘍細胞から選択される、請求項1に記載の装置。
- 生体試料を採取し、アッセイし、安定化するためのシステムであって、
a)請求項1に記載の採取装置と、
b)i)前記採取装置を動かし、回転させ、揺動させ、超音波振動させ、亜音速振動させることの1つ以上によって前記採取装置を操作することができる操作手段と、
ii)前記採取装置の前記第一及び第二のチャンバを流体連通させることができる力付与手段と、
iii)前記採取装置の温度を調節することができる熱調節手段とを含む自動装置と
を含む、システム。 - 前記自動装置の機能を制御するマイクロ電子素子を更に含む、請求項35に記載のシステム。
- システムの状態をユーザに報告することができるユーザインターフェースを更に含む、請求項35に記載のシステム。
- 前記操作手段、前記力付与手段及び前記熱調節手段の1つ以上と機能的に伝達し、前記操作手段、前記力付与手段及び前記熱調節手段の1つ以上の作動を誘発するように構成された時間調整手段を更に含む、請求項36に記載のシステム。
- 前記採取装置が、その識別を可能にする独特のタグを更に含む、請求項36に記載のシステム。
- 前記独特のタグが、RFIDタグ、一次元バーコード、マトリクス・バーコード及びマイクロドット・パターンからなる群より選択される、請求項36に記載のシステム。
- 前記自動装置が、1つ以上のタグ付き採取装置のアッセイ・パラメータ・データを含むデータを収集する、請求項39に記載のシステム。
- 前記アッセイ・パラメータ・データをリモート位置に伝達する手段を更に含む、請求項41に記載の自動装置。
- 前記リモート位置が、前記データの保存、前記データの解析及び前記データのユーザに対する表示のうち1つ以上を行うことができる外部処理システムである、請求項42に記載の自動装置。
- 前記隔壁が、前記第一及び第二のチャンバを流体連通させるために前記壁部の変形によってその流体一体性が損なわれ得る材料で構成され、
前記力付与手段が、前記壁部を変形させることによって前記採取装置の前記第一及び第二のチャンバを流体連通させることができる、請求項35に記載のシステム。 - 前記壁部が、前記内部コンパートメントの内部に支持リングを更に含み、
前記隔壁が、破断可能な接着剤によって前記支持リングに取り付けられたディスク部材を含み、前記取付けディスク部材が、前記内部コンパートメントにおける前記第一及び第二のチャンバを画定し、且つ流体分離し、
前記ディスク部材が、前記第一及び第二のチャンバを流体連通させるため、前記ディスク部材が前記壁部及び支持リングの変形によってずれるように、前記壁部より実質的に弾性度が低い変形可能な材料で構成された、請求項35に記載のシステム。 - 生体試料を採取し、刺激し、安定化する方法であって、
内部コンパートメントを画定する弾性的に変形可能な材料で構成される壁部、底壁部及び閉鎖部材を含む試料採取容器(前記内部コンパートメントは前記内部コンパートメントにおける第一及び第二のチャンバを画定し、且つ流体分離する隔壁を内部に配置し、前記第一のチャンバは前記生体試料を受け取るように前記閉鎖部材と関連して配置される)、生体試料を刺激するのに効果的な量での前記第一のチャンバにおける少なくとも1つの刺激剤、並びに前記生体試料を安定化するのに効果的な量での前記第二のチャンバにおける少なくとも1つの安定化剤を提供するステップと、
患者から生体試料を採取し、前記生体試料を前記刺激剤に晒すために前記生体試料を前記第一のチャンバに導入するステップと、
刺激を受けた生体試料を生成するために予め選択された時間、前記第一のチャンバにおける前記生体試料を刺激するステップと、
前記隔壁を損傷させて前記第一及び第二のチャンバの内容物を混合することによって、前記予め選択された時間後に前記刺激を受けた生体試料を安定化するステップと
を含む、方法。 - 前記安定化剤が、細胞溶解バッファ又は赤血球特異的細胞溶解バッファを含む、請求項46に記載の方法。
- 前記安定化剤が固定剤及び赤血球溶解バッファを含む、請求項46に記載の方法。
- 前記安定化剤がタンパク質及び細胞内シグナル伝達を安定化する、請求項46に記載の方法。
- 前記安定化生体試料がプロテオミクス技術によってその後に解析される、請求項49に記載の方法。
- 前記プロテオミクス技術がウエスタンブロット技術である、請求項50に記載の方法。
- 前記プロテオミクス技術がキャピラリー電気泳動技術である、請求項50に記載の方法。
- 前記プロテオミクス技術がマイクロフルイディクス技術である、請求項50に記載の方法。
- 前記安定化剤が、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)、リアルタイムPCR、オリゴヌクレオチドマイクロアレイ、cDNAマイクロアレイ及びマクロアレイ技術のうち1つ以上によるその後の解析のために核酸を保存する、請求項46に記載の方法。
- 前記技術が配列決定技術である、請求項54に記載の方法。
- 前記安定化剤が、単一細胞選別及び/又はフローサイトメトリー解析を可能にするのに好適な細胞表面を保存する、請求項46に記載の方法。
- 前記単一細胞選別が蛍光活性化細胞選別である、請求項56に記載の方法。
- 前記蛍光活性化細胞選別がリン酸特異的抗体を用いる、請求項57に記載の方法。
- 前記フローサイトメトリー解析が誘導結合プラズマ質量分析(ICP−MS)である、請求項56に記載の方法。
- 前記隔壁が、前記第一及び第二のチャンバを流体連通させるために前記壁部の変形によってその流体一体性が損ねられ得る材料で構成され、
前記隔壁の前記損傷が前記壁部を変形させることによって達成される、請求項46に記載の方法。 - 請求項35に記載の自動装置を提供するステップを更に含み、前記装置が、
前記刺激の間に前記試料採取容器及びその内容物を37℃に保持し、
前記壁部を変形させて前記隔壁を損傷させ、
前記試料採取容器をその長軸に沿って回転させて前記第一及び第二のチャンバの内容物を混合し、
前記安定化の間、所定の温度で所定の時間、前記試料採取容器をインキュベートし、
前記試料採取容器及びその内容物の温度を−80℃〜10℃まで下げる、請求項46に記載の方法。 - 前記生体試料が、前記患者から採取されて前記試料採取容器の前記第一のチャンバに直接入れられる、請求項46に記載の方法。
- 前記生体試料が、前記患者から前記試料採取容器ではない容器に採取され、その後、前記試料採取容器の前記第一のチャンバに導入される、請求項46に記載の方法。
- 全血試料を採取し、刺激し、安定化する方法であって、
内部コンパートメントを画定する側壁部、底壁部及び閉鎖部材を有する試料採取容器(前記内部コンパートメントは、(i)前記内部コンパートメントにおける第一及び第二のチャンバを画定し、且つ流体分離する隔壁(前記第一のチャンバは前記生体試料を受け取るように前記閉鎖部材と関連して配置され、前記第一のチャンバは大気圧より低い圧力を有する)と、(ii)全血試料を刺激するのに効果的な量での前記第一のチャンバ内に含まれる少なくとも1つの刺激剤及び前記全血試料を安定化するのに効果的な量での前記第二のチャンバ内に含まれる少なくとも1つの安定化剤とをその内部に配置する)(少なくとも1つの前記壁部は弾性的に変形可能な材料で構成される)を提供するステップと、
患者から全血試料を採取し、前記全血試料を前記刺激剤に即座に晒すために前記第一のチャンバに直接導入するステップと、
刺激を受けた全血試料を生成するために所望の時間、前記第一のチャンバにおける前記全血試料を刺激するステップと、
前記壁部を変形させることによって前記隔壁を損傷させ、前記第一及び第二のチャンバの内容物を混合することによって、前記所望の時間の直後に前記刺激を受けた全血試料を安定化するステップと
を含む、方法。 - 前記刺激するステップが、所定の時間、所定の反応温度で前記試料を維持するステップを更に含む、請求項46に記載の方法。
- 前記方法が、前記試料を室温又は室温以下での保管温度で保管し、前記試料を室温又は室温以下での保管温度で輸送するステップのうち1つ以上を更に含む、請求項46に記載の方法。
- 前記方法が、プロテオミクス又はゲノム法によって前記試料を解析するステップを更に含む、請求項46に記載の方法。
- 前記プロテオミクス又はゲノム法が、フローサイトメトリー、タンパク質マイクロアレイ、PCR、リアルタイム定量PCR、核酸マイクロアレイ、RNAiアレイ、細胞アレイ、cDNAマイクロアレイ、ペプチド配列決定及び核酸配列決定から選択される、請求項67に記載の方法。
- 生体試料の刺激プロファイルを分析する方法であって、刺激プロファイルのために生体試料を分析するステップを含み、前記生体試料が請求項46に記載の方法に従って調製される、方法。
- 前記方法が、試料を室温〜100℃の温度まで加熱することによって試料を処理するステップを更に含む、請求項46に記載の方法。
- 前記方法が、試料を40℃〜50℃の温度まで加熱することによって試料を処理するステップを更に含む、請求項46に記載の方法。
- 生体試料を採取し、アッセイし、安定化するためのキットであって、請求項1に記載の装置を含むキット。
- 生体試料を分析及び処理するためのキットであって、
請求項3に記載の装置の閉鎖部材を取り換えることができるフィルタキャップと(前記フィルタキャップは、これを通じて前記内部コンパートメントに対して液体が付加又は除去され得ると同時に、前記内部コンパートメント内に損傷した前記隔壁の断片を保持するメッシュ又は開口部を含む)、
低張溶解バッファと、
高張溶解バッファと、
透過バッファと、
染色バッファと
を含む、キット。 - 前記メッシュにおける開口部が、サイズで約500ミクロン超であり、サイズで約2000ミクロン未満である、請求項73に記載のキット。
- 前記低張溶解バッファ及び前記高張溶解バッファのうち1つ以上が洗浄剤を含む、請求項73に記載のキット。
- 前記洗浄剤がTween 20である、請求項75に記載のキット。
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