JP2020519873A - 赤血球の溶解のための組成物および方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2017年5月8日に出願された米国仮特許出願番号第62/503,202号の利益を主張している。この仮特許出願の全体の内容は、すべての目的のためにその全体が参考として本明細書中に援用される。
本発明は、赤血球を溶解するための方法および組成物に関する。
赤血球(RBC)は、内因性全血サンプル中に白血球(WBC)に対して1,000:1の比率で存在し、これは、WBC集団を全血中で稀な事象にする。フローサイトメトリーによって、全血サンプル中のWBCを適切に分析するために、RBCは、WBC集団を濃縮し、入手物から有意義なデータを提供するため、最初に、排除される必要がある。
本発明は、等張性で中性pH条件下、全血サンプル中のRBCの急速溶解を可能にする。本開示は、赤血球を溶解する方法であって、第1の混合物を形成するために、赤血球および白血球を含むサンプルと定着剤を含む第1の緩衝剤を接触させるステップであって、第1の緩衝剤の溶質濃度は、サンプルの溶質濃度を上回る、ステップと、第2の混合物を形成するために、第2の緩衝剤を、サンプルおよび第1の緩衝剤によって形成される第1の混合物に添加するステップであって、第2の混合物中の溶質濃度は、サンプルの溶質濃度と実質的に同一であって、それによって、サンプル中の赤血球が溶解される、ステップとを含む、方法を提供する。
続く説明では、いくつかの用語が、広範に使用され、以下の定義は、本発明の種々の側面の理解を促進するために提供される。用語の例を含む、明細書中の例の使用は、例証的目的のみのためのものであって、本明細書の本発明の実施形態の範囲および意味を限定することを意図するものではない。数値範囲は、明細書中の範囲を画定する数を包含し、単語「〜を含む」は、非限定的用語として使用され、語句「限定ではないが、〜を含む」の実質的に均等物であって、単語「〜を備える」は、対応する意味を有する。
1.緒言
2.方法
溶液張性を上昇させ、細胞を固定する
サンプル混合物を等張性状態まで復元する
分析または貯蔵
3.キット
4.用途
5.例示的実施形態
(実施例)
以下の実施例は、例証のために提供されるが、請求される発明を限定するものではない。
Claims (19)
- 赤血球を溶解する方法であって、
赤血球および白血球を含むサンプルと定着剤を含む第1の緩衝剤を接触させるステップであって、前記第1の緩衝剤の溶質濃度は、前記サンプルの溶質濃度を上回り、前記サンプルおよび前記第1の緩衝剤は、第1の混合物を形成する、ステップと、
第2の混合物を形成するために、第2の緩衝剤を前記第1の混合物に添加するステップであって、前記第2の混合物中の溶質濃度は、前記サンプルの溶質濃度の少なくとも90%であって、それによって、前記サンプル中の赤血球は、溶解される、ステップと、
を含む、方法。 - 前記サンプルは、全血である、請求項1に記載の方法。
- 前記第2の緩衝剤を添加するステップの前に、カルシウムキレート剤を添加するステップをさらに含み、前記カルシウムキレート剤は、カルシウムをキレート化することによって、前記赤血球中のカルシウム依存輸送を遮断する、請求項1に記載の方法。
- 前記第1の緩衝剤はさらに、カルシウムキレート剤を含み、前記カルシウムキレート剤は、前記赤血球中のカルシウム依存輸送を遮断する、請求項1に記載の方法。
- 前記接触させるステップはさらに、0.5分〜20分の期間にわわたって、前記第1の混合物をインキュベートすることを含む、請求項1〜4のいずれかに記載の方法。
- 前記方法のステップはさらに、0.5分〜20分の第2の期間にわたって、前記第2の混合物をインキュベートすることを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記第2の緩衝剤は、0×〜1×のPBSを含む、請求項1〜6のいずれかに記載の方法。
- 前記第1の混合物は、約0.5〜3%ホルムアルデヒドと、0.5〜20mMのEDTAと、1.2〜1.8×のリン酸緩衝生理食塩水(PBS)とを含む、請求項1〜7のいずれかに記載の方法。
- 前記第1の緩衝剤は、約0.5%〜10%ホルムアルデヒドと、0.01mM〜20mMのEDTAと、6.5〜8.5のpHにおける150mM〜600mMの塩とを含む、請求項4に記載の方法。
- 前記第1の緩衝剤は、1×〜3×のPBSを含む、請求項9に記載の方法。
- 前記接触させるステップは、0.2:1〜1:1に及ぶ体積比において、前記第1の緩衝剤と前記サンプルを混合することを含む、請求項1〜10のいずれかに記載の方法。
- 全血サンプルを処理する方法であって、
全血のサンプルと、定着剤と、高張性食塩水と、カルシウムキレート剤とを含む、第1の混合物を形成するステップであって、前記高張性食塩水の溶質濃度は、前記全血の溶質濃度を上回る、ステップと、
等張性の第2の混合物を形成するために、第2の緩衝剤を前記第1の混合物に添加するステップと、
を含む、方法。 - 前記第1の混合物は、0.5〜3%ホルムアルデヒドと、3〜7mMのEDTAとを含む、請求項12に記載の方法。
- 前記第2の混合物は、0.01〜2%ホルムアルデヒドを含む、請求項12または13に記載の方法。
- 前記第2の緩衝剤は、0×〜1×のPBSである、請求項12〜14のいずれかに記載の方法。
- 前記第1または前記第2の混合物の細胞を染色するステップと、溶解後の染色された細胞を血球計数器の中に導入するステップとをさらに含む、請求項12〜15のいずれかに記載の方法。
- 赤血球溶解キットであって、
高張性食塩水と、0.5%〜10%ホルムアルデヒドと、0.01mM〜20mMのEDTAとを含む、第1の試薬であって、前記第1の試薬の溶質濃度は、全血サンプルの溶質濃度を上回る、第1の試薬と、
0×〜1×のPBSを含む、第2の試薬と、
を含む、赤血球溶解キット。 - 前記高張性食塩水は、150mM〜600mMの塩濃度を有し、6.5〜8.5のpHである、請求項17に記載の赤血球溶解キット。
- 前記第2の試薬は、0×〜1×のPBSを含む、請求項17または18に記載の赤血球溶解キット。
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