CN104178424A - 一种红细胞裂解液及其裂解方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种红细胞裂解液及利用该裂解液裂解红细胞的方法，所述红细胞裂解液包括以下浓度的组份：0.1M～0.5M氯化铵、0.001M～0.2M碳酸氢钾、0.001～0.05M乙二胺四乙酸或乙二胺四乙酸二钠。本发明所述红细胞裂解液试剂具有很好的红细胞裂解效果，对操作人员安全无毒副作用，裂解效率高。并且以甲醛作为固定剂，与其它组份联合使用，实现了该试剂不仅可用于血液中红细胞的去除，而且可以作为血液样本中的非红细胞部分细胞的保护剂用于样本运输，从而克服了现有技术所纯化的血液不能稳定保存剩余细胞组分的缺点。
Description
技术领域
本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及一种红细胞裂解液及其裂解方法。
背景技术
红细胞也称红血球（RBC），是血液中数量最多的一种血细胞，也是脊椎动物体内通过血液运送氧气的最主要的媒介，同时还具有免疫功能。红细胞中含有血红蛋白，因而使血液呈红色。但是在利用现代临床诊断方法对血液样品进行诊断检测时，红细胞对许多诊断检测存在干扰作用，这就需要先把红细胞从血液样品中分离出去，然后再进一步对样品进行检测。
目前去除红细胞的方法主要有：密度梯度离心法、自然沉降法、差异沉降法、氯化铵分离法等。密度梯度离心法分离的肿瘤细胞不纯，分离效率不高，有相当一部分肿瘤细胞丢失，自然沉降法和差异沉降法简便但各层中的细胞种类多，分离的细胞纯度不高，而目前应用最广泛的氯化铵分离法也存在分离细胞纯度差的问题。
目前，很多常规的红细胞裂解试剂在实际应用中都存在裂解效果不够好的缺陷，例如或是分离细胞纯度差，或是裂解效率不够高等。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供一种红细胞裂解液，利用该裂解液裂解血液中的红细胞，简单高效，利于高通量的操作，更好地满足实际应用的需要。
实现上述目的技术方案如下。
一种红细胞裂解液，其包括有以下浓度的组份：0.1M～0.5M氯化铵、0.001M～0.2M碳酸氢钾、0.001～0.05M乙二胺四乙酸或乙二胺四乙酸二钠。
进一步地，包括有以下浓度的组份：0.3M～0.32M氯化铵、0.018M～0.022M碳酸氢钾、0.003～0.005M乙二胺四乙酸或乙二胺四乙酸二钠。
在其中一个实施例中，还包括有0.01%～0.2%的甲醛。
本发明的另一个目的是提供一种红细胞裂解的方法。
实现上述的目的的技术方案如下：
一种血液中红细胞裂解的方法，取血液样本，按照体积为1:2-5的比例加入上述的红细胞裂解液，两者混合15-30min。
与现有技术相比，本发明有益效果主要体现在：
本发明利用常规红细胞裂解试剂，经过大量的实验和发明人的技术积累，选取新的组份浓度，达到比现有技术更好的红细胞裂解效果，并且对操作人员安全无毒副作用，裂解效率高。并且以甲醛作为固定剂，与其它组份联合使用，实现了该试剂不仅可用于血液中红细胞的去除，而且可以作为保存血液样本中的非红细胞部分细胞的保护剂用于样本运输，从而克服了现有技术所纯化的血液不能稳定保存剩余细胞组分的缺点。
具体实施例
实施例1.一种红细胞裂解液
1、一种红细胞裂解液，具有以下组成：
| 试验组 | 氯化铵 | 碳酸氢钾 | 乙二胺四乙酸二钠 | 甲醛 |
| Group1 | 0.1M | 0.001M | 0.001M | 0.01% |
| Group2 | 0.3M | 0.018M | 0.0036M | 0.1% |
| Group3 | 0.31M | 0.021M | 0.0042M | 0.1% |
| Group4 | 0.32M | 0.022M | 0.0045M | 0.1% |
| Group5 | 0.5M | 0.2M | 0.05M | 0.2% |
蒸馏水补至1L，甲醛浓度为体积比，pH调至7.4。
2、红细胞的裂解：
1）分别取同一标本的血液5ml，红细胞的起始浓度均为5×1012/L；
2）分别加入红细胞裂解液试剂15ml，两者充分混合；
3）在4℃放置20min，600g离心5min，弃上清液。采用血细胞自动计数仪对RBC计数，结果如下：
表1红细胞数量平均值（/L）
| 样本 | Group1 | Group2 | Group3 | Group4 | Group5 |
| 1 | 1.9×1011 | 7.5×105 | 3.0×105 | 6.5×105 | 2.2×1011 |
| 2 | 8.3×1010 | 5.3×105 | 4.1×105 | 5.8×105 | 8.7×1010 |
| 3 | 2.1×1011 | 6.8×105 | 3.7×105 | 5.5×105 | 2.1×1011 |
| 4 | 2.4×1011 | 6.4×105 | 2.5×105 | 6.2×105 | 1.4×1011 |
| 5 | 9.7×1010 | 5.5×105 | 3.3×105 | 7.1×105 | 1.8×1011 |
| 6 | 1.7×1011 | 8.1×105 | 4.0×105 | 5.8×105 | 6.8×1010 |
| 7 | 9.2×1010 | 5.3×105 | 4.1×105 | 5.5×105 | 2.0×1011 |
| 8 | 2.2×1011 | 6.0×105 | 2.2×105 | 7.3×105 | 2.3×1011 |
| 9 | 1.4×1011 | 9.1×105 | 3.1×105 | 7.8×105 | 1.1×1011 |
| 10 | 7.4×1010 | 7.1×105 | 3.5×105 | 8.0×105 | 1.6×1011 |
| 11 | 2.5×1011 | 5.6×105 | 3.4×105 | 8.5×105 | 8.6×1010 |
| 12 | 2.1×1011 | 8.8×105 | 2.9×105 | 7.9×105 | 9.8×1010 |
| 13 | 7.0×1010 | 9.5×105 | 2.5×105 | 6.7×105 | 6.7×1010 |
| 14 | 1.0×1011 | 8.3×105 | 4.1×105 | 6.6×105 | 1.6×1011 |
| 15 | 1.7×1011 | 6.7×105 | 2.8×105 | 5.9×105 | 7.4×1010 |
| 16 | 1.5×1011 | 6.6×105 | 3.1×105 | 8.9×105 | 2.0×1011 |
| 17 | 8.7×1010 | 5.7×105 | 1.9×105 | 6.7×105 | 1.3×1011 |
| 18 | 1.6×1011 | 4.9×105 | 2.0×105 | 9.0×105 | 2.1×1011 |
| 19 | 2.3×1011 | 9.8×105 | 2.3×105 | 5.7×105 | 7.5×1010 |
| 20 | 2.0×1011 | 7.6×105 | 1.8×105 | 6.2×105 | 1.3×1011 |
由以上数据可见，经过本发明所述红细胞裂解液裂解，5组的裂解液均能有效裂解红细胞，其中，Group2、Group3和Group4三组配方红细胞裂解率高达99%以上，裂解效果更佳。
实施例2不同配方红细胞裂解的效果对比
1、红细胞裂解液的配方
根据文献报道，选择3种常用的红细胞裂解配方进行裂解效果对比。使用100ul全血，按照全血比裂解液为1:3的体积比例进行混合，并设置系列工作浓度梯度，如下：
配方一（1×）：1M Tris0.1M，NaCl0.1M，MgCl2·6H2O0.05M；
配方二（1×）：NH4Cl0.1396M，1M Tris0.1696M；
配方三（1×）：NH4Cl0.155M，KHCO30.01M，EDTA-Na20.002M，0.05%甲醛。
按照全血比裂解液1:3的比例进行混合，在4℃放置20min，将处理后的样本600g离心5min，采用血细胞自动计数仪对WBC、RBC计数。本发明技术领域的常规评价的标准为：离心后沉淀物的多少，即红细胞裂解效果越好，在混合液中细胞越少，沉淀物越少。
2、实验结果
配方1是NaCl的低渗液，红细胞在其中会因外部渗透压小而吸水膨胀破裂。在浓度为0.5×条件下裂解效果较好，浓度越高裂解效果越差。
配方2是氯化铵的裂解液，氯化铵在水中水解出NH3而进入细胞，后又水解成铵离子使细胞内渗透压升高，导致红细胞吸水破裂。在浓度为0.5×和1×时裂解效果较好。
配方3也是氯化铵的裂解液，但成分较配方2不同，裂解红细胞原理与配方2类似。在浓度为2×浓度时，裂解效果较其他浓度好。
表2不同配方红细胞裂解的效果对比
综合以上三种配方及不同浓度的红细胞裂解情况分析，配方3工作浓度为2×时是所有裂解液中最好的一种。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (4)
1.一种红细胞裂解液，其特征在于，包括有以下浓度的组份：0.1M～0.5M氯化铵、0.001M～0.2M碳酸氢钾、0.001～0.05M乙二胺四乙酸或乙二胺四乙酸二钠。
2.根据权利要求1所述的红细胞裂解液，其特征在于，包括有以下浓度的组份：0.3M～0.32M氯化铵、0.018M～0.022M碳酸氢钾、0.003～0.005M乙二胺四乙酸或乙二胺四乙酸二钠。
3.根据权利要求1或2所述的红细胞裂解液，其特征在于，所述的红细胞裂解液还包括有0.01%～0.2%的甲醛。
4.一种裂解血液中红细胞的方法，其特征在于，取血液样本，按照体积为1:2-5的比例加入权利要求1或2所述的红细胞裂解液，两者混合反应15-30min。
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Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106370855A (zh) * | 2016-09-28 | 2017-02-01 | 吉林大学 | 基于BSaBA信号放大系统的绵羊过氧化物氧还酶6双抗夹心ELISA试剂盒 |
| CN107515268A (zh) * | 2017-09-14 | 2017-12-26 | 中国计量大学 | 细胞裂解液中尼古丁的定量检测方法 |
| JPWO2017141789A1 (ja) * | 2016-02-19 | 2018-12-13 | コニカミノルタ株式会社 | 血液由来検体の保管方法および希少細胞の判定方法 |
| CN109652517A (zh) * | 2019-02-22 | 2019-04-19 | 领航基因科技（杭州）有限公司 | 一种用于检测血流感染致病菌的试剂盒 |
| CN109655607A (zh) * | 2019-01-25 | 2019-04-19 | 广东菲鹏生物有限公司 | 红细胞裂解试剂及其应用 |
| CN110770587A (zh) * | 2017-05-08 | 2020-02-07 | 拜克门寇尔特公司 | 用于裂解红细胞的组合物和方法 |
| CN111808843A (zh) * | 2020-07-21 | 2020-10-23 | 武汉海吉力生物科技有限公司 | 一种dna提取试剂盒及提取方法 |
| CN116286792A (zh) * | 2023-02-16 | 2023-06-23 | 江苏伟禾生物科技有限公司 | 一种全血基因组dna快提取试剂盒及其使用方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1126437A (zh) * | 1993-07-05 | 1996-07-10 | 北方总医院N.H.S.托拉斯 | 细胞的制备和稳定化 |
-
2013
- 2013-05-24 CN CN201310200383.2A patent/CN104178424A/zh active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1126437A (zh) * | 1993-07-05 | 1996-07-10 | 北方总医院N.H.S.托拉斯 | 细胞的制备和稳定化 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 崔巍等: "流式细胞术分析小鼠外周血免疫细胞全血裂解试剂比较研究", 《中国实验血液学杂志》 * |
| 巩文玉: "红细胞裂解液对CD34+细胞相对计数的影响", 《中国实验血液学杂志》 * |
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPWO2017141789A1 (ja) * | 2016-02-19 | 2018-12-13 | コニカミノルタ株式会社 | 血液由来検体の保管方法および希少細胞の判定方法 |
| CN106370855A (zh) * | 2016-09-28 | 2017-02-01 | 吉林大学 | 基于BSaBA信号放大系统的绵羊过氧化物氧还酶6双抗夹心ELISA试剂盒 |
| CN106370855B (zh) * | 2016-09-28 | 2018-02-02 | 吉林大学 | 基于BSaBA信号放大系统的绵羊过氧化物氧还酶6双抗夹心ELISA试剂盒 |
| CN110770587A (zh) * | 2017-05-08 | 2020-02-07 | 拜克门寇尔特公司 | 用于裂解红细胞的组合物和方法 |
| CN110770587B (zh) * | 2017-05-08 | 2023-10-20 | 拜克门寇尔特公司 | 用于裂解红细胞的组合物和方法 |
| CN107515268A (zh) * | 2017-09-14 | 2017-12-26 | 中国计量大学 | 细胞裂解液中尼古丁的定量检测方法 |
| CN107515268B (zh) * | 2017-09-14 | 2020-06-16 | 中国计量大学 | 细胞裂解液中尼古丁的定量检测方法 |
| CN109655607A (zh) * | 2019-01-25 | 2019-04-19 | 广东菲鹏生物有限公司 | 红细胞裂解试剂及其应用 |
| CN109652517A (zh) * | 2019-02-22 | 2019-04-19 | 领航基因科技（杭州）有限公司 | 一种用于检测血流感染致病菌的试剂盒 |
| CN111808843A (zh) * | 2020-07-21 | 2020-10-23 | 武汉海吉力生物科技有限公司 | 一种dna提取试剂盒及提取方法 |
| CN116286792A (zh) * | 2023-02-16 | 2023-06-23 | 江苏伟禾生物科技有限公司 | 一种全血基因组dna快提取试剂盒及其使用方法 |
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