CN102703597A - 血液白细胞分离液及其制作方法、真空采血管与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了血液白细胞分离液、该血液白细胞分离液的应用、该血液白细胞分离液的制作方法、具有该血液白细胞分离液的血液白细胞分离真空采血管、以及该血液白细胞分离真空采血管的应用，血液白细胞分离液由重量份比例为18.5~21.5：1.5~2.5：2~3：69：3.8：0.1：0.05~0.15：2~3的葡聚糖T500、羟乙基淀粉、泛影葡胺、水、柠檬酸钠、NaN3、聚二烯丙基二甲基氯化铵、聚乙烯吡咯烷酮组成。本发明的优点在于：能将临床采血、抗凝白细胞分离一次性完成，血液白细胞分离液中的柠檬酸钠和血液中的钙离子蛰合而抗凝，不存在破坏分离液液面层的技术问题，自然沉淀后吸取上清液不需要离心，把复杂细胞分离技术变成简单采血分离过程，过程易统一，试验效果的重复性好，质量可控性强。
Description
技术领域
本发明涉及医学临床检验领域中血液采集、白细胞密度自然沉降分离采集真空容器，尤其涉及血液白细胞分离液、该血液白细胞分离液的应用、该血液白细胞分离液的制作方法、具有该血液白细胞分离液的血液白细胞分离真空采血管、以及该血液白细胞分离真空采血管的应用。
背景技术
现今医学临床检验中血液病毒基因检验、免疫细胞功能的检验，都需要在血液采集后分离出具有吞噬病毒能力的有核白细胞或免疫淋巴细胞，传统的细胞分离方法一般都利用各种细胞的密度不同，配制各种目标细胞相同密度的高离子强度的细胞分离液，定量加入试管中，将抗凝血沿管壁缓慢加入管中（不能冲破分离液液面层），然后使用离心机进行离心（离心力范围需求非常窄），离心力与离心半径、离心机实际转速也只是理论推导值，无法实际进行测定和控制，专业性非常强，人为影响因素大，分离效果的重复性差。
基于上述传统细胞分离方法存在的诸多缺陷：专业性强、操作难度大，目前尚无统一的试剂，也没有统一操作规程，目标细胞收集率非常低、耗时、耗力，常要重复进行多次收集。
发明内容
有鉴于此，有必要提供能把复杂细胞分离技术变成简单采血分离过程、过程易统一、试验效果的重复性好、质量可控性强的血液白细胞分离液、该血液白细胞分离液的应用、该血液白细胞分离液的制作方法、具有该血液白细胞分离液的血液白细胞分离真空采血管、以及该血液白细胞分离真空采血管的应用。
本发明是这样实现的，血液白细胞分离液，其由重量份比例为18.5~21.5：1.5~2.5：2~3：69：3.8：0.1：0.05~0.15：2~3的葡聚糖T500、羟乙基淀粉、泛影葡胺、水、柠檬酸钠、NaN3、聚二烯丙基二甲基氯化铵、聚乙烯吡咯烷酮组成。
本发明还涉及上述血液白细胞分离液的制作方法，其包括以下步骤：将葡聚糖T500、羟乙基淀粉、泛影葡胺按重量份比例18.5~21.5：1.5~2.5：2~3：69加入玻璃容器中，并加入水充分溶解；将柠檬酸钠、NaN3、聚二烯丙基二甲基氯化铵、聚乙烯吡咯烷酮按重量份比例3.8：0.1：0.05~0.15：2~3加入该玻璃容器中，并充分混匀形成该血液白细胞分离液，其中，该葡聚糖T500：该羟乙基淀粉：该泛影葡胺：该水：该柠檬酸钠：该NaN3：该聚二烯丙基二甲基氯化铵：该聚乙烯吡咯烷酮为18.5~21.5：1.5~2.5：2~3：69：3.8：0.1：0.05~0.15：2~3。
作为上述方案的进一步改进，该血液白细胞分离液的制作方法还包括以下步骤：用0.1μm滤膜抽滤。
本发明还涉及上述血液白细胞分离液的应用，该血液白细胞分离液用于血液病毒基因检验或免疫细胞功能检验。
本发明还涉及血液白细胞分离真空采血管，其包括真空管体以及收容在该真空管体内的血液白细胞分离液，该血液白细胞分离液由重量份比例为18.5~21.5：1.5~2.5：2~3：69：3.8：0.1：0.05~0.15：2~3的葡聚糖T500、羟乙基淀粉、泛影葡胺、水、柠檬酸钠、NaN3、聚二烯丙基二甲基氯化铵、聚乙烯吡咯烷酮组成。
作为上述方案的进一步改进，该血液白细胞分离液与该血液白细胞分离真空采血管待获取的采血量的比例为：2:1。
作为上述方案的进一步改进，该血液白细胞分离真空采血管预置该待获取的采血量±10%真空度。
本发明还涉及上述任意一种血液白细胞分离真空采血管的应用，该血液白细胞分离真空采血管的应用包括以下步骤：按常规真空采血管采血，采血后将该血液白细胞分离真空采血管上下颠倒若干次；用血细胞分析仪计数，记录计数结果。
本发明还涉及上述任意一种血液白细胞分离真空采血管的另一种应用，该血液白细胞分离真空采血管的应用包括以下步骤：按常规真空采血管采血，采血后将该血液白细胞分离真空采血管上下颠倒若干次；将该血液白细胞分离真空采血管插在试管架上，其中，该血液白细胞分离真空采血管倾斜于该试管架；自然沉淀45分钟后，对该血液白细胞分离真空采血管中的液体分离出含白细胞的上清液层；将该上清液层中的上清液用血细胞分析仪计数，记录计数结果。
作为上述方案的进一步改进，当该血液白细胞分离真空采血管插在试管架上时，该血液白细胞分离真空采血管倾斜于该试管架。
本发明提供的血液白细胞分离液、该血液白细胞分离液的应用、该血液白细胞分离液的制作方法、具有该血液白细胞分离液的血液白细胞分离真空采血管、以及该血液白细胞分离真空采血管的应用利用以下原理：血液中红细胞与白细胞比例为5000：1，其中红细胞具有干扰大的特性，在不影响细胞免疫活性和细胞完整的情况下将红细胞和白细胞分离收集，追求分离操作过程的简单化、标准化以及重复性好、细胞收集率高，解决了医学临床检验急待解决的问题。
本发明提供的血液白细胞分离液、该血液白细胞分离液的应用、该血液白细胞分离液的制作方法、具有该血液白细胞分离液的血液白细胞分离真空采血管、以及该血液白细胞分离真空采血管的应用存在以下有益效果：将临床采血、抗凝白细胞分离一次性完成，真空采血管定量采血后，上下颠倒混匀，分离液中的柠檬酸钠和血液中的钙离子蛰合而抗凝，不存在破坏分离液液面层的技术问题，自然沉淀后吸取上清液，不需要离心、自然不需要考虑离心技术，把复杂细胞分离技术变成简单采血分离过程，过程易统一，试验效果的重复性好，质量可控性强。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明的目的在于：解决临床医学检验在血液中分离出所需一定浓度的白细胞样本这一问题，将这一复杂的、专业性非常高的分离过程简单化、标准化。
本发明较佳实施方式提供的血液白细胞分离真空采血管包括真空管体以及收容在该真空管体内的血液白细胞分离液。在本实施方式中，真空管体的管身大而长，根据所需目标细胞的量，选择采血管的大小，采血量（血液白细胞分离真空采血管待获取的采血量）5ml—25ml，加上血液白细胞分离液（血液白细胞分离液：采血量为2:1），真空管体直径16mm，长度宜在12cm—20cm之间，选用材质是透明材料制成，内壁硅化处理。
血液白细胞分离液用于血液病毒基因检验或免疫细胞功能检验，其由重量份比例为18.5~21.5：1.5~2.5：2~3：69：3.8：0.1：0.05~0.15：2~3的葡聚糖T500、羟乙基淀粉、泛影葡胺、水、柠檬酸钠、NaN3、聚二烯丙基二甲基氯化铵、聚乙烯吡咯烷酮组成。也就是说，血液白细胞分离液的组成成分中，葡聚糖T500重量份优化比例为20%，聚二烯丙基二甲基氯化铵重量份优化比例为0.1%，羟乙基淀粉重量份优化比例为2%，泛影葡胺重量份优化比例为2.5%，聚乙烯吡咯烷酮（PVP）重量份优化比例为2.5%。
在本实施方式中，血液白细胞分离液与采血量的比例为：2:1，将血液白细胞分离液加入采血管（即真空管体）中，预置采血管的采血量±10%真空度。即为血液白细胞分离真空采血管。
血液白细胞分离真空采血管的应用1包括以下步骤：按常规真空采血管采血，采血后将该血液白细胞分离真空采血管上下颠倒若干次；用血细胞分析仪计数，记录计数结果。
血液白细胞分离真空采血管的应用2包括以下步骤：按常规真空采血管采血，采血后将该血液白细胞分离真空采血管上下颠倒若干次（一般采血后缓慢上下颠倒3次为适宜）；将该血液白细胞分离真空采血管插在试管架上，优选地，该血液白细胞分离真空采血管倾斜于该试管架；自然沉淀45分钟，对该血液白细胞分离真空采血管中的液体分离出含白细胞的上清液层（若临检需要可另行再做单类型细胞分离，如淋巴细胞、单核细胞、粒细胞等）；将该上清液层中的上清液用血细胞分析仪计数，记录计数结果。
血液白细胞分离真空采血管中的添加剂是本发明重要组份之一，即血液白细胞分离液。研究人员重点研究了血液白细胞分离液在采血时按比例与血液混合时的密度；各类细胞在混合液中的分布状态；溶液离子的电荷对各类细胞的影响。用聚二丙基二甲基氯化铵（PDDA）、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）聚电解质（带正电荷）中和红细胞表面电荷层（负电荷），因为红细胞是圆盘状结构，可以形成盘面叠加的“串珠”状聚集下沉，下沉的速度与红细胞聚集形成的“串珠”大小成正比，与血液白细胞分离液密度成反比。本发明是目前医学检验界首次进入把血液采集与自然沉淀快速分离白细胞于一体的研究领域。
实验：取Φ16×160mm玻璃管，加5毫升本发明的血液白细胞分离液，预置2.5±10%毫升真空度，数量：50支。应用1：临床采血后，上下颠倒混匀，立即用血细胞分析仪计数，记录计数结果。应用2：自然沉淀45分钟后，吸取上清液再在同一台血细胞分析仪计数，记录计数结果。
本发明提供的血液白细胞分离液、该血液白细胞分离液的应用、该血液白细胞分离液的制作方法、具有该血液白细胞分离液的血液白细胞分离真空采血管、以及该血液白细胞分离真空采血管的应用存在以下有益效果：将临床采血、抗凝白细胞分离一次性完成，真空采血管定量采血后，上下颠倒混匀，分离液中的柠檬酸钠和血液中的钙离子蛰合而抗凝，不存在破坏分离液液面层的技术问题，自然沉淀后吸取上清液，不需要离心、自然不需要考虑离心技术，把复杂细胞分离技术变成简单采血分离过程，过程易统一，试验效果的重复性好，质量可控性强。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.血液白细胞分离液，其特征在于，其由重量份比例为18.5~21.5：1.5~2.5：2~3：69：3.8：0.1：0.05~0.15：2~3的葡聚糖T500、羟乙基淀粉、泛影葡胺、水、柠檬酸钠、NaN3、聚二烯丙基二甲基氯化铵、聚乙烯吡咯烷酮组成。
2.如权利要求1所述的血液白细胞分离液的制作方法，其特征在于，其包括以下步骤：
将葡聚糖T500、羟乙基淀粉、泛影葡胺按重量份比例18.5~21.5：1.5~2.5：2~3：69加入玻璃容器中，并加入水充分溶解；
将柠檬酸钠、NaN3、聚二烯丙基二甲基氯化铵、聚乙烯吡咯烷酮按重量份比例3.8：0.1：0.05~0.15：2~3加入该玻璃容器中，并充分混匀形成该血液白细胞分离液，其中，该葡聚糖T500：该羟乙基淀粉：该泛影葡胺：该水：该柠檬酸钠：该NaN3：该聚二烯丙基二甲基氯化铵：该聚乙烯吡咯烷酮为18.5~21.5：1.5~2.5：2~3：69：3.8：0.1：0.05~0.15：2~3。
3.如权利要求2所述的血液白细胞分离液的制作方法，其特征在于，该血液白细胞分离液的制作方法还包括以下步骤：用0.1μm滤膜抽滤。
4.如权利要求1所述的血液白细胞分离液的应用，该血液白细胞分离液用于血液病毒基因检验或免疫细胞功能检验。
5.血液白细胞分离真空采血管，其包括真空管体以及收容在该真空管体内的如权利要求1所述的血液白细胞分离液。
6.如权利要求5所述的血液白细胞分离真空采血管，其特征在于，该血液白细胞分离液与该血液白细胞分离真空采血管待获取的采血量的比例为：2:1。
7.如权利要求5或6所述的血液白细胞分离真空采血管，其特征在于，该血液白细胞分离真空采血管预置该待获取的采血量±10%真空度。
8.血液白细胞分离真空采血管的应用，该血液白细胞分离真空采血管为权利要求5至7中任意一项所述的血液白细胞分离真空采血管，该血液白细胞分离真空采血管的应用包括以下步骤：
按常规真空采血管采血，采血后将该血液白细胞分离真空采血管上下颠倒若干次；
用血细胞分析仪计数，记录计数结果。
9.血液白细胞分离真空采血管的应用，该血液白细胞分离真空采血管为权利要求5至7中任意一项所述的血液白细胞分离真空采血管，该血液白细胞分离真空采血管的应用包括以下步骤：
按常规真空采血管采血，采血后将该血液白细胞分离真空采血管上下颠倒若干次；
将该血液白细胞分离真空采血管插在试管架上；
自然沉淀45分钟后，对该血液白细胞分离真空采血管中的液体分离出含白细胞的上清液层；
将该上清液层中的上清液用血细胞分析仪计数，记录计数结果。
10.如权利要求9所述的血液白细胞分离真空采血管的应用，其特征在于，当该血液白细胞分离真空采血管插在试管架上时，该血液白细胞分离真空采血管倾斜于该试管架。
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