JP2010235634A

JP2010235634A - リポソーム処方物

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Publication number: JP2010235634A
Application number: JP2010160145A
Authority: JP
Inventors: Gerard M Jensen; エム．ジェンセンジェラード; Nin Fu; ニンフ; Su-Ming Chiang; チャンス−ミン; Craig R Skenes; アール．スキーンズクレイグ; Richard Fahrner; ファーナーリチャード
Original assignee: Gilead Sciences Inc
Current assignee: Gilead Sciences Inc
Priority date: 2002-11-26
Filing date: 2010-07-14
Publication date: 2010-10-21
Also published as: WO2004047802A2; AU2003293140A8; CN100367931C; CN1717221A; JP4874548B2; EP1565165A2; AU2003298738A1; CN100377704C; EP1567130A2; CA2507263A1; JP2006514016A; CN100367932C; JP4874547B2; JP2006515578A; WO2004047801A2; EP1599183A2; WO2004047800A3; US20040156889A1; US20100119590A1; WO2004047801A3

Abstract

【課題】治療指数および治療剤の活性を改善するための一般的に有用なリポソーム処方物を提供すること。
【解決手段】一つの実施形態において、本発明は、リポソームに封入された非脂質親和性の治療剤を含有する処方物を提供し、ここで、１）処方物の一部として動物に投与される場合の治療剤の除去半減期が、リポソーム無しで同じ動物に投与される場合の治療剤の除去半減期と少なくとも同じぐらい長く、そして２）処方物の一部として投与される場合の治療剤の除去半減期が、ラットにおいて約１４時間よりも短い。
【選択図】なし

Description

（発明の優先権）
本出願は、２００２年１１月２６日に出願された米国仮出願番号第６０／４２９，１２２号からの優先権を主張する。

（発明の背景）
リポソームは、水性コアを取り囲む疎水性二重層を形成するリン脂質およびコレステロールから構成されるサブミクロンの球状の小胞である。これらの構造は広く種々の治療剤とともに用いられ、そしてそれ自身の疎水性特性（二重層封入）もしくは親水性特性（水性区画に封入）に部分的に基づいて薬物をリポソーム内に封入させる。

代表的に、リポソームへの薬物の封入は、その薬物の生体分布および薬物動態の様式を変化させ得る。特定の場合において、リポソーム封入は毒性を低下させることが見出されている。特に、いわゆる長時間循環リポソーム処方物（ｌｏｎｇｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇｌｉｐｏｓｏｍａｌｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）は、単核食細胞系の器官（主として肝臓および脾臓）による取り込みを回避し、広く研究されている。このような長時間循環リポソームは、リポソームとリポソーム取り込みにおいて役割を果たす血漿成分との間の相互作用を阻害するように作用する、可性水溶性ポリマー鎖の表面被膜を含み得るか、もしくはこのようなリポソームは、この表面被膜無しに飽和長鎖リン脂質およびコレステロールから生成され得る。

シスプラチンは多くの固形腫瘍の処置において３０年以上にわたって広く使用され、そして癌の処置において不可欠な役割を果たし続けている。この化合物は効果的な抗腫瘍剤であるが、その使用はその重篤な蓄積性の腎臓毒性、神経毒性、骨髄抑制、および耳毒性により限定されている。

長時間循環リポソーム（例えば、ｐｅｇ化（ｐｅｇｙｌａｔｅｄ）リポソーム）（ＳＰＩ−０７７）中のシスプラチンの薬物動態、組織分布、および治療効果が調査されている：例えば、Ｍ．Ｓ．Ｎｅｗｍａｎら、ＣａｎｃｅｒＣｈｅｍｏｔｈｅｒＰｈａｒｍａｃｏｌ、１９９９、４３、５２４；Ｓ．Ｂａｎｄａｋら、Ａｎｔｉ−ＣａｎｃｅｒＤｒｕｇｓ、１９９９、１０、９１１−９２０；Ｍ．Ｄ．ＤｅＭａｒｉｏら、ＰｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓｏｆＡＳＣＯ、１９９８、１７、８８３；Ｐ．Ｋ．Ｗｏｒｋｉｎｇら、ＴｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ、１９９８、４６、１５５−１６５；Ｊ．Ｍ．Ｔｅｒｗｏｇｔら、ＣａｎｃｅｒＣｈｅｍｏｔｈｅｒＰｈａｒｍａｃｏｌ、２００２、４９、２０１−２１０；Ｃ．Ｔ．Ｃｏｌｂｅｒｎら、ＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｎｏｒｇａｎｉｃＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１９９９、７７、１１７−１２０およびＧ．Ｊ．Ｖｅａｌら、ＢｒｉｔｉｓｈＪｏｕｒｎａｌｏｆＣａｎｃｅｒ、２００１、８４、１０２９−１０３５参照。Ｐｅｇ被膜リポソーム中のドキソルビシンの抗腫瘍活性もまた、Ｒ−ＬＨｏｎｇ、ＣｌｉｎｉｃａｌＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ、１９９９、５、３６４５−３６５２により調査されている。

Ａｌｚａ（現在はＪｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ）が第Ｉ〜ＩＩ相臨床試験を通してリポソームシスプラチンであるＳＰＩ−０７７を開発した。ＳＰＩ−０７７候補物は、リポソームからの遊離の薬物の最小の放出をもたらし、同時に遊離の薬物に一般的な腎臓クリアランス機構を回避するＰＥＧ被膜長時間循環リポソーム内に処方された。ＳＰＩ−０７７の副作用プロファイルは遊離の薬物の副作用プロファイルよりも有意に良かったが、しかしＳＰＩ−０７７はまた、限定されたヒトの試験において効力を低下させることが見出され、そしてそのリポソーム処方物のさらなる開発は明らかに中止された。

長時間循環ｐｅｇ化リポソームへの封入がある特定の治療剤の毒性を低下させることが見出されたが、このような封入が広い群の治療剤の効果を改善するために一般的に有用であることは見出されなかった。例えば、ある報告書において、ｐｅｇ化リポソームに封入されたシスプラチンが頭部および頚部の鱗状の癌に対して本質的に不活性であることが見出された。Ｋ．Ｊ．Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎら、ＡｎａｌｓｏｆＯｎｃｏｌｏｇｙ、２００１、１２、４９３−４９６参照。この一般的な成功の欠如は、リポソームの循環寿命の促進と特定の薬物の放出プロファイルとの均衡を正しく保つことができないことに起因する。したがって、調査者は、腫瘍増殖部位におけるリポソームの蓄積を有益に促進するｐｅｇ化リポソームに封入された薬物の循環寿命をうまく上昇させたが、彼らは特定の治療剤についてこれらのリポソームから受容可能な薬物放出プロファイルを実現することができなかった。したがって、このようなｐｅｇ化リポソームに封入される薬物は、代表的に、対応する非封入薬物と比べて同等もしくは減少した臨床上の活性を示すことが見出された。

Ｈ．Ｊ．Ｌｉｍら，ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙａｎｄＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１９９７，２８１，５６６−５７３により、疾患部位へのリポソーム送達と、リポソーム（ＤＭＰＣ／コレステロール）に封入される両親媒性かつ勾配負荷可能な抗腫瘍剤ミトザントンの処方物の薬物放出との間のバランスが調査された。このリポソーム処方物は、ＢＤＦ１マウスモデルにおいて化合物の抗腫瘍活性を改善することが見出された。プログラミング可能膜融合小胞におけるミトザントンの抗腫瘍効果もまた、Ｇ．Ａｄｌａｋｈａ−Ｈｕｔｃｈｅｏｎら，ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９９，１７，７７５−７７９により調査された。３つの他のリポソーム処方物と比較して、改善された抗腫瘍活性が報告された。

長時間循環ｐｅｇ化リポソームにおいて実施された大規模な調査にもかかわらず、治療指数および治療剤の活性を改善するための一般的に有用なリポソーム処方物が必要とされたままである。抗腫瘍活性における改善が両親媒性剤ミトザントンのある特定のリポソーム処方物に対して報告されたが、治療指数および非両親媒性の治療剤の活性を改善するための一般的に有用なリポソーム系は、同定されていない。

（発明の要旨）
出願人は、少なくとも遊離の薬物の値より大きいが、長時間循環（例えば、ｐｅｇ化リポソーム）により代表的に達成される値より小さい値にまで治療剤の除去半減期を上昇させるリポソームに、非脂質親和性の治療剤を封入することにより、有益な治療効果を達成し得ることを見出した。このようなリポソーム系は、非脂質親和性治療剤の治療指数および／もしくは活性を改善するために有用である。したがって、一つの実施形態において、本発明は、リポソームに封入された非脂質親和性の治療剤を含有する処方物を提供し、ここで、１）処方物の一部として動物に投与される場合の治療剤の除去半減期が、リポソーム無しで同じ動物に投与される場合の治療剤の除去半減期と少なくとも同じぐらい長く、そして２）処方物の一部として投与される場合の治療剤の除去半減期が、ラットにおいて約１４時間よりも短い。遊離の薬物と同じ除去半減期を有するリポソーム処方物はさらに、組織分布の有益な変化もしくは分布体積の減少を与え得る。後者の場合、曲線下面積（ＡＵＣ）の増加は、同じ除去半減期についてさえ、遊離の薬物を越えて達成される。

本発明はまた、治療剤の効力を改善するための方法を提供し、この方法は、薬剤をリポソームに封入する工程を包含し、ここで、１）処方物の一部として動物に投与される場合の治療剤の除去半減期が、リポソーム無しで同じ動物に投与される場合の治療剤の除去半減期と少なくとも同じぐらい長く、そして２）処方物の一部として動物に投与される場合の治療剤の除去半減期が、ラットにおいて約１４時間よりも短い。

本発明はまた、動物において抗癌（例えば、抗腫瘍）効果を生成するための方法を提供し、この方法は、有効量の本発明の処方物を動物に投与する工程を包含し、ここで、治療剤は抗癌剤である。

本発明はまた、動物において抗生物質効果を生成するための方法を提供し、この方法は、有効量の本発明の処方物を動物に投与する工程を包含し、ここで、治療剤は抗生物質である。

本発明はまた、医療治療における使用のための本発明の処方物を提供する。

本発明はまた、哺乳動物における抗癌効果を生成するために有用な医薬を調製するための本発明の処方物の使用を提供し、ここで、治療剤は抗癌化合物である。

本発明はまた、哺乳動物における抗生物質効果を生成するために有用な医薬を調製するための本発明の処方物の使用を提供し、ここで、治療剤は抗生物質である。

本発明はまた、薬学的に受容可能な希釈剤もしくはキャリアとの組み合わせで、本発明の処方物を含有する、薬学的組成物を提供する。
本発明はまた、本発明の処方物を調製するために有用な、本明細書中に開示されるプロセスおよび中間体を提供する。
本発明の好ましい実施形態では、例えば以下の処方物などが提供される：
（項目１）
リポソームに封入された非脂肪親和性の治療剤を含む処方物であって、ここで、１）該処方物の一部として動物に投与される場合の該治療剤の除去半減期が、該リポソーム無しで同じ動物に投与される場合の該治療剤の除去半減期と少なくとも同じぐらい長く、そして２）該処方物の一部として投与される場合の該治療剤の除去半減期が、ラットにおいて約１４時間よりも短い、処方物。
（項目２）
前記リポソームが、ａ）一つ以上のホスファチジルコリン；ｂ）コレステロール；および必要応じてｃ）一つ以上の陰イオン性リン脂質を含有する、項目１に記載の処方物。
（項目３）
前記治療剤が、鎮痛剤、麻酔剤、抗座そう剤、抗生物質、抗細菌剤、抗癌剤、抗コリン作用剤、抗凝固剤、抗ジスキネシア剤、抗線維症剤、抗真菌剤、抗緑内障剤、抗炎症剤、抗腫瘍剤、抗骨粗しょう症剤、抗パジェット病剤、抗パーキンソン病剤、アンチスポラティック、解熱剤、防腐剤、抗血栓剤、カルシウム調節因子、角質溶解剤、もしくは硬化剤である、項目１もしくは２に記載の処方物。
（項目４）
前記治療剤が、抗癌剤、抗生物質、ヌクレオシド、ヌクレオチド、ＤＮＡ、ＲＮＡ、タンパク質、もしくはペプチドである、項目１〜３のいずれか一項に記載の処方物。
（項目５）
前記治療剤が、シスプラチン、シスプラチン誘導体、アミカシン、もしくはバンコマイシンである、項目１〜３のいずれか一項に記載の処方物。
（項目６）
ホスファチジルコリンのコレステロールに対するモル比が、約０．５：１〜約４：１である、項目１〜５のいずれか一項に記載の処方物。
（項目７）
ホスファチジルコリンのコレステロールに対するモル比が、約１：１〜約２：１である、項目１〜５のいずれか一項に記載の処方物。
（項目８）
ホスファチジルコリンのコレステロールに対するモル比が、約２：１である、項目１〜５のいずれか一項に記載の処方物。
（項目９）
前記ホスファチジルコリンが、ＤＥＰＣ、ＤＯＰＣ、ＤＳＰＣ、ＨＳＰＣ、ＤＭＰＣ、ＤＰＰＣ、およびそれらの混合物から選択される、項目１〜８のいずれか一項に記載の処方物。
（項目１０）
前記ホスファチジルコリンが、ＤＯＰＣ、ＤＳＰＣ、ＨＳＰＣ、ＤＭＰＣ、ＤＰＰＣ、およびそれらの混合物から選択される、項目１〜８のいずれか一項に記載の処方物。
（項目１１）
前記ホスファチジルコリンが、ＤＯＰＣ、ＤＳＰＣ、ＨＳＰＣ、ＤＰＰＣ、およびそれらの混合物から選択される、項目１〜８のいずれか一項に記載の処方物。
（項目１２）
前記ホスファチジルコリンが、ＤＥＰＣもしくはＤＯＰＣである、項目１〜８のいずれか一項に記載の処方物。
（項目１３）
前記リポソームが、ＳＵＶもしくはＭＬＶである、項目１〜１２のいずれか一項に記載の処方物。
（項目１４）
動的光散乱により測定される平均粒子サイズが、約１００ｎｍよりも小さい、項目１〜１３のいずれか一項に記載の処方物。
（項目１５）
前記動物が哺乳動物である、項目１〜１４のいずれか一項に記載の処方物。
（項目１６）
前記動物が、マウス、イヌもしくは霊長類である、項目１〜１４のいずれか一項に記載の処方物。
（項目１７）
前記動物がヒトである、項目１〜１４のいずれか一項に記載の処方物。
（項目１８）
脂質の総和の治療剤に対する重量比が５：１よりも大きい、項目１〜１７のいずれか一項に記載の処方物。
（項目１９）
脂質の総和の治療剤に対する重量比が１０：１よりも大きい、項目１〜１７のいずれか一項に記載の処方物。
（項目２０）
脂質の総和の治療剤に対する重量比が２０：１よりも大きい、項目１〜１７のいずれか一項に記載の処方物。
（項目２１）
前記処方物の一部として動物に投与される場合の前記治療剤の除去半減期が、前記リポソーム無しで同じ動物に投与される場合の該治療剤の除去半減期の少なくとも約１．５倍の長さである、項目１に記載の処方物。
（項目２２）
前記処方物の一部として動物に投与される場合の前記治療剤の除去半減期が、前記リポソーム無しで同じ動物に投与される場合の該治療剤の除去半減期の少なくとも約２倍の長さである、項目１に記載の処方物。
（項目２３）
前記処方物の一部として動物に投与される場合の前記治療剤の除去半減期が、前記リポソーム無しで同じ動物に投与される場合の該治療剤の除去半減期の少なくとも約３倍の長さである、項目１に記載の処方物。
（項目２４）
前記リポソームが、約４：１：０．１の比でＨＳＰＣ、コレステロールおよびＤＳＰＧを含む、項目２に記載の処方物。
（項目２５）
前記リポソームが、約２：１の比でＤＥＰＣおよびコレステロールを含む、項目２に記載の処方物。
（項目２６）
前記リポソームが、約２：１：０．１の比でＤＥＰＣ、コレステロールおよびＤＳＰＧを含む、項目２に記載の処方物。
（項目２７）
前記リポソームが、約２：１の比でＤＯＰＣおよびコレステロールを含む、項目２に記載の処方物。
（項目２８）
前記リポソームが、約２：１：０．１の比でＤＭＰＣ、コレステロールおよびＤＳＰＧを含む、項目２に記載の処方物。
（項目２９）
前記治療剤がシスプラチンである、項目２４〜２８のいずれか一項に記載の処方物。
（項目３０）
前記治療剤がアミカシンもしくはバンコマイシンである、項目２４〜２８のいずれか一項に記載の処方物。
（項目３１）
項目１〜３０のいずれか一項に記載の処方物を含む、単位投薬形態。
（項目３２）
非経口投与のために処方されている、項目３１に記載の単位投薬形態。
（項目３３）
治療剤の効力を改善するための方法であって、該方法は、該薬剤をリポソームに封入する工程を包含する方法し、ここで、１）処方物の一部として動物に投与される場合の該治療剤の除去半減期が、該リポソーム無しで同じ動物に投与される場合の該治療剤の除去半減期と少なくとも同じぐらい長く、そして２）該処方物の一部として動物に投与される場合の該治療剤の除去半減期が、ラットにおいて約１４時間よりも短い、方法。
（項目３４）
前記リポソームが、項目１〜３０のいずれか一項に記載のリポソームである、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
動物において抗癌効果を生成するための方法であって、該方法は、項目１〜２９のいずれか一項に記載の有効量の処方物を、該動物に投与する工程を包含し、ここで前記治療剤が抗癌剤である、方法。
（項目３６）
動物において抗生物質効果を生成するための方法であって、該方法は、項目１〜２８および項目３０のいずれか一項に記載の有効量の処方物を、該動物に投与する工程を包含し、ここで前記治療剤が抗生物質である、方法。
（項目３７）
医療治療における使用のための項目１〜３０のいずれか一項に記載の処方物。
（項目３８）
哺乳動物において抗癌効果を生成するための有用な医薬を調製するための項目１〜２９のいずれか一項に記載の処方物の使用であって、前記治療剤が抗癌剤である、使用。
（項目３９）
哺乳動物において抗生物質効果を生成するための有用な医薬を調製するための項目１〜２８および項目３０のいずれか一項に記載の処方物の使用であって、前記治療剤が抗生物質である、使用。
（項目４０）
項目１〜３０のいずれか一項に記載の処方物および薬学的に受容可能な希釈剤もしくはキャリアを含有する、薬学的組成物。
（項目４１）
非経口投与のために処方されている、項目４０に記載の組成物。

図１は、本明細書上記の試験Ｃにおけるシスプラチンのリポソーム処方物に対する、マウス生存データを示す。図２は、本明細書上記の試験Ｂにおける、リポソームシスプラチンの最大耐用量を示す。図３は、本明細書上記の試験Ｃにおけるシポソームシスプラチンおよび遊離のシスプラチンの効力を示す。図４は、本明細書上記の試験Ａにおけるシスプラチンのリポソーム処方物の血漿レベルを示す。図５は、本明細書上記の試験Ａにおけるアミカシンのリポソーム処方物の血漿レベルを示す。図６は、本明細書上記の試験Ａにおけるアミカシンのリポソーム処方物の血漿レベルを示す。図７は、本明細書上記の試験Ａにおけるアミカシンのリポソーム処方物の血漿レベルを示す。図８は、本明細書上記の試験Ａにおけるバンコマイシンのリポソーム処方物の血漿レベルを示す。図９は、本明細書上記の試験Ｄにおける、マウスにおけるヒト乳癌腫瘍ＭａＴｕの増殖への、（ＭＴＤで投与された）リポソームシスプラチンの効果を示す。

（詳細な説明）
リポソームは、リポソーム形成脂質を含む脂質の層を含む。代表的に、脂質は、リポソームの主なパッキング／封入／構造要素を提供する少なくとも一つのホスファチジルコリンを含む。代表的に、ホスファチジルコリンは、主にＣ_１６もしくはそれより長い脂肪酸鎖を含む。鎖長は、リポソーム構造の、完全性と安定性との両方を与える。必要に応じて、脂肪酸鎖の一つは少なくとも一つの二重結合を有する。

本明細書中で用いられる場合、用語「ホスファチジルコリン」は、ダイズＰＣ（ＳｏｙＰＣ）、卵ＰＣ（ＥｇｇＰＣ）、ジエライドイルホスファチジルコリン（ＤＥＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、水素添加されたダイズホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、１−パルミトイル−２−オレオホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、ジベヘノイルホスファチジルコリン（ＤＢＰＣ）、およびジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）を含む。

本明細書中で用いられる場合、用語「ダイズ−ＰＣ」は、種々のモノ−、ジ−、トリ−不飽和脂肪酸、および飽和脂肪酸を含むホスファチジルコリン組成物を言う。代表的に、ダイズ−ＰＣは、約１２％重量〜約３３％重量の量で存在するパルミチン酸；約３％重量〜約８％重量の量で存在するステアリン酸；約４％重量〜約２２％重量の量で存在するオレイン酸；約６０％重量〜約６６％重量の量で存在するリノレン酸；および約５％重量〜約８％重量の量で存在するリノレン酸を含む。

本明細書中で用いられる場合、用語「卵−ＰＣ」は、種々の不飽和脂肪酸および飽和脂肪酸を含むホスファチジルコリン組成物を言うが、これらに限定されない。代表的に、卵−ＰＣは、約３４％重量の量で存在するパルミチン酸；約１０％重量の量で存在するステアリン酸；約３１％重量の量で存在するオレイン酸；および約１８％重量の量で存在するリノレン酸を含む。

コレステロールは、代表的に、リポソームに安定性を提供する。ホスファチジルコリンのコレステロールに対する比は、代表的に、モル比で約０．５：１〜約４：１である。好ましくは、ホスファチジルコリンのコレステロールに対する比は、モル比で約１：１〜約２：１である。より好ましくは、ホスファチジルコリンのコレステロールに対する比は、モル比で約２：１である。

本明細書中で用いられる場合、用語「脂質の総和」は、ホスファチジルコリンおよび存在するあらゆる陰イオン性リン脂質を含む。

リポソームはまた、動物の血清との等張性を保つための生理学的に受容可能な塩を含み得る。ＮａＣｌのように、動物の血清との等張性を達成するいずれの薬学的に受容可能な塩も、受容可能である。

一つの実施形態において、リポソームはｐｅｇ化されない。

（リポソームの調製）
本発明のリポソームは、リン脂質およびコレステロールの脂質層を含む。代表的に、リン脂質のコレステロールに対する比は、一度動物に投与されると溶解も崩壊もしないリポソームを形成するために十分なものである。リン脂質およびコレステロールは、適切な溶媒もしくは溶媒混合物に溶解される。適切な時間の後、溶媒は真空乾燥および／もしくは噴霧乾燥により除去される。結果として生じた固体物質は、保存されてもよく、もしくは直ちに使用されてもよい。

続いて、結果として生じた固体物質は、適切な濃度の治療剤を含む水溶液において適切な温度で水和され、多層小胞（ＭＬＶ）が得られる。ＭＬＶを含む溶液は、均質化によりサイズが小さくされて、小型単層小胞（ＳＵＶ）を形成し得、薬物は形成されるＳＵＶ内に受動的に封入される。結果として生じたリポソーム溶液は、例えばクロマトグラフィーもしくはろ過により封入されなかった治療剤から精製され得、そして次に、使用のためにろ過され得る。

（陰イオン性リン脂質）
陰イオン性リン脂質が用いられ得、そして代表的にリポソームにクーロン（Ｃｏｕｌｏｍｂｉｃ）特性を提供する。これは保存の際の系の安定化を助け得、そして融合もしくは集合もしくは凝集を阻害し得る；それはまた、凍結乾燥を容易もしくは可能にし得る。ホスファチジン酸、ホスファチジルグリセロール、およびホスファチジルセリンクラス（ＰＡ、ＰＧ、およびＰＳ）のリン脂質が、本発明の処方物において特に有用である。陰イオン性リン脂質は、代表的に、主にＣ_１６もしくはそれより長い脂肪酸鎖を含む。

一つの実施形態において、陰イオン性リン脂質は、卵−ＰＧ（卵−ホスファチジグリセロール）、ダイズ−ＰＧ（ダイズ−ホスファチジグリセロール）、ＤＳＰＧ（ジステアロイルホスファチジグリセロール）、ＤＰＰＧ（ジパルミトイルホスファチジグリセロール）、ＤＥＰＧ（ジエライドイルホスファチジグリセロール）、ＤＯＰＧ（ジオレオイルホスファチジグリセロール）、ＤＳＰＡ（ジステアロイルホスファチジン酸）、ＤＰＰＡ（ジパルミトイルホスファチジン酸）、ＤＥＰＡ（ジエライドイルホスファチジン酸）、ＤＯＰＡ（ジオレオイルホスファチジン酸）、ＤＳＰＳ（ジステアロイルホスファチジルセリン）、ＤＰＰＳ（ジパルミトイルホスファチジルセリン）、ＤＥＰＳ（ジエライドイルホスファチジルセリン）、およびＤＯＰＳ（ジオレオイルホスファチジルセリン）、およびそれらの混合物から選択される。

別の実施形態において、陰イオン性リン脂質はＤＳＰＧである。

（治療剤）
多くの高活性かつ有用な薬学的物質は、最適ではない薬物動態および／もしくは生体分布に悩まされる。従って、これらの薬学的物質の治療用の使用は、限定され得る。本発明のリポソーム分散は、薬物動態／生体分布の改変によって、効力プロファイルもしくは毒性プロファイルもしくはその両方を改善するため、または薬物の投与スケジュールを改善するために用いられ得る。本明細書中で用いられる場合、用語「治療剤」は、診断剤を含む。

用語「非脂質親和性治療剤」（ｌｉｐｏｐｈｏｂｉｃｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｇｅｎｔ）は、受動的な封入により有用な負荷レベルを達成するのに十分なほど水溶性であっておよび一度負荷されるとかなり不透過性である化合物を含む。この用語は、両親媒性であってかつリポソームへ効果的に勾配負荷され得る物質を除外する。したがって、本発明の処方物は、代表的に、リポソームの受動的な負荷によって調製される。

用語「治療剤」としては、鎮痛剤、麻酔剤、抗座そう剤（ａｎｔｉａｃｎｅａｇｅｎｔ）、抗生物質、抗細菌剤、抗癌剤、抗コリン作用剤、抗凝固剤、抗ジスキネシア剤、抗嘔吐剤、抗線維症剤（ａｎｔｉｆｉｂｒｏｔｉｃ）、抗真菌剤、抗緑内障剤（ａｎｔｉｇｌａｕｃｏｍａａｇｅｎｔ）、抗炎症剤、抗腫瘍剤、抗骨粗しょう症剤（ａｎｔｉｏｓｔｅｏｐｏｒｏｔｉｃ）、抗パジェット病剤（ａｎｔｉｐａｇｅｔｉｃ）、抗パーキンソン病剤、アンチスポラティック（ａｎｔｉｓｐｏｒａｔｉｃ）、解熱剤、防腐剤、抗血栓剤（ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃ）、抗ウイルス剤、カルシウム調節因子、角質溶解剤、もしくは硬化剤が挙げられるが、これらに限定されない。

一つの実施形態において、治療剤は、抗癌剤、抗生物質（例えば、アミノグリコシドもしくはグリコペプチド）、ヌクレオシド、ヌクレオチド、ＤＮＡ、ＲＮＡ、タンパク質もしくはペプチドである。別の実施形態において、治療剤は抗腫瘍剤である。さらに別の実施形態において、治療剤はシスプラチン、シスプラチン誘導体、アミカシン、もしくはバンコマイシンである。

（シスプラチン誘導体）
一つの実施形態において、治療剤は天然のシスプラチンであり得、そして別の実施形態において、治療剤はシスプラチン誘導体、好ましくは親水性のシスプラチン誘導体であり得る。

天然のシスプラチン（また本明細書中ではシスプラチンと呼ばれる）は、二つの塩素原子および二つのアンモニア分子によりシス配置で取り囲まれる白金中心原子を含む重金属錯体である。それは、分子量３００．１の黄色粉末である。それは、水もしくは生理食塩水に室温、１ｍｇ／ｍｌで可溶であり、そして２０７℃の融点を有する。

シスプラチンの塩素原子は、水もしくはスルフヒドリル基のような求核試薬による化学置換反応の対象である。水性の媒体中で、水分子は潜在的な配位子であり、塩素原子を置き換えて白金（ＩＩ）モノヒドロキシモノクロロシス−ジアミンを形成し得る。

この薬物は、水１ｍｌあたり１ｍｇのシスプラチンおよび９ｍｇのＮａＣｌを含む滅菌水溶液として入手可能であり、そしてこの形態において、代表的に、約２０ｍｇ／ｍ^２〜１２０ｍｇ／ｍ^２の間の用量で腫瘍の治療のために静脈内に投与される。この薬物は、ボーラス注射、もしくは数時間にわたるゆっくりとした輸液として、単独もしくは他の化学療法剤と組み合わせて投与され得る。

単剤の場合、シスプラチンは、例えば、１００ｍｇ／ｍ^２の用量で静脈内に４週間毎に一度、もしくは２０ｍｇ／ｍ^２のシスプラチン用量で、急な静脈内輸液として、５日間毎日、そして４週間の間隔で繰り返して投与され得る。

単剤として活性である一方で、シスプラチンは、しばしば他の物質との組み合わせで投与され、これらの他の物質としては、ビンブラスチン、ブレオマイシン、アクチノマイシン、アドリアマイシン、プレドニゾン、ビンクリスチンなどが挙げられる。例えば、卵巣癌の治療は、２４時間の輸液として投与される６０ｍｇ／ｍ^２のシスプラチンおよび６０ｍｇ／ｍ^２のアドリアマイシンを含み得る。

本発明の別の実施形態において、リポソーム内に封入されるシスプラチン化合物は、シスプラチン誘導体である。数多くのシスプラチン誘導体が合成されている。このようなアナログとしては、カルボプラチン、オルマプラチン、オキサリプラチン、ＤＷＡ２１１４Ｒ（（−）−（Ｒ）−２−アミノメチルピロリジン（１，１−シクロシクロブタンジカルボキシラート）白金）、ゼニプラチン、エンロプラチン、ロバプラチン、ＣＩ−９７３（ＳＰ−４−３（Ｒ）−１，１−シクロブタン−ジカルボキシラート（２−）−（２−メチル−１，４−ブタンジアミン−Ｎ，Ｎ’）白金）、２５４−ＳネダプラチンおよびＪＭ−２１６（ビス−アセタート−アミン−ジクロロ−シクロヘキシルアミン−白金（ＩＶ））が挙げられる。スピロプラチンのようないくつかのシスプラチンアナログは、天然のシスプラチンよりも毒性が大きいことが見出されている。より毒性の大きいアナログは、遊離形態での静脈内投与には所望されないが、このようなアナログは、薬物の毒性を軽減するリポソーム封入形態での用途を有し得る。

本発明の目的のために、カルボプラチン、イプロプラチンなどのようないくらかの水溶性を有するアナログが好まれ得、そのため薬物は、リポソームの主に内部水性区画に封入される。

一つの実施形態において、シスプラチンアナログは、白金の４座平面錯体に有機配位子を含む、カルボプラチン（１，１−シクロブタン−ジカルボキシレート−ジアミン白金）である。

（相対的な量）
一つの実施形態において、脂質ベースの分散物は、ホスファチジルコリンに対するモル比で０．０５〜６０％の陰イオン性リン脂質を含む。

一つの実施形態において、脂質の総和（ホスファチジルコリン＋陰イオン性リン脂質）の治療剤に対する重量比は、１：１より大きい。

別の実施形態において、脂質の総和（ホスファチジルコリン＋陰イオン性リン脂質）の治療剤に対する重量比は、５：１より大きい。

別の実施形態において、脂質の総和（ホスファチジルコリン＋陰イオン性リン脂質）の治療剤に対する重量比は、１０：１より大きい。

別の実施形態において、脂質の総和（ホスファチジルコリン＋陰イオン性リン脂質）の治療剤に対する重量比は、２０：１より大きい。

一つの実施形態において、本発明は、約４：１：０．１の比でＨＳＰＣ、コレステロールおよびＤＳＰＧを含むリポソーム中に非脂質親和性の治療剤を含む処方物を提供する。

別の一つの実施形態において、本発明は、約２：１の比でＤＥＰＣおよびコレステロールを含むリポソーム中に非脂質親和性の治療剤を含む処方物を提供する。

別の一つの実施形態において、本発明は、約２：１：０．１の比でＤＥＰＣ、コレステロールおよびＤＳＰＧを含むリポソーム中に非脂質親和性の治療剤を含む処方物を提供する。

別の一つの実施形態において、本発明は、約２：１の比でＤＯＰＣおよびコレステロールを含むリポソーム中に非脂質親和性の治療剤を含む処方物を提供する。

別の一つの実施形態において、本発明は、約２：１：０．１の比でＤＭＰＣ、コレステロールおよびＤＳＰＧを含むリポソーム中に非脂質親和性の治療剤を含む処方物を提供する。

（処方物）
本発明の処方物は、選択される投与経路に適応した種々の形態で、ヒト患者のような哺乳動物宿主に投与され得る。例えば、それらは、非経口で投与されるために処方され得る。さらに、脂質ベースの分散物は、輸液もしくは注射による皮下投与、筋肉内投与、静脈内投与、もしくは腹腔内投与のために処方され得る。これらの調製物はまた、微生物の増殖を防ぐ保存剤、緩衝剤、もしくは抗酸化剤を適切な量で含み得る。

本発明の処方物の有益な投与量は、それらのインビトロ活性、および動物モデルにおけるインビボ活性と比較することにより決定され得る。マウス、および他の動物での効果的な投与量の、ヒトへの外挿のための方法が、当該分野で公知である；米国特許番号４，９３８，９４９号参照。

一般的に、本発明の単位投与量形態における治療剤の濃度は、代表的に、組成物の約０．５重量％〜５０重量％、好ましくは組成物の約２重量％〜２０重量％である。

処置における使用のために必要とされる治療剤の量は、特定の物質によってだけではなく、投与経路、処置される状態の性質ならびに患者の年齢および状態によっても変化する；必要とされる量は、最終的には担当医師もしくは臨床家の裁量による。

処方物の所望される量は、好都合には、単回用量もしくは適切な間隔で投与される分割された用量（例えば、一日に二回、三回、四回もしくはそれより多い用量）として示され得る。部分用量自体は、例えば、多数の別個のゆるく間隔のあいた投与にさらに分割され得る。

一つの実施形態において、本発明は、リポソームに封入された非脂質親和性の治療剤を含む処方物を提供し、ここで、１）処方物の一部として動物に投与される場合の治療剤の除去半減期は、リポソーム無しで同じ動物に投与される場合の治療剤の除去半減期の少なくとも約１．５倍の長さであって、そして２）処方物の一部として投与される場合の治療剤の除去半減期は、ラットにおいて約１４時間よりも短い。

一つの実施形態において、本発明は、リポソームに封入された非脂質親和性の治療剤を含む処方物を提供し、ここで、１）処方物の一部として動物に投与される場合の治療剤の除去半減期は、リポソーム無しで同じ動物に投与される場合の治療剤の除去半減期の少なくとも約２倍の長さであって、そして２）処方物の一部として投与される場合の治療剤の除去半減期は、ラットにおいて約１４時間よりも短い。

一つの実施形態において、本発明は、リポソームに封入された非脂質親和性の治療剤を含む処方物を提供し、ここで、１）処方物の一部として動物に投与される場合の治療剤の除去半減期は、リポソーム無しで同じ動物に投与される場合の治療剤の除去半減期の少なくとも約３倍の長さであって、そして２）処方物の一部として投与される場合の治療剤の除去半減期は、ラットにおいて約１４時間よりも短い。

一つの実施形態において、本発明は、リポソームに封入された非脂質親和性の治療剤を含む処方物を提供し、ここで、１）処方物の一部として動物に投与される場合の治療剤の除去半減期は、リポソーム無しで同じ動物に投与される場合の治療剤の除去半減期の少なくとも約１．５倍の長さであって、そして２）処方物の一部として投与される場合の治療剤の除去半減期は、ラットにおいて約１２時間よりも短い。

一つの実施形態において、本発明は、リポソームに封入された非脂質親和性の治療剤を含む処方物を提供し、ここで、１）処方物の一部として動物に投与される場合の治療剤の除去半減期は、リポソーム無しで同じ動物に投与される場合の治療剤の除去半減期の少なくとも約２倍の長さであって、そして２）処方物の一部として投与される場合の治療剤の除去半減期は、ラットにおいて約１２時間よりも短い。

一つの実施形態において、本発明は、リポソームに封入された非脂質親和性の治療剤を含む処方物を提供し、ここで、１）処方物の一部として動物に投与される場合の治療剤の除去半減期は、リポソーム無しで同じ動物に投与される場合の治療剤の除去半減期の少なくとも約３倍の長さであって、そして２）処方物の一部として投与される場合の治療剤の除去半減期は、ラットにおいて約１２時間よりも短い。

一つの実施形態において、本発明は、リポソームに封入された非脂質親和性の治療剤を含む処方物を提供し、ここで、１）処方物の一部として動物に投与される場合の治療剤の除去半減期は、リポソーム無しで同じ動物に投与される場合の治療剤の除去半減期の少なくとも約１．５倍の長さであって、そして２）処方物の一部として投与される場合の治療剤の除去半減期は、ラットにおいて約１０時間よりも短い。

一つの実施形態において、本発明は、リポソームに封入された非脂質親和性の治療剤を含む処方物を提供し、ここで、１）処方物の一部として動物に投与される場合の治療剤の除去半減期は、リポソーム無しで同じ動物に投与される場合の治療剤の除去半減期の少なくとも約２倍の長さであって、そして２）処方物の一部として投与される場合の治療剤の除去半減期は、ラットにおいて約１０時間よりも短い。

一つの実施形態において、本発明は、リポソームに封入された非脂質親和性の治療剤を含む処方物を提供し、ここで、１）処方物の一部として動物に投与される場合の治療剤の除去半減期は、リポソーム無しで同じ動物に投与される場合の治療剤の除去半減期の少なくとも約３倍の長さであって、そして２）処方物の一部として投与される場合の治療剤の除去半減期は、ラットにおいて約１０時間よりも短い。

一つの実施形態において、本発明は、リポソームに封入された非脂質親和性の治療剤を含む処方物を提供し、ここで、１）処方物の一部として動物に投与される場合の治療剤の除去半減期は、リポソーム無しで同じ動物に投与される場合の治療剤の除去半減期の少なくとも約１．５倍の長さであって、そして２）処方物の一部として投与される場合の治療剤の除去半減期は、ラットにおいて約８時間よりも短い。

一つの実施形態において、本発明は、リポソームに封入された非脂質親和性の治療剤を含む処方物を提供し、ここで、１）処方物の一部として動物に投与される場合の治療剤の除去半減期は、リポソーム無しで同じ動物に投与される場合の治療剤の除去半減期の少なくとも約２倍の長さであって、そして２）処方物の一部として投与される場合の治療剤の除去半減期は、ラットにおいて約８時間よりも短い。

一つの実施形態において、本発明は、リポソームに封入された非脂質親和性の治療剤を含む処方物を提供し、ここで、１）処方物の一部として動物に投与される場合の治療剤の除去半減期は、リポソーム無しで同じ動物に投与される場合の治療剤の除去半減期の少なくとも約３倍の長さであって、そして２）処方物の一部として投与される場合の治療剤の除去半減期は、ラットにおいて約８時間よりも短い。

本発明の処方物における治療剤および遊離治療剤に関する薬物動態学的データ（注射後の時間に対する血漿濃度）は、おびただしい数の公知の動物モデルにおいて決定され得る。例えば、それは試験Ａを用いてラットにおいて決定され得る。

（試験方法Ａ−薬物動態（ＰＫ））
リポソーム処方物および対応する遊離薬物あたり一回の用量で、薬物動態学的データ（注射後の時間に対する血漿濃度）を得た。約１５０ｇの重量の雌のＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙラットもしくはＷｉｓｔａｒラットを使用した。代表的に、用量群あたりラット６匹とした。２００マイクロリットルの（眼窩洞からサンプリングした）血漿採取物をＥＤＴＡチューブに収集し、薬物の化学的分析の前に、サンプルを凍結した。一次もしくは二次の指数崩壊方程式に対してデータを当てはめることにより、除去半減期を決定する。

シスプラチンを含む処方物の代表的血漿濃度を図４に示し；アミカシンを図５〜７に示し；そしてバンコマイシンを図８に示す。

種々のシスプラチン（ＣＤＤＰ）処方物の除去半減期を以下の表に示す。

種々のアミカシン処方物の除去半減期を以下の表に示す。

種々のバンコマイシン処方物の除去半減期を以下の表に示す。

本発明の処方物における治療剤および遊離治療剤の最大耐用量（ｍａｘｉｍｕｍｔｏｌｅｒａｔｅｄｄｏｓｅ）は、おびただしい数の公知の動物モデルにおいて決定され得る。例えば、それは試験Ｂを用いて決定され得る。

（試験方法Ｂ−最大耐用量（ＭＴＤ））
静脈内投与により、各リポソーム処方物、および遊離薬物をヌードマウス（ＮＣｒ．ｎｕ／ｎｕ−マウス）に投与し、そして次に、各処方物の最大耐用量（ＭＴＤ）を決定した。代表的に、用量群あたりマウス２匹を用いて、ＭＴＤが見出されるまでの一定範囲の用量を与えた。体重、死亡率、行動変化、および／もしくは解剖における徴候の評価により、ＭＴＤの見積もりを決定した。代表的な実験継続期間は、四週間のマウスの観察であり、一週間あたり二回、体重を測定した。シスプラチンを含む処方物のデータを図２に示す。

本発明の処方物における治療剤および遊離治療剤の抗白血病活性は、おびただしい数の公知の動物モデルにおいて決定され得る。例えば、それは試験Ｃを用いてラットにおいて決定され得る。

（試験方法Ｃ−Ｐ−３８８白血病効力）
Ｐ３８８白血病細胞株由来の細胞を、Ｂ６Ｄ２Ｆ−１マウス（１群あたり６匹）に注射した（Ｂリンパ球白血病Ｐ３８８、１０６細胞／マウス、静脈内、０日目）。代表的に、一日目もしくは一日目、二日目および三日目に、各処方物および遊離薬物について既に決定されたＭＴＤで、マウスを処置した。特定の試験品で処置されたマウスの、コントロール（生理食塩水）で処置されたマウスに対する生存時間の中央値における上昇百分率として、効力を計算した。実験の継続期間は、代表的に、３〜４週間（もしくは長時間生存するマウスが生じれば、４５日間）である。シスプラチンを含む処方物の代表的なデータを図１および図３に示す。

本発明の処方物における治療剤および遊離治療剤の抗癌活性は、おびただしい数の公知の動物モデルにおいて決定され得る。例えば、それは試験Ｄを用いてラットにおいて決定され得る。

（試験方法Ｄ−乳癌異種移植片モデル）
ＭａＴｕもしくはＭＴ−３ヒト乳癌細胞をヌードマウスに皮下移植し、そして続いて、遊離薬物および生理食塩水コントロールに加えて、リポソーム処方物で処置した。処置は、腫瘍移植後１０日目に始め、そして一度もしくは連続する三日間に一日に一度、各対応する物質のＭＴＤで動物に投与する工程からなっていた。腫瘍移植後約３４日目の研究の終了時とともに、研究を通していくつかの時点で腫瘍体積を測定した。中央相対腫瘍体積（研究の１０日目に測定された腫瘍サイズと比較した、各個々の腫瘍サイズ測定値）を各試験品についてプロットする。シスプラチンを含む処方物の代表的データを図９に示す。乳癌モデルにおいて試験された６つのリポソーム処方物のうちの４つが、シスプラチンコントロールよりも大きい腫瘍体積の減少を示した。

本発明は、本発明の処方物の調製を記載する以下の実施例を参照して、さらに定義される。本発明の目的および興味から逸脱することなく、材料および方法に対する多くの改変が実行され得ることは、当業者に明らかである。

（通常のリポソーム調製手順）
水素添加されたダイズホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジエライドイルホスファチジルコリン（ＤＥＰＣ）、コレステロール（Ｃｈｏｌ）およびジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）を含め、種々のリン脂質を以下のモル比で含む脂質薄膜もしくは脂質噴霧乾燥粉末を調製した。

ＨＳＰＣ：Ｃｈｏｌ：ＤＳＰＧを、ａ）２：１：０、ｂ）２：１：０．１、ｃ）４：１：０、ｄ）４：１：０．１で；
ＤＯＰＣ：Ｃｈｏｌ：ＤＳＰＧを、ａ）２：１：０、ｂ）２：１：０．１で；
ＤＥＰＣ：Ｃｈｏｌ：ＤＳＰＧを、ａ）２：１：０、ｂ）２：１：０．１で；
ＤＭＰＣ：Ｃｈｏｌ：ＤＳＰＧを、ａ）２：１：０．１で。

（脂質薄膜の調製）
クロロホルム：メタノール１：１（ｖ／ｖ）有機溶媒系において、各脂質成分の保存溶液を作製した。各脂質成分の最終濃度は：ＨＳＰＣ、ＤＯＰＣ、ＤＥＰＣ、Ｃｈｏｌ（２００ｍｇ／ｍｌ）；そしてＤＳＰＧ（５０ｍｇ／ｍｌ）であった。所望のモル比にしたがって脂質溶液をピペッティングし、そして円錐チューブ中で混合した。最終脂質濃度を約２００ｍｇ／ｍｌとした。次に、溶液を温度６５℃に設定したヒートブロックで加熱しながら溶液に窒素を通すことによって、溶媒を除去した。次に、残った有機溶媒を除去するために、使用されるまで、形成された脂質薄膜を真空下のデシケーター中に放置した。

（噴霧乾燥脂質粉末の調製）
全ての脂質成分を秤量し、そして丸底フラスコ中で混合し、約２００ｍｇ／ｍｌの最終脂質濃度となるように、クロロホルム：メタノール１：１（ｖ／ｖ）溶媒を脂質粉末に添加した。次に、設計されたパラメーター設定のＹＡＭＡＴＯＧＢ−２１噴霧乾燥機を用いて、脂質溶液を噴霧乾燥して脂質粉末を形成した。真空下で３〜５日間乾燥することにより、脂質粉末中に残った溶媒を除去した。

（シスプラチン（ＣＤＤＰ）保存溶液の調製）
シスプラチン粉末を秤量し、２００ｍＭの塩化ナトリウム溶液（ｐＨ＝６．４）を薬物粉末に添加して、１０ｍｇ／ｍｌの最終的なＣＤＤＰ保存溶液を作製した。ＣＤＤＰ薬物溶液を、７０℃で約２〜３分間、プローブ超音波処理に曝露し、全ての薬物が溶解されていることを確実にした。次に、保存溶液を７０℃の水浴中に維持し、透明な沈殿物の無い溶液を維持した。

（プローブ超音波処理による、脂質薄膜もしくは噴霧乾燥脂質粉末のいずれかからのリポソームの調製）
脂質薄膜もしくは脂質粉末を秤量し、そして７０℃水浴中で、約１５０ｍｇ／ｍｌの脂質濃度で、ＣＤＤＰ保存溶液により水和した。この水和された溶液を、溶液が半透明になるまで、プローブ超音波処理に曝した。代表的な超音波処理温度は７０℃であり、そして代表的な超音波処理時間は１５〜２０分間であった。超音波処理の完了後、リポソームを以下のクリーニング手順のうちの一つに供した：ａ）リポソームを冷却して約４時間、周囲温度に維持し、そして遠心により黄色沈殿を除去し、そして９％スクロースとの緩衝液交換のために、セファデックス（ｓｅｐｈａｄｅｘ）Ｇ−５０カラムに、沈殿の無い透明な溶液を適用した；もしくはｂ）超音波処理が完了すると、２００ｍＭ塩化ナトリウム溶液により、リポソーム溶液を直ちに１０分の１に希釈した；クリーニング／９％スクロースとの緩衝液交換のために、この希釈溶液を限外ろ過に供した；そして周囲温度で、酢酸セルロース０．２２μｍフィルターを通して、リポソーム溶液の滅菌ろ過を行った。

（噴霧乾燥脂質粉末からのホモジナイゼーションによるリポソームの調製）
脂質粉末を秤量し、そして７０℃水浴中で、約１００ｍｇ／ｍｌの脂質濃度で、ＣＤＤＰ保存溶液により水和した。この水和された溶液を、溶液が半透明になるまで、Ｎｉｒｏホモジナイザーを用いて１０，０００ＰＳＩ、７０℃で、ホモジナイゼーションに供した。代表的なホモジナイゼーションプロセスは、約２０回通過させた。ホモジナイゼーションの完了後、２００ｍＭ塩化ナトリウム溶液により、リポソーム溶液を直ちに１０分の１に希釈した。次に、クリーニング／９％スクロースとの緩衝液交換のために、この希釈溶液を限外ろ過に供した。周囲温度で酢酸セルロース０．２２μｍフィルターを通して、リポソーム溶液の滅菌ろ過を行った。

（実施例１）
シスプラチンを含むリポソームを上記のように調製した。代表的なリポソームの特徴付けデータを以下の表に示す。

（実施例２）
アミカシンを含むリポソームを以下のように調製した。

（アミカシン（ＡＭＫ）保存溶液の調製）
アミカシンフリーベース粉末を秤量し、そして注射用水（ＷＦＩ）と混合した。アミカシンスラリーのｐＨを約ｐＨ６．５に滴定した。ＷＦＩの添加により、保存溶液の最終容量まで容量を上げた。アミカシン保存溶液の最終濃度を約２５０ｍｇ／ｍｌとし、約６．５の最終ｐＨとした。

（プローブ超音波処理による、脂質薄膜もしくは噴霧乾燥脂質粉末のいずれかからのリポソームの調製）
適切な量の脂質を秤量した。アミカシン保存溶液により、３００ｍｇ／ｍｌの脂質濃度に脂質を水和した。次に、混合物を６５℃で約１０〜２０分間インキュベートし、そして約６０℃で２０分間もしくは溶液が透明になるまで超音波処理した。超音波処理が完了すると、９％スクロース（ｐＨ＝６．５）中の１０ｍＭのコハク酸ナトリウムにより、リポソーム溶液を１：１に希釈した。次に、希釈後のリポソーム溶液をセファデックスカラムに通し、９％スクロース（ｐＨ＝６．５）中の１０ｍＭのコハク酸ナトリウムに緩衝液を交換して、遊離の薬物を除去した。周囲温度で酢酸セルロース０．２２μｍフィルターを通して、リポソームをろ過した。代表的リポソームの特徴付けデータを、以下の表に示す。

（実施例３）
バンコマイシンを含むリポソームを以下のように調製した。

（バンコマイシン（ＶＡＮＣＯ）保存溶液の調製）
塩酸バンコマイシン粉末を秤量し、そして適切な量の０．１５Ｍ塩酸塩（ＨＣｌ）溶液と混合した。このスラリーを６５℃水浴で加熱し、全ての薬物が溶解していることを確実にした。保存溶液を最終容量にして、約３００ｍｇ／ｍｌの濃度とし、保存溶液のｐＨを約２．４とした。

（プローブ超音波処理による、脂質薄膜もしくは噴霧乾燥脂質粉末のいずれかからのリポソームの調製）
適切な量の脂質を秤量した。３００ｍｇ／ｍｌの脂質濃度のバンコマイシン保存溶液により、脂質を水和した。約６０℃で２０分間もしくは溶液が透明になるまで、混合物を超音波処理した。超音波処理が完了すると、酸性９％スクロースにより、リポソーム溶液を１：１に希釈した。次に、希釈後のリポソーム溶液を、セファデックスカラムに通し、９％スクロース（ｐＨ＝６．５）中の１０ｍＭの塩化アンモニウムに緩衝液を交換して、遊離の薬物を除去した。周囲温度で酢酸セルロース０．２２μｍフィルターを通して、リポソームをろ過した。代表的リポソームの特徴付けデータを、以下の表に示す。

（実施例４）
以下は、動物（例えば、ヒト）における治療用途もしくは予防用途のための、本発明の脂質ベース分散物を含む代表的な薬学的投与量形態を説明する。

（ｉ）注射１（１ｍｇ／ｍｌ）ｍｇ／ｍｌ
「治療剤」１．０
ホスファチジルコリン４０
コレステロール１０
スクロース９０
０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液
（ｐＨを７．０〜７．５に調整）適量
注射用水適量を加え１ｍＬにする。

（ｉｉ）注射２（１０ｍｇ／ｍｌ）ｍｇ／ｍｌ
「治療剤」１０
ホスファチジルコリン６０
コレステロール１５
陰イオン性リン脂質３
０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液
（ｐＨを７．０〜７．５に調整）適量
スクロース９０
注射用水適量を加え１ｍＬにする。

上記の処方物は、薬学的分野において周知の従来の手順により得られ得る。

全ての刊行物、特許、および特許文献は、参考として個別に援用されるように、本明細書中で参考として援用される。本発明は、種々の特定のおよび好まれる実施形態および技術に関して記載されている。しかし、本発明の意図内および範囲内のままで、多くの変更および改変がなされることは、理解されるべきである。

Claims

本明細書中に記載の発明。