JP2009531068A5

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Publication number: JP2009531068A5
Application number: JP2009503126A
Authority: JP
Filing date: 2007-03-09
Publication date: 2010-04-22

Claims

変異Ｒａｓタンパク質の少なくとも５個の隣接するアミノ酸を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列を含み、当該アミノ酸配列は、Ｋ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ、又はＨ−ｒａｓの野生型タンパク質の第７６位の位置のアミノ酸を含み、かつ、当該第７６位の位置のアミノ酸は上記野生型タンパク質と比較して変異している、単離された核酸分子。
上記第７６位の位置のアミノ酸は、グルタミン酸塩が、グリシン、リシン及びグルタミンからなる群より選択されるグルタミン酸塩以外のアミノ酸残基に変異したものである、請求項１に記載の単離された核酸分子。
上記アミノ酸配列はさらに、変異Ｒａｓタンパク質の少なくとも５個の隣接するアミノ酸残基を含み、当該アミノ酸配列は、Ｋ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ、又はＨ−ｒａｓの野生型タンパク質の第１２位、第１３位、第５９位及び第６１位からなる群より選択される位置のアミノ酸を含み、さらに、当該位置のアミノ酸は、上記野生型タンパク質と比較して変異している、請求項１に記載の単離された核酸分子。
上記核酸配列は２個以上のドメインを含む融合タンパク質をコードし、上記ドメインの１個が、第７６位の位置に変異を含む変異Ｒａｓタンパク質の少なくとも５個のアミノ酸を含み、さらに他の各ドメインは免疫原からなる、請求項１に記載の単離された核酸分子。
上記融合タンパク質は、フレーム単位で融合した以下のタンパク質又は断片を含む、請求項４に記載の単離された核酸分子：
ｉ）Ｋ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ又はＨ−ｒａｓの野生型タンパク質に関して第１２位の位置のアミノ酸を含み、上記第１２位の位置のグリシンがシステインに置換されている、変異Ｒａｓタンパク質又はその断片；
ｉｉ）Ｋ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ又はＨ−ｒａｓの野生型タンパク質に関して第６１位の位置のアミノ酸を含み、上記第６１位の位置のグルタミンがアルギニンに置換されている、変異Ｒａｓタンパク質又はその断片；
ｉｉｉ）Ｋ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ又はＨ−ｒａｓの野生型タンパク質に関して第１２位の位置のアミノ酸を含み、上記第１２位の位置のグリシンがアスパラギン酸塩に置換されている、変異Ｒａｓタンパク質又はその断片；
ｉｖ）Ｋ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ又はＨ−ｒａｓの野生型タンパク質に関して第１２位の位置のアミノ酸を含み、上記第１２位の位置のグリシンがバリンに置換されている、変異Ｒａｓタンパク質又はその断片；
ｖ）Ｋ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ又はＨ−ｒａｓの野生型タンパク質に関して第１２位の位置のアミノ酸を含み、上記第１２位の位置のグリシンがアルギニンに置換されている、変異Ｒａｓタンパク質又はその断片；及び
ｖｉ）Ｋ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ又はＨ−ｒａｓの野生型タンパク質に関して第７６位の位置のアミノ酸を含み、上記第７６位の位置のグルタミン酸塩がグリシンに置換されている、変異Ｒａｓタンパク質又はその断片。
上記融合タンパク質は、フレーム単位で融合した以下のタンパク質又は断片を含む、請求項４に記載の単離された核酸分子：
ｉ）Ｋ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ又はＨ−ｒａｓの野生型タンパク質に関して第１２位の位置のアミノ酸を含み、上記第１２位の位置のグリシンがアルギニンに置換されている、変異Ｒａｓタンパク質又はその断片；
ｉｉ）Ｋ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ又はＨ−ｒａｓの野生型タンパク質に関して第７６位の位置のアミノ酸を含み、上記第７６位の位置のグルタミン酸塩がグリシンに置換されている、変異Ｒａｓタンパク質又はその断片。
上記免疫原は、野生型Ｒａｓアミノ酸配列に関連して少なくとも１個の変異を含む、Ｒａｓタンパク質又はその免疫原性フラグメントである、請求項４に記載の単離された核酸分子。
上記免疫原は、（ａ）Ｒａｓタンパク質の第８位〜第１６位の位置のアミノ酸残基を少なくとも含み、野生型の上記Ｒａｓタンパク質に関して第１２位の位置の上記アミノ酸残基が変異したペプチド；（ｂ）Ｒａｓタンパク質の第９位〜第１７位の位置のアミノ酸残基を少なくとも含み、野生型の上記Ｒａｓタンパク質に関して第１３位の位置の上記アミノ酸残基が変異したペプチド；（ｃ）Ｒａｓタンパク質の第５５位〜第６３位の位置のアミノ酸残基を少なくとも含み、野生型の上記Ｒａｓタンパク質に関して第５９位の位置の上記アミノ酸残基が変異したペプチド；（ｄ）Ｒａｓタンパク質の第５７位〜第６５位の位置のアミノ酸残基を少なくとも含み、野生型の上記Ｒａｓタンパク質に関して第６１位の位置の上記アミノ酸残基が変異したペプチド；（ｅ）Ｒａｓタンパク質の第６９位〜第７７位の位置のアミノ酸残基を少なくとも含み、野生型の上記Ｒａｓタンパク質に関して第７３位の位置の上記アミノ酸残基が変異したペプチド；（ｆ）Ｒａｓタンパク質の第７０位〜第７８位の位置のアミノ酸残基を少なくとも含み、野生型の上記Ｒａｓタンパク質に関して第７４位の位置の上記アミノ酸残基が変異したペプチド；（ｇ）Ｒａｓタンパク質の第７１位〜第７９位の位置のアミノ酸残基を少なくとも含み、野生型の上記Ｒａｓタンパク質に関して第７５位の位置の上記アミノ酸残基が変異したペプチド；（ｈ）Ｒａｓタンパク質の第７３位〜第８１位の位置のアミノ酸残基を少なくとも含み、野生型の上記Ｒａｓタンパク質に関して第７７位の位置の上記アミノ酸残基が変異したペプチド；及び（ｉ）Ｒａｓタンパク質の第７４位〜第８２位の位置のアミノ酸残基を少なくとも含み、野生型の上記Ｒａｓタンパク質に関して第７８位の位置の上記アミノ酸残基が変異したペプチドからなる群より選択される、請求項４に記載の単離された核酸分子。
上記核酸配列は、配列番号１４又は配列番号１５に示すアミノ酸配列を含む融合タンパク質をコードしている、請求項１に記載の単離された核酸分子。
請求項１に記載の単離された核酸分子、又はその相補物に選択的に結合するオリゴヌクレオチドプローブ又はプライマー。
少なくとも１つの発現制御配列に作動可能に連結された、請求項１〜９のいずれか１項に記載の単離された核酸分子を含む、組み換え核酸分子。
請求項１１に記載の組み換え核酸分子を用いてトランスフェクトした、組み換え細胞。
上記細胞が酵母である、請求項１２に記載の組み換え細胞。
請求項１〜９のいずれか１項に記載の単離された核酸分子によってコードされた、単離されたタンパク質又はペプチド。
請求項１〜９のいずれか１項に記載の核酸分子、又は請求項１４に記載の単離されたタンパク質若しくはペプチドを含む、組成物。
上記組成物はさらに酵母運搬体を含む、請求項１５に記載の組成物。
上記酵母運搬体は、上記タンパク質又はペプチドを組み換え的に発現する、請求項１６に記載の組成物。
請求項１４に記載の単離されたタンパク質又はペプチドに選択的に結合する、抗体又はその抗原結合断片。
請求項１４に記載の単離されたタンパク質又はペプチドに選択的に結合する、アプタマー。
請求項１〜９のいずれか１項に記載の核酸分子によって転写されたＲＮＡ又は変異Ｒａｓタンパク質をコードするｒａｓ遺伝子によって転写されたＲＮＡ、の選択的な切断を触媒するｓｉＲＮＡであって、上記変異Ｒａｓタンパク質は、Ｋ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ又はＨ−ｒａｓの野生型アミノ酸配列に関して少なくとも第７６位の位置の変異によって、上記野生型アミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列含む、ｓｉＲＮＡ。
請求項１〜９のいずれか１項に記載の核酸分子又は変異Ｒａｓタンパク質をコードするｒａｓ遺伝子、の不活性化を選択的に触媒するリボザイムであって、上記変異Ｒａｓタンパク質は、Ｋ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ又はＨ−ｒａｓの野生型アミノ酸配列に関して少なくとも第７６位の位置の変異によって、上記野生型アミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列含む、リボザイム。
請求項１〜９のいずれか１項に記載の核酸分子又は変異Ｒａｓタンパク質をコードするｒａｓ遺伝子、に非常に高いストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ発現を抑制する、アンチセンス核酸分子であって、上記変異Ｒａｓタンパク質は、Ｋ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ又はＨ−ｒａｓの野生型アミノ酸配列に関して少なくとも第７６位の位置の変異によって、上記野生型アミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列含む、アンチセンス核酸分子。
癌の予防又は治療のための組成物の調製における、請求項１〜９のいずれか１項に記載の核酸分子、請求項１４に記載のタンパク質若しくはペプチド、請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の組成物、請求項１９に記載のアプタマー、請求項２０に記載のｓｉＲＮＡ、請求項２１に記載のリボザイム、又は請求項２２に記載のアンチセンス核酸分子の使用。
腫瘍の診断のための製品の調製における、請求項１〜９のいずれか１項に記載の核酸分子、請求項１４に記載のタンパク質若しくはペプチド、又は請求項１８に記載の抗体若しくはその抗原結合断片の使用。
標的Ｒａｓタンパク質又は標的Ｒａｓタンパク質をコードする核酸分子の阻害物質を同定する同定工程を包含し、上記標的Ｒａｓタンパク質は、野生型Ｒａｓタンパク質に関連する第７６位の位置のアミノ酸に変異を含む、癌を予防又は治療するための化合物を同定するための方法。
標的変異Ｒａｓタンパク質を発現するが、野生型Ｒａｓタンパク質を発現しない細胞におけるＧＴＰ加水分解を誘発する化合物を同定する同定工程を包含し、上記標的変異Ｒａｓタンパク質は、野生型Ｒａｓタンパク質に関する第７６位の位置のアミノ酸に変異を含む、癌を予防又は治療するための化合物を同定するための方法。