JP2006506339A - エキナセア・アングスチフォリア抽出物 - Google Patents
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Abstract
Description
エキナセアは北アメリカ及びメキシコから発した植物であり;その治療的性質は原住アメリカ人に周知であり、彼らはそれを創傷の治癒のために用いた。エキナセアは感染に対する抵抗性を向上させることができるとみなされていたために、前世紀の最初の何年かの間に局所的及び全身的感染の処置のためのその使用は普及した。エキナセア、特にエキナセア・アングスチフォリアは今日、インフルエンザ症候群の処置のため及び特に風邪の処置のため、創傷の治癒のため及び真菌症の処置のために非常に推奨されている。
本発明の目的は、0.1%より低いアルキルアミド含有率、1〜10%の範囲のエキナコシド含有率及び1〜15%の範囲のエキナセア・アングスチフォリアに特徴的な多糖(以下、「多糖類」という)の含有によって特徴づけられるエキナセア・アングスチフォリアの抽出物である。多糖は1.3x105Daの重さであり、0.5:2.5:1.75:10.25の比率におけるラムノース、アラビノース、ガラクトース及びガラクツロン酸から成り、直線状及び分枝状部分が交代する骨格を有し、直線状部分はα−(1−4)結合を介して結合する部分的にアセチル化(9%)及びメチル化(35%)されたガラクツロン酸残基から成り、分枝状部分は2.5:1.75の比率においてアラビノース及びガラクトースを含有する側鎖が結合した交互のガラクツロン酸とラムノースから成る。
1.有機溶媒あるいは40%(v/v)より高くない含水率を有する有機溶媒−水混合物を用いて根を抽出し、プールされ且つ濃縮された抽出物を非極性溶媒で繰り返して洗浄し;
2.水又は60%(v/v)もしくはそれより高い、好ましくは80〜85%(v/v)の含水率を有する有機溶媒−水混合物を用いて根を抽出し;
3.先行する段階で得られた抽出物を混合すること
段階を含む方法により調製される。
1a.20℃から有機溶媒又は水−有機溶媒混合物の還流温度までの範囲の温度で、好ましくは還流下で根を抽出し;
1b.一緒にした抽出物を小体積まで濃縮し;
1c.濃縮物を50%より低くない含水率を有する水−有機溶媒混合物中に溶解し;
1d.水−有機溶媒混合物を、例えば石油エーテル、ペンタン、ヘキサン又はヘプタンから選ばれる非極性溶媒、好ましくはヘキサンで繰り返して洗浄し;
1e.水−有機溶媒混合物を蒸発させる
ことを含む。
2a.抽出段階からの根を20℃から水又は溶媒混合物の沸騰温度まで、好ましくは40〜70℃の範囲の温度で抽出し;
2b.抽出物を小体積に濃縮し;
2c.残留物を50〜70%(v/v)の範囲の有機溶媒含有率を有する水−有機溶媒混合物中に溶解して沈殿を得;
2d.沈殿を濾過し、同じ溶媒混合物で洗浄する
ことを含む。
3a.先行する段階からのプールされた抽出物を水−有機溶媒混合物中に溶解し、好ましい有機溶媒は60%(v/v)もしくはそれより高い、好ましくは80〜85%(v/v)の範囲の含水率を有するエタノールであり;
3b.水−有機溶媒溶液を濃縮し、減圧下で乾燥する
ことを含む。
実施例
600グラムのエキナセア・アングスチフォリアの粉砕された根をパーコレーター中に入れ、2.5Lの90%(v/v)エタノールを用い、還流下で4時間抽出する。浸出物を集めた後、同じ溶媒を用いてさらに7回の抽出を行う;浸出物をプールし、後の段階のために根を保存する。
実施例1に従う90%(v/v)エタノールを用いる抽出から得られるエキナセア・アングスチフォリアの根を、2.5Lの15%(v/v)エタノールを用い、70℃でさらに8回抽出する。
78.5gのエキナコシドの豊富な抽出物を106.5gの多糖の豊富な抽出物と一緒にする。925mlの15%(v/v)エタノールを用いて混合物を取り上げ、1時間攪拌し、減圧下で濃縮乾固して185gのエキナセア・アングスチフォリア抽出物を得る(エキナコシドHPLC力価:4.2%;アルキルアミドHPLC力価:0.04%;多糖HPLC力価5.12%)。抽出物のHPLC分布を図1(非−多糖画分)及び2(多糖画分)に報告する。
本発明の多糖を含有する抽出物の特性化を、TosoHaas TSK−Gel G 5000 PWXLカラムを用い、0.5ml/分の流量でアイソクラチック条件において、0.5%のトリエチルアミンを含有する水を用いて溶離させて行なう。30分続く分析の間、カラムを50℃に保つ。
エキナセア・アングスチフォリア抽出物中のエキナコシド及びアルキルアミド含有率のHPLC決定を、UV−可視検出器(波長235nm)に連結されたAgilent Zorbax SB−C18逆−相カラムを用い、1.0ml/分の流量で0.01%のトリフルオロ酢酸を含有する適した水/アセトニトリル勾配を用いて溶離して行なう。60分続く分析の間、カラムを室温に保つ。
生物学的部門
実験1
T−リンパ球におけるγ−インターフェロンの生産に関する試験(Zucca M.et al.New Microbiol.1996,19,39−46)
ナイロン−ウールカラム上における脾臓細胞の分離により得られるネズミT−リンパ球を、場合によりα−CD3(インターフェロン生産を担う細胞機能活性化剤としての抗−CD3モノクローナル抗体)と一緒に予備−インキュベーションされていることができるミクロタイタープレート中で、4%の胎児ウシ血清を含む1640 RPMI培地中で培養した。試験に物質を加えてから48時間後、インキュベーション培地中におけるγ−インターフェロンの放出を評価した。
マウスにおけるカンジダ・アルビカンスにより誘導される死亡率への効果(Microbiology,2000,146,1881−9)
酵母をサブロー寒天添加培地(Sabouraud agarized medium)上で培養し、非−免疫抑制マウスにおいて3.5x105個の濃度で、及び1mg/KgのサイクロスポリンA(CsA)を腹腔内で用いて免疫抑制されたマウスにおいて2.9x105個の濃度で静脈内に接種した。すべての標準マウス(未処置)が死亡するまで毎日5及び10mg/Kgの本発明の抽出物を用い、マウスを腹腔内で処置した。結果を処置群における生存動物として評価した。
Claims (17)
- 0.1%より低いアルキルアミド含有率、1〜10%の範囲のエキナコシド含有率及び1〜15%の範囲の多糖含有率によって特徴づけられ、多糖が1.3x105Daの重さであり、0.5:2.5:1.75:10.25の比率におけるラムノース、アラビノース、ガラクトース及びガラクツロン酸から成るエキナセア・アングスチフォリア(Echinacea angustifolia)抽出物。
- 多糖が交互の直線状及び分枝状部分をもつ骨格を有し、直線状部分はα−(1−4)結合を介して結合する部分的にアセチル化及びメチル化されたガラクツロン酸残基から成り、分枝状部分は2.5:1.75の比率においてアラビノース及びガラクトースを含有する側鎖が結合した交互のガラクツロン酸とラムノースから成る請求項1に従う抽出物。
- 以下の段階:
1.有機溶媒あるいは40%(v/v)より高くない含水率を有する有機溶媒−水混合物を用いて根を抽出し、続いてプールされ且つ濃縮された抽出物を非極性溶媒で洗浄し;
2.水又は60%(v/v)もしくはそれより高い含水率を有する有機溶媒−水混合物を用いて根を抽出し;
3.先行する段階で得られた抽出物を混合すること
を含む請求項1〜2のいずれか1つに従う抽出物の調製法。 - 有機溶媒がアセトン又は1〜3個の炭素原子のアルコールから選ばれる請求項3に従う方法。
- 有機溶媒がエタノールである請求項3及び4のいずれか1つに従う方法。
- 段階1が:
1a.20℃から有機溶媒又は水−有機溶媒混合物の還流温度までの範囲の温度で根を抽出し;
1b.一緒にした抽出物を小体積まで濃縮し;
1c.濃縮物を50%(v/v)より低くない含水率を有する水−有機溶媒混合物中に溶解し;
1d.水−有機溶媒混合物を非極性溶媒で繰り返して洗浄し;
1e.水−有機溶媒混合物を蒸発させる
ことを含む請求項3〜5のいずれか1つに従う方法。 - 段階1a及び1cで独立して用いられる有機溶媒がアセトン及び1〜3個の炭素原子のアルコールから選ばれる請求項6に従う方法。
- 段階1dの非極性溶媒が石油エーテル、ペンタン、ヘキサン又はヘプタンから選ばれる請求項6に従う方法。
- 溶媒がヘキサンである請求項8に従う方法。
- 段階2が:
2a.先行する段階の抽出から得られた根を20℃から水又は溶媒混合物の沸騰温度までの範囲の温度で抽出し;
2b.抽出物を小体積に濃縮し;
2c.残留物を50〜70%の範囲の有機溶媒含有率を有する水−有機溶媒混合物中に溶解して沈殿を得;
2d.沈殿を濾過し同じ溶媒混合物で洗浄する
ことを含む請求項3〜9のいずれか1つに従う方法。 - 有機溶媒がアセトン又は1〜3個の炭素原子のアルコールから選ばれる請求項10に従う方法。
- 段階3が:
3a.先行する段階で得られた一緒にされた抽出物を60%(v/v)もしくはそれより高い含水率を有する水−有機溶媒混合物中に溶解し;
3b.水−アルコール溶液を濃縮し、減圧下で乾燥する
ことを含む請求項3〜11のいずれか1つに従う方法。 - 有機溶媒がアセトン又は1〜3個の炭素原子のアルコールである請求項12に従う方法。
- アルコールがエタノールである請求項13に従う方法。
- 請求項3〜14のいずれか1つの方法を用いて得ることができる抽出物。
- 製薬学的又は栄養調製学的(nutraceutical)組成物及び食物サプリメントの調製のための請求項1、2及び15のいずれか1つに従う抽出物の使用。
- 適した賦形剤及び/又は担体と混合された請求項1、2及び15のいずれか1つに従う抽出物を含有する製薬学的又は栄養調製学的組成物及び食物サプリメント。
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