JP2005525088A5

JP2005525088A5 -

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Publication number: JP2005525088A5
Application number: JP2003552350A
Authority: JP
Filing date: 2002-12-13
Publication date: 2006-01-19

Claims

以下の工程：
（ａ）再構成真皮（偽真皮；ＰＤ）または偽真皮調剤を供給する工程、
（ｂ）培養した真皮乳頭細胞（髪乳頭細胞）を含む再構成乳頭（偽乳頭；ＰＰ）を、適当な担体上および／または適当なマトリックス、とりわけゲルマトリックス中に供給するか、あるいは
培養した真皮乳頭細胞を含むそのような再構成乳頭（偽乳頭；ＰＰ）の対応する前駆体を、マトリックス、とりわけゲルマトリックスを形成することができる適当なマトリックス形成培地、とりわけゲル形成培地ＭＦＭ_PP中に、インサイチューで、とりわけ再構成真皮（偽真皮；ＰＤ）中に供給する工程、
（ｃ）工程（ｂ）で供給された再構成乳頭（ＰＰ）またはそれらの前駆体を、工程（ａ）で供給された偽真皮（ＰＤ）また偽真皮調剤中に導入または挿入する工程、
（ｄ）場合により、再構成表皮（偽表皮；ＰＥ）または再構成周皮（偽周皮；ＰＩ）を偽真皮（ＰＤ）に適用する工程
を含む、皮膚／毛髪等価物、とりわけ再構成真皮（偽真皮；ＰＤ）中に再構成乳頭（偽乳頭；ＰＰ）を有する皮膚／毛髪モデルの製造方法。
偽真皮（ＰＤ）または偽真皮調剤が、培養した収縮性細胞を適当なマトリックス中に含み、該マトリックスが、コラーゲン、とりわけ I 型および／または III 型コラーゲン、および場合によりに他の成分をベースとするマトリックスであることを特徴とする請求項１に記載の方法。
線維芽細胞、とりわけ真皮線維芽細胞を、偽真皮（ＰＤ）または偽真皮調剤のための収縮性細胞として使用することを特徴とする請求項１または２に記載の方法。
真皮線維芽細胞をヒトまたは動物の皮膚から単離し、培養後に収縮性細胞を得られた単層培養物から、とりわけ穏やかなトリプシン処理によって回収することにより、偽真皮（ＰＤ）または偽真皮調剤のための培養した収縮性細胞を得ることを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
収縮性細胞、とりわけ線維芽細胞、好ましくは真皮線維芽細胞を、適当な栄養培地中で、とりわけ最小必須培地ＭＥＭを栄養培地として使用して培養することを特徴とする請求項４に記載の方法。
単層培養物から回収され、任意に適当な栄養培地中に存在する収縮性細胞と、少なくとも１種のマトリックス形成剤ＭＦ_PD、とりわけゲル形成剤を含有する偽真皮（ＰＤ）のためのマトリックス形成培地、とりわけゲル形成培地ＭＦＭ_PDおよび任意に他の成分とを混合することにより、偽真皮調剤を得ることを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
偽真皮調剤が、マトリックス、好ましくはゲルを形成し、とりわけ、もしあるなら栄養培地を放出して、偽真皮（ＰＤ）に収縮することを特徴とする請求項６に記載の方法。
マトリックス形成培地、とりわけゲル形成培地ＭＦＭ_PDが、少なくとも１種のコラーゲン、とりわけ I 型および／または III 型コラーゲン、および任意に他の成分、とりわけ真皮の細胞外マトリックスの成分、好ましくはマトリックスおよび／または硬タンパク質、例えばラミニンを、マトリックス形成剤ＭＦ_PD、とりわけゲル形成剤として含むことを特徴とする請求項６または７に記載の方法。
適当な栄養培地、とりわけ最小必須培地ＭＥＭ、および任意に他の成分を、偽真皮（ＰＤ）に適用することを特徴とする請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
偽乳頭（ＰＰ）が、培養した乳頭細胞、とりわけ真皮乳頭細胞を、適当なマトリックス中に含み、該マトリックスが、特に、コラーゲン、とりわけ IV 型コラーゲンおよび任意に他の成分をベースとするマトリックスであることを特徴とする請求項１〜９のいずれかに記載の方法。
真皮乳頭細胞をヒトまたは動物の皮膚の毛包から単離し、培養後に真皮乳頭細胞を、得られた単層培養物から、とりわけ穏やかなトリプシン処理によって回収することにより、培養した真皮乳頭細胞を得ることを特徴とする請求項１〜１０のいずれかに記載の方法。
真皮乳頭細胞を、適当な栄養培地中で、とりわけ最小必須培地（ＭＥＭ）、特にＤＭＥＭおよび／またはＲＰＭＩ培地および／またはチャング(Chang)培地を栄養培地として、任意に他の成分、とりわけウシ胎児血清（ＦＣＳ）、コラーゲン、とりわけ I 型コラーゲンなどと一緒に使用して培養することを特徴とする請求項１〜１１のいずれかに記載の方法。
乳頭細胞、とりわけ真皮乳頭細胞を適当な担体上で成長させることにより、偽乳頭（ＰＰ）を得ることを特徴とする請求項１〜１２のいずれかに記載の方法。
担体が、約５０〜２,０００μｍの範囲、好ましくは１００〜１,０００μｍの範囲、より好ましくは約１００〜５００μｍの範囲の寸法を有することを特徴とする請求項１３に記載の方法。
担体物質を、好ましくは架橋されている、多糖類またはポリペプチド、とりわけゼラチンまたはデキストランから選択することを特徴とする請求項１３または１４に記載の方法。
単層培養物から回収され、任意に適当な栄養培地中に存在する乳頭細胞と、少なくとも１種のマトリックス形成剤ＭＦ_PP、とりわけゲル形成剤を含有する偽乳頭（ＰＰ）のためのマトリックス形成培地、とりわけゲル形成培地ＭＦＭ_PPおよび場合により他の成分とを混合し、得られた混合物が、マトリックス、好ましくはゲルを形成し、とりわけ、もしあるなら栄養培地を放出して収縮することにより、偽乳頭（ＰＰ）を得ることを特徴とする請求項１〜１２のいずれかに記載の方法。
マトリックス形成培地、とりわけゲル形成培地ＭＦＭ_PPが、マトリックス形成剤ＭＦ_PP、とりわけゲル形成剤として、少なくとも１種のコラーゲン、とりわけ IV 型コラーゲン、並びに任意に、マトリックスおよび／または硬タンパク質、とりわけラミニン、ゼラチン、キトサン、グルコサミン、グルコサミノグリカン（ＧＡＧ）、ヘパラン硫酸プロテオグリカン、硫酸化糖タンパク質、例えばナイドジェン（とりわけエンタクチン）、および成長因子、例えば組織成長因子-ベータ（ＴＧＦ-β）、線維芽細胞成長因子、組織プラスミノーゲン活性化因子、および Engelbreth-Holm-Swarm 腫瘍（ＥＨＳ腫瘍）および／またはヒト胎盤からの他の成長因子、および上記成分の混合物の群から特に選ばれる他の成分を含有することを特徴とする請求項１６に記載の方法。
収縮したマトリックス、とりわけゲルおよび／または偽乳頭（ＰＰ）を、インサイチューで、偽真皮（ＰＤ）または偽真皮調剤中で形成することを特徴とする請求項１６または１７に記載の方法。
偽乳頭（ＰＰ）を、マトリックス、とりわけゲルから形成し、偽乳頭（ＰＰ）の形成／造形を、工程（ｃ）における偽乳頭（ＰＰ）またはそれらの前駆体の導入または挿入前またはその後のいずれかで行うことを特徴とする請求項１〜１８のいずれかに記載の方法。
偽真皮（ＰＤ）のためのマトリックス形成剤ＭＦ_PDおよび／または偽乳頭（ＰＰ）のためのマトリックス形成剤ＭＦ_PPが、加熱により、とりわけ２０℃〜４０℃の温度でゲル化し、とりわけ該方法において重合し、細胞の成長および分化を促進することができることを特徴とする請求項１〜１９のいずれかに記載の方法。
偽真皮（ＰＤ）のマトリックスおよび／または偽乳頭（ＰＰ）のマトリックスが、三次元構造を形成することを特徴とする請求項１〜２０のいずれかに記載の方法。
マトリックス、とりわけゲルの形成が、可逆または不可逆であることを特徴とする請求項１〜２１のいずれかに記載の方法。
偽乳頭（ＰＰ）を適応させるために適当な空洞を偽真皮（ＰＤ）中に、とりわけパンチングまたはプリッキングにより形成し、次いで培養乳頭細胞を含有し、その寸法が偽真皮（ＰＤ）中に形成された空洞に対応する偽乳頭（ＰＰ）を、それらの空洞に導入、挿入または移植することにより、あるいは培養真皮乳頭細胞および少なくとも１種のマトリックス形成剤ＭＦ_PPの混合物の形態の偽乳頭（ＰＰ）またはそのような偽乳頭（ＰＰ）の対応する前駆体を、導入または挿入し、次いで偽乳頭（ＰＰ）の前駆体が、インサイチューで偽真皮（ＰＤ）中で、とりわけゲル化によってマトリックスを形成することにより、工程（ｃ）における偽乳頭（ＰＰ）の導入または挿入を行うことを特徴とする請求項１〜２１のいずれかに記載の方法。
パンチングまたはプリッキングを、とりわけ直径０.５〜４ｍｍ、好ましくは約２ｍｍのパンチ、ボタンカニューレまたは通常のカニューレで行うことを特徴とする請求項２３に記載の方法。
偽乳頭（ＰＰ）またはそれらの前駆体の導入の前に空洞を、少なくとも１種のコラーゲン、とりわけ IV 型コラーゲンおよび／または他のマトリックスタンパク質、とりわけ基底膜タンパク質、例えばラミニンで裏打ちすることを特徴とする請求項２３または２４に記載の方法。
予備成形偽乳頭（ＰＰ）または偽乳頭（ＰＰ）の前駆体を、偽真皮（ＰＤ）中、またはとりわけ偽真皮調剤中に直接導入または挿入することを特徴とする請求項１〜２３のいずれかに記載の方法。
工程（ｃ）において偽乳頭（ＰＰ）またはそれらの前駆体を偽真皮（ＰＤ）中に導入または挿入する角度が、偽真皮（ＰＤ）面を基準に３０°〜９０°、とりわけ４０°〜６０°であることを特徴とする請求項１〜２６のいずれかに記載の方法。
任意に工程（ｄ）で行われる再構成表皮（偽表皮；ＰＥ）または再構成周皮（偽周皮；ＰＩ）の適用を、工程（ｃ）における偽乳頭（ＰＰ）またはそれらの前駆体の導入または挿入の前またはその後に行うことを特徴とする請求項１〜２７のいずれかに記載の方法。
偽表皮（ＰＥ）または偽周皮（ＰＩ）が、培養ケラチノサイト、とりわけ毛包ケラチノサイト（ＯＲＳおよび／またはマトリックスケラチノサイト）および／または表皮ケラチノサイト、および任意にメラノサイトさえ、とりわけ外毛根鞘メラノサイト（ＯＲＳメラノサイト）および／または表皮メラノサイト、および任意に他の成分を含有することを特徴とする請求項２８に記載の方法。
ケラチノサイトおよびメラノサイトを、個々に別の単層若しくは多層中、または一緒に単層若しくは多層として混合物で、偽真皮（ＰＤ）に適用することを特徴とする請求項２８または２９に記載の方法。
請求項１〜３０のいずれかに記載の方法により得ることができる、毛髪／皮膚等価物、とりわけ偽真皮（ＰＤ）中に再構成乳頭（ＰＰ）を有する毛髪モデル。
製薬、医療または化粧品およびボディケア分野における、請求項３１に記載の皮膚／毛髪等価物の使用。
とりわけ適合性および／または有効性について薬剤または化粧品を発見、研究および／または試験するための、請求項３２に記載の皮膚／毛髪等価物の使用。
毛包に関する、とりわけ毛髪の着色、毛髪の成長、毛髪の構造、毛髪の色などに関する有効性および／または適合性について薬剤または化粧品を発見、研究および／または試験するための、請求項３３に記載の使用。
薬剤または化粧品の開発のための、請求項３１に記載の皮膚／毛髪等価物の使用。
好ましくは自動スクリーニング法において、とりわけ薬剤または化粧品を発見、研究および／または試験するための、請求項３１に記載の皮膚／毛髪等価物の使用。
とりわけ薬剤または化粧品による毛包、毛髪の着色、毛髪の成長、毛髪の構造、毛髪の色などの影響をインビトロで評価するための、請求項３１に記載の皮膚／毛髪等価物の使用。
請求項３１に記載の皮膚／毛髪等価物を含む系、とりわけ試験系。