JPH0747043B2 - 合成生体皮膚等価物 - Google Patents

合成生体皮膚等価物

Info

Publication number
JPH0747043B2
JPH0747043B2 JP3508090A JP50809091A JPH0747043B2 JP H0747043 B2 JPH0747043 B2 JP H0747043B2 JP 3508090 A JP3508090 A JP 3508090A JP 50809091 A JP50809091 A JP 50809091A JP H0747043 B2 JPH0747043 B2 JP H0747043B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
collagen
porous
skin
skin equivalent
layer
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
JP3508090A
Other languages
English (en)
Other versions
JPH05506169A (ja
Inventor
エイゼンバーグ，マーク
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Individual
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=25643857&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=JPH0747043(B2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Individual filed Critical Individual
Publication of JPH05506169A publication Critical patent/JPH05506169A/ja
Publication of JPH0747043B2 publication Critical patent/JPH0747043B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
    • A61L27/3804—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by specific cells or progenitors thereof, e.g. fibroblasts, connective tissue cells, kidney cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
    • A61F2/00—Filters implantable into blood vessels; Prostheses, i.e. artificial substitutes or replacements for parts of the body; Appliances for connecting them with the body; Devices providing patency to, or preventing collapsing of, tubular structures of the body, e.g. stents
    • A61F2/02—Prostheses implantable into the body
    • A61F2/10—Hair or skin implants
    • A61F2/105—Skin implants, e.g. artificial skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/14—Macromolecular materials
    • A61L27/22—Polypeptides or derivatives thereof, e.g. degradation products
    • A61L27/24—Collagen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
    • A61L27/3804—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by specific cells or progenitors thereof, e.g. fibroblasts, connective tissue cells, kidney cells
    • A61L27/3813—Epithelial cells, e.g. keratinocytes, urothelial cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
    • A61L27/3886—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells comprising two or more cell types
    • A61L27/3891—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells comprising two or more cell types as distinct cell layers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A61L27/56—Porous materials, e.g. foams or sponges
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A61L27/60—Materials for use in artificial skin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0697—Artificial constructs associating cells of different lineages, e.g. tissue equivalents
    • C12N5/0698—Skin equivalents
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5014—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing toxicity
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
    • C12N2502/09—Coculture with; Conditioned medium produced by epidermal cells, skin cells, oral mucosa cells
    • C12N2502/094—Coculture with; Conditioned medium produced by epidermal cells, skin cells, oral mucosa cells keratinocytes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
    • C12N2502/13—Coculture with; Conditioned medium produced by connective tissue cells; generic mesenchyme cells, e.g. so-called "embryonic fibroblasts"
    • C12N2502/1323—Adult fibroblasts
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2503/00—Use of cells in diagnostics
    • C12N2503/04—Screening or testing on artificial tissues
    • C12N2503/06—Screening or testing on artificial skin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
    • C12N2533/50—Proteins
    • C12N2533/54—Collagen; Gelatin
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S128/00—Surgery
    • Y10S128/08—Collagen

Description

【発明の詳細な説明】 技術の分野 この発明は生体皮膚等価物に関し、特に培養されたケラ
チン細胞の表皮層と、高度に精製された非多孔性コラー
ゲンの層と、多孔性の、架橋コラーゲンスポンジ内の培
養された繊維芽細胞の真皮層を含む合成生体皮膚等価物
に関する。発明は、またこの合成生体皮膚等価物の調製
方法にも関連する。
背景技術 皮膚等価物は皮膚移植のためのヒトまたは動物の皮膚の
代替物としてのみならず、薬品および化粧品の皮膚への
影響を決定するための試験用皮膚としてなど多くの用途
を有している。
薬理学的、化学的および化粧品の試験における主な困難
点は、その製品の皮膚に対する効力と安全性を決定する
うえでのものである。この発明の皮膚等価物の１つの利
点は、試験用皮膚に対する生体外の試験により、このよ
うな物質により生じる影響の指標としての用途である。
また、肉芽を形成する傷および火傷により裸出した領域
の皮膚移植は、移植技術の発達にもかかわらず、依然と
して大きな治癒上の問題を抱えている。中間層自家移植
片および表皮自家移植片（培養自原性ケラチン細胞）が
利用された場合には様々な成功をおさめている。しかし
ながら、双方の治療形態ともに多くの問題点を抱えてい
る。たとえば、中間層自家移植片は一般的には大きな体
表面積（BSA）の火傷の場合には利用不可能であり、患
者にさらに傷を与え、ジストロフイー性の表皮水疱症
（DEB）の患者の治療においての利用は制限されてお
り、限られた組織の伸張を示し、何度も外科手術を繰返
さなればならず、長期入院を必要としかつ美容的に見て
も望ましくない結果をもたらす、表皮自家移植片は製作
に時間がかかり、30−50％の範囲の低い成功（「生
着」）率であり、しばしば自然水疱を形成し、壊れやす
くかつ扱いにくく、元のサイズの60−70％までの収縮を
示し、移植後約15日の間は傷つきやすく、かつ表皮と真
皮とが破壊されているような深い火傷の治療にはほとん
ど全く使用されていない。
代替的な治療の形態が表皮同種移植（培養された同種異
系ケラチン細胞）である。アメリカの研究者は、２度の
火傷の患者を、その傷に表皮同種移植を行なうことで幾
分かの成功をおさめている。このような同種移植の有利
点は以下のとおりである、すなわち患者が単一の経過に
おいて、永久治癒を可能とする物質で覆われるようにこ
のような移植片の容易な供給が維持され得ること、傷の
領域を広げかつ痛みを伴い、感染しやすい供与体部位が
残る自家移植をなくし、培養された同種移植片で覆われ
た火傷の傷が自家移植片で覆われている火傷の傷と同じ
ぐらい早く治癒し、かつDEBを伴う患者の治療も可能な
点である。
しかしながら、表皮同種移植にも依然として表皮自家移
植の限界の多くがみられる。
火傷による全層皮膚の傷は表皮と真皮の双方を破壊し、
培養皮膚による治療ではこれらの部分の双方を置換する
必要がある。
ハンズボロー.J.F（Hansborough,J.F）およびボイズ.S.
T（Boyce,S.T）（JAMA 1989,2125−2130）は、真皮の等
価物の自家表皮細胞を付与してこれを今度は傷の上に移
植する方法を報告している。この方法の主な欠点は真皮
等価物の調製にある。
さらに、この方法は中性のpHでコラーゲンに対し結合が
弱く、かつしたがって傷の周囲に放出されて、被験者に
対し予測のできない長期間にわたっての影響を引き起こ
しかねないコンドロイチン−６−硫酸（GAG）の使用を
含んでいた。GAGは、移植では避けるべきである傷にお
ける傷痕の形成を増大させることが報告されている。コ
ラーゲンの血液凝固能力を減少させるコラーゲンスポン
ジを含むGAGのもう１つの影響は出血する傷に適用する
場合にはあまり好ましいものではないと考えられ得る。
フィブリンの凝血は移植片の傷への癒着の原因となる。
またこの方法においては、コラーゲンスポンジは0.25％
のグリタルアルデヒド（GTA）と架橋させられることに
より安定する。このような架橋コラーゲンは、より遅い
速度で再吸収されかつ細菌または真菌の感染に対し抵抗
がある。同時に、GTA架橋コラーゲンマトリックスに浸
入する細胞の内殖も少ない。GTAと架橋されたコラーゲ
ンは、この溶剤を断続的に加水分解される高分子重量ポ
リマとして保持してもよくかつ単重体のGTAが６週間ま
での間に放出されかつ分離可能である。組織培養におけ
る組織芽細胞に対するGTAの細胞障害効果は、宿主細胞
によりり浸入されかつその中でウシのコラーゲンマトリ
ックスが急速に劣化してGTAを体液内に放出する真皮等
価物には理想的な架橋剤とは言えないことを提示してい
る。
最近、溶解性コラーゲンに投入されたラットの繊維芽細
胞からなる真皮層と培養されたラットのケラチン細胞の
表皮層とを含む生体皮膚等価移植片が、ベル他（Bell e
t.al.）によりSDラットに対して同種異系移植片として
うまく移植された（Journal Investigative Dermatolog
y,198 3;81:2s−10s）。移植片を組織的に検査すること
で、表皮細胞が完全に変化してデスモゾーム、トノフィ
ラメント、ケラトヒアリンおよび基底板を形成したこと
がわかった。しかしながら、ヒトの繊維芽細胞とケラチ
ン細胞とを使用して生体皮膚等価物を再生しようとする
試みはほんの少ししか成功しなかった。ケラチン細胞は
基底板を形成するほど十分には変化を遂げずかつ真皮−
表皮関係は直線的であった。
上記真皮等価物の表面を表皮化することに関する問題に
より、ベルが公開されたWO86−02273号の国際PCT出願に
記載されるような、皮膚の生検材料をケラチン細胞源と
して使用することにより彼の方法を修正することになっ
た。この方策にまつわる問題は、こうして生成された皮
膚の代替物がその全表面にわたって均一でないことであ
り、つまり真皮部分を含む生検材料が真皮の代替物に挿
入されたままだからである。また、得られた皮膚代替物
の表面積は１人の人間から採取され得る生検の数により
制限される。生検をとることは感染と傷痕をつくるとい
う潜在的問題を伴う医療的な経過を含むものである。皮
膚等価物のパンチバイオプシは、付加的な皮膚等価物の
生成を拡大する手段としては時間のかかる方法である。
結果として、このような皮膚の等価物は臨床学的には使
用されていない。1988年には、雑誌“火傷”（Burns）
掲載されたコロンブ他（Colounb et.al）による論文
は、ベルの方法を利用しての100％の失敗率を報告して
いる。
オーストラリア特許出願AU−Ａ−13743/88号の発明者で
ある、バーナード他（Bernard et al）は毛嚢のシース
に含まれるケラチン細胞の培養能力を利用して上記の問
題を回避することを試みる。皮膚の生検材料がそのシー
ス内に放出された毛嚢で置換えられ、形成されている真
皮の代替物の自由な表面における直角をなす位置に移植
される。上記の発明に関する主な批判点は、その真皮の
性質、および表皮が成長する期間が数カ月かかるかもし
れないという点である。
したがって、皮膚の損傷の一回の治療を可能にするのに
十分な量で容易に調製されかつ維持され得る表皮および
真皮の層双方を含む生体皮膚等価移植片の開発の必要が
ある。
生体皮膚等価物を開発するうえで、その等価物が以下に
述べる特徴の少なくとも幾つかまたはすべてを含んでい
ることが望ましい、すなわち傷の表面に対して迅速かつ
持続する粘着が可能であること、組織適合性があるこ
と、繊維芽細胞組織の内殖を促進する傷の表面と接触す
る内側表面を有していること、および／または感染から
保護しかつ体液の損失を防止することである。
したがって、本件発明の目的は、これらの特徴の少なく
とも幾つかを提示し、かつ上記の問題の１つまたは２つ
以上を実質的に克服するかまたは改善する培養生体皮膚
等価物を提供することにある。
発明の開示 この発明の１つの局面は、培養ケラチン細胞からなる表
皮層と、高純度で、非多孔性のコラーゲンからなる層
と、多孔性の、架橋されたコラーゲンスポンジ内の培養
繊維芽細胞からなる真皮層とを含む、合成生体皮膚等価
物に関する。
この発明のもう１つの局面は、合成生体皮膚等価物の調
製のための方法であって、皮膚のサンプルを入手し、そ
の皮膚のサンプルに対し真皮から表皮を分離するように
酵素で処理し、表皮を酵素で処理してケラチン細胞を放
出させ、集密するまで表皮ケラチン細胞を培養し、並行
してまたは別々に、真皮を酵素で処理して繊維芽細胞を
放出させ、準集密状態になるまで繊維芽細胞を培養し、
培養した繊維芽細胞を多孔性の架橋されたコラーゲンス
ポンジ膜に植えつけ、その表面上に植えつけられたコラ
ーゲンスポンジをインキュベートしてコラーゲンスポン
ジを通して繊維芽細胞を成長させ、コラーゲンスポンジ
を倒置し、かつスポンジの他方の表面を高純度の、好ま
しくはペプシンで処理された非多孔性のコラーゲンから
なる薄膜でラミネート処理して積層のスポンジ複合体を
形成し、その複合体をインキュベートして非多孔性コラ
ーゲンを重合し、かつその後それに培養したケラチン細
胞を接種し、かつその合成皮膚等価複合体をインキュベ
ートして細胞の成長を促進することを含む。
繊維芽細胞の初代培養物は好ましくは以下の工程により
調製される、すなわち真皮のサンプルを入手し、その真
皮のサンプルをコラゲナーゼの溶液に懸濁して繊維芽細
胞を放出させ、培養物をインキュベートし、その培養物
を遠心分離して繊維芽細胞の細胞ペレットを生成し、培
地を取り除き、細胞ペレットを洗浄して外来性の培地を
取り除き、細胞の数と生存度を決定し、培養フラスコに
細胞を接種しかつ準集密状態まで培養する工程である。
好ましくは、非多孔性の、高度に精製されたコラーゲン
が、タイプ１、タイプ３またはタイプ１とタイプ３の混
合物のコラーゲンから選択される。たとえば、適当なウ
シの皮膚のコラーゲンはシグマ（Sigma）から入手可能
である。
このコラーゲンは理想的にはペプシンでの処理により精
製されて、抗原物質を取り除く。
使用されるコラーゲンスポンジはミタプラスト（Mitapl
ast）から入手可能なものなど、任意の適当なコラーゲ
ンスポンジでよい。
本願発明において使用されるケラチン細胞は、好ましく
は「滴下（drop）」法により調製される。ケラチン細胞
は表皮から放出されて単細胞懸濁物を生成する。この懸
濁物の別々の零が培地上に均一に置かれてインキュベー
トされ、細胞が広がりかつ最終的に合着する。
図面の簡単な説明 この発明は、限定目的ではない例によりかつ添付の図面
を参照して以下に説明され、図面において； 第１図は本願発明の合成生体皮膚等価物を生成するため
の方法を示す模式図である。
第２図はａ）において移植後２週間後の合成生体皮膚等
価物の組織学的外観を、正常な皮膚の組織学的外観を示
す図ｂ）と比較して示すものである。
第３図はこの発明の皮膚等価物を利用する移植片からの
皮膚バイオプシの組織構造を示す図である。
第４図は本願発明の合成皮膚等価物を示す図である。
第５図は被験者からの皮膚の移植片における皮膚等価物
のバイオプシを示す。
発明を実施するためのモード 第１図は合成生体皮膚等価物の調製のための方法を模式
的に示す。
第１図において、皮膚のサンプルが、繊維芽細胞（10）
の源として使用される真皮と、ケラチン細胞（11）の源
として使用される表皮とに分けられる。培養された繊維
芽細胞（10）はコラーゲンスポンジ（12）に植えつけら
れ、かつ繊維芽細胞がスポンジにコロニーを形成した
後、スポンジの反対側にペプシンで処理した非多孔性の
コラーゲンが植えつけられる。さらにインキュベートし
た後、非多孔性コラーゲンに好ましくは「滴下」法によ
りケラチン細胞培養物が接種され、かつ培養されて最終
的に皮膚等価物（13）を生成する。
細胞培養技術に従う任意の皮膚サンプルが本願発明に従
い使用可能である。皮膚のサンプルは自原性でもよいし
同種異系性のものでもよい。
皮膚のサンプルはトリプシンで処理されて真皮から表皮
が分離される（エイジンガー,M.による皮膚研究におけ
る方法、編集者D,スケロー、（1985）pp193）（Eisinge
r,M.Method in Skin Research, Editor D.Skerrow）。
表皮は細かく切られてトリプシンで処理されケラチン細
胞を放出する。ケラチン細胞は標準的な方法を利用して
集密状態まで培養される。好ましい局面においては、ケ
ラチン細胞は集密するまで単細胞懸濁物として培養され
る。
本願の発明に従い使用される繊維芽細胞の初代培養物は
たとえば「単層培養物におけるウサギの繊維芽細胞から
の特異性コラゲナーゼ」（ジャーナル オブ バイオケ
ミストリー（1974）137、373−385）に開示されるよう
な方法などの標準的な方法を使用して調製され得る。好
ましくは、繊維芽細胞の初代培養物は以下のような方法
で調製される。
真皮のサンプルが1mmの立方体にまで切りわけられてト
リスーHC1pH7.4で緩衝されたコラゲナーゼの溶液に懸濁
される。真皮のサンプルが自原性のものでもよいし同種
異系性のものでもよい。適切なコラゲナーゼはヒストリ
チクス菌（Clostridium histolyticum）のコラゲナーゼ
である。真皮のサンプルは好ましくは１マイクログラム
/mlの濃度で溶液に懸濁される。懸濁液はインキュベー
トされその後1500rev/secで遠心分離にかけられ溶液か
ら細胞を取り除く。懸濁液は好ましくは30分間インキュ
ベートされる。細胞のペレットがDMEMで洗浄されかつ繊
維芽細胞の数が血球計数器により測定される。繊維芽細
胞の生存度がトリパンブルーを使用する色素排除試験に
より測定される。繊維芽細胞は直接コラーゲンスポンジ
内に注入されてもよいしまたは培養フラスコに植えるた
めに使用される標準的な方法を利用して準集密状態まで
成長させられる。驚くべきことに、この方法は繊維芽細
胞の初代培養物を調製するために３週間までの時間を必
要とする他の公知の方法に比べて、２週間まで、かかる
時間が短い。
上記の培養方法はまた汗腺または他の皮膚細胞のタイプ
にまで成長する可能性を有する他の真皮上皮細胞を生じ
させる。
架橋されたウシのコラーゲンのスポンジ膜は商業的に入
手されかつ冷凍保存が可能である。使用の前に、スポン
ジは滅菌された水で洗われかつ膜の目の詰まった状態に
するために37℃で脱水される。
コラーゲンスポンジには培養された繊維芽細胞が接種さ
れる。一実施例においては、このスポンジには準集密細
胞培養物が接種される。好ましくは、繊維芽細胞の接種
物は約４×105細胞/mlの密度を有する。
接種されたスポンジは標準的な方法を利用してインキュ
ベートされ、繊維芽細胞の、コラーゲンマトリックスを
通しての成長を可能にする。一実施例においては、この
スポンジはDMEMとならし培地において37℃で、５％のCO
2および飽和湿度で10日間インキュベートされる。DMEM
とならし培地は好ましくは２日置きに取り替えられる。
ならし培地は２日間にわたってヒトのケラチン細胞から
なる培養物において使用されていたDMEMである。これは
繊維芽細胞を刺激することが知られているケラチン細胞
により分泌された様々な高分子を含む。ならし培地は使
用まで凍結保存が可能である。これは1:2の割合で新鮮
なDMEMと関連して使用される。
スポンジはそこで反転され、かつ上の面が、ペプシン処
理した非多孔性のコラーゲンでラミネートされる。本願
発明の一実施例においては、ラミネート層は、（精製さ
れた）ペプシンで処理され、非多孔性の、無菌のタイプ
１のウシのコラーゲンか、またはタイプ１とタイプ３の
ウシのコラーゲンの混合物である。ウシのコラーゲンは
実質的に精製された形態で商業的に入手可能である。こ
れはドレーク,M.P.、デビソン,P.F.およびバンプ,S.の
（1966）バイオケミストリー5:301−312（Drake,M.P.,D
avison,P.F.and Bump,S）の方法を使用してヘピシンで
処理され、テリオペプチド（teliopeptide）が取り除か
れる。コラーゲン溶液のpHは中性のpHに調節されかつγ
線の放射により殺菌される。コラーゲン溶液の適切な濃
度は2mg/mlである。コラーゲンは薄膜としてスポンジ上
に積層されかつ37℃で60分間インキュベートされてコラ
ーゲンの重合化が完了する。
培養されたケラチン細胞はその後ラミネート層上に接種
される。好ましくは、細胞は１×105細胞／滴の密度で
細胞を含む媒質の零を接種される。スポンジはその後２
％のウシ胎児血清、10mg/mlのヒトの表皮成長因子、0.4
mg/mlのヒドロコルチゾンおよび10-9Ｍはコレラ毒素を
加えられたDMEM内でpH7.2および35℃で10日間インキュ
ベートされる。
皮膚等価物はこのインキュベート期間を通して上記の培
地に浸されたままである。
この合成生体皮膚等価物の臨床学的または生体外付与に
先立って、ウシの下垂体抽出物を伴わない培養液が培地
に加えられる。
驚いたことに、臨床学的応用においては、本願発明の合
成生体皮膚等価物は治癒した移植片の表皮と真皮との間
の界面の急速な正常化を結果としてもたらす。生体外で
の２週間の培地を経た本願の皮膚等価物の組織学的検査
によれば、均一な膜の上に多層の表皮が成長しているの
が明らかとなった。移植の後２週間を経た本願の皮膚等
価物のバイオプシのサンプルを組織学的に検査したとこ
ろ非炎症性結合組織細胞が密集した真皮の上に十分にケ
ラチン化された表皮を有する角質層の形成が確認された
（図2aを参照）。重要なことは、光および電子顕微鏡で
見たときに、波状の形態的に成熟した表皮−真皮の接合
部が存在していることである。正常な皮膚の特徴であり
かつ表皮と真皮との間の界面が正常化される場合に重要
である、乳頭間隆起と真皮乳頭の嵌合襞が存在してい
た。
皮膚等価物が0.05×10-3ＭのCa++を有するDMEM培地に最
初に４日間浸されて培養された後、0.05×10-3Ｍの濃度
を上げたCa++を含むDMEM培地内で表皮を露出して（気相
液相界面）で10日間培養された場合には、よく発達した
基底板上の基底細胞層と初期のケラチン化を示す数層の
上基底細胞から構成される、多層の、分化した表皮を検
出することが可能である。
上記の生体外のシステムが、ヒトの皮膚の内部構造的構
成および生合成産物に非常に類似しておりかつ化学殺虫
剤の安全性や化粧品の皮膚への刺激について試験を行な
うべく適合され得る。このシステムの表面に塗布された
テスト物質は細胞の刺激を引き起こしかつ培養液で測定
され得る炎症反応の媒介物質の放出の引金となるかもし
れない。このシステムは生体外の細胞毒性試験に適して
いるかもしれない、すなわち細胞におけるタンパク質濃
度を測定する全体的細胞性タンパク質検定とニュートラ
ルレッド取込み検定により生存しているおよび死んでい
る細胞の存在に関する量的な検定が行なわれる。
皮膚等価物はガラスのボトルまたは皿で培養が可能で、
かつテスト対象の様々な化学物質がこの培養皮膚に塗布
される。適切な培地を断続して供給することで、皮膚は
テストが終了するまで成長し続けることになる。
コラーゲンのスポンジは、ヒトまたは動物において、傷
の表面への、合成生体皮膚等価物の急速なかつ持続した
粘着を可能にする一時的なマトリックスを提供し、これ
が傷表面からの繊維芽細胞の内殖を可能にし、かつ新真
皮構造が成長することを可能にする傷の表面に接触した
面を提供する。コラーゲンのマトリックスは変化させら
れかつ繊維芽細胞と物理的に反応しかつ生合成的な影響
を受けるうちに崩壊して内因性のコラーゲンにとって代
わられる。しかしながら、コラーゲンスポンジは架橋さ
れたコラーゲンなので、収縮することはなく、したがっ
てある期間貯蔵されることは可能であり、かつ傷に対し
て移植された際にも収縮を示すことはない。
コラーゲンスポンジの上表面上に置かれた、ペプシンで
処理された、非多孔性のコラーゲンにより培養されたケ
ラチン細胞によるコラーゲンスポンジへの侵入を防ぎ、
それにより皮膚等価物の、表皮および真皮層への区画化
を確実なものとする。このラミネート層はまた徐々に崩
壊して真皮と表皮の間に正常な界面が形成することを可
能にする。
本願の合成生体皮膚等価物は、約0.8mmの厚さでありか
つしたがって表皮移植片よりも強くかつ移植の際により
容易に扱われる。本願の皮膚等価物の成功（生着）率は
約90％であり、これは移植片の血管新生の進行を促進す
る真皮層の存在によるものかもしれない。最後に、本願
の合成生体皮膚等価物は１段階で付与することが可能
で、したがって移植片を受入れるのはたった１回で良
い。合成生体皮膚等価物の移送および付与を容易にする
ために、ワセリンガーゼが培養された移植片の上に置か
れてもよい。
本願発明に従い使用される繊維芽細胞とケラチン細胞は
自原性のものでもよいし同種異系性のものでもよい。同
種異系性細胞を使用することにより、本願発明の生体皮
膚等価物の生成と貯蔵が可能となり、それにより傷の治
療のために移植片を調達する際の遅れが回避される。ケ
ラチン細胞と繊維芽細胞双方の細胞タイプ共に単細胞懸
濁物として公知の方法により凍結貯蔵が可能である。解
凍の後、これらの細胞は生存しており、培養物において
簡単に成長し、かつ皮膚等価物の製造に適していた。皮
膚等価物はボランティア被験者にうまく移植された。冷
却することにより皮膚移植片の免疫原性が抑制されるの
で、（ボールドウィンWM他（Baldwin W M et al）の
「移植」（Transplantation）1973年;15:419−422）、
同種異系性細胞の冷凍保存が幾つかの望ましくない抗原
を軽減するうえでの助けとなる。表面領域の傷の治療の
ための合成生体皮膚等価物が入手可能になったことによ
って恒久的な傷被覆の源としての恐らくは無限の量の移
植可能な皮膚が提供され得る。
ヒトの同種異系性皮膚細胞を利用した以下の例において
本件発明に関し説明する。
例１ 合成移植片が、同種異系性ヒトケラチン細胞（HK）とヒ
ト繊維芽細胞（HF）の別個、並行培養物と細胞性ウシコ
ラーゲン膜から製作された。真皮膜はタイプ１のウシの
コラーゲンを使用して修正され、培養されたHKのための
平坦な表面がもたらされた。
外科的な標本、すなわち新生児の環状切除（包皮）から
ヒトの皮膚が入手された。切除の後、ダルベッコの修正
されたイーグル培地（DMEM−Dulbecco's modified Eagl
e's medium）に置かれた。標本は、短時間で組織培養実
験室に運ばれて、表皮がエンジンガー,Mの方法により酵
素で真皮から分離された（皮膚研究における方法（Meth
od inSkin Research）、編集者D,スケロー、1985年第19
3頁）。
ケラチン細胞は以下のように修正されたエイジンガーの
方法により単細胞懸濁物として培養される、すなわちHK
が２％のウシの胎児血清と、表皮成長因子と、イッシュ
リンと、pH7.2でのヒドロコルチゾンを加えられたDMEM
内で培養された。集密培養物は二次培養またはコラーゲ
ン膜への接種のために12日から14日後に採取可能となっ
た。
繊維芽細胞はそれらをヒストリチクス菌（Clostidium h
istolyticum）のコラゲナーゼで消化することにより真
皮の断面から放出された。HFはその後標準的な方法を利
用してDMEM内で成長させられた。
ペトリ皿で凍結保存されたコラーゲンスポンジ膜（直径
6cm）は無菌水で洗われかつ膜を緊密にするためにイン
キュベート内で37℃で脱水された。スポンジはその後な
らし培地を加えられたDMEM内で一晩インキュベートされ
た。HFの準集密培養物は４×105セル/mlの密度でスポン
ジの表面に接種された。スポンジはその後37℃、５％の
二酸化炭素と飽和湿度でインキュベート内のDMEMに10日
間置かれた。
培地は２日置きに変えられた。この期間の最後には、ス
ポンジはひっくり返されて非多孔性の表面が培養HKのた
めの平坦な表面を提供するべく調製された。
ペプシンで処理した、非多孔性の、無菌のタイプ１のウ
シのコラーゲンの薄膜を付与することによりラミネート
処理が行なわれた。膜はテリオプチドを取り除くために
ペプシン化されかつγ線放射で殺菌された商業的に入手
可能な精製されたタイプ１のコラーゲンから調製され
た。コラーゲンの溶液は中性のpHにされかつ薄膜として
コラーゲンスポンジの表面に塗布されかつ37℃で60分間
にわたってインキュベートされた。
培養されたHKは一滴あたり１×105の密度の水滴でスポ
ンジの非多孔性の表面に接種されかつ上記に述べた添加
物を加えられたDMEM内で10日間インキュベートされた。
臨床的な適用の前に、ウシの下垂体の抽出液を持たない
培地が培養皿に加えられた。移植片の傷への移送および
固定を容易にするために、ワセリンガーゼが培養移植片
の上に置かれた。
本願の生体皮膚等価物を使用した５人の子供に対する８
つの手術においては、成功率は90％であった。
RDEBの子供たちの８つの手術においては、上記の移植片
の臨床的かつ組織学的な外観が、拒否反応が存在してい
ないことを提示していた。
しかしながら、培養された同種移植片が長期にわたって
生き残っているかまたはそれらの恒久的な上皮への役割
に関して直接的な証拠を見定めるために、以下の例に述
べる健康な成人の自発的被験者に対して臨床試験が行な
われた。
例２ 合成移植片と同種移植片とが例１に概要を述べたような
態様で生成された。培養されたケラチン細胞に平坦な表
面を与えて、ヒトのケラチン細胞が架橋されたウシのコ
ラーゲンの基質の表面に付着させられた。この「皮膚培
養物サンドイッチ」が一塊で患者の傷床に移植され、コ
ラーゲンのマトリックスが下に横たわる傷床からの繊維
芽細胞の内殖を可能にする枠組みとしての役割を果た
し、それによりヒトのケラチン細胞が生き残り、かつ新
しい真皮構造の形成が可能になった。
刺青をとるために、４人の自発的被験者に対して臨床研
究が行なわれた。各被験者は腕の上で除去された４つの
皮膚の領域を有していた。２つの領域において、皮膚は
脂肪の位置まで除去されており、一方残りの２つの除去
箇所はそこに真皮の要素を残していた。全層および部分
的な層の切除部分には培養された皮膚と中間層自家移植
片（コントロールとして）が移植された。傷が完全に治
癒するまで２週間にわたり包帯が巻かれた。傷は写真に
撮られ、バイオプシが組織構造の研究およびDNAのフィ
ンガプリンティのために行なわれた。
被験者１は培養された皮膚を移植された２つの領域と自
家移植片を移植された他の２つの領域を有していた。２
週間の後、移植片は生着しかつ移植片の収縮の証拠は見
られなかった。移植片の中心領域のバイオプシはよく分
化しておりかつ多層になった表皮を有しており、かつそ
の真皮が緩く詰められたコラーゲンのマトリックスで、
数々の繊維芽細胞と非炎症性の細胞を含んでいた。第３
図と第５図が培養された移植片からの皮膚のバイオプシ
の術後２週間の組織構造を示す。第４図は移植前の皮膚
等価物を示す。DNAフィンガプリティングによれば、マ
ークをつけた真皮の細胞性の証拠が見られたので、真皮
細胞の幾つかが患者から発生していることを示す供与体
と受容体双方の細胞の混合された密集を示していた。
被験者２。移植片はどの領域においても生着しなかっ
た。３週間で肉芽を形成する傷という組織学的証拠が見
られた。
被験者３。４週間でいかなる収縮も伴わずにすべての移
植片が治癒した。組織学的検査によれば、十分に分化し
た表皮とハイパーセルの真皮が見られた。DNAのフィン
ガプリンティングにより、供与体と受容体細胞の混ざっ
た密集状態が見られた。
被験者４。８週間の後、移植片は幾らかの収縮（約15−
20％）を示し、この患者の中央の移植片領域は完全に分
化した表皮と付属器を伴わない成熟した真皮とを有して
いた。
本願発明の全体的範囲および精神から逸脱することな
く、上に記載した発明について様々な変更および修正が
加えられ得ることは、当業者にとり自明であろう。

Claims (18)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】内部に培養された繊維芽細胞を含む多孔性
    の、架橋されたコラーゲンスポンジからなる真皮層と、 前記真皮層に付着した高純度の、非多孔性コラーゲンか
    らなる層と、 前記非多孔性コラーゲン上の培養されたケラチン細胞か
    らなる表皮層とを含む、合成生体皮膚等価物。
  2. 【請求項２】非多孔性コラーゲンがタイプ１コラーゲ
    ン、タイプ３コラーゲン、またはそれらの混合物から選
    択される、請求項１に記載の合成生体皮膚等価物。
  3. 【請求項３】非多孔性コラーゲンが、ペプシンで予め高
    度に精製されている、請求項１に記載の合成生体皮膚等
    価物。
  4. 【請求項４】繊維芽細胞が、真皮のサンプルをコラゲナ
    ーゼで処理することから得られる、請求項１に記載の合
    成生体皮膚等価物。
  5. 【請求項５】ケラチン細胞の層が、ケラチン細胞の単細
    胞懸濁物を入手し、かつその懸濁物の水滴を非多孔性の
    コラーゲンの層に均一にかつ断続的に分配することによ
    り調製され、それがその後インキュベートされる、請求
    項１に記載の合成生体皮膚等価物。
  6. 【請求項６】適切な培地においてさらに培養されかつそ
    れに物質が付与され得る、請求項１に記載の合成生体皮
    膚等価物を含む、皮膚に対する物質の影響を試験するた
    めのテストキット。
  7. 【請求項７】合成生体皮膚等価物を調製するための方法
    であって、 （ａ）皮膚のサンプルを入手しかつそのサンプルを酵素
    で処理して真皮から表皮を分離させるステップと、 （ｂ）表皮を酵素で処理してケラチン細胞を放出させ、
    かつ集密状態になるまで表皮ケラチン細胞を培養するス
    テップと、 （ｃ）真皮を酵素で処理して繊維芽細胞を放出させ、か
    つ繊維芽細胞を準集密状態に至るまで培養するステップ
    と、 （ｄ）多孔性の、架橋されたコラーゲンスポンジ膜の片
    側にはステップ（ｃ）から培養された繊維芽細胞を接種
    し、かつ接種を受けたスポンジをインキュベートしてコ
    ラーゲンスポンジを通る繊維芽細胞の成長を可能にする
    ステップと、 （ｅ）架橋されたコラーゲンスポンジの他方側に非多孔
    性コラーゲンからなる層を形成しかつそれをインキュベ
    ートして非多孔性コラーゲンの層を重合するステップ
    と、 （ｆ）ステップ（ｅ）からの重合された層にステップ
    （ｂ）からの培養されたケラチン細胞を接種し、かつこ
    うして形成された合成皮膚等価物をインキュベートして
    さらなる細胞の成長を可能にするステップとを含む、方
    法。
  8. 【請求項８】非多孔性のコラーゲンがタイプ１コラーゲ
    ン、タイプ３コラーゲン、またはそれらの混合物から選
    択される、請求項７に記載の方法。
  9. 【請求項９】非多孔性コラーゲンがペプシンでの前処理
    でさらに精製される、請求項７に記載の方法。
  10. 【請求項１０】繊維芽細胞が、真皮をコラゲナーゼで処
    理することにより放出される、請求項７に記載の方法。
  11. 【請求項１１】ステップ（ｆ）の接種が、重合された非
    多孔性コラーゲン層に対しケラチン細胞の単細胞懸濁物
    の水滴を均一にかつ断続的に分配することにより行なわ
    れる、請求項７に記載の方法。
  12. 【請求項１２】合成生体皮膚等価物を調製する方法であ
    って、 （ａ）多孔性の、架橋されたコラーゲンスポンジ膜に培
    養された繊維芽細胞を植えつけ、かつ細胞を植えつけら
    たスポンジをインキュベートしてコラーゲンスポンジを
    通る繊維芽細胞の成長を可能にするステップと、 （ｂ）架橋されたコラーゲンスポンジの片側に高純度
    の、非多孔性コラーゲンの層を塗布するステップと、 （ｃ）非多孔性コラーゲンの層に培養されたケラチン細
    胞を植えつけ、かつこうして形成された合成皮膚等価物
    をインキュベートしてさらなる細胞の成長を可能にする
    ステップとを含む、方法。
  13. 【請求項１３】非多孔性コラーゲンがタイプ１コラーゲ
    ン、タイプ３コラーゲン、またはそれらの混合物から選
    択される、請求項12に記載の方法。
  14. 【請求項１４】非多孔性コラーゲンがペプシンでの前処
    理によりさらに精製される、請求項12に記載の方法。
  15. 【請求項１５】繊維芽細胞が真皮の標本をコラゲナーゼ
    で処理することにより放出される、請求項12に記載の方
    法。
  16. 【請求項１６】ステップ（ｃ）における植えつけがケラ
    チン細胞の単細胞懸濁物の雫を均一にかつ断続的に非多
    孔性コラーゲン層に分配することにより実行される、請
    求項12に記載の方法。
  17. 【請求項１７】皮膚に対する物質の影響をテストするた
    めのテストキットを調製する方法であって、請求項７ま
    たは請求項12に従い合成生体皮膚等価物を調製しかつそ
    の後その皮膚等価物を適切な培地において空気中でさら
    に培養するステップを含む、方法。
  18. 【請求項１８】皮膚に対する物質の影響をテストする方
    法であって、適切な培地におて空気中でさらに培養をさ
    れた、請求項１の皮膚等価物に対して、テスト対象の物
    質を塗布しかつその後その皮膚等価物における変化を観
    察またはテストするステップを含む、方法。
JP3508090A 1990-04-24 1991-04-24 合成生体皮膚等価物 Expired - Fee Related JPH0747043B2 (ja)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AU9819 1990-04-24
AUPJ981990 1990-04-24
AUPK430291 1991-01-22
PCT/AU1991/000160 WO1991016010A1 (en) 1990-04-24 1991-04-24 Composite living skin equivalents
AU4302 1992-08-26

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPH05506169A JPH05506169A (ja) 1993-09-16
JPH0747043B2 true JPH0747043B2 (ja) 1995-05-24

Family

ID=25643857

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP3508090A Expired - Fee Related JPH0747043B2 (ja) 1990-04-24 1991-04-24 合成生体皮膚等価物

Country Status (15)

Country Link
US (3) USRE35399E (ja)
EP (1) EP0526550B1 (ja)
JP (1) JPH0747043B2 (ja)
AT (1) ATE161408T1 (ja)
BR (1) BR9106354A (ja)
CA (1) CA2080693C (ja)
DE (1) DE69128530T2 (ja)
DK (1) DK0526550T3 (ja)
ES (1) ES2111566T3 (ja)
FI (1) FI924773A0 (ja)
GR (1) GR3026463T3 (ja)
HU (1) HUT63319A (ja)
RU (1) RU2135191C1 (ja)
TW (1) TW225986B (ja)
WO (1) WO1991016010A1 (ja)

Families Citing this family (136)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5976878A (en) * 1987-04-28 1999-11-02 The Regents Of The University Of California Method and apparatus for preparing composite skin replacement
WO1991016010A1 (en) * 1990-04-24 1991-10-31 Mark Eisenberg Composite living skin equivalents
US6399380B1 (en) * 1991-02-28 2002-06-04 Anti-Cancer, Inc. Native-state histoculturing skin extracellular support
US5888720A (en) * 1992-10-27 1999-03-30 Yissum Research And Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem In vitro micro-organs
US5610007A (en) * 1993-01-21 1997-03-11 Universite Laval Chimeric sheets of epithelial cells
CA2119064A1 (en) * 1993-03-17 1994-09-18 Richard A. Berg Dermal-epidermal in vitro test system
CH687153A5 (de) * 1993-12-22 1996-09-30 Jiri E Dr Prenosil Verfahren und Vorrichtung zur Herstellung einer Zellstruktur auf einer semipermeablen Membran.
US5489304A (en) * 1994-04-19 1996-02-06 Brigham & Women's Hospital Method of skin regeneration using a collagen-glycosaminoglycan matrix and cultured epithelial autograft
DE4414755C2 (de) * 1994-04-27 2000-11-16 Lohmann Therapie Syst Lts Kollagenzubereitung zur gesteuerten Abgabe von Wirkstoffen, Verfahren und Verwendung
JP2858087B2 (ja) * 1994-09-19 1999-02-17 グンゼ株式会社 組織培養用基材及び組織培養法
US20030152909A1 (en) * 1994-11-16 2003-08-14 Mitrani Eduardo N. In vitro micro-organs, and uses related thereto
US6080194A (en) * 1995-02-10 2000-06-27 The Hospital For Joint Disease Orthopaedic Institute Multi-stage collagen-based template or implant for use in the repair of cartilage lesions
IT1281870B1 (it) * 1995-04-27 1998-03-03 Fidia Advanced Biopolymers Srl Pelle artificiale umana costituita da materiali biocompatibili a base di derivati dell'acido ialuronico
US20040002772A1 (en) * 1995-04-28 2004-01-01 Organogenesis, Inc. Tissue equivalents with perforations for improved integration to host tissues and methods for producing perforated tissue equivalents
US20020111695A1 (en) * 1995-11-06 2002-08-15 Mount Sinai Hospital Corporation Reconstituted mineralized cartilage tissue
EP0862616B1 (en) 1995-11-06 2008-07-30 Mount Sinai Hospital Reconstituted mineralized cartilage tissue
ES2117573B1 (es) * 1996-07-19 1999-02-16 Comunitario De Transfusion Del Base dermica especialmente diseñada para el cultivo de queratinocitos.
WO1998013076A1 (en) * 1996-09-24 1998-04-02 Brigham And Women's Hospital Cultured cell-seeded fibrous lattice for tissue replacement
FR2757635B1 (fr) * 1996-12-24 1999-02-05 Oreal Procede d'evaluation des dommages induits dans la peau par les uv-a
CA2207882A1 (en) 1997-06-17 1998-12-17 Joel Claveau Assessment of human skin damage following exposure to harmful agents
ES2132027B1 (es) * 1997-07-04 2000-04-01 Comunitario De Transfusion Del Desarrollo de una piel artificial mediante cultivo de queratinocitos sobre una base de fibrina y fibroblastos humanos y metodo de preparacion de esta piel para trasplante.
US7687057B2 (en) * 1998-01-09 2010-03-30 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem In vitro micro-organs, and uses related thereto
US6498138B1 (en) 1998-03-11 2002-12-24 University Of Southern California Method of promoting production of living tissue equivalents
US6432710B1 (en) * 1998-05-22 2002-08-13 Isolagen Technologies, Inc. Compositions for regenerating tissue that has deteriorated, and methods for using such compositions
US6177514B1 (en) * 1999-04-09 2001-01-23 Sulzer Carbomedics Inc. Blocked functional reagants for cross-linking biological tissues
FR2792650B1 (fr) 1999-04-20 2003-02-28 Oreal Equivalent de peau agee, son procede de preparation et son utilisation
US6372494B1 (en) 1999-05-14 2002-04-16 Advanced Tissue Sciences, Inc. Methods of making conditioned cell culture medium compositions
DE19922078A1 (de) * 1999-05-15 2000-11-23 Weitzel Kage Doris Gewebekonstrukt für die Transplantationschirurgie
FR2801313A1 (fr) 1999-05-19 2001-05-25 Coletica Produit collagenique contenant du collagene d'origine marine a faible odeur et de preference a proprietes mecaniques ameliorees, ainsi que son utilisation sous forme de compositions ou de produits cosmetiques ou pharmaceutiques
FR2798735B1 (fr) * 1999-09-17 2001-11-23 Serobiologiques Lab Sa Procede d'evaluation et de suivi du vieillissement tissulaire
US6479079B1 (en) 1999-12-13 2002-11-12 Sulzer Carbomedics Inc. Anticalcification treatments for fixed biomaterials
FR2809313B1 (fr) * 2000-05-26 2005-11-18 Coletica Procedes de preparation de nouveaux supports a base de collagene pour l'ingenieurie tissulaire et biomateriaux obtenus
FR2809412A1 (fr) 2000-05-26 2001-11-30 Coletica Utilisation de collagene d'origine aquatique pour la realisation de supports destines a l'ingenierie tissulaire, et supports et biomateriaux obtenus
WO2001091821A1 (fr) * 2000-05-26 2001-12-06 Coletica Supports a base de collagene pour l'ingenierie tissulaire et la preparation de biomateriaux
US6974679B2 (en) 2000-05-26 2005-12-13 Coletica Support with collagen base for tissue engineering and manufacture of biomaterials
JP3865635B2 (ja) * 2000-05-26 2007-01-10 エンゲルハード・リヨン 組織工学及び生体材料製造のためのコラーゲンベースによる支持体
US6790454B1 (en) * 2000-05-26 2004-09-14 Coletica Processes for the preparation of novel collagen-based supports for tissue engineering, and biomaterials obtained
DE20019809U1 (de) * 2000-05-31 2001-07-12 Fraunhofer Ges Forschung Knorpelersatz und Biomatrix zur Kultivierung von Zellen
DK1290145T3 (da) 2000-05-31 2006-03-13 Fraunhofer Ges Forschung Tredimensional hudmodel
AU6904101A (en) * 2000-05-31 2001-12-11 Fraunhofer-Gesellschaft Zur Forderung Der Angewandten Forschung E.V. Infection model
WO2002058588A2 (en) * 2000-12-27 2002-08-01 Ortec International, Inc. Processes for making cryopreserved composite living constructs and products resulting therefrom
US6500464B2 (en) * 2000-12-28 2002-12-31 Ortec International, Inc. Bilayered collagen construct
CA2439899C (en) * 2001-03-02 2015-09-29 Stratatech Corporation Improved skin substitutes and uses thereof
US6974697B2 (en) * 2001-03-02 2005-12-13 Stratech Corporation Skin substitutes with improved barrier function
EP1273913A1 (de) * 2001-07-02 2003-01-08 Cognis France S.A. Verfahren zur Bestimmung der Interaktionen zwischen Keratinocyten und Neuronen
US7468242B2 (en) 2001-11-05 2008-12-23 Medgenics, Inc. Dermal micro organs, methods and apparatuses for producing and using the same
US8501396B2 (en) 2001-11-05 2013-08-06 Medgenics Medical Israel Ltd. Dermal micro-organs, methods and apparatuses for producing and using the same
US8088568B2 (en) * 2001-11-05 2012-01-03 Medgentics, Inc. Dermal micro-organs, methods and apparatuses for producing and using the same
US8394371B2 (en) * 2002-02-11 2013-03-12 Neocutis Sa Compositions for the treatment of skin conditions, disorders or diseases and methods of making and using the same
WO2003072128A2 (en) * 2002-02-22 2003-09-04 Ebi, L.P. Methods and compositions for treating bone or cartilage defects
US7741116B2 (en) 2002-03-06 2010-06-22 University Of Cincinnati Surgical device for skin therapy or testing
KR100874543B1 (ko) * 2002-04-22 2008-12-16 동아제약주식회사 인공피부 배양물 및 그 제조방법
NZ536205A (en) * 2002-04-30 2008-04-30 Stratatech Corp Keratinocytes expressing exogenous angiogenic growth factors
US7229820B2 (en) * 2002-06-13 2007-06-12 Wilson Wolf Manufacturing Corporation Apparatus and method for culturing and preserving tissue constructs
US20030235580A1 (en) * 2002-06-24 2003-12-25 Fen Zhang Amniotic membrane mediated delivery of bioactive molecules
AU2003242967A1 (en) * 2002-07-12 2004-02-02 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Method and device for inducing biological processes by micro-organs
AU2003254298A1 (en) * 2002-08-02 2004-02-23 Stratatech Corporation Species specific dna detection
US7666134B2 (en) * 2002-09-28 2010-02-23 Kci Licensing, Inc. System and method for transplantation of dermal tissue
US20050107876A1 (en) * 2002-09-30 2005-05-19 Kim Ki-Ho Dermal substitute consisting of amnion and biodegradable polymer, the preparation method and the use thereof
US7177705B2 (en) * 2003-02-19 2007-02-13 Stimu-Heal Inc. Surface electrode for electrical stimulation of tissue
JP4097544B2 (ja) * 2003-02-27 2008-06-11 独立行政法人理化学研究所 人工リンパ節
EP2377403A1 (en) 2003-05-01 2011-10-19 Medgenics, Inc. A genetically modified dermal micro-organ expressing factor VIII
EP2481287B1 (en) * 2003-08-01 2016-07-20 Stratatech Corporation Human skin equivalents expressing exogenous polypeptides
US7375077B2 (en) * 2003-09-19 2008-05-20 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois In vivo synthesis of connective tissues
DE102004039537A1 (de) * 2004-08-13 2006-02-23 Phenion Gmbh & Co. Kg Vernetzte Kollagenmatrix zur Herstellung eines Hautäquivalentes
US20060058238A1 (en) * 2004-09-15 2006-03-16 Lee Laurent-Applegate Fetal skin cell protein compositions for the treatment of skin conditions, disorders or diseases and methods of making and using the same
AU2006218610B2 (en) 2005-03-01 2011-01-20 Stratatech Corporation Human skin equivalents expressing exogenous polypeptides
WO2006101834A1 (en) 2005-03-17 2006-09-28 Stratatech Corporation Skin substitutes with improved purity
WO2006107188A1 (en) 2005-04-06 2006-10-12 Fujifilm Manufacturing Europe B.V. A non-porous film for culturing cells
WO2006107207A2 (en) * 2005-04-06 2006-10-12 Fujifilm Manufacturing Europe B.V. A non-porous film for culturing cells
FR2889808B1 (fr) 2005-08-17 2011-07-22 Oreal Utilisation de l'acide 8-hexadecene-1,16-dicarboxylique comme agent de soin destine a favoriser la cohesion de la couche cornee
WO2007029676A1 (ja) * 2005-09-07 2007-03-15 Arblast Co., Ltd. 生体組織シート及びその作製方法
RU2498808C9 (ru) * 2006-03-03 2014-01-20 Огенодженесис, Инк. Способ лечения состояния ротовой полости больного (варианты)
US8454948B2 (en) 2006-09-14 2013-06-04 Medgenics Medical Israel Ltd. Long lasting drug formulations
AU2007294858B2 (en) 2006-09-14 2011-05-12 Medgenics Medical Israel, Ltd Long lasting drug formulations
US8105380B2 (en) * 2006-10-23 2012-01-31 Stemedica Cell Technologies, Inc. Cellular scaffold
US8709081B2 (en) 2006-10-23 2014-04-29 Stemedica Cell Technologies, Inc. Cellular scaffold
US20080260794A1 (en) * 2007-02-12 2008-10-23 Lauritzen Nels J Collagen products and methods for producing collagen products
US9056151B2 (en) * 2007-02-12 2015-06-16 Warsaw Orthopedic, Inc. Methods for collagen processing and products using processed collagen
DE102007026639A1 (de) 2007-06-06 2008-12-11 Stefan-Andreas Ulrich Industrielle Fertigung tierischer Lederhautsubstitute für die Lederproduktion aus etablierten Epithelzelllinien und/oder primären Epithelzellkulturen, wie vorzugsweise Fibroplasten, Melanozyten, Keratiozyten sowie deren Verfahren und Vorrichtungen
DK2215212T3 (da) 2007-11-14 2017-11-27 Stratatech Corp Kold opbevaring af organotypisk dyrkede hudækvivalenter til kliniske anvendelser
US9308068B2 (en) 2007-12-03 2016-04-12 Sofradim Production Implant for parastomal hernia
US9382514B2 (en) 2008-06-20 2016-07-05 Escape Therapeutics, Inc. Compositions comprising mesenchymal stem cell-derived fibroblasts
US9242026B2 (en) 2008-06-27 2016-01-26 Sofradim Production Biosynthetic implant for soft tissue repair
DK2352472T3 (en) 2008-11-04 2017-04-10 Stratatech Corp Dried and irradiated skin equivalents ready to use
DE102009022349B4 (de) * 2009-05-15 2011-02-03 Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. Automatisches Trennen von Gewebeschichten
DE102009022351A1 (de) * 2009-05-15 2010-11-25 Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. Modulares Produktionssystem zur automatischen Herstellung von dreidimensionalen Gewebestrukturen
US20100330046A1 (en) * 2009-05-21 2010-12-30 Stratatech Corporation Human skin substitutes expressing il-12
FR2949688B1 (fr) 2009-09-04 2012-08-24 Sofradim Production Tissu avec picots revetu d'une couche microporeuse bioresorbable
AU2011219882A1 (en) 2010-02-23 2012-07-12 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Methods for preparing human melanocytes from human pluripotent stem cells
GB201003656D0 (en) * 2010-03-05 2010-04-21 Tigenix Ltd Fabrication process
US8460691B2 (en) 2010-04-23 2013-06-11 Warsaw Orthopedic, Inc. Fenestrated wound repair scaffold
US8790699B2 (en) 2010-04-23 2014-07-29 Warsaw Orthpedic, Inc. Foam-formed collagen strand
MX339001B (es) * 2010-05-21 2016-05-09 Rodrigo Foción Soto Pareja Proceso para la produccion de parches o apositos de piel autologa mediante cultivo de queratinocitos y fibroblastos autologos con suero autologo para generacion de piel.
KR101591887B1 (ko) 2010-06-15 2016-02-04 메드제닉스 메디칼 이스라엘 리미티드 장기 지속형 약물 제형
CA2802880C (en) * 2010-06-18 2019-09-24 The Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine, Inc. Hair follicle neogenesis
FR2967163A1 (fr) 2010-11-05 2012-05-11 Centre Nat Rech Scient Procede in vitro ou ex vivo pour la maintenance en survie et la generation ou reconstruction d'un epiderme
JP6031221B2 (ja) * 2011-03-02 2016-11-24 花王株式会社 皮膚感作性物質の評価方法
FR2972626B1 (fr) 2011-03-16 2014-04-11 Sofradim Production Prothese comprenant un tricot tridimensionnel et ajoure
JP5868601B2 (ja) * 2011-03-23 2016-02-24 フタムラ化学株式会社 液体培地用足場部材
JP2012205516A (ja) * 2011-03-29 2012-10-25 Osaka Univ 人工皮膚モデルの製造方法、及び人工皮膚モデル
RU2464987C1 (ru) * 2011-04-07 2012-10-27 Российская Федерация, от имени которой выступает Министерство образования и науки РФ Способ получения резорбируемой полилактидной матрицы для культивирования и имплантации клеток, предназначенных для заживления ран
FR2976001B1 (fr) 2011-05-30 2014-10-31 Oreal Modele de cuir chevelu reconstruit et procede de screening de molecules actives
FR2977789B1 (fr) 2011-07-13 2013-07-19 Sofradim Production Prothese pour hernie ombilicale
FR2977790B1 (fr) 2011-07-13 2013-07-19 Sofradim Production Prothese pour hernie ombilicale
GB201112922D0 (en) 2011-07-27 2011-09-14 Univ Durham Micro-organ
CA2849052C (en) 2011-09-30 2019-11-05 Sofradim Production Reversible stiffening of light weight mesh
FR2985271B1 (fr) 2011-12-29 2014-01-24 Sofradim Production Tricot a picots
FR2985170B1 (fr) 2011-12-29 2014-01-24 Sofradim Production Prothese pour hernie inguinale
FR2994185B1 (fr) 2012-08-02 2015-07-31 Sofradim Production Procede de preparation d’une couche poreuse a base de chitosane
FR2995778B1 (fr) 2012-09-25 2015-06-26 Sofradim Production Prothese de renfort de la paroi abdominale et procede de fabrication
FR2995788B1 (fr) 2012-09-25 2014-09-26 Sofradim Production Patch hemostatique et procede de preparation
FR2995779B1 (fr) 2012-09-25 2015-09-25 Sofradim Production Prothese comprenant un treillis et un moyen de consolidation
US10159555B2 (en) 2012-09-28 2018-12-25 Sofradim Production Packaging for a hernia repair device
JP6580028B2 (ja) 2013-03-13 2019-09-25 ストラタテック コーポレーション 生育可能なヒト皮膚代用物の凍結保存
AU2014259787B2 (en) 2013-05-03 2018-03-08 The Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine, Inc. Skin substitutes and methods for hair follicle neogenesis
FR3006578B1 (fr) 2013-06-07 2015-05-29 Sofradim Production Prothese a base d’un textile pour voie laparoscopique
FR3006581B1 (fr) 2013-06-07 2016-07-22 Sofradim Production Prothese a base d’un textile pour voie laparoscopique
EP3000432B1 (en) 2014-09-29 2022-05-04 Sofradim Production Textile-based prosthesis for treatment of inguinal hernia
EP3000433B1 (en) 2014-09-29 2022-09-21 Sofradim Production Device for introducing a prosthesis for hernia treatment into an incision and flexible textile based prosthesis
US10801009B2 (en) 2014-11-17 2020-10-13 Biocoz Global Korea Corp. Cosmetic composition for improving condition of skin, containing cell culture medium, epidermal growth factor and bovine serum albumin
EP3029189B1 (en) 2014-12-05 2021-08-11 Sofradim Production Prosthetic porous knit, method of making same and hernia prosthesis
EP3059255B1 (en) 2015-02-17 2020-05-13 Sofradim Production Method for preparing a chitosan-based matrix comprising a fiber reinforcement member
EP3085337B1 (en) 2015-04-24 2022-09-14 Sofradim Production Prosthesis for supporting a breast structure
EP3106185B1 (en) 2015-06-19 2018-04-25 Sofradim Production Synthetic prosthesis comprising a knit and a non porous film and method for forming same
EP3195830B1 (en) 2016-01-25 2020-11-18 Sofradim Production Prosthesis for hernia repair
JP6993329B2 (ja) * 2016-06-24 2022-02-04 株式会社 資生堂 三次元培養皮膚シート、その製造に使用するための細胞培養容器及びその製造方法
FR3054449B1 (fr) 2016-07-29 2018-08-31 L'oreal Equivalent de peau a compartiments dermiques juxtaposes distincts
EP3312325B1 (en) 2016-10-21 2021-09-22 Sofradim Production Method for forming a mesh having a barbed suture attached thereto and the mesh thus obtained
EP3398554A1 (en) 2017-05-02 2018-11-07 Sofradim Production Prosthesis for inguinal hernia repair
FR3071512B1 (fr) 2017-09-28 2022-02-25 Oreal Signatures moleculaires de trois sous-populations de fibroblastes dermiques et equivalent de derme comprenant une de ces sous-populations
IT201800010390A1 (it) * 2018-11-16 2020-05-16 Diego Furlan Dispositivo medico monouso per la medicazione di lesioni della pelle di un paziente e relativi procedimenti di preparazione e utilizzazione
EP3653171A1 (en) 2018-11-16 2020-05-20 Sofradim Production Implants suitable for soft tissue repair
FR3108505A1 (fr) * 2020-03-30 2021-10-01 Universite Grenoble Alpes Biomatériau comprenant une matrice poreuse résorbable et procédé de fabrication associé
FR3111904B1 (fr) 2020-06-30 2022-10-21 Oreal Bioencre pour bioimpression d’un modèle de jonction dermo-épidermique invaginée
WO2022056131A2 (en) * 2020-09-11 2022-03-17 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Wearable engineered human skin and systems and methods for making the same

Family Cites Families (65)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4144126A (en) * 1975-05-21 1979-03-13 Beecham Group Limited Cell culture method
US4280954A (en) * 1975-07-15 1981-07-28 Massachusetts Institute Of Technology Crosslinked collagen-mucopolysaccharide composite materials
US4060081A (en) * 1975-07-15 1977-11-29 Massachusetts Institute Of Technology Multilayer membrane useful as synthetic skin
US4016036A (en) * 1975-11-14 1977-04-05 Massachusetts Institute Of Technology Process for serially culturing keratinocytes
US4024020A (en) * 1975-12-15 1977-05-17 Monsanto Company Method of cell culture on polyacrylonitrile surface
DE2557870A1 (de) * 1975-12-22 1977-06-23 Linde Ag Verfahren und vorrichtung zum tiefgefrieren von biologischen substanzen
US4117881A (en) * 1977-06-14 1978-10-03 The United States Of America As Represented By The Administrator Of The National Aeronautics And Space Administration System for and method of freezing biological tissue
US4135975A (en) * 1977-12-14 1979-01-23 Lichtman Marshall A Obtaining human cell lines that elaborate colony stimulating activity for marrow cells of man and other species and methods of preparing same
US4228243A (en) * 1978-07-13 1980-10-14 Toray Industries, Inc. Cell culture propagation apparatus
US4299819A (en) * 1979-01-02 1981-11-10 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Process for treating burn victims
FR2461002A1 (fr) * 1979-07-13 1981-01-30 Inst Nat Sante Rech Med Procede pour stimuler la croissance des cellules d'epiderme humain et produits faisant application dudit procede
US4342828A (en) * 1979-07-20 1982-08-03 Morinaga Milk Industry Co., Ltd. Method for producing substance capable of stimulating differentiation and proliferation of human granulopoietic stem cells
US4412947A (en) * 1979-09-12 1983-11-01 Seton Company Collagen sponge
US4254226A (en) * 1979-09-13 1981-03-03 Sloan Kettering Institute For Cancer Research Process for growing human epidermal cells in tissue culture
US4352887A (en) * 1979-10-29 1982-10-05 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University Method and article for culturing differentiated cells
US4642292A (en) * 1979-10-29 1987-02-10 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University, A Division Of Yeshiva University Method for isolation of connective tissue biomatrix
US4304866A (en) * 1979-11-14 1981-12-08 Massachusetts Institute Of Technology Transplantable sheets of living keratinous tissue
US4522753A (en) * 1980-07-17 1985-06-11 Massachusetts Institute Of Technology Method for preserving porosity in porous materials
US4481946A (en) * 1980-08-14 1984-11-13 Altshuler John H Bone marrow transplant method and apparatus
US4486188A (en) * 1980-08-14 1984-12-04 Applied Medical Devices, Inc. Bone marrow transplant method and apparatus
US4314380A (en) * 1980-09-26 1982-02-09 Koken Co., Ltd. Artificial bone
US4565784A (en) * 1981-01-26 1986-01-21 Trustees Of Boston University Hydrogels capable of supporting cell growth
US4553272A (en) * 1981-02-26 1985-11-19 University Of Pittsburgh Regeneration of living tissues by growth of isolated cells in porous implant and product thereof
US4546500A (en) * 1981-05-08 1985-10-15 Massachusetts Institute Of Technology Fabrication of living blood vessels and glandular tissues
US4489710A (en) * 1981-06-23 1984-12-25 Xoma Corporation Composition and method for transplantation therapy
US4350629A (en) * 1981-07-29 1982-09-21 Massachusetts Institute Of Technology Procedures for preparing composite materials from collagen and glycosaminoglycan
US4621100A (en) * 1981-09-25 1986-11-04 The Upjohn Company Treatment of osteoporosis with prostaglandins
US4418691A (en) * 1981-10-26 1983-12-06 Massachusetts Institute Of Technology Method of promoting the regeneration of tissue at a wound
US4458678A (en) * 1981-10-26 1984-07-10 Massachusetts Institute Of Technology Cell-seeding procedures involving fibrous lattices
US4505266A (en) * 1981-10-26 1985-03-19 Massachusetts Institute Of Technology Method of using a fibrous lattice
FR2517315B1 (fr) * 1981-11-30 1985-12-20 Tech Cuir Centre Procede de preparation de formes nouvelles de collagene, natif ou dereticule, a structure helicoidale preservee, associees a des mucopolysaccharides et leurs applications notamment dans les domaines cosmetologiques, pharmaceutiques, analytiques et autres
US4485096A (en) * 1982-02-26 1984-11-27 Massachusetts Institute Of Technology Tissue-equivalent and method for preparation thereof
US4520821A (en) * 1982-04-30 1985-06-04 The Regents Of The University Of California Growing of long-term biological tissue correction structures in vivo
US4485097A (en) * 1982-05-26 1984-11-27 Massachusetts Institute Of Technology Bone-equivalent and method for preparation thereof
JPS5928472A (ja) * 1982-08-09 1984-02-15 Koken:Kk 細胞培養用基質およびこの基質を用いた細胞培養・分離法
US4645669A (en) * 1982-10-04 1987-02-24 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University Culturing and emplacement of differentiated cells in vivo
US4960423A (en) * 1982-11-17 1990-10-02 Smith Donald W Method of enhancing the attachment of endothelial cells on a matrix and vascular prosthesis with enhanced anti-thrombogenic characteristics
US4769317A (en) * 1983-06-14 1988-09-06 Hefton John M Process for growing human epidermis, product thereof
US5000963A (en) * 1983-06-14 1991-03-19 Hefton John M Method of treating the skin using human epidermal sheets
US4673649A (en) * 1983-07-15 1987-06-16 University Patents, Inc. Process and defined medium for growth of human epidermal keratinocyte cells
US4940666A (en) * 1983-07-15 1990-07-10 University Patents, Inc. Process and defined medium for growth of human epidermal keratinocyte cells
US4448718A (en) * 1983-09-13 1984-05-15 Massachusetts Institute Of Technology Method for the preparation of collagen-glycosaminoglycan composite materials
US4609551A (en) * 1984-03-20 1986-09-02 Arnold Caplan Process of and material for stimulating growth of cartilage and bony tissue at anatomical sites
CA1295796C (en) * 1984-03-27 1992-02-18 Conrad Whyne Biodegradable matrix and methods for producing same
US4925924A (en) * 1984-03-27 1990-05-15 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Biocompatible synthetic and collagen compositions having a dual-type porosity for treatment of wounds and pressure ulcers and therapeutic methods thereof
JPS60261460A (ja) * 1984-06-11 1985-12-24 株式会社　高研 コラ−ゲンとポリ―α―アミノ酸膜から成る人工皮膚
US4604346A (en) * 1984-10-09 1986-08-05 Massachusetts Institute Of Technology Skin-equivalent prepared by the use of punch biopsy
JPS61253065A (ja) * 1985-05-02 1986-11-10 片倉チツカリン株式会社 キトサン誘導体およびコラ−ゲンの複合材の医用材料およびその製造法
US4963489A (en) * 1987-04-14 1990-10-16 Marrow-Tech, Inc. Three-dimensional cell and tissue culture system
JPS62246371A (ja) * 1986-04-19 1987-10-27 株式会社　高研 人工皮膚及びその製造方法
FR2612939B1 (fr) * 1987-03-26 1989-06-23 Cird Equivalent de peau
FR2612938B1 (fr) * 1987-03-26 1989-06-23 Cird Procede d'obtention d'un equivalent de peau et equivalent de peau correspondant
US4835102A (en) * 1987-03-31 1989-05-30 Eugene Bell Tissue equivalent test systems
US5273900A (en) * 1987-04-28 1993-12-28 The Regents Of The University Of California Method and apparatus for preparing composite skin replacement
WO1988008305A1 (en) * 1987-04-28 1988-11-03 The Regents Of The University Of California Method and apparatus for preparing composite skin replacement
US4975377A (en) * 1987-05-14 1990-12-04 Key Marc E Cell growth chambers and method of use thereof
US4888291A (en) * 1987-06-19 1989-12-19 President And Fellows Of Harvard College Human epithelium originating from cell cultures
GB8721018D0 (en) * 1987-09-07 1987-10-14 Alcan Int Ltd Porous inorganic membrane support
US5015584A (en) * 1987-10-14 1991-05-14 Board Of Regents, The University Of Texas System Epidermal graft system
US4837379A (en) * 1988-06-02 1989-06-06 Organogenesis Inc. Fibrin-collagen tissue equivalents and methods for preparation thereof
US4950483A (en) * 1988-06-30 1990-08-21 Collagen Corporation Collagen wound healing matrices and process for their production
JPH0271749A (ja) * 1988-09-07 1990-03-12 Terumo Corp 人工皮膚
US4996154A (en) * 1989-05-04 1991-02-26 Millipore Corporation Method for growing cellular tissue
NL8902237A (nl) * 1989-09-06 1991-04-02 Hc Implants Bv Kunsthuid.
WO1991016010A1 (en) * 1990-04-24 1991-10-31 Mark Eisenberg Composite living skin equivalents

Also Published As

Publication number Publication date
CA2080693A1 (en) 1991-10-25
EP0526550A4 (en) 1993-06-30
DE69128530T2 (de) 1998-08-20
HUT63319A (en) 1993-08-30
ATE161408T1 (de) 1998-01-15
DE69128530D1 (de) 1998-02-05
AU7756991A (en) 1991-11-11
WO1991016010A1 (en) 1991-10-31
BR9106354A (pt) 1993-04-27
EP0526550B1 (en) 1997-12-29
RU2135191C1 (ru) 1999-08-27
JPH05506169A (ja) 1993-09-16
CA2080693C (en) 2001-11-27
FI924773A (fi) 1992-10-21
FI924773A0 (fi) 1992-10-21
US6039760A (en) 2000-03-21
TW225986B (ja) 1994-07-01
DK0526550T3 (da) 1998-08-31
AU632693B2 (en) 1993-01-07
HU9203338D0 (en) 1993-01-28
GR3026463T3 (en) 1998-06-30
EP0526550A1 (en) 1993-02-10
USRE35399E (en) 1996-12-10
US5282859A (en) 1994-02-01
ES2111566T3 (es) 1998-03-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JPH0747043B2 (ja) 合成生体皮膚等価物
US8765468B2 (en) Surgical device for skin therapy or testing
US6110208A (en) Artificial skin containing as support biocompatible materials based on hyaluronic acid derivatives
Valencia et al. Skin grafting
JP2002504412A (ja) 生きたキメラ皮膚置換体
CN1062441C (zh) 复合的活的皮肤等同物及其制备方法
AU632693C (en) Composite living skin equivalents
IL99548A (en) Composite living skin equivalents and process for their preparation
NZ240126A (en) Composite living skin equivalent
IE913512A1 (en) Composite living skin equivalents

Legal Events

Date Code Title Description
R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080524

Year of fee payment: 13

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090524

Year of fee payment: 14

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100524

Year of fee payment: 15

LAPS Cancellation because of no payment of annual fees