RU2135191C1 - Композиционный эквивалент живой кожи, способ его получения, тест-набор - Google Patents
Композиционный эквивалент живой кожи, способ его получения, тест-набор Download PDFInfo
- Publication number
- RU2135191C1 RU2135191C1 RU92016420A RU92016420A RU2135191C1 RU 2135191 C1 RU2135191 C1 RU 2135191C1 RU 92016420 A RU92016420 A RU 92016420A RU 92016420 A RU92016420 A RU 92016420A RU 2135191 C1 RU2135191 C1 RU 2135191C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- collagen
- skin
- layer
- porous
- equivalent
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
- A61L27/3804—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by specific cells or progenitors thereof, e.g. fibroblasts, connective tissue cells, kidney cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
- A61F2/00—Filters implantable into blood vessels; Prostheses, i.e. artificial substitutes or replacements for parts of the body; Appliances for connecting them with the body; Devices providing patency to, or preventing collapsing of, tubular structures of the body, e.g. stents
- A61F2/02—Prostheses implantable into the body
- A61F2/10—Hair or skin implants
- A61F2/105—Skin implants, e.g. artificial skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/14—Macromolecular materials
- A61L27/22—Polypeptides or derivatives thereof, e.g. degradation products
- A61L27/24—Collagen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
- A61L27/3804—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by specific cells or progenitors thereof, e.g. fibroblasts, connective tissue cells, kidney cells
- A61L27/3813—Epithelial cells, e.g. keratinocytes, urothelial cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
- A61L27/3886—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells comprising two or more cell types
- A61L27/3891—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells comprising two or more cell types as distinct cell layers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
- A61L27/56—Porous materials, e.g. foams or sponges
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
- A61L27/60—Materials for use in artificial skin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0697—Artificial constructs associating cells of different lineages, e.g. tissue equivalents
- C12N5/0698—Skin equivalents
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5014—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing toxicity
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
- C12N2502/09—Coculture with; Conditioned medium produced by epidermal cells, skin cells, oral mucosa cells
- C12N2502/094—Coculture with; Conditioned medium produced by epidermal cells, skin cells, oral mucosa cells keratinocytes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
- C12N2502/13—Coculture with; Conditioned medium produced by connective tissue cells; generic mesenchyme cells, e.g. so-called "embryonic fibroblasts"
- C12N2502/1323—Adult fibroblasts
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2503/00—Use of cells in diagnostics
- C12N2503/04—Screening or testing on artificial tissues
- C12N2503/06—Screening or testing on artificial skin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
- C12N2533/50—Proteins
- C12N2533/54—Collagen; Gelatin
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S128/00—Surgery
- Y10S128/08—Collagen
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Botany (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Cardiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
Abstract
Композиционный эквивалент живой кожи включает эпидермальный слой культивированных кератиноцитовых клеток, слой беспористого коллагена и дермальный слой культивированных фибробластовых клеток в сшитой пористой коллагеновой губчатой матрице. Предпочтительно беспористым коллагеном является бычий коллаген типа 1, типа 3 или их смеси, обработанные пепсином. Описаны способ получения эквивалента кожи, а также тест-набор для испытаний in vitro эквивалента кожи. Технический результат: расширение функциональных возможностей за счет того, что указанный эквивалент кожи может использоваться для трансплантации кожи, а также для определения in vitro действия, оказываемого на кожу различными веществами. 3 с. и 5 з. п. ф-лы, 5 ил.
Description
Изобретение относится к композиционным эквивалентам живой кожи, в частности к композиционным эквивалентам живой кожи, включающим эпидермальный слой культивированных кератиноцитных клеток, слой беспористого коллагена высокой чистоты и дермальный слой культивированных фибробластовых клеток в пористой сшитой коллагеновой губке. Предметом изобретения является также способ получения такого композиционного эквивалента живой кожи.
Эквиваленты кожи широко используются не только в качестве заменителей человеческой кожи и кожи животных при трансплантации кожи, но и для определения влияния на кожу фармацевтических препаратов и косметических средств.
Главная проблема в испытании фармакологических, химических и косметических средств заключается в трудности определения эффективности их действия на кожу и их безопасности. Одним из преимуществ эквивалентов кожи в соответствии с настоящим изобретением является возможность их использования в качестве индикатора эффектов, вызываемых при воздействии этих веществ на испытуемую кожу в опытах in vitro.
И трансплантация кожи на обнаженных поверхностях, грануляционных ранах и при ожогах, несмотря на прогресс в этой области, и сейчас остается основной проблемой при лечении такого рода поражений. Аутотрансплантаты с расщеплением по толщине и эпидермальные аутотрансплантаты (культивированные аутогенные кератиноциты) использовались для этой цели с переменным успехом. Однако оба эти способа лечения имеют ряд недостатков. Так, например, аутотрансплантаты с расщеплением по толщине, как правило, нельзя использовать в случае ожоговых ранений с большой поверхностью (В А). Кроме того, они наносят вред пациенту, находят лишь ограниченно использование при лечении пациентов с Dystrophit Epidermolysis bullosa (DEB), обладают ограниченным расширением ткани, требуют повторных хирургических вмешательств и длительной госпитализации и вызывают нежелательные косметические эффекты.
Получение эпидермальных аутотрансплантатов требует длительного времени, они имеют низкую эффективность приживления порядка 30-50%, при их использовании часто образуются спонтанные пузыри, они хрупки, при работе с ними возникают трудности, сужаются до 60-70% от первоначального размера, уязвимы в течение примерно первых 15 дней после трансплантации и фактически неприменимы при лечении глубоких ран при одновременном поражении и дермиса, и эпидермиса.
Другим способом лечения является использование эпидермальных аллотрансплантатов (культивированных аллогенных кератиноцитов). Американские ученые добились определенных успехов при лечении пациентов с ожогами второй степени путем трансплантации на раны эпидермальных аллотрансплантатов. К преимуществам таких аллотрансплантатов относятся: возможность создания запасов таких трансплантатов, благодаря чему пациентам за один раз может быть пересажен материал в количестве, обеспечивающим перманентное лечение; исключение необходимости аутотрансплантации, применение которой увеличивает поверхность ран и приводит к появлению болезненных и легко подверженных инфекциям донорских мест; ожоговые раны, при лечении которых используются культивированные аллотрансплантаты, заживают так же быстро, как и ожоговые раны с пересаженными аутотрансплантами, и возможность лечения пациентов с ЕВ.
Тем не менее эпидермальным аллотрансплантатам присущи многие из недостатков эпидермальных аутотрансплантатов.
При ожоговых ранах на всю толщину кожи происходит разрушение и эпидермиса, и дермиса, и лечение с помощью культивированной кожи требует замены обоих этих компонентов. T.F. Наnsborough и S.Т. Boyce сообщили в TAMA 1989, 2125-2130, о нанесении аутоэпидермальных клеток на эквивалент кожи, который затем трансплантировали на рану. Главная трудность этого метода состоит в получении эквивалента кожи.
Кроме того, этот метод предполагает использование хондроитин-6-сульфата (GAG), который образует непрочную связь с коллагеном при нейтральных pH и поэтому может выделяться в свободном виде в среду раны, являясь причиной непредвиденно длительного заживания ран у человека. Согласно литературным данным, GAG увеличивает вероятность образования рубцов в ранах, что недопустимо при использовании трансплантатов. Другой эффект, вызываемый содержащими GAG коллагеновыми губками и заключающийся в снижении способности образования коллагеновых сгустков крови, можно считать нежелательным при лечении кровоточащих ран. Фибриновые сгустки способствуют адгезии трансплантата к ране.
И в случае этого метода стабилизация коллагеновой губки осуществляется путем сшивания ее 0,25% глутаровым альдегидом (GTA). Сшитый таким образом коллаген рессорбируется с меньшей скоростью и является стойким к бактериальным и грибковым инфекциям. Кроме того, уменьшается прорастание внутрь клеток, инфильтрация сшитой GTA коллагеновой матрицы. Коллаген, сшитый GTA, может удерживать его в виде высокомелккулярного полимера, который непрерывно гидролизуется с выделением мономерного, который может обнаруживаться в течение до 6 недель. Цитотоксическое действие GTA на фибробласты в тканевой культуре говорит о том, что он не является идеальным сшивающим агентом для эквивалентов кожи, поскольку в такие эквиваленты происходит инфильтрация клеток хозяина, а их бычья коллагеновая матрица быстро разрушается, и в результате выделяющийся в свободном виде попадает в жидкости организма.
Недавно Bell'om и др. (Tournae Investigative Dermatology, 1983, 81:2-10) была успешно осуществлена трансплантация крысам Sprague Dawleg, использующихся в качестве аллотрансплантатов трансплантатов эквивалента живой кожи, включающих дермальный слой фибробластовых клеток крысы в растворимом коллагене и эпидермальный слой культивированных кератиноцитов крысы. Гистологические исследования трансплантата показали, что произошла полная дефференциация эпидермального слоя с образованием десмосом, тонофиламентов, кератогиалина и пластины-основы. Однако попытки воспроизвести такой эквивалент живой кожи с использованием человеческих фибробастов и кератиноцитов имели лишь ограниченный успех. В этом случае не происходило полной дифференциации кератиноцитов с образованием пластины-основы, а дермоэпидермальная функция представляла собой прямую линию.
Проблемы, связанные с эпидермализацией поверхности вышеуказанного эквивалента кожи, привели к тому, что Bell модифицировал свой метод, использовав в качестве источника кератиноцитов биопсии кожи, как это описано в международной заявке PCT WO 86/02273. Недостаток этого модифицированного метода состоит в том, что полученный описанным образом эквивалент кожи неоднороден по поверхности, поскольку биопсия, включая дермальную часть, остается включенной в эквивалент. Кроме того, величина поверхности полученного таким образом заменителя кожи ограничивается количеством биопсий, которые могут быть взяты у одного человека. Взятие биопсии предполагает медицинскую процедуру, связанную с потенциальной опасностью инфекции и образования рубцов. Иссечение биопсий эквивалента кожи как способ увеличения производства дополнительных эквивалентов кожи требует больших затрат времени, и поэтому такие эквиваленты кожи не нашли применения в клинической практике. В 1988 г. в статье в журнале "Burns" Calounb и др. сообщили о полном отказе использования метода Bell'a.
Bernard и др., авторы австралийской заявки AU-A-13743/88, попытались избежать вышеуказанных недостатков путем использования культивирующей способности кератиноцитов, содержащихся в оболочке фолликул волос. Вместо биопсии кожи они использовали фолликулу волоса, заключенную в собственную оболочку, которую имплантировали в перпендикулярном направлении в свободную поверхность формируемого заменителя кожи. Основными недостатками указанного изобретения являются природа дермиса и тот факт, что период эпидермального роста может продолжаться несколько месяцев.
Наиболее близкий композиционный эквивалент живой кожи описан в публикации Boyсe et al, Surgery, vol. 10 N 4, 1988. В статье описано образование in vitro биологических соединений между кератиноцитами и коллагеновым и хондроитин-6-сульфатным дермальным заменителем кожи. Дермальные мембраны получают в виде родовых бесклеточных слоев и хранят в сухом состоянии в течение продолжительных периодов. Композитный материал имеет дискретные дермальные и эпидермальные отделения, имеет общую толщину, сравнимую с толщиной в разрезе полнослойного кожного лоскута, его можно использовать для лечения глубоких кожных повреждений.
Таким образом, существует необходимость в разработке трансплантатов эквивалентов живой кожи, включающих эпидермальный и дермальный слои, которые можно было бы легко получать и сохранять в количествах, достаточных для единоразового лечения кожных ран.
При создании эквивалента живой кожи желательно, чтобы он отвечал, по меньшей мере, некоторым или всем следующим требованиям: он должен быстро и в течение длительного времени сцепляться с поверхностью раны; должен быть совместимым с тканью; должен иметь внутреннюю, контактирующую с раной поверхность, способствующую прорастанию внутрь фиброваскулярной ткани, и/или должен обеспечивать защиту от инфекций и предупреждать потерю жидкости.
Задачей настоящего изобретения поэтому является создание культивированных эквивалентов живой кожи, которые отвечали бы, по меньшей мере, некоторым из перечисленных требований и которые не обладали бы или обладали в меньшей степени одним или несколькими из вышеперечисленных недостатков.
Одним из аспектов настоящего изобретения являются композиционные эквиваленты живой кожи, включающие эпидермальный слой культивированных кератиноцитных слеток, слой беспористого коллагена высокой чистоты и дермальный слой культивированных фибробластовых клеток в пористой сшитой коллагеновой губке.
Другим аспектом настоящего изобретения является способ получения композиционных эквивалентов живой кожи, включающий получение образца кожи; ферментативную обработку его для отделения эпидермиса от дермиса; ферментативную обработку эпидермиса для выделения в свободном виде кератиноцитных клеток; культивирование эпидермальных кератиноцитов до слияния; проводимую параллельно или отдельно фермантивную обработку дермиса для выделения в свободном виде фибробластовых клеток; культивирование фибробластовых клеток до субслияния; инокуляцию пористой сшитой коллагеновой губчатой мембраны культивированным фибробластовыми клетками; инкубацию инокулированной коллагеновой губки на ее поверхности для обеспечения роста фибробластовых клеток по всему объему коллагеновой губки; переворачивание коллагеновой губки и нанесение на другую ее сторону тонкого слоя беспористого, предпочтительно обработанного пепсином, колагена высокой чистоты с образованием слоистого губчатого комплекса; инкубацию полученного комплекса для обеспечения полимеризации беспористого коллагена; инокуляцию комплекса культивироваными кератиноцитными клетками и инкубацию композиционного комплекса - эквивалента коки для обеспечения роста клеток.
Первичную культуру фибробластов предпочтительно готовят следующим образом: получают дермальный образец, суспендируют его в растворе коллагеназы для выделения фибробластовых клеток, инкубируют полученную культуру, центрифугируют ее для отделения осадка клеток фибробласта, удаляют культуральную среду, промывают осадок клеток для удаления внешней культуральной среды, определяют количество клеток и их жизнеспособность, инокулируют колбы с культурой полученными клетками и проводят культивирование до субслияния.
Предпочтительным беспористым коллагеном высокой чистоты является коллаген типа 1, типа 3 или их смеси. Подходящим, например, является коллаген из бычьей шкуры, поставляемый Sigma.
Такой коллаген идеально очищается от антигенных веществ путем обработки его пепсином.
В качестве коллагеновой трубки можно использовать любую подходящую губку, например поставляемую фирмой Mitaplast.
Кератиноциты, предназначенные для осуществления настоящего изобретения, предпочтительно получать "Капельным" методом. По этому методу кератиноциты выделяют в свободном виде из эпидермиса для получения суспензии однородных клеток. Отдельные капли этой суспензии наносят равномерно пятнами на культуральную среду и проводят инкубацию, таким образом, чтобы происходило разрастание и в конечном счете отрастание клеток.
Ниже изобретение описывается с помощью неограничивающих его примеров и содержащихся в приложении рисунков, на которых изображены:
фиг. 1 - схематическое представление способа получения композиционных эквивалентов живой кожи в соответствии с настоящим изобретением;
фиг. 2:
a) гистологический вид эквивалента живой кожи, представленный в ежегодном отчете за 1987 г. Organogenesis Company, 150 Dan Road, Canton, Massachussetg 02021 USA, и для сравнения,
в) гистологический вид живой кожи, как показано в вышеуказанном отчете;
фиг. 3 - гистология биопсии кожи из трансплантата с использованием эквивалента кожи в соответствии с настоящим изобретением;
фиг. 4 - композиционный эквивалент кожи в соответствии с настоящим изобретением;
фиг. 5 - биопсия эквивалента кожи в трансплантате кожи, взятом у человека.
фиг. 1 - схематическое представление способа получения композиционных эквивалентов живой кожи в соответствии с настоящим изобретением;
фиг. 2:
a) гистологический вид эквивалента живой кожи, представленный в ежегодном отчете за 1987 г. Organogenesis Company, 150 Dan Road, Canton, Massachussetg 02021 USA, и для сравнения,
в) гистологический вид живой кожи, как показано в вышеуказанном отчете;
фиг. 3 - гистология биопсии кожи из трансплантата с использованием эквивалента кожи в соответствии с настоящим изобретением;
фиг. 4 - композиционный эквивалент кожи в соответствии с настоящим изобретением;
фиг. 5 - биопсия эквивалента кожи в трансплантате кожи, взятом у человека.
На фиг. 1 схематически изображен процесс получения композиционного эквивалента живой кожи.
В соответствии с изображенным на этом рисунке процессом образец кожи разделяют на дермис, предназначенный для использования в качестве источника фибробластов (10), и эпидермис, предназначенный для использования в качестве источника кератиноцитов (11). Культивированными фибробластами (10) инокулируют коллагеновую губку (12) и после образования на губке колоний фибробластов другую ее сторону инокулируют обработанным пепсином беспористым коллагеном. После повторной инкубации беспористый коллаген инокулируют кератиноцитной культурой, предпочтительно "Капельным" методом, и проводят культивирование, получая в результате эквивалент кожи (13).
Для осуществления настоящего изобретения можно использовать любые образцы кожи, на которых возможно выращивание известными способами культур клеток. Такие образцы кожи могут быть как аутогенными, так и аллогенными.
Образцы кожи обрабатывают трипсином для отделения эпидермиса от дермиса (1985) стр. 193). Отделенный эпидермис измельчают и обрабатывают трипсином для выделения кератиноцитных клеток. Полученные кератиноцитные клетки культивируют обычными методами до слияния. По предпочтительному варианту кератиноцитные клетки культивируют в виде моноклеточной суспензии до слияния.
Первичные культуры фибробластовых клеток для осуществления настоящего изобретения могут быть получены стандартными методами, например методом, описанным в статье "Aspecifiс collaqenase from Rabbit fibroblasts in monolayer cultyre" (Tornal of Biochemistry (1974) 137, 373-385). По предпочтительному варианту первичные культуры фибробластовых клеток получают следующим образом.
Дермальный образец нарезают кубиками со стороной 1 мм и суспендируют в растворе коллагеназы, буферированном буфером трис-HCl с pH 7,4. Образцы кожи могут быть как аллогенными, так и аутогенными. Подходящий коллагеназой является коллагеназа Clostridium histolyticum. Предпочтительно, чтобы концентрация суспензии образца кожи в растворе составляла 1 мкг/л. Приготовленную суспензию инкубируют и затем центрифугируют при 1500 об/мин для выделения клеток из раствора. Предпочтительно инкубацию суспензии проводят в течение 30 минут. Осадок клеток промывают DMEM и определяют количество фибробластовых клеток с помощью гемоцитометра. Жизнеспособность фибробластовых клеток определяют методом исключения красителя с использованием трипана голубого. Полученные фибробластовые клетки могут непосредственно вводиться в коллагеновые губки или ими засевают колбы с культурой и выращивают стандартными методами до субслияния. Поразительно, но этот метод приготовления первичных культур фибробластов занимает меньше времени (до 2 недель), чем другие известные методы, требующие до трех недель.
Совершенно удивительно, но вышеописанный метод позволяет культивировать и другие дермальные эпителиальные клетки, обладающие способностью развиваться в потовых железах, или другие типы клеток кожи.
Сшитые бычьи коллагеновые губчатые мембраны выпускаются промышленностью и хранятся в замороженном состоянии. Перед использованием губки промывают стерильной водой и обезвоживают при 37oC для уплотнения мембран.
Приготовленную таким образом коллагеновую губку инокулируют культивированными фибробластовыми клетками. По одному из вариантов осуществления губку инокулируют субконфлуентной клеточной культурой. Предпочтительно, чтобы концентрация фибробластового инокулята составляла примерно 4•105 клеток/мл.
Инокулированную губку культивируют стандартными методами для обеспечения роста фибробластовых клеток в объеме коллагеновой матрицы. По одному из вариантов инкубацию проводят при 37oC в атмосфере с концентрацией CO2 5% со 100%-ной влажностью в течение 10 дней в DMEM и кондиционированной среде.
DMEM и кондиционированную среду предпочтительно меняют через день. В качестве кондиционированной среды используют модифицированную по методу Дульбекко среду Игла (DMEM), использовавшуюся при культивировании человеческих кератиноцитов в течение 2 дней. Она содержит различные микромолекулы, выделяемые кератиноцитами, которые, как известно, стимулируют рост фибробластов. До использования такую кондиционированную среду можно хранить замороженной. Ее используют в комбинации со свежей DMEM в соотношении 1:2.
После этого губку переворачивают и на верхнюю сторону наносят слой обработанного пепсином беспористого коллагена. По одному из вариантов осуществления настоящего изобретения в качестве такого слоя используют обработанный пепсином (очищенный) беспористый стерильный бычий коллаген типа 1 или смесь бычьих коллагенов типов 1 и 3. Такой бычий коллаген выпускается промышленно в достаточно чистом виде. Для удаления телиопептидов его обрабатывают пепсином методом M. P. Drake, P.F. Davision и S. Bump (Biochemistry, 1966, 5: 301-312). pH раствора коллагена устанавливают нейтральным и стерилизуют с помощью гамма-излучения. Подходящей является концентрация коллагена в растворе 2 мг/мл. Коллаген наносят на губку в виде тонкой пленки и затем проводят инкубацию при 37oC в течение 60 минут до полной полимеризации коллагена.
Культивированные кератиноциты высевают затем на нанесенный слой. Предпочтительно осуществлять инокуляцию клеток путем нанесения капель среды с концентрацией 1•105 клеток в капле. Губку затем инкубируют в DMEM с добавкой 2% плодной бычьей сыворотки, человеческого эпидермального фактора роста 10 мг/мл, 0,4 мг/мл гидрокортизона и 10-9 М холерного токсина при pH 7,2 и 35oC в течение 10 дней.
В течение всего времени инкубации эквивалент кожи остается погруженным в вышеуказанную культуральную среду.
Перед клиническим применением или испытаниях in vitro полученного композиционного эквивалента живой кожи и культуральной среде добавляют среду без экстракта бычьего гипофиза.
Совершенно неожиданно оказалось, что при клиническом применении композиционный эквивалент кожи в соответствии с настоящим изобретением обеспечивает быструю нормализацию поверхности раздела между эпидермисом и дермисом пересаженных трансплантатов.
Гистологические исследования эквивалента кожи в соответствии с настоящим изобретением после 2 недель культивирования in vitro показали наличие многослойного эпидермиса, растущего на гомогенной мембране. Гистологические исследования бипосим эквивалента кожи в соответствии с настоящим изобретением, взятой через 2 недели после трансплантации, подтвердили образование stratum corneum с полностью кератинизированным эпидермисом, заселенным клетками невоспаленной соединительной ткани.
Существенным здесь является образование волнообразного и морфологически зрелого соединения между эпидермисом и дермисом видимого в электронном и оптическом микроскопах. При этом наблюдалось разобщение выступов и дермальных бугорков, что является характерным для нормальной кожи и имеет существенное значение для нормализации поверхности раздела между эпидермисом и дермисом.
Если культивировать эквивалент кожи вначале погруженным в течение 4 дней в модифицированную по способу Дульбекко культуральную среду Игла с концентрацией Ca++ 0,05•10-3 М, а затем в течение 10 дней с эпидермисом, находящимся в этой же среде (межфазная граница воздух-жидкость), содержащей более высокую концентрацию Ca++ 0,05•10-3 M становится возможным выявить многослойный характерный эпидермис, состоящий из основного слоя клеток на хорошо развитом основном тонком слое и нескольких слоев надосновных клеток, свидетельствующих о начале кератинизации.
Описанная система in vitro близко напоминает по структуре и биосинтетической способности функционировать кожу человека и может использоваться для испытаний безопасности для кожи пестицидов и раздражающего действия на нее косметических композиций. Испытуемые вещества, будучи нанесены на поверхность этой системы, могут вызывать раздражение клеток и являются причиной выделения медиаторов воспалительной реакции, концентрация которых может быть измерена в культуральной жидкости. Эта система может оказаться подходящей для испытаний на цитотоксичность in vitro: определения общего содержания белка в клетках и поглощения нейтрального красного. Определенная концентрация белка в клетках дает возможность количественной оценки присутствия живых и мертвых клеток.
Культивирование эквивалента кожи может осуществляться в стеклянных колбах или чашках, в которые вводятся различные химикаты, испытуемые на их воздействие на культивированную кожу. Осуществляя непрерывную подачу соответствующей культуральной среды, можно обеспечить условия для непрерывного роста кожи в течение всего периода испытаний.
Коллагеновая губка играет роль временной матрицы, которая обеспечивает быстрое и длительное связывание композиционного эквивалента живой кожи с поверхностью раны человека или животного и их тесное контактирование, создавая благоприятные условия для фиброваскулярного прорастания со стороны поверхности раны и образования неодермальных структур. Коллагеновая матрица стареет и постепенно разрушается, заменяясь эндогенным каллогеном, образующимся в результате физического взаимодействия ее с фибробластами и частично биосинтеза. Однако, поскольку коллагеновые губки представляют собой сшитый коллаген, то они не сокращаются в размерах и поэтому могут храниться в течение некоторого времени. Они не сокращаются также при трансплантации их на раны.
Обработанный пепсином беспористый коллаген, будучи размещенным на верхней стороне коллагеновой губки, предохраняет последнюю от инвазии культивированными кератиноцитными клетками и тем самым обеспечивает внедрение эквивалента кожи в эпидермальный и дермальный слои. Этот ламинированный слой также постепенно разрушается, создавая тем самым возможность формирования нормальной поверхности раздела между дермисом и эпидермисом.
Композиционные эквиваленты живой кожи в соответствии с настоящим изобретением имеют толщину примерно 0,8 мм. Поэтому они прочнее эпидермальных трансплантатов, и с ними легче работать при их трансплантации. Степень эффективности эквивалентов кожи в соответствии с настоящим изобретением составляет примерно 90%, что можно приписать наличию в них дермального слоя, который способствует процессу васкуляризации трансплантата. И, наконец, композиционные эквиваленты живой кожи в соответствии с настоящим изобретением позволяют осуществлять пересадку трансплантата в один прием. Для облегчения транспортировки и нанесения композиционных эквивалентов живой кожи поверх культивированного трансплантата может быть размещена вазелиновая сетка.
Фибробласты и кератиноциты, используемые при осуществлении настоящего изобретения, могут быть аутогенными или аллогенными. Использование аллогенных клеток дает возможность получать и хранить эквиваленты живой кожи в соответствии с настоящим изобретением, благодаря чему исключаются задержки, связанные с доставлением трансплантатов для лечения ран. Оба типа клеток, кератиноциты и фибробласты, могут месяцами храниться в замороженном состоянии в виде моноклеточных суспензий с использованием известных способов. После оттаивания эти клетки сохраняют свою жизнеспособность и быстро растут в культуральной среде, и поэтому вполне могут использоваться для получения эквивалента кожи. Предлагаемый в соответствии с настоящим изобретением эквивалент кожи был успешно транспортирован добровольному пациенту. Поскольку при охлаждении подавляется иммуногенность трансплантатов кожи (Baldwin W.M. и др. Transplantation 1973; 15: 419-422), хранение при низких температурах аллогенных клеток способствует ослаблению некоторых нежелательных антигенов. Создание композиционных эквивалентов живой кожи для лечения поверхностных ран позволяет получать фактически неограниченные количества кожи для трансплантации в качестве материала для длительного покрытия ран.
Ниже изобретение описывается на приведенных примерах, в которых использовались аллогенные клетки кожи человека.
Пример 1.
Композиционные трансплантаты получали из отдельных культур аллогенных человеческих кератиноцитов (ЧК) и человеческих фибробластов (ЧФ), а также пористой бычьей коллагеновой мембраны. Для получения плоской поверхности для культивированных ЧК дермальную мембрану модифицировали, используя бычий коллаген типа 1.
Человеческую кожу получали из хирургических образцов, а именно путем натального иссечения крайней плоти. После иссечения кожу помещали в стерильный контейнер с модифицированной по методу Дульбекко средой Игла (DMEM). Образцы отправляли на короткое время в лабораторию тканевых культур, в которой эпидермис отделяли от дермиса ферментивным способом по методу M. Eisinger (Method in Skin Research, Editor D. Skerrow 1985, стр. 193).
Кератиноциты культивировали в виде моноклеточной суспензии по методу Eisinger, модифицированного следующим образом. ЧК культивировали в DMEM с добавкой 2% плодной бычьей сыворотки, эпидермального фактора роста, инсулина и гидрокортизона при pH 7,2. Слившиеся культуры были готовы для сбора через 12-14 дней и могли использоваться как субкультуры или для инокуляции на коллагеновой мембране.
Фибробласты выделяли из дермальных фрагментов путем ферментации последних Clostridium hislolyticum коллагеназой. Культивировали затем в DМЕМ стандартными методами.
Коллагеновые губчатые мембраны (диаметром 6 см), хранившиеся замороженными в чашках Петри, промывали стерильной водой и обезвоживали в целях уплотнения в инкубаторе при 37oC. После этого губки инкубировали в течение ночи в DMEM с добавкой кондиционированной среды. Субслившиеся культуры ЧФ высевали при концентрации 4•105 клеток/мл на ЧФ поверхность губки. Губку затем помещали в DMEM и выдерживали в инкубаторе в течение 10 дней при 37oC, концентрации диоксида углерода 5% и 100%-ной влажности.
Через день среду сменяли. В конце этого периода губки переворачивали и готовили беспористую поверхность для создания плоской поверхности для культивированных ЧК.
Ламинирование осуществляли путем нанесения тонкой пленки обработанного пепсином беспористого стерильного бычьего коллаген типа 1. Пленки получали из выпускаемого очищенного коллагена типа 1, обработанного пепсином для удаления телиопептидов и стерилизованного путем обработки гамма-излучением. pH раствора коллагена доводили до нейтрального значения и наносили в виде тонкой пленки на поверхность коллагеновой губки, после чего проводили инкубацию в течение 60 минут при 37oC.
Культивированные ЧК наносили затем каплями при концентрации 1•105 клеток в капле на беспористую поверхность губки и выдерживали в течение 10 дней в DMEM с вышеуказанными добавками. Перед клиническим использованием к культуре в чашках добавляли культуральную среду без экстракта бычьего гипофиза. Для облегчения транспортирования и закрепления трансплантата на ране поверх культивированного трансплантата наносили вазелиновую сетку.
В 8 операциях на 5 детях с использованием эквивалентов живой кожи в соответствии с настоящим изобретением степень эффективности составляла 90%.
Клинические и гистологические исследования этих трансплантатов, пересаженных в ходе восьми операций детям с RDEB, позволяли сделать вывод об отсутствии отторжения.
Тем не менее, в целях получения прямого доказательства длительного выживания культивированных аллотрансплантатов или их содействия перманентному эпителию были проведены клинические испытания на здоровых взрослых добровольцах, описанные в нижеследующем примере.
Пример 2.
Композиционные трансплантаты и аллотрансплантаты получали таким же образом, как это описано в примере 1. На плоскую поверхность субстрата из сшитого бычьего коллагена для культивированных кератиноцитов наносили человеческие кератиноциты. Приготовленный таким образом "сэндвич культивированной кожи" трансплантировали затем в раненое ложе пациентов. При этом коллагеновая матрица играла роль каркаса, обеспечивающего фиброваскулярное прорастание внутрь из глубины раны, благодаря чему создаются условия для выживания человеческих кератиноцитов и формирования неодермальной структуры.
Клинические исследования проводились на четырех добровольцах, которым удаляли декоративную татуировку. У каждого добровольца иссекали на руке четыре куска кожи. В двух местах кожу иссекали до жирового слоя, а в двух других местах иссечения оставляли дермальные элементы. В месте с иссечением на всю и неполную глубину трансплантировали культивированную кожу и аутотрансплантат кожи с расщеплением по толщине (для сравнения).
Раз в неделю, до полного заживления ран, делали перевязки. Раны фотографировали, брали биопсии для гистологических исследований и получения фингерпринта ДНК.
У добровольца 1 в двух местах была трансплантирована культивированная кожа, а в двух других - аутотрансплантаты. Через 2 недели трансплантаты фотографировали. При этом не было обнаружено их сокращения. В биопсиях центрального участка трансплантата наблюдался хорошо дифференцированный многослойный эпидермис, а в дермисе содержались многочисленные фибробласты и невоспаленные клетки, находящиеся в коллагеновой матрице с рыхлой упаковкой. На фиг. 3 и 5 показана гистология биопсии кожи из культивированного трансплантата через 2 недели после операции. На фиг. 4 показан эквивалент кожи перед трансплантацией. Из фингерпринта ДНК следует, что в данном случае имела место смешанная популяция клеток донора и реципиента. Это свидетельствует о том, что часть дермальных клеток происходит от пациентов, поскольку имело место явная дермальная клеточная насыщенность.
Доброволец 2. Трансплантат не принялся ни в одном из мест, через три недели были все гистологические признаки грануляционной раны.
Доброволец 3. Через 4 недели все трансплантаты зажили. При этом не происходило их сокращения. Данные гистологических исследований свидетельствуют о наличии полностью дифференцированного эпидермиса и насыщенного клетками дермиса. Из фингерпринта ДНК следует, что имела место смешанная популяция клеток донора и реципиента.
Доброволец 4. Через 8 недель трансплантат несколько сократился в размерах (примерно на 15-20%). Центральный участок трансплантата этого пациента имел полностью дифференцированный эпидермис и зрелый дермис без придатков.
Для специалиста в данной области ясно, что в рамках настоящего изобретения, помимо описанных, возможны самые различные модификации и варианты его осуществления.
Claims (8)
1. Композиционный эквивалент живой кожи, включающий дермальный пористый слой коллагена, слой беспористого коллагена и эпидермальный слой культивированных кератиноцитов на слое беспористого коллагена, отличающийся тем, что дермальный слой содержит пористую сшитую коллагеновую губку, содержащую культивированные фибробластные клетки, беспористый коллаген выбран из коллагена типа 1, коллагена типа 3 или их смесей.
2. Композиционный эквивалент живой кожи по п.1, отличающийся тем, что беспористый коллаген предварительно очищен путем обработки пепсином.
3. Композиционный эквивалент живой кожи по п.1, отличающийся тем, что фибробластные клетки получены путем обработки кожи коллагеназой.
4. Композиционный эквивалент живой кожи по п.1, отличающийся тем, что слой кератиноцитов получен путем приготовления моноклеточной суспензии каратиноцитов и равномерного и прерывистого распределения капель полученной суспензии на поверхности слоя беспористого коллагена, который затем подвергают инкубации.
5. Тест-набор для определения действия, оказываемого различными веществами на кожу, содержащий композиционный эквивалент живой кожи и культуральную среду, на которую может быть нанесено испытуемое вещество, отличающийся тем, что в качестве композиционного эквивалента используют вещество по п.1.
6. Способ получения композиционного эквивалента живой кожи путем ферментативного отделения эпидермиса от дермального слоя образца кожи, ферментативной обработки эпидермиса для выделения и культивирования кератиноцитов, инокуляции слоя беспористого коллагена культивированными кератиноцитами, формирования беспористого коллагена на пористую поверхность дермальной мембраны, отличающийся тем, что в качестве дермальной мембраны используют коллагеновую губку, инокулируют пористую сшитую коллагеновую губчатую мембрану с одной стороны культивированными фибробластовыми клетками, инкубируют для обеспечения роста фибробластовых клеток по всей коллагеновой губке, формируют на другой стороне коллагеновой губки обработанный пепсином слой беспористого коллагена высокой чистоты, выбранного из коллагена типа 1, коллагена типа 3 или их смеси и после инокуляции слоя беспористого коллагена культивированными кератиноцитами инкубируют сформированный композиционный эквивалент кожи для обеспечения дальнейшего роста клеток.
7. Способ по п.6, отличающийся тем, что фибробластовые клетки выделяют путем обработки образца дермиса коллагеназой.
8. Способ по п.6, отличающийся тем, что инокуляцию осуществляют путем равномерного и прерывистого распределения капель моноклеточной суспензии кератиноцитов на поверхности слоя беспористого коллагена.
Приоритет по пунктам:
24.04.98 - по пп.1 - 4 и 6 - 8;
22.01.91 - по п.5.
24.04.98 - по пп.1 - 4 и 6 - 8;
22.01.91 - по п.5.
Applications Claiming Priority (6)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
AU9816 | 1983-06-15 | ||
AU9819 | 1990-04-24 | ||
AUPJ981990 | 1990-04-24 | ||
AUPK430291 | 1991-01-22 | ||
PCT/AU1991/000160 WO1991016010A1 (en) | 1990-04-24 | 1991-04-24 | Composite living skin equivalents |
AU4302 | 1992-08-26 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU92016420A RU92016420A (ru) | 1995-09-10 |
RU2135191C1 true RU2135191C1 (ru) | 1999-08-27 |
Family
ID=25643857
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU92016420A RU2135191C1 (ru) | 1990-04-24 | 1991-04-24 | Композиционный эквивалент живой кожи, способ его получения, тест-набор |
Country Status (15)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US5282859A (ru) |
EP (1) | EP0526550B1 (ru) |
JP (1) | JPH0747043B2 (ru) |
AT (1) | ATE161408T1 (ru) |
BR (1) | BR9106354A (ru) |
CA (1) | CA2080693C (ru) |
DE (1) | DE69128530T2 (ru) |
DK (1) | DK0526550T3 (ru) |
ES (1) | ES2111566T3 (ru) |
FI (1) | FI924773A0 (ru) |
GR (1) | GR3026463T3 (ru) |
HU (1) | HUT63319A (ru) |
RU (1) | RU2135191C1 (ru) |
TW (1) | TW225986B (ru) |
WO (1) | WO1991016010A1 (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2464987C1 (ru) * | 2011-04-07 | 2012-10-27 | Российская Федерация, от имени которой выступает Министерство образования и науки РФ | Способ получения резорбируемой полилактидной матрицы для культивирования и имплантации клеток, предназначенных для заживления ран |
RU2498808C2 (ru) * | 2006-03-03 | 2013-11-20 | Огенодженесис, Инк. | Способ лечения состояния ротовой полости больного (варианты) |
Families Citing this family (135)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5976878A (en) * | 1987-04-28 | 1999-11-02 | The Regents Of The University Of California | Method and apparatus for preparing composite skin replacement |
US5282859A (en) * | 1990-04-24 | 1994-02-01 | Mark Eisenberg | Composite living skin equivalents |
US6399380B1 (en) * | 1991-02-28 | 2002-06-04 | Anti-Cancer, Inc. | Native-state histoculturing skin extracellular support |
US5888720A (en) * | 1992-10-27 | 1999-03-30 | Yissum Research And Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | In vitro micro-organs |
US5610007A (en) * | 1993-01-21 | 1997-03-11 | Universite Laval | Chimeric sheets of epithelial cells |
CA2119064A1 (en) * | 1993-03-17 | 1994-09-18 | Richard A. Berg | Dermal-epidermal in vitro test system |
CH687153A5 (de) * | 1993-12-22 | 1996-09-30 | Jiri E Dr Prenosil | Verfahren und Vorrichtung zur Herstellung einer Zellstruktur auf einer semipermeablen Membran. |
US5489304A (en) * | 1994-04-19 | 1996-02-06 | Brigham & Women's Hospital | Method of skin regeneration using a collagen-glycosaminoglycan matrix and cultured epithelial autograft |
DE4414755C2 (de) * | 1994-04-27 | 2000-11-16 | Lohmann Therapie Syst Lts | Kollagenzubereitung zur gesteuerten Abgabe von Wirkstoffen, Verfahren und Verwendung |
JP2858087B2 (ja) | 1994-09-19 | 1999-02-17 | グンゼ株式会社 | 組織培養用基材及び組織培養法 |
US20030152909A1 (en) * | 1994-11-16 | 2003-08-14 | Mitrani Eduardo N. | In vitro micro-organs, and uses related thereto |
US6080194A (en) * | 1995-02-10 | 2000-06-27 | The Hospital For Joint Disease Orthopaedic Institute | Multi-stage collagen-based template or implant for use in the repair of cartilage lesions |
IT1281870B1 (it) * | 1995-04-27 | 1998-03-03 | Fidia Advanced Biopolymers Srl | Pelle artificiale umana costituita da materiali biocompatibili a base di derivati dell'acido ialuronico |
US20040002772A1 (en) * | 1995-04-28 | 2004-01-01 | Organogenesis, Inc. | Tissue equivalents with perforations for improved integration to host tissues and methods for producing perforated tissue equivalents |
US20020111695A1 (en) * | 1995-11-06 | 2002-08-15 | Mount Sinai Hospital Corporation | Reconstituted mineralized cartilage tissue |
EP0862616B1 (en) | 1995-11-06 | 2008-07-30 | Mount Sinai Hospital | Reconstituted mineralized cartilage tissue |
ES2117573B1 (es) * | 1996-07-19 | 1999-02-16 | Comunitario De Transfusion Del | Base dermica especialmente diseñada para el cultivo de queratinocitos. |
WO1998013076A1 (en) * | 1996-09-24 | 1998-04-02 | Brigham And Women's Hospital | Cultured cell-seeded fibrous lattice for tissue replacement |
FR2757635B1 (fr) * | 1996-12-24 | 1999-02-05 | Oreal | Procede d'evaluation des dommages induits dans la peau par les uv-a |
CA2207882A1 (en) * | 1997-06-17 | 1998-12-17 | Joel Claveau | Assessment of human skin damage following exposure to harmful agents |
ES2132027B1 (es) * | 1997-07-04 | 2000-04-01 | Comunitario De Transfusion Del | Desarrollo de una piel artificial mediante cultivo de queratinocitos sobre una base de fibrina y fibroblastos humanos y metodo de preparacion de esta piel para trasplante. |
US7687057B2 (en) * | 1998-01-09 | 2010-03-30 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | In vitro micro-organs, and uses related thereto |
AU3077299A (en) | 1998-03-11 | 1999-09-27 | University Of Southern California | Method of promoting production of living tissue equivalents |
US6432710B1 (en) | 1998-05-22 | 2002-08-13 | Isolagen Technologies, Inc. | Compositions for regenerating tissue that has deteriorated, and methods for using such compositions |
US6177514B1 (en) * | 1999-04-09 | 2001-01-23 | Sulzer Carbomedics Inc. | Blocked functional reagants for cross-linking biological tissues |
FR2792650B1 (fr) * | 1999-04-20 | 2003-02-28 | Oreal | Equivalent de peau agee, son procede de preparation et son utilisation |
US6372494B1 (en) | 1999-05-14 | 2002-04-16 | Advanced Tissue Sciences, Inc. | Methods of making conditioned cell culture medium compositions |
DE19922078A1 (de) * | 1999-05-15 | 2000-11-23 | Weitzel Kage Doris | Gewebekonstrukt für die Transplantationschirurgie |
FR2801313A1 (fr) | 1999-05-19 | 2001-05-25 | Coletica | Produit collagenique contenant du collagene d'origine marine a faible odeur et de preference a proprietes mecaniques ameliorees, ainsi que son utilisation sous forme de compositions ou de produits cosmetiques ou pharmaceutiques |
FR2798735B1 (fr) * | 1999-09-17 | 2001-11-23 | Serobiologiques Lab Sa | Procede d'evaluation et de suivi du vieillissement tissulaire |
US6479079B1 (en) | 1999-12-13 | 2002-11-12 | Sulzer Carbomedics Inc. | Anticalcification treatments for fixed biomaterials |
WO2001091821A1 (fr) * | 2000-05-26 | 2001-12-06 | Coletica | Supports a base de collagene pour l'ingenierie tissulaire et la preparation de biomateriaux |
FR2809412A1 (fr) | 2000-05-26 | 2001-11-30 | Coletica | Utilisation de collagene d'origine aquatique pour la realisation de supports destines a l'ingenierie tissulaire, et supports et biomateriaux obtenus |
FR2809313B1 (fr) * | 2000-05-26 | 2005-11-18 | Coletica | Procedes de preparation de nouveaux supports a base de collagene pour l'ingenieurie tissulaire et biomateriaux obtenus |
US6790454B1 (en) * | 2000-05-26 | 2004-09-14 | Coletica | Processes for the preparation of novel collagen-based supports for tissue engineering, and biomaterials obtained |
DE10196234B4 (de) * | 2000-05-26 | 2008-04-30 | Engelhard Lyon S.A. | Verfahren zur Herstellung eines Verbundprodukts aus Kollagen für die Gewebebildung und seine Verwendung |
US6974679B2 (en) * | 2000-05-26 | 2005-12-13 | Coletica | Support with collagen base for tissue engineering and manufacture of biomaterials |
US20040023907A1 (en) * | 2000-05-31 | 2004-02-05 | Christoph Dieterich | Infection model |
DE50107916D1 (de) | 2000-05-31 | 2005-12-08 | Fraunhofer Ges Forschung | Dreidimensionales hautmodell |
DE20019809U1 (de) * | 2000-05-31 | 2001-07-12 | Fraunhofer Ges Forschung | Knorpelersatz und Biomatrix zur Kultivierung von Zellen |
JP2004520828A (ja) * | 2000-12-27 | 2004-07-15 | オーテック・インターナショナル,インコーポレイテッド | 凍結保存された複合生体構築物の製造方法および該方法から得られる製造物 |
US6500464B2 (en) * | 2000-12-28 | 2002-12-31 | Ortec International, Inc. | Bilayered collagen construct |
US6974697B2 (en) * | 2001-03-02 | 2005-12-13 | Stratech Corporation | Skin substitutes with improved barrier function |
CA2439899C (en) * | 2001-03-02 | 2015-09-29 | Stratatech Corporation | Improved skin substitutes and uses thereof |
EP1273913A1 (de) * | 2001-07-02 | 2003-01-08 | Cognis France S.A. | Verfahren zur Bestimmung der Interaktionen zwischen Keratinocyten und Neuronen |
US7468242B2 (en) | 2001-11-05 | 2008-12-23 | Medgenics, Inc. | Dermal micro organs, methods and apparatuses for producing and using the same |
US8501396B2 (en) | 2001-11-05 | 2013-08-06 | Medgenics Medical Israel Ltd. | Dermal micro-organs, methods and apparatuses for producing and using the same |
US8088568B2 (en) * | 2001-11-05 | 2012-01-03 | Medgentics, Inc. | Dermal micro-organs, methods and apparatuses for producing and using the same |
US8394371B2 (en) | 2002-02-11 | 2013-03-12 | Neocutis Sa | Compositions for the treatment of skin conditions, disorders or diseases and methods of making and using the same |
AU2003219830A1 (en) * | 2002-02-22 | 2003-09-09 | Ebi, L.P. | Methods and compositions for treating bone or cartilage defects |
US7741116B2 (en) * | 2002-03-06 | 2010-06-22 | University Of Cincinnati | Surgical device for skin therapy or testing |
KR100874543B1 (ko) * | 2002-04-22 | 2008-12-16 | 동아제약주식회사 | 인공피부 배양물 및 그 제조방법 |
JP4753577B2 (ja) * | 2002-04-30 | 2011-08-24 | ストラタテック コーポレーション | 外因性血管新生増殖因子を発現するケラチノサイト |
US7229820B2 (en) * | 2002-06-13 | 2007-06-12 | Wilson Wolf Manufacturing Corporation | Apparatus and method for culturing and preserving tissue constructs |
AU2003243781A1 (en) * | 2002-06-24 | 2004-01-06 | Amniotech, Inc. | Amniotic membrane mediated delivery of bioactive molecules |
JP2005533102A (ja) * | 2002-07-12 | 2005-11-04 | イッサム リサーチ ディベロップメント カンパニー オブ ザ ヘブリュー ユニバーシティー オブ エルサレム | 微小器官によって生物学的プロセスを誘発する方法と装置 |
WO2004013606A2 (en) | 2002-08-02 | 2004-02-12 | Stratatech Corporation | Species specific dna detection |
US7666134B2 (en) * | 2002-09-28 | 2010-02-23 | Kci Licensing, Inc. | System and method for transplantation of dermal tissue |
US20050107876A1 (en) * | 2002-09-30 | 2005-05-19 | Kim Ki-Ho | Dermal substitute consisting of amnion and biodegradable polymer, the preparation method and the use thereof |
US7177705B2 (en) * | 2003-02-19 | 2007-02-13 | Stimu-Heal Inc. | Surface electrode for electrical stimulation of tissue |
JP4097544B2 (ja) * | 2003-02-27 | 2008-06-11 | 独立行政法人理化学研究所 | 人工リンパ節 |
PT1653807E (pt) * | 2003-05-01 | 2012-07-23 | Medgenics Inc | Micro-órgãos dérmicos, métodos e dispositivos para produção e utilização dos mesmos |
CA2534349C (en) | 2003-08-01 | 2012-04-10 | Stratatech Corporation | Human skin equivalents expressing exogenous polypeptides |
US7375077B2 (en) * | 2003-09-19 | 2008-05-20 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | In vivo synthesis of connective tissues |
DE102004039537A1 (de) * | 2004-08-13 | 2006-02-23 | Phenion Gmbh & Co. Kg | Vernetzte Kollagenmatrix zur Herstellung eines Hautäquivalentes |
US20060058238A1 (en) * | 2004-09-15 | 2006-03-16 | Lee Laurent-Applegate | Fetal skin cell protein compositions for the treatment of skin conditions, disorders or diseases and methods of making and using the same |
EP1858333B1 (en) | 2005-03-01 | 2015-12-23 | Stratatech Corporation | Human skin equivalents expressing exogenous polypeptides |
ES2622508T3 (es) | 2005-03-17 | 2017-07-06 | Stratatech Corporation | Sustitutos de piel con pureza mejorada |
WO2006107188A1 (en) * | 2005-04-06 | 2006-10-12 | Fujifilm Manufacturing Europe B.V. | A non-porous film for culturing cells |
EP1883432B1 (en) | 2005-04-06 | 2016-03-30 | FUJIFILM Manufacturing Europe B.V. | A non-porous film for culturing cells |
FR2889808B1 (fr) | 2005-08-17 | 2011-07-22 | Oreal | Utilisation de l'acide 8-hexadecene-1,16-dicarboxylique comme agent de soin destine a favoriser la cohesion de la couche cornee |
WO2007029676A1 (ja) * | 2005-09-07 | 2007-03-15 | Arblast Co., Ltd. | 生体組織シート及びその作製方法 |
US8454948B2 (en) | 2006-09-14 | 2013-06-04 | Medgenics Medical Israel Ltd. | Long lasting drug formulations |
CN102886052B (zh) * | 2006-09-14 | 2014-07-30 | 迈德詹尼克斯医疗以色列有限公司 | 长效药物制剂 |
US8105380B2 (en) * | 2006-10-23 | 2012-01-31 | Stemedica Cell Technologies, Inc. | Cellular scaffold |
US8709081B2 (en) | 2006-10-23 | 2014-04-29 | Stemedica Cell Technologies, Inc. | Cellular scaffold |
US9056151B2 (en) * | 2007-02-12 | 2015-06-16 | Warsaw Orthopedic, Inc. | Methods for collagen processing and products using processed collagen |
US20080260794A1 (en) * | 2007-02-12 | 2008-10-23 | Lauritzen Nels J | Collagen products and methods for producing collagen products |
DE102007026639A1 (de) | 2007-06-06 | 2008-12-11 | Stefan-Andreas Ulrich | Industrielle Fertigung tierischer Lederhautsubstitute für die Lederproduktion aus etablierten Epithelzelllinien und/oder primären Epithelzellkulturen, wie vorzugsweise Fibroplasten, Melanozyten, Keratiozyten sowie deren Verfahren und Vorrichtungen |
US20090145087A1 (en) | 2007-11-14 | 2009-06-11 | Stratatech Corporation | Cold storage of organotypically cultured skin equivalents for clinical applications |
US9308068B2 (en) | 2007-12-03 | 2016-04-12 | Sofradim Production | Implant for parastomal hernia |
WO2009155334A1 (en) | 2008-06-20 | 2009-12-23 | Escape Therapeutics, Inc. | Differentiation of mesenchymal stem cells into fibroblasts, compositions comprising mesenchymal stem cell-derived fibroblasts, and methods of using the same |
WO2009156866A2 (en) | 2008-06-27 | 2009-12-30 | Sofradim Production | Biosynthetic implant for soft tissue repair |
AU2009313656B2 (en) | 2008-11-04 | 2014-02-20 | Stratatech Corporation | Dried and irradiated skin equivalents for ready use |
DE102009022349B4 (de) * | 2009-05-15 | 2011-02-03 | Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. | Automatisches Trennen von Gewebeschichten |
DE102009022351A1 (de) * | 2009-05-15 | 2010-11-25 | Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. | Modulares Produktionssystem zur automatischen Herstellung von dreidimensionalen Gewebestrukturen |
US20100330046A1 (en) | 2009-05-21 | 2010-12-30 | Stratatech Corporation | Human skin substitutes expressing il-12 |
FR2949688B1 (fr) | 2009-09-04 | 2012-08-24 | Sofradim Production | Tissu avec picots revetu d'une couche microporeuse bioresorbable |
BR112012021267A2 (pt) | 2010-02-23 | 2015-09-22 | Inst Nat Sante Rech Med | métodos para a preparação de melanócitos a partir de células tronco humanas pluripotentes. |
GB201003656D0 (en) * | 2010-03-05 | 2010-04-21 | Tigenix Ltd | Fabrication process |
US8790699B2 (en) | 2010-04-23 | 2014-07-29 | Warsaw Orthpedic, Inc. | Foam-formed collagen strand |
US8460691B2 (en) | 2010-04-23 | 2013-06-11 | Warsaw Orthopedic, Inc. | Fenestrated wound repair scaffold |
BE1019331A5 (nl) | 2010-05-10 | 2012-06-05 | Flooring Ind Ltd Sarl | Vloerpaneel en werkwijzen voor het vervaardigen van vloerpanelen. |
US9222076B2 (en) * | 2010-05-21 | 2015-12-29 | Rodrigo Focion Soto Pareja | Process for the production of patches or derssings of autologous skin through cultivation of autologous keratinocytes and fibroblasts with autologous serum for the generation of skin |
JP2013532152A (ja) | 2010-06-15 | 2013-08-15 | メドジェニクス・メディカル・イスラエル・リミテッド | 長期持続性の医薬製剤 |
CA2802880C (en) * | 2010-06-18 | 2019-09-24 | The Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine, Inc. | Hair follicle neogenesis |
FR2967163A1 (fr) | 2010-11-05 | 2012-05-11 | Centre Nat Rech Scient | Procede in vitro ou ex vivo pour la maintenance en survie et la generation ou reconstruction d'un epiderme |
JP6031221B2 (ja) * | 2011-03-02 | 2016-11-24 | 花王株式会社 | 皮膚感作性物質の評価方法 |
FR2972626B1 (fr) | 2011-03-16 | 2014-04-11 | Sofradim Production | Prothese comprenant un tricot tridimensionnel et ajoure |
JP5868601B2 (ja) * | 2011-03-23 | 2016-02-24 | フタムラ化学株式会社 | 液体培地用足場部材 |
JP2012205516A (ja) * | 2011-03-29 | 2012-10-25 | Osaka Univ | 人工皮膚モデルの製造方法、及び人工皮膚モデル |
FR2976001B1 (fr) | 2011-05-30 | 2014-10-31 | Oreal | Modele de cuir chevelu reconstruit et procede de screening de molecules actives |
FR2977790B1 (fr) | 2011-07-13 | 2013-07-19 | Sofradim Production | Prothese pour hernie ombilicale |
FR2977789B1 (fr) | 2011-07-13 | 2013-07-19 | Sofradim Production | Prothese pour hernie ombilicale |
GB201112922D0 (en) | 2011-07-27 | 2011-09-14 | Univ Durham | Micro-organ |
CA2849052C (en) | 2011-09-30 | 2019-11-05 | Sofradim Production | Reversible stiffening of light weight mesh |
FR2985271B1 (fr) | 2011-12-29 | 2014-01-24 | Sofradim Production | Tricot a picots |
FR2985170B1 (fr) | 2011-12-29 | 2014-01-24 | Sofradim Production | Prothese pour hernie inguinale |
FR2994185B1 (fr) | 2012-08-02 | 2015-07-31 | Sofradim Production | Procede de preparation d’une couche poreuse a base de chitosane |
FR2995778B1 (fr) | 2012-09-25 | 2015-06-26 | Sofradim Production | Prothese de renfort de la paroi abdominale et procede de fabrication |
FR2995779B1 (fr) | 2012-09-25 | 2015-09-25 | Sofradim Production | Prothese comprenant un treillis et un moyen de consolidation |
FR2995788B1 (fr) | 2012-09-25 | 2014-09-26 | Sofradim Production | Patch hemostatique et procede de preparation |
WO2014049446A2 (en) | 2012-09-28 | 2014-04-03 | Sofradim Production | Packaging for a hernia repair device |
DK2967836T3 (en) | 2013-03-13 | 2019-01-28 | Stratatech Corp | Cryopreservation of viable human skin substitutes |
AU2014259787B2 (en) | 2013-05-03 | 2018-03-08 | The Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine, Inc. | Skin substitutes and methods for hair follicle neogenesis |
FR3006578B1 (fr) | 2013-06-07 | 2015-05-29 | Sofradim Production | Prothese a base d’un textile pour voie laparoscopique |
FR3006581B1 (fr) | 2013-06-07 | 2016-07-22 | Sofradim Production | Prothese a base d’un textile pour voie laparoscopique |
EP3000433B1 (en) | 2014-09-29 | 2022-09-21 | Sofradim Production | Device for introducing a prosthesis for hernia treatment into an incision and flexible textile based prosthesis |
EP3000432B1 (en) | 2014-09-29 | 2022-05-04 | Sofradim Production | Textile-based prosthesis for treatment of inguinal hernia |
WO2016080732A1 (ko) * | 2014-11-17 | 2016-05-26 | 주식회사 바이오코즈글로벌코리아 | 세포 배양 배지, 표피성장인자 및 소혈청알부민을 포함하는 피부 상태 개선용 화장료 조성물 |
EP3029189B1 (en) | 2014-12-05 | 2021-08-11 | Sofradim Production | Prosthetic porous knit, method of making same and hernia prosthesis |
EP3059255B1 (en) | 2015-02-17 | 2020-05-13 | Sofradim Production | Method for preparing a chitosan-based matrix comprising a fiber reinforcement member |
EP3085337B1 (en) | 2015-04-24 | 2022-09-14 | Sofradim Production | Prosthesis for supporting a breast structure |
ES2676072T3 (es) | 2015-06-19 | 2018-07-16 | Sofradim Production | Prótesis sintética que comprende un tejido de punto y una película no porosa y método para formarla |
EP3195830B1 (en) | 2016-01-25 | 2020-11-18 | Sofradim Production | Prosthesis for hernia repair |
CN109415692A (zh) * | 2016-06-24 | 2019-03-01 | 株式会社资生堂 | 三维培养皮肤片、用于其制造的细胞培养容器和该三维培养皮肤片的制造方法 |
FR3054449B1 (fr) | 2016-07-29 | 2018-08-31 | L'oreal | Equivalent de peau a compartiments dermiques juxtaposes distincts |
EP3312325B1 (en) | 2016-10-21 | 2021-09-22 | Sofradim Production | Method for forming a mesh having a barbed suture attached thereto and the mesh thus obtained |
EP3398554A1 (en) | 2017-05-02 | 2018-11-07 | Sofradim Production | Prosthesis for inguinal hernia repair |
FR3071512B1 (fr) | 2017-09-28 | 2022-02-25 | Oreal | Signatures moleculaires de trois sous-populations de fibroblastes dermiques et equivalent de derme comprenant une de ces sous-populations |
EP3653171A1 (en) | 2018-11-16 | 2020-05-20 | Sofradim Production | Implants suitable for soft tissue repair |
IT201800010390A1 (it) * | 2018-11-16 | 2020-05-16 | Diego Furlan | Dispositivo medico monouso per la medicazione di lesioni della pelle di un paziente e relativi procedimenti di preparazione e utilizzazione |
FR3108505A1 (fr) * | 2020-03-30 | 2021-10-01 | Universite Grenoble Alpes | Biomatériau comprenant une matrice poreuse résorbable et procédé de fabrication associé |
FR3111904B1 (fr) | 2020-06-30 | 2022-10-21 | Oreal | Bioencre pour bioimpression d’un modèle de jonction dermo-épidermique invaginée |
WO2022056131A2 (en) * | 2020-09-11 | 2022-03-17 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Wearable engineered human skin and systems and methods for making the same |
Family Cites Families (65)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4144126A (en) * | 1975-05-21 | 1979-03-13 | Beecham Group Limited | Cell culture method |
US4280954A (en) * | 1975-07-15 | 1981-07-28 | Massachusetts Institute Of Technology | Crosslinked collagen-mucopolysaccharide composite materials |
US4060081A (en) * | 1975-07-15 | 1977-11-29 | Massachusetts Institute Of Technology | Multilayer membrane useful as synthetic skin |
US4016036A (en) * | 1975-11-14 | 1977-04-05 | Massachusetts Institute Of Technology | Process for serially culturing keratinocytes |
US4024020A (en) * | 1975-12-15 | 1977-05-17 | Monsanto Company | Method of cell culture on polyacrylonitrile surface |
DE2557870A1 (de) * | 1975-12-22 | 1977-06-23 | Linde Ag | Verfahren und vorrichtung zum tiefgefrieren von biologischen substanzen |
US4117881A (en) * | 1977-06-14 | 1978-10-03 | The United States Of America As Represented By The Administrator Of The National Aeronautics And Space Administration | System for and method of freezing biological tissue |
US4135975A (en) * | 1977-12-14 | 1979-01-23 | Lichtman Marshall A | Obtaining human cell lines that elaborate colony stimulating activity for marrow cells of man and other species and methods of preparing same |
US4228243A (en) * | 1978-07-13 | 1980-10-14 | Toray Industries, Inc. | Cell culture propagation apparatus |
US4299819A (en) * | 1979-01-02 | 1981-11-10 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Process for treating burn victims |
FR2461002A1 (fr) * | 1979-07-13 | 1981-01-30 | Inst Nat Sante Rech Med | Procede pour stimuler la croissance des cellules d'epiderme humain et produits faisant application dudit procede |
US4342828A (en) * | 1979-07-20 | 1982-08-03 | Morinaga Milk Industry Co., Ltd. | Method for producing substance capable of stimulating differentiation and proliferation of human granulopoietic stem cells |
US4412947A (en) * | 1979-09-12 | 1983-11-01 | Seton Company | Collagen sponge |
US4254226A (en) * | 1979-09-13 | 1981-03-03 | Sloan Kettering Institute For Cancer Research | Process for growing human epidermal cells in tissue culture |
US4642292A (en) * | 1979-10-29 | 1987-02-10 | Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University, A Division Of Yeshiva University | Method for isolation of connective tissue biomatrix |
US4352887A (en) * | 1979-10-29 | 1982-10-05 | Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University | Method and article for culturing differentiated cells |
US4304866A (en) * | 1979-11-14 | 1981-12-08 | Massachusetts Institute Of Technology | Transplantable sheets of living keratinous tissue |
US4522753A (en) * | 1980-07-17 | 1985-06-11 | Massachusetts Institute Of Technology | Method for preserving porosity in porous materials |
US4481946A (en) * | 1980-08-14 | 1984-11-13 | Altshuler John H | Bone marrow transplant method and apparatus |
US4486188A (en) * | 1980-08-14 | 1984-12-04 | Applied Medical Devices, Inc. | Bone marrow transplant method and apparatus |
US4314380A (en) * | 1980-09-26 | 1982-02-09 | Koken Co., Ltd. | Artificial bone |
US4565784A (en) * | 1981-01-26 | 1986-01-21 | Trustees Of Boston University | Hydrogels capable of supporting cell growth |
US4553272A (en) * | 1981-02-26 | 1985-11-19 | University Of Pittsburgh | Regeneration of living tissues by growth of isolated cells in porous implant and product thereof |
US4546500A (en) * | 1981-05-08 | 1985-10-15 | Massachusetts Institute Of Technology | Fabrication of living blood vessels and glandular tissues |
US4489710A (en) * | 1981-06-23 | 1984-12-25 | Xoma Corporation | Composition and method for transplantation therapy |
US4350629A (en) * | 1981-07-29 | 1982-09-21 | Massachusetts Institute Of Technology | Procedures for preparing composite materials from collagen and glycosaminoglycan |
US4621100A (en) * | 1981-09-25 | 1986-11-04 | The Upjohn Company | Treatment of osteoporosis with prostaglandins |
US4458678A (en) * | 1981-10-26 | 1984-07-10 | Massachusetts Institute Of Technology | Cell-seeding procedures involving fibrous lattices |
US4505266A (en) * | 1981-10-26 | 1985-03-19 | Massachusetts Institute Of Technology | Method of using a fibrous lattice |
US4418691A (en) * | 1981-10-26 | 1983-12-06 | Massachusetts Institute Of Technology | Method of promoting the regeneration of tissue at a wound |
FR2517315B1 (fr) * | 1981-11-30 | 1985-12-20 | Tech Cuir Centre | Procede de preparation de formes nouvelles de collagene, natif ou dereticule, a structure helicoidale preservee, associees a des mucopolysaccharides et leurs applications notamment dans les domaines cosmetologiques, pharmaceutiques, analytiques et autres |
US4485096A (en) * | 1982-02-26 | 1984-11-27 | Massachusetts Institute Of Technology | Tissue-equivalent and method for preparation thereof |
US4520821A (en) * | 1982-04-30 | 1985-06-04 | The Regents Of The University Of California | Growing of long-term biological tissue correction structures in vivo |
US4485097A (en) * | 1982-05-26 | 1984-11-27 | Massachusetts Institute Of Technology | Bone-equivalent and method for preparation thereof |
JPS5928472A (ja) * | 1982-08-09 | 1984-02-15 | Koken:Kk | 細胞培養用基質およびこの基質を用いた細胞培養・分離法 |
US4645669A (en) * | 1982-10-04 | 1987-02-24 | Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University | Culturing and emplacement of differentiated cells in vivo |
US4960423A (en) * | 1982-11-17 | 1990-10-02 | Smith Donald W | Method of enhancing the attachment of endothelial cells on a matrix and vascular prosthesis with enhanced anti-thrombogenic characteristics |
US5000963A (en) * | 1983-06-14 | 1991-03-19 | Hefton John M | Method of treating the skin using human epidermal sheets |
US4769317A (en) * | 1983-06-14 | 1988-09-06 | Hefton John M | Process for growing human epidermis, product thereof |
US4940666A (en) * | 1983-07-15 | 1990-07-10 | University Patents, Inc. | Process and defined medium for growth of human epidermal keratinocyte cells |
US4673649A (en) * | 1983-07-15 | 1987-06-16 | University Patents, Inc. | Process and defined medium for growth of human epidermal keratinocyte cells |
US4448718A (en) * | 1983-09-13 | 1984-05-15 | Massachusetts Institute Of Technology | Method for the preparation of collagen-glycosaminoglycan composite materials |
US4609551A (en) * | 1984-03-20 | 1986-09-02 | Arnold Caplan | Process of and material for stimulating growth of cartilage and bony tissue at anatomical sites |
US4925924A (en) * | 1984-03-27 | 1990-05-15 | University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey | Biocompatible synthetic and collagen compositions having a dual-type porosity for treatment of wounds and pressure ulcers and therapeutic methods thereof |
MX163953B (es) * | 1984-03-27 | 1992-07-03 | Univ New Jersey Med | Procedimiento para preparar una matriz biodegradable a base de colageno |
JPS60261460A (ja) * | 1984-06-11 | 1985-12-24 | 株式会社 高研 | コラ−ゲンとポリ―α―アミノ酸膜から成る人工皮膚 |
US4604346A (en) * | 1984-10-09 | 1986-08-05 | Massachusetts Institute Of Technology | Skin-equivalent prepared by the use of punch biopsy |
JPS61253065A (ja) * | 1985-05-02 | 1986-11-10 | 片倉チツカリン株式会社 | キトサン誘導体およびコラ−ゲンの複合材の医用材料およびその製造法 |
US4963489A (en) * | 1987-04-14 | 1990-10-16 | Marrow-Tech, Inc. | Three-dimensional cell and tissue culture system |
JPS62246371A (ja) * | 1986-04-19 | 1987-10-27 | 株式会社 高研 | 人工皮膚及びその製造方法 |
FR2612939B1 (fr) * | 1987-03-26 | 1989-06-23 | Cird | Equivalent de peau |
FR2612938B1 (fr) * | 1987-03-26 | 1989-06-23 | Cird | Procede d'obtention d'un equivalent de peau et equivalent de peau correspondant |
US4835102A (en) * | 1987-03-31 | 1989-05-30 | Eugene Bell | Tissue equivalent test systems |
US5273900A (en) * | 1987-04-28 | 1993-12-28 | The Regents Of The University Of California | Method and apparatus for preparing composite skin replacement |
ATE86115T1 (de) * | 1987-04-28 | 1993-03-15 | Univ California | Vorrichtung und verfahren zur herstellung eines komposithautersatzes. |
US4975377A (en) * | 1987-05-14 | 1990-12-04 | Key Marc E | Cell growth chambers and method of use thereof |
US4888291A (en) * | 1987-06-19 | 1989-12-19 | President And Fellows Of Harvard College | Human epithelium originating from cell cultures |
GB8721018D0 (en) * | 1987-09-07 | 1987-10-14 | Alcan Int Ltd | Porous inorganic membrane support |
US5015584A (en) * | 1987-10-14 | 1991-05-14 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Epidermal graft system |
US4837379A (en) * | 1988-06-02 | 1989-06-06 | Organogenesis Inc. | Fibrin-collagen tissue equivalents and methods for preparation thereof |
US4950483A (en) * | 1988-06-30 | 1990-08-21 | Collagen Corporation | Collagen wound healing matrices and process for their production |
JPH0271749A (ja) * | 1988-09-07 | 1990-03-12 | Terumo Corp | 人工皮膚 |
US4996154A (en) * | 1989-05-04 | 1991-02-26 | Millipore Corporation | Method for growing cellular tissue |
NL8902237A (nl) * | 1989-09-06 | 1991-04-02 | Hc Implants Bv | Kunsthuid. |
US5282859A (en) * | 1990-04-24 | 1994-02-01 | Mark Eisenberg | Composite living skin equivalents |
-
1991
- 1991-04-24 US US07/777,419 patent/US5282859A/en not_active Ceased
- 1991-04-24 WO PCT/AU1991/000160 patent/WO1991016010A1/en active IP Right Grant
- 1991-04-24 ES ES91908747T patent/ES2111566T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1991-04-24 DK DK91908747T patent/DK0526550T3/da active
- 1991-04-24 BR BR919106354A patent/BR9106354A/pt not_active Application Discontinuation
- 1991-04-24 EP EP91908747A patent/EP0526550B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-04-24 RU RU92016420A patent/RU2135191C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1991-04-24 JP JP3508090A patent/JPH0747043B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1991-04-24 HU HU9203338A patent/HUT63319A/hu unknown
- 1991-04-24 AT AT91908747T patent/ATE161408T1/de not_active IP Right Cessation
- 1991-04-24 CA CA002080693A patent/CA2080693C/en not_active Expired - Fee Related
- 1991-04-24 US US08/346,525 patent/USRE35399E/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-04-24 DE DE69128530T patent/DE69128530T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1991-10-21 TW TW080108276A patent/TW225986B/zh active
-
1992
- 1992-10-21 FI FI924773A patent/FI924773A0/fi not_active Application Discontinuation
-
1996
- 1996-02-16 US US08/602,271 patent/US6039760A/en not_active Expired - Fee Related
-
1998
- 1998-03-27 GR GR980400647T patent/GR3026463T3/el unknown
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Boyce S.T. et al. Biologic attachment growth, and differentiation of cultured human epidermal Keratinocytes on a graftable collagen and chondroitin-6-Sulfate Substrate. B: Surgery, 1988, V.103, N 4, p.228. * |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2498808C2 (ru) * | 2006-03-03 | 2013-11-20 | Огенодженесис, Инк. | Способ лечения состояния ротовой полости больного (варианты) |
RU2498808C9 (ru) * | 2006-03-03 | 2014-01-20 | Огенодженесис, Инк. | Способ лечения состояния ротовой полости больного (варианты) |
RU2464987C1 (ru) * | 2011-04-07 | 2012-10-27 | Российская Федерация, от имени которой выступает Министерство образования и науки РФ | Способ получения резорбируемой полилактидной матрицы для культивирования и имплантации клеток, предназначенных для заживления ран |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA2080693C (en) | 2001-11-27 |
USRE35399E (en) | 1996-12-10 |
WO1991016010A1 (en) | 1991-10-31 |
DK0526550T3 (da) | 1998-08-31 |
ATE161408T1 (de) | 1998-01-15 |
US5282859A (en) | 1994-02-01 |
FI924773A (fi) | 1992-10-21 |
TW225986B (ru) | 1994-07-01 |
EP0526550A4 (en) | 1993-06-30 |
HUT63319A (en) | 1993-08-30 |
DE69128530T2 (de) | 1998-08-20 |
JPH05506169A (ja) | 1993-09-16 |
US6039760A (en) | 2000-03-21 |
AU632693B2 (en) | 1993-01-07 |
AU7756991A (en) | 1991-11-11 |
ES2111566T3 (es) | 1998-03-16 |
JPH0747043B2 (ja) | 1995-05-24 |
GR3026463T3 (en) | 1998-06-30 |
FI924773A0 (fi) | 1992-10-21 |
HU9203338D0 (en) | 1993-01-28 |
EP0526550A1 (en) | 1993-02-10 |
BR9106354A (pt) | 1993-04-27 |
CA2080693A1 (en) | 1991-10-25 |
EP0526550B1 (en) | 1997-12-29 |
DE69128530D1 (de) | 1998-02-05 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2135191C1 (ru) | Композиционный эквивалент живой кожи, способ его получения, тест-набор | |
US9089417B2 (en) | Surgical device for skin therapy or testing | |
Wilkins et al. | Development of a bilayered living skin construct for clinical applications | |
JP3646882B2 (ja) | ヒアルロン酸誘導体を基本とするバイオ適合性物質を支持体として含む人工皮膚 | |
US5015584A (en) | Epidermal graft system | |
JP3311351B2 (ja) | 新規なケラチノサイト培養物,その調製方法及び創傷治療物質としてのその用途 | |
US5968546A (en) | Keratinocyte culture from precursor cells | |
Phillips | Biologic skin substitutes | |
Fimiani et al. | Other uses of homologous skin grafts and skin bank bioproducts | |
US9259445B2 (en) | Integrated implant system (IIS) biocompatible, biodegradable and bioactive, comprising a biocompatible sterile porous polymeric matrix and a gel, integrating in situ the tridimensional matrix structure | |
Eisinger | Regeneration of epidermis by cells grown in tissue culture | |
CN1071568A (zh) | 复合的活的皮肤等同物 | |
AU632693C (en) | Composite living skin equivalents | |
IL99548A (en) | Composite living skin equivalents and process for their preparation | |
IE913512A1 (en) | Composite living skin equivalents | |
Wilkins et al. | 0202 zyxwvutsrqponmlkj | |
Allows | Skin Substitutes Wound Healing | |
NZ240126A (en) | Composite living skin equivalent |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20080425 |