JP2003535907A - 抗体誘導性細胞溶解を促進し、そして癌を処置するための方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、癌を処置するための方法および産物に関する。特に本発明は、癌を処置および予防するための核酸および抗体の組合せに関する。本発明はまた、癌細胞をスクリーニングするための診断方法に関する。本発明の別の局面において、本発明は、癌を処置または予防するための方法であって、該方法は、以下：ＣＤ２０の発現を上方制御するのに有効な量の核酸、および抗ＣＤ２０抗体を、癌を有する被験体または癌を発症する危険性のある被験体に投与する工程、を包含する方法、に関する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （優先権） 本発明は、米国仮特許出願第６０／２１３，３４６（２０００年６月２２日出
願）の利益を主張する。

【０００２】 （発明の分野） 本発明は、免疫刺激性の核酸および抗体を用いた、癌の処置および予防に関連
する。

【０００３】 （発明の背景） 癌は、死因の第２位であり、米国において４人に１人が癌で死んでいる。１９
９７年に、肺癌、乳癌、前立腺癌、結腸直腸癌および卵巣癌であると新たに診断
された合計は、推定約２００万症例であった。米国における老齢人口のこれまで
の増加傾向に起因して、癌の発症率が増加しつづけるとの予測は、もっともであ
る。

【０００４】 癌は、細胞の制御不能な増殖（すなわち、分化）を含む疾患である。癌細胞の
制御不能な増殖に寄与するいくつかの既知の機構は、増殖因子非依存性、ゲノム
変異の検出障害、および不適切な細胞シグナル伝達を含む。正常な増殖制御を無
視する癌細胞の能力は、増殖速度の増加を生じ得る。癌の原因は、確固として確
立されてはいないが、いくつかの因子が癌に寄与、または少なくとも対象を癌に
罹患しやすくすることが知られる。このような因子としては、特定の遺伝子変異
（例えば、乳癌についてのＢＲＣＡ遺伝子変異、結腸直腸癌についてのＡＰＣ変
異）、推定癌原因因子または発癌物質（例えば、アスベスト、ＵＶ照射）に対す
る曝露、および特定の癌（例えば、乳癌）に対する家族性素質が挙げられる。

【０００５】 現在、癌は、手術、放射線治療および化学療法を含む種々の様式を用いて処置
される。処置様式の選択は、癌の型、癌の部位および癌の散在性に依存する。例
えば、手術および放射線治療は、固形の輪郭のはっきりした腫瘍塊の場合におい
てより適切であり得るが、例えば、白血病およびリンパ腫のような非固形癌の場
合においては、あまり実用的でない。手術および放射線治療の１つの有利な点は
、治療効果を特定の範囲に制御する能力であり、従って、体内の正常な組織への
毒性を限定することである。しかし、手術および放射線治療に続いて、しばしば
化学療法が行われて、任意の残りの癌細胞または放射線耐性の癌細胞を抑制する
。化学療法はまた、例えば、白血病およびリンパ腫のような散在性の癌ならびに
転移に対する最も最適な処置である。

【０００６】 さらに最近、ＣｐＧを含む核酸の使用が、癌の処理および予防に対して提案さ
れてきた。本発明者らは、特定の配列文脈中の非メチル化ＣＧジヌクレオチド（
ＣｐＧ ＤＮＡ）が、脊椎動物の免疫系によって、外来性ＤＮＡ（細菌性または
ウイルス性）として認識される。ＣｐＧ ＤＮＡは、協調した一連の免疫応答（
先天免疫（マクロファージ、樹状細胞およびナチュラルキラー細胞）、体液性免
疫および細胞性免疫を含む）を活性化する。Ｋｒｉｅｇ ＡＭら，Ｐｈａｒｍａ
ｃｏｌ Ｔｈｅｒ ８４：１１３−２０（１９９９）；Ｋｒｉｅｇ ＡＭら，Ｃ
ｕｒｒ Ｔｏｐ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２４７：１−２１（２
０００）；Ｗａｇｎｅｒ Ｈ，Ａｄｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ７３：３２９−６８（
１９９９）。ワクチンアジュバントとして、ＣｐＧ ＤＮＡは、少なくとも最も
優れたフロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）と同じ位に効果的であるが、より
高いＴｈ１活性を誘導し、より少ない毒性を示す。Ｃｈｕ ＲＳら，Ｊ Ｅｘｐ
Ｍｅｄ １８６：１６２３−３１（１９９７）；Ｗｅｉｎｅｒ ＧＪら，Ｐｒ
ｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９４：１０８３３−７（１９９７
）； Ｒｏｍａｎ Ｍら，Ｎａｔ Ｍｅｄ ３：８４９−５４（１９９７）；Ｌ
ｉｐｆｏｒｄ ＧＢら，Ｅｕｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２７：２３４０−４（１９９
７）；Ｄａｖｉｓ ＨＬら，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６０：８７０−６（１９９
８）。最近、本発明者らは、初代ヒトＢ細胞の増殖および活性を誘導するヒトＣ
ｐＧモチーフを同定した。Ｈａｒｔｍａｎｎ Ｇら，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６
４：９４４−５３（２０００）。

【０００７】 （発明の要旨） 本発明は、免疫刺激性の核酸および抗体を用いて、癌を処置および予防する方
法についてのいくつかの局面に関連する。従って、１つの局面において、本発明
は、癌を処置または予防する方法である。本方法は、癌に罹患しているか癌発症
の危険がある被験体に、ＣＤ２０の核酸の発現および抗ＣＤ２０抗体の発現をア
ップレセプターギュレートするのに有効な量を投与する工程を包含する。いくつ
かの実施形態において、癌は、低レベルのＣＤ２０発現に関するＢ細胞リンパ腫
である。他の実施形態におけるＢ細胞リンパ腫は、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（
Ｂ−ＣＬＬ）または辺縁層のリンパ腫である。いくつかの実施形態において、Ｃ
Ｄ２０抗体は、Ｃ２Ｂ８またはＲｉｔｕｘｉｍａｂである。

【０００８】 他の局面において、本発明は、Ｂ細胞を被験体から単離して、Ｂ細胞が免疫刺
激性核酸に接触した場合の細胞表面マーカーの変化を同定することによって、リ
ンパ腫を診断する方法に関し、ここでＢ細胞に誘導される細胞表面マーカーは、
リンパ腫の型を示す。いくつかの実施形態において、被験体は、１つの型のリン
パ腫に罹患している。いくつかの実施形態において、被験体は、１つの型のリン
パ腫に罹患していることが疑われる。本方法は必要に応じて、癌を処置するため
に、免疫刺激性核酸およびＢ細胞に誘導される細胞表面抗原に対して特異的な抗
体を、被験体に投与することによって癌を処置する方法を含む。

【０００９】 別の局面において、本発明は、癌に罹患しているか癌発症の危険がある被験体
に、癌細胞表面上の表面抗原の発現を誘導するのに有効な量の核酸を投与し、そ
の被験体に抗ＣＤ２２抗体および抗ＣＤ１９抗体からなる群から選択される抗体
を投与することによって、ガンを処置または予防する方法である。

【００１０】 本発明の別の局面に従って、リンパ腫を処置する方法を提供する。本方法は、
以下：リンパ腫に罹患している被験体からＢ細胞を単離する工程、Ｂ細胞表面上
に、コントロールＢ細胞表面上より低い量で発現するかまたは発現しない表面抗
原を同定する工程、被験体に、この同定された表面抗原に特異的な抗体および免
疫刺激性核酸をリンパ腫処置のために投与する工程を包含し、ここでこの核酸は
、リンパ腫細胞表面上の表面抗原の発現をアップレセプターギュレートするのに
有効な量で投与される。

【００１１】 抗体治療に抵抗性のリンパ腫を処置するための方法を、本発明の別の局面に従
って提供する。本方法は、表面抗原特異的抗体を用いた治療に対し耐性のリンパ
腫に罹患している被験体に、リンパ腫治療のために、リンパ腫が耐性であるこの
表面抗原に特異的な抗体および核酸を投与する工程を包含し、ここでこの核酸は
、リンパ腫細胞表面上の表面抗原の発現をアップレギュレートするのに有効な量
で投与される。

【００１２】 この表面抗原は、任意の型の表面抗原であり得、癌細胞の表面上に発現され得
、免疫刺激性核酸を用いた刺激で誘導される。いくつかの実施形態において、こ
の表面抗原は、ＣＤ２０、ＣＤ４０、ＣＤ２２またはＣＤ１９である。他の実施
形態において、このリンパ腫は、Ｂ−ＣＬＬまたは辺縁層のリンパ腫である。い
くつかの実施形態において、この抗体は、抗ＣＤ２０抗体である。いくつかの実
施形態において、抗ＣＤ２０抗体は、Ｃ２Ｂ８である。他の実施形態において、
このＣＤ２０抗体は、Ｒｉｔｕｘｉｍａｂである。

【００１３】 いくつかの好ましい実施形態において、この抗体は、ヒトＩｇＧ１抗体である
。いくつかの好ましい実施形態において、この抗体は、マウスＩｇＧ２ａ抗体で
ある。

【００１４】 いくつかの実施形態において、本方法はまた、被験体に抗癌治療を行う工程を
包含する。

【００１５】 本発明はまた、ヒトにおける癌を、ヒトに免疫刺激性核酸およびＩｇＧ１アイ
ソタイプ（本明細書中において用いられるＩｇＧ１アイソタイプとは、他に規定
されない限りヒトＩｇＧ１またはヒト化されたＩｇＧ１を指す）を投与すること
によって処置する方法を含み、このＩｇＧ１アイソタイプは、癌細胞の表面抗原
に結合し、ここでこの核酸および抗体は、癌細胞を殺すのに有効な量で投与され
る。

【００１６】 必要に応じて、核酸と抗体は、一緒に投与される。あるいは、核酸と抗体は、
別々に投与されてもよい。

【００１７】 いくつかの実施形態において、本方法は、癌治療を実施する工程を包含する。
本明細書中で用いられる用語「癌治療」とは、１つの医薬品、特定のクラスの複
数の薬物および異なるクラスの複数の薬物を利用することを意味し、癌治療とし
ては、化学療法剤、癌ワクチン、生物学的応答修飾因子およびホルモン療法を含
むが、これらに限定されない。

【００１８】 化学療法剤は、以下からなる群から選択され得る：メトトレキサート、ビンク
リスチン、アドリアマイシン、シスプラチン、糖を含まないクロロエチルニトロ
ソ尿素、５−フルオロウラシル、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ドキソル
ビシン、ダカルバジン、タキソール、フラギリン（ｆｒａｇｙｌｉｎｅ）、メグ
ルミンＧＬＡ（Ｍａｇｌａｍｉｎｅ ＧＬＡ）、バルルビシン（ｖａｌｒｕｂｉ
ｃｉｎ）、カルムスタチン（ｃａｒｍｕｓｔａｉｎｅ）およびポリファポサン（
ｐｏｌｉｆｅｒｐｏｓａｎ）、ＭＭＩ２７０、ＢＡＹ １２−９５６６、ＲＡＳ
ファメシール（ｆａｍｅｓｙｌ）トランスフェラーゼインヒビター、ファメシー
ル（ｆａｍｅｓｙｌ）トランスフェラーゼインヒビター、ＭＭＰ、ＭＴＡ／ＬＹ
２３１５１４、ＬＹ２６４６１８／ロメテソール（Ｌｏｍｅｔｅｘｏｌ）、グラ
モレック（Ｇｌａｍｏｌｅｃ）、ＣＩ−９９４、ＴＮＰ−４７０、ハイカムチン
（Ｈｙｃａｍｔｉｎ）／トポテカン、ＰＫＣ４１２、バルスポダー（Ｖａｌｓｐ
ｏｄｅｒ）／ＰＳＣ８３３、ノバントロン／ミトザントロン（Ｍｉｔｒｏｘａｎ
ｔｒｏｎｅ）、メタレット（Ｍｅｔａｒｅｔ）／スラミン、バチマスタット（Ｂ
ａｔｉｍａｓｔａｔ）、Ｅ７０７０、ＢＣＨ４５５６、ＣＳ−６８２、９−ＡＣ
、ＡＧ３３４０、ＡＧ３４３３、Ｉｎｃｅｌ／ＶＸ−７１０、ＶＸ−８５３、Ｚ
Ｄ０１０１、ＩＳＩ６４１、ＯＤＮ ６９８、ＴＡ ２５１６／マミスタット（
Ｍａｒｍｉｓｔａｔ）、ＢＢ２５１６／マミスタット、ＣＤＰ ８４５、Ｄ２１
６３、ＰＤ１８３８０５、ＤＸ８９５１ｆ、レモナール（Ｌｅｍｏｎａｌ）ＤＰ
２２０２、ＦＫ ３１７、ピシバニール／ＯＫ−４３２、ＡＤ ３２／バルル
ビシン（Ｖａｌｒｕｂｉｃｉｎ）、メタステロン（Ｍｅｔａｓｔｒｏｎ）／スト
ロンチウム誘導体、テモダール（Ｔｅｍｏｄａｌ）／テモゾロミド、エバセット
（Ｅｖａｃｅｔ）／リポソームドキソルビシン、ユタキサン（Ｙｅｗｔａｘａｎ
）／パクリタキセル、タキソール／パクリタキセル、キセロード（Ｘｅｌｏａｄ
）／カペシタビン、フルツロン／ドキシフルリジン、シクロパックス（Ｃｙｃｌ
ｏｐａｘ）／経口パクリタキセル、経口タキソイド（Ｔａｘｏｉｄ）、ＳＰＵ−
０７７／シスプラチン、 ＨＭＲ １２７５／フラボピリドール（Ｆｌａｖｏｐ
ｉｒｉｄｏｌ）、ＣＰ−３５８ （７７４）／ＥＧＦＲ、ＣＰ−６０９（７５４
）／ＲＡＳ オンコジーンインヒビター、ＢＭＳ−１８２７５１／経口白金、Ｕ
ＦＴ（テガフール／ウラシル）、エルガミソール（Ｅｒｇａｍｉｓｏｌ）／レバ
ミゾール、エニルウラシル（Ｅｎｉｌｕｒａｃｉｌ）／７７６Ｃ８５／５ＦＵエ
ンハンサー、カンプト／レバミゾール、カンプトサール（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ）
／イリノテカン、ツモデックス（Ｔｕｍｏｄｅｘ）／ラリトレキシド（Ｒａｌｉ
ｔｒｅｘｅｄ）、ロイスタチン（Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ）／クラドリビン、パクキ
セス（Ｐａｘｅｘ）／パクリタキセル、ドキシル／リポソームドキソルビシン、
カエリックス（Ｃａｅｌｙｘ）／リポソームドキソルビシン、フルダラ／フルダ
ラビン、ファーマルビシン（Ｐｈａｒｍａｒｕｂｉｃｉｎ）／エピルビシン、デ
ポサイト（ＤｅｐｏＣｙｔ）、ＺＤ１８３９、ＬＵ ７９５５３／ビス−ナフタ
ルイミド（Ｂｉｓ−Ｎａｐｈｔａｌｉｍｉｄｅ）、ＬＵ １０３７９３／ドラス
タチン、カエチクス（Ｃａｅｔｙｘ）／リポソームドキソルビシン、ジェムザー
ル／ゲムシタビン、ＺＤ ０４７３／アノルメッド（Ａｎｏｒｍｅｄ）、ＹＭ
１１６、ヨード種、ＣＤＫ４およびＣＤＫ２インヒビター、ＰＡＲＰインヒビタ
ー、Ｄ４８０９／デキシフォスアミド（Ｄｅｘｉｆｏｓａｍｉｄｅ）、イフェス
（Ｉｆｅｓ）／メスネクス（Ｍｅｓｎｅｘ）／イフォサミド（ｉｆｏｓａｍｉｄ
ｅ）、ブモン（Ｖｕｍｏｎ）／テニポシド、パラプラチン／カルボプラチン、プ
ラチノール（Ｐｌａｎｔｉｎｏｌ）／シスプラチン、ベペシド（Ｖｅｐｅｓｉｄ
ｅ）／エトポシド、ＺＤ ９３３１、タキソティア／ドセタキセル、グアニンア
ラビノシドのプロドラッグ、タキサンアナログ、ニトロソ尿素、メルファランの
ようなアルキル化剤、シクロホスファミド、アミノグルテチミド、アスパラギナ
ーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、クロラムブシル、塩酸シタラビン、ダク
チノマイシン、塩酸ダウノルビシン、エストラムスチンリン酸ナトリウム、エト
ポシド（ＶＰ１６−２１３）、フロクスウリジン、フルオロウラシル（５−ＦＵ
）、フルタミド、ヒドロキシ尿素（ヒドロキシカルバミド）、イフォサミド、イ
ンターフェロンアルファ−２ａ、インターフェロンアルファ−２ｂ、酢酸ロイプ
ロリド（ＬＨＲＨ−放出因子アナログ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、塩酸メクロ
レタミン（ナイトロジェンマスタード）、メルカプトプリン、メスナ、ミトーテ
ン（ｏ，ｐ’−ＤＤＤ）、塩酸ミトザントロン、オクトレオチド、プリカマイシ
ン、塩酸プロカルバジン，ストレプトゾシン、クエン酸タモキシフェン、チオグ
アニン、チオテパ、硫酸ビンブラスチン、アムサクリン（ｍ−ＡＭＳＡ）、アザ
シチジン、エリトロポイエチン、ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）、インターロ
イキン ２、ミトグアゾン（メチル−ＧＡＧ；メチルグリオキサールビス−グア
ニルヒドラゾン；ＭＧＢＧ）、ペントスタチン（２’デオキシコホルマイシン）
、セムスチン（メチル−ＣＣＮＵ）、テニポシド（ＶＭ−２６）ならびに硫酸ビ
ンデシン。

【００１９】 いくつかの好ましい実施形態において、化学療法剤は、以下からなる群から選
択される：メトトレキサート、ビンクリスチン、アドリアマイシン、シスプラチ
ン、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダカルバジン、タキ
ソール、バルルビシン（ｖａｌｒｕｂｉｃｉｎ）、ノバントロン／ミトザントロ
ン（Ｍｉｔｒｏｘａｎｔｒｏｎｅ）、エバセット（Ｅｖａｃｅｔ）／リポソーム
ドキソルビシン、ユタキサン（Ｙｅｗｔａｘａｎ）／パクリタキセル、タキソー
ル／パクリタキセル、ＳＰＵ−０７７／シスプラチン、ＨＭＲ １２７５／フラ
ボピリドール（Ｆｌａｖｏｐｉｒｉｄｏｌ）、ＢＭＳ−１８２７５１／経口白金
、リュ−スタチン（Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ）／クラドリビン（Ｃｌａｄｒｉｂｉｎ
ｅ）、パクキセス（Ｐａｘｅｘ）／パクリタキセル（Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、
ドキシル（Ｄｏｘｉｌ）／リポソームドキソルビシン、カエリックス（Ｃａｅｌ
ｙｘ）／リポソームドキソルビシン、フルダラ／フルダラビン、ファーマルビシ
ン（Ｐｈａｒｍａｒｕｂｉｃｉｎ）／エピルビシン、デポサイト（ＤｅｐｏＣｙ
ｔ）、カエチクス（Ｃａｅｔｙｘ）／リポソームドキソルビシン、ジェムザール
／ゲムシタビン、イフェス（Ｉｆｅｓ）／メスネクス（Ｍｅｓｎｅｘ）／イフォ
サミド（ｉｆｏｓａｍｉｄｅ）、ブモン（Ｖｕｍｏｎ）／テニポシド、パラプラ
チン／カルボプラチン、プラチノール（Ｐｌａｎｔｉｎｏｌ）／シスプラチン、
ベペシド（Ｖｅｐｅｓｉｄｅ）／エトポシド、タキソティア／ドセタキセル、グ
アニンアラビノシドのプロドラッグ、ニトロソ尿素、メルファランおよびシクロ
ホスファミドのようなアルキル化剤、アスパラギナーゼ、ブスルファン、カルボ
プラチン、クロラムブシル、塩酸シタラビン、塩酸ダウノルビシン、 エトポシ
ド（ＶＰ１６−２１３）、ヒドロキシ尿素（ヒドロキシカルバミド）、イフォサ
ミド、インターフェロンアルファ−２ａ、インターフェロンアルファ−２ｂ、ロ
ムスチン（ＣＣＮＵ）、塩酸メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード）、メ
ルカプトプリン、塩酸ミトザントロン、塩酸プロカルバジン、チオグアニン、チ
オテパ、硫酸ビンブラスチン、アザシチジン、インターロイキン−２、ペントス
タチン（２’デオキシコホルマイシン）、テニポシド（ＶＭ−２６）、ＧＭ−Ｃ
ＳＦならびに硫酸ビンデシン。

【００２０】 癌ワクチンは、ＥＧＦ、抗−イディオタイプ癌ワクチン、Ｇｐ７５抗原、ＧＭ
Ｋ黒色腫ワクチン、ＭＧＶガングリオシド結合ワクチン（ＭＧＶ ｇａｎｇｌｉ
ｏｓｉｄｅ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ ｖａｃｃｉｎｅ）、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、Ｏｖ
ａｒｅｘ、Ｍ−Ｖａｘ、Ｏ−Ｖａｘ、Ｌ−Ｖａｘ、ＳＴｎ−ＫＨＬ ｔｈｅｒａ
ｔｏｐｅ、ＢＬＰ２５（ＭＵＣ−１）、リポソームイディオタイプワクチン、メ
ラシン（ｍｅｌａｃｉｎｅ）、ペプチド抗原ワクチン、毒素／抗原ワクチン、Ｍ
ＶＡ−ベースのワクチン（ＭＶＡ−ｂａｓｅｄ ｖａｃｃｉｎｅ）、ＰＡＣＩＳ
、ＢＣＧワクチン、ＴＡ−ＨＰＶ、ＴＡ−ＣＩＮ、ＤＩＳＣ−ウイルス、および
ＩｍｍｕＣｙｓｔ／ＴｈｅｒａＣｙｓからなる群より選択され得る。生物学的応
答変更因子としては、ＩＬ−２のようなインターフェロンおよびリンホカインが
挙げられる。ホルモン補充療法としては、タモキシフェン単独またはプロゲステ
ロンとの併用が挙げられる。さらなる実施形態において、癌療法は、インターフ
ェロン−α（例えば、ＩＮＴＲＯＮ（登録商標）Ａ、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）である
。

【００２１】 癌は、基底細胞癌、膀胱癌、骨癌、脳および中枢神経系（ＣＮＳ）の癌、乳癌
、子宮頚癌、結腸癌および直腸癌、結合組織癌、食道癌、眼の癌、腎臓癌、喉頭
癌、白血病、肝臓癌、肺癌、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、黒色腫、
骨髄腫、口腔癌（例えば、唇、舌、口および咽頭）、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌
、横紋筋肉腫、皮膚癌、胃癌，精巣癌ならびに子宮癌からなる群より選択され得
る。好ましい実施形態において、処置されるべき癌は、骨癌、脳およびＣＮＳの
癌、結合組織癌、食道癌、眼の癌、ホジキンリンパ腫、喉頭癌，口腔癌（例えば
、唇、舌、口および咽頭）、皮膚癌、ならびに精巣癌からなる群より選択され得
る。

【００２２】 別の局面において、本発明は、キットを包含する。このキットは、少なくとも
２つの容器（第一の容器は、免疫刺激性核酸を収容しており、第二の容器は、細
胞表面抗原に特異的な抗体を収容している）、および免疫刺激性核酸が細胞表面
抗原の発現をアップレギュレートするか否かを決定するために細胞をスクリーニ
ングするための使用説明書、を備えるパッケージを含む。１つの実施形態におい
て、抗体は、抗−ＣＤ２０抗体、抗−ＣＤ１９抗体および抗−ＣＤ２２抗体から
なる群より選択される。

【００２３】 本発明によって有用な核酸は、免疫刺激性核酸であり、いくつかの実施形態に
おいて、これらの核酸は、非メチル化ＣｐＧモチーフ、免疫刺激性Ｔ−リッチ核
酸、免疫刺激性ポリ−Ｇ核酸、細菌ＤＮＡ、酵母ＤＮＡ、または真核生物ＤＮＡ
を有する免疫刺激性ＣｐＧ核酸である。

【００２４】 いくつかの実施形態において、核酸は、ストリンジェントな条件下でゲノムＤ
ＮＡまたはＲＮＡとハイブリダイズしない。他の実施形態において、核酸は、ス
トリンジェントな条件下でゲノムＤＮＡまたはＲＮＡとハイブリダイズする。

【００２５】 核酸は、天然の結合を有してもよいし、少なくとも１つの修飾した骨格ヌクレ
オチド間結合を含んでもよい。いくつかの実施形態において、修飾した骨格とは
、リン酸骨格修飾である。他の実施形態において、修飾した骨格とは、ペプチド
修飾したオリゴヌクレオチド骨格である。核酸はまた、天然の塩基または修飾し
た塩基を含み得る。ヌクレオチド骨格は、キメラであり得るか、またはヌクレオ
チド骨格は、完全に修飾されている。

【００２６】 免疫刺激性核酸は、６ヌクレオチドより長い、任意の長さを有し得るが、いく
つかの実施形態において、この核酸は、８と１００との間のヌクレオチド残基長
である。他の実施形態において、核酸は、少なくとも２０ヌクレオチド、少なく
とも２４ヌクレオチド、少なくとも２７ヌクレオチド、または少なくとも３０ヌ
クレオチドを含む。核酸は、一本鎖または二本鎖であり得る。いくつかの実施形
態において、核酸は単離され、そして他の実施形態において、核酸は合成核酸で
あり得る。

【００２７】 １つの実施形態におけるＣｐＧ核酸は、少なくとも以下の式：５’Ｘ_１Ｘ_２Ｃ
ＧＸ_３Ｘ_４３’を含む配列を有する、少なくとも１つの非メチル化ＣｐＧジヌク
レオチドを含み、ここで、Ｃは、非メチル化されており、Ｘ_ｌ、Ｘ_２、Ｘ_３およ
びＸ_４は、ヌクレオチドである。１つの実施形態において、ＣｐＧ核酸の５’Ｘ_Ｉ Ｘ_２ＣＧＸ_３Ｘ_４３’配列は非パリンドローム配列であり、そして、他の実施
形態において、この配列はパリンドローム配列である。

【００２８】 いくつかの実施形態において、Ｘ_ＩＸ_２は、ＧｐＴ、ＧｐＧ、ＧｐＡ、ＡｐＡ
、ＡｐＴ、ＡｐＧ、ＣｐＴ、ＣｐＡ、ＣｐＧ、ＴｐＡ、ＴｐＴおよびＴｐＧから
なる群より選択されるヌクレオチドであり；そして、Ｘ_３Ｘ_４は、ＴｐＴ、Ｃｐ
Ｔ、ＡｐＴ、ＴｐＧ、ＡｐＧ、ＣｐＧ、ＴｐＣ、ＡｐＣ、ＣｐＣ、ＴｐＡ、Ａｐ
ＡおよびＣｐＡからなる群より選択されるヌクレオチドである。他の実施形態に
おいて、Ｘ_１Ｘ_２は、ＧｐＡまたはＧｐＴであり、そしてＸ_３Ｘ_４は、ＴｐＴで
ある。さらに他の実施形態において、Ｘ_１もしくはＸ_２またはこれらの両方はプ
リンであり、そしてＸ_３もしくはＸ_４またはこれらの両方はピリミジンであるか
、あるいは、Ｘ_ｌＸ_２はＧｐＡであり、そしてＸ_３もしくはＸ_４またはこれらの
両方はピリミジンである。１つの実施形態において、Ｘ_２はＴであり、そしてＸ_３ はピリミジンである。

【００２９】 他の実施形態において、ＣｐＧ核酸は、配列番号１９、３５〜３７、３９〜４
２、９１、９２、１０１、１０８、１１１、１３５、１４１、１５１、２７４、
２７７、２８０、２８６、３１９、３５０、３６３、３６８、３７５、４９５〜
４９８、５１７、５１８、５２４、５２９、５４５、５４８、５４９、５５５、
５５７、５６０〜５６３、５６６、５８５、５９０、５９１、５９５、５９９、
６０３、６０５、６１１、６１４〜６１６、６５０、６７６、６７９、６８２、
６８４、７０２、７０３、７０７〜７１０、７１７〜７２０、７２９〜７３２、
７５２、７５５、７７０、および８０１〜８０３からなる群より選択される配列
を有する。

【００３０】 いくつかの実施形態において、Ｔ−リッチ免疫刺激性核酸は、５’ＴＴＴＴ３
’を含むポリ−Ｔ核酸である。さらに他の実施形態において、ポリ−Ｔ核酸は、
５’Ｘ_１Ｘ_２ＴＴＴＴＸ_３Ｘ_４３’を含み、ここで、Ｘ_ｌ、Ｘ_２、Ｘ_３およびＸ_４ は、ヌクレオチドである。いくつかの実施形態において、Ｘ_１Ｘ_２は、ＴＴで
あり、そして／または、Ｘ_３Ｘ_４は、ＴＴである。他の実施形態において、Ｘ_１ Ｘ_２は、ＴＡ、ＴＧ、ＴＣ、ＡＴ、ＡＡ、ＡＧ、ＡＣ、ＣＴ、ＣＣ、ＣＡ、ＣＧ
、ＧＴ、ＧＧ、ＧＡおよびＧＣからなる群より選択され；そして／またはＸ_３Ｘ_４ は、ＴＡ、ＴＧ、ＴＣ、ＡＴ、ＡＡ、ＡＧ、ＡＣ、ＣＴ、ＣＣ、ＣＡ、ＣＧ、
ＧＴ、ＧＧ、ＧＡおよびＧＣからなる群より選択される。

【００３１】 Ｔ−リッチ免疫刺激性核酸は、単一のポリ−Ｔモチーフのみを有し得るか、ま
たは複数のポリ−Ｔ核酸モチーフを有し得る。いくつかの実施形態において、Ｔ
−リッチ免疫刺激性核酸は、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ
、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、または少なくとも８つの
Ｔモチーフを含む。他の実施形態において、Ｔ−リッチ免疫刺激性核酸は、少な
くとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６
つ、少なくとも７つ、または少なくとも８つのＣｐＧモチーフを含む。いくつか
の実施形態において、複数のＣｐＧモチーフおよびポリ−Ｔモチーフは、分散さ
れている。

【００３２】 さらに他の実施形態において、複数のポリ−Ｔモチーフのうちの少なくとも１
つは、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少
なくとも７つ、少なくとも８つ、または少なくとも９つの隣接Ｔヌクレオチド残
基を含む。他の実施形態において、複数のポリ−Ｔモチーフは、少なくとも３つ
のモチーフであり、ここで、少なくとも３つのモチーフの各々は、少なくとも３
つの隣接Ｔヌクレオチド残基を含むか、または複数のポリ−Ｔモチーフは、少な
くとも４つのモチーフであり、ここで、少なくとも４つのモチーフの各々は、少
なくとも３つの隣接Ｔヌクレオチド残基を含む。

【００３３】 Ｔ−リッチ免疫刺激性核酸は、１つ以上のＣｐＧモチーフを含み得る。他の実
施形態において、Ｔ−リッチ免疫刺激性核酸は、１つ以上のＣｐＧジヌクレオチ
ドを含まない。

【００３４】 他の実施形態において、Ｔ−リッチ免疫刺激性核酸は、ポリＡモチーフ、ポリ
−Ｇモチーフおよび/またはポリＣモチーフを有する。他の実施形態において、
Ｔ−リッチ免疫刺激性核酸は、少なくとも３つの隣接Ｃヌクレオチド残基のポリ
Ｃ配列を２つ含まない。好ましくは、Ｔ−リッチ免疫刺激性核酸は、少なくとも
３つ隣接Ａヌクレオチド残基のポリＡ配列を２つ含まない。他の実施形態におい
て、Ｔ−リッチ免疫刺激性核酸は、２５％を越えるＣのヌクレオチド組成物、ま
たは２５％を越えるＡのヌクレオチド組成物を含む。さらに他の実施形態におい
て、Ｔ−リッチ免疫刺激性核酸は、ポリ−Ｃ配列、ポリ−Ｇ配列またはポリ−Ａ
配列を含まない。

【００３５】 いくつかの場合において、Ｔ−リッチ免疫刺激性核酸は、ポリ−Ｔモチーフを
含まなくてもよく、むしろ２５％を越えるＴのヌクレオチド組成物を含む。他の
実施形態において、Ｔ−リッチ免疫刺激性核酸は、ポリ−Ｔモチーフを有し得、
そしてまた、２５％を越えるＴのヌクレオチド組成物も含む。いくつかの実施形
態において、Ｔ−リッチ免疫刺激性核酸は、２５％を越えるＴヌクレオチド残基
、３０％を越えるＴヌクレオチド残基、４０％を越えるＴヌクレオチド残基、５
０％を越えるＴヌクレオチド残基、６０％を越えるＴヌクレオチド残基、８０％
を越えるＴヌクレオチド残基、または９０％を越えるＴヌクレオチド残基のヌク
レオチド組成物を含む。

【００３６】 いくつかの実施形態において、ポリ−Ｇ核酸は、５’Ｘ_ｌＸ_２ＧＧＧＸ_３Ｘ_４ ３’を含み、ここで、Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３およびＸ_４は、ヌクレオチドである。あ
る実施形態において、Ｘ_３およびＸ_４のうち少なくとも一方がＧであるか、また
はＸ_３およびＸ_４の両方がＧである。他の実施形態において、ポリ−Ｇ核酸は、
以下の式：５’ＧＧＧＮＧＧＧ３’を含み、ここで、Ｎは、０と２０との間のヌ
クレオチドを表す。さらに他の実施形態において、ポリ−Ｇ核酸は、以下の式：
５’ＧＧＧＮＧＧＧＮＧＧＧ３’を含み、ここで、Ｎは、０と２０との間のヌク
レオチドを表す。

【００３７】 ポリ−Ｇ免疫刺激性核酸は、１つ以上のＣｐＧモチーフまたはＴ−リッチモチ
ーフを含み得る。他の実施形態において、ポリ−Ｇ核酸は、１つ以上のＣｐＧジ
ヌクレオチドまたはポリ−Ｔモチーフを含まない。

【００３８】 本発明の制限の各々は、本発明の種々の実施形態を表し得る。従って、任意の
１つのエレメントまたはエレメントの組み合わせを含む本発明の制限の各々は、
本発明の各々の局面に含まれ得ることが予測される。

【００３９】 （詳細な説明） 現在の癌の処置は、しばしば、効果がなく、かつ高い程度の患者の羅患率に関
わっている。本発明は、免疫刺激性核酸、抗体および必要に応じて癌療法を併用
した、癌のより有効な処置のための方法および手順を提供する。

【００４０】 本発明は、免疫賦活核酸の被験体への投与が、細胞表面抗原の発現（癌細胞表
面のＣＤ２０、ＣＤ１９、およびＣＤ２２を含む）を誘導し、そしてこれらの抗
原のこの誘導が、増強された抗体依存性細胞の細胞毒性（ＡＤＣＣ）をもたらす
という驚くべき発見に一部基づいている。ＣｐＧオリゴヌクレオチドが、エフェ
クター細胞に影響することによって（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を
活性化することによって）ＡＤＣＣを増強させると以前は考えられていた。現在
は免疫賦活核酸が特定の抗原（ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２２（これらのそれぞ
れが特定の抗体治療によって標的化され得る））の誘導を実際に生じるというこ
とが本発明によって発見された。免疫賦活核酸が癌細胞の表面の特定の標的抗原
の発現をアップレギュレーションし得るという発見は、これらの細胞表面抗原と
相互作用する特定の抗体との組み合わせで免疫賦活核酸を使用する治療の開発を
支援する。従って、１つの局面において、本発明は癌を治療または予防するため
の方法を提供し、この方法は、免疫賦活核酸およびＣＤ２０、ＣＤ１９、および
ＣＤ２２と特異的に相互作用する抗体の組み合わせを、癌を予防または処置する
のに有効な量で、被験体に投与する工程を包含する。

【００４１】 さらに、これらおよび他の細胞表面抗原の増加した発現は、研究されている腫
瘍細胞の組織学的状態に大きく依存して変化することが発見された。免疫賦活核
酸の異なる型の原発性悪性Ｂ細胞および反応性濾胞過形成（ｒｅａｃｔｉｖｅ
ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ）への影響が広く調査された。
試験した全てのＢ細胞リンパ腫細胞は、免疫賦活核酸に応答し、大きさおよび粒
度（ｇｒａｎｕｌａｒｉｔｙ）を増し、活性化マーカー（ＣＤ８０、ＣＤ８６、
ＣＤ４０、ＣＤ５４、ＣＤ６９）をアップレギュレーションし、そして抗原提示
分子（クラスＩの主な組織適合性複合体（ＭＨＣＩ）、クラスＩＩ主要組織適合
複合体（ＭＨＣＩＩ））をアップレギュレーションする。コントロールであるポ
リＣオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）は、少しの影響しか示さなかった。
免疫賦活核酸によって誘導される表現型の変化の程度は、サンプルとサンプルで
異なった。免疫賦活核酸（コントロール核酸ではない）は、反応性濾胞過形成由
来のＢ細胞の表現型を変えることなく、悪性Ｂ細胞の同時刺激分子（例えば、Ｃ
４０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ５４）の発現を増加した。免疫賦活核酸はまた
、ほとんどのサンプルでクラスＩ ＨＭＣおよびクラスＩＩ ＭＨＣの両方の発
現を増強した。ＣＤ２０の発現は、最も顕著にはＢ−ＣＬＬおよび辺縁層リンパ
腫において、免疫賦活核酸に応答し増加した。

【００４２】 さらに、逆の関係が特定の細胞表面抗原のベースラインの発現と免疫賦活核酸
へ曝露した後の細胞表面抗原の発現との間で見出された。従って、これらの分子
の発現における最も有意な増加は、最低のベースラインレベルを有する（または
ベースラインレベルを有さない）これらのサンプル中で見出された。これらのデ
ータは、免疫賦活核酸が、悪性Ｂ細胞の同時刺激分子の低い発現（これは低レベ
ルの活性化に対応する）を逆転し得るが、既に活性化された状態の細胞に対する
これらの影響はそれほど顕著ではない。

【００４３】 従って、本発明は、リンパ腫患者のための適切な治療を同定するための方法、
およびこの治療を使用して患者を処置するための方法に関連する。この方法は、
リンパ腫の患者からＢ細胞を単離する工程、および悪性Ｂ細胞で発現された表面
抗原と正常Ｂ細胞で発現されたこれらを比較する工程によって達成され得る。悪
性Ｂ細胞で低レベルで発現されるか、またはまったく発現されない抗原が同定さ
れ得る。次に、被験体を免疫賦活核酸および抗体（悪性Ｂ細胞で低レベルで発現
されるか、まったく発現されない抗原を特異的に認識する）の組み合わせを使用
して処置し得る。

【００４４】 本発明はまた、モノクローナル抗体治療に耐性の癌を処置するために有用であ
る。免疫賦活核酸が腫瘍細胞の耐性を逆転し得、そして腫瘍細胞（以前には非応
答性または弱い応答性であった）を治療に感受性にし得ることが、本発明により
発見された。詳細には、免疫賦活核酸が、耐性腫瘍細胞の表現型の変化を生じ得
、このことがモノクローナル抗体治療への感受性をその細胞に与えるということ
が発見された。例えば、モノクローナル抗ＣＤ２０抗体Ｒｉｔｕｘｉｍａｂは、
いくつかの臨床試験で効果があることが示され、そして最近濾胞性Ｂ細胞リンパ
腫の治療として認められた。Ｍａｌｏｎｅｙ ＤＧ、Ｓｅｍｉｎ Ｏｎｃｏｌ
２６：７４〜８（１９９９）；Ｆｏｒａｎ ＪＭら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ
１８：３１７〜２４（２０００）；Ｗｉｔｚｉｇ ＴＥら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏ
ｎｃｏｌ １７：３７９３〜８０３（１９９９）；Ｄａｖｉｓ ＴＡら、Ｊ Ｃ
ｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ １７：１８５１〜７（１９９９）；Ｗｉｓｅｍａｎ ＧＡ
ら、Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５：３２８１ｓ〜３２８６ｓ（１９９９
）；Ｇｒｉｌｌｏ−Ｌｏｐｅｚ ＡＪら、Ｓｅｍｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２６：６６
〜７３（１９９９）。リンパ腫に関して、Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ治療に続いて再発
するごくわずかな腫瘍が、ＣＤ２０の発現を欠如し得るという報告が存在する。
Ｄａｖｉｓ ＴＡら、Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５：６１１〜５（１９
９９）；Ｋｉｎｏｓｈｉｔａ Ｔら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ １６：３９１
６（１９９８）。本発明の免疫賦活核酸は、この一連の耐性腫瘍を処置するため
に有用である。さらに、Ｒｉｔｕｘｉｍｕｂは、全ての型のＢ細胞悪性疾患の処
置に有用であった。ＣＤ２０の発現は、Ｂ−ＣＬＬ細胞で比較的低く、このこと
は、Ｒｉｔｕｘｉｍｕｂがいくつかの他のＢ細胞悪性疾患よりもＣＬＬで効果が
低い理由についての説明を提供する。Ｇｒｉｎａｌｄｉ Ｌら、Ｊ Ｃｌｉｎ
Ｐａｔｈｏｌ ５１：３６４〜９（１９９８）。本発明の免疫賦活核酸はまた、
これらの腫瘍を処置するために有用である。

【００４５】 ヒト化モノクローナル抗体１Ｄ１０は、ＨＬＡ−ＤＲ改変体抗原を認識する。
Ｌｉｎｋ ＢＫら、Ｂｌｏｏｄ ８１：３３４３〜９（１９９３）。この抗体は
現在リンパ腫を有する患者で第Ｉ相臨床試験において試験中である。この抗体の
使用に対する１つの制限は、標的抗原が、Ｂ細胞リンパ腫のおよそ５０％までし
か発現されないことである。興味深いことに、その発現は、試験されたすべての
リンパ腫サンプル中で、免疫賦活核酸によってアップレギュレーションされた。
免疫賦活核酸が、標的抗原の発現を増加することによってこれらおよび他の抗体
を用いる治療の効力を増強させ得ることが、本発明により発見された。従って、
別の局面において、本発明は、免疫賦活核酸およびＨＬＡ−ＤＲに特異的な抗体
を被験体に投与することによってリンパ腫を処置するための方法を包含する。１
つの有効な抗体が、ヒト化モノクローナル抗体１Ｄ１０である。これは耐性腫瘍
を処置するために特に有用である。

【００４６】 本発明はまた、免疫賦活核酸と組み合された場合に、相乗的な免疫応答を産生
する抗体の特定のサブクラス、またはアイソタイプの発見に関連する。別のサブ
クラスまたはアイソタイプは、免疫賦活核酸と組み合わせた場合に相加的な応答
さえ提供しない。免疫賦活核酸およびＩｇＧ１アイソタイプのヒト抗体の組み合
わせが増加した（相乗的な）生存率を生じるということが本発明により発見され
た。免疫賦活核酸がＩｇＧ２アイソタイプのヒト抗体と組み合される場合には、
ＩｇＧ２抗体のみの使用を超える生存率の増加は観察されない。ＩｇＧ２アイソ
タイプ（これはマウスＩｇＧ１アイソタイプと関連する）は、Ｆｃレセプター（
これは、ＣＤ１６と命名され、ＮＫ細胞によって多量に発現される）によって認
識されると考えられている。免疫賦活核酸は、ＮＫ細胞を活性化することが公知
であり、従って、免疫賦活核酸がヒトＩｇＧ２抗体またはマウスＩｇＧ１抗体の
治療効果を増強しないということは驚くべきことである。ＮＫ細胞は、ＡＤＣＣ
に関連し、そして免疫賦活核酸によって活性化されると考えられているので、ヒ
トＩｇＧ２（またはマウスＩｇＧ１）アイソタイプ抗体が、免疫賦活核酸を投与
された場合に、相乗的応答または相加的応答さえも産生しないということは驚く
べきことであった。

【００４７】 癌細胞は、正常な増殖制御の欠失のために異常に分裂し、そして再生する細胞
である。癌細胞はたいてい少なくとも１つの遺伝的変異から生じる。いくつかの
例において、癌細胞は、発現される遺伝子およびタンパク質、ならびにこれらの
発現レベルのプロファイルに基づいて、その正常対応細胞との区別が可能である
。一般的に癌細胞において影響される遺伝子としては、オンコジーン（例えば、
ｒａｓ、ｎｅｕ／ＨＥＲ２／ｅｒｂＢ、ｍｙｂ、ｍｙｃおよびａｂｌ）ならびに
腫瘍抑制遺伝子（例えば、ｐ５３、Ｒｂ、ＤＣＣ、ＲＥＴおよびＷＴ）が挙げら
れる。これらのいくつかの遺伝子における癌関連の変異は、これらの発現の減少
または完全な欠失をもたらす。その他において、変異は、発現または活性化され
た正常対応物の改変体の発現の増加を引き起こす。

【００４８】 用語「腫瘍」は、通常新生物（これは文字通り「新しい増殖」を意味する）と
同等であり、「癌」と交互に使用される。「新生物形成疾患」は、細胞増殖、特
に新生物形成に関連する任意の疾患である。「新生物」は、新生物の発生を開始
させる発癌性因子を取り除いた後にも残存し、そして増殖する異常な組織の塊で
ある。新生物の２つの型（良性および悪性）が存在する。ほとんどすべての良性
腫瘍は、被包されており、非侵襲性である；これとは対照的に、悪性腫瘍は、ほ
とんど被包されていないが、浸潤性の破壊的な増殖によって隣接する組織を侵襲
する。この浸潤性の増殖に続いて、腫瘍細胞は、最初の腫瘍とは不連続な部位に
移植され得る。本発明の方法を使用して、以下が挙げられるが、これらに限定さ
れないヒトの新生物障害を処置し得る：肉腫、癌腫、線維腫、神経膠腫、白血病
、リンパ腫、黒色腫、骨髄腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、および横紋筋肉腫
ならびに本明細書中で記載される他の腫瘍の各々。

【００４９】 本明細書中で使用される場合「癌」は、身体器官および身体システムの正常な
機能を妨害する細胞の制御されていない増殖をいう。最初の場所から遊走し、そ
して重要な器官に播種される癌は、罹患した器官の機能的悪化によって、被験体
の死を最終的に引き起こし得る。造血癌（例えば、白血病）は、被験体の正常な
造血画分との競争に勝ち得、これによって（貧血、血小板減少、および好中球減
少の形態で）造血不全をもたらし、最終的に死を引き起こす。

【００５０】 転移は、原発性腫瘍の位置とは区別される癌細胞領域であり、原発性腫瘍から
身体の他の部分への癌細胞の蔓延から生じる。原発性腫瘍塊の診断の時点で、被
験体は、転移の存在についてモニターされ得る。転移は、特定の症状のモニタリ
ングに加えて、磁気共鳴画像化（ＭＲＩ）スキャン、コンピューター断層（ＣＴ
）スキャン、血液および血小板計数、肝機能研究、胸部Ｘ線および骨スキャン単
独でか、または組合せて使用することによって、最も頻繁に検出される。

【００５１】 癌としては、基底細胞癌腫、胆管癌；膀胱癌；骨癌；脳の癌およびＣＮＳ癌；
乳癌；頚部癌；絨毛癌；結腸癌および直腸癌；結合組織癌；消化器系の癌；子宮
内膜癌；食道癌；眼癌；頭頚部癌；胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）；上
皮内新生物；腎癌（ｋｉｄｎｅｙ ｃａｎｃｅｒ）；喉頭癌；白血病；肝癌；肺
癌（例えば、小細胞および非小細胞）；ホジキン白血病および非ホジキン白血病
を含む白血病；黒色腫；骨髄腫；神経芽細胞腫；口腔癌（例えば、口唇、舌、口
、および咽頭）；卵巣癌；膵臓癌；前立腺癌；網膜芽細胞腫；横紋筋肉腫；直腸
癌；腎性癌（ｒｅｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）；呼吸器系の癌；肉腫；皮膚癌；胃癌
（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）；精巣癌；甲状腺癌；子宮癌；泌尿器系の癌
ならびに他の癌腫および肉腫が挙げられるが、これらに限定されない。

【００５２】 免疫賦活核酸および抗体は、被験体の癌を処置および予防するために有用であ
る。他に特定されない限り「被験体」は、ヒトまたは脊椎動物（イヌ、ネコ、ウ
マ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギまたは霊長類（例えば、サル）が挙げられるがこ
れらに限定されない）を意味する。従って、本発明を使用して、ヒト被験体およ
び非ヒト被験体の癌および腫瘍を処置し得る。癌は、コンパニオン動物（すなわ
ち、ネコおよびイヌ）の死を引き起こす主な原因の１つである。癌は、通常家庭
用ペットの場合、家族の一員となっている老齢の動物を襲う。１０歳よりも老齢
なイヌクレオチドの４５％は、この疾患で死ぬようである。最も一般的な処置の
選択として、外科手術、化学治療および放射性治療が挙げられる。いくらかの成
功をともなって使用される他の処置様式は、レーザー治療、寒冷療法、高体温、
および免疫療法である。処置の選択は、癌の型および蔓延の程度に依存する。悪
性の増殖が、身体の離散した部分に限定されない限り、正常細胞に影響すること
なしに悪性組織のみを取り除くことは困難である。

【００５３】 イヌおよびネコにおいて一般的に診断される悪性障害として、リンパ肉腫、骨
肉腫、胸部腫瘍（ｍａｍｍａｒｙ ｔｕｍｏｒ）、肥満細胞腫、脳腫瘍、黒色腫
、腺扁平上皮癌、カルチノイド肺腫瘍、気管支腺腫瘍（ｂｒｏｎｃｈｉａｌ ｇ
ｌａｎｄ ｔｕｍｏｒ）、細気管支腺癌、線維腫、粘液軟骨腫、肺肉腫、神経肉
腫、骨腫、乳頭腫、網膜芽細胞腫、ユーイング肉腫、ウィルムス腫瘍、バーキッ
トリンパ腫、小神経膠細胞腫、神経芽細胞腫、骨巨細胞腫、口腔新生物形成（ｏ
ｒａｌ ｎｅｏｐｌａｓｉａ）、線維肉腫、骨肉腫、および横紋筋肉腫が挙げら
れるが、これらに限定されない。イヌにおける他の新生物形成として、生殖扁平
上皮癌、感染性性病腫瘍（ｔｒａｎｓｍｉｓｓａｂｌｅ ｖｅｎｅｒｅａｌ ｔ
ｕｍｏｒ）、精巣腫瘍、セミノーマ、セルトーリ細胞腫、血管腫、組織球腫、緑
色腫（顆粒球性肉腫）、角膜乳頭腫、角膜扁平上皮癌、血管肉腫、胸膜中皮腫、
基底細胞腫瘍、胸腺腫、胃の腫瘍、副腎癌、口腔乳頭腫症、血管腫および嚢胞腺
腫が挙げられる。ネコにおいて診断されるさらなる悪性疾患として、濾胞性リン
パ腫、腸リンパ肉腫（ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｌｙｍｐｈｏｓａｒｃｏｍａ）、
線維肉腫および肺性扁平上皮細胞癌が挙げられる。フェレット（これまで以上に
人気のあるペット）は、インスリノーマ、リンパ腫、肉腫、神経腫、膵島細胞腫
瘍、胃のＭＡＬＴリンパ腫および胃腺癌を発症することが公知である。

【００５４】 農業家畜に罹患する新生物形成として、白血病、血管腫、およびウシ眼新生物
形成（ウシにおいて）；包皮線維肉腫（ｐｒｅｐｕｔｉａｌ ｆｉｂｒｏｓａｒ
ｃｏｍａ）、潰瘍性扁平上皮細胞癌、包皮癌、結合組織新生物形成および肥満細
胞癌（ウマにおいて）；肝細胞癌（スワンにおいて）；リンパ腫および肺腺腫症
（ヒツジにおいて）；肺肉腫、リンパ腫、ラウス肉腫、横紋筋肉腫、線維肉腫、
腎芽細胞腫、Ｂ細胞リンパ腫およびリンパ性白血病（鳥類において）；網膜芽細
胞腫、肝性新生物形成、リンパ肉腫（リンパ芽球性リンパ腫）、プラズマ細胞白
血病（ｐｌａｓｍａｃｙｔｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ）および魚類浮き袋肉腫（
魚類において）、乾酪性リンパ節炎（ＣＬＡ）；ヒツジおよびヤギの慢性疾患、
感染性疾患、伝染性疾患は、細菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｓｅｄ
ｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）によって引き起こされ、ヒツジの伝染性肺腫瘍は
、ｊａａｇｓｉｅｋｔｅによって引き起こされる。

【００５５】 １つの局面において、癌を処置するための方法が提供され、この方法は、癌を
有する被験体に本発明の組成物を投与する工程を包含する。「癌を有する被験体
」は、癌を有すると診断された被験体である。いくつかの実施形態において、固
形腫瘍（ｓｏｌｉｄ ｍａｓｓ ｔｕｍｏｒ）によって特徴付けられる癌の型を
有する。固形腫瘍塊（存在する場合）は、原発性腫瘍塊であり得る。原発性腫瘍
塊は、組織における癌細胞の増殖をいい、これはその組織の正常細胞の形質転換
から生じる。ほとんどの場合において、原発性腫瘍塊は、嚢腫の存在によって同
定され、これは、目視検査または触診法によってか、または組織お不規則な形状
、構成、および重量によって見出され得る。

【００５６】 しかし、いくつかの原発性腫瘍は、触診できず、そして医学的画像化技術（例
えば、Ｘ線（例えば、マンモグラフィ））によるか、または針での吸入によって
のみ検出され得る。これらの後述の技術の使用は、初期検出において一般的であ
る。組織内の癌細胞の分子分析および表現型分析は、通常、癌が組織に対して内
因性であるか、または病変が別の部位からの転移に起因するかを確認する。

【００５７】 予防的処置方法に関して、本発明は、癌を発症する危険にある被験体に、本発
明の組成物を投与することを目的とする。癌を発症する危険性にある被験体は、
癌が発症する可能性が高い。これらの被験体として、例えば、遺伝的な異常性（
遺伝的異常の存在は、癌を発症するより高い可能性との相関関係を有することが
実証されている）を有する被験体が挙げられる。癌を引き起こす因子（例えば、
タバコ、アスベスト、または他の化学的毒素）に曝露された被験体はまた、本明
細書中で使用される癌を発症する危険性のある被験体である。癌を発症する危険
性のある被験体は、免疫賦活核酸、抗体、および必要に応じて癌治療を用いて、
定期的な規準（例えば、毎月）で処置され、癌増殖が開始されるのを予防する。
本発明のこの局面は、被験体が継続的な基準で癌を引き起こす因子に曝露される
特定の職業に雇用された場合に特に有利である。例えば、空中で浮遊しているか
、または吸入される発癌性物質（例えば、タバコの煙およびアスベスト）は、肺
癌に関連する。

【００５８】 発癌性物質は、悪性癌の発症を開始し得る因子である。発癌性物質への曝露は
、一般的にＤＮＡに直接影響することによって、被験体における新生物形成の危
険性を増大させる。発癌性物質は、いくつかの形態（例えば、化学薬品、電磁放
射線）のうちの１つの形態を取り得るか、または不活性な固形物であり得る。

【００５９】 ヒトの癌において因果関係を確立するための十分な証拠が存在する物質は、確
認済みのヒト発癌性物質と呼ばれる。この分類に含まれる物質は以下の物質であ
る：アフラトキシン、アルコール飲料、アルミニウム製品、４−アミノビフェニ
ル、ヒ素およびヒ素化合物、アスベスト、オーラミンの製造、アザチオプリン、
ベンゼン、ベンジジン、ベリリウムおよびベリリウム化合物、キンマタバコ、ビ
ス（クロロメチル）エーテルおよびクロロメチルメチルエーテル（技術的グレー
ド）、ブーツおよび靴の製造および修復（職業上の曝露）、１，４ブタンジオー
ルジメタンスルホネート（Ｍｙｌｅｒａｎ）、カドミウムおよびカドミウム化合
物、クロラムブシル、クロロナファジン（Ｃｈｌｏｒｎａｐｈａｚｉｎｅ）、１
−（２−クロロエチル）−３−（４−メチルシクロヘキシル）−１ニトロソウレ
ア、クロロメチルメチルエーテル（技術的）、クロミウム化合物（六価）、ガス
化石炭、コールタールピッチ、コールタール、コークス製造、シクロホスファミ
ド、シクロスポリン、エリオナイト（Ｅｒｉｏｎｉｔｅ）、エチレンオキシド、
家具およびキャビネット製造、ラドンに対する曝露を伴なう地下赤鉄鋼採鉱、鉄
およびスチールの発掘、イソプロピルアルコール製造（強酸工程）、マゼンタ染
料の製造、メルファラン、８−メトキシソラレン（メトキサレン）＋紫外線照射
、未処理の鉱油および穏やかに処理された油、ＭＯＰＰおよび他の組み合わせら
れた癌の化学治療、マスタードガス（硫黄マスタード）、２−ナフチルアミン、
ニッケルおよびニッケル化合物（実質的に硫酸塩および硫化物）、非ステロイド
エストロゲン（群の全てである必要はない）（ジエチルスチルベストロール、エ
ストロゲン置換治療、ならびに混合型経口避妊薬および連続的な経口避妊薬（ｓ
ｅｑｕｅｎｔｉａｌ ｏｒａｌ ｃｏｎｔｒａｃｅｐｔｉｖｅ））、ステロイド
エストロゲン（群の全てではない）、塗装工（塗装工としての職業的曝露）、フ
ェナセチン（類似の混合物を含む）、ゴム工業、塩魚（中国風）、日射、シェー
ル油、すす、硫酸（無機性強酸の硫酸ミストへの職業的な曝露）、タルクを含む
アスベスト形態（ａｓｂｅｓｔｉｆｏｒｍ）の繊維、チオテパ、タバコ製品（無
煙）、タバコの煙、トレオスルファン（Ｔｒｅｏｓｕｌｐｈａｎ）、および塩化
ビニル。

【００６０】 ヒトにおいてより少ない程度の証拠しか存在しないが、動物研究において十分
な証拠が存在する物質、または哺乳動物細胞において明確に変異原性とみなされ
る証拠が存在する物質は、推定ヒト発癌物質として言及される。この部類の物質
として以下が挙げられる：アクリルアミド、アクリロニトリル、アドリアマイシ
ン、タンパク質同化ステロイド、アザシチジン、ベンズアントラセン、ベンジジ
ンベースの色素（技術等級）、Ｄｉｒｅｃｔ Ｂｌａｃｋ ３８、Ｄｉｒｅｃｔ
Ｂｌｕｅ ６、Ｄｉｒｅｃｔ Ｂｒｏｗｎ ９５、ベンゾピレン１，３−ブタ
ジエン、カプタホル、ビスクロロエチル−ニトロソ尿素（ＢＣＮＵ）、１−（２
−クロロエチル）−３−シクロへキシル−１−ニトロソ尿素（ＣＣＮＵ）、クロ
ラムフェニコールパラ−クロロ−オルト−トルイジンおよびその強酸塩、クロロ
ゾトシン、シスプラチン、クレオソート、ジベンズアントラセン、ディーゼルエ
ンジンの排気ガス、ジエチル硫酸、ジメチルカルバモイルクロリド、ジメチル硫
酸、エピクロロヒドリン、二臭化エチレン、Ｎ−エチル−Ｎ−ニトロソ尿素、ホ
ルムアルデヒド、ガラス製造工業（職業被爆）、アートガラス（ガラス製容器お
よび押型陶器）、美容院または理髪店（職業被爆、恐らく色素）、殺虫剤使用（
職業被爆）、ＩＱ（２−アミノ−３−メチルイミダゾ［４，５−ｆ］キノリン）
、仲間同士での飲酒（高温）、５−メトキシソラレン、４，４’−メチレンビス
（２−クロロアニリン）（ＭＯＣＡ）、Ｎ−メチル−Ｎ−ニトロ−Ｎ−ニトロソ
グアニジン（ＭＮＮＧ）、Ｎ−メチル−Ｎ−ニトロソ尿素、ナイトロジェンマス
タード、Ｎ−ニトロソジエチルアミン、Ｎ−ニトロソジメチルアミン、石油精製
（職業精製被爆）、フェナセチン、ポリ塩素化ビフェニル、ポリカルバジンヒド
ロクロリド、シリカ（結晶）、スチレン−７，８−オキシド、トリス（１−アザ
リジニル）ホスフィンスルフィド（チオテパ）、トリス（２，３−ジブロモプロ
ピル）ホスフェート、紫外線照射：Ａ、Ｂ、およびＣ（太陽灯および日光浴用ベ
ッドを含む）、および臭化ビニル。

【００６１】 動物試験において十分な証拠が存在する物質は、可能性のあるヒト発癌物質と
言及される。この部類の物質として以下が挙げられる：Ａ−Ｃ（２−アミノ−９
Ｈ−ピリド［２，３−ｂ］インドール）、アセトアルデヒド、アセトアミド、Ａ
Ｆ−２［２−（２−フリル）−３−（５−ニトロ−２−フリル）アクリルアミド
、パラ−アミノアゾベンゼン、オルト−アミノアゾベンゼン、２−アミノ−５−
（５−ニトロ−２−フリル）−１，３，４−チアジアゾール、アミトロール、オ
ルト−アニシジン、三酸化二アンチモン、アラマイト、アトラジン、アタパルガ
イト、アザセリン、ベンゾ［ｂ］フルオロアンセン、ベンゾ［ｊ］フルオロアン
セン、ベンゾ［ｋ］フルオロアンセン、ベンジルバイオレット、アスファルト（
蒸気精製アスファルトおよび空気精製アスファルトの抽出物）、ブレオマイシン
、ワラビ（Ｂｒａｃｋｅｎ ｆｅｒｎ）、ブロモジクロロメタン、ブチル化ヒド
ロキシアニソール（ＢＨＡ）、ａ−ブチロラクトン、カフェイン酸、カーボンブ
ラック抽出物、四塩化炭素、カラゲナン（分解物）、セラミック線維、クロラム
フェニコール、クロルダン、クロルデコン、クロレンド酸、平均炭素鎖長Ｃ１２
および平均の塩素化の程度約６０％の塩素化パラフィン、α−塩素化トルエン（
全ての群において必ずしもそうではない）、ベンゾトリクロリド、パラ−クロロ
アニリン、クロロホルム、クロロフェノール、ペンタクロロフェノール、２，４
，６−トリクロロフェノール、クロロフェノキシ除草剤（全ての群において必ず
しもそうではない）、４−クロロ−オルト−フェニルレンジアミン、ＣＩ Ａｃ
ｉｄ Ｒｅｄ １１４、ＣＩ Ｂａｓｉｃ Ｒｅｄ ９、ＣＩ Ｄｉｒｅｃｔ
Ｂｌｕｅ １５、Ｃｉｔｒｕｓ Ｒｅｄ Ｎｏ．２、コバルトおよびコバルト化
合物、コーヒー（膀胱）、パラ−クレシジン、サイカシン、ダカルバジン、ダン
トロン（１，８−ジヒドロキシアントラキノン）、ダウノマイシン、ＤＤＴ、Ｎ
，Ｎ’−ジアセチルベンジジン、、４，４’−ジアミノジフェニルエーテル、２
，４−ジアミノトルエン、ジベンズ［ａ，ｈ］アクリジン、ジベンズ［ａ，ｊ］
アクリジン、７Ｈ−ジベンゾ［ｃ，ｇ］カルバゾール、ジベンゾ［ａ，ｅ］ピレ
ン、ジベンゾ［ａ，ｈ］ピレン、ジベンゾ［ａ，ｉ］ピレン、ジベンゾ［ａ，ｌ
］ピレン、１，２−ジブロモ−３−クロロプロパン、パラ−ジクロロベンゼン、
３，３’−ジクロロベンゼン、３，３’−ジクロロ−４，４’−ジアミノジフェ
ニルエーテル、１，２−ジクロロエタン、ジクロロメタン、１，３−ジクロロプ
ロペン（技術等級）、ジクロルボス、ジエポキシブタン、ディーゼル燃料（航海
用）、ジ（２−エチルヘキシル）フタレート、１，２−ジエチルヒドラジン、ジ
グリシジルレゾルシノールエーテル、ジヒドロサフロール、ジイソプロピル硫酸
、３，３’−ジメトキシベンジジン、パラ−ジメチルアミノアゾベンゼン、トラ
ンス−２−［（ジメチルアミノ）メチルイミノ］−５−［２−（５−ニトロ−２
−フリル［ビニル］−１，３，４−オキシジアゾール］、２，６−ジメチルアニ
リン（２，６−キシリデン）、３，３’−ジメチルベンジジン（オルト−トリジ
ン）、ジメチルホルムアミド、１，１−ジメチルヒドラジン、１，２−ジメチル
ヒドラジン、１，６−ジニトロピレン、１，８−ジニトロピレン、１，４−ジオ
キサン、Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｂｌｕｅ、１エチルアクリレート、エチレンチオ尿
素、エチルメタンスルホネート、２−（２−ホルミルヒドラジノ）−４−（５−
ニトロ−２−フリル）チアゾール、燃料油（残留油、重油）、Ｆｕｓａｒｉｕｍ
ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｅ（これに由来する毒素）、Ｆｕｍｏｎｉｓｉｎ Ｂ１
；Ｆｕｍｏｎｉｓｉｎ Ｂ２；Ｆｕｓａｒｉｎ Ｃ、ガソリン、ガソリンエンジ
ン排気ガス、ガラスウール、Ｇｌｕ−Ｐ−１（２−アミノ−６−メチルジピリド
［１，２−ａ：３’２’−ｄ］イミダゾール）、Ｇｌｕ−Ｐ−２（−アミノジピ
リド［１，２−ａ：３’２’−ｄ］イミダゾール）、グリシドアルデヒド、グリ
セロフルビン、ＨＣ Ｂｌｕｅ Ｎｏ １、ヘプタクロル、ヘキサクロロベンゼ
ン、ヘキサクロロシクロヘキサン技術等級α異性体γ異性体（リンデン）、ヘキ
サメチルホスホラミド、ヒドラジン、インデノ［１，２，３−ｃｄ］ピレン、鉄
−デキストラン複合体、イソピレン、ラシオカルピン、鉛および鉛化合物（無機
）、マゼンタ（ＣＩ Ｂａｓｉｃ Ｒｅｄ ９を含む）、人工鉱物線維（ガラス
ウール、ロックウール、スラグウール、およびセラミック線維を参照のこと）、
ＭｅＡ−ａ−Ｃ（２−アミノ−３−メチル−９Ｈ−ピリド［２，３−ｂ］インド
ール）、ＭｅＩＱ（２−アミノ−３，４−ジメチルイミダゾ［４，５−ｆ］−キ
ノン）、ＭｅＩＱｘ（２−アミノ−３，８−ジメチルアミダゾ［４，５−ｆ］キ
ノキサリン）、メチル水銀化合物（塩化メチル水銀）、メルファラン、２−メチ
ルアジリジン、メチルアゾキシメタノールおよびその酢酸塩、５−メチルクリセ
ン、４，４’−メチレンビス（２−メチルアニリン）、４，４’−メチレンジア
ニリン、メチルメタンスルホネート、２−メチル−１−ニトロアントラキノン（
純度不明）、Ｎ−メチル−Ｎ−ニトロソウレタン、メチルチオウラシル、メトロ
ニダゾール、ミレックス、ミトマイシン、モノクロタリン５−（モルホリノメチ
ル）−３−［（５−ニトロフルフリリデン）アミノ］−２−オキサゾリジノン、
ナフェノピン、ニリダゾール、５−ニトロアセナフテン、６−ニトロクリセン、
ニトロフェン（技術等級）、２−ニトロフルオレン１−［（５−ニトロフルフリ
リデン）アミノ］−２−イミダゾリジノン、Ｎ−［４−（５−ニトロ−２−フリ
ル）−２−チアゾリル］アセトアミド、ナイトロジェンマスタード、Ｎ−オキシ
ド、ニトロロトリ酢酸（Ｎｉｔｒｏｌｏｔｒｉａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）および
その塩、２−ニトロプロパン１−ニトロピレン、４−ニトロピレン、Ｎ−ニトロ
ソジ−ｎ−ブチルアミン、Ｎ−ニトロソジエタノールアミン、Ｎ−ニトロソジ−
ｎ−プロピルアミン、３−（Ｎ−ニトロソメチルアミノ）プリピオニトリル、４
−（Ｎ−ニトロソメチルアミノ）−１−（３−ピリジル）−１−ブタノン（ＮＮ
Ｋ）、Ｎ−ニトロソメチルエチルアミン、Ｎ−ニトロソメチルビニルアミン、Ｎ
−ニトロソモルホリン、Ｎ−ニトロソノルニコチン、Ｎ−ニトロソピペリジン、
Ｎ−ニトロソピロリジン、Ｎ−ニトロソサルコシン、オクラトキシンＡ、Ｏｉｌ
Ｏｒａｎｇｅ、Ｐａｎｆｕｒａｎ Ｓ（ジヒドロキシメチルフラトジン（ｄｉ
ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌｆｕｒａｔｚｉｎｅ）を含む）、塩酸フェナゾピリ
ジン、フェノバルビタール、塩酸フェノキシベンザミン、フェニルグリシジルエ
ーテル、フェニトインＰｈＩＰ（２−アミノ−１−メチル−６−フェニルイミダ
ゾ［４，５−ｂ］ピリジン、アジアの伝統的な漬物、ポリ臭素化ビフェニル、Ｐ
ｏｎｃｅａｕ ＭＸＰｏｎｃｅａｕ ３Ｒ、臭素酸カリウム、１，３−プロパン
スルトン、酸化プロピレン、プロゲスチン、酢酸メドロキシプロゲステロン、ａ
−プロピオラクトン、プロピルチオウラシル、ロックウール、サッカリン、サフ
ロール、スラグウール、オルト−フェニルフェノールナトリウム、ステリグマト
シスチン、ストレプトゾトシン、スチレン、スルファレート、２，３，７，８−
テトラクロロジベンゾ−パラ−ジオキシン（ＴＣＤＤ）、テトラクロロエチレン
、織物製造（職業被爆）、チオセタミド（Ｔｈｉｏｃｅｔａｍｉｄｅ）、４，４
’−チオジアニリン、チオ尿素、トルエン、ジイソシアネートオルト−トルイジ
ン、トクサフェン（ポリ塩素化カンフェン）、トリクロロメチン（塩酸トリムス
チン）、Ｔｒｐ−Ｐ−１（３−アミノ−１，４−ジメチル−５−Ｈ−ピリド［４
，３−ｂ］インドール）、Ｔｒｐ−Ｐ−２（３−アミノ−１−メチル−５Ｈ−ピ
リド［４，３−ｂ］インドール）、トリパンブルー、ウラシルマスタード、ウレ
タン、４−ビニルシクロヘキセン、４−ビニルシクロヘキセンジエポキシド、溶
接煙、木材工業および大工業、ならびに指物職。

【００６２】 癌を発症する危険を有する被験体は、癌に対する遺伝的素因を有する被験体も
含む。多くの場合、癌に対する遺伝的素因は、家族構成員における癌の発生を研
究することにより同定され得る。一般的な形態の癌に対する遺伝的素因の例とし
て、家族性乳癌におけるＢＲＣＡ１およびＢＲＣＡ２の変異、家族性結腸癌（家
族性結腸ポリポーシス）におけるＡＰＣの変異、遺伝性非ポリポーシス結腸癌（
ＨＮＰＣＣ）におけるＭＳＨ２およびＭＬＨ１の変異、リー−フラウメニ癌症候
群におけるｐ５３の変異、網膜芽腫におけるＲｂ１の変異、多発性内分泌腺腫症
２型（ＭＥＮ２）におけるＲＥＴの変異、腎臓癌におけるＶＨＬの変異、ならび
にウィルムス腫におけるＷＴ１の変異が挙げられるがこれらに限定されない。家
族性の素因が同定されている他の癌として、卵巣癌、前立腺癌、黒色腫癌、およ
び肺癌が挙げられる。

【００６３】 現在診断されている全ての癌のほぼ半分は、いくつかの形態の癌用医薬品によ
り処置されると推定される。しかし、多くの形態の癌（黒色腫癌、結腸直腸癌、
前立腺癌、子宮内膜癌、頸部癌、および膀胱癌を含む）は、癌用医薬品による処
置に対して十分に応答しない。実際、約５〜１０％の癌しか、癌用医薬品のみを
用いて治療され得ない。これらは、いくつかの形態の白血病およびリンパ腫、精
巣癌、絨毛癌、ウィルム腫、ユーイング肉腫、神経芽腫、小細胞肺癌、および卵
巣癌を含む。さらに他の癌（乳癌を含む）の処置は、癌用医薬品と手術または放
射線療法を組み合わせた併用療法を必要とする。

【００６４】 免疫賦活性核酸は、癌細胞の表面抗原に特異的に結合する抗体と組み合わせて
投与される。これらの抗体として、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＤ１
９抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体、抗ＣＤ８０抗体、抗ＣＤ８６抗
体、抗ＣＤ５４抗体、および抗ＣＤ６９抗体が挙げられるがこれらに限定されな
い。これらの抗体は市販されているか、またはデノボで合成され得る。

【００６５】 市販の抗ＣＤ２０抗体として、以下の表１に示す抗体が挙げられるがこれらに
限定されない。

【００６６】

【表１】

【００６７】

【００６８】

【００６９】 抗体は、免疫学に関する科学の当業者にとって周知である。本明細書中で使用
される場合、用語「抗体」は、インタクトな抗体分子のみでなく、特異的結合能
を保持する抗体分子のフラグメントも意味する。このようなフラグメントはまた
、当該分野で周知であり、そしてインビトロおよびインビボの両方において、通
常使用される。特に、本明細書中で使用される場合、用語「抗体」は、インタク
トな免疫グロブリン分子だけではなく、周知の活性フラグメントであるＦ（ａｂ
’）_２、およびＦａｂも意味する。インタクトな抗体のＦｃフラグメントを欠く
、Ｆ（ａｂ’）_２フラグメント、およびＦａｂフラグメントは、循環からより迅
速に消失し、そして、インタクトな抗体のより小さい非特異的な組織結合を有し
得る。Ｗａｈｌ ＲＬら、Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ ２４：３１６−２５（１９８
３）。本発明の方法に従う特に有用な抗体フラグメントは、二重特異性でありか
つＦｃＲ結合を増強する（例えば、Ｆｃ部分を含む）ように構築される抗体フラ
グメントである。これらに、Ｍｅｄａｒｅｘ抗体（ＭＤＸ−２１０、ＭＤＸ−２
２０、ＭＤＸ−２２、ＭＤＸ−４４７、およびＭＤＸ−２６０）を含むがこれら
に限定されない。細胞表面上で誘導される抗原と相互作用する他の非Ｆｃ含有フ
ラグメントはまた有用である。これらは、免疫毒素および／または放射能との組
み合わせにおいて特に有用である。このフラグメントは、免疫毒素または放射能
から別々に送達されるか、またはこれらと結合され得る（例えば、放射性標識し
た抗体または抗体フラグメント）。

【００７０】 抗体の抗原結合部分において、当該分野で周知のように、抗原のエピトープと
直接相互作用する相補性決定領域（ＣＤＲ）、およびパラトープの三次元構造を
維持するフレームワーク領域（ＦＲ）が存在する（一般的には、Ｃｌａｒｋ，１
９８６；Ｒｏｉｔｔ，１９９１を参照のこと）。ＩｇＧ免疫グロブリンの重鎖Ｆ
ｄフラグメントおよび軽鎖の両方において、それぞれ３つの相補性決定領域（Ｃ
ＤＲ１〜ＣＤＲ３）によってそれぞれに分離される４つのフレームワーク領域（
ＦＲ１〜ＦＲ４）が存在する。このＣＤＲ、特に、このＣＤＲ３領域、より具体
的には重鎖ＣＤＲ３は、抗体特異性を大いに招く。

【００７１】 哺乳動物抗体の非ＣＤＲ領域は、もとの抗体のエピトープ特異性を保持しつつ
同種抗体または異種特異的抗体の類似領域で置換され得ることが、当該分野で現
在十分に確立している。これは、非ヒトＣＤＲが、機能的抗体を生成するために
ヒトのＦＲ領域および／またはＦｃ／ｐＦｃ’領域に共有結合される、「ヒト化
」抗体の開発および使用において最も明確に示される。従って、例えば、ＰＣＴ
国際公開番号ＷＯ ９２／０４３８１は、ヒト化マウスＲＳＶ抗体の生成および
使用を教示し、このヒト化マウスＲＳＶ抗体において、マウスＦＲ領域の少なく
とも一部分が、ヒト起源のＦＲ領域で置換されている。このような抗体（抗原結
合能を有する、インタクトな抗体のフラグメントを含む）は、しばしば、「キメ
ラ」抗体と称される。「ヒト化モノクローナル抗体」は、本明細書中で使用され
る場合，ヒトの定常領域およびヒト以外の種の哺乳動物由来の結合ＣＤＲ３領域
を有する、ヒトモノクローナル抗体またはその機能的に活性なフラグメントであ
る。ヒト化モノクローナル抗体は、当該分野で公知である任意の方法によって、
作製され得る。ヒト化モノクローナル抗体は、例えば、もとの抗体のエピトープ
特異性を保持しつつ、ヒト抗体の類似領域で非ヒト哺乳動物抗体の非ＣＤＲ領域
を置換することによって構築され得る。例えば、非ヒトＣＤＲおよび必要に応じ
ていくつかのフレームワーク領域は、ヒトのＦＲおよび／またはＦｃ／ｐＦｃ’
領域と共有結合されて、機能的抗体を産生し得る。商業的に特定のマウス抗体領
域からヒト化抗体を合成する事業者（例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ
Ｌａｂｓ（Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ））が米国にお
いて存在する。

【００７２】 欧州特許出願０２３９４００（この全内容が、本明細書中で参考として援用さ
れる）は、ヒト化モノクローナル抗体の生成および使用の例示的な教示を提供し
、ここで、マウス（または他の非ヒト哺乳動物）抗体の少なくともＣＤＲ部分は
、このヒト化抗体中に含まれる。簡潔には、以下の方法が、マウスＣＤＲの少な
くとも一部分を含む、ヒト化ＣＤＲモノクローナル抗体を構築するために有用で
ある。Ｉｇ重鎖またはＩｇ軽鎖の少なくとも可変領域をコードするＤＮＡ配列に
作動的に連結される適切なプロモーター、およびヒト抗体由来のフレーム領域を
含む可変領域ならびにマウス抗体のＣＤＲ領域を含む第１の複製可能発現ベクタ
ーが、調製される。必要に応じて、第２の複製可能発現ベクターが調製され、こ
の第２のベクターは、それぞれ、相補的ヒトＩｇ軽鎖またＩｇ重鎖の少なくとも
可変ドメインをコードするＤＮＡ配列に作動可能に連結される適切なプロモータ
ーを含む。次いで、細胞株がこのベクターで形質転換される。好ましくは、この
細胞株は、リンパ起原の不死化哺乳動物細胞株（例えば、骨髄腫細胞株、ハイブ
リドーマ細胞株、トリオーマ細胞株、またはクアドローマ細胞株）であるか、ま
たはウイルスによる形質転換によって不死化された正常なリンパ細胞である。次
いで、この形質転換された細胞株は、ヒト化抗体を生成するための当業者に公知
の条件下で培養される。

【００７３】 欧州特許出願０２３９４００に示されるように、複製可能ベクターに挿入され
る特定の抗体ドメインを作製するための、いくつかの技術が、当該分野で周知で
ある（好ましいベクターおよび組換え技術が、以下にてより詳細に議論されてい
る）。例えば、このドメインをコードするＤＮＡ配列は、オリゴヌクレオチド合
成によって調製され得る。あるいは、合成遺伝子はＣＤＲ領域を欠失し、４つの
フレームワーク領域がその接合部で適切な制限部位と融合しているため、付着端
を有する、二本鎖の、合成または制限された、サブクローンニングＣＤＥカセッ
トが、このフレームワーク領域との接合部で連結され得る。別の方法は、オリゴ
ヌクレオチド部位特異的変異誘発による、可変ＣＤＲ含有ドメインをコードする
ＤＮＡ配列の調製を包含する。これらの方法の各々は、当該分野で周知である。
従って、当業者は、このエピトープに対する抗体の特異性を破壊することなしに
、マウスＣＤＲ領域を含むヒト化抗体を構築し得る。

【００７４】 ヒトモノクローナル抗体は、当該分野で公知の任意の方法によって作製され得
る（例えば、米国特許第５，５６７，６１０号（Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋらに発行
された）、米国特許第５，５６５，３５４号（Ｏｓｔｂｅｒｇに発行された）、
米国特許第５，５７１，８９３号（Ｂａｋｅｒらに発行された）、Ｋｏｚｂｏｒ
Ｄら，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １３３：３００１−５（１９８４）、Ｂｒｏｄｅ
ｕｒら，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔ
ｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（
Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）、ならび
にＢｏｅｒｎｅｒ Ｐら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １４７：８６−９５（１９９１
）に開示される方法）。ヒトモノクローナル抗体を調製するための従来の方法に
加え、このような抗体はまた、ヒト抗体を産生し得るトランスジェニック動物を
免疫することによって調製され得る（例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ Ａ ｅら
、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：２５５１−５（１９
９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ Ａら、Ｎａｔｕｒｅ ３６２：２５５−８（１
９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎら、Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ
７：３３ （１９９３）；および米国特許第５，５６９，８２５号（Ｌｏｎｂ
ｅｒｇに発行された））。

【００７５】 注目に値すべきことに、当該分野で周知であるように、抗体分子の小さな一部
分のみ、すなわち、そのパラトープは、そのエピトープに対する抗体の結合に関
与する（一般的には、Ｃｌａｒｋ，Ｗ．Ｒ．（１９８６）「Ｔｈｅ Ｅｘｐｅｒ
ｉｍｅｎｔａｌ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｍｏｄｅｒｎ Ｉｍｍｕｎｏ
ｌｏｇｙ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｒｏｉｔｔ，
Ｉ．（１９９１）Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、第７版、Ｂｌ
ａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｏｘｆｏ
ｒｄを参照のこと）。このｐＦｃ’領域およびＦｃ領域は、例えば、相補体カス
ケードのエフェクターであるが、抗原結合には関与しない。ｐＦｃ’領域が酵素
的に切断されるか、またはｐＦｃ’領域なしで産生される、抗体（Ｆ（ａｂ’）_２ フラグメントとして呼称される）は、インタクトな抗体の抗原結合部位の両方
を保持する。同様に、Ｆｃ領域が酵素的に切断されるか、またはＦｃ領域なしで
産生される抗体（Ｆａｂフラグメントとして呼称される）は、インタクトな抗体
分子の抗原結合部位の１つを保持する。さらに進むと、Ｆａｂフラグメントは、
共有結合した抗体の軽鎖およびＦｄと示される抗体重鎖の一部分からなる。この
Ｆｄフラグメントは、抗体の特異性の主要な決定基であり（単一のＦｄフラグメ
ントは、抗体の特異性を変更することなしに、１０個までの異なる軽鎖と結合し
得る）、そしてＦｄフラグメントは、単離されて、エピトープ結合能を保持する
。

【００７６】 本発明に従う有用な他の抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプの抗体である。上述さ
れたように、抗ＩｇＧ１アイソタイプ抗体とは、本明細書中で使用される場合、
別段特定しない限り、ヒト抗ＩｇＧ１またはヒト化ＩｇＧ１をいう。ＩｇＧｌア
イソタイプ抗体は、当該分野で周知であり、少なくとも以下の表２に列挙された
抗体を含む。

【００７７】 （表２：開発中または販売されている、癌免疫治療剤）

【００７８】

【表２】

【００７９】

【００８０】

【００８１】

【００８２】 いくつかの実施形態において、核酸および抗体が、癌治療剤と併せて投与され
る。本明細書中で使用される場合、「癌治療剤」とは、増殖速度を減じるか、も
しくは緩くすることによってか、増殖全体を阻害することによってか、または癌
細胞を殺すか、もしくは癌細胞のアポトーシスを誘導することによって、癌細胞
の増殖を阻害する薬剤をいう。従って、本明細書中で使用される場合、「癌を処
置する」は、癌の発生を予防すること、癌の症状を減少すること、および／また
は、樹立した癌の増殖を阻害することを含む。他の局面において、癌治療剤は、
癌の発生の危険性を減じる目的で、癌を発生する危険性がある被験体に対して投
与される。癌を処置するための種々の型の医薬品が、本明細書中で記載される。
本明細書の目的のために、癌治療を、化学療法剤、癌ワクチン、ホルモン療法剤
、生化学的応答改変剤、外科手順、および癌を処置する目的での放射線療法とし
て分類する。さらに、本発明の方法は、免疫刺激核酸および抗体と共に、１つ以
上の癌治療剤の使用を含むことが意図される。例として、適切な場合、免疫刺激
核酸は、化学療法剤、および放射線療法の両方と共に投与され得る。

【００８３】 癌治療剤は、様々な様式で機能する。腫瘍細胞に特異的な生理学的機構を標的
化することによって、いくつかの癌治療剤が作用する。例としては、癌において
、変異される、特定の遺伝子およびそれらの遺伝子産物（すなわち、主にタンパ
ク質）の標的化が挙げられる。このような遺伝子としては、癌遺伝子（例えば、
Ｒａｓ、Ｈｅｒ２、ｂｃｌ−２）、腫瘍サプレッサ遺伝子（例えば、ＥＧＦ、ｐ
５３、Ｒｂ）、および細胞周期標的（例えば、ＣＤＫ４、ｐ２１、テロメラーゼ
）が挙げられるがこれらに限定されない）。癌治療剤は、癌細胞において変更さ
れている、シグナル伝達経路および分子機構を交互に標的化し得る。

【００８４】 他の癌治療剤は、癌細胞以外の細胞を標的化する。例えば、いくつかの医薬は
、免疫系を初回刺激して、腫瘍細胞を攻撃する（すなわち、癌ワクチン）。さら
に他の薬剤（新脈管形成インヒビターと称される）は、固体腫瘍の血液供給を攻
撃することによって機能する。ほとんどの悪性の癌は転移するので（すなわち、
最初の腫瘍の部位に存在し、そして遠位の組織に播種し、それにより第２の腫瘍
を形成する）、この転移を妨害する医薬がまた、癌の処置において有用である。
新脈管形成薬剤としては、塩基性ＦＧＦ、ＶＥＧＦ、アンジオポエチン、アンジ
オスタチン、エンドスタチン、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−４７０、トロンボスポンジ
ン−１、血小板因子４、ＣＡＩ、およびインテグリンのタンパク質ファミリーの
特定のメンバーが挙げられる。この型の薬剤の１つのカテゴリーは、メタロプロ
テイナーゼインヒビターであり、これは、使用される酵素を、癌細胞によって阻
害して最初の腫瘍部位を抜け出し、そして別の組織に血管外遊出する。

【００８５】 本明細書中で使用される場合、化学療法薬剤とは、化学的薬剤および生物学的
薬剤の両方を含む。これらの薬剤は、癌細胞が生存を続けることに依存する細胞
活性を阻害するように機能する。化学療法剤のカテゴリーとしては、アルキル化
／アルカロイド剤、代謝拮抗剤、ホルモンまたはホルモンアナログ、および雑多
な抗新生物薬剤が挙げられる。全てでない場合、ほとんどのこれらの薬剤は、癌
細胞に対して直接毒性であり、そして免疫刺激を必要としない。現在開発されて
いるかまたは臨床設定において使用されている化学療法剤を、以下の表３に示す
。

【００８６】 （表３．開発中または販売されている制癌剤）

【００８７】

【表３】

【００８８】

【００８９】

【００９０】

【００９１】 別の有用な抗癌治療は、インターフェロン−α（例えば、ＩＮＴＲＯＮ（登録
商標）Ａ，Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）である。

【００９２】 本発明に従う有用な化合物は、核酸である。核酸は、二本鎖であっても一本鎖
であっても良い。一般に、二本鎖の分子は、インビボでより安定であり、一方、
一本鎖の分子は、より増加した活性を有する。用語「核酸」および「オリゴヌク
レオチド」は、複数のヌクレオチド（すなわち、リン酸基および交換可能な有機
塩基に連結する糖（例えば、リボースまたはデオキシリボース）であり、これは
置換ピリミジン（例えば、シトシン（Ｃ）、チミジン（Ｔ）もしくはウラシル（
Ｕ））または置換プリン（例えば、アデニン（Ａ）もしくはグアニン（Ｇ））あ
るいは改変塩基である）である。本明細書中で使用される場合、この用語は、オ
リゴリボヌクレオチドおよびオリゴデオキシリボヌクレオチドをいう。この用語
はまた、ポリヌクレオシド（すなわち、リン酸を除いたポリヌクレオチド）およ
び他の任意の有機塩基含有ポリマーを含むべきである。用語「核酸」および「オ
リゴヌクレオチド」はまた、共有結合的に変異された塩基および／もしくは糖を
有する核酸またはオリゴヌクレオチドを含む。例えば、これらは、３’位のヒド
ロキシル基以外、および５’位のリン酸基以外の、低分子量の有機基に共有結合
する骨格糖を有する核酸を含む。従って、改変核酸は、２’−Ｏ−アルカリ化リ
ボース基を含み得る。さらに、改変ヌクレオチドは、リボースの代わりにアラビ
ノースのような糖を含み得る。従って、この核酸は、骨格組成物において異種で
あり、それにより、共に連結するポリマー単位の可能性のある任意の組み合わせ
（例えば、ペプチド核酸（これは、核酸塩基と共にアミノ酸骨格を有する）を含
む。いくつかの実施形態において、核酸は、骨格組成において、異種である。

【００９３】 核酸はまた、塩基アナログ（例えば、Ｃ−５プロピン改変塩基）を含み得る。
Ｗａｇｎｅｒ ＲＷら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １４：８４０〜
４（１９９６）。プリンおよびピリミジンとしては、アデニン、シトシン、グア
ニン、５−メチルシトシン、２−アミノプリン。２−アミノ−６−クロロプリン
、２，６−ジアミノプリン、ヒポキサンチン、ならびに他の天然に存在するおよ
び天然に存在しない核酸塩基、置換されたおよび置換されていない芳香族部分が
挙げられるが、これらに限定されない。

【００９４】 核酸は、塩基またはヌクレオチドの連結されたポリマーである。核酸の連結さ
れた単位に関して本明細書中で使用される場合、「連結された」または「連結」
とは、２つの要素が、物理的な手段によって互いに結合されることを意味する。
当業者に公知の任意の連結、すなわち共有結合または非共有結合が、包含される
。このような連結は、当業者に周知である。天然の連結（核酸の個々の単位を結
合するように通常天然に見出される）が、最も一般的である。核酸の個々の単位
は連結され得るが、合成的または変異的連結による。

【００９５】 核酸が文字列によって示される場合はいつでも、ヌクレオチドは、５’→３’
のオーダーで左から右へ存在すること、および「Ａ」がアデノシンを表し、「Ｃ
」がシトシンを表し、「Ｇ」がグアノシンを示し、「Ｔ」がチミジンを表し、そ
して「Ｕ」がウラシルを表すことが、他に示されない限り、理解される。

【００９６】 本発明に従って有用である核酸分子は、天然の核酸供給源（例えば、ゲノム核
またはミトコンドリアＤＮＡもしくはｃＤＮＡ）から得られ得るか、あるいは合
成的に得られる（例えば、オリゴヌクレオチド合成によって産生される）。存在
する核酸供給源から単離された核酸は、本明細書に対して、ネイティブ、天然、
または単離された核酸と称される。本発明に従って有用である核酸は、任意の供
給源から単離され得、この供給源としては、真核生物供給源、原核生物供給源、
核ＤＮＡ、ミトコンドリアＤＮＡなどが挙げられる。従って、用語 核酸は、合
成的核酸および単離された核酸の両方を包含する。本明細書中で使用される場合
、用語「単離された」とは、他の核酸、タンパク質、脂質、糖質、または天然で
結合する他の物質から、実質的に遊離している核酸をいう。核酸は、プラスミド
中で大規模に産生され得（Ｓａｍｂｒｏｏｋ Ｔら、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃ
ｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒ
ｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ
，１９８９を参照のこと）、そしてより小さな小片に分けられるか、または全体
を投与され得る。被験体に投与された後、このプラスミドは、オリゴヌクレオチ
ドに分解され得る。当業者は、標準的な技術（例えば、制限酵素、エキソヌクレ
アーゼまたはエンドヌクレアーゼを使用するような技術）を使用して、ウイルス
、細菌、真核生物などの核酸を精製し得る。

【００９７】 本発明における使用について、核酸は、当該分野で周知の多くの手順を使用し
てデノボ合成され得る。例えば、ｂ−シアノエチルホスホルアミダイト方法（Ｂ
ｅａｕｃａｇｅ ＳＬら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ ２２：１８５９
、１９８１）；ヌクレオシド Ｈ−リン酸方法（Ｇａｒｅｇｇら、Ｔｅｔｒａｈ
ｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ ２７：４０５１〜４、１９８６；Ｆｒｏｅｈｌｅｒら、
Ｎｕｃｌ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ １４：５３９９〜４０７、１９８６；Ｇａｒｅｇ
ｇら、Ｔｅｒｔａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ ２７：４０５５〜８、１９８６；Ｇ
ａｆｆｎｅｙら、Ｔｅｒｔａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ ２９：２６１９〜２２、
１９８８）。これらの化学反応は、市販の種々の自動化オリゴヌクレオチド合成
器によって実行され得る。

【００９８】 いくつかの実施形態において、本発明に従う有用な核酸は、免疫刺激性（ｉｍ
ｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ）の核酸である。免疫刺激性の核酸は、上に記
載される、免疫応答を調節し得る任意の核酸である。免疫応答を調節する核酸は
、免疫刺激の任意の形態を産生する核酸であり、この形態としては、サイトカイ
ン、Ｂ細胞活性化、Ｔ細胞活性化、単球活性化の誘導が挙げられるが、これらに
限定されない。免疫刺激性核酸としては、ＣｐＧ核酸、メチル化ＣｐＧ核酸、Ｔ
リッチな核酸、ポリＧ核酸、およびリン酸改変骨格を有する核酸が挙げられるが
、これらに限定されない。

【００９９】 本明細書中で使用される場合、「ＣｐＧ核酸」または「ＣｐＧ免疫刺激性核酸
」は、少なくとも１つの非メチル化ＣｐＧジヌクレオチド（システイングアニン
ジヌクレオチド配列（すなわち、「ＣｐＧ ＤＮＡ」または５’シトシンのあと
に３’グアノシンを有し、そしてリン酸結合によって連結される５’シトシンを
含むＤＮＡ）を含む核酸であり、そして、「ＣｐＧ核酸」または「ＣｐＧ免疫刺
激性核酸」は、免疫系の成分を活性化する。ＣｐＧ核酸の全体が非メチル化であ
っても、部分的に非メチル化であってもいいが、少なくとも５’ＣＧ３’のＣは
、非メチル化であるべきである。

【０１００】 １つの実施形態において、本発明は、少なくとも以下の式によって表されるＣ
ｐＧ核酸を提供し： ５’Ｎ_１Ｘ_１ＣＧＸ_２Ｎ_２３’ ここで、Ｘ_１およびＸ_２が、ヌクレオチドであり、および、Ｎが、任意のヌク
レオチドであり、ならびにＮ_１およびＮ_２が、それぞれ０〜２５個のＮから構成
される核酸配列である。いくつかの実施形態において、Ｘ_１は、アデニン、グア
ニン、またはチミンであり、およびＸ_２は、シトシン、アデニン、またはチミン
である。他の実施形態において、Ｘ_１は、シトシンであり、および／または、Ｘ_２ は、グアニンである。

【０１０１】 他の実施形態において、ＣｐＧ核酸は少なくとも以下の式によって表され： ５’Ｎ_１Ｘ_１Ｘ_２ＣＧＸ_３Ｘ_４Ｎ_２３’ ここで、Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３、およびＸ_４は、ヌクレオチドである。いくつかの
実施形態において、Ｘ_１Ｘ_２は、以下からなる群から選択されるヌクレオチドで
あり：ＧｐＴ、ＧｐＧ、ＧｐＡ、ＡｐＡ、ＡｐＴ、ＡｐＧ、ＣｐＴ、ＣｐＡ、Ｃ
ｐＧ、ＴｐＡ、ＴｐＴ、およびＴｐＧ；そしてＸ_３Ｘ_４は、以下からなる群から
選択されるヌクレオチドであり：ＴｐＴ、ＣｐＴ、ＡｐＴ、ＴｐＧ、ＡｐＧ、Ｃ
ｐＧ、ＴｐＣ、ＡｐＣ、ＣｐＣ、ＴｐＡ、ＡｐＡ、およびＣｐＡ；Ｎは、任意の
ヌクレオチドであり、そしてＮ_１およびＮ_２は、約０〜２５個のＮから構成され
る核酸配列である。他の実施形態において、Ｘ_１もしくはＸ_２またはその両方は
プリンであり、そしてＸ_３もしくはＸ_４またはその両方はピリミジンであり、あ
るいは、Ｘ_１Ｘ_２はＧｐＡであり、そしてＸ_３もしくはＸ_４またはその両方は、
ピリミジンである。

【０１０２】 いくつかの実施形態において、核酸のＮ_１およびＮ_２は、ＣＣＧＧもしくはＣ
ＧＣＧ四量体も、１つよりも多いＣＣＧもしくはＣＧＧ三量体も含まなかった。
ＣＣＧＧもしくはＣＧＣＧ四量体、または１つよりも多いＣＣＧもしくはＣＧＧ
三量体の効果は、核酸骨格の状態に一部依存する。例えば、核酸がリン酸ジエス
テル骨格またはキメラ骨格を有する場合、核酸においてこれらの配列を含めるこ
とは、核酸の生物学的活性に対する影響が存在する場合、最小のみを含む。骨格
が、完全にホスホロチオエートであるかまたは大部分がホスホロチオエートであ
る場合、これらの配列を含めることは、生物学的活性または生物学的活性の反応
速度に対してより大きな影響を有し得るが、これらの配列を含む化合物はいぜん
として有用である。別の実施形態において、ＣｐＧ核酸は、配列５’ＴＣＮ_１Ｔ
Ｘ_１Ｘ_２ＣＧＸ_３Ｘ_４３’を有する。

【０１０３】 「Ｔリッチな核酸」または「Ｔリッチな免疫刺激性核酸」は、少なくとも１つ
のポリＴ配列を含み、および／または２５％よりも多いＴヌクレオチド残基のヌ
クレオチド組成物を有し、ならびに免疫系の成分を活性化する核酸であり得る。
好ましい実施形態において、Ｔリッチな核酸は、２、３、４、などのポリＴ配列
（例えば、オリゴヌクレオチド＃２００６（５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧ
ＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ３’、配列番号７２９）を含み得る。本発明に従う、開示
された最も高度に免疫刺激性であるＴリッチなオリゴヌクレオチドの１つは、全
体がＴヌクレオチド残基から構成される核酸（例えば、オリゴヌクレオチド＃２
１８３（５’ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴ３’、配列番
号８４１）である。他のＴリッチな核酸は、２５％よりも多いＴヌクレオチド残
基から構成されるが、必ずしもポリＴ配列を含まない。これらのＴリッチな核酸
において、Ｔヌクレオチド残基は、これらのヌクレオチド残基の型（すなわち、
Ｇ、Ｃ、およびＡ）によって互いに区別される。いくつかの実施形態において、
Ｔリッチな核酸は、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％
、および９９％、およびその間のあらゆる整数％よりも多いＴヌクレオチド残基
から構成される。好ましくは、Ｔリッチな核酸は、少なくとも１つのポリＴ配列
および２５％よりも多いＴヌクレオチド残基のヌクレオチド組成を有する。

【０１０４】 １つの実施形態において、Ｔリッチな核酸は、少なくとも以下の式によって表
され： ５’Ｘ_１Ｘ_２ＴＴＴＴＸ_３Ｘ_４３’ ここで、Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３、およびＸ_４は、ヌクレオチドである。１つの実施形
態において、Ｘ_１Ｘ_２はＴＴ、および／またはＸ_３Ｘ_４はＴＴである。Ｘの実施
形態において、Ｘ_１Ｘ_２は、以下のヌクレオチドのいずれか１つであり：ＴＡ、
ＴＧ、ＴＣ、ＡＴ、ＡＡ、ＡＧ、ＡＣ、ＣＴ、ＣＴ、ＣＣ、ＣＡ、ＣＧ、ＧＴ、
ＧＧ、ＧＡ、およびＧＣ；そしてＸ_３Ｘ_４は、以下のヌクレオチドのいずれか１
つである：ＴＡ、ＴＧ、ＴＣ、ＡＴ、ＡＡ、ＡＧ、ＡＣ、ＣＴ、ＣＣ、ＣＡ、Ｃ
Ｇ、ＧＴ、ＧＧ、ＧＡ、およびＧＣ。

【０１０５】 いくつかの実施形態において、Ｔリッチな核酸は、ポリＣ（ＣＣＣＣ）、ポリ
Ａ（ＡＡＡＡ）、ポリＧ（ＧＧＧＧ）、ＣｐＧモチーフまたは複数のＧＧを含ま
ないことが好ましい。他の実施形態において、Ｔリッチな核酸は、これらのモチ
ーフを含む。したがって、本発明のいくつかの実施形態において、Ｔリッチな核
酸は、ＣｐＧジヌクレオチドを含み、そして他の実施形態において、Ｔリッチな
核酸は、ＣｐＧジヌクレオチドを含まない、ＣｐＧジヌクレオチドは、メチル化
されていてもメチル化されていなくてもよい。

【０１０６】 ポリＧ含有核酸はまた、免疫刺激性である。種々の参考文献（Ｐｉｓｋｅｓｋ
ｙ ＤＳら、Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ Ｒｅｐ １８：２１７〜２１（１９９３）；Ｋ
ｒｉｎｇｅｒ Ｍら、Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ ６３：６０１〜３７
（１９９４）；Ｍａｃａｙａ ＲＦら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ
ＵＳＡ ９０：３７４５〜９（１９９３）；Ｗｙａｔｔ ＪＲら、Ｐｒｏｃ
Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９１：１３５６〜６０（１９９４）；Ｒ
ａｎｄｏおよびＨｏｇａｎ、１９９８ Ａｐｐｌｉｅｄ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ
Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｋｒｉｅｇ ＡＭお
よびＳｔｅｉｎ Ｃ編、３３５〜３５２頁；ならびにＫｉｍｕｒａ Ｙら、Ｊ
Ｂｉｏｃｈｅｍ（Ｔｏｋｙｏ）１１６：９９１〜４（１９９４）が挙げられる）
もまた、ポリＧ核酸の免疫刺激性の特性を記載する。

【０１０７】 ポリＧ核酸は、好ましくは以下の式を有する核酸であり： ５’Ｘ_１Ｘ_２ＧＧＧＸ_３Ｘ_４３’ ここで、Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３、およびＸ_４は、ヌクレオチドである。好ましい実施
形態において、Ｘ_３およびＸ_４のうちの少なくとも１つは、Ｇである。他の実施
形態において、Ｘ_３およびＸ_４の両方ともがＧである。さらに他の実施形態にお
いて、好ましい式は、５’ＧＧＧＮＧＧＧ３’、または５’ＧＧＧＮＧＧＧＮＧ
ＧＧ３’であり、ここで、Ｎは、０と２０との間のヌクレオチドを示す。他の実
施形態において、ポリＧ核酸は、メチル化されていないＣＧジヌクレオチドを含
まず、従って、この核酸は、以下の表４に配列番号１２〜１４、２３、５６、１
００、１５５、１６３、１８２、２２７、２３７、２４６、４００、４０７、４
２９、４３０、４３２、４３５、４３８、４３９、４４６、４５０、４５１、４
８０、４８７、４９３、５２２、６６１、６６２、６７１〜６７３、８０７、８
０８、８２１、８２３および８３４として列挙される。他の実施形態において、
ポリＧ核酸は、少なく１つのＣＧジヌクレオチドを含み、従って、例えば、この
核酸は、以下の表４に配列番号６、７、２２、２６、２８〜３０、８７、１１５
、１４１、１７７、１９１、２０９、２５４、２５８、２６７、３０３、３１７
、３２９、３３５、３４４、３４５、３９５、４１４、４１７、４１８、４２３
〜４２６、４２８、４３１、４３３、４３４、４３６、４３７、４４０、４４２
〜４４５、４４７〜４４９、４５８、４６０、４６３、４６７〜４６９、４７４
、５１５、５１６、５９４、６３８〜６４０、６６３、６６４、７２７、７５２
、７７６、７９５、７９９、８１８、８１８、８３１、および８３２として列挙
される。

【０１０８】 ホスホロチオエート骨格のような改変骨格を有する核酸はまた、免疫刺激性の
核酸のクラスに含まれる。Ｈｕｔｃｈｅｒｓｏｎらに発行された米国特許第５，
７２３，３３５号および同第５，６６３，１５３号ならびに関連するＰＣＴ公開
ＷＯ９５／２６２０４は、ホスホロチオエートリゴヌクレオチドアナログを使用
する免疫刺激を記載する。これらの特許は、非配列特異的な様式における免疫応
答を刺激するホスホロチオエート骨格の能力を記載する。

【０１０９】 免疫刺激性核酸は、任意のサイズであり得るが、いくつかの実施形態において
、６ヌクレオチドと１００ヌクレオチドとの間の範囲のサイズか、またはいくつ
かの実施形態において、８ヌクレオチドと３５ヌクレオチドとの間の範囲のサイ
ズであり得る。免疫刺激核酸は、プラスミドにおいて大規模で産生され得る。こ
れらは、プラスミド形態において投与され得るか、あるいは、オリゴヌクレオチ
ドに分解され得る。

【０１１０】 「パリンドローム配列」は、反転した反復を意味する（すなわち、ＡＢＣＤＥ
Ｅ’Ｄ’Ｃ’Ｂ’Ａ’のような配列、ここでＡおよびＡ’は、通常のＷａｔｏｓ
ｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対を形成し得る塩基であり、そしてこの配列は、パリンド
ロームにおいて少なくとも６個のヌクレオチドを含む）。インビボで、このよう
な配列は、二本鎖構造を形成し得る。１つの実施形態において、核酸は、パリン
ドローム配列を含む。いくつかの実施形態において、核酸が、ＣｐＧ核酸である
場合、この状況で使用されるパリンドローム配列は、ＣｐＧが、パリンドローム
の部分であるパリンドロームをいい、そして必要に応じて、パリンドロームの中
央にある。別の実施形態において、核酸は、パリンドロームがない。パリンドロ
ームがない核酸は、パリンドロームである６またはそれより多いヌクレオチド長
の領域を全く有しない。パリンドロームがない核酸は、パリンドロームである６
個未満のヌクレオチド領域を含み得る。

【０１１１】 「安定化核酸分子」は、インビトロ分解（例えば、エキソヌヌクレアーゼまた
はエンドヌクレアーゼを介する）に比較的耐性である核酸分子を意味する。安定
化は、長さの関数または二次構造の関数であり得る。数十〜数百長である核酸は
、インビボ分解に比較的耐性である。より短い核酸について、二次構造は、安定
化され得、そしてこの効果を増大し得る。例えば、オリゴヌクレオチドの３’末
端は、上流領域に自己相補性（ｓｅｌｆ−ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ）を
有し、その結果、折り畳まれ得、そしてステムループ構造のようなものを形成し
得る場合、オリゴヌクレオチドは、安定化され、従って、さらなる活性を示す。

【０１１２】 本発明のいくつかの安定化オリゴヌクレオチドは、改変された骨格を有する。
オリゴヌクレオチド骨格の改変は、インビボで投与される場合、核酸の増大した
活性を提供することを実証した。オリゴヌクレオチドの５’末端における少なく
とも２つのホスホロチオエート結合および３’末端、好ましくは、５’末端にお
ける複数のホスホロチオエート結合を含む、核酸は、最大の活性を提供し得、そ
して細胞内、エキソヌクレアーゼおよびエンドヌクレアーゼによる分解からオリ
ゴヌクレオチドを保護し得る。他の改変オリゴヌクレオチドは、ホスホジエステ
ル改変オリゴヌクレオチド、ホスホジエステルオリゴヌクレオチドとホスホロチ
オエートリゴヌクレオチドの組み合わせ、メチルホスホネート、メチルホスホロ
チオエート、ホスホロジチオエートおよびそれらの組み合わせを含む。これら組
み合わせのそれぞれのおよび免疫細胞における特定の効果は、それぞれ、１９９
６年１０月３０日および１９９７年１０月３０日に出願された、米国出願番号第
０８／７３８，６５２号（ここで、米国特許第６，２０７，６４６ Ｂ１号とし
て示される）および同第０８／９６０，７７４号（ここで、米国特許第６，２３
９，１１６ Ｂ１号として発行される）に優先権を主張するＰＣＴ公開特許出願
ＷＯ９８／１８８１０に詳細に考察される（これらの全体の内容は、参考として
本明細書中に援用される）。これらの改変オリゴヌクレオチドは、増強したヌク
レアーゼ耐性、増大した細胞の取り込み、増大したタンパク質結合および／また
は変更された細胞内局在に起因するさらなる刺激活性を示し得ると考えられる。
ホスホロチオエート核酸とホスホジエステル核酸の両方は、哺乳動物細胞におい
て活性である。

【０１１３】 他の安定化オリゴヌクレオチドは、以下を含む：非イオン性ＤＮＡアナログ（
例えば、アルキルホスフェートおよびアリールホスフェート）（ここで、荷電し
たホスホネート酸素は、アルキル基またはアリール基によって置換される）、ホ
スホジエステルならびにアルキルホスホトリエステル（ここで、荷電した酸素部
分は、アルキル化される）。いずれかの末端または両方の末端において、ジオー
ル（例えば、テトラエチレングリコールまたはヘキサエチレングリコール）を含
むオリゴヌクレオチドはまた、ヌクレアーゼ分解に実質的に耐性であることが示
されている。

【０１１４】 インビボでの使用に関して、核酸は、好ましくは、分解（例えば、エンドヌク
レアーゼおよびエキソヌクレアーゼを介する）に比較的耐性である。二次構造（
例えば、ステムループ）は、分解に対して核酸を安定化し得る。あるいは、核酸
安定化は、ホスフェネート骨格改変を介して達成され得る。安定化核酸の１つの
型は、少なくとも部分的なホスホロチオエート改変骨格を有する。ホスホロチオ
エートは、ホスホラミダイトまたはＨ−ホスホネート化学物質のいずれかを使用
する自動化技術を使用して合成され得る。アリールホスホネートおよびアルキル
ホスホネートは、例えば、米国特許第４，４６９，８６３号に記載されるように
作製され得、そしてアルキルホスホトリエステル（ここで、荷電した酸素部分は
、米国特許第５，０２３，２４３号および欧州特許番号０９２，５７４号に記載
されるようにアルキル化される）は、市販の試薬を使用して自動化固相合成によ
って調製され得る。他のＤＮＡ骨格改変および置換を作製するための方法は、記
載されている。Ｕｈｌｍａｎｎ Ｅら，Ｃｈｅｍ Ｒｅｖ ９０：５４４−８４
（１９９０）；Ｇｏｏｄｃｈｉｌｄ Ｊ，Ｂｉｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ
１：１１６５−８７（１９９０）。

【０１１５】 いくつかの実施形態において、本発明に従う有用な骨格改変を有する免疫刺激
核酸は、Ｓキラル免疫刺激核酸またはＲキラル免疫刺激核酸である。本明細書中
で使用される場合、「Ｓキラル免疫刺激核酸」は、免疫刺激核酸であり、ここで
少なくとも２つのヌクレオチドは、キラル中心を形成する骨格改変を有し、そし
てここで、複数のキラル中心は、Ｓキラリティーである。本明細書中で使用され
る場合、「Ｒキラル免疫刺激核酸」は、免疫刺激核酸であり、ここで少なくとも
２つのヌクレオチドは、キラル中心を形成する骨格改変を有し、そしてここで、
複数のキラル中心は、Ｒキラリティーである。骨格改変は、キラル中心を形成す
る任意の型の改変であり得る。改変としては以下が挙げられるがこれらに限定さ
れない：ホスホロチオエート、メチルホスホネート、メチルホスホロチオエート
、ホスホロジチオエート、２’−ＯＭｅおよびそれらの組み合わせ。他の実施形
態において、これらは、非キラルである。非キラル核酸は、少なくとも２つのキ
ラル中心を有しない任意の核酸である。

【０１１６】 キラル免疫刺激核酸は、骨格改変を有する核酸内に少なくとも２つのヌクレオ
チドを有しなければならない。しかし、核酸における全てまたは全てより少ない
ヌクレオチドは、改変された骨格を有し得る。改変された骨格を有するヌクレオ
チド（キラル中心として称される）の多数は、単一のキラリティー、ＳまたはＲ
を有する。本明細書中において使用される場合、「多数」は、７５％以上の量を
いう。従って、全てより少ないキラル中心は、多数のキラル中心が、Ｓキラリテ
ィーまたはＲキラリティーを有する限りＳキラリティーまたはＲキラリティーを
有し得る。いくつかの実施形態において、少なくとも７５％、８０％、８５％、
９０％、９５％または１００％のキラル中心は、ＳキラリティーまたはＲキラリ
ティーである。他の実施形態において、少なくとも７５％、８０％、８５％、９
０％、９５％または１００％のヌクレオチドは、骨格改変を有する。

【０１１７】 Ｓキラル免疫刺激核酸およびＲキラル免疫刺激核酸は、キラリティーにおいて
純粋なオリゴヌクレオチドを産生するための当該分野で公知の任意の方法によっ
て調製され得る。Ｓｔｅｃらは、オキサチアホスホランを使用する立体的に純粋
な（ｓｔｅｒｅｏｐｕｒｅ）ホスホロチオエートリゴデオキシヌクレオチドを産
生するための方法を教示する。Ｓｔｅｃ ＷＪら，Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ
１１７：１２０１９（１９９５）。キラリティーにおいて純粋なオリゴヌクレ
オチドを作製するための他の方法は、ＩＳＩＳ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
ｓのような会社によって記載される。立体的に純粋なオリゴヌクレオチドを産生
するための方法を開示する米国特許としては、第５，２１２，２９５号、第５，
３５９，０５２号、第５，５０６，２１２号、第５，５１２，６６８号、第５，
５２１，３０２号、第５，５９９，７９７号、第５，８３７，８５６号、第５，
８５６，４６５号および第５，８８３，２３７号が挙げられる（これらのそれぞ
れは、その全体が、参考として援用される）。

【０１１８】 本発明に従う有用な核酸の他の供給源としては、標準的なウイルスベクターお
よび細菌ベクターが挙げられる（これらの多くが、市販されている）。最も広範
な意味において、「ベクター」は、送達および細胞への核酸の移行を容易にする
ために通常使用される任意の核酸物質である。本明細書中において使用されるベ
クターは、空のベクターまたは発現し得る遺伝子を有するベクターであり得る。
この状況において、ベクターが、遺伝子を有する場合、ベクターは、一般に、ベ
クターの非存在下に生じる分解の程度と比較して減少した分解を伴って、標的細
胞に遺伝子を輸送する。この場合において、ベクターは、必要に応じて、免疫細
胞のような標的細胞における遺伝子の発現を増強する遺伝子発現配列を含むが、
遺伝子が、この細胞において発現することは必要ではない。

【０１１９】 一般に、ベクターとしては以下が挙げられるがこれらに限定されない：プラス
ミド、ファージミド、ウイルス、ウイルス供給源または細菌供給源由来の他のビ
ヒクル。ウイルスベクターは、ベクターの１つの型であり、そしてウイルスベク
ターとしては、以下のウイルス由来の核酸配列が挙げられるがこれらに限定され
ない：レトロウイルス（例えば、モロニーマウス白血病ウイルス、Ｈａｒｖｅｙ
マウス肉腫ウイルス、マウス乳癌ウイルスおよびラウス肉腫ウイルス）；アデノ
ウイルス、アデノ随伴ウイルス；ＳＶ４０型ウイルス；ポリオーマウイルス；エ
プスタイン−バーウイルス；パピローマウイルス；疱疹ウイルス；痘疹ウイルス
；ポリオウイルス；およびレトロウイルスのようなＲＮＡウイルス。示されてい
ないが、当該分野で公知の他のベクターは、容易に使用され得る。いくつかのウ
イルスベクターは、非細胞変性真核生物ウイルスに基づき、ここで、非本質的な
遺伝子は、送達される核酸と置換される。非細胞変性ウイルスとしては、レトロ
ウイルスが挙げられ、これの生活環は、ＤＮＡへのゲノムウイルスＲＮＡの逆転
写に関与する。

【０１２０】 空のベクターまたは遺伝子を有するベクターを産生するための標準的なプロト
コル（プラスミドへの外因性遺伝子物質の取り込みの工程、プラスミドを用いて
株化されたパッケージング細胞のトランスフェクションの工程、パッケージング
細胞株による組換えレトロウイルスの産生、組織培養培地からのウイルス粒子の
収集および／またはウイルス粒子を用いた標的細胞の感染）は、Ｋｒｉｅｇｌｅ
ｒ Ｍ，「Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ Ｃｏ．，Ｎｅ
ｗ Ｙｏｒｋ（１９９０）およびＭｕｒｒｙ ＥＪ，編，「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉ
ｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」第７巻，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ
，Ｉｎｃ．，Ｃｌｉｆｆｔｏｎ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ（１９９１）に提供され
る。

【０１２１】 他のベクターとしては、プラスミドベクターが挙げられる。プラスミドベクタ
ーは、当該分野で広範に記載され、そして当業者に周知である。例えば、Ｓａｍ
ｂｒｏｏｋら；「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｙ Ｍａｎｕａｌ」第２版，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９８９を参照のこと。最近数年間、プラスミド
ベクターは、宿主ゲノムにおいて複製され、そして組み込まれる能力を持たない
ので、インビボで細胞に遺伝子を送達するという利点があることが見出されてい
る。しかし、宿主細胞と適合性があるプロモーターを有するいくつかのプラスミ
ドは、プラスミドに作動可能にコードされる遺伝子由来のペプチドを発現し得る
。いくつかの通常使用されるプラスミドとしては、ｐＢＲ３２２、ｐＵＣ１８、
ｐＵＣ１９、ｐｃＤＮＡ３．１、ｐＳＶ４０およびｐＢｌｕｅＳｃｒｉｐｔが挙
げられる。他のプラスミドは、当業者に周知である。さらに、プラスミドは、Ｄ
ＮＡの特定のフラグメントを除去および付加するために、制限酵素反応および連
結反応を使用して特注品設計され得る。

【０１２２】 プラスミド（空かまたは遺伝子送達する）は、細菌を使用する免疫系に送達さ
れ得ることが最近発見された。Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａのような細菌の改変形態は
、プラスミドでトランスフェクトされ得、そして送達ビヒクルとして使用され得
る。細菌送達ビヒクルは、経口的にまたは他の投与手段によって宿主被験体に投
与され得る。細菌は、おそらく腸障壁を通じて通過することによって免疫細胞（
例えば、樹状細胞）にプラスミドを送達する。高レベルの免疫防御は、この方法
論を使用して確立された。送達のこのような方法は、核酸の全身的な送達を利用
する本発明の局面に有用である。

【０１２３】 本明細書中において使用される場合、免疫刺激核酸の投与は、これらのプロフ
ィール、配列、骨格改変および生物学的効果について異なっても良いし、異なっ
てなくても良い１つ以上の免疫刺激核酸の投与を採用することが意図される。例
えば、ＣｐＧ核酸およびＴリッチ核酸は、抗体および必要に応じて癌治療と共に
単一の被験体に投与され得る。別の例において、ヌクレオチド配列が異なる複数
のＣｐＧ核酸はまた、被験体に投与され得る。

【０１２４】 本発明中に従う有用な核酸および本明細書中に記載される核酸のいくつかを、
下の表４に示す。

【０１２５】 （表４ 例示的な核酸）

【０１２６】

【表４】

【０１２７】

【０１２８】

【０１２９】

【０１３０】

【０１３１】

【０１３２】

【０１３３】

【０１３４】

【０１３５】

【０１３６】

【０１３７】

【０１３８】

【０１３９】

【０１４０】

【０１４１】

【０１４２】 表４の配列に関して、ａ、ｃ、ｔ、およびｇ以外の文字記号は、以下の通りに
定義される：「ｂ」は、単一でオリゴヌクレオチドの５’末端または３’末端に
列挙される場合、オリゴヌクレオチドの末端に付着したビオチン部分を示す；「
ｄ」は、ａ、ｇ、またはｔを表す；「ｆ」は、オリゴヌクレオチドの５’末端ま
たは３’末端に付着したフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）部分を
表す；「ｈ」は、ａ、ｃ、またはｔを表す；「ｉ」は、イノシンを表す；「ｎ」
は、任意のヌクレオチドを表す；「ｚ」は、５−メチルシトシンを表す。

【０１４３】 また、表４の骨格に関して、記号は、以下の通りに定義される：「ｏ」は、ホ
スホジエステルを表す；「ｏｓ」は、５’末端にホスホジエステルを有するホス
ホロチオネートキメラおよびホスホジエステルキメラを表す；「ｏｓ２」は、５
’末端にホスホジエステルを有するホスホロジチオネートキメラおよびホスホジ
エステルキメラを表す；「ｐ−エトキシ」は、ｐ−エトキシ骨格を表す（例えば
、米国特許第６，０１５，８８６号を参照のこと）；「ｐｏ」は、ホスホジエス
テルを表す；「ｓ」は、ホスホロチオネートを表す；「ｓ２」は、ホスホロジチ
オネートを表す；「ｓ２ｏ」は、３’末端にホスホジエステルを有するホスホロ
ジチオネートキメラおよびホスホジエステルキメラを表す；「ｓｏ」は、３’末
端にホスホジエステルを有するホスホロチオネートキメラおよびホスホジエステ
ルキメラを表す；そして「ｓｏｓ」は、５’末端および３’末端にホスホロチオ
ネートを有するキメラのホスホロチオネート／ホスホジエステルを表す。

【０１４４】 核酸は、有効量で送達される。免疫刺激核酸の用語「有効量」は、所望の生物
学的効果を実現するのに必要または十分な量をいう。例えば、免疫刺激核酸の有
効量は、免疫系の活性化を引き起こすのに必要な量であり得る。本発明のいくつ
かの局面に従って、有効量は、一定量の免疫刺激核酸および一定量の抗体が、組
み合わされるかまたは同時投与される場合に、癌の予防または処置を生じる量で
ある。いくつかの実施形態において、相乗的な効果が観察される。相乗的な量は
、免疫刺激核酸および抗体単独のいずれかの個々の効果の合計よりも大きい抗癌
反応を生じる量である。例えば、免疫刺激核酸および抗体の相乗的組み合わせは
、別々に各々の成分（すなわち、核酸および抗体）を使用して得られ得る生物学
的効果の組み合わせよりも大きい生物学的効果を提供する。生物学的効果は、癌
から生じる症状の軽減および／または完全な除去であり得る。別の実施形態にお
いて、生物学的効果は、例えば、腫瘍の非存在または癌細胞を含まない生検もし
くは血液標本により証明される、癌の完全な抑止である。

【０１４５】 癌を処置するため、または癌を発症する危険の減少において必要な免疫刺激核
酸の有効量は、免疫刺激核酸の配列、核酸の骨格構成、および核酸の送達様式に
非常に依存し得る。特定の適用のための有効量はまた、処置される癌、投与され
る特定の免疫刺激核酸（例えば、核酸における免疫刺激モチーフの性質、数また
は位置）、被験体のサイズ、または疾患もしくは状態の重篤度のような要因に非
常に依存して変化し得る。当業者は、過度の実験を必要とすることなく、有効量
の特定の免疫刺激核酸および抗体の組み合わせを経験的に決定し得る。本明細書
中に提供される教示と組み合わせて、種々の活性化合物の中で選択することによ
って、そして効力、相対的なバイオアベイラビリティー、患者体重、有害な副作
用の重篤度および好ましい投与様式のような因子を検討することによって、実質
的な毒性を引き起こさずかつ特定の被験体を処置するのに全体的に有効である、
有効な予防的または治療的な処置レジメンは、計画され得る。

【０１４６】 癌治療の治療用量は、癌の処置に関する医学の分野で周知である。これらの投
薬は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃ
ｅｓ、第１８版、１９９０年；ならびに癌の処置のための手引きとして医学専門
職によって信頼される多数の他の医学文献のような参考文献において広範に記載
されている。免疫刺激核酸の治療投薬量はまた当該分野で記載されており、そし
て被験体における治療投薬量を同定するための方法は、本明細書中により詳細に
記載されている。

【０１４７】 本明細書中に記載される化合物の被験体用量は、代表的に、投与当り約０．１
μｇ〜１０ｍｇで変化し、これは、適用に依存して、毎日、毎週、または毎月お
よびその間の任意の他の時間量で与えられ得る。より代表的には、粘膜用量また
は局所的用量は、数時間、数日または数週間間隔を空ける２〜４回の投与で、投
与当り約１０μｇ〜５ｍｇ、そして最も代表的には約１００μｇ〜１ｍｇで変化
する。より代表的には、免疫刺激用量は、毎日または毎週の投与で、投与当り１
μｇ〜１０ｍｇ、そして最も代表的には、１０μｇ〜１ｍｇで変化する。非経口
送達について本明細書中で記載される化合物の被験体用量（ここで、化合物は、
別の治療剤なしで送達される）は、代表的に、有効な粘膜用量よりも、または免
疫刺激剤適用について、５〜１０，０００倍高く、そしてより代表的には、１０
〜１，０００倍高く、そして最も代表的には２０〜１００倍高い。より代表的に
は、これらの目的のための非経口用量は、数時間、数日または数週間の間隔を空
ける２〜４回の投与で、投与当り約１０μｇ〜５ｍｇ、そして最も代表的には、
約１００μｇ〜１ｍｇで変化する。しかし、いくつかの実施形態において、これ
らの目的のための非経口用量は、上記の代表的な用量より５〜１０，０００倍高
い範囲で使用され得る。

【０１４８】 本明細書中に記載される任意の化合物について、治療有効量は、動物モデル（
例えば、本明細書中に記載される動物モデル）から最初に決定され得る。治療有
効用量はまた、ヒトにおいて試験されたＣｐＧ核酸について（ヒト臨床試験が開
始され、そして結果は公に広められた）そして同様な薬理学的活性を示すことが
公知の化合物についてのヒトデータから決定され得る。より高い用量は、上記の
ように、非経口投与のために必要とされ得る。適用された用量は、相対的なバイ
オアベイラビリティーおよび投与された化合物の効力に依存して調整され得る。
上記の方法および当業者に周知の他の方法に基づいて、最大の効力を得るための
用量を調整することは、当業者の能力の十分に範囲内である。

【０１４９】 本発明の処方物は、薬学的に受容可能な溶液で投与され、これは、慣用的に、
薬学的に受容可能な濃度の塩、緩衝剤、防腐剤、適合性キャリア、アジュバント
、および必要に応じて他の治療成分を含み得る。

【０１５０】 治療における使用のために、有効量の核酸は、核酸を被験体に送達する任意の
様式によって被験体に送達され得る。本発明の薬学的組成物を「投与すること」
は、当業者に公知の任意の方法によって達成され得る。投与のいくつかの経路と
しては、経口、鼻腔内、気管内、吸入、眼内、膣、直腸、非経口（例えば、筋肉
内、皮内、静脈内または皮下注入）および直接的注入が挙げられるがこれらに限
定されない。

【０１５１】 経口投与については、化合物（すなわち、核酸および抗体）は、いずれの薬学
的キャリアとも組み合わせず単独で送達され得るか、または当該分野で周知の薬
学的に受容可能なキャリアと活性化合物を組み合わせることによって容易に処方
され得る。用語「薬学的に受容可能なキャリア」は、ヒトまたは他の脊椎動物へ
の投与に適切である、１つ以上の適合性の固体または液体の充填剤または希釈剤
またはカプセル化物質を意味する。用語「キャリア」は、活性成分が適用を容易
にするために組み合わされた、天然または合成の、有機成分または無機成分を意
味する。薬学的組成物の成分はまた、所望の薬学的効率を実質的に損なう相互作
用が存在しないような様式で、本発明の化合物と互いに混合され得る。

【０１５２】 このようなキャリアは、処置される被験体による経口の消化のために、本発明
の化合物が、錠剤、丸剤、糖剤、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、
懸濁液などとして処方されることを可能にする。経口用途のための薬学的調製物
は、固体賦形剤として得られ得、所望であれば、錠剤または糖剤のコアを得るた
めに、適切な補助剤を添加した後、必要に応じて、得られた混合物を粉砕し、そ
して顆粒の混合物を処理する。適切な賦形剤は、特に、ラクトース、スクロース
、マンニトール、またはソルビトールを含む糖のような充填剤；例えば、トウモ
ロコシデンプン、コムギデンプン、イネデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチ
ン、ガムトラガント、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース
、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および／またはポリビニルピロリド
ン（ＰＶＰ）のようなセルロース調製物である。所望の場合、架橋ポリビニルピ
ロリドン、アガー、またはアルギニン酸もしくはそれらの塩（アルギン酸ナトリ
ウムのような）のような崩壊剤が添加され得る。必要に応じて、経口処方物もま
た、内部の酸性状態を中和するための生理食塩水または緩衝液中で処方され得る
。

【０１５３】 糖剤コアは、適切なコーティングと共に提供され得る。この目的のために、濃
縮された糖溶液が使用され得、これは、必要に応じて、ガムアラビン（ａｒａｂ
ｉｃ）、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポル（ｃａｒｂｏｐｏｌ）ゲル
、ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタン、ラッカー溶液、およ
び適切な有機溶媒または溶媒混合物を含み得る。染料または色素は、同定のため
にか、または異なる組み合わせの活性化合物用量を特徴付けるために、錠剤また
は糖剤のコーティングに添加され得る。

【０１５４】 経口的に使用され得る薬学的調製物としては、ゼラチンから作製された押し込
み適合（ｐｕｓｈ−ｆｉｔ）カプセル、ならびにゼラチンから作製された軟質の
密封されたカプセルおよび可塑剤（例えば、グリセロールまたはソルビトール）
が挙げられる。押し込み適合カプセルは、ラクトースのような充填剤、デンプン
のような結合剤、および／またはタルクもしくはステアリン酸マグネシウムのよ
うな潤滑剤、および必要に応じて安定化剤との混合物中に活性成分を含み得る。
軟質カプセルにおいて、活性化合物は、脂肪油、液体パラフィン、または液体ポ
リエチレングリコールのような適切な液体中に溶解または懸濁され得る。さらに
、安定化剤が添加され得る。経口投与のために処方される微粒子もまた使用され
得る。このような微粒子は、当該分野で十分に規定されている。経口投与のため
の全ての処方物は、このような投与のために適切な投薬量であるべきである。

【０１５５】 頬側投与については、組成物は、従来の様式で処方される錠剤または菓子錠剤
の形態を取り得る。

【０１５６】 吸入による投与については、本発明に従う使用のための化合物は、適切な噴霧
剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロ
テトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適切な気体）を使用して、加圧パ
ックまたは噴霧器から、エアロゾル噴霧の形態で簡便に送達され得る。加圧エア
ロゾルの場合では、投薬単位は、定量（ｍｅｔｅｒｅｄ ａｍｏｕｎｔ）を送達
するための弁を提供することによって決定され得る。化合物の粉末混合物および
ラクトースまたはデンプンのような適切な粉末基剤を含む、例えば、吸入器また
は注入器における使用のためのゼラチンのカプセルおよびカートリッジが、処方
され得る。

【０１５７】 化合物は、全身的に送達されることが所望される場合、注射による（例えば、
ボーラス注射または連続注入による）非経口投与のために処方され得る。注射の
ための処方物は、単位投薬形態中（例えば、アンプル中または多用量容器）に、
添加された保存料と共に存在し得る。これらの組成物は、油性ビヒクルまたは水
性ビヒクル中の懸濁液、溶液または乳濁液のような形態を取り得、そして処方剤
（例えば、懸濁剤、安定化剤および／または分散剤）を含み得る。

【０１５８】 非経口投与のための薬学的処方物としては、水可溶形態の活性化合物の水溶液
が挙げられる。さらに、活性成分の懸濁液は、適切な油性の注射懸濁液として調
製され得る。適切な脂肪親和性の溶媒またはビヒクルとしては、脂肪油（例えば
、ゴマ油）または合成脂肪酸エステル（例えば、オレイン酸エチルまたはトリグ
リセリド）あるいはリポソームが挙げられる。水性注射懸濁液は、懸濁液の粘性
を増大させる物質（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビト
ールまたはデキストラン）を含み得る。必要に応じて、この懸濁液はまた、高度
に濃縮された溶液の調製を可能にするために、化合物の溶解性を増大させる適切
な安定化剤または薬剤を含み得る。

【０１５９】 あるいは、活性化合物は、使用の前に、適切なビヒクル（例えば、発熱物質を
ふくまない滅菌水）との構成のための粉末形態であり得る。

【０１６０】 化合物はまた、坐剤または滞留浣腸剤のような、直腸用組成物または膣用組成
物（例えば、カカオ脂または他のグリセリドのような従来の坐剤基剤を含む）で
処方され得る。

【０１６１】 以前に記載された処方物に加えて、これらの化合物もまた、貯蔵調製物として
処方され得る。長く作用するこのような処方物は、適切なポリマー材料もしくは
疎水性材料（例えば、受容可能な油中の乳濁液として）またはイオン交換樹脂と
共に、あるいは難溶性（ｓｐａｒｉｎｇｌｙ ｓｏｌｕｂｌｅ）誘導体（例えば
、難溶性塩）として処方され得る。

【０１６２】 これらの薬学的処方物はまた、適切な固相またはゲル相のキャリアまたは賦形
剤を含み得る。これらのキャリアまたは賦形剤の例としては、炭酸カルシウム、
リン酸カルシウム、種々の糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチンおよびポ
リエチレングリコールのようなポリマーが挙げられるが、これらに限定されない
。

【０１６３】 適切な液体または固体の薬学的調製物形態は、例えば、吸入のための水溶液も
しくは生理食塩水溶液であるか、マイクロカプセル化されるか、コクレエートに
包含されるか（ｅｎｃｏｃｈｌｅａｔｅｄ）、微細金粒子上に被覆されるか、リ
ポソーム中に含まれるか、噴霧されるか、エアロゾルであるか、皮膚への移植の
ためのペレットであるか、または皮膚中に入れられるようにとがった物体に乾燥
されるかである。この薬学的組成物としてはまた、顆粒、粉末、錠剤、被覆され
た錠剤、（マイクロ）カプセル、坐剤、シロップ、乳濁液、懸濁液、クリーム、
ドロップまたは活性化合物の遅延性の放出を伴う調製物が挙げられ、これらの調
製物において、賦形剤、ならびに添加剤および／または補助剤（例えば、崩壊剤
、結合剤、被覆剤、膨張剤、潤滑剤、香料、甘味剤または可溶化剤）は、上記の
ように習慣的に使用される。この薬学的組成物は、種々の薬物送達システムにお
ける使用のために適切である。薬物送達のための本発明の方法の簡単な総説につ
いては、本明細書中で参考として援用される、Ｌａｎｇｅｒ Ｒ、Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ ２４９：１５２７−３３（１９９０）を参照のこと。

【０１６４】 核酸および／または抗体は、それ自体で（ニートで）投与され得るか、または
薬学的に受容可能な塩形態で投与され得る。医薬において使用される場合、この
塩は、薬学的に受容可能であるべきだが、薬学的に受容可能でない塩は、薬学的
に受容可能な塩を調製するために、好都合に使用され得る。このような塩として
は、以下の酸から調製されるものが挙げられるが、これらに限定されない：塩酸
、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、ｐ−トル
エンスルホン酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、蟻酸、マロン酸、コハ
ク酸、ナフタレン−２−スルホン酸、およびベンゼンスルホン酸。また、このよ
うな塩は、アルカリ金属またはアルカリ土類金属の塩（例えば、カルボン酸基の
ナトリウム塩、カリウム塩、またはカルシウム塩）として調製され得る。

【０１６５】 適切な緩衝剤としては、以下が挙げられる：酢酸および塩（１〜２％ｗ／ｖ）
；クエン酸および塩（１〜３％ｗ／ｖ）；ホウ酸および塩（０．５〜２．５％ｗ
／ｖ）；ならびにリン酸および塩（０．８〜２％ｗ／ｖ）。適切な保存剤として
は、以下が挙げられる：塩化ベンザルコニウム（０．００３〜０．０３％ｗ／ｖ
）；クロロブタノール（０．３〜０．９％ｗ／ｖ）；パラベン（０．０１〜０．
２５％ｗ／ｖ）；およびチメロサール（０．００４〜０．０２％ｗ／ｖ）。

【０１６６】 本発明において有用な核酸または他の治療剤は、さらなる抗体との混合物で送
達され得る。混合物は、核酸に加えて、いくつかの抗体からなり得る。

【０１６７】 種々の投与経路が利用可能である。選択される特定の様式は、もちろん、選択
される核酸または抗体、処置される特定の状態および治療的効力のために必要な
投薬量に依存する。本発明の方法は、一般的に言えば、医学的に受容可能な投与
の任意の様式を使用して実行され得、この任意の様式は、臨床的に受容できない
悪影響を引き起こさずに免疫応答の効果的なレベルを提供する任意の様式を意味
する。好ましい投与様式は、上記で考察される。

【０１６８】 この組成物は、単位投薬形態で好都合に提供され得、そして薬学の分野で周知
な任意の方法によって調製され得る。全ての方法は、化合物を１以上の付属的な
成分を構成するキャリアと混合する工程を包含する。一般に、これらの組成物は
、化合物を液体キャリア、微細に分割された固体キャリア、またはこれら両方に
均一かつ密接に混合し、次いで、必要な場合、生成物を成形することによって調
製される。液体用量単位は、バイアルまたはアンプルである。固体用量単位は、
錠剤、カプセルおよび坐剤である。

【０１６９】 他の送達システムとしては、時限型放出（ｔｉｍｅ−ｒｅｌｅａｓｅ）、遅延
型放出（ｄｅｌａｙｅｄ ｒｅｌｅａｓｅ）または徐放性（ｓｕｓｔａｉｎｅｄ
ｒｅｌｅａｓｅ）送達システムが挙げられる。このようなシステムは、化合物
の反復投与を回避し得、被験体および医師の簡便性を増大させる。多くの型の放
出型送達システムが利用可能であり、そして当業者に公知である。これらとして
は、ポリマーベースのシステム（例えば、ポリ（ラクチド−グリコリド）、コポ
リオキサラート（ｃｏｐｏｌｙｏｘａｌａｔｅ）、ポリカプロラクトン、ポリエ
ステルアミド、ポリオルトエステル、ポリヒドロキシ酪酸およびポリ酸無水物）
が挙げられる。薬物を含む前記のポリマーのマイクロカプセルは、例えば、米国
特許第５，０７５，１０９号に記載される。送達システムとしてはまた、以下の
非ポリマーシステムが挙げられる：ステロール（例えば、コレステロール、コレ
ステロールエステル）および脂肪酸または中性脂肪（例えば、モノグリセリド、
ジグリセリド、およびトリグリセリド）を含む脂質；ヒドロゲル放出システム；
シラスティック（ｓｙｌａｓｔｉｃ）システム；ペプチドベースのシステム；ワ
ックスコーティング；従来の結合剤および賦形剤を使用する圧縮錠剤；部分的に
融合した移植片など。特定の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定さ
れない：（ａ）米国特許第４，４５２，７７５号、同第４，６７５，１８９号、
および同第５，７３６，１５２号に記載されるような、本発明の薬剤がマトリッ
クス内の形態で含まれる、侵食性のシステム、ならびに（ｂ）米国特許第３，８
５４，４８０号、同第５，１３３，９７４号および同第５，４０７，６８６号に
記載されるような、活性成分がポリマーから制御された速度で浸透する拡散性シ
ステム。さらに、ポンプベースのハードウェア送達システムが使用され得、この
うちいくつかは、移植のために適合される。

【０１７０】 核酸は、被験体に直接投与され得るか、または薬学的に受容可能なキャリアも
しくは送達ビヒクルと共に投与され得る。核酸および必要に応じて他の治療剤は
、単独で（例えば、生理食塩水または緩衝液中に）か、または当該分野で公知の
任意の送達ビヒクルを使用して投与され得る。１つの型の送達ビヒクルは、本明
細書中で、核酸送達複合体といわれる。「核酸送達複合体」は、標的化手段（例
えば、標的細胞に対するより高い結合親和性（例えば、樹状細胞表面および／ま
たは標的細胞による細胞取り込みの増大）を生じる分子）と会合する（例えば、
イオン的にまたは共有結合的に結合するか、あるいはこれの中にカプセル化され
る）核酸分子を意味する。核酸送達複合体の例としては、以下と会合する核酸が
挙げられる：ステロール（例えば、コレステロール）、脂質（例えば、カチオン
性脂質、ビロゾームまたはリポソーム）、または標的細胞特異的結合剤（例えば
、標的細胞特異的レセプターによって認識されるリガンド）。好ましい複合体は
、標的細胞による内部移行の前に有意な未結合を減少させるために、インビボで
十分安定であり得る。しかし、この複合体は、細胞内の適切な条件下で切断可能
であり得、その結果、この核酸は、機能的な形態で放出され得る。

【０１７１】 この核酸は、上記のような非侵襲性の方法によって送達され得る。化合物の非
侵襲性の送達は、子供、老人、動物および成人までもの処置のために所望され、
そしてまた、針刺しの創傷の危険性を回避するために所望される。化合物を粘膜
表面に送達するための送達ビヒクルが記載されており、そして以下を含むがこれ
らに限定されない：コクレエート（ｃｏｃｈｌｅａｔｅ）（Ｇｏｕｌｄ−Ｆｏｇ
ｅｒｉｔｅら、１９９４、１９９６）；エマルソーム（ｅｍｕｌｓｏｍｅ）（Ｖ
ａｎｃｏｔｔら、１９９８、Ｌｏｗｅｌｌら、１９９７）；ＩＳＣＯＭ（Ｍｏｗ
ａｔら、１９９３、Ｃａｒｌｓｓｏｎら、１９９１、Ｈｕら、１９９８、Ｍｏｒ
ｅｉｎら、１９９９）；リポソーム（Ｃｈｉｌｄｅｒｓら、１９９９、Ｍｉｃｈ
ａｌｅｋら、１９８９、１９９２、ｄｅ Ｈａａｎ、１９９５ａ、１９９５ｂ）
；生きた細菌ベクター（例えば、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉ
ａ ｃｏｌｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ、Ｓｈｉｇ
ｅｌｌａ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）（Ｈｏｎｅら、１９９６、Ｐｏｕｗｅ
ｌｓら、１９９８、Ｃｈａｔｆｉｅｌｄら、１９９３、Ｓｔｏｖｅｒら、１９９
１、Ｎｕｇｅｎｔら、１９９８）；生きたウイルスベクター（例えば、ワクシニ
ア、アデノウイルス、単純ヘルペス）（Ｇａｌｌｉｃｈａｎら、１９９３、１９
９５、Ｍｏｓｓら、１９９６、Ｎｕｇｅｎｔら、１９９８、Ｆｌｅｘｎｅｒら、
１９８８、Ｍｏｒｒｏｗら、１９９９）；マイクロスフィア（Ｇｕｐｔａら、１
９９８、Ｊｏｎｅｓら、１９９６、Ｍａｌｏｙら、１９９４、Ｍｏｏｒｅら、１
９９５、Ｏ’Ｈａｇａｎら、１９９４、Ｅｌｄｒｉｄｇｅら、１９８９）；核酸
ワクチン（Ｆｙｎａｎら、１９９３、Ｋｕｋｌｉｎら、１９９７、Ｓａｓａｋｉ
ら、１９９８、Ｏｋａｄａら、１９９７、Ｉｓｈｉｉら、１９９７）；ポリマー
（例えば、カルボキシメチルセルロース、キトサン）（Ｈａｍａｊｉｍａら、１
９９８、Ｊａｂｂａｌ−Ｇｉｌｌら、１９９８）；ポリマーリング（Ｗｙａｔｔ
ら、１９９８）；プロテオソーム（Ｖａｎｃｏｔｔら、１９９８、Ｌｏｗｅｌｌ
ら、１９８８、１９９６、１９９７）；フッ化ナトリウム（Ｈａｓｈｉら、１９
９８）；トランスジェニック植物（Ｔａｃｋｅｔら、１９９８、Ｍａｓｏｎら、
１９９８、Ｈａｑら、１９９５）；ビロゾーム（Ｇｌｕｃｋら、１９９２、Ｍｅ
ｉｎｇｉａｒｄｉら、１９９５、Ｃｒｙｚら、１９９８）；ウイルス様粒子（Ｊ
ｉａｎｇら、１９９９、Ｌｅｉｂｌら、１９９８）。

【０１７２】 本発明はまた、キットを含む。このキットは、一般に、活性薬剤を収容する複
数の容器および本発明の方法を実行するための説明書を有するパッケージを含む
。活性薬剤としては、免疫刺激核酸、抗体（例えば、細胞表面抗原に特異的な抗
体）および抗癌治療剤が挙げられるが、これらに限定されない。

【０１７３】 以下の実施例は、本発明の実行の特定の例を説明するために提供され、そして
本発明をこれらの実施例に限定するとは解釈されない。当業者に明らかなように
、本発明は、種々の組成物および方法における適用を見出す。

【０１７４】 （実施例） （導入） 健康なＢ細胞とＴ細胞との間の広範囲なクロストークが存在する。悪性Ｂ細胞
もまた、Ｔ細胞と連絡するという証拠が存在する。しかし、悪性細胞は、多くの
点（正常なシグナルに応答してアポトーシスを受ける傾向の減少、種々の表面マ
ーカーの発現の変更、および有効な抗原提示細胞として機能する能力の変更を含
む）で、正常な対応物とは異なるようである。Ｌａｎｇｎｅａｕｘ Ｌら、Ｂｌ
ｏｏｄ ９１：２３８７−９６（１９９８）；Ｇｏｒｄｏｎ Ｊら、Ｌｅｕｋｅ
ｍｉａ ７ 補遺２：Ｓ５−９（１９９３）；Ｇｏｒｄｏｎ Ｊら、Ａｄｖ Ｅ
ｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ ４０６：１３９−４４（１９９６）；Ｃｈａｐｅｒｏ
ｔ Ｌら、Ｅｘｐ Ｈｅｒｍａｔｏｌ ２７：４７９−８８（１９９９）。免疫
治療アプローチは、最近、Ｂ細胞悪性疾患のいくつかのサブタイプの本発明者ら
の治療の一部になっている。Ｂ細胞悪性疾患の改善された免疫治療は、この疾患
の細胞性免疫学の増大する理解に基づいて設計される必要がある。Ｓｃｈｕｌｔ
ｚｅ ＪＬら、Ｊ Ｍｏｌ Ｍｅｄ ７７：３２２−３２（１９９９）。

【０１７５】 種々の細胞レセプターおよび抗原は、Ｂ細胞悪性疾患の増殖、分化およびアポ
トーシスに関与する。種々の抗原に対する抗体またはリガンド（ＣＤ２０、表面
免疫グロブリン、ＭＨＣ ＩＩ、ＣＤ８０、ＣＤ８６およびＣＤ４０を含む）は
、増殖阻害またはアポトーシスまでも引き起こし得る。Ｍａｌｏｎｅｙ ＤＧ、
Ｓｅｍｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２６：７４−８（１９９９）；ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ
Ｐら、Ｓｅｍｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２６：７９−８７（１９９９）；Ｓｈａｎ
Ｄら、Ｂｌｏｏｄ ９１：１６４４−５２（１９９８）；Ｃｏｉｆｆｅｒ Ｂら
、Ｂｌｏｏｄ ９２：１９２７−３２（１９９８）；ＭａＬａｕｇｈｌｉｎ Ｐ
ら、Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｈｕｎｔｉｎｇｔ）１２：１７６３−７０、１７７５−
７（１９９８）；Ｔｕｔｔ ＡＬら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６１：３１７６−
８５（１９９８）；Ｆｕｎａｋｏｓｈｉ Ｓら、Ｂｌｏｏｄ ８３：２７８７−
９４（１９９４）；Ｍａｙｕｍｉ Ｍら、Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ ９８：Ｓ２３８−４７（１９９６）；Ｈｉｇａｋｉ Ｙら、Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ７２：２０５−１４（１９９４）；Ｅｌｓａｓ
ｓｅｒ Ｄら、Ｂｌｏｏｄ ８７：３８０３−１２（１９９６）；Ｌｉｎｋ Ｂ
Ｋら、Ｂｌｏｏｄ ８１：３３４３−９（１９９３）；Ｌｉｎｋ ＢＫら、Ｉｎ
ｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ７７：２５１−６（１９９８）。抗体依存性細胞性細胞
傷害性（ＡＤＣＣ）の、抗Ｂ細胞抗原によって媒介される膜貫通シグナル伝達に
対する相対的な寄与は、いまだ明らかでない。本研究において、本発明者らは、
ＣｐＧ−ＤＮＡが、異なる型のＢ細胞悪性疾患（小胞状Ｂ細胞リンパ腫およびＢ
−ＣＬＬを含む）の表現型、アポトーシスおよび増殖にどのように影響するかを
試験した。

【０１７６】 （材料および方法） （細胞培養）新鮮なリンパ節サンプルを、手術室から獲得し、そして無菌的な
条件下でメスで切り刻んだ。得られた懸濁物を、続いて、ナイロンメッシュスク
リーン、１５０μｍメッシュのスクリーンおよび６０μｍメッシュのスクリーン
を含む滅菌篩−組織グラインダーを通過させた。あるいは、単核細胞を、末梢血
または胸膜液から記載のように獲得した。Ｈａｒｔｍａｎｎ Ｇら、Ｊ Ｐｈａ
ｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ ２８５：９２０−８（１９９８）。赤血球を
、標準的な手順に従って、５ｍｌのＡＣＫ溶解緩衝液中に細胞を再懸濁すること
によって除去した。細胞をゆっくりと凍結させ、そして液体窒素中で保存した。
分析のために、細胞を解凍し、そして１０％（ｖ／ｖ）熱不活化（５６℃、１時
間）ＦＣＳ（ＨｙＣｌｏｎｅ、Ｌｏｇａｎ、ＵＴ）、１．５ｍＭ Ｌ−グルタミ
ン（全てＧｉｂｃｏ ＢＲＬ、Ｇｒａｍｄ Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹから）中に再懸
濁し、そして以下に示されるようなＯＤＮの存在下で９６ウェルのプレート（１
×１０^６細胞／ｍｌ）上でインキュベートした。いくつかのサンプルについて利
用可能な細胞の数の限定に起因して、全てのサンプルについて全てのアッセイが
実行されたわけではない。

【０１７７】 （オリゴヌクレオチド）ヌクレアーゼ耐性ホスホロチオエート改変オリゴデオ
キシヌクレオチド（ＯＤＮ）を、Ｏｐｅｒｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ａ
ｌａｍｅｄａ、ＣＡ）およびＨｙｂｒｉｄｏｎ Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ Ｐｒｏｄ
ｕｃｔｓ（Ｍｉｌｆｏｒｅｄ、ＭＡ）から購入した。配列は以下であった：Ｃｐ
Ｇ ＯＤＮ ２００６：５’−ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧ
ＴＴ−３’（配列番号７２９）およびコントロールＯＤＮ ２０１７：５’−Ｃ
ＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣ−３’（配列番号１６８）。ＯＤＮを
、発熱物質を含まない試薬を使用して、ＴＥ（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１
ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ８．０）中に希釈した。ＯＤＮを、５μｇ／ｍｌの最終濃
度で添加した。

【０１７８】 （フローサイトメトリー）細胞を洗浄し、そして氷冷ＰＢＳまたはＡｎｎｅｘ
ｉｎ Ｖ結合緩衝液（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ／ＮａＯＨ、１４０ｍＭ ＮａＣｌ
、２．５ｍＭ ＣａＣｌ_２、ｐＨ７．４）中に再懸濁した。マウスまたはヒトの
血清を、抗体の非特異的な結合をブロックするために添加した（最終濃度１％）
。表面抗原染色を、記載のように実行した。Ｈａｒｔｍａｎｎ Ｇら、Ｊ Ｐｈ
ａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ ２８５：９２０−８（１９９８）。簡潔に
は、１サンプル当たり１×１０^５の細胞を、示されたようなＣｙＣｈｒｏｍｅ標
識した抗ＣＤ１９抗体およびＦＩＣＴ標識またはＰＥ標識した抗体を用いて、氷
上で２０分間染色した。次いで、これらを洗浄し、そしてフローサイトメトリー
で分析した。ＣＤ４０に対するモノクローナル抗体（５Ｃ３）、ＣＤ６９に対す
るモノクローナル抗体（ＦＮ５０）、ＣＤ８０に対するモノクローナル抗体（Ｌ
３０７．４）、ＣＤ８６に対するモノクローナル抗体（ＩＴ２．２）、ＣＤ５４
に対するモノクローナル抗体（ＨＡ５８）、ＭＨＣ Ｉに対するモノクローナル
抗体（Ｇ４６−２．６）およびＭＨＣ ＩＩに対するモノクローナル抗体（ＴＵ
３９）ならびにアイソタイプコントロール（ＩｇＧ１、ＭＯＰＣ−２１およびＩ
ｇＧ２ａ、Ｇ１５５−１７８）を、ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ
、ＣＡから購入した。ＦＩＴＣ標識したポリクローナル抗ヒトＩｇを、Ｓｏｕｔ
ｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＡＬから購入した。種々の
ＨＬＡ−ＤＲに対するモノクローナルヒト化抗体である１Ｄ１０を、以前に記載
のように本発明者らの研究室で産生した。Ｌｉｎｋ ＢＬら、Ｂｌｏｏｄ ８１
：３３４３−９（１９９３）。モノクローナルヒト化抗ＣＤ２０抗体であるＣ２
Ｂ８を、ＩＤＥＣ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、Ｃ
Ａから購入した。１Ｄ１０およびＣ２Ｂ８を、標準的なプロトコールに従って、
ＦＩＴＣで標識した。分析ゲートを、ＦＳＣ／ＳＳＣ特徴およびＡｎｎｅｘｉｎ
Ｖ染色に従って同定された生存細胞に対してセットした（分析ゲート内に９７
％より多い生存細胞）。スペクトルの重なりを、適切な補正によって較正した。
１サンプル当たり１×１０^４細胞からのフローサイトメトリーデータを、ＦＡＣ
Ｓｃａｎ（Ｂｅｃｋｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｍｅｔ
ｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｓａｎ Ｊｏｓｅ、ＣＡ）で獲得した。データを、コン
ピュータープログラムＦｌｏｗＪｏ（バージョン２．５．１、Ｔｒｅｅ Ｓｔａ
ｒ，Ｉｎｃ．、Ｓｔａｎｆｏｒｄ、ＣＡ）を使用して分析した。

【０１７９】 （ＣＦＳＥ染色）ＣＦＳＥ ５−（および６−）カルボキシフロオレセインジ
アセテートスクシンイミジルエステル、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ、Ｕ
ＳＡは、細胞分裂の際に娘細胞間で均等に分割されるフルオレセイン誘導細胞内
蛍光標識である。ＣＦＳＥによる細胞の染色は、混合された細胞懸濁物中の増殖
細胞の定量および免疫表現型分類（ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｉｎｇ）の両
方を可能にする。オリゴヌクレオチド分解産物とチミジン取り込み（標準的な増
殖アッセイ）との間の障害は、この方法の使用によって回避される。この技術は
、以前に詳細に記載されている。Ｌｙｏｎｓ ＡＢら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍ
ｅｔｈｏｄｓ １７１：１３１−７（１９９４）。簡潔には、細胞をＰＢＳで２
回洗浄し、１μＭの最終濃度でＣＦＳＥを含むＰＢＳ中に再懸濁し（１×１０^７ 細胞／ｍｌ）、そして３７℃で１０分間インキュベートした。細胞を、ＰＢＳで
３回洗浄した。

【０１８０】 （ＴＵＮＥＬアッセイ）Ｌｉら（Ｌｉ Ｘら、Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ ２
２２：２８−３７（１９９６））によって記載されるアッセイの改変に基づく二
色ＤＮＡ鎖切断（ｂｒｅａｋ）標識アッセイを使用して、ＣｐＧ ＯＤＮに応答
するＢ細胞増殖を評価した。このアッセイは、ＢｒｄＵ標識細胞におけるＤＮＡ
鎖切断の誘導の前および後の、末端トランスフェラーゼ媒介性のｄＵＴＰニック
末端標識（ＴＵＮＥＬ）を含んだ。簡潔には、細胞を、ＯＤＮありまたはなしで
３日間培養した。次いで、これらを、１０μＭ ＢｒｄＵ中で１６時間インキュ
ベートし、そしてサイトスピンによってスライド上に配置した。次いで、細胞を
、１％パラホルムアルデヒド含有ＰＢＳ中に１５分間置き、次に７０％エタノー
ル中に２０分間置いた。アポトーシス細胞を示すＤＮＡ開裂を、ＦＩＴＣ−ｄｄ
ＵＴＰ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ−Ｍａｎｎｈｅｉｍ）を用いて、ニック鎖の３’
−ＤＮＡ末端を標識することによって検出した。ジデオキシ−ｄＵＴＰの使用は
、その後の工程において３’末端のさらなる伸長を防止した。次いで、スライド
を、ＵＶ透過照明器上の両端で２ｍｍの支持体に表を下にして配置し、そして５
分間曝露させた。ＢｒｄＵ取り込み（すなわち、増殖細胞）部位での光分解によ
って誘導された新たなＤＮＡ鎖切断を、テトラメチルローダミン−ｄＵＴＰ（Ｔ
ＭＲ−ｄＵＴＰ、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ−Ｍａｎｎｈｅｉｍ）を使用する第二の
ＴＵＮＥＬ標識によって検出した。両方のＴＵＮＥＬ染色工程は、カバーガラス
の下で、５０μｌのＴｄＴ混合物（３４μｌの蒸留水、１０μｌの５×ＴｄＴ緩
衝液、５μｌの２５ｍＭ 塩化コバルト、１２．５単位の末端トランスフェラー
ゼおよび０．５ｎｍｏｌの蛍光色素結合体化ｄＵＴＰ）（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ
−Ｍａｎｎｈｅｉｍ）中で、加湿チャンバにおいて３７℃で１時間、スライドを
インキュベートする工程を包含した。次いで、このスライドを、蒸留水の５回の
迅速な交換によって洗浄し、続いて室温で３０％のホルムアミドを含む２×ＳＳ
Ｃでの各々５分間の３回の交換によって洗浄した。第二のＴＵＮＥＬ標識工程の
後、細胞をＣＤ１９について対比染色し、そしてまた血球分化についてＷｒｉｇ
ｈｔ溶液で染色し、そしてＤＡＰＩ対比染色を含むＶｅｃｔａｓｈｉｅｌｄ媒体
中（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｂｕｒｌｉｎｇａｎｅ、ＣＡ）
に据え付けた。細胞の形態および染色を、光学顕微鏡および蛍光顕微鏡の両方を
使用して評価した。アポトーシス細胞を、緑色蛍光（ＦＩＴＣ標識）によって同
定し、そして増殖細胞を赤色蛍光（ＴＭＲ標識）によって同定した。アポトーシ
ス細胞および増殖細胞の割合を、細胞がＯＤＮで処理されたか否かを隠された３
人の観察者が、１サンプル当たり少なくとも２００細胞を計数することによって
、決定した。平均および標準誤差を、これらの３つの読み取りに基づいて各サン
プルについて決定した。

【０１８１】 （実施例１：免疫刺激核酸は、悪性Ｂ細胞での形態学的変化および表現型変化
を誘導する） 我々の先の研究は、増大した細胞の大きさ（ＦＳＣ）および粒度（ＳＳＣ）で
のＣｐＧ ＯＤＮの結果によって、未処置のヒトＢ細胞の活性化を証明した。Ｈ
ａｒｔｍａｎｎ Ｇら、Ｊ Ｉｍｍｕｏｌ １６４：９４４−５３（２０００）
。それゆえ、我々は、このような変化が悪性Ｂ細胞においても生じるか否かを最
初に決定した。原発性悪性Ｂ細胞を、種々の型のＢ細胞悪性疾患を有する患者の
リンパ節の生検、末梢血、または胸膜液から得た。さらに、良性の反応性濾胞過
形成を有する患者のリンパ節由来の細胞を検討した。総計で９つの試料を評価し
た（表５を参照のこと）。細胞を、ＣｐＧ ＯＤＮ２００６（５μｇ／ｍｌ）ま
たはコントロールＯＤＮ２０１７を含む培地中で、７２時間インキュベートした
。ＦＳＣおよびＳＳＣを、ＣＤ１９＋生存細胞をゲーティングすることにより試
験した（図１）。コントロールＯＤＮ２０１７または培地単独と比較した場合に
、ＣｐＧ ＯＤＮ２００６に応じた種々の程度のＦＳＣおよびＳＳＣの変化を記
録した。匹敵する変化は、良性の反応性濾胞過形成を有する患者由来の細胞では
検出されなかった。

【０１８２】 図１は、ＣｐＧ ＯＤＮ刺激に関する辺縁層リンパ腫細胞の形態学的変化を示
す。辺縁層リンパ腫細胞を有する患者由来の悪性Ｂ細胞を、５μｇ／ｍｌのＯＤ
Ｎなし（ＡおよびＤ）、コントロールＯＤＮ（ＢおよびＥ）またはＣｐＧ ＯＤ
Ｎ（ＣおよびＦ）を用いて７２時間刺激し、そしてフローサイトメトリーによっ
て分析した。Ａ、Ｂ、およびＣは、ＦＳＣ（Ｘ軸） 対 ＳＳＣ（Ｙ軸）を示す
。Ｄ、Ｅ、およびＦはＣＤ１９の発現（Ｘ軸） 対 ＳＳＣ（Ｙ軸）を示し、他
の白血球の亜集団由来のＢ細胞の分離を可能する。ＣｐＧ ＯＤＮを用いる刺激
に関して、Ｂ細胞は右上に移動し、粒度および大きさの増大を示した。刺激なし
または非ＣｐＧ ＯＤＮによる刺激では、変化は検出できなかった。

【０１８３】 ＣＤ２０、ＣＤ４０、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、表面Ｉｇ、ＣＤ５４、
ＭＨＣＩ、ＭＨＣＩＩ、およびＨＬＡ−ＤＲ改変体抗原（ｍｏＡｂ １Ｄ１０）
の発現を、生存ＣＤ１９＋細胞に関して、ＣｐＧ ＯＤＮとともに７２時間イン
キュベートした後、試験した。これらのマーカーのそれぞれは、コントロールＯ
ＤＮ２０１７と比較したＣｐＧ ＯＤＮ ２００６に応じて変動範囲をアップレ
ギュレートした（図２、図３）。

【０１８４】 図２は、ＣｐＧ ＯＤＮ処置の際の辺縁層リンパ腫細胞上での表面抗原の発現
を示す。辺縁層リンパ腫細胞を有する患者由来の悪性Ｂ細胞上の表面抗原の発現
のフローサイトメトリー分析を、ＣｐＧ ＯＤＮまたは非ＣｐＧ ＯＤＮのいず
れかの５μｇ／ｍｌを用いた刺激の７２時間後で実行した。ＣｐＧ ＯＤＮを用
いる刺激に関して、試験した全マーカーの中央の吸光強度は右に移動し、これは
、表面発現の増強を示す。細い曲線は、培地単独とのインキュベーション、点線
の曲線はコントロールＯＤＮとのインキュベーション、太い曲線はＣｐＧ ＯＤ
Ｎとのインキュベーションを示す。

【０１８５】 図３は、異なったＢ細胞悪性疾患を呈する初代細胞およびＣｐＧ ＯＤＮ処置
の際の良性の濾胞過形成の細胞上での、表面抗原の発現を示す。異なったＢ細胞
悪性疾患を有する患者由来のリンパ節の生検、末梢血、または胸膜液に由来する
細胞を、培地単独、コントロールＯＤＮまたはＣｐＧ ＯＤＮのいずれかととも
に７２時間インキュベートした。各パネルは、１つの実験を示す。

【０１８６】 ＣＤ２０は、試験した全試料において種々の程度に発現した。周知のように、
他の組織学のＢ細胞悪性疾患と比較した場合に、ベースラインのＣＤ２０の発現
は、Ｂ−ＣＬＬ試料においてより低かった。コントロールＯＤＮ２０１７ではな
く、ＣｐＧ ＯＤＮ２００６は、Ｂ−ＣＬＬおよび両方の辺縁層リンパ腫におけ
るＣＤ２０の発現を増強した。他のリンパ腫試料でのアップレギュレーションは
、全く検出されないか、またはほとんど検出されなかった。反応性濾胞過形成か
ら誘導した非悪性ＣＤ１９＋細胞は、ＣｐＧに応じてＣＤ２０の発現が減少した
（図３）。このデータは、ＣＤ２０およびＣＤ４０のベースラインの発現と、Ｃ
ｐＧ ＯＤＮとのインキュベーション後のこれらのマーカーの発現との間の逆の
相関を証明し；従って、ＣＤ２０およびＣＤ４０のベースラインが低ければ低い
ほど、ＣｐＧ ＯＤＮに対する応答性はより高くなる（ｒ：０．６；−０．４）
（図４）。この相関は、他のマーカーについてはより明らかではない。反応性濾
胞過形成から誘導したＣＤ１９＋細胞は、ＣｐＧによるさらなるアップレギュレ
ーションを受けなかった活性化マーカーの高いベースライン発現を示した。

【０１８７】 図４は、ＣＤ２０およびＣＤ４０に対するＣｐＧ ＯＤＮの影響が、発現のベ
ースラインレベルに依存することを示す。異なったＢ細胞悪性疾患を有する患者
由来のリンパ節の生検、末梢血、または胸膜液に由来する細胞を（表５を参照の
こと）、ＣｐＧ ＯＤＮとともにまたはＣｐＧ ＯＤＮを含まずに７２時間イン
キュベートした。ＣＤ２０およびＣＤ４０の発現を、フロサイトメトリーで測定
した。培地単独でのＣＤ２０およびＣＤ４０のベースラインの発現を、ＣｐＧ
ＯＤＮの存在下でのＣＤ２０およびＣＤ４０の発現と比較した。相関係数を示す
。

【０１８８】 （表５：試験した試料でのＣＤ１９＋細胞の割合）

【０１８９】

【表５】

【０１９０】 （実施例２：免疫刺激核酸は、悪性Ｂ細胞の増殖およびアポトーシスを誘導す
る） ＣｐＧは、初代ヒトＢ細胞の強い増殖応答を誘導する。Ｈａｒｔｍａｎｎ Ｇ
ら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６４：９４４−５３（２０００）。ＣｐＧ ＯＤＮ
がＢ−ＣＬＬの増殖を誘導する能力を有するか否かを評価するために、２つの技
術を使用した。試料の選択するために、細胞をＣＦＳＥで染色し、４日間インキ
ュベートした。細胞の増殖は、あらゆる細胞分裂のＣＦＳＥ染色の欠損によって
示す。Ｂ−ＣＬＬにおいて、ＣＤ５は、ＣＤ１９＋細胞のうち悪性Ｂ細胞を同定
するために使用し得る。悪性Ｂ細胞（ＣＤ５＋およびＣＤ１９＋）の増殖は、正
常Ｂ細胞（ＣＤ５−およびＣＤ１９＋）の増殖よりも低かった（図５）。辺縁層
リンパ腫については、ＣｐＧ ＯＤＮ２００６は、ＣＤ１９＋細胞集団の増殖を
誘導した（図５）。

【０１９１】 図５は、悪性Ｂ細胞および正常Ｂ細胞のＣｐＧ ＯＤＮ誘導増殖の比較を示す
。２人の患者（Ｂ−ＣＬＬを有する患者および循環悪性細胞を伴う辺縁層リンパ
腫を有する患者）に由来する末梢血単核細胞を、ＣｐＧ ＯＤＮまたは培地単独
で７２時間インキュベートし、２色フラーサイトメトリーで評価した。ＣＦＳＥ
蛍光（Ｘ軸）およびＣＤ５の発現（ＣＬＬ）またはＣＤ１９の発現（辺縁層リン
パ腫）（Ｙ軸）を、評価した。ＣＬＬにおいて、ＣｐＧ ＯＤＮは、ＣＤ５＋細
胞およびＣＤ５−細胞の両方の増殖を促進した。しかし、増殖細胞の相対数およ
び分裂回数は、ＣＤ５＋部分集合よりもＣＤ５−部分集合のほうが低かった。辺
縁層リンパ腫において、ＣｐＧ ＯＤＮは、ＣＤ１９＋細胞部分集合での増殖を
促進した。

【０１９２】 一貫しないパターンは、ＣｐＧ ＯＤＮが、形態学的基準により決定される死
細胞の割合を変化させるか否かの決定に関連することは明らかであった（表６を
参照のこと）。

【０１９３】 （表６：形態学的基準に基づくアポトーシス細胞の割合）

【０１９４】

【表６】

【０１９５】 ＴＵＮＥＬアッセイを、増殖およびアポトーシスの両方に対するＣｐＧ ＯＤ
Ｎの効果を評価するために利用した。その結果を表７に示す。

【０１９６】 （表７：ＴＵＮＥＬにより決定したアポトーシスおよび増殖）

【０１９７】

【表７】

【０１９８】 （実施例３：ＣｐＧ ＯＤＮは、マウスＩｇＧ１（ヒトＩｇＧ２に関連する）
抗腫瘍抗体ではなくマウスＩｇＧ２ａ（ヒトＩｇＧ１に関連する）抗腫瘍抗体の
治療効果を増強する） マウスサブタイプＩｇＧ２ａ抗体と組み合わされた場合、ＣｐＧ ＯＤＮは、
腫瘍を有するマウスでの生存を劇的に促進する。マウスに、５０００ Ｔ３Ｃ細
胞を０日目に腹腔内注射した。次いで、それらにＩｇＧ１抗イディオタイプモノ
クローナル抗体（ＭＳ５Ａ１０）またはＩｇＧ２ａ抗イディオタイプモノクロー
ナル抗体（ＭＳ１１Ｇ６）１００μｇを、５日目、７日目、および１０日目に与
えた。このモデルにおいて、標的抗原は、そのリンパ腫細胞によって発現される
イディオタイプである。それゆえ、抗腫瘍抗体はまた、「抗イディオタイプ」で
ある。これらの抗体（ＭＳ５Ａ１０およびＭＳ１１Ｇ６）は、同時に抗腫瘍抗体
および抗イディオタイプ抗体の両方である。２０μｇのＣｐＧ ＯＤＮ１８２６
（５’ＴＣＣＡＴＧＡＣＧＴＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴ ３’；配列番号：５６０）
を、同時に与えた。結果を図６に示す。未処理コントロールは、腫瘍を接種の１
７日後の生存時間の中央値（ＭＳＴ）を有した。ＣｐＧ ＯＤＮを添加したマウ
スＩｇＧ１抗体で処置したマウスは、マウスＩｇＧ１抗体単独で処置したマウス
と類似の生存（それぞれ、ＭＳＴ２８日および２７日）を有した。対照的に、Ｃ
ｐＧ ＯＤＮを添加したマウスＩｇＧ２で処置したマウスは、マウスＩｇＧ２単
独で処置したマウスと比較した場合に、有意に改善された生存（それぞれ、ＭＳ
Ｔ４５日および３７日）を有した。

【０１９９】 先に記載の明細書は、当業者が本発明を実施し得るに十分であるとみなされる
。本発明は、提供される実施例によって範囲を制限されるべきではない。なぜな
ら、これらの実施例は本発明の１つの局面の単一の説明として意図され、他の機
能的に等価な実施形態が本発明の範囲内にあるからである。本明細書中に示され
、そして記載されるものに加えて、本発明の種々の改変が、上記から当業者に明
らかとなり、そして添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれる。本発明の利点お
よび目的は、本発明の各実施形態によって必ずしも含まれない。

【０２００】 この出願に言及される全て参考文献、特許および特許刊行物は、参考として本
明細書中にその全体が援用される。

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１は、ＣｐＧオリゴヌクレオチド刺激の際の辺縁層リンパ腫細胞の形態学的
変化の誘導を実証する、フローサイトメトリからのデータを示している。辺縁層
リンパ腫を有する患者由来の悪性Ｂ細胞を、オリゴヌクレオチドなし（Ａおよび
Ｄ）、コントロールオリゴヌクレオチド（ＯＤＮ ２０１７、配列番号１６８、
ＢおよびＥ）、または、ＣｐＧオリゴヌクレオチド（ＯＤＮ ２００６、配列番
号７２９、ＣおよびＦ）で刺激し、そしてフローサイトメトリによって分析した
。Ａ、ＢおよびＣは、前方散乱（ＦＳＣ；ｘ軸）対 側方散乱（ＳＳＣ；ｙ軸）
を示している。Ｄ、ＥおよびＦは、ＦＳＣ（ｙ軸）に対するＣＤ１９発現（ｘ軸
）を示している。

【図２】 図２は、ＣｐＧオリゴヌクレオチド（ＯＤＮ）処置の際の辺縁層リンパ腫細胞
上の表面抗原の発現の変化を実証するフローサイトメトリからのデータを示して
いる。辺縁層リンパ腫を有する患者由来の悪性Ｂ細胞上の表面抗原発現のフロー
サイトメトリ分析を、ＣｐＧオリゴヌクレオチドまたは非ＣｐＧオリゴヌクレオ
チドのいずれかを用いて行った。細い曲線は、培地単独を用いるインキュベーシ
ョンを示し、点線の曲線は、コントロールオリゴヌクレオチドを用いるインキュ
ベーションを示し、そして太字の曲線は、ＣｐＧオリゴヌクレオチドを用いるイ
ンキュベーションを示している。

【図３】 図３は、各パネルにおいて左から右に：ネガティブコントロール、オリゴヌク
レオチドなし、コントロールオリゴヌクレオチド（ＯＤＮ ２０１７、配列番号
１６８）、またはＣｐＧオリゴヌクレオチド（ＯＤＮ ２００６、配列番号７２
９）を用いる処置の際の、異なるＢ細胞悪性度を示す初代細胞および良性の濾胞
性過形成の細胞上の表面抗原の発現の変化を表す一連の棒グラフである。各パネ
ルは、１つの実験を表している。

【図４】 図４は、ＣＤ２０（上図）およびＣＤ４０（下図）に対するＣｐＧオリゴヌク
レオチドの効果が、ＣＤ２０およびＣＤ４０の発現のベースラインレベルに依存
しているという観測を示す一連のグラフである。異なるＢ細胞悪性度を有する患
者由来のリンパ節生検、末梢血または胸膜液からの細胞を、ＣｐＧオリゴヌクレ
オチドと共にかまたはＣｐＧオリゴヌクレオチドなしでインキュベートし、ＣＤ
２０およびＣＤ４０の発現を、フローサイトメトリによって測定した。

【図５】 図５は、悪性Ｂ細胞および正常なＢ細胞のＣｐＧオリゴヌクレオチド−誘導増
殖の効果を実証するフローサイトメトリからのデータを示している。Ｂ−ＣＬＬ
（左図）または循環悪性細胞を有する辺縁層リンパ腫（右図）を有する患者由来
の末梢血単核細胞を、ＣｐＧオリゴヌクレオチド（下図）または培地単独（上図
）を用いてインキュベートして、２色のフローサイトメトリによって評価した。
ＣＦＳＥ蛍光（ｘ軸）およびＣＤ５（Ｂ−ＣＬＬ）またはＣＤ１９（辺縁層リン
パ腫）の発現（ｙ軸）を評価した。

【図６】 図６は、マウスＩｇＧ２ａとマウスＩｇＧｌ抗腫瘍抗体とを組み合わせたＣｐ
Ｇ刺激に対する、０日目に腫瘍細胞を注射されたマウスの生存率を示すグラフで
ある。処置は、塗り潰し四角（未処置のコントロール）；塗り潰し円（マウスＩ
ｇＧ１）；塗り潰し三角（マウスＩｇＧ１＋ＣｐＧ）；塗り潰し菱形（マウスＩ
ｇＧ２ａ）；および白四角（マウスＩｇＧ２ａ＋ＣｐＧ）として示されている。

【配列表】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 35/00 Ａ６１Ｐ 35/00 35/02 35/02 35/04 35/04 43/00 １２１ 43/00 １２１ Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｓ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＯ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＣ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ， ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，Ｉ Ｎ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ， ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，Ｐ Ｌ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ， ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ Ｆターム(参考） 4B063 QA06 QA19 QQ08 QQ79 QR48 QR77 QS33 QX02 4C084 AA13 AA19 MA02 NA14 ZB261 ZB262 ZB271 ZC751 4C085 AA03 AA14 BB01 CC21 CC22 DD62 EE01 EE03

Claims (77)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 癌を処置または予防するための方法であって、該方法は、以
   下： ＣＤ２０の発現を上方制御するのに有効な量の核酸、および抗ＣＤ２０抗体を、
   癌を有する被験体または癌を発症する危険性のある被験体に投与する工程、 を包含する方法。
2. 【請求項２】 請求項１に記載の方法であって、ここで、前記核酸が、非メ
   チル化ＣｐＧモチーフを有する免疫刺激性ＣｐＧ核酸である、方法。
3. 【請求項３】 請求項１に記載の方法であって、ここで、前記核酸が、免疫
   刺激性Ｔ−リッチ核酸である、方法。
4. 【請求項４】 請求項１に記載の方法であって、ここで、前記核酸が、免疫
   刺激性ポリ−Ｇ核酸である、方法。
5. 【請求項５】 請求項１に記載の方法であって、ここで、前記核酸が、細菌
   性ＤＮＡである、方法。
6. 【請求項６】 請求項１に記載の方法であって、ここで、前記核酸が、真核
   生物性ＤＮＡである、方法。
7. 【請求項７】 請求項１に記載の方法であって、ここで、前記癌が、低レベ
   ルのＣＤ２０発現に関連したＢ細胞リンパ腫である、方法。
8. 【請求項８】 請求項７に記載の方法であって、ここで、前記Ｂ細胞リンパ
   腫が、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（Ｂ−ＣＬＬ）である、方法。
9. 【請求項９】 請求項７に記載の方法であって、ここで、前記Ｂ細胞リンパ
   腫が、辺縁層リンパ腫である、方法。
10. 【請求項１０】 請求項１に記載の方法であって、ここで、前記抗ＣＤ２０
    抗体が、Ｃ２Ｂ８である、方法。
11. 【請求項１１】 請求項１に記載の方法であって、ここで、前記抗ＣＤ２０
    抗体が、リツキシマブである、方法。
12. 【請求項１２】 請求項１に記載の方法であって、ここで、前記核酸が、ス
    トリンジェントな条件下でゲノムＤＮＡまたはゲノムＲＮＡとハイブリダイズし
    ない、方法。
13. 【請求項１３】 請求項１に記載の方法であって、ここで、前記核酸が、修
    飾された骨格を有する、方法。
14. 【請求項１４】 請求項１３に記載の方法であって、ここで、前記修飾され
    た骨格が、リン酸骨格修飾である、方法。
15. 【請求項１５】 請求項１３に記載の方法であって、ここで、前記修飾され
    た骨格が、ペプチド修飾されたオリゴヌクレオチド骨格である、方法。
16. 【請求項１６】 請求項１に記載の方法であって、ここで、前記核酸が、免
    疫刺激性核酸である、方法。
17. 【請求項１７】 請求項１に記載の方法であって、ここで、前記核酸が、８
    〜４０ヌクレオチド長である、方法。
18. 【請求項１８】 請求項１に記載の方法であって、ここで、前記核酸が単離
    されている、方法。
19. 【請求項１９】 請求項１に記載の方法であって、ここで、前記核酸が、合
    成核酸である、方法。
20. 【請求項２０】 請求項１に記載の方法であって、ここで、前記核酸および
    前記抗ＣＤ２０抗体が、一緒に投与される、方法。
21. 【請求項２１】 請求項１に記載の方法であって、ここで、前記核酸および
    前記抗ＣＤ２０抗体が、別々に投与される、方法。
22. 【請求項２２】 リンパ腫を診断するための方法であって、該方法は、以下
    ： １つの型のリンパ腫を有する被験体または１つの型のリンパ種を有する疑いのあ
    る被験体からＢ細胞を単離する工程、および 該Ｂ細胞が免疫刺激性核酸と接触した場合の、細胞表面マーカーにおける変化を
    同定し、ここで、該Ｂ細胞上に誘導された該細胞表面マーカーが、該型のリンパ
    腫の指標である、工程、 を包含する、方法。
23. 【請求項２３】 請求項２２の方法であって、該方法が、癌を処置するため
    に、前記被験体に、免疫刺激性核酸およびＢ細胞上に誘導される前記細胞表面マ
    ーカーに特異的な抗体を投与することによって、該癌を処置するための方法、 をさらに包含する、方法。
24. 【請求項２４】 癌を処置または予防するための方法であって、該方法は、
    以下： 癌細胞表面上の表面抗原の発現を誘導するために有効な量の核酸を、癌を有する
    被験体または癌を発症する危険性のある被験体に投与する工程、および 抗ＣＤ２２抗体および抗ＣＤ１９抗体からなる群より選択される抗体を、該被験
    体に投与する工程、 を包含する、方法。
25. 【請求項２５】 請求項２４に記載の方法であって、ここで、前記核酸が、
    非メチル化ＣｐＧモチーフを有する免疫刺激性ＣｐＧ核酸である、方法。
26. 【請求項２６】 請求項２４に記載の方法であって、ここで、前記核酸が、
    免疫刺激性Ｔ−リッチ核酸である、方法。
27. 【請求項２７】 請求項２４に記載の方法であって、ここで、前記核酸が、
    免疫刺激性ポリ−Ｇ核酸である、方法。
28. 【請求項２８】 請求項２４に記載の方法であって、ここで、前記核酸が、
    細菌性ＤＮＡである、方法。
29. 【請求項２９】 請求項２４に記載の方法であって、ここで、前記核酸が、
    真核生物性ＤＮＡである、方法。
30. 【請求項３０】 請求項２４に記載の方法であって、ここで、前記抗ＣＤ２
    ２抗体が、ヒトＩｇＧ１抗体である、方法。
31. 【請求項３１】 請求項２４に記載の方法であって、ここで、前記抗ＣＤ２
    ２抗体が、マウスＩｇＧ２ａ抗体である、方法。
32. 【請求項３２】 請求項２４に記載の方法であって、ここで、前記抗ＣＤ１
    ９抗体が、ヒトＩｇＧ１抗体である、方法。
33. 【請求項３３】 請求項２４に記載の方法であって、ここで、前記抗ＣＤ１
    ９抗体が、マウスＩｇＧ２ａ抗体である、方法。
34. 【請求項３４】 リンパ腫を処置するための方法であって、該方法は、以下
    ： リンパ腫を有する被験体からＢ細胞を単離する工程、 該Ｂ細胞の表面上に発現しないか、またはコントロールＢ細胞の表面よりも低量
    で発現する表面抗原を同定する工程、 該癌を処置するために、該被験体に、該同定された表面抗原に特異的な抗体およ
    びの免疫刺激性核酸を投与する工程であって、ここで、該免疫刺激性核酸が、該
    癌細胞表面上の該表面抗原の発現を上方制御するのに有効な量で投与される、工
    程、 を包含する、方法。
35. 【請求項３５】 請求項３４に記載の方法であって、ここで、前記表面抗原
    が、ＣＤ２０である、方法。
36. 【請求項３６】 請求項３４に記載の方法であって、ここで、前記表面抗原
    が、ＣＤ４０である、方法。
37. 【請求項３７】 請求項３４に記載の方法であって、ここで、前記表面抗原
    が、ＣＤ２２である、方法。
38. 【請求項３８】 請求項３４に記載の方法であって、ここで、前記表面抗原
    が、ＣＤ１９である、方法。
39. 【請求項３９】 請求項３４に記載の方法であって、ここで、前記リンパ腫
    が、Ｂ−ＣＬＬである、方法。
40. 【請求項４０】 請求項３４に記載の方法であって、ここで、前記リンパ腫
    が、辺縁層リンパ腫である、方法。
41. 【請求項４１】 請求項３４に記載の方法であって、ここで、前記抗体が、
    ヒトＩｇＧ１抗体である、方法。
42. 【請求項４２】 請求項３４に記載の方法であって、ここで、前記抗体が、
    マウスＩｇＧ２ａ抗体である、方法。
43. 【請求項４３】 抗体療法に耐性のリンパ腫を処置するための方法であって
    、該方法は、以下： 該リンパ腫を処置するために、該リンパ腫が耐性である表面抗原に特異的な抗体
    および核酸を、該表面抗原に特異的な抗体を用いる療法に耐性のリンパ腫を有す
    る被験体に投与する工程であって、ここで、該核酸が該リンパ腫細胞表面上の該
    表面抗原の発現を上方制御するのに有効な量で投与される、工程、 を包含する、方法。
44. 【請求項４４】 請求項４３に記載の方法であって、ここで、前記表面抗原
    が、ＣＤ２０である、方法。
45. 【請求項４５】 請求項４４に記載の方法であって、ここで、前記抗体が、
    リツキシマブである、方法。
46. 【請求項４６】 請求項４３に記載の方法であって、ここで、前記表面抗原
    が、ＣＤ４０である、方法。
47. 【請求項４７】 請求項４３に記載の方法であって、ここで、前記表面抗原
    が、ＣＤ２２である、方法。
48. 【請求項４８】 請求項４３に記載の方法であって、ここで、前記表面抗原
    が、ＣＤ１９である。
49. 【請求項４９】 請求項４３に記載の方法であって、ここで、前記抗体が、
    ヒトＩｇＧ１抗体である、方法。
50. 【請求項５０】 請求項４３に記載の方法であって、ここで、前記抗体が、
    マウスＩｇＧ２ａ抗体である、方法。
51. 【請求項５１】 請求項４３に記載の方法であって、該方法が、抗癌治療剤
    を投与する工程をさらに包含する、方法。
52. 【請求項５２】 請求項５１に記載の方法であって、ここで、前記抗癌治療
    剤が、化学療法剤または癌ワクチンからなる群より選択される、方法。
53. 【請求項５３】 請求項５２に記載の方法であって、ここで、前記化学療法
    剤が、以下： メトトレキサート、ビンクリスチン、アドリアマイシン、シスプラチン、マイト
    マイシンＣ、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダカルバジン、タキソール、バ
    ルルビシン、ノバントロン／ミトザントロン、エバセット／リポソームのドキソ
    ルビシン、ユウタキサン／パクリタキセル、タキソール／パクリタキセル、フル
    ツロン／ドキシフルリジン、シクロパクス／経口パクリタキセル、ＳＰＵ−０７
    ７／シスプラチン、ＨＭＲ１２７５／フラボピリドール、ＢＭＳ−１８２７５１
    ／経口白金、ロイスタチン／クラドリビン、パキセクス／パクリタキセル、ドキ
    シル／リポソームのドキソルビシン、カエリクス／リポソームのドキソルビシン
    、フルダラ／フルダラビン、ファーマルビシン／エピルビシン、ＤｅｐｏＣｙｔ
    、カエチクス／リポソームのドキソルビシン、ジェムザール／ゲムシタビン、イ
    フェス／メスネクス／イフォサミド、ブモン／テニポシド、パラプラチン／カル
    ボプラチン、プランチノール／シスプラチン、ベペシド／エトポシド、タキソテ
    レ／ドセタキセル、グアニンアラビノシドのプロドラッグ、ニトロソウレア、ア
    スパラギナーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、クロラムブシル、シタラビン
    ＨＣｌ、ダウノルビシンＨＣｌ、エトポシド（ＶＰ１６−２１３）、ヒドロキシ
    ウレア（ヒドロキシカルバミド）イフォサミド、インターフェロンα−２ａ、イ
    ンターフェロンα−２ｂ、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、メクロレタミンＨＣｌ（ナ
    イトロジェンマスタード）、メルカプトプリン、メスナ、ミトキザントロンＨＣ
    ｌ、プロカルバジンＨＣｌ、チオグアニン、チオテパ、硫酸ビンブラスチン、ア
    ザシチジン、インターロイキン２、ペントスタチン（２’デオキシコフォルマイ
    シン）、テニポシド（ＶＭ−２６）、ＧＭ−ＣＳＦ、ならびに硫酸ビンデシン、
    からなる群より選択される、方法。
54. 【請求項５４】 請求項５２に記載の方法であって、ここで、前記化学療法
    剤が、以下： メトトレキサート、ビンクリスチン、アドリアマイシン、シスプラチン、マイト
    マイシンＣ、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダカルバジン、タキソール、バ
    ルルビシン、ノバントロン／ミトザントロン、エバセット／リポソームのドキソ
    ルビシン、ユウタキサン／パクリタキセル、タキソール／パクリタキセル、ＳＰ
    Ｕ−０７７／シスプラチン、ＨＭＲ１２７５／フラボピリドール、ＢＭＳ−１８
    ２７５１／経口白金、ロイスタチン／クラドリビン、パキセクス／パクリタキセ
    ル、ドキシル／リポソームのドキソルビシン、カエリクス／リポソームのドキソ
    ルビシン、フルダラ／フルダラビン、ファーマルビシン／エピルビシン、Ｄｅｐ
    ｏＣｙｔ、カエチクス／リポソームのドキソルビシン、ジェムザール／ゲムシタ
    ビン、イフェス／メスネクス／イフォサミド、ブモン／テニポシド、パラプラチ
    ン／カルボプラチン、プランチノール／シスプラチン、ベペシド／エトポシド、
    タキソテレ／ドセタキセル、グアニンアラビノシドのプロドラッグ、ニトロソウ
    レア、アルキル化剤（例えば、メルファランおよびシクロホスファミド）、アス
    パラギナーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、クロラムブシル、シタラビンＨ
    Ｃｌ、ダウノルビシンＨＣｌ、エトポシド（ＶＰ１６−２１３）、ヒドロキシウ
    レア（ヒドロキシカルバミド）イフォサミド、インターフェロンα−２ａ、イン
    ターフェロンα−２ｂ、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、メクロレタミンＨＣｌ（ナイ
    トロジェンマスタード）、メルカプトプリン、ミトキザントロンＨＣｌ、プロカ
    ルバジンＨＣｌ、チオグアニン、チオテパ、硫酸ビンブラスチン、アザシチジン
    、インターロイキン２、ペントスタチン（２’デオキシコフォルマイシン）、テ
    ニポシド（ＶＭ−２６）、ＧＭ−ＣＳＦ、ならびに硫酸ビンデシン、 からなる群より選択される、方法
55. 【請求項５５】 請求項５２に記載の方法であって、ここで、前記癌ワクチ
    ンが、以下： ＥＧＦ、抗イディオタイプの癌ワクチン、Ｇｐ７５抗原、ＧＭＫ黒色腫ワクチン
    、ＭＧＶガングリオシド結合体ワクチン、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、オバレックス、Ｍ
    −Ｖａｘ、Ｏ−Ｖａｘ、Ｌ−Ｖａｘ、ＳＴｎ−ＫＨＬセラトープ、ＢＬＰ２５（
    ＭＵＣ−１）、リポソームのイディオタイプのワクチン、メラシン、ペプチド抗
    原ワクチン、毒素／抗原ワクチン、ＭＶＡベースのワクチン、ＰＡＣＩＳ、ＢＣ
    Ｇワクチン、ＴＡ−ＨＰＶ、ＴＡ−ＣＩＮ、ＤＩＳＣ−ウイルスおよびＩｍｍｕ
    Ｃｙｓｔ／ＴｈｅｒａＣｙｓ、 からなる群より選択される、方法。
56. 【請求項５６】 ヒトにおける癌を処置するための方法であって、該方法は
    、以下： 免疫刺激性核酸および癌細胞の細胞表面抗原に結合するＩｇＧ１のアイソタイプ
    の抗体を、ヒトに投与する工程であって、ここで、該核酸および該抗体が該癌細
    胞を殺傷するために有効な量で投与される、工程、 を包含する、方法。
57. 【請求項５７】 請求項５６に記載の方法であって、ここで、前記核酸が、
    非メチル化ＣｐＧモチーフを有する免疫刺激性ＣｐＧ核酸である、方法。
58. 【請求項５８】 請求項５６に記載の方法であって、ここで、前記核酸が、
    免疫刺激性Ｔ−リッチ核酸である、方法。
59. 【請求項５９】 請求項５６に記載の方法であって、ここで、前記核酸が、
    免疫刺激性ポリ−Ｇ核酸である、方法。
60. 【請求項６０】 請求項５６に記載の方法であって、ここで、前記核酸が、
    細菌性ＤＮＡである、方法。
61. 【請求項６１】 請求項５６に記載の方法であって、ここで、前記核酸が、
    真核生物性ＤＮＡである、方法。
62. 【請求項６２】 請求項５６に記載の方法であって、ここで、前記核酸が、
    修飾された骨格を有する、方法。
63. 【請求項６３】 請求項６２に記載の方法であって、ここで、前記修飾され
    た骨格が、リン酸骨格修飾である、方法。
64. 【請求項６４】 請求項６２に記載の方法であって、ここで、前記修飾され
    た骨格がペプチド修飾されたオリゴヌクレオチド骨格である、方法。
65. 【請求項６５】 請求項５６に記載の方法であって、ここで、前記核酸が、
    免疫刺激性核酸である、方法。
66. 【請求項６６】 請求項５６に記載の方法であって、ここで、前記核酸が、
    ８〜４０ヌクレオチド長である、方法。
67. 【請求項６７】 請求項５６に記載の方法であって、ここで、前記核酸が単
    離されている方法。
68. 【請求項６８】 請求項５６に記載の方法であって、ここで、前記核酸が、
    合成核酸である、方法。
69. 【請求項６９】 請求項５６に記載の方法であって、ここで、前記核酸およ
    び前記抗体が、一緒に投与される、方法。
70. 【請求項７０】 請求項５６に記載の方法であって、ここで、前記核酸およ
    び前記抗体が、別々に投与される、方法。
71. 【請求項７１】 請求項５６に記載の方法であって、該方法が、抗癌治療剤
    を投与する工程、をさらに包含する、方法。
72. 【請求項７２】 請求項７１に記載の方法であって、ここで、前記抗癌治療
    剤が、化学療法剤および癌ワクチンからなる群より選択される、方法。
73. 【請求項７３】 請求項７２に記載の方法であって、ここで、前記化学療法
    剤が、以下： メトトレキサート、ビンクリスチン、アドリアマイシン、シスプラチン、クロロ
    エチルニトロソウレアを含有する非糖質、５−フルオロウラシル、マイトマイシ
    ンＣ、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダカルバジン、タキソール、フラジリ
    ン、メラニンＧＬＡ、バルルビシン、カルマスタチンおよびポリフェルポサン、
    ＭＭＩ２７０、ＢＡＹ１２−９５６６、ＲＡＳファメシルトランスフェラーゼイ
    ンヒビター、ファメシルトランスフェラーゼインヒビター、ＭＭＰ、ＭＴＡ／Ｌ
    Ｙ２３１５１４、ＬＹ２６４６１８／ロメテキソール、グラモレック、ＣＩ−９
    ９４、ＴＮＰ−４７０、ハイカムチン／トポテカン、ＰＫＣ４１２、バルスポダ
    ール／ＰＳＣ８３３、ノバントロン／ミトザントロン、メタレット／スラミン、
    バチマスタット、Ｅ７０７０、ＢＣＨ−４５５６、ＣＳ−６８２、９−ＡＣ、Ａ
    Ｇ３３４０、ＡＧ３４３３、インセル／ＶＸ−７１０、ＶＸ−８５３、ＺＤ０１
    ０１、ＩＳＩ６４１、ＯＤＮ６９８、ＴＡ２５１６／マルミスタット、ＢＢ２５
    １６／マルミスタット、ＣＤＰ８４５、Ｄ２１６３、ＰＤ１８３８０５、ＤＸ８
    ９５１ｆ、レモナルＤＰ２２０２、ＦＫ３１７、ピシバニール／ＯＫ−４３２、
    ＡＤ３２／バルルビシン、メタストロン／ストロンチウム誘導体、テモダール／
    テモゾロミド、エバセット／リポソームのドキソルビシン、ユウタキサン／パク
    リタキセル、タキソール／パクリタキセル、キセロード／カペシタビン、フルツ
    ロン／ドキシフルリジン、シクロパクス／経口パクリタキセル、経口タキソイド
    、ＳＰＵ−０７７／シスプラチン、ＨＭＲ１２７５／フラボピリドール、ＣＰ−
    ３５８（７７４）／ＥＧＦＲ、ＣＰ−６０９（７５４）／ＲＡＳオンコジーンイ
    ンヒビター、ＢＭＳ−１８２７５１／経口白金、ＵＦＴ（テガフル／ウラシル）
    、エルガミソル／レバミソール、エニルウラシル／７７６Ｃ８５／５ＦＵエンハ
    ンサー、カンプト／レバミソール、カンプトサル／イリノテカン、ツモデクス／
    ラリトレキセド、ロイスタチン／クラドリビン、パキセクス／パクリタキセル、
    ドキシル／リポソームのドキソルビシン、カエリクス／リポソームのドキソルビ
    シン、フルダラ／フルダラビン、ファーマルビシン／エピルビシン、ＤｅｐｏＣ
    ｙｔ、ＺＤ１８３９、ＬＵ７９５５３／ビス−ナフタルイミド、ＬＵ１０３７９
    ３／ドラスタイン、カエチクス／リポソームのドキソルビシン、ジェムザール／
    ゲムシタビン、ＺＤ０４７３／アノームド、ＹＭ１１６、ヨウ素種、ＣＤＫ４お
    よびＣＤＫ２インヒビター、ＰＡＲＰインヒビター、Ｄ４８０９／デキシフォス
    ファミド、イフェス／メスネクス／イフォサミド、ブモン／テニポシド、パラプ
    ラチン／カルボプラチン、プランチノール／シスプラチン、ベペシド／エトポシ
    ド、ＺＤ９３３１、タキソテレ／ドセタキセル、グアニンアラビノシドのプロド
    ラッグ、タキサンアナログ、ニトロソウレア、アルキル化剤（例えば、メルファ
    ランおよびシクロホスファミド）、アミノグルテチミド、アスパラギナーゼ、ブ
    スルファン、カルボプラチン、クロラムブシル、シタラビンＨＣｌ、ダクチノマ
    イシン、ダウノルビシンＨＣｌ、リン酸エストラムスチンナトリウム、エトポシ
    ド（ＶＰ１６−２１３）、フロキシウリジン、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、
    フルタミド、ヒドロキシウレア（ヒドロキシカルバミド）イフォサミド、インタ
    ーフェロンα−２ａ、インターフェロンα−２ｂ、酢酸ロイプロリド（ＬＨＲＨ
    −放出因子アナログ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、メクロレタミンＨＣｌ（ナイ
    トロジェンマスタード）、メルカプトプリン、メスナ、ミトタン（ｏ，ｐ’−Ｄ
    ＤＤ）、ミトキザントロンＨＣｌ、オクトレオチド、プリカマイシン、プロカル
    バジンＨＣｌ、ストレプトゾシン、クエン酸タモキシフェン、チオグアニン、チ
    オテパ、硫酸ビンブラスチン、アムサクリン（ｍ−ＡＭＳＡ）、アザシチジン、
    エリスロポエチン、ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）、インターロイキン２、ミ
    トグアゾン（メチル−ＧＡＧ；メチルグリコキサールビス−グアニルヒドラゾン
    ；ＭＧＢＧ）、ペントスタチン（２’デオキシコフォルマイシン）、セムスチン
    （メチルＣＣＮＵ）、テニポシド（ＶＭ−２６）、ＧＭ−ＣＳＦ、ならびに硫酸
    ビンデシン、 からなる群より選択される、方法。
74. 【請求項７４】 請求項７２に記載の方法であって、ここで、前記化学療法
    剤が、以下： メトトレキサート、ビンクリスチン、アドリアマイシン、シスプラチン、マイト
    マイシンＣ、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダカルバジン、タキソール、バ
    ルルビシン、ノバントロン／ミトザントロン、エバセット／リポソームのドキソ
    ルビシン、ユウタキサン／パクリタキセル、タキソール／パクリタキセル、ＳＰ
    Ｕ−０７７／シスプラチン、ＨＭＲ１２７５／フラボピリドール、ＢＭＳ−１８
    ２７５１／経口白金、ロイスタチン／クラドリビン、パキセクス／パクリタキセ
    ル、ドキシル／リポソームのドキソルビシン、カエリクス／リポソームのドキソ
    ルビシン、フルダラ／フルダラビン、ファーマルビシン／エピルビシン、Ｄｅｐ
    ｏＣｙｔ、カエチクス／リポソームのドキソルビシン、ジェムザール／ゲムシタ
    ビン、イフェス／メスネクス／イフォサミド、ブモン／テニポシド、パラプラチ
    ン／カルボプラチン、プランチノール／シスプラチン、ベペシド／エトポシド、
    タキソテレ／ドセタキセル、グアニンアラビノシドのプロドラッグ、ニトロソウ
    レア、アルキル化剤（例えば、メルファランおよびシクロホスファミド、アスパ
    ラギナーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、クロラムブシル、シタラビンＨＣ
    ｌ、ダウノルビシンＨＣｌ、エトポシド（ＶＰ１６−２１３）、ヒドロキシウレ
    ア（ヒドロキシカルバミド）イフォサミド、インターフェロンα−２ａ、インタ
    ーフェロンα−２ｂ、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、メクロレタミンＨＣｌ（ナイト
    ロジェンマスタード）、メルカプトプリン、ミトキザントロンＨＣｌ、プロカル
    バジンＨＣｌ、チオグアニン、チオテパ、硫酸ビンブラスチン、アザシチジン、
    インターロイキン２、ペントスタチン（２’デオキシコフォルマイシン）、テニ
    ポシド（ＶＭ−２６）、ＧＭ−ＣＳＦ、ならびに硫酸ビンデシン、 からなる群より選択される、方法。
75. 【請求項７５】 請求項７２に記載の方法であって、ここで、前記癌ワクチ
    ンが、以下： ＥＧＦ、抗イディオタイプの癌ワクチン、Ｇｐ７５抗原、ＧＭＫ黒色腫ワクチン
    、ＭＧＶガングリオシド結合体ワクチン、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、オバレックス、Ｍ
    −Ｖａｘ、Ｏ−Ｖａｘ、Ｌ−Ｖａｘ、ＳＴｎ−ＫＨＬセラトープ、ＢＬＰ２５（
    ＭＵＣ−１）、リポソームのイディオタイプのワクチン、メラシン、ペプチド抗
    原ワクチン、毒素／抗原ワクチン、ＭＶＡベースのワクチン、ＰＡＣＩＳ、ＢＣ
    Ｇワクチン、ＴＡ−ＨＰＶ、ＴＡ−ＣＩＮ、ＤＩＳＣ−ウイルスおよびＩｍｍｕ
    Ｃｙｓｔ／ＴｈｅｒａＣｙｓ、 からなる群より選択される、方法。
76. 【請求項７６】 キットであって、該キットは、以下： 少なくとも２つの容器を備えるパッケージ、 免疫刺激性核酸を格納する第１容器、 細胞表面抗原に特異的な抗体を格納する第２容器、および 該免疫刺激性核酸が該細胞表面抗原の発現を上方制御するか否かを決定するため
    に細胞をスクリーニングするための指示書、 を備える、キット。
77. 【請求項７７】 請求項７６に記載のキットであって、ここで、前記抗体が
    、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ１９抗体、および抗ＣＤ２２抗体からなる群より選択
    される、キット。