JP2003510368A

JP2003510368A - 安定化された液体のポリペプチド含有薬学的組成物

Info

Publication number: JP2003510368A
Application number: JP2001527813A
Authority: JP
Inventors: バオ−ルチェン，; マニンダーホーラ，
Original assignee: カイロンコーポレイション
Priority date: 1999-10-04
Filing date: 2000-10-03
Publication date: 2003-03-18
Also published as: CA2477857A1; NO20021567L; BRPI0017437B1; NZ535205A; EP1491208A1; HU0401975D0; AU2006200141A1; BRPI0017437B8; EP1220682B1; HUP0203133A3; CZ305123B6; US7030086B2; US6525102B1; AU783306B2; AU2006200141B2; PL211886B1; US20030180253A1; CN100389821C; NO20021567D0; ATE345810T1

Abstract

(57)【要約】安定化された液体のペプチド含有薬学的組成物が、提供される。この組成物は、ポリペプチドの主要安定剤として働くアミノ酸塩基、ならびにポリペプチドの安定性に受容可能なｐＨ範囲内に溶液を緩衝化するための酸および／またはその塩形態を含む。この組成物は、ほぼ等張である。液体の薬学的組成物中のポリペプチドの安定性を増加するための方法、およびこのような薬学的組成物の貯蔵安定性を増加するための方法もまた、提供される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】（発明の分野）本発明は、一般に、薬学的組成物に関し、より詳細には、代表的には、液体の
薬学的処方物においては不安定であるポリペプチドを含む薬学的組成物に関する
。

【０００２】（発明の背景）遺伝子操作技術の発展における最近の進歩は、薬物として使用するための十分
に大量な、広範な種々の生物学的に活性なポリペプチドを提供してきた。しかし
、ポリペプチドは、物理的不安定性（変性、ならびに可溶性および不溶性凝集物
の形成を含む）および種々の化学的不安定性（例えば、加水分解、酸化、および
脱アミド化）の結果として、生物学的活性を失い得る。液体の薬学的処方物にお
けるポリペプチドの安定性は、例えば、ｐＨ、イオン強度、温度、凍結融解の反
復サイクル、および機械的剪断力（例えば、処理の間に生じるような）への曝露
のような因子により影響を及ぼされ得る。凝集物の形成および生物学的活性の喪
失はまた、保存バイアル内の溶液中および液体−空気界面におけるポリペプチド
分子の物理的攪拌および相互作用の結果として生じ得る。さらなるコンホメーシ
ョン変化は、運搬または他の方法の間の攪拌から生じる、界面の圧縮−拡張の間
に、液体−空気界面および固体−液体界面に吸着するポリペプチドで生じ得る。
このような攪拌は、タンパク質がもつれ（ｅｎｔａｎｇｌｅ）、凝集し、粒子を
形成し、そして最終的には他の吸着したタンパク質とともに沈殿することを引き
起こし得る。タンパク質医薬品の安定性についての一般的な総説については、例
えば、Ｍａｎｎｉｎｇら（１９８９）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．６：９０３−９１８
、およびＷａｎｇａｎｄＨａｎｓｏｎ（１９８８）Ｊ．Ｐａｒｅｎｔｅｒａ
ｌＳｃｉ．Ｔｅｃｈ．４２：Ｓ１４を参照のこと。

【０００３】ポリペプチドを含有する液体の薬学的処方物の不安定性は、再構成するための
適切な液体媒体とともに凍結乾燥形態でこれらの処方物を適切なパッケージング
することを引き起こした。凍結乾燥は、組成物の保存安定性を改善したが、多く
のポリペプチドは、乾燥した状態での保存の間（Ｐｉｋａｌ（１９９０）Ｂｉｏ
ｐｈａｒｍ．２７：２６−３０）または液体処方物として再構成する際の凝集物
形成もしくは触媒活性の喪失の結果として（例えば、Ｃａｒｐｅｎｔｅｒら（１
９９１）Ｄｅｖｅｌｏｐ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄａｒｄ７４：２２５−２３９
；Ｂｒｏａｄｈｅａｄら（１９９２）ＤｒｕｇＤｅｖｅｌ．Ｉｎｄ．Ｐｈａｒ
ｍ．１８：１１６９−１２０６；Ｍｕｍｅｎｔｈａｌｅｒら（１９９４）Ｐｈａ
ｒｍ．Ｒｅｓ．１１：１２−２０；ＣａｒｐｅｎｔｅｒａｎｄＣｒｏｗｅ（
１９８８）Ｃｒｙｏｂｉｏｌｏｇｙ２５：４５９−４７０；およびＲｏｓｅｒ
（１９９１）Ｂｉｏｐｈａｒｍ．４：４７−５３）のいずれかで、活性の低下を
示す。添加物の使用は、乾燥タンパク質の安定性を改善したが、多くの再水和処
方物は、受け入れられない量または所望でない量の不活性な、凝集したタンパク
質を有し続けた（例えば、ＴｏｗｎｓｅｎｄａｎｄＤｅＬｕｃａ（１９８３
）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．８０：６３−６６；Ｈｏｒａら（１９９２）Ｐｈａ
ｒｍ．Ｒｅｓ．９：３３−３６；Ｙｏｓｈｉａｋａら（１９９３）Ｐｈａｒｍ．
Ｒｅｓ，１０：６８７−６９１を参照のこと）。また、再構成の必要性は、不便
であり、そして不正確な投薬の可能性をもたらす。

【０００４】多くの液体の薬学的組成物は、そこに含まれるポリペプチドの生物学的活性を
安定化するために処方されてきた一方、液体処方物におけるポリペプチドの分解
は、医師に問題を与え続けてきた。結論として、ポリペプチド成分の安定性を促
進する、生理学的に適合性の安定化剤を含むさらなる薬学的組成物が必要であり
、それにより、これらの治療有効性が維持される。

【０００５】（発明の要旨）治療活性成分としてポリペプチドを含む組成物およびこれらの調製に有用な方
法が提供される。この組成物は、通常、液体処方物中での保存の間に、ポリペプ
チドの凝集の結果として、治療活性成分としての有効性が損なわれるポリペプチ
ドを含む、安定化された液体の薬学的組成物である。本発明の安定化された液体
の薬学的組成物は、液体処方物中での保存の間に凝集物形成を示すポリペプチド
に加えて、保存の間にこのポリペプチドの凝集物形成を低下させるに十分な量の
アミノ酸塩基を含み、ここで、このアミノ酸塩基は、アミノ酸またはアミノ酸の
組み合わせであり、ここで、任意の所定のアミノ酸がそのフリーな塩基形態また
はその塩形態のいずれかで存在する。この組成物は、このポリペプチドの安定性
のために、受容可能な範囲内で液体組成物のｐＨを維持するために緩衝化剤をさ
らに含む。ここで、この緩衝化剤は、塩形態を実質的に含まない酸、塩形態の酸
、または酸およびその塩形態の混合物である。

【０００６】このアミノ酸塩基は、液体の薬学的組成物の保存の間の凝集物形成に対してポ
リペプチドを安定化するように働く一方、緩衝化剤として、塩形態を実質的に含
まない酸、塩形態の酸、または酸およびその塩形態の混合物の使用により、等張
性に近い容量オスモル濃度を有する液体組成物が生じる。この液体の薬学的組成
物は、このポリペプチドの安定性をさらに増すために、さらに他の安定化剤、よ
り詳細には、メチオニン、非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソルベート８０
）およびＥＤＴＡを組み込み得る。このような液体の薬学的組成物は、安定化さ
れているといわれ、塩形態を実質的に含まない酸、塩形態の酸、または酸とその
塩形態の混合物と組み合わせてアミノ酸塩基の付加として、これら２つの成分の
組み合わせがない場合に処方された液体の薬学的組成物に対して増加した保存安
定性を有する組成物を生じる。

【０００７】液体の薬学的組成物におけるポリペプチドの安定性を増大する方法およびこの
ような薬学的組成物の保存安定性を増大する方法もまた、提供される。これらの
方法は、液体の薬学的組成物中に、この組成物の保存の間にポリペプチドの凝集
物形成を低減するに十分な量のアミノ酸塩基、および緩衝化剤（ここで、この緩
衝化剤は、塩形態を実質的に含まない酸、塩形態の酸、または酸およびその塩形
態の混合物である）を組み込む工程を包含する。この方法は、本発明の液体の薬
学的組成物の調製における使用が見出される。

【０００８】（発明の詳細な説明）本発明は、治療上活性な成分としてポリペプチドを含有する液体の薬学的組成
物に関し、そしてその調製において有用な方法に関する。本発明の目的について
、用語「液体（流体）（ｌｉｑｕｉｄ）」は、薬学的組成物または処方物に関し
て、用語「水性（ａｑｕｅｏｕｓ）」を含むことを意図する。本明細書において
用いられる場合、用語「ポリペプチド」は、本明細書のいずれか他の場所で規定
されるように、天然に存在する（ネイティブ）、合成の、および組換えの、ポリ
ペプチドおよびタンパク質、ならびにその生物学的に活性な改変体を包含する。
「治療上活性な成分」とは、このポリペプチドがこの組成物に特異的に取りこま
れて、この薬学的組成物が被験体に投与された場合、この被験体内の疾患または
状態の処置、予防、または診断に関して、所望の治療的反応をもたらすことを意
図する。

【０００９】より詳細には、本発明の組成物は、安定化された液体の薬学的組成物であり、
この組成物の治療上活性な成分としては、液体の薬学的処方物中に保存されてい
る間、通常、凝集体形成を示すポリペプチドが挙げられる。「凝集体形成（ａｇ
ｇｒｅｇａｔｅｆｏｒｍａｔｉｏｎ）」とは、可溶性のまま保持され得るオリ
ゴマーの形成、または溶液から沈殿する可視的な大きい凝集体を生じるポリペプ
チド分子の間の物理的相互作用を意図する。「貯蔵の間」とは、一旦調製された
液体の薬学的組成物または処方物が、被験体に直ちに投与されないことを意図す
る。むしろ、調製後、液体形態で、凍結状態で、または液体形態もしくは被験体
への投与に適切な他の形態中での後の再構成のための乾燥形態でのいずれかで、
貯蔵のためにこれをパッケージングする。「乾燥形態」とは液体の薬学的組成物
または処方物が、凍結乾燥（すなわち、凍結乾燥；例えば、Ｗｉｌｌｉａｍｓ
ａｎｄＰｏｌｌｉ（１９８４）Ｊ．ＰａｒｅｎｔｅｒａｌＳｃｉ．Ｔｅｃｈ
ｎｏｌ．３８：４８〜５９、を参照のこと）、噴霧乾燥（Ｍａｓｔｅｒｓ（１９
９１）Ｓｐｒａｙ−ＤｒｙｉｎｇＨａｎｄｂｏｏｋ（第５版；Ｌｏｎｇｍａｎ
ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃａｎｄＴｅｃｈｎｉｃａｌ，Ｅｓｓｅｚ，Ｕ．Ｋ．
）第４９１〜６７６頁；Ｂｒｏａｄｈｅａｄら（１９９２）ＤｒｕｇＤｅｖｅ
ｌ．Ｉｎｄ．Ｐｈａｒｍ．１８：１１６９〜１２０６；およびＭｕｍｅｎｔｈａ
ｌｅｒら（１９９４）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１１：１２〜２０）、または風乾（
ＣａｒｐｅｎｔｅｒおよびＣｒｏｗｅ（１９８８）Ｃｒｙｂｉｏｌｏｇｙ２５
：４５９〜４７０；およびＲｏｓｅｒ（１９９１）Ｂｉｏｐｈａｒｍ．４：４７
〜５３）のいずれかによって乾燥されることを意図する。液体の薬学的組成物の
貯蔵の間、ポリペプチドによる凝集体形成は、そのポリペプチドの生物学的活性
に有害に影響し得、この薬学的組成物の治療有効性の損失をもたらす。さらに、
凝集体形成は、このポリペプチド含有薬学的組成物が融合システムを用いて投与
される場合、配管、膜、またはポンプの詰まりのような他の問題を生じ得る。

【００１０】本発明の安定化された液体の薬学的組成物は、この組成物の貯蔵の間のこのポ
リペプチドによる凝集体形成を低下するのに十分な量のアミノ酸塩基をさらに含
む。「アミノ酸塩基（ａｍｉｎｏａｃｉｄｂａｓｅ）」とは、アミノ酸また
はアミノ酸の組合せを意図し、ここで任意の所定のアミノ酸がその遊離の塩基型
、またはその塩型のいずれかで存在する。アミノ酸の組合せを用いる場合、アミ
ノ酸の全てがその遊離の塩基型で存在してもよく、全てがその塩型で存在しても
よい、またはいくつかがその遊離の塩型で存在してもよいが、他のアミノ酸はそ
の塩型で存在する。本発明の組成物を調製するのにおいて使用するために好まし
いアミノ酸は、アルギニン、リジン、アスパラギン酸、およびグルタミン酸のよ
うな荷電した側鎖を保有するアミノ酸である。特定のアミノ酸の任意の立体異性
体（すなわち、Ｌ、Ｄ、またはＤＬ立体異性体）、またはこれらの立体異性体の
組合せは、特定のアミノ酸がその遊離の塩基型またはその塩型のいずれかで存在
する限り、本発明の薬学的組成物に存在し得る。このましくは、Ｌ立体異性体を
用いる。本発明の組成物はまた、これらの好ましいアミノ酸のアナログを用いて
処方され得る。「アミノ酸アナログ（類似体）」とは、本発明の液体の薬学的組
成物の貯蔵の間、このポリペプチドによる凝集体形成を減弱する所望の効果をも
たらす、天然に存在するアミノ酸の誘導体を意図する。適切なアルギニンアナロ
グとしては、例えば、アミノグアニジンおよびＮ−モノエチルＬ−アルギニンが
挙げられる。好ましいアミノ酸と同様、このアミノ酸アナログは、その遊離塩基
型または塩型のいずれかでこの組成物中に組み込まれる。

【００１１】本明細書において規定されるようにこのアミノ酸塩基と組合せて、本発明の安
定化された液体の薬学的組成物は、溶液のｐＨを維持するため、その塩型を実質
的に含まない酸、その塩型の酸、または酸とその塩型の混合物をさらに含む。好
ましくは、実質的にその塩型を含まない酸と組合せて、アミノ酸塩基を用いるこ
とによって、ｐＨを維持する。このような組合せによって、酸およびその塩型を
アミノ酸塩基と組合せて緩衝剤として用いて、安定化した薬学的組成物を処方す
る場合よりも、溶液の浸透圧を低くする。このような組合せの利点は、当業者が
より高濃度の安定化剤（アミノ酸塩基）を、溶液の等張性を大きくすることなく
、この薬学的組成物に組み込み得るということである。「その塩型を実質的に含
まない酸」とは、液体の薬学的組成物内で緩衝剤として作用するこの酸が、その
塩型の非存在下で存在することを意図する。代表的には、酸を含む緩衝液を液体
の薬学的組成物中に用いる場合、この酸の塩型またはこの酸とこの酸の塩型の組
合せを用いて、これを調製する。従って、例えば、この緩衝液は、酸をその対イ
オン（例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、またはマグ
ネシウム）とともに用いて調製される。このように、スクシナート緩衝液は、一
般に、コハク酸の塩（例えば、コハク酸ナトリウム）、またはコハク酸とコハク
酸ナトリウムの混合物からなる。本発明の安定化された液体の薬学的組成物中で
緩衝剤として用いられる酸は、この酸の塩型、またはこの酸とその塩型の混合物
であり得、好ましくは緩衝剤として作用するこの酸は単にその酸型である。本発
明の安定化液体ポリペプチド含有組成物を処方するにおける使用に適切な酸とし
ては、コハク酸、クエン酸、リン酸、グルタミン酸、マレイン酸、リンゴ酸、酢
酸、酒石酸、およびアスパラギン酸、より好ましくはコハク酸およびクエン酸、
最も好ましくはコハク酸、が挙げられるがこれらに限定されない。

【００１２】本発明の液体のポリペプチド含有薬学的組成物は、「安定化された」組成物で
ある。「安定化された」とは、この液体組成物が、本明細書において開示される
ように、アミノ酸塩基と緩衝剤との組合せの非存在下で調製された組成物に比し
て貯蔵安定性が増大していることを意図する。この貯蔵安定性の増大は、液体処
方物において、後の使用のためにその形態中に直接貯蔵されても、凍結状態で貯
蔵されそして使用の前に融解されても、または液体形態もしくは使用前の他の形
態中への後の再構成のために、乾燥形態（例えば、凍結乾燥されるか、風乾され
るか、または噴霧乾燥された形態）で準備されても、観察される。好ましくは、
本発明の組成物は、その液体形態における貯蔵安定性の増大の利便性、再構成な
しの投与の容易さ、およびプレフィルド（事前充填）レディーツーユース（すぐ
使える）シリンジ（注射器）中の処方物を供給する能力、を完全に利用するため
に、またはこの処方物が静菌剤と適合する場合、マルチドーズ（多回用量）調製
物として、その液体形態中に直接貯蔵される。

【００１３】本発明の組成物は、アミノ酸であるアルギニン、リジン、アスパラギン酸、ま
たはグルタミン酸を、その遊離の塩基型またはその塩型で、その塩型を実質的に
含まない酸、その塩型の酸、または酸およびその塩型の混合物と組合せて、添加
することが、これらの２つの成分の組合せなしに調製した液体のポリペプチド含
有薬学的組成物に比して、貯蔵安定性が増大した、液体のポリペプチド含有薬学
的組成物を生じる、という発見に関する。この組成物の貯蔵安定性の増大は、治
療上活性なポリペプチドの安定性に対するアミノ酸の影響、より詳細には、液体
処方物中の貯蔵の間のポリペプチド凝集に対するその影響を通じて達成される。
さらに、本明細書において規定されるようなアミノ酸塩基、および液体のポリペ
プチド含有処方物内のその塩型を実質的に含まない酸の取り込みが、さらなる等
張化剤（例えば、塩化ナトリウム）を含むことのない等張性に近い、液体の薬学
的組成物を生じる。「等張性に近い（ｎｅａｒｉｓｏｔｏｎｉｃ）」とは、こ
の液体組成物が、約２４０ｍｍｏｌ／ｋｇ〜約３６０ｍｍｏｌ／ｋｇの浸透圧、
好ましくは、約２４０〜約３４０ｍｍｏｌ／ｋｇの浸透圧、より好ましくは約２
５０〜約３３０ｍｍｏｌ／ｋｇの浸透圧、なおより好ましくは、約２６０〜約３
２０ｍｍｏｌ／ｋｇ、最も好ましくは、約２７０〜約３１０ｍｍｏｌ／ｋｇの浸
透圧を有することを意図する。

【００１４】本発明の安定化された液体の薬学的組成物に組み込まれたアミノ酸塩基は、治
療上活性なポリペプチドを凝集に対して保護し、これによってこの組成物の貯蔵
中のポリペプチドの安定性を増加させる。「安定性を増加させる」とは、液体の
薬学的組成物の貯蔵中にポリペプチドによる凝集物形成が、この特定の安定剤の
非存在下での貯蔵中のポリペプチドの凝集物形成と比較して減少することを示す
。アミノ酸塩基の添加による、減少した凝集物形成は、濃度依存性の様式で起こ
る。すなわち、アミノ酸塩基の濃度を増加させることは、このポリペプチドがア
ミノ酸塩基の非存在下では通常は液体処方物中での貯蔵中に凝集物形成を示す場
合に、液体の薬学的組成物中のポリペプチドの増加した安定性をもたらす。凝集
物形成を減少させ、これによってポリペプチドの安定性を増加させ、従って組成
物の貯蔵安定性を増加させるために、液体の薬学的組成物に添加されるための特
定のアミノ酸塩基の量の決定は、当業者に一般的に公知の方法を使用する過度の
実験なしに、目的の特定の任意のポリペプチドに対して容易に決定され得る。

【００１５】従って、例えば、特定のアミノ酸塩基の、液体組成物中での貯蔵中のポリペプ
チド凝集に対する効果は、溶液中の可溶性ポリペプチドの変化を経時的に測定す
ることによって、容易に決定され得る。溶液中の可溶性ポリペプチドの量は、目
的のポリペプチドの検出に適合される多数の分析アッセイによって、定量され得
る。このようなアッセイとしては、例えば、以下の実施例に記載されるような、
逆相（ＲＰ）−ＨＰＬＣ、サイズ排除（ＳＥＣ）−ＨＰＬＣ、およびＵＶ吸光度
が挙げられる。目的のポリペプチドが、液体処方物中での貯蔵中に可溶性と不溶
性との両方の凝集物を形成する場合には、以下の実施例１に記載するように、Ｒ
Ｐ−ＨＰＬＣとＳＥＣ−ＨＰＬＣとの組み合わせを使用して、可溶性凝集物とし
て存在する可溶性ポリペプチドの部分と、凝集していない生物学的に活性な分子
形態で存在する部分との間を区別し得る。

【００１６】凝集の場合には、液体のポリペプチド含有薬学的組成物に組み込まれて、本発
明の安定化された薬学的組成物を得るための、効果的な量のアミノ酸塩基は、経
時的な凝集物形成の減少、従って、溶液中での可溶性ポリペプチドの、その凝集
していない、生物学的に活性な分子形態における、より大きな保持を生じる量と
判断される。従って、例えば、ポリペプチドがモノマータンパク質（例えば、以
下の実施例に記載されるインターロイキン−２（ＩＬ−２）または組織因子経路
インヒビター（ＴＦＰＩ））である場合には、本発明の安定化された組成物を調
製する際に使用するための効果的な量の安定剤は、そのモノマー分子形態でのＩ
Ｌ−２またはＴＦＰＩのより大きな保持を生じる量である。

【００１７】本発明の安定化された液体ポリペプチド含有組成物の増加した貯蔵安定性はま
た、治療上活性なポリペプチドにおけるグルタミン残基および／またはアスパラ
ギン残基の、貯蔵中の脱アミノ化に対する、アミノ酸塩基の阻害効果に関連し得
る。特定のアミノ酸塩基の、液体組成物における貯蔵中のこれらの残基の脱アミ
ノ化に対する効果は、その脱アミノ化形態において存在するポリペプチドの量を
経時的にモニタリングすることによって、容易に決定され得る。溶液相に存在す
る分子種（すなわち、ネイティブまたは脱アミノ化された、特定のポリペプチド
）を測定するための方法は、当該分野において一般的に公知である。このような
方法としては、分子種のクロマトグラフィー分離およびポリペプチド分子量標準
物質を使用して（例えば、以下の実施例に記載されるように、ＲＰ−ＨＰＬＣを
用いて）の同定が挙げられる。

【００１８】本発明の安定化された液体の薬学的組成物におけるポリペプチドの安定性を増
加させるための、実質的に塩形態を含まない酸によって緩衝されたアミノ酸塩基
の新規な組み合わせの使用は、例えば、コハク酸／コハク酸ナトリウム緩衝系中
でのアミノ酸の使用より優れた利点を提供する。この新規な組み合わせは、その
酸形態と塩形態との混合物である緩衝系の使用によって達成され得るより高い濃
度の安定化アミノ酸を有する、ほぼ等張の処方物の調製を可能にする。より高い
濃度の安定化アミノ酸は、ポリペプチドの安定性をさらに大きく増加させること
を可能にし、従って、この処方物の増加した貯蔵安定性を可能にする。

【００１９】例えば、タンパク質インターロイキン−２（ＩＬ−２）を含み、そしてこのタ
ンパク質のために最適なｐＨ（ｐＨ５．８）を有する液体処方物に添加されたア
ルギニン塩基を緩衝化するために、コハク酸が使用される場合には、アルギニン
の濃度は、２３０ｍＭまで増加され得、一方で依然として、この処方物の等張性
を維持し得る。このことは、ＩＬ−２の５０℃における貯蔵寿命（これは、タン
パク質の安定性の尺度である）を二倍にする。類似のＩＬ−２貯蔵寿命が、同じ
アルギニン濃度および緩衝剤としてコハク酸／コハク酸ナトリウムを使用して達
成され得るが、アルギニンは、類似のｐＨを達成するためにはその酸形態で添加
されなければならず、そして得られる処方物は、過緊張である（実施例１、表１
を参照のこと）。

【００２０】同様に、タンパク質組織因子経路インヒビター（ＴＦＰＩ）を含み、そしてこ
のタンパク質のために適切なｐＨ（ｐＨ５．５）を有する液体処方物に添加され
るアルギニン塩基を緩衝化するために、クエン酸が使用される場合には、アルギ
ニンの濃度は、３００ｍＭに増加され得、一方で依然として、この処方物の等張
性を維持し得る。このことは、５０℃でのＴＦＰＩの貯蔵寿命に、ほぼ５０％の
増加を生じる。類似のＴＦＰＩ貯蔵寿命が、同じアルギニン濃度および緩衝剤と
してクエン酸／クエン酸ナトリウムを使用して、達成され得るが、アルギニンは
再度、類似のｐＨを達成するために、その酸形態で添加されなければならず、そ
して得られる処方物は、過緊張である（実施例８、表１８を参照のこと）。より
高い濃度のアミノ酸を主要な安定剤として使用する能力は、より伝統的なポリペ
プチド安定剤（例えば、ウシ血清アルブミンまたはヒト血清アルブミン）の必要
性を排除する。これらは、その潜在的なウイルス汚染に起因して、さほど所望さ
れない安定剤である。

【００２１】さらに、液体の薬学的組成物の等張性は望ましい。なぜなら、これは、投与の
際の減少された疼痛を生じ、そして過緊張または低張性の組成物に関連する潜在
的な溶血効果を最小にするからである。従って、本発明の安定化された組成物は
、増加された貯蔵安定性を有するのみでなく、酸とその酸の塩形態からなる他の
より伝統的な緩衝系を使用する処方物と比較した場合に、投与の際の実質的に減
少した疼痛のさらなる利点を有する。例えば、本発明の１つの実施形態において
、安定化された液体の薬学的組成物は、注射される場合に、通常の生理食塩水の
注射と比較して、火傷および刺傷に関連する疼痛の減少を示す（実施例７を参照
のこと）。

【００２２】主要な安定剤としてアミノ酸塩基を含み、そして緩衝剤としての酸がその塩形
態を実質的に含まない、本発明の液体ポリペプチド組成物の調製の利点が確認さ
れたので、この組成物の貯蔵中のポリペプチドの増加した安定性を達成するため
に、本明細書中に記載されるような凝集物形成を示す治療上活性な目的のポリペ
プチドを含む液体の薬学的組成物に組み込むための、これらの成分の各々の好ま
しい濃度を、過度な実験なしに決定することは、当該分野の技術の範囲内である
。例えば以下の実施例１において開示されるプロトコルに従って、当業者は、本
明細書中に記載される液体の薬学的組成物において使用するためのアミノ酸塩基
および種々の緩衝酸の所望の濃度の範囲を、評価し得る。好ましくは、この組成
物に組み込まれるアミノ酸塩基の量は、この組成物中に存在するタンパク質に依
存して、約１００ｍＭ〜約４００ｍＭ、好ましくは、約１３０ｍＭ〜約３７５ｍ
Ｍ、より好ましくは、約１５０ｍＭ〜約３５０ｍＭ、なおより好ましくは、約１
７５ｍＭ〜約３２５ｍＭ、さらにより好ましくは、約１８０ｍＭ〜約３００ｍＭ
、なおより好ましくは、約１９０ｍＭ〜約２８０ｍＭ、最も好ましくは、約２０
０ｍＭ〜約２６０ｍＭの濃度範囲内である。緩衝剤は、塩形態の酸、または酸と
その塩形態の混合物であり得るが、本明細書中に開示される有利な理由により、
好ましくは、緩衝剤は、実質的に塩形態を含まない酸である。緩衝剤として使用
される酸は、好ましくは、緩衝剤として使用される酸およびポリペプチドが凝集
物形成に対して安定化されるために最適なｐＨに依存して、約４０ｍＭ〜約２５
０ｍＭ、約５０ｍＭ〜約２４０ｍＭ、約６０ｍＭ〜約２３０ｍＭ、約７０ｍＭ〜
約２２０ｍＭ、より好ましくは、約８０ｍＭ〜約２１０ｍＭ、最も好ましくは、
約９０ｍＭ〜約２００ｍＭの濃度範囲内で添加される。

【００２３】１つの実施形態において、アミノ酸塩基は、約２３０ｍＭの濃度で存在するア
ルギニン塩基であり、そして緩衝剤として使用される酸は、約１２８ｍＭの濃度
のコハク酸である。これは、ほぼ等張の容量オスモル濃度および約５．８のｐＨ
を有する液体ポリペプチド含有薬学的組成物の調製を可能にする。別の実施形態
において、アミノ酸塩基は、約３００ｍＭの濃度で存在するアルギニン塩基であ
り、そして緩衝剤として使用される酸は、約１２０ｍＭの濃度のクエン酸である
。これは、ほぼ等張の容量オスモル濃度および約５．５のｐＨを有する液体ポリ
ペプチド含有薬学的組成物の調製を可能にする。なお別の実施形態において、ア
ミノ酸塩基は、約２００ｍＭ〜約３００ｍＭの濃度で存在するアルギニン塩基で
あり、そして緩衝剤として使用される酸は、約１２０ｍＭ〜約１８０ｍＭの濃度
のコハク酸である。これは、約２５６ｍｍｏｌ／ｋｇ〜約３６３ｍｍｏｌ／ｋｇ
の容量オスモル濃度および約５．５のｐＨを有する液体ポリペプチド含有薬学的
組成物の調製を可能にする。

【００２４】従って、本発明の別の実施形態において、安定化された液体の薬学的組成物は
、ポリペプチドとしてのＩＬ−２またはその改変体、約１５０ｍＭ〜約３５０ｍ
Ｍの濃度のアルギニン塩基、および約８０ｍＭ〜約１９０ｍＭの濃度のコハク酸
を含む。好ましい実施形態において、アルギニン塩基は、約２３０ｍＭの濃度で
このＩＬ−２液体の薬学的組成物中に存在し、そしてコハク酸は約１２８ｍＭの
濃度で存在する。この好ましいＩＬ−２組成物は、約５．８のｐＨ、および約２
５０ｍｍｏｌ／ｋｇ〜約３３０ｍｍｏｌ／ｋｇの浸透圧モル濃度を有する。これ
らの組成物中のＩＬ−２またはその改変体の濃度は、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約
２．０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約０．０２ｍｇ／ｍｌ〜約１．０ｍｇ／ｍｌ、よ
り好ましくは約０．０３ｍｇ／ｍｌ〜約０．８ｍｇ／ｍｌ、最も好ましくは約０
．０３ｍｇ／ｍｌ〜約０．５ｍｇ／ｍｌである。

【００２５】本発明のさらに別の実施形態において、安定化された液体の薬学的組成物は、
ポリペプチドとしてのＴＦＰＩまたはその改変体、約１００ｍＭ〜約４００ｍＭ
の濃度のアルギニン塩基、および約８０ｍＭ〜約１９０ｍＭの濃度のコハク酸を
含む。好ましい実施形態において、アルギニン塩基は、ＴＦＰＩの液体の薬学的
組成物中に、約２００ｍＭ〜約３００ｍＭの濃度で存在し、そしてコハク酸は約
１２０ｍＭ〜約１８０ｍＭの濃度で存在する。この好ましいＴＦＰＩ組成物は、
５．５のｐＨ、および約２４０ｍｇ／ｋｇ〜約３６０ｍｇ／ｋｇの浸透圧モル濃
度を有する。これらの組成物中のＴＦＰＩまたはその改変体の濃度は、約０．０
１ｍｇ／ｍｌ〜約５．０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約０．０５ｍｇ／ｍｌ〜約２．
０ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは約０．１０ｍｇ／ｍｌ〜約１．０ｍｇ／ｍｌ、最
も好ましくは約０．１０ｍｇ／ｍｌ〜約０．６０ｍｇ／ｍｌである。

【００２６】本発明の別の実施形態において、安定化された液体の薬学的組成物は、ポリペ
プチドとしてのＴＦＰＩまたはその改変体、約１７５ｍＭ〜約４００ｍＭの濃度
のアルギニン塩基、および約４０ｍＭ〜約２００ｍＭの濃度のクエン酸を含む。
好ましい実施形態において、アルギニン塩基は、このＴＦＰＩの液体の薬学的組
成物中に、約２５０ｍＭ〜約３５０ｍＭの濃度で存在し、そしてクエン酸は約１
００ｍＭ〜約１５０ｍＭの濃度で存在する。この好ましいＴＦＰＩ組成物は、約
５．０〜６．５のｐＨ、および約２４０ｍｍｏｌ／ｋｇ〜約３６０ｍｍｏｌ／ｋ
ｇの浸透圧モル濃度を有する。さらに別の実施形態において、このアルギニン塩
基は、約３００ｍＭの濃度で存在し、そしてクエン酸は約１２０ｍＭの濃度で存
在する。このＴＦＰＩ組成物は、約５．５のｐＨ、および約２４０ｍｍｏｌ／ｋ
ｇ〜約３６０ｍｍｏｌ／ｋｇの浸透圧モル濃度を有する。これらの組成物中のＴ
ＦＰＩまたはその改変体の濃度は、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約５．０ｍｇ／ｍｌ
、好ましくは約０．０５ｍｇ／ｍｌ〜約２．０、より好ましくは約０．１０ｍｇ
／ｍｌ〜約１．０ｍｇ／ｍｌ、最も好ましくは約０．１０ｍｇ／ｍｌ〜約０．６
０ｍｇ／ｍｌである。

【００２７】以下の実施例に示されるように、液体ポリペプチド含有薬学的組成物のｐＨは
、その中に含まれるポリペプチドの安定性、主にポリペプチド凝集体の形成に対
するその影響に影響を与える。従って、本発明の薬学的組成物中に存在するする
緩衝酸の量は、目的の特定のポリペプチドの安定性に最適なｐＨに依存して変わ
る。この最適なｐＨの決定は、当該分野で一般的に利用可能であり、そして本明
細書中に記載される実施例にさらに例示される方法を使用して達成され得る。本
発明の組成物に好ましいｐＨ範囲は、ポリペプチドに依存して、約ｐＨ４．０〜
約ｐＨ９．０、より好ましくは約ｐＨ５．０〜約６．５である。従って、一実施
形態において、より詳細には、ポリペプチドがＩＬ−２またはその改変体である
場合、ｐＨは、約５．８である。別の実施形態において、より詳細には、ポリペ
プチドがＴＦＰＩまたはその改変体である場合、５．５である。

【００２８】実質的に塩形態を含まない酸で緩衝化されたアミノ酸塩基、その酸の塩形態、
または酸およびその酸形態の混合物を含む安定化された薬学的組成物はまた、さ
らなる安定化剤を含み得、この安定化剤は、組成物中の治療上活性なポリペプチ
ドの安定性をさらに増大する。本発明に対して特に目的とされる安定化剤として
は、メチオニンおよびＥＤＴＡ（これらはポリペプチドをメチオニン酸化から保
護する）；ならびに非イオン性界面活性剤（これはポリペプチドを凍結解凍また
は機械的剪断に関連する凝集化から保護する）が挙げられるが、これらに限定さ
れない。

【００２９】この様式において、治療剤として作用するポリペプチドが、メチオニン残基か
らメチオニンスルホキシドへの酸化に対して感受性の少なくとも１つのメチオニ
ン残基を含むポリペプチドである場合、アミノ酸のメチオニンは、メチオニン残
基からメチオニンスルホキシドへの酸化を阻害するために添加され得る。「阻害
」により、経時的なメチオニン酸化種の最小の蓄積が意図される。メチオニン酸
化を阻害することによって、適切な分子形態のポリペプチドがより多く保持され
る。任意の立体異性体のメチオニン（Ｌ、ＤまたはＤＬ異性体）、またはその組
み合わせが使用され得る。添加される量は、メチオニンスルホキシドの量が調節
因子に対して受容可能であるようにメチオニン残基の酸化を阻害するのに十分な
量でなければならない。典型的に、これは、この組成物が約１０％〜約３０％以
下のメチオニンスルホキシドを含むことを意味する。一般的に、これは、添加さ
れるメチオニン対メチオニン残基の比が約１：１〜約１０００：１、最も好まし
くは１０：１〜約１００：１の範囲であるようにメチオニンを添加することによ
って達成され得る。

【００３０】添加されるメチオニンの好ましい量は、異なる濃度のメチオニンと共に目的の
ポリペプチドを含む組成物を調製し、そして以下の実施例２に記載されるように
、ポリペプチドの酸化種の形成に対する相対的な影響を決定する（例えば、分子
種のクロマトグラフィー分離、およびポリペプチドの分子量標準を使用する同定
（例えば，ＲＰ−ＨＰＬＣを用いる）を使用する）ことによって、経験的に容易
に決定され得る。ポリペプチドの凝集化のアミノ酸関連性阻害に対する悪影響を
有することなく、メチオニン残基の酸化の阻害を最小にするメチオニンの濃度は
、ポリペプチドの安定性をさらに改善するためにこの組成物に添加されるべきメ
チオニンの好ましい量を表す。

【００３１】本発明の液体組成物の処理の間の凍結解凍または機械的剪断に起因するポリペ
プチドの分解は、本発明の液体ポリペプチド含有組成物に界面活性剤を組み込み
、液体−空気界面における表面張力を小さくすることによって阻害され得る。用
いられる典型的に界面活性剤は、非イオン性界面活性剤であり、これにはポリオ
キシエチレンソルビトールエステル（例えば、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ
８０）およびポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ２０））；ポリオキシプロピ
レン−ポリオキシエチレンエステル（例えば、ＰｌｕｒｏｎｉｃＦ６８）；ポ
リオキシエチレンアルコール（例えば、Ｂｒｉｊ３５）；シメチコン；ポリエ
チレングリコール（例えば、ＰＥＧ４００）；リゾホスファチジルコリン；お
よびポリオキシエチレン−ｐ−ｔ−オクチルフェノール（例えば、Ｔｒｉｔｏｎ
Ｘ−１００）が挙げられる。界面活性剤または乳化剤による医薬の伝統的な安
定化は、例えば、Ｌｅｖｉｎｅら（１９９１）、Ｊ．ＰａｒｅｎｔｅｒａｌＳ
ｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．４５（３）：１６０〜１６５（本明細書中で参考として
援用される）に記載される。本発明の実施の際に用いられる好ましい界面活性剤
は、ポリソルベート８０である。

【００３２】上記のこれらの薬剤に加えて、他の安定化剤（例えば、アルブミン、エチレン
ジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、またはＥＤＴＡナトリウムのようなその塩）は、
液体の薬学的組成物の安定性をさらに増大するために添加され得る。約１．０％
ｗ／ｖ未満の濃度の量のアルブミンが添加され得る。ＥＤＴＡは、多くの酸化
反応を触媒することが知られている金属イオンのスカベンジャーとして作用し、
従ってさらなる安定化剤を提供する。

【００３３】本発明の一実施形態において、安定化された液体の薬学的組成物は、ポリペプ
チドとしてのＩＬ−２またはその改変体、約１５０ｍＭ〜約３５０ｍＭの濃度の
アルギニン塩基、約８０ｍＭ〜約１９０ｍＭの濃度のコハク酸、約０．５ｍＭ〜
約１０ｍＭの濃度のメチオニン、約０．１〜約５．０ｍＭのＥＤＴＡ、および約
０．００１％〜約０．２％のポリソルベート８０を含む。好ましい実施形態にお
いて、アルギニン塩基は、このＩＬ−２液体の薬学的組成物中に、約２３０ｍＭ
の濃度で存在し、そしてコハク酸は約１２８ｍＭの濃度で存在する。この好まし
いＩＬ−２組成物は、約５．８のｐＨ、および約２５０ｍｍｏｌ／ｋｇ〜約３３
０ｍｍｏｌ／ｋｇの浸透圧モル濃度を有する。これらの組成物中のＩＬ−２また
はその改変体の濃度は、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約２．０ｍｇ／ｍｌ、好ましく
は約０．０２ｍｇ／ｍｌ〜約１．０ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは約０．０３ｍｇ
／ｍｌ〜約０．８ｍｇ／ｍｌ、最も好ましくは約０．０３ｍｇ／ｍｌ〜約０．５
ｍｇ／ｍｌである。

【００３４】望ましい場合、糖または糖アルコールもまた、本発明の安定化された液体ポリ
ペプチド含有薬学的組成物中に含有され得る。任意の糖（例えば、単糖類、二糖
類、または多糖類）、または水溶性グルカン（例えば、フルクトース、グルコー
ス、マンノース、ソルボース、キシロース、マルトース、ラクトース、スクロー
ス、デキストラン、プルラン、デキストリン、シクロデキストリン、可溶性デン
プン、ヒドロキシエチルデンプン、およびカルボキシメチルセルロース−Ｎａ）
を含む）が使用され得る。スクロースは最も好ましい糖添加剤である。糖アルコ
ールは、−ＯＨ基を有するＣ４〜Ｃ８炭化水素として定義され、例えば、マンニ
トール、ソルビトール、イノシトール、ガラクチトール、ダルシトール、キシリ
トール、およびアラビトールが挙げられ、マンニトールが最も好ましい糖アルコ
ール添加剤である。上記の糖または糖アルコールは、個々にまたは組み合わせて
使用され得る。この糖または糖アルコールが液体調製物に可溶性であり、かつ本
発明の方法を使用して達成される安定化効果に悪影響を与えない限り、使用され
る量の固定された制限はない。好ましくは、糖または糖アルコールの濃度は、約
１．０ｗ／ｖ％と約１５．０ｗ／ｖ％との間、より好ましくは約２．０ｗ
／ｖ％と約１０．０ｗ／ｖ％との間である。

【００３５】本発明の安定化された液体の薬学的組成物は、アミノ酸塩基を用いて達成され
る主要安定化効果が不利に影響されない限り、治療上活性な成分として役立つ目
的のポリペプチドの有効性を増加するかまたはこのポリペプチドの望ましい質を
促進する他の組成物を含み得る。この組成物は、選択される経路を介した投与に
ついて安全でなければならず、滅菌されていなければならず、そしてその望まし
い治療上活性を保持しなければならない。

【００３６】本発明の組成物は、好ましくは、目的のポリペプチドの組み込みの前に安定化
剤および緩衝化剤、ならびに任意の他の賦形剤を予備混合することによって調製
される。本発明の組成物をさらに安定化するために加えられ得る任意のさらなる
賦形剤は、主要安定化剤の安定化効果に不利に影響してはならない（すなわち、
アミノ酸塩基、緩衝化剤との組み合わせ、すなわち、その塩形態を実質的に含ま
ない酸、酸の塩形態、酸およびその塩形態の混合物（本明細書中に開示される新
規な組成物を得るために使用される））。目的のポリペプチドの凝集形成の減少
を達成するための好ましい量のアミノ酸塩基の添加に続いて、液体組成物のｐＨ
が、緩衝化剤を、好ましくは本明細書中で開示される範囲で、より好ましくは、
目的のポリペプチドに最適なｐＨを使用して調節される。目的のポリペプチドを
組成物に添加することに続いてｐＨが調節され得るが、好ましくは、本発明のポ
リペプチドの添加の前に調節される。なぜなら、これは、ポリペプチドの変性の
危険性を減少し得るからである。このとき、適切な機械的デバイスは、構成物の
適切な混合を達成するために使用される。

【００３７】本発明の特定の実施形態が、インターロイキン−２（ＩＬ−２）またはその改
変体、あるいは組織因子経路インヒビター（ＴＦＰＩ）またはその改変体（凝集
形成による分解に特に感受性であるタンパク質の例）を含む安定化された組成物
に関するが、本発明の有用性は、一般的に、液体処方物中での保存の間に凝集形
成を示すポリペプチドまたはその改変体を含む任意の薬学的組成物に及ぶ。従っ
て、本発明の実施における使用に適切なポリペプチドとしては、例えば、インタ
ーロイキン（例えば、ＩＬ−２）、インターフェロン（β−インターフェロン（
ＩＦＮ−β）およびそのムテイン（例えば、ＩＦＮ−β_ser17）（欧州特許出願
番号１８５４５９Ｂ１および米国特許第４，５８８，５８５号に記載される（本
明細書中で参考として援用される）））、組織因子経路インヒビター（ＴＦＰＩ
）、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）、インシュリン、および液体処方物中で凝集形
成を示す他の同様なポリペプチド、ならびにその任意の生物学的に活性な改変体
が挙げられる。

【００３８】本発明の安定化された液体の薬学的組成物に存在するポリペプチドは、ネイテ
ィブであるか、または組換え技術によって得られ得、そして任意の供給源（例え
ば、マウス、ラット、ウサギ、霊長類動物、ブタ、およびヒトのような哺乳動物
供給源を含む）からであり得るが、但し、それらは、本明細書中で詳細される基
準に適合する（すなわち、それらは、液体処方物中での保存の間に凝集を形成す
る）。好ましくは、このようなポリペプチドは、ヒト供給源から誘導され、そし
てより好ましくは、微生物宿主からの組換えヒトタンパク質である。

【００３９】本発明の薬学的組成物中の治療上活性成分として役立つ目的のポリペプチドの
生物学的に活性な改変体はまた、本明細書中で使用される、用語「ポリペプチド
」によって包含される。このような改変体は、改変体のポリペプチドを含む薬学
的組成物が、被験体に投与される場合、ネイティブなポリペプチドを含む薬学的
組成物と同じ治療効果を有するように、ネイティブなポリペプチドの望ましい生
物学的活性を保持すべきである。すなわち、改変体ポリペプチドは、ネイティブ
なポリペプチドについて観測されるのと類似の様式で薬学的組成物中の治療上活
性な成分として役立つ。改変体ポリペプチドが望ましい生物学的活性を保持する
かいなか、従って、薬学的組成物中の治療上活性な成分として役立つか否かを決
定するための方法は、当該分野において利用可能である。生物学的活性は、ネイ
ティブなポリペプチドまたはタンパク質の活性を測定するための特に設計された
アッセイ（本発明に記載されるアッセイを含む）を使用して測定され得る。さら
に、生物学的に活性なネイティブなポリペプチドに対して惹起される抗体は、改
変体ポリペプチドに結合するそれらの能力について試験され得、ここで、有効な
結合は、ネイティブなポリペプチドのコンホメーションと類似のコンホメーショ
ンを有するポリペプチドを示す。

【００４０】ネイティブまたは天然の目的のポリペプチドの適切な生物学的に活性な改変体
は、そのポリペプチドのフラグメント、アナログおよび誘導体であり得る。「フ
ラグメント」は、インタクトなポリペプチド配列および構造の一部のみからなる
ポリペプチドを意図し、ネイティブなポリペプチドのＣ末端欠失またはＮ末端欠
失であり得る。「アナログ」は、ネイティブなポリペプチドまたはネイティブな
ポリペプチドのフラグメントのいずれかのアナログを意図し、ここで、アナログ
は、１つ以上のアミン酸置換、挿入または欠失を有するネイティブなポリペプチ
ド配列および構造を含む。「ムテイン」（例えば、本明細書中に記載されるもの
および１つ以上のペプトイド（ペプチド模倣物）を有するペプチド）はまた、用
語アナログによって包含される（国際公開番号ＷＯ９１／０４２８２を参照のこ
と）。「誘導体」は、目的のネイティブなポリペプチド、ネイティブなポリペプ
チドのフラグメント、またはそれらのそれぞれのアナログの任意の適切な改変（
例えば、グリコシル化、リン酸化、または他の外来部分の付加）を、ネイティブ
なポリペプチドの望ましい生物学的な活性が保持される限り、意図する。ポリペ
プチドのフラグメント、アナログ、および誘導体を作製するための方法は、一般
的に当該分野において利用可能である。

【００４１】例えば、ポリペプチドのアミノ酸配列改変は、目的のネイティブなポリペプチ
ドをコードするクローン化されたＤＮＡ配列における変異によって調製され得る
。変異誘発およびヌクレオチド配列改変のための方法は、当該分野において周知
である。例えば、ＷａｌｋｅｒおよびＧａａｓｔｒａ編（１９８３）Ｔｅｃｈｎ
ｉｑｕｅｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ（ＭａｃＭｉｌｌａｎ
ＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ，ＮｅｗＹｏｒｋ）；Ｋｕｎｋｅｌ
（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８２：４８８−
４９２；Ｋｕｎｋｅｌｅｔａｌ．（１９８７）ＭｅｔｈｏｄｓＥｎｚｙｍ
ｏｌ．１５４：３６７−３８２；Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．（１９８９）
ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａ
ｌ（ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，ＮｅｗＹｏｒｋ）；米国特許
第４，８７３，１９２号；およびそれらに引用される参考文献を参照のこと；こ
れらは、本明細書中において参考として援用される。目的のポリペプチドの生物
学的活性に影響しない適切なアミノ酸置換についての手引きは、Ｄａｙｈｏｆｆ
ｅｔａｌ．（１９７８）ＡｔｌａｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎＳｅｑｕｅｎ
ｃｅａｎｄＳｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕ
ｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）のモデルに見出され得、これは本明
細書において参考として援用される。保存的な置換（例えば、１つのアミノ酸を
同じ性質を有する別のアミノ酸と交換すること）は、好ましくあり得る。保存的
な置換の例としては、Ｇｌｙ⇔Ａｌａ、Ｖａｌ⇔Ｉｌｅ⇔Ｌｅｕ、Ａｓｐ⇔Ｇｌ
ｕ、Ｌｙｓ⇔Ａｒｇ、Ａｓｎ⇔Ｇｌｎ、およびＰｈｅ⇔Ｔｒｐ⇔Ｔｙｒが挙げら
れるが、これらには限定されない。

【００４２】目的のポリペプチドの改変体を構築する際に、改変体が望ましい活性を保有し
続けるように改変がなされる。明らかに、改変体ポリペプチドをコードするＤＮ
Ａにおいてなされる任意の変異は、読み取り枠からの配列を配置してはならず、
そして好ましくは、二次ｍＲＮＡ構造を作り得る相補性領域を作らない。欧州特
許出願公開番号第７５，４４４号を参照のこと。

【００４３】目的のポリペプチドの生物学的に活性な改変体は、一般的に、参照ポリペプチ
ド分子のアミノ酸配列（これは、比較のための基準として役立つ）に対して、少
なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは約９０％〜９５
％以上、そして最も好ましくは約９８％以上のアミノ酸同一性を有する。目的の
ネイティブなポリペプチドの生物学的に活性な改変体は、１〜１５アミノ酸の少
なさの、１〜１０の少なさの、例えば、６〜１０、５の少なさの、４の少なさの
、３、２、または１のアミノ酸残基だけネイティブなポリペプチドと異なり得る
。「配列同一性」は、同じアミノ酸残基が、改変体ポリペプチド、および改変体
のアミノ酸配列の特定の連続的なセグメントが整列し、参照分子のアミノ酸配列
と比較される場合、参照として役立つポリペプチド分子内に見出されることを意
図する。２つのアミノ酸配列の間のパーセンテージ配列同一性は、同一のアミノ
酸残基が両方の配列に存在する位置の数を決定してマッチした位置の数を得、マ
ッチした位置の数を参照分子との比較を受けるセグメント内の位置の全数で割り
、そしてその結果に１００を掛けて配列同一性のパーセンテージを得ることによ
って計算される。

【００４４】２つの配列の最適な整列のために、改変体のアミノ酸配列の連続的なセグメン
トは、参照分子のアミノ酸配列に関してさらなるアミノ酸残基または欠失したア
ミノ酸残基を有し得る。参照アミノ酸配列との比較に使用される連続的なセグメ
ントは、少なくとも２０の連続的なアミノ酸残基を含み、そして３０、４０、５
０、１００以上の残基であり得る。改変体のアミノ酸配列におけるギャップを含
むことに関連する増加した配列同一性の補正は、ギャップペナルティーを割り当
てることによってなされ得る。配列整列の方法は、アミノ酸配列についてとアミ
ノ酸配列をコードするヌクレオチド配列についての両方について当該分野におい
て周知である。

【００４５】従って、任意の２つの配列間の％同一性の決定は、数学的アルゴリズムを使用
して達成され得る。配列の比較のために利用される数学的アルゴリズムの１つの
好ましい非限定的な例は、ＭｙｅｒｓおよびＭｉｌｌｅｒ（１９９８）ＣＡＢＩ
ＯＳ４：１１−１７のアルゴリズムである。このようなアルゴリズムは、ＡＬ
ＩＧＮプログラム（バージョン２．０）において利用され、これは、ＧＣＧ配列
整列ソフトウェアパッケージの一部である。アミノ酸配列を比較する場合、ＰＡ
Ｍ１２０重み残基表、１２のギャップ長ペナルティ、および４のギャップペナル
ティが、ＡＬＩＧＮプログラムと共に使用され得る。２つの配列を比較する際に
使用するための、数学的アルゴリズムの別の好ましい、非限定的な例は、Ｋａｒ
ｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．ＵＳＡ８７：２２６４のアルゴリズムであり、これは、Ｋａｒｌｉｎお
よびＡｌｔｓｃｈｕｌ（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ９０：５８７３−５８７７のように改変された。このようなアルゴリズム
は、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３の
ＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラムに組込まれる。ＢＬＡＳＴヌクレオ
チド検索は、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、文字長＝１２を用いて
実施されて、目的のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列に相同的なヌク
レオチド配列が得られ得る。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、ＸＢＬＡＳＴプログ
ラム、スコア＝５００、文字長＝３を用いて実施されて、目的のポリペプチドに
相同的なアミノ酸配列が得られ得る。比較の目的のためのギャップのある整列を
得るために、ＧａｐｐｅｄＢＬＡＳＴが、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９７）Ｎ
ｅｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．２５：３３８９に記載されるように利用
され得る。あるいは、ＰＳＩ−Ｂｌａｓｔは、分子間の距離的関係を検出する反
復検索を実施するために使用され得る。Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９７）前出を
参考のこと。ＢＬＡＳＴ、ＧａｐｐｅｄＢＬＡＳＴ、およびＰＳＩ−Ｂｌａｓ
ｔプログラムを使用する場合、各々のプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよび
ＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメータが使用され得る。ｈｔｔｐ：／ｗｗｗ．
ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖを参照のこと。また、ＡＬＩＧＮプログラム
（Ｄａｙｈｏｆｆ（１９７８）、ＡｔｌａｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎＳｅｑｕ
ｅｎｃｅａｎｄＳｔｒｕｃｔｕｒｅ５：補遺３（ＮａｔｉｏｎａｌＢｉ
ｏｍｅｄｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈＦｏｕｎｄａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇ
ｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）およびＷｉｓｃｏｎｓｉｎＳｅｑｕｅｎｃｅＡｎａｌｙ
ｓｉｓＰａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ８（ａｖａｉｌａｂｌｅｆｒｏｍ
ＧｅｎｅｔｉｃｓＣｏｍｐｕｔｅｒＧｒｏｕｐ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ
ｃｏｎｓｉｎから入手可能）のプログラム（例えば、ＧＡＰプログラム、ここで
、プログラムのデフォルトパラメータが利用される）もまた参照のこと。

【００４６】アミノ酸配列同一性の割合を考慮する場合、いくつかのアミノ酸残基位置が、
タンパク質機能の特性に影響しない保存的アミノ酸置換の結果として異なり得る
。これらの例において、％配列同一性は、保存的に置換されたアミノ酸における
類似性をカウントするために上方調節される。このような調節は、当該分野で周
知である。例えば、ＭｙｅｒｓおよびＭｉｌｌｅｒ（１９８８）Ｃｏｍｐｕｔｅ
ｒＡｐｐｌｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｓｃｉ．４：１１−１７を参照のこと。

【００４７】ポリペプチドの正確な化学構造は、多くの因子に依存する。イオン化可能なア
ミノ基およびカルボキシル基が分子中に存在するために、特定のポリペプチドは
、酸性塩または塩基性塩、あるいは中性の形態として得られ得る。適切な環境条
件に配置された場合それらの生物学的活性を保持する全てのこのような調製物は
、本明細書で使用されるようにポリペプチドの定義に含まれる。さらに、このポ
リペプチドの一次アミノ酸配列は、糖部分を使用する誘導体化（グリコシル化）
によって、または脂質、ホスフェート、アセチル基などのような他の補足的な分
子によって増強され得る。この配列はまた、糖類との結合によって、増強され得
る。このような増強の特定の局面は、産生宿主の翻訳後プロセシング系を介して
達成される；他のこのような改変は、インビトロで導入され得る。任意の事象に
おいて、このような改変は、ポリペプチドの活性が破壊されない限り、本明細書
中で使用されるポリペプチドの定義に含まれる。このような改変は、種々のアッ
セイにおいて、このポリペプチドの活性を増加させるかまたは減少されるかのい
ずれかによって、その活性に定量的にまたは定性的に影響し得ることが期待され
る。さらに、鎖中の個々のアミノ酸残基は、酸化、還元、または他の誘導体化に
よって改変され得、そしてポリペプチドは、活性を保持するフラグメントを得る
ために切断され得る。活性を破壊しないこのような変更は、本明細書中で使用さ
れるような目的のポリペプチドの定義からこのポリペプチド配列を排除しない。

【００４８】先行技術は、ポリペプチド改変体の調製および使用に関する実質的なガイダン
スを提供する。ポリペプチド改変体の調製において、当業者は、ネイティブなタ
ンパク質ヌクレオチドまたはアミノ酸配列に対するどの改変が、本発明の薬学的
組成物の治療上活性な成分としての使用に適し、そしてその凝集形態が、本明細
書中に記載されるように、その塩形態、酸の塩形態、または酸およびその塩形態
の混合物を実質的に含まないアミノ酸塩基および酸の存在によって減少される改
変体を生じるかを容易に決定し得る。

【００４９】本発明の１つの実施形態において、本発明の液体状の薬学的組成物中の治療上
活性な成分として存在するポリペプチドは、インターロイキン−２（ＩＬ−２）
またはその誘導体、好ましくは組換えＩＬ−２である。インターロイキン−２は
、正常な末梢血リンパ球によって生成され、そして低濃度で身体中に存在するリ
ンホカインである。これは、植物レクチン、抗原、または他の刺激に曝露された
後に、抗原刺激Ｔ細胞またはマイトジェン刺激Ｔ細胞の増殖を誘導する。ＩＬ−
２は、最初に、Ｍｏｒｇａｎら（１９７６）Ｓｃｉｅｎｃｅ１９３：１００７
−１００８によって記述され、そしてもともと刺激されたＴリンパ球の増殖を誘
導するその能力のために、Ｔ細胞増殖因子と呼ばれた。それは、１３，０００〜
１７，０００の範囲の報告された分子量を有するタンパク質であり（Ｇｉｌｌｉ
ｓおよびＷａｔｓｏｎ（１９８０）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．４５９：１７０９）そ
して６〜８．５の範囲の等電点を有する。現在、その増殖因子の特性に加えて、
それは、免疫系の種々のインビトロおよびインビボ機能を調節することが確認さ
れている。ＩＬ−２は、細胞の相互作用および機能を媒介する、いくつかのリン
パ球生成メッセンジャー−調節分子の１つである。この天然に存在するリンホカ
インは、単独でまたはリンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞または腫瘍浸潤
リンパ球と組合せた場合のいずれかで、種々の悪性腫瘍に対して抗腫瘍活性を有
することが示されている（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら（１９８７）Ｎ．Ｅｎ
ｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３１６：８８９−８９７；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ（１９８８）
Ａｎｎ．Ｓｕｒｇ．２０８：１２１−１３５；Ｔｏｐａｌｉａｎら（１９８８）
Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．６：８３９−８５３；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら（１９
８８）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３１９：１６７６−１６８０；およびＷｅｂ
ｅｒら（１９９２）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１０：３３−４０を参照のこと
）。ＩＬ−２の抗腫瘍活性は、転移性メラノーマおよび腎細胞癌を有する患者に
ついて最もよく記述されているが、他の疾患、特に、リンパ腫もまた、ＩＬ−２
での処置に応答するようである。

【００５０】「組換えＩＬ−２」は、ネイティブ配列ＩＬ−２に匹敵する生物学的活性を有
するインターロイキン−２を意図し、そしてこれは、例えば、Ｔａｎｉｇｕｃｈ
ｉら（１９８３）Ｎａｔｕｒｅ３０２：３０５−３１０およびＤｅｖｏｓ（１
９８３）ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ１１：４３０７−４
３２３に記述されるような組換えＤＮＡ技術によって調製されているか、または
Ｗａｎｇら（１９８４）Ｓｃｉｅｎｃｅ２２４：１４３１−１４３３によって
記載されるように、変異的に変化されたＩＬ−２である。一般に、ＩＬ−２をコ
ードする遺伝子がクローニングされ、次いで、本明細書中に記載されるように、
形質転換された生物、好ましくは微生物、および最も好ましくはＥ．Ｃｏｌｉに
おいて発現される。宿主生物は、発現条件下でＩＬ−２を生成するための外来遺
伝子を発現する。合成組換えＩＬ−２はまた、真核生物（例えば、酵母細胞また
はヒト細胞など）において作製され得る。細胞からＩＬ−２を増殖、回収、分裂
または抽出するためのプロセスは、例えば、米国特許第４，６０４，３７７号；
同第４，７３８，９２７号；同第４，６５６，１３２号；同第４，５６９，７９
０号；同第４，７４８，２３４号同第；４，５３０，７８７号；同第４，５７２
，２９８号；および同第４，９３１，５４３号（これらは、本明細書中で、その
全体が参考として援用される）に実質的に記載される。

【００５１】改変体ＩＬ−２タンパク質の例として、欧州特許出願第１３６，４８９号；欧
州特許出願第８３１０１０３５．０（１９８３年２月３日出願）（公開番号第９
１５３９号のもとで１９８３年１０月１９日公開）；欧州特許出願第８２３０７
０３６．２号（１９８２年１２月２２日出願）（第８８１９５号のもとで１９８
３年９月１４日公開）；欧州特許出願第８３３０６２２１．９号（１９８３年１
０月１３日出願）（第１０９７４８号のもとで１９８４年５月３０日公開）（ベ
ルギー特許第８９３，０１６号、共有に係る米国特許第４，５１８，５８４号の
等価物）に記載される組換えＩＬ−２ムテイン；米国特許第４，７５２，５８５
号およびＷＯ９９／６０１２８号に記載のムテイン；ならびに本明細書中の実
施例にて使用されそして米国特許第４，９３１，５４３号に記載されるＩＬ−２
ムテイン（これらすべてが、本明細書において参考として援用される）を参照の
こと。さらに、ＩＬ−２は、増加した可溶性および変化した薬物速度論プロフィ
ールを提供するように、ポリエチレングリコールを用いて改変され得る（本明細
書中にその全体が参考として援用される、米国特許第４，７６６，１０６号を参
照のこと）。

【００５２】本発明の別の実施形態において、本発明の液体の薬学的組成物中に治療上活性
な成分として存在するポリペプチドは、インターフェロンである、より詳細には
、線維上皮β−インターフェロン（ＩＦＮ−β）もしくはその改変体であり、好
ましくは、当該分野にて記載される組換えＤＮＡ技術により調製される組換えＩ
ＦＮ−βである。インターフェロンは、種々の誘導物質（例えば、マイトジェン
、ポリペプチド、ウイルスなど）への曝露に応答して哺乳動物細胞により産生さ
れる。これらの比較的小さい、種特異的な単鎖ポリペプチドは、免疫調節特性、
抗ウイルス特性、および抗増殖特性を示す。インターフェロンは、抗ウイルス疾
患の処置および癌の制御のための、治療剤として興味深い。

【００５３】ヒトＩＦＮ−β遺伝子をコードするＤＮＡ配列は、当該分野で利用可能であり
（Ｇｏｅｄｄｅｌら（１９８０）ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．８：４
０５７およびＴａｎｉｇｕｃｈｉら（１９７９）Ｐｒｏｃ．Ｊａｐａｎａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．８５５：４６４を参照のこと）、そしてその遺伝子は、Ｅ．ｃｏｌ
ｉにおいて発現され（Ｔａｎｉｇｕｃｈｉら（１９８０）Ｇｅｎｅ１０：１１
〜１５）そしてチャイニーズハムスター卵巣細胞において発現される（例えば、
米国特許４，９６６，８４３号および同５，３７６，５６７号を参照のこと）。
ＩＦＮ−βの改変体は、欧州特許出願第１８５４５９Ｂ１に記載され、そして米
国特許第４，５１８，５８４号、同４，５８８，５８５号および同４，７３７，
４６２号は、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて発現されるＩＦＮ−β_ser17のようなムテイ
ンを記載する（これらすべてが、本明細書中で参考として援用される）。

【００５４】なお別の実施形態において、本発明の液体の薬学的組成物中に治療上活性な成
分として存在するポリペプチドは、組織因子経路インヒビター（ＴＦＰＩ）もし
くはその改変体であり、好ましくは組換えＴＦＰＩである。このポリペプチドは
、凝固カスケードのインヒビターであり、リポタンパク質会合凝固インヒビター
（ＬＡＣＩ）、組織因子インヒビター（ＴＦＩ）、および外因性経路インヒビタ
ー（ＥＰＩ）としても公知である。ＴＦＰＩは、ヒト肝細胞癌であるＨｅｐＧ
２から最初に精製され（ＢｒｏｚｅおよびＭｉｌｅｔｉｃｈ（１９８７）Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８４：１８８６〜１８９０）、その
後ヒト血漿から精製され（Ｎｏｖｏｔｎｙら（１９８９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．２６４：１８８３２〜１８８３７）；そしてチャン肝細胞およびＳＫ肝細胞
癌細胞から精製された（Ｗｕｎら（１９９０）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５
：１６０９６〜１６１０１）。ＴＦＰＩｃＤＮＡが、胎盤ｃＤＮＡライブラリ
ーおよび内皮ｃＤＮＡライブラリーから単離された（Ｗｕｎ（１９８８）Ｊ．Ｂ
ｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３：６００１〜６００４；Ｇｉｒａｒｄら（１９８９）
Ｔｈｒｏｍｂ．Ｒｅｓ．５５：３７〜５０）。概説として、Ｒａｐａｐｏｒｔ（
１９８９）Ｂｌｏｏｄ７３：３５９〜３６５（１９８９）；Ｂｒｏｚｅら（１
９９０）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２９：７５３９〜７５４６を参照のこと。
ＴＦＰＩｃＤＮＡ（ＴＦＰＩの２７６アミノ酸残基タンパク質をコードする）
のクローニングが、米国特許第４，９６６，８５２号にさらに記載されており；
また、米国特許第５，７７３，２５１号および同第５，８４９，８７５号（これ
らすべてが本明細書中に参考として援用される）も参照のこと。

【００５５】ＴＦＰＩの改変体は、当該分野で公知である。例えば、組換えＴＦＰＩの非グ
リコシル化形態がＥ．ｃｏｌｉ中で産生および単離された、米国特許第５，２１
２，０９１号；アナログおよびフラグメントが開示されている、米国特許第５，
１０６，８３３号；ならびに酵母におけるＴＦＰＩアナログの産生が記載されて
いる、米国特許第５，３７８，６１４号（これらすべてが、本明細書中で参考と
して援用される）を参照のこと。

【００５６】薬学的に有効な量の、本発明の安定化された液体のポリペプチド含有薬学的組
成物が、被験体に投与される。「薬学的に有効な量」により、疾患もしくは状態
の、処置、予防または診断において有用である量が意図される。代表的な投与経
路としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：経口投与および非経口
投与（静脈内、筋肉内、皮下、動脈内および腹腔内の注射または注入を含む）。
１つのこのような実施形態において、その投与は、注射により、好ましくは皮下
注射による。本発明の組成物の注射可能な形態としては、溶液、懸濁物および乳
濁液が挙げられるが、これらに限定されない。

【００５７】目的のポリペプチドを含む安定化された液体の薬学的組成物は、単位用量にて
処方されるべきであり、そして溶液、懸濁物、または乳濁液のような、注射可能
な形態または注入可能な形態であり得る。さらに、これは、乾燥形態（例えば、
凍結乾燥粉末）で凍結貯蔵または調製され得、それは、経口投与経路または非経
口投与経路を含む種々の方法のいずれかによって投与前に液体溶液、懸濁物また
は乳濁液中に再構成され得る。好ましくは、それは、下記に概説されるように、
本発明の方法に従って達成される、増加した貯蔵安定性を利用して、液体処方物
にて貯蔵される。この安定化された薬学的組成物は、好ましくは、膜濾過により
滅菌され、そして密封されたバイアルもしくはアンプルのような、単位用量また
は複数用量の容器中で貯蔵される。当該分野で一般的に公知の薬学的組成物を処
方するためのさらなる方法が、本明細書中に開示される液体の薬学的組成物の貯
蔵安定性をさらに増強するための使用され得るが、ただしそれは、それらの方法
が、本発明の方法に開示される好ましい安定化剤および緩衝剤の有益な効果に不
利には影響しない場合である。薬学的に受容可能なキャリア、安定化剤などの処
方および選択の徹底的な考察は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕ
ｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）（第１８版、ＭａｃｋＰｕｂ．Ｃ
ｏ．、Ｅａｔｏｎ、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）（本明細書中に参考として援用
される）に見出され得る。

【００５８】「被験体」によって、任意の動物が意図される。好ましくは、その被験体は哺
乳動物であり、より好ましくはその被験体はヒトである。ヒト以外の特に重要な
哺乳動物としては、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、およびブタが挙げられる
が、こられに限定されない。

【００５９】投与が処置目的である場合、投与は、予防目的または治療目的のいずれかのた
めであり得る。予防的に提供される場合、その物質は、すべての症状の前に提供
される。その物質の予防的投与は、その後のいかなる症状をも予防または減弱す
るように作用する。治療的に提供される場合、その物質は、症状の開始時（また
はすぐ後）に提供される。その物質の治療的投与は、実際のいかなる症状をも減
弱するように作用する。

【００６０】従って、例えば、ネイティブ配列ＩＬ−２またはその改変体を含む、本発明の
有効量の薬学的組成物を含む処方物を、このポリペプチドでの治療に応答する複
数の診療徴候の処置、予防、および診断の目的のために使用し得る。ネイティブ
配列ＩＬ−２の生物学的活性改変体（例えば、ＩＬ−２活性を保持するＩＬ−２
のムテイン、特にムテインＩＬ−２．ｓｕｂ．ｓｅｒ１２５および他のムテイン
、ここで、位置１２５のシステインは、別のアミノ酸で置換される）を、ネイテ
ィブ配列ＩＬ−２と同一の様式で処方および使用され得る。従って、ネイティブ
配列ＩＬ−２またはその改変体を含む本発明の処方物は、細菌、ウイルス、寄生
虫、原虫および真菌感染の診断、予防、および処置（局所的または全身的）のた
め；細胞媒介細胞傷害を増強するため；リンフォカイン活性化キラー（ＬＡＫ）
細胞の活性を刺激するため；リンパ球の免疫機能の回復を媒介するため；同種抗
原の応答を増強するため；後天的免疫不全状態における免疫機能の回復を促進す
るため；加齢のヒトおよび動物における正常な免疫機能の再構成のため；疾患状
態におけるＩＬ−２レベルのモニタリングのために、酵素増幅の使用、放射線標
識、放射線画像化、および他の当該分野で公知の方法のような診断アッセイの展
開において；治療および診断目的のためにインビトロでＴ細胞増殖を促進するた
めに；リンフォカインの対するレセプター部位を遮断するため；ならびに種々の
他の治療、診断および調査適用において有用である。ヒトＩＬ−２またはその改
変体（例えば、ＩＬ−２ムテイン）の種々の治療適用および診断適用を、Ｒｏｓ
ｅｎｂｅｒｇら（１９８７）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３１６：８８９−８９
７；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ（１９８８）Ａｎｎ．Ｓｕｒｇ．２０８：１２１−１３
５；Ｔｏｐａｌｉａｎら（１９８８）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．６：８３９−
８５３；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら（１９８８）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３１９
：１６７６−１６８０；Ｗｅｂｅｒら（１９９２）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．
１０：３３−４０；Ｇｒｉｍｍら（１９８２）Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７０
（２）２４８−２５９；Ｍａｚｕｍｄｅｒ（１９９７）ＣａｎｃｅｒＪ．Ｓｃ
ｉ．Ａｍ．３（Ｓｕｐｐｌ．１）：Ｓ３７−４２；ＭａｚｕｍｄｅｒおよびＲｏ
ｓｅｎｂｅｒｇ（１９８４）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１５９（２）：４９５−５０
７；およびＭａｚｕｍｄｅｒら（１９８３）ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌ．Ｉ
ｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．１５（１）：１−１０において研究および報告されている
。ＩＬ−２またはその改変体を含む本発明の処方物は、単一治療活性剤として使
用され得るか、または他の免疫学的に関連するＢもしくはＴ細胞または他の治療
剤と組合せて使用され得る。関連細胞の例としては、ＢまたはＴ細胞、ナチュラ
ルキラー細胞、ＬＡＫ細胞などであり、そしてＩＬ−２またはその改変体と組合
せて使用され得る例示的治療剤は、種々のインターフェロン、特にγ−インター
フェロン、Ｂ細胞増殖因子、ＩＬ−１、および抗体（例えば、抗−ＨＥＲ２また
は抗−ＣＤ抗体）である。ＩＬ−２またはその改変体を含む本発明の処方物は、
内科医によって適切であるとみなされた場合、経口、腹腔内、筋肉内、皮下、静
脈内、鼻腔内、または肺送達によって、ヒトまたは動物に投与され得る。投与さ
れ得るＩＬ−２の量（ＩＬ−２生物学的活性を保持するネイティブ配列またはそ
の改変体（例えば、本明細書中で開示されるムテイン）のいずれか）は、約０．
１ｍｌＵ／ｍ²と約１５ｍｌＵ／ｍ²との間の範囲であり得る。腎細胞癌および転
移性黒色腫のような徴候のために、ＩＬ−２またはその生物学的活性改変体を、
３００，０００〜８００，０００ＩＵ／ｋｇ／８時間の高い用量の静脈内ボーラ
スとして投与し得る。

【００６１】ネイティブ配列組織因子経路インヒビター（ＴＦＰＩ）またはその改変体を含
む本発明の有効量の薬学的組成物を含む処方物を、このポリペプチドでの治療に
応答する複数の診療徴候の診断、予防、および処置（局所的または全身的）の目
的のために使用し得る。このような診断徴候としては、例えば、好中球エラスタ
ーゼの増加した合成および放出に関連する徴候（このような免疫疾患には、重篤
急性膵炎、気腫、慢性関節リウマチ、多発性器官不全、嚢胞性線維症、成人呼吸
促進症候群（ＡＲＤＳ）、および敗血症が挙げられる）；ならびに疾患の診断お
よび処置のために、ＩＬ−８の増加した合成および放出に関連する徴候（このよ
うな免疫疾患には、ＡＲＤＳ、再灌流障害（肺再灌流障害を含む）、敗血症、お
よび関節炎が挙げられる）を含む。本明細書中で参考として援用されるＷＯ９６
／４０２２４を参照のこと。ＩＦＮ−βまたはムテインのヒトまたは動物への投
与は、内科医によって適切であるとみなされた場合、経口、腹腔内、筋肉内、皮
下、静脈内、鼻腔内、または肺送達によって投与され得る。

【００６２】 β−インターロイキン（ＩＮＦ−β）またはその改変体（例えば、ＩＮＦ−β _ser17 ）を含む、本発明の有効量の薬学的組成物を含む処方物を、このポリペプ
チドでの治療に応答する複数の診療徴候の診断、予防、および処置（局所的また
は全身的）の目的のために使用し得る。例えば、このような診断徴候は、以下が
挙げられる：中枢神経系（ＣＮＳ）、脳、および／または脊髄の障害または疾患
（アルツハイマー病、パーキンソン病、レーヴィ体痴呆、多発性硬化症、癲癇、
小脳性運動失調、進行性核上性麻痺、筋萎縮側索硬化症、情動障害、不安障害、
強迫性障害、人格障害、注意欠陥障害、注意欠陥過活動性障害、ツレット症候群
、テイサックス病、ニーマン‐ピック、および精神分裂病；神経損傷（脳血管疾
患（例えば、脳または脊髄での発作）、ＣＮＳ感染（髄膜炎およびＨＩＶを含む
）、脳および脊髄の腫瘍、またはプリオン疾患）；自己免疫疾患（後天免疫欠損
、慢性関節リウマチ、乾癬、クローン病、シェーグレン症候群、筋萎縮性側索硬
化症、および狼瘡）；ならびに癌（脳癌、前立腺癌、膀胱癌、腎臓癌および結腸
癌を含む））。ＩＮＦ−βまたはそのムテインのヒトまたは動物への投与は、内
科医によって適切であるとみなされた場合、経口、腹腔内、筋肉内、皮下、静脈
内、鼻腔内、または肺送達によって投与され得る。

【００６３】本発明はまた、液体の薬学的組成物中におけるポリペプチドの安定性を増加さ
せるための方法を提供し、ここで、治療活性成分として有用であるポリペプチド
は、液体処方物中での保存の間に、凝集形成を示す。この方法は、液体の薬学的
組成物の保存の間のポリペプチドの凝集形成を減少させるために、十分な量でア
ミノ酸塩、ならびに実質的に塩形態でない酸、その塩形態の酸、または酸および
その塩形態の混合物を液体の薬学的組成物に取り込む工程を包含し、ここで、こ
の酸は、本明細書中で先に記載されるように、受容可能な範囲内で液体組成物の
ｐＨを維持するために緩衝剤として有用である。

【００６４】アミノ酸塩、またはアミノ酸塩基の塩および本明細書中に記載されるような１
以上のさらなる安定剤を、本明細書中に記載されるような緩衝剤と組合せて（す
なわち、実質的に塩形態でない酸、酸の塩形態、または酸およびその塩形態の混
合物）取り込むことによって、ポリペプチドまたはその改変体の安定性を上げる
ことによって、保存中の液体ポリペプチド含有薬学的組成物の安定性の増加に導
く。従って、本発明はまた、この組成物が液体処方物中での保存の間に凝集を形
成するポリペプチドを含む場合、液体の薬学的組成物の保存安定性を上げるため
の方法を提供する。「保存安定性を上げる」とは、保存中に適切な、凝集しない
、生物学的活性コンフォメーションでポリペプチドまたはその改変体のより長い
保持を示し、従って、アミノ酸塩を含まないか、またはアミノ酸塩および１以上
の明細書中に記載されるさらなる安定化剤を含まないように、本明細書中で開示
される緩衝剤と組合せて調製された液体の薬学的組成物よりも治療効果が衰退し
ない薬学的組成物を意図する。

【００６５】本発明の方法に従って達成されたポリペプチド含有薬学的組成物の保存安定性
は、当該分野で標準の手順を使用して評価され得る。代表的に、このような組成
物の保存安定性は、保存安定性プロフィールを使用して評価される。これらのプ
ロフィールは、以下の実施例に示されるように、凝集しない生物学的活性分子形
態で存在するポリペプチドの量、および目的の変量（例えば、ｐＨ濃度、安定剤
、安定剤の濃度など）に応答する経時的効力をモニタリングすることによって得
られる。これらの安定性プロフィールは、可能な保存条件（例えば、凍結温度、
冷蔵温度、室温、または高温（例えば、４０〜５０℃））のそれぞれの個々の温
度で作製され得る。次いで、保存安定性を、例えば、目的のポリペプチドの凝集
しない生物学的活性分子形態の半減期を決定することによってプロフィール間で
比較する。「半減期」とは、目的のポリペプチドの凝集しない生物学的活性分子
形態において５０％の減少に必要とされる時間が意図される。アルギニン塩およ
び本発明の方法に従って調製された、実質的に塩形態でない酸を含む組成物は、
アミノ酸塩基の塩を含まないか、またはアミノ酸塩および１以上の明細書中に記
載されるさらなる安定化剤を含まないように、実質的に塩形態でない酸、その酸
の塩形態、または酸およびその塩形態の混合物と組合せて調製された液体組成物
の半減期よりも約２倍〜約１０倍長い半減期、好ましくは、少なくとも約３倍〜
約１０倍長い半減期、より好ましくは、少なくとも約４倍〜約１０倍長い半減期
、最も好ましくは、少なくとも約５倍〜約１０倍長い半減期を有する。本発明の
目的のために、本発明に従って調製される結果として、増加した保存安定性を有
する薬学的組成物は、「安定化」薬学的組成物とみなされる。このような安定化
組成物は、好ましくは、２〜８℃で保存した場合、少なくとも約１８ヶ月、より
好ましくは、少なくとも約２０ヶ月、さらにより好ましくは、少なくとも２２ヶ
月、最も好ましくは、少なくとも２４ヶ月の有効期間を有する。

【００６６】以下の実施例は、例示の目的で提供され、制限する目的で提供するものではな
い。

【００６７】（実験）ＩＬ−２は、Ｔ細胞増殖を刺激する強力なマイトジェンである。これは、癌転
移の処置として、癌治療のためのアジュバントとして、および感染性疾患の組み
合わせ薬剤としての、広範な治療適用を有する。

【００６８】ＩＬ−２治療を使用する種々の臨床試験の進行に伴い、このタンパク質につい
ての安定な液体処方物の開発が、非常に望ましいことが明らかになった。このよ
うな処方物は、従来の凍結乾燥化処方物よりも汎用性がある。なぜなら、これは
、種々の投薬レジメンに従って異なる強度で供給され得るからである。液体処方
物はまた、再構成を必要としないので、投与により簡便である。このような処方
物は、予め充填された既製シリンジにおいて供給され得るか、または静菌剤と適
合性であることが見い出された場合は、複数回用量の調製物として供給され得る
。

【００６９】液体処方物中のＩＬ−２は、貯蔵中に少なくとも以下の３つの経路：凝集、メ
チオニン酸化および脱アミノ化、を介して分解することが報告されている（Ｋｕ
ｎｉｔａｎｉら（１９８６）Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ３５９：３９
１−４０１；Ｋｅｎｎｅｙら（１９８６）ＬｙｍｐｈｏｋｉｎｅＲｅｓ．５：
５２３−５２７）。さらに、ＩＬ−２は、凍結および機械的剪断ストレスによっ
て引き起こされる急性のダメージに対して感受性である。従って、ＩＬ−２処方
物の開発は、急性のダメージおよび慢性的分解の両方に取り組みことを必要とす
る。

【００７０】従って、新規な安定なモノマーｒｈＩＬ−２処方物を開発した。この処方物に
おいて、タンパク質分子は、そのモノマー形態で溶液中に存在し、凝集形態では
存在しない。それゆえ、ｒｈＩＬ−２の共有結合オリゴマーまたは疎水性オリゴ
マーあるいは凝集体は存在しない。処方物は、いくつかの安定剤（最も重要には
、アルギニンおよびメチオニン）を含み、長期間の貯蔵の間の凝集、メチオニン
酸化および脱アミノ化のような物理的および化学的なダメージに対して、このタ
ンパク質を安定化する。さらに、非イオン性界面活性剤、ポリソルベート−８０
を、処方物に含め、凍結融解および機械的剪断ストレスによって生じる急性のダ
メージからタンパク質を防止する。以下の実施例に示されるように、ｒｈＩＬ−
２処方物への本発明の安定剤の添加は、その貯蔵安定性を増加する。

【００７１】これらの実施例において使用されるＩＬ−２分子は、組換えヒトＩＬ−２ムテ
インである、アルデスロイキン（ａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎ）（デス−アラニル−
１，セリン−１２５ヒトインターロイキン−２）であり、これは、システイン−
１２５がセリンで置換されている。米国特許第４，９３１，５４３号に記載のよ
うに、これは、Ｅ．ｃｏｌｉから発現され、その後、ダイアフィルトレーション
およびカチオン交換クロマトグラフィーによって精製される。開発用途のための
精製バルクは、約３ｍｇ／ｍｌのＩＬ−２であり、そして１０ｍＭクエン酸ナ
トリウム（ｐＨ６）、２００〜２５０ｍＭＮａＣｌ（ＣＭプール緩衝液）中
または１０ｍＭコハク酸ナトリウム（ｐＨ６）および１５０ｍＭＬ−アルギ
ニンを含有する緩衝液中のいずれかにおいて処方した。

【００７２】組織因子経路インヒビター（ＴＦＰＩ）は、液体の薬学的処方物における貯蔵
の間の凝集による分解を示す別のタンパク質である（Ｃｈｅｎら（１９９９）Ｊ
．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．８８：８８１−８８８）。以下の実施例８は、凝集形態
を減少するためのその遊離塩基形態にある酸、およびその塩形態を実質的に含ま
ない酸によって供給される緩衝液系の使用の効果を示す、液体処方物に関する。

【００７３】以下のプロトコルを実施例において使用し、ＩＬ−２またはＴＦＰＩの分解に
対する特定の安定剤の効果、およびそれゆえ、液体処方物中の貯蔵の間のこのタ
ンパク質の安定性を測定した。

【００７４】（ＵＶ吸光度測定）タンパク質溶液のＵＶ吸光度を、ＨｅｗｌｅｔｔＰａｃｋａｒｄＤｉｏｄ
ｅＡｒｒａｙスペクトロメーター（Ｍｏｄｅｌ８４５２）を使用して行った
。この装置は、適切な処方物緩衝液でブランクを取った。２８０ｎｍでの吸光度
を、１．０ｃｍの経路長の石英キュベットを使用して記録した。０．７０（ｍｇ
／ｍｌ）^-1ｃｍ^-1の吸光率を使用して、吸光度データをＩＬ−２濃度（ｍｇ／ｍ
ｌ）に変換した。

【００７５】（ＲＰ−ＨＰＬＣ）ＲＰ−ＨＰＬＣを、７１７自動サンプラーを備えたＷａｔｅｒｓ６２６Ｌ
Ｃシステム（ＷａｔｅｒｓＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｍｉｌｆｏｒｄ，Ｍａｉ
ｎｅ）上で、Ｖｙｄａｃ２１４ＢＴＰ５４Ｃ₄カラムおよびＶｙｄａｃ２１
４ＧＣＣ５４プレカラム（ＳｅｐａｒａｔｉｏｎｓＧｒｏｕｐ，Ｈｅｓｐａｒ
ｉａ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を使用して行った。カラムを、最初に、移動相Ａ
（１０％アセトニトリル、０．１％ＴＦＡ）で平衡化した。次いで、２０μ
ｇのＩＬ−２サンプルをロードし、そしてタンパク質を、流速１．０ｍｌ／分で
５０分間にわたる、０〜１００％の移動相Ｂ（１００％アセトニトリル、０．
１％ＴＦＡ）を適用して溶出した。主要な可溶性ＩＬ−２種は、約３２分で溶
出され、そしてＷａｔｅｒｓ４８６検出器を使用してＵＶ２１４ｎｍによっ
て検出した。データの取得および処理を、Ｐｅｒｋｉｎｓ−ＥｌｍｅｒＴｕｒ
ｂｏｃｈｒｏｍシステム（ＰＥＮｅｌｓｏｎ，，Ｃｕｐｅｒｔｉｎｏ，Ｃａｌ
ｉｆｏｒｎｉａ）上で行った。

【００７６】このＲＰ−ＨＰＬＣ方法は、主要なモノマーＩＬ−２種をピークＢとして、メ
チオニン酸化種（主に、Ｍｅｔ¹⁰⁴が酸化されている）をピークＡとして、脱ア
ミノ化種（おそらく、Ａｓｎ⁸⁸）をピークＢ’として、そしてこれらのピークの
前後のいずれかで溶出された他の未知の種を検出した。

【００７７】（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ）サイズ排除ＨＰＬＣを、ＴＯＳＯＨＡＡＳＧ２０００ＳＷｘ１カラムおよび
ＴＳＫＳＷｘ１ガードカラム（ＴＯＳＯＨＡＡＳ，Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙｖｉ
ｌｌｅ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）上で行った。１０ｍＭリン酸ナトリウム
（ｐＨ７）および２００ｍＭ硫酸アンモニウムを含む単一の移動相を、１．
０ｍｌ／分の流速で適用した。モノマーＩＬ−２種は、約１４分で溶出され、そ
してＷａｔｅｒｓ４８６検出器を使用してＵＶ２１４ｎｍによって検出され
た。データの取得および処理を、Ｐｅｒｋｉｎｓ−ＥｌｍｅｒＴｕｒｂｏｃｈ
ｒｏｍシステム上で行った。

【００７８】ＩＬ−２をモニターするために特別に開発したネイティブＳＥＣ−ＨＰＬＣプ
ロトコルを使用して、ｒｈＩＬ−２は、主に、単一の種として溶出し、凝集解離
剤（例えば、ＳＤＳ、尿素およびＤＴＴ）の添加は、この種の溶出に影響を与え
なかったことから、この種は、おそらくモノマー形態である。

【００７９】（ＩＥＸ−ＨＰＬＣ）イオン交換（ＩＥＸ）−ＨＰＬＣを、Ｃｈｅｎら（１９９９）Ｊ．Ｐｈａｒｍ
．Ｓｃｉ．８８：８８１−８８８に記載されるように、７１７加熱器／冷却器自
動サンプラーを備えるＷａｔｅｒｓ６２６ＬＣシステムを使用して、Ｐｈａ
ｒｍａｃｉａＭｏｎｏ−ＳＨＲ５／５ガラスカラム上で行った。このカラ
ムは、８０％の移動相Ａ（７０：３０ｖ／ｖ、２０ｍＭ酢酸ナトリウム：アセ
トニトリル（ｐＨ５．４））および２０％の移動相Ｂ（７０：３０ｖ／ｖ、２
０ｍＭ酢酸ナトリウムおよび１Ｍ塩化アンモニウム：アセトニトリル（ｐＨ
５．４））で平衡化した。注入後、組換えヒト（ｒｈ）ＴＦＰＩを、流速０．
７ｍｌ／分で２１分間にわたり、移動相Ｂを８５％に増加させることによって溶
出した。ｒｈＴＦＰＩは、約１６．５分で単一のピークとして溶出され、そして
Ｗａｔｅｒｓ４８６吸光度検出器を用いて２８０ｎｍのＵＶ吸光度によって検
出した。データの取得および処理を、Ｐｅｒｋｉｎｓ−ＥｌｍｅｒＴｕｒｂｏ
ｃｈｒｏｍシステム上で行った。タンパク質濃度を、ピーク面積を積分しそして
既知の濃度のサンプルから作成した標準曲線での面積と比較することによって、
推測した。

【００８０】（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）ＳＤＳ−ＰＡＧＥを、Ｌａｅｍｍｌｉのプロトコルに従って行った。約５μｇ
のＩＬ−２を、プレキャスト１８％ＮｏｒｖｅｘＴｒｉｓ−グリシンゲルの
各レーンにロードし、そして電気泳動を１００Ｖで行った。タンパクバンドを、
クーマシーブルー染色によって染色し、そしてＩｍａｇｅｑｕａｎＴシステム
を備えるＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｙｎａｍｉｃｓ濃度計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｄｙｎａｍｉｃｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）によって分析
した。

【００８１】（ＩＬ−２生物活性についてのＨＴ−２細胞増殖およびＭＴＴ染色）ＩＬ−２の効力を、ＨＴ−２細胞増殖およびＭＴＴ染色を使用するインビトロ
バイオアッセイ（Ｇｉｌｌｉｓら（１９７８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１２
０：２０２７−２０３２；Ｗａｔｓｏｎ（１９７９）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１５
０（６）：１５１０）によって測定した。手短には、１×１０⁴のマウスＨＴ−
２細胞（これは、増殖についてＩＬ−２依存性である）を、標準、コントロール
またはサンプルを含む、組織培養プレートのウェルにロードした。３７℃で２２
〜２６時間のインキュベーション後、ＭＴＴ染色をウェルに添加し、そしてイン
キュベーションを３７℃で３〜４時間継続した。次いで、２０％ＳＤＳを添加
し、室温で一晩脱色した。ウェルの吸光度を、５７０ｎｍで読み取り、そしてＷ
ＨＯ国際標準に基づいてＩＬ−２の生物活性に変換した。

【００８２】（ｐＨおよび容量オスモル濃度測定）種々の処方物の溶液のｐＨを、Ｏｒｉｏｎ製のｐＨメーター（Ｍｏｄｅｌ６
１１、ＯｒｉｏｎＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄＬａｂｏｒ
ａｔｏｒｙＰｒｏｄｕｃｔｓＧｒｏｕｐ，Ｂｏｓｔｏｎ，Ｍａｓｓａｃｈｕ
ｓｅｔｔｓ）によって測定した。このｐＨメーターは、ｐＨ４標準（Ｆｉｓｈ
ｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，カタログ番号ＳＢ１０１−５００）およびｐＨ
７標準（ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号ＳＢ１０７−５０
０）を使用して、製造業者に示された２緩衝液較正手順によって較正した。

【００８３】これらの処方物の溶液の容量オスモル濃度を、Ｗｅｓｃｏｒ製のＶａｐｏｒ
ＰｒｅｓｓｕｒｅＯｓｍｏｍｅｔｅｒ（Ｍｏｄｅｌ５５００、Ｗｅｓｃｏｒ
Ｉｎｃ．，Ｌｏｇａｎ．Ｕｔａｈ）によって測定した。この浸透圧計は、この
製造業者によって供給される以下の２つの標準：２９０ｍｍｏｌ／ｋｇ標準（Ｗ
ｅｓｃｏｒ，発注番号ＯＡ−０１０）および１，０００ｍｍｏｌ／ｋｇ標準（Ｗ
ｅｓｃｏｒ，発注番号ＯＡ−０２９）、によって較正した。

【００８４】これらのプロトコルを使用して、タンパク質の凝集、メチオニン酸化および脱
アミノ化によるｒｈＩＬ−２分解に対する、種々の安定剤の効果を定量化した。

【００８５】（実施例１：タンパク質凝集およびｒｈＩＬ−２の貯蔵安定性に対する種々の
可溶化剤の影響）タンパク質凝集は、マイルドな酸性からアルカリ性のｐＨ条件の範囲の液体媒
体中のｒｈＩＬ−２についての主な分解経路である。これらのｐＨ条件で処方さ
れた溶液中のｒｈＩＬ−２は、高温で貯蔵される場合、迅速にタンパク質凝集し
、これによって、可視の沈澱が生じる。可視の沈澱したタンパク質は、０．２μ
ｍフィルターを通した濾過によって除去され得る。溶液中の残りの可溶性タンパ
ク質は、ＲＰ−ＨＰＬＣ、ＳＥＣ−ＨＰＬＣおよびＵＶ吸光度のような多数の分
析アッセイによって定量され得る。凝集はまた、生物活性の減少を生じ、これは
、本明細書中に記載されるインビトロでのバイオアッセイによって決定され得る
。

【００８６】本明細書中に記載される分析手順を用いて、いくつかの条件下でのｒｈＩＬ−
２の貯蔵安定性を、高温でのインキュベーション時間の関数として可溶性ｒｈＩ
Ｌ−２の量の変化をモニタリングすることによって追跡した。

【００８７】（１．Ａ．糖およびアミノ酸の影響）ｒｈＩＬ−２の貯蔵安定性に対する糖の影響を、ソルビトール、スクロースお
よびマンニトールについて、０．２ｍｇ／ｍｌｒｈＩＬ−２、１０ｍＭコハク
酸ナトリウム（ｐＨ６）およびこれらの糖のうちの１つ２７０ｍＭを含む処方物
中で調べた。安定性サンプル中に残っている可溶性ｒｈＩＬ−２の量を、図１に
示すようにインキュベーション時間に対してプロットした。互いに重ねたスクロ
ースおよびマンニトールの曲線は、ＩＬ−２貯蔵安定性に対するそれらの影響が
類似することを示す。ソルビトールについての曲線は、他の２つの糖よりもわず
かに高く、このことは、ソルビトールが他の２つの糖よりもわずかに大きな安定
性効果を有することを示唆する。

【００８８】貯蔵安定性に対するアミノ酸の影響を図２に示す。処方物は、０．１ｍｇ／ｍ
ｌＩＬ−２、１０ｍＭコハク酸ナトリウム（ｐＨ６）および選択された９つの
アミノ酸のうちの１つ１５０ｍＭを含んでいた。図２に示すように、安定性のラ
ンクは、Ａｒｇ＞Ａｓｐ＞Ｌｙｓ＞Ｍｅｔ＞Ａｓｎ＞Ｌｅｕ＝Ｓｅｒ＝Ｐｒｏ＝
Ｇｌｙである。

【００８９】ソルビトールおよびアルギニンの安定化効果を、さらなる研究において確認し
た。この研究は、ｒｈＩＬ−２貯蔵安定性が濃度依存性様式で影響を受けること
を示した。従って、ｒｈＩＬ−２貯蔵安定性は、ソルビトール濃度が５０ｍＭか
ら１５０ｍＭに、そして最終的に２７０ｍＭまで増大した場合に増強される（図
３）。同様に、ｒｈＩＬ−２貯蔵安定性は、処方物中のアルギニンの濃度が増大
するにつれて増大する（図４）。

【００９０】（１．Ｂ．処方物のｐＨの影響）ＮａＣｌ、ソルビトールおよびアルギニンを含む処方物中のｒｈＩＬ−２のｐ
Ｈ貯蔵安定性プロフィールを調べた。５０℃での残りの可溶性ＩＬ−２について
の半減期を、図５中のｐＨに対してプロットする。半減期（ｔ_1/2）を、安定性
サンプル中の可溶性タンパク質の５０％減少に必要な時間として本明細書で定義
した。より大きな半減期は、より大きな貯蔵安定性を示す。

【００９１】図５に示すように、タンパク質凝集に対してｒｈＩＬ−２を安定化するために
最適なｐＨは、溶液中に存在する安定化剤に依存する。ＮａＣｌ中のｒｈＩＬ−
２の最大の貯蔵安定性には、ｐＨ４で到達し、ここで、ｒｈＩＬ−２は、５０℃
で約２３日間の半減期を有する。ソルビトール処方物中のｒｈＩＬ−２は、ｐＨ
が減少するにつれて増大した安定性を示し、最大の安定性は、ｐＨ５で生じ、こ
こで、５０℃での半減期は約２６日間である。最大の安定性（すなわち、最長の
半減期）は、約６．０のｐＨを有する処方物中で安定化剤としてアルギニンを用
いて達成され得、ここで、このタンパク質の５０℃での半減期は約３２日間であ
る。これらの結果は、アルギニンが、ソルビトールまたはＮａＣｌと比較して好
ましい安定化剤であることを示唆する。なぜなら、タンパク質安定化についての
最適ｐＨが、より生理学的に受容可能なｐＨで生じるからである。

【００９２】（１．Ｃ．緩衝液系の影響）処方物中で１０ｍＭ緩衝液系を用いて、適切なｐＨを提供し、そして特定の量
の緩衝化能力を維持することが極めて習慣的である。例えば、５．８の処方物ｐ
Ｈは、コハク酸およびその塩形態（例えば、コハク酸ナトリウム）の１０ｍＭの
混合物を用いることによって達成され得る。このような緩衝液系が選択される場
合、１５０ｍＭアルギニンＨＣｌは、処方物において一次安定化剤として用いら
れ得るが、１５０ｍＭアルギニン塩基はそうではない。なぜなら、１５０ｍＭア
ルギニン塩基は、ｐＨが１０ｍＭ緩衝液によって下げて５．８に調整されるのを
妨げるからである。

【００９３】しかし、アルギニンＨＣｌは、アルギニン塩基が生じるよりも高い容量オスモ
ル濃度を生じる。従って、１０ｍＭコハク酸およびコハク酸ナトリウム緩衝液を
用いてｐＨ５．８に調整された１５０ｍＭアルギニンＨＣｌを含む処方物は、既
に等張性に近く、約２５３ｍｍｏｌ／ｋｇの容量オスモル濃度および５０℃での
約８日間の半減期を有する（表１）。貯蔵安定性は、この安定化剤の増大に伴っ
て増大するので、処方物中のなおより高い濃度のアルギニンが望ましい。アルギ
ニンＨＣｌの添加によってアルギニンの濃度が２３０ｍＭに増大し、そして１０
ｍＭコハク酸およびコハク酸ナトリウム緩衝液を用いてｐＨが５．８に調整され
た場合、５０℃での半減期は二倍（約１７日間）であり、なお、この溶液は高張
性であり、約３７２ｍｍｏｌ／ｋｇの容量オスモル濃度を有する。

【００９４】溶液のｐＨを５．８に調整するための緩衝化系として供されるコハク酸および
アルギニンは、アルギニン塩基として存在し、２３０ｍＭまでアルギニン塩基の
濃度が増大すると、５０℃での半減期が同様に二倍になり、これは、約１６日間
まで増大した。しかし、貯蔵安定性におけるこの増大は、溶液をほぼ等張にしつ
つ達成され、この処方物は、約２７１ｍｍｏｌ／ｋｇの容量オスモル濃度を有し
ていた（表１を参照のこと）。このようにして、２３０ｍＭアルギニン塩基は処
方物中で用いられて、この処方物の等張性を越えることなく、ｒｈＩＬ−２の貯
蔵安定性を増大させ得る。

【００９５】（表１：ｒｈＩＬ−２処方物の溶液の容量オスモル濃度および貯蔵安定性）貯
蔵安定性を、５０℃で貯蔵した後、ＲＰ−ＨＰＬＣによって測定した残りの可溶
性ｒｈＩＬ−２についての半減期（ｔ_1/2）で表す。アルギニンＨＣｌ処方物は
、０．５ｍｇ／ｍｌｒｈＩＬ−２、１ｍＭＥＤＴＡおよび１５０ｍＭまたは
２３０ｍＭＬ−アルギニンＨＣｌならびに１０ｍＭコハク酸およびコハク酸ナ
トリウムを含み、ｐＨが５．８に調整される。アルギニン塩基処方物は、０．５
ｍｇ／ｍｌｒｈＩＬ−２、１ｍＭＥＤＴＡおよび１５０ｍＭまたは２３０ｍ
ＭＬ−アルギニン塩基、ならびに８１ｍＭまたは１２８ｍＭコハク酸を含み、
ｐＨが５．８に調整された。

【００９６】

【表１】これらの２つのｐＨ調整方法を、他の緩衝液系について調べた（表２）。１５
０ｍＭアルギニンＨＣｌを処方物中で用い、そして１０ｍＭの酸およびそのナト
リウム塩によってｐＨを５．８に調整した場合、全ての処方物は、等張未満であ
り、等張は約２９０ｍｍｏｌ／ｋｇであった。これらの処方物中でのｒｈＩＬ−
２についての５０℃での半減期は、約１５日間〜約２０日間の範囲であった。２
３０ｍＭアルギニン塩基をこの処方物中で用い、そして緩衝液系としてその塩の
形態を実質的に含まない酸を用いてｐＨを５．８になるまで滴定した場合、クエ
ン酸またはコハク酸で調整されたｐＨを有する処方物は、依然として等張よりも
低い溶液容量オスモル濃度を示し、一方、他の処方物は、リン酸の場合のように
等張よりもわずかに高いか、またはグルタミン酸もしくは酢酸の場合のように高
張であるかのいずれかであった。しかし、全ての処方物についての５０℃での半
減期は、３０日を越えるまで増大した。従って、いずれもその塩形態を実質的に
含まないクエン酸またはコハク酸を緩衝化系として用いることによって、アルギ
ニンの濃度は、アルギニン塩基を用いて２３０ｍＭへと増大され得、ｒｈＩＬ−
２の貯蔵安定性が増大する。

【００９７】（表２：ｒｈＩＬ−２処方物の溶液容量オスモル濃度および貯蔵安定性）５０
℃での貯蔵後にＲＰ−ＨＰＬＣによって測定した残りの可溶性ｒｈＩＬ−２につ
いての貯蔵安定性を半減期（ｔ_1/2）で表す。全ての処方物は、０．２ｍｇ／ｍ
ｌｒｈＩＬ−２、５ｍＭメチオニン、１ｍＭ二ナトリウムＥＤＴＡ、０．１
％ポリソルベート８０および１５０ｍＭＬ−アルギニンＨＣｌを含んでおり、
１０ｍＭの酸およびそのナトリウム塩または２３０ｍＭＬ−アルギニン塩基に
よってｐＨを５．８に調整し、その塩形態を実質的に含まない酸を用いて滴定す
ることによってｐＨを５．８に調整した。

【００９８】

【表２】（１．Ｄ．タンパク質濃度の効果）貯蔵安定性に対するタンパク質濃度の効果を、１０ｍＭコハク酸ナトリウム
（ｐＨ６）および１５０ｍＭアルギニンを含有する処方物において試験した。
図６に示されるように（ここで、可溶性ｒｈＩＬ−２に関する５０℃における半
減期を、最初のタンパク質濃度に対してプロットした）、ｒｈＩＬ−２貯蔵安定
性はタンパク質濃度が減少するにつれて増加する。この知見は、凝集体が処方物
中のｒｈＩＬ−２に関する主要な分解経路であるという実験的な観測と合致する
。

【００９９】（１．Ｅ．非イオン性界面活性剤ポリソルベート８０の効果）ｒｈＩＬ−２貯蔵安定性に対するポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０また
はＴｗ８０）の効果を、０．５ｍｇ／ｍｌＩＬ−２、２３０ｍＭアルギニ
ン塩基、ｐＨ５．８に調整された１２８ｍＭコハク酸、１ｍＭＥＤＴＡなら
びに０、０．０２、および０．１％のポリソルベート８０を含有する処方物中試
験した。表３に示されるように、ＲＰ−ＨＰＬＣによって測定された場合、ポリ
ソルベート８０を含有する両方の処方物は、５０℃において可溶性ＩＬ−２の半
減期に減少（１６日から約９日へ）を示す。従って、処方物中にポリソルベート
８０を含有することは、タンパク質凝集に対するその効果に単独で基づいて望ま
しくないとして認識される。しかし、この因子は、以下の実施例に開示されるよ
うに、このタンパク質を含有する液体処方物の加工の間に有利である、凍結融解
および機械剪断に関連する激しいタンパク質損傷に対して安定化する効果を有す
る。

【０１００】２つのソルビトールベースの処方物の貯蔵安定性をまた、試験した。ＲＰ−Ｈ
ＰＬＣおよび生物活性によるこれらの半減期はアルギニン処方物に対して比較可
能であったが、ＳＥＣ−ＨＰＬＣから概算された半減期は大いに小さく、これは
、これらの処方物中のｒｈＩＬ−２タンパク質のより大きい部分が、おそらく可
溶性凝集形態中に存在することを示唆する。

【０１０１】（表３：ＲＰ−ＨＰＬＣ、ＳＥＣ−ＨＰＬＣによって測定された半減期（ｔ_1/ ₂ ）または残存する可溶性ｒｈＩＬ−２（ピークＢ）、および５０℃で所蔵さ
れたｒｈＩＬ−２処方物中のインビトロバイオアッセイ）

【０１０２】

【表３】表３において、ＲＰ−ＨＰＬＣ方法によって決定された場合のアルギニン塩基
のコハク酸ｒｈＩＬ−２処方物に関する半減期は、ＳＥＣ−ＨＰＬＣ方法によっ
て決定されたものよりもわずかにより小さく、そしてインビトロバイオアッセイ
方法によって決定されたものよりも大いにより小さい。ＳＥＣ−ＨＰＬＣに対す
る主要なｒｈＩＬ−２種の溶出を、これらの差異をさらに調べるために評価した
。ＳＤＳ、尿素、およびＤＴＴの処置が有りおよび無しでのサンプルは、主要な
種に関して溶出時間に変化を示さず、これらの処方物中のｒｈＩＬ−２が単量体
種として存在したことを示す。しかし、ＳＥＣ−ＨＰＬＣプロトコールは、他の
単量体種（例えば、ピークＡのメチオニン酸化種）を主要な単量体のインタクト
種（ピークＢの種）と区別し得なかったのかもしれない。従って、半減期の決定
において小さな差異が予想される。

【０１０３】表３に提示されるデータにおいて生物活性を決定するために使用されるインビ
トロバイオアッセイは、アッセイ希釈物中に０．１％のＳＤＳを用いて実行した
。従って、マウスＨＴ−２細胞と相互作用させるために組織培養プレートへサン
プルを適用する前に、このサンプルを０．１％ＳＤＳを含有するアッセイ希釈
物を用いて希釈した。ＳＤＳを用いた希釈が、これらのサンプル中のいくらかの
ｒｈＩＬ−２凝集体をもとの単量体形態へ解離させ、所定の処方物の生物活性の
過大評価を生じ得た可能性はあった。従って、安定性のサンプルを、ＳＤＳの添
加有り（＋Ｓ）および無し（−Ｓ）のアッセイ希釈物を用いてアッセイした。サ
ンプルをまた、０．２μｍのろ過処理が有り（＋Ｆ）および無し（−Ｆ）でアッ
セイした。なぜなら、ろ過は、視覚検査によって判定されるように大きなタンパ
ク質凝縮物を除去することが可能だからである。これらの処置を用いたサンプル
に関して測定された生物活性値を、比較のためのＲＰ−ＨＰＬＣプロトコールを
用いて得られた貯蔵安定性の結果と共に、表４に示す。値は、−７０℃で貯蔵さ
れた類似のサンプルにおいて得られた生物活性値の百分率として示す。

【０１０４】一般的に、ＨＴ−２細胞と接触される前にＳＤＳを用いて希釈されろ過されて
いない処方物は、このアッセイを動かす前にアッセイ希釈中ＳＤＳ無しで希釈さ
れてろ過された処方物よりも、より高い生物活性値を示す。これらの生物活性結
果の間で、ろ過およびＳＤＳ無しでの希釈を用いて得られたものは、ＲＰ−ＨＰ
ＬＣの結果に全く匹敵した。従って、この方法は、単量体ｒｈＩＬ−２に関する
真の生物活性測定に推奨される。

【０１０５】（表４：可溶性ｒｈＩＬ−２に関するＲＰ−ＨＰＬＣ分析と４０℃または５０
℃で２週間貯蔵された安定性サンプルに関するインビトロ生物活性分析との間の
結果の比較）全ての結果は、これらそれぞれの−７０℃サンプルに関して得られた結果のパ
ーセンテージとして表す。処方物は、０．５ｍｇ／ｍｌｒｈＩＬ−２、２３０
ｍＭＬ−アルギニン塩基、１２８ｍＭコハク酸（ｐＨ５．８）、および１ｍ
ＭＥＤＴＡ、０．１％ポリソルベート８０（有り（＃１）および無し（＃２
））を含んだ。バイオアッセイに関するサンプルを、０．１％ＳＤＳが有りお
よび無しの希釈物を用いた希釈の前に、０．２２μｍのろ過が有りおよび無しで
処置した。

【０１０６】

【表４】（ｌ．Ｆ．保存料適合性）保存料適合性を、複用量処方物の開発を要して調査した。ＩＬ−２安定性に対
する保存料の効果を、２つの促進された研究において評価した。研究１は、０．
２ｍｇ／ｍｌＩＬ−２、１０ｍＭコハク酸ナトリウム（ｐＨ６）および１６
０ｍＭアルギニンを含有する処方物中、ベンジルアルコール、ｍ−クレゾール
、およびフェノールをスクリーニングした。研究２は、０．２ｍｇ／ｍｌＩｌ
−２、２３０ｍＭＬ−アルギニン塩基、１２８ｍＭコハク酸（ｐＨ５．８）
、１ｍＭＥＤＴＡ二ナトリウム、０．１％ポリソルベート８０を含有する処
方物中、塩化ベンゼトニウム、塩化ベンザルコニウム、メチルパラゲン（ｐａｒ
ａｇｅｎ）／プロピルパルベン（ｐａｒｂｅｎ）、およびクロロブタノールをス
クリーニングした。４０℃で貯蔵されたこれらの処方物に関してＲＰ−ＨＰＬＣ
によって測定された可溶性ｒｈＩＬ−２に関する半減期を、表５に示す。

【０１０７】全ての試験された保存料は、上昇した温度においてｒｈＩＬ−２安定性を減少
した。研究１において、可溶性ｒｈＩＬ−２に関する半減期は、いずれの保存剤
も無しでは４０℃において約７４日間であった。ベンジルアルコールまたはｍ−
クレゾールまたはフェノールの添加は、半減期を有意に５分の１倍〜１０分の１
倍に減少した。研究２において、保存剤の効果は十分に低い強度であった。可溶
性ｒｈＩＬ−２に関する半減期は、塩化ベンゼトニウムに関しては半分よりも小
さく減少し、そして他の保存料に関して２分の１より大きく減少した。全てを考
慮に入れて、塩化ベンゼトニウムは、試験された保存料の間でｒｈＩＬ−２安定
性において最も少ない減少を有した。

【０１０８】（表５．防腐剤を含有する処方物についての４０℃での可溶性ｒｈＩＬ−２の
半減期（ｔ_2/1））研究１：処方物は、０．２ｍｇ／ｍｌｒｈＩＬ−２、１０
ｍＭコハク酸ナトリウム（ｐＨ６）、１５０ｍＭＬ−アルギニンおよび防腐剤
を含有した。研究２：処方物は、０．２ｍｇ／ｍｌｒｈＩＬ−２、２３０ｍＭ
Ｌ−アルギニン塩基、１２８ｍＭコハク酸（ｐＨ５．８）、１ｍＭＥＤＴＡ
ナトリウム、０．１％ポリソルベート８０および防腐剤を含有した。

【０１０９】

【表５】防腐剤は、上昇した温度でのｒｈＩＬ−２に対する明白な不安定化効果を有し
たが、４℃または２５℃でのｒｈＩＬ−２の短時間貯蔵安定性に対するこれらの
効果をも試験した。新たな研究を、０．２ｍｇ／ｍｌｒｈＩＬ−２、２３０ｍ
ＭＬ−アルギニン塩基、１２８ｍＭコハク酸、１ｍＭＥＤＴＡナトリウム、
５ｍＭメチオニンおよび０．１％ポリソルベート８０（ｐＨ５．８）を含む同じ
処方物中において６つ防腐剤を試験した。表６は、１年貯蔵した後に残った可溶
性ｒｈＩＬ−２の量の結果を報告する。全ての処方物は、コントロールと比較し
て、ＲＰ−ＨＰＬＣおよびインビトロバイオアッセイの両方により可溶性ｒｈＩ
Ｌ−２の有意な損失を示さないが、ただし、０．２５％ｍ−クレゾールを含む
処方物（これは、検出可能な損失を示した）を除く。

【０１１０】（表６．ＲＰ−ＨＰＬＣ積分ピーク面積およびインビトロ生物活性により決定
される場合に残っている総可溶性ｒｈＩＬ−２の割合で表した、４℃または２５
℃での防腐剤含有処方物の１年間の貯蔵の安定性）コントロール処方物は、０．
２ｍｇ／ｍｌＩＬ−２、２３０ｍＭＬ−アルギニン塩基、１２８ｍＭコハク
酸、１ｍＭＥＤＴＡ、５ｍＭメチオニンおよび０．１％ポリソルベート８０（
ｐＨ５．８）を含有した。

【０１１１】

【表６】（実施例２．ｒｈＩＬ−２のメチオニン酸化および貯蔵安定性に対する種々の
因子の効果）ＩＬ−２におけるメチオニン酸化は、以前に特徴付けられている（Ｋｕｎｉｔ
ａｎｉら（１９８６）Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ３５９：３９１−４
０２；Ｓａｓａｏｋｉら（１９８９）Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．３７（
８）：２１６０−２１６４）。Ｉｌ−２は、ペプチド鎖上の残基の位置２３、３
９、３６および１０４位の４つのメチオニン残基を有する。これらの中でも、Ｍ
ｅｔ¹⁰⁴は、タンパク質表面上に存在し、そして最も酸化的である。このメチオ
ニン酸化種は、ＲＰ−ＨＰＬＣクロマトグラムからの初期の溶出種（ピークＡ）
〜主要なＩＬ−２種（ピークＢ）として溶出され得る。Ｍｅｔ²³およびＭｅｔ³⁹ は酸化されにくく、これは、おそらくタンパク質分子の内部のそれらの距離に起
因して、極度な酸化条件下でしか生じない。これらのＭＥＴ残基の酸化種は、Ｒ
Ｐ−ＨＰＬＣ上でＭｅｔ¹⁰⁴よりも早い種として溶出され得る。Ｍｅｔ⁴⁶は、タ
ンパク質の内部深く埋められ、そしてタンパク質が完全に展開しない限り、簡単
には酸化されない。

【０１１２】ＩＬ−２におけるメチオニン酸化の研究は、Ｍｅｔ¹⁰⁴（それ自体、酸化を最
も受け易いメチオニン残基であり、そしてまた他のメチオニン残基の酸化を妨げ
る）の酸化に集中した。

【０１１３】（２．Ａ．ｐＨの効果）メチオニン酸化を、０．２ｍｇ／ｍｌＩＬ−２、１５０ｍＭＮａＣｌおよ
び１０ｍＭの種々の緩衝液種を含む処方物において、３〜９のｐＨ範囲において
研究した。これらの処方物におけるメチオニン酸化を、ｔ＝０およびｔ＝３ヶ月
で、ＩＬ−２サンプルにおけるピークＡ（すなわち、Ｍｅｔ¹⁰⁴酸化種）の割合
を定量化することにより試験した。表７に報告するように、ｐＨの効果は、シト
レートにより緩衝化したサンプル（ｐＨ６）を除いて、ｔ＝０で認められた。他
のサンプル（５％のピークＡ種を有するサンプル）と比較して、シトレートサン
プルは、６％までのピークＡのレベルの増加を示した。

【０１１４】ｔ＝３ヶ月では、ピークＡのレベルは、高いｐＨ条件で増加し、このことは、
Ｍｅｔ¹⁰⁴のメチオニン酸化のための塩基触媒機構を示唆する。ｐＨ６では、ス
クシネートは、低い値のピークＡがスクシネート処方物において観察される場合
にメチオニン酸化を最少化する際、シトレートより良好な緩衝液である。

【０１１５】（表７．ｔ＝０および３ヶ月でのｐＨ３〜ｐＨ９の処方物サンプルについての
メチオニン酸化ピークＡ種（総可溶性ＩＬ−２のピークＡ（％））として表され
る可溶性ＩＬ−２（ピークＡ＋ピークＢ）の総量の割合として表したメチオニン
酸化のＲＰ−ＨＰＬＣ分析）処方物は、０．２ｍｇ／ｍｌＩＬ−２、１５０ｍ
ＭＮａＣｌを含み、そしてｐＨは１０ｍＭの種々の緩衝液種により調製された
。

【０１１６】

【表７】（２．Ｂ．ＥＤＴＡ、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０およびＭｇＣ
ｌ₂の効果）メチオニン酸化に対する金属イオンキレート剤、２種類の非イオン性界面活性
剤、および二価金属イオンの効果を表８に報告する。処方物におけるポリソルベ
ート２０またはポリソルベート８０の存在は、ｔ＝０およびｔ＝１ヶ月の両方で
のメチオニン酸化種のレベルを増加させる。対照的に、ＥＤＴＡおよびＭｇＣｌ ₂ は、４０および５０℃での１ヶ月貯蔵した後のメチオニン酸化種のレベルを減
少させる。

【０１１７】（表８．ｔ＝０およびｔ＝１ヶ月でのＩＬ−２サンプル中のメチオニン酸化ピ
ークＡ種（ピークＡ（％））として存在する可溶性ＩＬ−２（ピークＡおよびピ
ークＢ）の総量の割合）コントロールサンプルは、０．２ｍｇ／ｍｌＩＬ−２
、１０ｍＭコハク酸ナトリウム（ｐＨ６）、および１５０ｍＭアルギニンを
含有した。

【０１１８】

【表８】（２．Ｃ．メチオニンの効果）メチオニン酸化からＩＬ−２を保護するために、処方物におけるメチオニンの
添加を実験した。表９は、５０℃での２週間貯蔵した後のメチオニンの種々の量
を含む処方物についての、ピークＡの変化および可溶性ＩＬ−２（ピークＡ＋ピ
ークＢ）の総量を報告する。処方物におけるメチオニン濃度の増加は、ｔ＝０お
よび２週間でピークＡのレベルを減少させ、一方２週間貯蔵した後に残っている
可溶性ＩＬ−２の量は、影響されない。５ｍＭメチオニンでは、ピークＡの３倍
減少をｍｔ＝２週間において観察する。従って、メチオニンの添加は、タンパク
質の有意なメチオニン酸化の減少を生じ、そしてＩＬ−２凝集に対してわずかし
か影響しない。

【０１１９】（表９．５０℃におけるｔ＝０およびｔ＝２週間でのＩｌ−２サンプルにおけ
る、ピークＡの変化および総可溶性タンパク質の変化）処方物は、０．２ｍｇ／
ｍｌＩＬ−２、２３０ｍＭアルギニン、１２８ｍＭコハク酸（ｐＨ５．８）、
１ｍＭＥＤＴＡ、０．１％ポリソルベート８０および０〜１０ｍＭメチオニン
を含有した。

【０１２０】

【表９】高温の結果に加えて、５ｍＭメチオニンを有するかまたは有さない処方物につ
いて、３ヶ月貯蔵した後の４℃および２５℃でのメチオニン酸化のレベルも記録
した。表１０に示されるように、処方物における５ｍＭメチオニンの存在は、４
℃および２５℃の両方におけるピークＡのレベルの３倍の減少を生じる。従って
、５ｍＭメチオニンの添加は、酸化からＭｅｔ¹⁰⁴を有効に保護する。

【０１２１】（表１０．メチオニンが酸化されたピークＡ種（総可溶性ＩＬ−２のピークＡ
（％））として示される可溶性ＩＬ−２（ピークＡ＋ピークＢ）の総量の割合、
および４℃または２５℃のいずれかでの３ヶ月間貯蔵したサンプルに残っている
可溶性ＩＬ−２の割合として表される、メチオニン酸化のレベル）処方物は、０
．２ｍｇ／ｍｌＩＬ−２、２３０ｍＭアルギニン、１２８ｍＭコハク酸（ｐＨ
５．８）１ｍＭＥＤＴＡ、０．１％ポリソルベート８０および０〜５ｍＭメチ
オニンを含有した。

【０１２２】

【表１０】（２．Ｄ．窒素パージングおよび脱気による酸素除去の効果）メチオニン酸化を最少化するためにＩＬ−２サンプル中の酸素の除去を試験し
た。１ｍｌＩＬ−２サンプルを満たした３ｃｃバイアル中のヘッドスペース中
の空気を窒素でパージした。溶解した酸素分子を減圧脱気により除去した。表１
１は、これらのサンプルについて、５０℃で１週間貯蔵した後の可溶性ＩＬ−２
（ピークＡ＋ピークＢ）の総量の変化およびピークＡの変化を示す。窒素パージ
ング単独では、メチオニン酸化種の割合をわずか（６．７％〜６．２％）しか減
少しない。溶液脱気とヘッドスペースの窒素パージングとの組み合わせはさらに
ピークＡのレベルを約１パーセントポイント減少させる。一方、可溶性ＩＬ−２
の総量の割合は、窒素パージまたは脱気のどちらを使用しても変化しないままで
ある。

【０１２３】（表１１：ｔ＝０およびｔ＝１週間にて５０℃で回収したサンプル中の、メチ
オニン酸化されたピークＡの種として表した可溶性ＩＬ−２の総量（ピークＡ＋
ピークＢ）のパーセンテージ（％ピークＡ）における変化およびサンプル中に残
っている可溶性ＩＬ−２の総量のパーセンテージにおける変化。処方物は、０．
３ｍｇ／ｍｌのＩＬ−２、２３０ｍＭアルギニン、１２８ｍＭコハク酸、１
ｍＭＥＤＴＡ、および０．１％ポリソルベート８０を含有した。）

【０１２４】

【表１１】（２．Ｅ．保存剤の効果）メチオニン酸化に対する保存剤の効果を試験した。表１２は、６つの保存剤の
うちの１つを有する処方物サンプルおよび保存剤を有さない処方物サンプルにつ
いての、４℃および２５℃で６ヶ月および１２ヶ月保存した後の、ピークＡにお
ける変化を示す。保存剤を含むすべての処方物は、コントロールと同様のピーク
Ａのレベルを示した。このことは、この保存剤が、０．２５％ｍ−クレゾール
を含有する処方物（これは、ピークＡのレベルにおける有意な増加を示した）を
除いて、メチオニン酸化に対する検出可能な効果を有さないことを示す。

【０１２５】（表１２：４℃および２５℃で６ヶ月および１２ヶ月保存した種々の保存剤含
有処方物における、メチオニン酸化されたピークＡの種として表した可溶性ＩＬ
−２の総量（ピークＡ＋ピークＢ）のパーセンテージ（％ピークＡ）。コントロ
ール処方物は、５．８のｐＨにおいて、０．２ｍｇ／ｍｌＩＬ−２、２３０ｍ
ＭＬ−アルギニン塩基、１２８ｍＭコハク酸、１ｍＭＥＤＴＡ、５ｍＭ
メチオニン、０．１％ポリソルベート８０を含有した。）

【０１２６】

【表１２】（実施例３：ＩＬ−２の脱アミド化に対する種々の因子の効果）ＩＬ−２の脱アミド化は、以前に報告されている（Ｋｕｎｉｔａｎｉら（１９
８６）Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ３５９：３９１−４０２）。Ａｓｐ ⁸⁸ は、ＩＬ−２における脱アミド化のための主要な部位であることが発見された
（Ｓａｓａｏｋｉら（１９９２）Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．４０（４）
：９７６−９８０）。脱アミド化された種は、ＲＰ−ＨＰＬＣによって、主要な
種（ピークＢ）に対するバックショルダーピーク（ピークＢ’）として検出され
得る。ＩＬ−２脱アミド化を、アルギニン、ＮａＣｌおよびソルビトールを含有
する処方物において研究した。表１３は、高温で２週間のインキュベーションの
後、脱アミド化された種が、ソルビトールを含有する処方物およびＮａＣｌを含
有する処方物においてのみ検出され得るが、アルギニンを含有する処方物におい
ては検出され得ないことを示す。従って、アルギニンは、脱アミド化を介する分
解に対してＩＬ−２を安定化させる。

【０１２７】（表１３：ｐＨ６において、０．２ｍｇ／ｍｌＩＬ−２、１０ｍＭコハク
酸ナトリウム、および１５０ｍＭアルギニン、１５０ｍＭＮａＣｌ、または
２７０ｍＭソルビトールを含有する処方物における、ＲＰ−ＨＰＬＣによって
検出されたピークＢ’の種の脱アミド化）

【０１２８】

【表１３】（実施例４：ＩＬ−２安定性に対する凍結融解の効果）凍結により誘導されるタンパク質の損傷は、通常、３つの機構によって生じる
：（１）タンパク質は、低温において立体配置的に不安定である（低温変性）；
（２）タンパク質は、氷−水界面での変性に対して感受性である；（３）タンパ
ク質は、凍結の際の塩濃度における変化またはｐＨシフトによって損傷される。

【０１２９】ＩＬ−２の場合においては、凍結融解の間のタンパク質損失は、おそらく氷−
水界面における変性および凝集より引き起こされる。なぜなら、非イオン性界面
活性剤ポリソルベート８０は、凍結融解損傷から効率的にＩＬ−２を保護したか
らである。図７に示されるように、可溶性ＩＬ−２の量は、ｐＨ６において、０
．２ｍｇ／ｍｌＩＬ−２、１０ｍＭコハク酸ナトリウム、および１５０ｍＭ
アルギニンを含有する処方物における凍結融解の各サイクルにおいて減少する
。処方物へのポリソルベート８０の添加は、複数の凍結融解に対するＩＬ−２の
安定性を増加させる。ポリソルベート８０の濃度が０．０５％以上に達するとき
、ＩＬ−２は、完全に凍結融解損傷から保護される。

【０１３０】（実施例５：ＩＬ−２の安定性に対する機械的剪断の効果）（５．１．ポリソルベート８０、ＥＤＴＡ、タンパク質濃度、および充填容積
の効果）剪断−応力により誘導される可溶性ＩＬ−２の損失を試験するための研究を行
った。２つの型の剪断応力を評価した：Ｏｒｂｉｔａｌｓｈａｋｅｒ（ＶＷＲ
Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号５７０１８−７５４）での振とうおよび
ボルテキサー（ｖｏｒｔｅｘｅｒ）（ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｇ
ｅｎｉｅ２モデル、スピードを４に設定）でのボルテックス。種々のＩＬ−２処
方物を、３ｃｃバイアル中に１ｍｌ充填した。これらのバイアルを、冷蔵庫中に
保存する（コントロールサンプル）か、ラボラトリーベンチ上に一晩置く（静置
サンプル）か、２００ＲＰＭで一晩振とうする（振とうサンプル）か、または１
分間ボルテックスした（ボルテックスサンプル）。表１４は、これらのサンプル
についての可溶性ＩＬ−２の量における変化の結果を示す。

【０１３１】冷蔵したコントロールサンプルと比較して、静置サンプルおよび振とうサンプ
ルの両方は、ＩＬ−２の損失を示さない。従って、ＩＬ−２は、周囲温度におい
て安定であり、そして振とう処理に対して安定である。一方、これらの処方物を
１分間のボルテックスに供した場合、種々の量の損失が検出された。０．１〜０
．５ｍｇ／ｍｌＩＬ−２または１ｍＭＥＤＴＡおよび５ｍＭＥＤＴＡまた
は低濃度のポリソルベート８０（０．００５〜０．０５％）を含有する処方物は
すべて、可溶性ＩＬ−２の２５〜５０％の損失を示す。従って、１分間のボルテ
ックスは、一晩の振とうよりもＩＬ−２分子に対して有害である。ＩＬ−２の損
失は、処方物中のポリソルベート８０の濃度を０．１％に等しい濃度およびそれ
より高い濃度まで増加させることによって防止され得る。さらに、ヘッドスペー
スに空気が残っていない完全に満たされたバイアルもまた、１分間のボルテック
スの際に可溶性ＩＬ−２の最小の損失を示し、このことは、気−液界面が損傷を
引き起こす主な因子であったことを示す。

【０１３２】（表１４：４℃で保存したサンプルと比較した場合の、周囲温度で一晩保存し
たサンプル（静置）、２００ＲＰＭで一晩振とうしたサンプル（振とう）および
１分間ボルテックスしたサンプル（ボルテックス）についての可溶性ＩＬ−２の
量における変化。コントロール処方物は、ｐＨ６において、０．２ｍｇ／ｍｌ
ＩＬ−２、１０ｍＭコハク酸ナトリウム、および１５０ｍＭアルギニンを含
有した。この処方物を、完全に充填したサンプル（これは、ヘッドスペースに空
気を残さずに、３ｃｃバイアルの頂部まで完全にコントロールサンプルを充填し
た）以外は、３ｃｃガラスバイアル中に１ｍｌ充填した。可溶性ＩＬ−２を、Ｒ
Ｐ−ＨＰＬＣによって定量した。

【０１３３】

【表１４】（５．２アルギニンの効果）ボルテックス損傷に対するＩＬ−２の安定性に対するアルギニンの効果を、表
１５に報告する。アルギニン濃度を１５０ｍＭから２３０ｍＭまで増加させるこ
とにより、１分間のボルテックスに供した後、可溶性ＩＬ−２の量における６５
％から６９％までの３％の増加を生じる。従って、アルギニンは、剪断損傷に対
してＩＬ−２に対する小さな効果を有するが、アルギニンは、以前に、凝集の形
成に起因する変性に対してＩＬ−２に対する大きな安定化効果を示した。

【０１３４】２３０ｍＭアルギニン処方物におけるポリソルベート８０の効果を試験した
。低濃度のポリソルベート８０（０．０２％）の添加は、ＩＬ−２を不安定化し
、そして高濃度のポリソルベート８０（０．１％）の添加は、ＩＬ−２をボルテ
ックスの損傷に対して安定化する。

【０１３５】（表１５：ＲＰ−ＨＰＬＣによって分析した場合の、１分間のボルテックスの
際の種々の処方物中の可溶性ＩＬ−２の残留パーセント）

【０１３６】

【表１５】（５．３．輸送研究）製品の輸送の間のＩＬ−２に対する剪断損傷を、実際の輸送研究において調査
した。ＩＬ−２を、アルギニン処方物およびＮａＣｌ処方物（いずれも、異なる
量のポリソルベート８０を含む）中で調製した。これらのＩＬ−２サンプルを、
航空機によってＥｍｅｒｙｖｉｌｌｅ（Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）からＳｔ．Ｌｏ
ｕｉｓ（Ｍｉｓｓｏｕｒｉ）まで氷上で輸送し、そしてＳｔ．ＬｏｕｉｓからＥ
ｍｅｒｙｖｉｌｌｅまで戻った。図８は、これらのサンプル中の可溶性ＩＬ−２
の量のＲＰ−ＨＰＬＣ分析を示す。処方物中にポリソルベート８０が存在しない
と、ＩＬ−２の約１０％の損失が、アルギニン処方サンプルおよびＮａＣｌ処方
サンプルの両方において観察される。アルギニン処方物とＮａＣｌ処方物との間
の安定性の差異は無視し得る（約１％）。処方物中にポリソルベート８０が存在
するとＩＬ−２の損失は減少する。０．１％ポリソルベート８０においては損
失は観察されず、このことは、ＩＬ−２がこの界面活性剤濃度において完全に保
護されたことを示す。従って、０．１％ポリソルベート８０は、輸送の間のＩＬ
−２の急激な剪断損傷を防ぐために、処方物において有効である。

【０１３７】結論として、アルギニンは、長期間の保存の間のＩＬ−２凝集および脱アミド
化を減少させるために、液体ＩＬ−２薬学的処方物における初期安定化剤として
役立ち得る。処方物中のアルギニン濃度をさらに増加させ、従ってより高いＩＬ
−２安定性を達成するが、溶液の等張性をなお維持するために、好ましくは、コ
ハク酸を、アルギニン塩基をｐＨ５．８まで滴定するように使用する。さらに、
タンパク質のメチオニン酸化を防ぐために、メチオニンおよびＥＤＴＡを処方物
中に含有し得る。最後に、ＩＬ−２が凍結融解および機械的剪断により損傷する
ことを防ぐために、非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソルベート８０）を処
方物中に含有し得る。

【０１３８】（実施例６：保存剤効力試験）抗菌保存剤を含有するいくつかの処方物を、ＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓＰ
ｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ（ＵＳＰ）保存剤効力試験に供した。結果を表１６に
示す。保存剤を含まないコントロールサンプルは、試験に不合格であったが、保
存剤を含有する処方物はすべて試験に合格した。

【０１３９】（表１６：ｒｈＩＬ−２処方物についてのＵＳＰ保存剤効力試験。コントロー
ル処方物は、５．８のｐＨにおいて、０．１ｍｇ／ｍｌｒｈＩＬ−２、２３０
ｍＭＬ−アルギニン塩基、１２８ｍＭコハク酸、１ｍＭＥＤＴＡ、５ｍＭ
メチオニン、０．１％ポリソルベート８０を含有した。）

【０１４０】

【表１６】（実施例７：疼痛産生性質）フロリダ大学、歯科大学、神経科学のＯＭＳＤＳ部門において開発されたラッ
トモデル使用して、疼痛産生性質、より具体的には、処方物によって産生された
激しい疼痛および辛辣な疼痛を評価する。このモデルは、疼痛メッセージを運ぶ
感覚細胞で誘導された電流のアッセイに基づく。このアッセイを行なうために、
感覚細胞（ラット後根神経節）が、記録チャンバーにおいて単離される。記録は
侵害性（疼痛誘導）基準に基づいて、あらかじめ選択された個々の細胞から作製
される。激しい疼痛、辛辣な疼痛、および規準化された疼痛スコアが、試験され
た処方物について計算される。激しい疼痛スコアは、カプサイシン（５００ｎＭ
）と比較した試験処方物に対する応答によって定義する。カプサイシンは、ヒト
における激烈な激しい疼痛を産生するその能力が周知である（Ｃｏｏｐｅｒら（
１９８６）Ｐａｉｎ２４：９３−１１６）。辛辣な疼痛スコアは、ｐＨ５．
０に緩衝化された溶液によって産生されたスコアに対する試験処方物によって産
生された電流の割合として計算される。基準化された疼痛スコアは、通常の生理
食塩水（０．９％ＮａＣｌ、非緩衝化）（辛辣な感覚を産生することが公知の
一般的な病院の薬局の非経口的な処方物）と比較した処方物を評価する。

【０１４１】液体Ｌ−アルギニン塩基のコハク酸処方物は、このモデルを介して疼痛分析に
供される。これらの２つの試験溶液の結果を表１７に示す。激しい疼痛、辛辣な
疼痛、および規準化された疼痛スコアについて計算されたスコアに基づいて、Ｌ
−アルギニン−コハク酸処方物は、通常の生理食塩水と比較して優れた性質を示
した。通常の生理食塩水を使用して減少しなかったが、処方物の適用の間に試験
電流が減少することが観察された（時間依存性減少）。このことは、この処方物
が、このアッセイによって評価されるように、生理食塩水より優れて耐性である
ことを実証する。

【０１４２】（表１７：液体処方物および０．９％塩化ナトリウムについての激しい疼痛、
辛辣な疼痛、および基準化された疼痛スコア）液体処方物は、５．８のｐＨで、
２３０ｍＭＬ−アルギニン塩基で、１２８ｍＭコハク酸、１ｍＭＥＤＴＡ、５ｍ
Ｍメチオニン、０．１％ポリソルベート８０を含んだ。

【０１４３】

【表１７】（実施例８：ＴＦＰＩに関する安定性研究）種々の処方物におけるＴＦＰＩの安定性および可溶性研究は、Ｌ−アルギニン
がＴＦＰＩに対する安定剤（データは示されていない）であり、そしてクエン酸
イオンのように荷電した緩衝液種類が、より著名な可溶効果を有することを実証
する。この研究において、種々の処方物におけるＴＦＰＩ安定性に対するＬ−ア
ルギニン濃度および緩衝化システムの影響を調べた。特に、酸およびその塩形態
の混合物に対する、その塩形態を実質的に含まない酸の形態における緩衝化シス
テムの影響を、前出の実施例におけるＩＬ−２処方物について以前に記載される
ように試験した。

【０１４４】（材料および方法）ＴＦＰＩ溶液を、ｐＨ５．５で、２０ｍＭクエン酸ナトリウムおよび３００ｍ
ＭＬ−アルギニン中で０．６ｍｇ／ｍｌに処方した。この溶液を、クエン酸ま
たはコハク酸緩衝化システムのいずれかによってｐＨ６．５に緩衝化された種々
のアルギニン処方物に対するＳｐｅｃｔｒａｌＰｏｒ＃７膜（ＭＷＣＯ３，５
００，ＩＤ＃１３２−１１０）を使用して、４℃での透析を介して緩衝液交換し
た。透析後、各溶液のＴＦＰＩ濃度をＵＶ／Ｖｉｓ分光法を使用して測定した。
次いで、各溶液を適切な緩衝液を使用して、０．１５ｍｇ／ｍｌに希釈した。次
いで、調製された溶液を、安定性貯蔵のために３ｃｃバイアルにアリコート（各
１ｍｌ）した。バイアルは、Ｔ＝０の時点で取っておいた。残りのバイアルを、
促進された安定性研究のために５０℃のインキュベーターで配置した。次いで、
３、７、１４、および３０日の時点で採取した。各時点での分析について、各バ
イアルの含有量を１．７ｍｌの微小遠心分離チューブに移し、次いで、約２分間
１０Ｋｒｐｍで遠心分離した。ＩＥＸ−ＨＰＬＣ（記載が必要）を使用する分析
のために、サンプルの遠心分離された上清を、このチューブから取り出し、ＩＥ
Ｘ−ＨＰＬＣは、安定性指示アッセイであることが以前の研究から公知である。

【０１４５】（結果および考察）ＴＦＰＩをＬ−アルギニン塩基またはＬ−アルギニンＨＣｌのいずれかを含む
種々の処方物における０．１５ｍｇ／ｍｌの最終濃度に処方した。Ｌ−アルギニ
ンＨＣｌ処方物を、そのそれぞれの結合体ナトリウム塩と組み合わせて、１０ｍ
Ｍクエン酸またはコハク酸によって、ｐＨ５．５に緩衝化した。Ｌ−アルギニン
塩基処方物をクエン酸またはコハク酸のいずれかによって、ｐＨ５．５に滴定し
た。全８回の研究を以下に列挙されるように実行した：１）１０ｍＭクエン酸およびクエン酸ナトリウムによって、２０〜１５０ｍＭ
Ｌ−アルギニンＨＣｌをｐＨ５．５に緩衝化した；２）クエン酸によって、２０〜１５０ｍＭＬ−アルギニン塩基をｐＨ５．５
に滴定した；３）１０ｍＭクエン酸およびクエン酸ナトリウムによって、１００〜３００ｍ
ＭＬ−アルギニンＨＣｌをｐＨ５．５に緩衝化した；４）クエン酸によって、１００〜３００ｍＭＬ−アルギニン塩基をｐＨ５．
５に滴定した；５）１０ｍＭコハク酸およびコハク酸ナトリウムによって、２０〜１５０ｍＭ
Ｌ−アルギニンＨＣｌをｐＨ５．５に緩衝化した；６）コハク酸によって、２０〜１５０ｍＭＬ−アルギニン塩基をｐＨ５．５
に滴定した；７）１０ｍＭコハク酸およびコハク酸ナトリウムによって、１００〜３００ｍ
ＭＬ−アルギニンＨＣｌをｐＨ５．５に緩衝化した；８）コハク酸によって、１００〜３００ｍＭＬ−アルギニン塩基をｐＨ５．
５に滴定した；ＴＦＰＩについての主要な分解経路は、タンパク質凝集／沈殿であると以前に
決定されている（Ｃｈｅｎら（１９９９）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．８８：８８
１−８８８）。ＴＦＰＩ分解後、安定性サンプルにおける残りの可溶性タンパク
質のモニタリングが続く。異なったＬ−アルギニン濃度で、処方されたＴＦＰＩ
溶液を、促進安定性研究のために、５０℃で貯蔵した。サンプルを、予定の時間
間隔で採取した。サンプル中の可溶性タンパク質を、微小遠心分離チューブにお
ける遠心分離を介して凝集／沈殿したタンパク質から分離する。可溶性タンパク
質の量をＩＥＸ−ＨＰＬＣ方法によって決定した（Ｃｈｅｎら（１９９９）Ｊ．
Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．８８：８８１−８８８）。次いで、データをＫａｌｅｉｄ
ａＧｒａｐｈグラフィックソフトウェアを使用して残りの可溶性タンパク質の半
減期を計算するために、単一指数関数速度方程式（Ｙ＝ＹｏＥＸＰ（−ｋｌｔ）
）によって貯蔵時間の関数として適合させた（ＳｙｎｅｒｇｙＳｆｔｗａｒｅ
，ＲｅａｄｉｎｇＰｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）。

【０１４６】シトレートまたはクエン酸ナトリウム添加によって緩衝化した処方物に関する
残存する可溶性ＴＦＰＩの半減期（ｔ_1/2）値を、表１８に示す。コハク酸また
はコハク酸ナトリウムによって緩衝化された処方物に関するこれらは、表１９に
示す。これらのデータは、半減期値がこれらの処方物中の漸増するＬ−アルギニ
ン濃度とともに増加することを示す。これらのデータはまた、シトレート緩衝化
系およびスクシネート緩衝化系のそれぞれに関して、図９および図１０にプロッ
トされる。半減期値を放射線状曲線としてプロットし、そしてアルギニン濃度の
関数として増加させる。これは、Ｌ−アルギニンがＴＦＰＩのための安定剤であ
ることを確立する。

【０１４７】２つの緩衝化系の間で、ＴＦＰＩ安定性における差異は、無視できるようであ
る。シトレート緩衝化系はより変動性を示したが（図９）、スクシネート緩衝化
系に関する２つの半減期対アルギニン濃度の曲線は、本質的に重ね合わせ可
能であった（図１０）。ＴＦＰＩは、これらの緩衝化系がｐＨ調整のために使用
されたにかかわらず、類似のＬ−アルギニン濃度で類似の安定性を達成した。図
１１はまた、コハク酸緩衝化系とクエン酸系との間の半減期対アルギニン濃
度曲線を比較する。この図は、アルギニン濃度が処方物中で同じままである限り
、ＴＦＰＩ安定性に主要な差異は存在しないことを示す。これらのデータは、安
定化効果が主にアルギニンから寄与されたことを示す。

【０１４８】しかし、コハク酸またはクエン酸のいずれかを用いた酸滴定は、等張性を維持
しながら処方物中のより大きなアルギニン濃度を可能にする（これより増加した
安定性を可能にする）。従って、例えば、表１８中の処方物３−３および３−４
の両方は、処方物中３００ｍＭＬ−アルギニンを有し、そしてこれらの半減期
値は類似している。しかし、３−３処方物は、１０ｍＭクエン酸およびクエン
酸ナトリウムを使用して３００ｍＭＬ−アルギニンＨＣｌをｐＨ５．５に緩
衝化し、そして４９７ｍＯｓｍ／ｋｇの溶液容量オスモル濃度を有した。これは
高張性処方物であり、注射可能な処方物としては好ましくない。一方、４−３処
方物は、３００ｍＭＬ−アルギニン塩基と組み合わせて１２１ｍＭクエン酸
を使用してｐＨを５．５に調整し、そして２９５ｍＯｓｍ／ｋｇの溶液容量オス
モル濃度を有した。この処方物は、等張性溶液（２９０ｍｍｏｌ／ｋｇ）に非常
に近く、従ってより好ましい注射可能な処方物である。ｐＨ調整のための簡便な
方法が使用された（例えば、１０ｍＭクエン酸およびクエン酸ナトリウムを用
いる）場合、等張性を超えることなく、処方物にわずかに１５０ｍＭより大きい
Ｌ−アルギニンを単に添加し得る。３００ｍＭＬ−アルギニン処方物（コード
４−３）に対して２３日間を有するのに比較して、１５０ｍＭＬ−アルギニン
処方物（コード１−６）の半減期は１６日間である。従って、ＴＦＰＩを、安定
剤としての酸塩基（すなわち、アルギニン塩基）およびその塩形態を実質的に有
さない酸を含む緩衝液（すなわち、コハク酸）と処方することは、ＴＦＰＩに対
する安定化効果を最大化するためにより多くの安定剤（すなわち、アルギニン）
を添加するための、効果的な手段を提供する。

【０１４９】（結論）本実施例は、Ｌ−アルギニンがＴＦＰＩを、その保存の貯蔵寿命を拡大するこ
とによって安定化することを実証する。酸滴定を使用することによって、より多
くのアルギニンを処方物に添加して、等張性を超えることなく安定化効果を最大
化し得、これは、注射可能な処方物に対して好ましい。

【０１５０】（表１８：ＴＦＰＩアルギニン−シトレート（ｐＨ５．５）処方物に関する安
定性データ）この半減期（ｔ_1/2）は、単一指数運動方程式を用いて５０℃の安
定性データを適合させることによって得た。

【０１５１】

【表１８】（表１９：ＴＦＰＩアルギニン−スクシネート（ｐＨ５．５）処方物に関する
安定性データ）この半減期（ｔ_1/2）は、単一指数運動方程式を用いて５０℃の
安定性データを適合させることによって得た。

【０１５２】

【表１９】本明細書中に言及される全ての刊行物および特許出願は、本発明が属する当業
者のレベルの指標である。全ての刊行物および特許出願は、各個々の刊行物また
は特許出願が詳細にそして個々に参考として援用されることが示されるかのよう
に、同じ程度で本明細書中に参考として援用される。

【０１５３】上記の本発明は、理解の明確化の目的で実例および実施例によっていくらか詳
細に記載してきたが、特定の変化および改変が添付の特許請求の範囲の範囲内で
実行され得ることは、明らかである。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、４０℃で保存した安定性サンプルにおけるＲＰ−ＨＰＬＣにより分析
した可溶性ＩＬ−２の残存％を示す。処方物は、０．２ｍｇ／ｍｌＩＬ−２、
１０ｍＭクエン酸ナトリウム（ｐＨ６）、および２７０ｍＭのソルビトールま
たはスクロースまたはマンニトールを含んでいた。

【図２】図２は、５０℃で保存した安定性サンプルにおけるＲＰ−ＨＰＬＣにより分析
した可溶性ＩＬ−２の残存％を示す。処方物は、０．１ｍｇ／ｍｌＩＬ−２、
１０ｍＭクエン酸ナトリウム（ｐＨ６）、および図に示されるように、１５０
ｍＭの種々のアミノ酸を含んでいた。

【図３】図３は、４０℃で保存した安定性サンプルにおけるＲＰ−ＨＰＬＣにより分析
した可溶性ＩＬ−２の残存％を示す。処方物は、０．２ｍｇ／ｍｌＩＬ−２、
１０ｍＭコハク酸ナトリウム（ｐＨ６）、および５０ｍＭ、１００ｍＭ、また
は２７０ｍＭのソルビトールを含んでいた。

【図４】図４は、５０℃で保存した安定性サンプルにおけるＲＰ−ＨＰＬＣにより分析
した可溶性ＩＬ−２の残存％を示す。処方物は、０．２ｍｇ／ｍｌＩＬ−２、
１０ｍＭコハク酸ナトリウム（ｐＨ６）、および５０ｍＭ、１００ｍＭ、また
は１５０ｍＭのアルギニンを含んでいた。

【図５】図５は、５０℃でのｐＨの関数として、ＲＰ−ＨＰＬＣにより分析した残存可
溶性ＩＬ−２の半減期（ｔ_1/2、日数）を示す。処方物は、０．２ｍｇ／ｍｌ
ＩＬ−２、１０ｍＭ緩衝液（グリシン、酢酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム
、コハク酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム）、および１５０
ｍＭＮａＣｌ、２７０ｍＭソルビトールまたは１５０ｍＭアルギニンを含
んでいた。

【図６】図６は、５０℃で保存した安定性サンプルに関する半減期（ｔ_1/2）対初
期タンパク質濃度のＬｎ−Ｌｎプロットを示す。処方物は、１０ｍＭコハク酸
ナトリウム（ｐＨ６）および１５０ｍＭアルギニン中に、０．１ｍｇ／ｍｌ、
０．２ｍｇ／ｍｌ、または０．５ｍｇ／ｍｌのＩＬ−２を含んでいた。

【図７】図７は、−７０℃から周囲温度までの凍結融解を１サイクル、３サイクル、お
よび５サイクルで処理したサンプルにおけるＲＰ−ＨＰＬＣにより分析した可溶
性ＩＬ−２の残存％を示す。処方物は、０．２ｍｇ／ｍｌＩＬ−２、１０ｍＭ
コハク酸ナトリウム（ｐＨ６）、１５０ｍＭアルギニン、および０〜０．１
％ポリソルベート８０を含んでいた。

【図８】図８は、氷上でＥｍｅｒｙｖｉｌｌｅ（Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）からＳｔ．Ｌ
ｏｕｉｓ（Ｍｉｓｓｏｕｒｉ）まで、およびＳｔ．ＬｏｕｉｓからＥｍｅｒｙｖ
ｉｌｌｅに戻す輸送で処理したサンプルにおけるＲＰ−ＨＰＬＣにより分析した
可溶性ＩＬ−２の残存％を示す。種々の量のポリソルベート８０を含む２つの処
方物を用いた：アルギニン処方物（１０ｍＭコハク酸ナトリウム（ｐＨ６）お
よび１５０ｍＭアルギニン中に０．２ｍｇ／ｍｌＩＬ−２を含む）；および
ＮａＣｌ処方物（１０ｍＭクエン酸ナトリウム（ｐＨ６．５）および２００ｍ
ＭＮａＣｌ中に０．２ｍｇ／ｍｌＩＬ−２を含む）。

【図９】図９は、５０℃でのアルギニン濃度の関数として、ＩＥＸ−ＨＰＬＣにより分
析した４つの処方物における残存可溶性ＴＦＰＩの半減期（ｔ_1/2、日数）を示
す。全ての処方物は、０．１５ｍｇ／ｍｌＴＦＰＩ、およびＬ−アルギニン塩
基またはＬ−アルギニンＨＣ１のいずれか（クエン酸、または１０ｍＭクエン
酸およびクエン酸ナトリウムのいずれかでｐＨ５．５に緩衝化されている）を含
んでいた。特定のＴＦＰＩ処方物は、以下を含んでいた：（ａ）緩衝液として２
０〜１５０ｍＭＬ−アルギニンＨＣｌ、１０ｍＭクエン酸およびクエン酸ナ
トリウム；（ｂ）２０〜１５０ｍＭＬ−アルギニン塩基（クエン酸で滴定した
）；（ｃ）緩衝液として１００〜３００ｍＭＬ−アルギニンＨＣｌ，１０ｍＭ
クエン酸およびクエン酸ナトリウム；（ｄ）１００〜３００ｍＭＬ−アルギ
ニン塩基（クエン酸で滴定した）。

【図１０】図１０は、５０℃でのアルギニン濃度の関数として、ＩＥＸ−ＨＰＬＣにより
分析した４つの処方物における残存可溶性ＴＦＰＩの半減期（ｔ_1/2、日数）を
示す。全ての処方物は、０．１５ｍｇ／ｍｌＴＦＰＩ、およびＬ−アルギニン
塩基またはＬ−アルギニンＨＣｌのいずれか（コハク酸、または１０ｍＭコハ
ク酸およびコハク酸ナトリウムのいずれかでｐＨ５．５に緩衝化されている）を
含んでいた。特定のＴＦＰＩ処方物は、以下を含んでいた：（ａ）緩衝液として
２０〜１５０ｍＭＬ−アルギニンＨＣｌ、１０ｍＭコハク酸およびコハク酸
ナトリウム；（ｂ）２０〜１５０ｍＭＬ−アルギニン塩基（コハク酸で滴定し
た）；（ｃ）緩衝液として１００〜３００ｍＭＬ−アルギニンＨＣｌ、１０ｍ
Ｍコハク酸およびコハク酸ナトリウム；（ｄ）１００〜３００ｍＭＬ−アル
ギニン塩基（コハク酸で滴定した）。

【図１１】図１１は、５０℃でのアルギニン濃度の関数として、ＩＥＸ−ＨＰＬＣにより
分析した４つの処方物における残存可溶性ＴＦＰＩの半減期（ｔ_1/2、日数）を
示す。全ての処方物は、０．１５ｍｇ／ｍｌＴＦＰＩ、およびＬ−アルギニン
塩基（コハク酸またはクエン酸のいずれかでｐＨ５．５に滴定した）を含んでい
た。特定のＴＦＰＩ処方物は、以下を含んでいた：（ａ）２０〜１５０ｍＭＬ
−アルギニン塩基（クエン酸で滴定した）；（ｂ）２０〜１５０ｍＭＬ−アル
ギニン塩基（コハク酸で滴定した）；（ｃ）１００〜３００ｍＭＬ−アルギニ
ン塩基（クエン酸で滴定した）；（ｄ）１００〜３００ｍＭＬ−アルギニン塩
基（コハク酸で滴定した）。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 47/04 Ａ６１Ｋ 47/18 47/12 Ａ６１Ｐ 35/00 47/18 43/00 １１１Ａ６１Ｐ 35/00 Ｃ０７Ｋ 1/02 43/00 １１１Ａ６１Ｋ 37/02 Ｃ０７Ｋ 1/02 37/66 Ｈ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者ホーラ，マニンダーアメリカ合衆国カリフォルニア 94622 −8097，エメリービル，ピー．オー．ボックス 8097，インテレクチュアルプロパティ−アール440 Ｆターム(参考） 4C076 AA11 AA31 CC27 CC29 DD26Z DD43Z DD51Z GG06 4C084 AA01 AA03 AA17 DA14 DA23 NA14 ZB262 ZC022 4H045 AA20 AA30 DA04 DA17 EA20 GA45

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】安定化された液体の薬学的組成物であって、以下：治療上活性な成分としてのポリペプチドまたはその改変体であって、該ポリペ
プチドまたはその改変体は、液体処方物中での貯蔵の間に凝集体形成を示す、ポ
リペプチドまたはその改変体；該組成物の貯蔵の間の該ポリペプチドまたはその改変体の凝集体形成を減少す
るために十分な量のアミノ酸塩基であって、該アミノ酸塩基は、アルギニン、リ
ジン、アスパラギン酸、およびグルタミン酸からなる群より選択される少なくと
も１つのアミノ酸を含む、アミノ酸塩基；ならびに緩衝剤であって、該緩衝剤は、その塩形態を実質的に含まない酸、その塩形態
にある酸、ならびに酸およびその塩形態の混合物からなる群より選択される、緩
衝剤を含む、組成物。
【請求項２】前記ポリペプチドが、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、
組織因子経路インヒビター（ＴＦＰＩ）、およびβ−インターフェロン（ＩＦＮ
−β）からなる群より選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】約２４０ｍｍｏｌ／ｋｇ〜約３６０ｍｍｏｌ／ｋｇの容量オ
スモル濃度を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】約ｐＨ４．０〜約ｐＨ９．０の範囲内のｐＨを有する、請求
項１に記載の組成物。
【請求項５】前記酸が、酢酸、コハク酸、クエン酸、リン酸、およびグル
タミン酸からなる群より選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】前記酸がコハク酸である、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】請求項６に記載の組成物であって、前記アミノ酸塩基が、約
１００ｍＭ〜約４００ｍＭの濃度で存在する遊離塩基形態のアルギニンであり、
前記コハク酸が、約８０ｍＭ〜約１９０ｍＭの濃度範囲内で該組成物中に存在す
る、組成物。
【請求項８】前記ポリペプチドが、インターロイキン−２（ＩＬ−２）ま
たはその改変体であり、前記遊離塩基形態にあるアルギニンが、約１５０ｍＭ〜
約３５０ｍＭの濃度で存在する、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】前記遊離塩基形態にあるアルギニンが、約２３０ｍＭの濃度
で存在し、前記コハク酸が、約１２８ｍＭの濃度で存在する、請求項８に記載の
組成物。
【請求項１０】前記ＩＬ−２が、組換えヒトＩＬ−２（ｒｈＩＬ−２）ま
たはその改変体である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】約５．０〜約６．５のｐＨおよび約２５０ｍｍｏｌ／ｋｇ
〜約３３０ｍｍｏｌ／ｋｇの容量オスモル濃度を有する、請求項９に記載の組成
物。
【請求項１２】前記ポリペプチドが、組織因子経路インヒビター（ＴＦＰ
Ｉ）またはその改変体であり、前記遊離塩基形態にあるアルギニンが、約１７５
ｍＭ〜約３２５ｍＭの濃度で存在する、請求項７に記載の組成物。
【請求項１３】前記遊離塩基形態にあるアルギニンが、約２００ｍＭ〜約
３００ｍＭの濃度で存在し、前記コハク酸が、約１２０ｍＭ〜約１８０ｍＭの濃
度で存在する、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】前記ＴＦＰＩが、組換えヒトＴＦＰＩまたはその改変体で
ある、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】約５．０〜約６．５のｐＨおよび約２４０ｍｍｏｌ／ｋｇ
〜約３６０ｍｍｏｌ／ｋｇの容量オスモル濃度を有する、請求項１３に記載の組
成物。
【請求項１６】前記酸がクエン酸である、請求項５に記載の組成物。
【請求項１７】請求項１６に記載の組成物であって、前記アミノ酸塩基が
、約１７５ｍＭ〜約４００ｍＭの濃度で存在する遊離塩基形態のアルギニンであ
り、前記クエン酸が、約４０ｍＭ〜約２００ｍＭの濃度範囲内で該組成物中に存
在する、組成物。
【請求項１８】前記ポリペプチドがＴＦＰＩまたはその改変体である、請
求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】前記ＴＦＰＩが組換えヒトＴＦＰＩ（ｒｈＴＦＰＩ）であ
る、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】前記遊離塩基形態にあるアルギニンが、約２５０ｍＭ〜約
３５０ｍＭの濃度で存在し、前記クエン酸が、約１００ｍＭ〜約１５０ｍＭの濃
度で存在する、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２１】約５．０〜約６．５のｐＨおよび約２４０ｍｍｏｌ／ｋｇ
〜約３６０ｍｍｏｌ／ｋｇの容量オスモル濃度を有する、請求項２０に記載の組
成物。
【請求項２２】前記ポリペプチドまたはその改変体が、液体処方物中での
貯蔵の間に酸化される、少なくとも１つのメチオニン残基を含む、請求項１に記
載の組成物。
【請求項２３】請求項２２に記載の組成物であって、該組成物の貯蔵の間
の前記ポリペプチド中の前記少なくとも１つのメチオニン残基の酸化を防止する
ために十分な量のメチオニンをさらに含む、組成物。
【請求項２４】請求項１に記載の組成物であって、該組成物の貯蔵の間の
凍結融解または機械的剪断に応答する、前記ポリペプチドまたはその改変体の凝
集を防止するために十分な量の非イオン性界面活性剤をさらに含む、組成物。
【請求項２５】前記非イオン性界面活性剤がポリソルベート８０である、
請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】安定化された液体の薬学的組成物であって、該組成物は、
インターロイキン−２（ＩＬ−２）またはその改変体、遊離塩基形態にあるアル
ギニン、およびその塩形態を実質的に含まないコハク酸を含み、該遊離塩基形態
にあるアルギニンは、約１５０ｍＭ〜約３５０ｍＭの濃度で該組成物中に存在し
、該コハク酸は、約８０ｍＭ〜約１９０ｍＭの濃度で該組成物中に存在する、組
成物。
【請求項２７】請求項２６に記載の組成物であって、前記遊離塩基形態に
あるアルギニンが、約２３０ｍＭの濃度で該組成物中に存在し、前記コハク酸が
約１２８ｍＭの濃度で存在し、ここで、該組成物は、約５．０〜約６．５のｐＨ
および約２５０ｍｍｏｌ／ｋｇ〜約３３０ｍｍｏｌ／ｋｇの容量オスモル濃度を
有する、組成物。
【請求項２８】安定化された液体の薬学的組成物であって、該組成物は、
組織因子経路インヒビター（ＴＦＰＩ）またはその改変体、遊離塩基形態にある
アルギニン、およびその塩形態を実質的に含まないコハク酸を含み、該遊離塩基
形態にあるアルギニンは、約１７５ｍＭ〜約３２５ｍＭの濃度で該組成物中に存
在し、該コハク酸は、約８０ｍＭ〜約１９０ｍＭの濃度で該組成物中に存在する
、組成物。
【請求項２９】請求項２８に記載の組成物であって、前記遊離塩基形態に
あるアルギニンが、約２００ｍＭ〜約３００ｍＭの濃度で該組成物中に存在し、
前記コハク酸が約１２０ｍＭ〜約１８０ｍＭの濃度で存在し、ここで、該組成物
は、約５．０〜約６．５のｐＨおよび約２４０ｍｍｏｌ／ｋｇ〜約３６０ｍｍｏ
ｌ／ｋｇの容量オスモル濃度を有する、組成物。
【請求項３０】安定化された液体の薬学的組成物であって、該組成物は、
組織因子経路インヒビター（ＴＦＰＩ）またはその改変体、遊離塩基形態にある
アルギニン、およびその塩形態を実質的に含まないクエン酸を含み、該遊離塩基
形態にあるアルギニンは、約１７５ｍＭ〜約４００ｍＭの濃度で該組成物中に存
在し、該クエン酸は、約４０ｍＭ〜約２００ｍＭの濃度で該組成物中に存在する
、組成物。
【請求項３１】請求項３０に記載の組成物であって、前記遊離塩基形態に
あるアルギニンが、約２５０ｍＭ〜約３５０ｍＭの濃度で該組成物中に存在し、
前記クエン酸が約１００ｍＭ〜約１５０ｍＭの濃度で存在し、ここで、該組成物
は、約５．０〜約６．５のｐＨおよび約２４０ｍｍｏｌ／ｋｇ〜約３６０ｍｍｏ
ｌ／ｋｇの容量オスモル濃度を有する、組成物。
【請求項３２】液体の薬学的組成物中のポリペプチドまたはその改変体の
安定性を増加するための方法であって、該ポリペプチドまたはその改変体は、液
体処方物中での貯蔵の間に凝集体形成を示し、該方法は、該ポリペプチドまたは
その改変体の該凝集体形成を減少するために十分な量のアミノ酸塩基、および緩
衝剤を該組成物に組み込む工程を包含し、該緩衝剤は、その塩形態を実質的に含
まない酸、その塩形態にある酸、ならびに酸およびその塩形態の混合物からなる
群より選択され、該アミノ酸塩基は、アルギニン、リジン、アスパラギン酸、お
よびグルタミン酸からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸を含む、
方法。
【請求項３３】前記組成物が、約２４０ｍｍｏｌ／ｋｇ〜約３６０ｍｍｏ
ｌ／ｋｇの容量オスモル濃度を有する、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】前記組成物が、約ｐＨ４．０〜約ｐＨ９．０の範囲内のｐ
Ｈを有する、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】前記酸が、酢酸、コハク酸、クエン酸、リン酸、およびグ
ルタミン酸からなる群より選択される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３６】前記酸がコハク酸である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】ポリペプチドまたはその改変体を含む薬学的組成物の貯蔵
安定性を増加するための方法であって、該ポリペプチドまたはその改変体は、液
体処方物中での貯蔵の間、凝集体形成を示し、該方法は、該ポリペプチドまたは
その改変体の該凝集体形成を減少するために十分な量のアミノ酸塩基、および緩
衝剤を該組成物に組み込む工程を包含し、該緩衝剤は、その塩形態を実質的に含
まない酸、その塩形態にある酸、ならびに酸およびその塩形態の混合物からなる
群より選択され、該アミノ酸塩基は、アルギニン、リジン、アスパラギン酸、お
よびグルタミン酸からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸を含む、
方法。
【請求項３８】前記酸がコハク酸である、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】凍結乾燥形態およびスプレー乾燥形態からなる群より選択
される、請求項１に記載の組成物の乾燥形態。
【請求項４０】インターロイキン−２（ＩＬ−２）、組織因子経路インヒ
ビター（ＴＦＰＩ）、またはβ−インターフェロン（ＩＦＮ−β）での治療に応
答性の疾患の診断、予防、または処置のための処方物であって、該処方物は、請
求項１に記載の薬学的組成物を含み、ここで、前記ポリペプチドは、ＩＬ−２、
ＴＦＰＩ、およびＩＦＮ−βからなる群より選択される、処方物。