JP2002538183A - α−ガラクトシダーゼＡ欠乏症の治療 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、高度に精製されたα−Ｇａｌ Ａ、およびそれを精製する様々な方法；変更された電荷を有するα−Ｇａｌ Ａ調製品およびその調製品の製造方法；ほ乳類宿主中で延長された循環半減期を有するα−Ｇａｌ Ａ調製品、およびその製造方法；α−Ｇａｌ Ａ調製品を被験者に投与する方法および投与量を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 発明の分野 本発明は、α−ガラクトシダーゼＡ欠乏症を治療する方法および組成物に関す
る。

【０００２】 発明の背景 ファブリー病は、心室膨大および僧帽弁不全を含む、酷い腎臓障害、角化血管
腫、および心臓血管異常により特徴付けられるＸ染色体連鎖遺伝リソソーム貯蔵
症である。ファブリー病はまた、末梢神経系に影響を与え、末端において燃える
ような苦痛の症状を発現させる。ファブリー病は、酵素であるα−ガラクトシダ
ーゼＡ（α−Ｇａｌ Ａ）の欠乏により生じる。α−Ｇａｌ Ａは、様々な糖接
合体(glycoconjugate)の末端α−ガラクトシル部分を開裂するリソソームグリコ
ヒドロラーゼである。ファブリー病により、中性グリコスフィンゴリピドである
三ヘキソシドセラミド（ＣＴＨ）の異化が阻害されたり、この酵素基質が細胞内
および血流中に蓄積したりする。

【０００３】 この病気のＸ染色体連鎖遺伝パターンのために、ほとんどのファブリー病患者
は男性である。酷く冒された女性のヘテロ接合体も観察されるが、女性のヘテロ
接合体はしばしば無症候性であるかまたは比較的穏やかな症候（角膜の特徴的な
混濁のような）を有する。低残留α−Ｇａｌ Ａ活性を示し、かつ非常に穏やか
な症候を示すかまたはファブリー病に特徴的な他の症候を明らかにまったく示さ
ないファブリー病の異型変種は、左心室肥大および心臓病と関連する。Nakano e
t al., New Engl.J.Med. 333:288-293 (1995)。α−Ｇａｌ Ａの減少は、その
ような心臓異常の原因であろう。

【０００４】 ヒトα−Ｇａｌ Ａをコード化するｃＤＮＡおよび遺伝子が、単離され、塩基
配列決定された。ヒトα−Ｇａｌ Ａは、429のアミノ酸ポリペプチドとして発
現され、そのＮ末端の31のアミノ酸はシグナルペプチドである。そのヒト酵素は
、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Desnick et al., 米国特許第5,
356,804号；Ioannou et al., J.Cell Biol. 119:1137 (1992)）；および昆虫細
胞（Calhoun et al., 国際特許出願公開第WO90/11353号）中で発現された。

【０００５】 しかしながら、α−Ｇａｌ Ａの現在の調製品の効力は乏しい。比較的高純度
でα−Ｇａｌ Ａを調製する方法は、レクチンアフィニティークロマトグラフィ
ー（コンカナバリンＡ(Con A)セファロース(Sepharose)（登録商標））およびセ
ファロース（登録商標）マトリクスに連結された基質類似体Ｎ−６−アミノヘキ
サノイル−α−Ｄ−ガラクトシルアミンへのα−Ｇａｌ Ａの結合に基づくアフ
ィニティークロマトグラフィーの組合せを用いた、アフィニティークロマトグラ
フィーの使用に依存する。例えば、Bishop et al., J.Biol.Chem. 256:1307-131
6 (1981)参照のこと。タンパク質様レクチンアフィニティー樹脂および基質類似
体樹脂の使用は、一般的に、固体支持体からのアフィニティー試薬の連続浸出に
関連し、溶液中に遊離したかまたは溶出したタンパク質に結合したアフィニティ
ー試薬により、精製された生成物が汚染されてしまう。そのような汚染により、
その生成物は、製剤調製品への使用に適さなくなる。結合した基質類似体および
レクチンもまた、タンパク質の酵素的、機能的、および構造的特性に実質的に負
の影響を及ぼすことがある。さらに、従来技術の方法により製造されたα−Ｇａ
ｌ Ａは、肝臓により急速に除去される。

【０００６】 したがって、大規模の商業用途に適した品質および供給量で容易に得られる従
来のクロマトグラフィー樹脂を用いた、アフィニティー試薬を含まないα−Ｇａ
ｌ Ａ調製品を生成する精製プロトコルが、当該技術分野において必要とされて
いる。さらに、循環半減期が増大し、肝臓以外の特定の組織中の吸収が増大した
α−Ｇａｌ Ａ調製品が、当該技術分野において必要とされている。

【０００７】 発明の概要 本発明は、高度に精製されたα−Ｇａｌ Ａ調製品、および該α−Ｇａｌ Ａ
グリコフォーム(glycoform)を精製する様々な方法を提供する。本発明はまた、
変更された電荷を有するα−Ｇａｌ Ａ調製品およびその調製品の製造方法を提
供する。電荷の変更は、α−Ｇａｌ Ａのシアル酸含有量を増加させるおよび／
またはα−Ｇａｌ Ａのリン酸化を増大させることにより達成される。本発明は
さらに、ほ乳類宿主中で循環半減期の増大したα−Ｇａｌ Ａ調製品およびその
製造方法を提供する。最後に、本発明はさらに、α−Ｇａｌ Ａ調製品を被験者
に投与する方法および投与量を提供する。本発明のα−Ｇａｌ Ａ調製品は、フ
ァブリー病またはファブリー病の異型変種を患った個人の治療、例えば、心室膨
大、例えば、左心室肥大（ＬＶＨ）、および／または僧帽弁不全のような主に心
臓血管異常を有するファブリー病患者、または主に腎臓に関わる問題のあるファ
ブリー病患者の特定の個体群の治療に有用であろう。

【０００８】 図面の説明 図１は、ヒト繊維芽細胞ｃＤＮＡライブラリからα−Ｇａｌ Ａ ｃＤＮＡを
単離するのに用いた210ｂｐのプローブである（配列番号１）。この配列は、α
−Ｇａｌ Ａ遺伝子のエクソンからのものである。このプローブは、ポリメラー
ゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によりヒトゲノムＤＮＡから単離した。図中の下線を引い
た領域は、増幅プライマーの配列に対応する。

【０００９】 図２は、α−Ｇａｌ Ａ ｃＤＮＡクローンの５’末端を完了するＤＮＡ断片
の配列である（配列番号２）。この断片は、ＰＣＲによりヒトゲノムＤＮＡから
増幅した。下線を引いた領域は、増幅プライマーの配列に対応する。実施例１に
記載するようなサブクローニングに用いた、ＮｃｏＩおよびＳａｃＩＩ制限エン
ドヌクレアーゼ部位の位置もまた示されている。

【００１０】 図３は、シグナルペプチドをコード化する配列を含む、α−Ｇａｌ Ａ ｃＤ
ＮＡの配列である（配列番号３）。

【００１１】 図４は、ＣＭＶ（サイトメガロウイルス）プロモータ、エクソン１、および第
１のイントロン、ｈＧＨシグナルペプチドコード配列および第１のイントロン、
α−Ｇａｌ ＡのｃＤＮＡ（α−Ｇａｌ Ａシグナルペプチド配列を欠如した）
およびｈＧＨ ３’ＵＴＳを含む、α−Ｇａｌ Ａ発現構築物であるｐＸＡＧ−
１６の地図である。ｐｃＤＮｅｔは、プラスミドｐｃＤＮｅｔから由来のｎｅｏ
遺伝子の位置を示す。

【００１２】 図５は、コラーゲンＩα２プロモータおよび第１のエクソン、β−アクチンイ
ントロン、ｈＧＨシグナルペプチドコード配列および第１のイントロン、α−Ｇ
ａｌ ＡのｃＤＮＡ（α−Ｇａｌ Ａシグナルペプチド配列を欠如した）および
ｈＧＨ ３’ＵＴＳを含む、α−Ｇａｌ Ａ発現構築物であるｐＸＡＧ−２８の
地図である。ｐｃＤＮｅｔは、プラスミドｐｃＤＮｅｔから由来のｎｅｏ遺伝子
の位置を示す。

【００１３】 図６は、ヒトα−Ｇａｌ Ａアミノ酸配列である（配列番号４）。

【００１４】 図７は、ヒトα−Ｇａｌ Ａ（シグナルペプチドを含まない）をコード化する
ｃＤＮＡ配列である（配列番号５）。

【００１５】 図８は、ブチルセファロース（登録商標）樹脂を用いたα−Ｇａｌ Ａ精製段
階のクロマトグラムである。選択された分画の280ｎｍでの吸光度（実線）およ
びα−Ｇａｌ Ａ活性（点線）が示されている。

【００１６】 図９は、ｐＧＡ２１３Ｃの地図である。

【００１７】 図１０は、標的構築物であるｐＧＡ２１３Ｃ、および内因性α−ガラクトシダ
ーゼＡ座との相同組換えを示す図である。ｐＧＡ２１３Ｃは、Ｘ染色体αガラク
トシダーゼＡ座上の対応する配列上に整合された標的配列として示されている。
メチオニン開始コドンに対する位置であるＡＴＧが、直線地図上の数により示さ
れている。ネズミｄｈｆｒ、細菌ｎｅｏ、およびＣＭＶプロモータ／アルドラー
ゼイントロン配列を含有する活性化単位が位置(-221)上に示され、その位置中に
ＤＮＡクローニングによりそれらの配列が挿入された。α−ガラクトシダーゼＡ
コード配列は、塗りつぶされた四角により示されている。α−ガラクトシダーゼ
Ａ非コードゲノム配列は、明るく塗られた四角により示されている。大きな矢印
は、ｄｈｆｒおよびｎｅｏ発現カセットの転写方向を示している。成功した標的
付けおよび遺伝子活性化後のＧＡ−ＧＡＬ ｍＲＮＡのスプライシングが、活性
化されたα−ガラクトシダーゼＡ（ＧＡ−ＧＡＬ）座の地図の下のセグメント化
された線により示されている。

【００１８】 発明の詳細な説明 導入 ここに記載した本発明は、ある新規のα−Ｇａｌ Ａ調製品およびその製造方
法、並びにそれらの調製品を用いたファブリー病またはファブリー病の異型変種
を患った患者を治療する方法に関する。考えられる特定の代表的な実施の形態が
、要約され、以下詳細に説明されている。

【００１９】 本発明は、ファブリー病の治療のために任意の細胞（α−Ｇａｌ Ａ産生細胞
）中で産生されたα−Ｇａｌ Ａを使用する。好ましい実施の形態において、本
発明は、標準的な遺伝子操作技法（クローンされたα−Ｇａｌ Ａ遺伝子または
ｃＤＮＡの宿主中への導入に基づく）、または遺伝子活性化を用いて産生される
ヒトα−Ｇａｌ Ａを使用する。

【００２０】 本発明は、従来技術において調製されたものよりも高い純度のα−Ｇａｌ Ａ
を含有する調製品、およびその製造方法を提供する。本発明の精製方法を用いる
ことにより、ヒトα−Ｇａｌ Ａ調製品の組成物は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥまたは逆
相ＨＰＬＣにより測定された場合、好ましくは、少なくとも98％の均一性、より
好ましくは、少なくとも99％の均一性、最も好ましくは、少なくとも99.5％の均
一性まで精製される。本発明のα−Ｇａｌ Ａ調製品の比活性は、好ましくは、
少なくとも2.0×10⁶単位／ｍｇタンパク質、より好ましくは、少なくとも3.0×1
0⁶単位／ｍｇタンパク質、最も好ましくは、少なくとも3.5×10⁶単位／ｍｇタン
パク質である。

【００２１】 ある実施の形態において、α−Ｇａｌ Ａ調製品は、疎水性相互作用樹脂上で
他の成分からα−Ｇａｌ Ａの様々な糖形態を分離することにより精製されるが
、これには、レクチンクロマトグラフィー段階は含まれない。好ましい実施の形
態において、この疎水性相互作用樹脂の官能部分は、ブチル基を含む。

【００２２】 代わりの実施の形態において、α−Ｇａｌ Ａ調製品は、最初に、α−Ｇａｌ Ａの様々なグリコフォームを平衡緩衝液中において酸性ｐＨでカラム内の陽イ
オン交換樹脂に結合させることにより精製される。次いで、このカラムを前記平
衡緩衝液で洗浄して、未結合材料を溶離させ、溶離液として、10-100ｍＭの塩溶
液、ｐＨ４−５の緩衝溶液、またはそれらの組合せを用いて、α−Ｇａｌ Ａの
様々な糖形態を溶離する。好ましい実施の形態において、平衡緩衝液は約4.4の
ｐＨを有する。

【００２３】 別の代わりの実施の形態において、α−Ｇａｌ Ａ調製品は、精製方法として
、等電点クロマトグラフィー、金属キレートアフィニティークロマトグラフィー
、またはイムノアフィニティークロマトグラフィーの内の少なくとも１つの工程
を含む精製方法を用いて、ある試料中のα−Ｇａｌ Ａの様々なグリコフォーム
を、その試料中の他の成分から分離することにより精製される。

【００２４】 本発明はさらに、変更された電荷を有するα−Ｇａｌ Ａ調製品およびその製
造方法を提供する。該調製品は、α−Ｇａｌ Ａの異なるグリコフォームを含ん
でもよい。電荷の変更は、α−Ｇａｌ Ａ調製品のシアル酸含有量を増加させる
ことにより、および／またはα−Ｇａｌ Ａ調製品のリン酸化を増大させること
により、行われる。

【００２５】 α−Ｇａｌ Ａ調製品のシアル酸含有量は、(i)前記精製プロセス中または後に
より高く荷電されたおよび／またはより高い分子量のα−Ｇａｌ Ａ糖形態の分
離により；(ii)シアリルトランスフェラーゼ遺伝子またはｃＤＮＡを発現するよ
うに遺伝的に変異された（従来の遺伝子操作法または遺伝子活性化のいずれかに
より）細胞を用いてシアル酸残基を加えることにより；または(iii)低アンモニ
ウム環境中の前記酵素を発現する細胞の発酵または増殖により、増加させられる
。

【００２６】 α−Ｇａｌ Ａ調製品のリン酸化は、(i)ホスホリルトランスフェラーゼ遺伝
子またはｃＤＮＡを発現するように遺伝的に変異された（従来の遺伝子操作法ま
たは遺伝子活性化のいずれかにより）細胞を用いてリン酸残基加えることにより
；または(ii)ホスファターゼ阻害因子を培養された細胞に加えることにより、増
大させられる。

【００２７】 本発明の方法を用いれば、オリゴ糖の35％から85％が荷電された、ヒトグリコ
シル化α−Ｇａｌ Ａ調製品が得られる。好ましい実施の形態において、少なく
とも35％のオリゴ糖が荷電されている。より好ましい実施の形態において、少な
くとも50％のオリゴ糖が荷電されている。

【００２８】 実施例１ α−Ｇａｌ Ａを発現し、与えるように設計された構築物の調製およ
び使用 ２つの発現プラスミド、ｐＸＡＧ−１６およびｐＸＡＧ−２８を構築した。こ
れらのプラスミドは、α−Ｇａｌ Ａ酵素の398のアミノ酸（α−Ｇａｌ Ａシ
グナルペプチドを含まない）をコード化するヒトα−Ｇａｌ Ａ ｃＤＮＡ；ｈ
ＧＨ遺伝子の第１のイントロンにより中断された、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）
シグナルペプチドゲノムＤＮＡ配列；およびポリアデニル化のシグナルを含有す
る、ｈＧＨ遺伝子の３’非翻訳配列（ＵＴＳ）を含有する。プラスミドｐＸＡＧ
−１６は、ヒトサイトメガロウイルス即時−早期(immediate-early)（ＣＭＶ
ＩＥ）プロモータおよび第１のイントロン（非コードエクソン配列に隣接した）
を有し、一方で、ｐＸＡＧ−２８は、コラーゲンＩα２プロモータおよびエクソ
ン１により駆動され、β−アクチン遺伝子の第１のイントロンを含有するβ−ア
クチン遺伝子の５’ＵＴＳも含有する。

【００２９】 １．１ 完全α−Ｇａｌ Ａ ｃＤＮＡのクローニング、およびα−Ｇａｌ
Ａ発現プラスミドｐＸＡＧ−１６の構築 ヒトα−Ｇａｌ ｃＤＮＡを、以下のように構築したヒト線維芽細胞ｃＤＮＡ
ライブラリからクローニングした。Ｐｏｌｙ−Ａ^＋ｍＲＮＡを全ＲＮＡから単離
し、製造業者の使用説明書にしたがってｌａｍｂｄａ ＺａｐＩＩ（登録商標）
システム（カリフォルニア州、ラ・ホーヤのストラタジーン社(Stratagene Inc.
)）の試薬を用いて、ｃＤＮＡ合成を行った。手短に言えば、「第１鎖」ｃＤＮ
Ａは、内部ＸｈｏＩ制限エンドヌクレアーゼ部位を含有するオリゴ−ｄＴプライ
マーの存在下で逆転写により産生した。ＲＮａｓｅ Ｈによる処理後に、そのｃ
ＤＮＡをＤＮＡポリメラーゼＩによりニックトランスレーションして、二本鎖ｃ
ＤＮＡを産生した。このｃＤＮＡを、Ｔ４ ＤＮＡポリメラーゼＩにより平滑末
端とし、ＥｃｏＲＩアダプタにライゲーションした。このライゲーションの産物
をＴ４ ＤＮＡキナーゼにより処理し、ＸｈｏＩで切断した。ｃＤＮＡをSephac
ryl（登録商標）−４００クロマトグラフィーにより分画した。大型および中型
分画をプールし、これらのｃＤＮＡを、ＥｃｏＲＩおよびＸｈｏＩで切断したｌ
ａｍｂｄａ ＺａｐＩＩアームにライゲーションした。次いで、このライゲーシ
ョンの産物をパッケージングし、滴定した。この一次ライブラリは、1.2×10⁷ｐ
ｆｕ／ｍＬの力価および925ｂｐの平均挿入サイズを有した。

【００３０】 ヒトα−Ｇａｌ Ａ遺伝子のエクソン７からの210ｂｐプローブ（図１、配列
番号１）を用いて、ｃＤＮＡを単離した。このプローブ自体は、以下のオリゴヌ
クレオチド： ５’−ＣＴＧＧＧＣＴＧＴＡＧＣＴＡＴＧＡＴＡＡＡＣ−３’（オリゴ１；配列
番号６）および ５’−ＴＣＴＡＧＣＴＧＡＡＧＣＡＡＡＡＣＡＧＴＧ−３’（オリゴ２；配列番
号７） を用いて、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によりゲノムＤＮＡから単離した。
次いで、このＰＣＲ産物を用いて、前記線維芽細胞ｃＤＮＡライブラリをスクリ
ーニングし、正のクローンを単離し、さらに特徴付けた。ある正のクローンであ
るファージ３Ａに、製造業者の使用説明書にしたがって、Ｌａｍｂｄａ Ｚａｐ
ＩＩ（登録商標）システム切除プロトコル（カリフォルニア州、ラ・ホーヤのス
トラタジーン社）を施した。この方法によりプラスミドｐＢＳＡＧ３Ａを産生し
た。この産物は、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ（商標）−プラスミドバックボー
ンにα−Ｇａｌ Ａ ｃＤＮＡ配列を含有している。ＤＮＡ塩基配列決定により
、このプラスミドは、前記ｃＤＮＡ配列の完全５’末端を含まないことが分かっ
た。したがって、この５’末端を、ヒトゲノムＤＮＡから増幅したＰＣＲ断片を
用いて再構築した。このことを行うために、以下のオリゴヌクレオチド： ５’−ＡＴＴＧＧＴＣＣＧＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴ−３’（オリゴ３；配列番号８
）および ５’−ＴＧＡＴＧＣＡＧＧＡＡＴＣＴＧＧＣＴＣＴ−３’（オリゴ４；配列番号
９） を用いて268ｂｐのゲノムＤＮＡ断片（図２、配列番号２）を増幅した。この断
片を「ＴＡ」クローニングプラスミド（カリフォルニア州、サンディエゴのイン
ビトロゲン社(Invitrogen Corp.)）中にサブクローニングして、プラスミドｐＴ
ＡＡＧＥＩを産生した。α−Ｇａｌ Ａ ｃＤＮＡ配列の大部分を含有する、プ
ラスミドｐＢＳＡＧ３Ａ、およびα−Ｇａｌ Ａ ｃＤＮＡの５’末端を含有す
るｐＴＡＡＧＥＩの各々をＳａｃＩＩおよびＮｃｏＩで切断した。増幅されたＤ
ＮＡ断片内の関連するＳａｃＩＩおよびＮｃｏＩの位置が図２に示されている。
ｐＴＡＡＧＥＩからの0.2ｋｂのＳａｃＩＩ−ＮｃｏＩ断片を単離し、同等に切
断したｐＢＳＡＧ３Ａにライゲーションした。このプラスミドｐＡＧＡＬは、前
記α−Ｇａｌ Ａシグナルペプチドをコード化する配列を含有する、完全α−Ｇ
ａｌ Ａ ｃＤＮＡ配列を含有する。このｃＤＮＡを完全に塩基配列決定し（図
３に示したように、α−Ｇａｌ Ａシグナルペプチドを含む；配列番号３）、ヒ
トα−Ｇａｌ Ａ ｃＤＮＡについて発表された配列と同一であることが分かっ
た（Ｇｅｎｂａｎｋ配列ＨＵＭＧＡＬＡ）。

【００３１】 プラスミドｐＸＡＧ−１６を、以下のようにいくつかの中間体を介して構築し
た。第１に、ｐＡＧＡＬをＳｃａＩＩおよびＸｈｏＩで切断し、平滑末端にした
。第２に、完全α−Ｇａｌ Ａ ｃＤＮＡの末端をＸｂａＩリンカーにライゲー
ションし、ＸｂａＩで切断されたｐＥＦ−ＢＯＳ中にサブクローニングし（Mixu
shima et al., Nucl.Acids.Res. 18:5322, 1990）、ｐＸＡＧ−１を構成した。
この構築物は、ヒト顆粒細胞−コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）３’ＵＴＳと、
α−Ｇａｌ Ａおよびα−Ｇａｌ Ａシグナルペプチドをコード化するｃＤＮＡ
に隣接するヒト延長因子−１ａ（ＥＦ−１ａ）プロモータとを含有し、したがっ
て、α−Ｇａｌ Ａ ｃＤＮＡの５’末端は、ＥＦ−１ａプロモータに融合され
ている。ＣＭＶ ＩＥプロモータおよび第１のイントロンを有する構築物を構成
するために、ｐＸＡＧ−１から、2ｋｂのＸｂａＩ−ＢａｍＨＩ断片として、α
−Ｇａｌ Ａ ｃＤＮＡおよびＧ−ＣＳＦ３’ＵＴＳを除去した。この断片を平
滑末端とし、ＢａｍＨＩリンカーにライゲーションし、ＢａｍＨＩで切断したｐ
ＣＭＶｆｌｐＮｅｏ（以下に記載するように構築した）中に挿入した。その方向
は、α−Ｇａｌ Ａ ｃＤＮＡの５’末端がＣＭＶ ＩＥプロモータ領域に融合
されるようなものであった。

【配列表】

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１は、ヒト繊維芽細胞ｃＤＮＡライブラリからα−Ｇａｌ Ａ ｃＤＮＡを
単離するのに用いた210ｂｐのプローブである（配列番号１）

【図２】 図２は、α−Ｇａｌ Ａ ｃＤＮＡクローンの５’末端を完了するＤＮＡ断片
の配列である（配列番号２）

【図３】 図３は、シグナルペプチドをコード化する配列を含む、α−Ｇａｌ Ａ ｃＤ
ＮＡの配列である（配列番号３）

【図４】 図４は、α−Ｇａｌ Ａ発現構築物であるｐＸＡＧ−１６の地図である

【図５】 図５は、α−Ｇａｌ Ａ発現構築物であるｐＸＡＧ−２８の地図である

【図６】 図６は、ヒトα−Ｇａｌ Ａアミノ酸配列である（配列番号４）

【図７】 図７は、ヒトα−Ｇａｌ Ａ（シグナルペプチドを含まない）をコード化する
ｃＤＮＡ配列である（配列番号５）

【図８】 図８は、ブチルセファロース（登録商標）樹脂を用いたα−Ｇａｌ Ａ精製段
階のクロマトグラムである

【図９】 図９は、ｐＧＡ２１３Ｃの地図である

【図１０】 図１０は、標的構築物であるｐＧＡ２１３Ｃ、および内因性α−ガラクトシダ
ーゼＡ座との相同組換えを示す図である

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ボロースキー，マリアン アメリカ合衆国 マサチューセッツ州 02152 ウィンスロップ バートレット パークウェイ 47 (72)発明者 キノシタ，キャロル エム アメリカ合衆国 マサチューセッツ州 01730 ベッドフォード デイヴィス ロ ード 400 (72)発明者 トレコ，ダグラス エイ アメリカ合衆国 マサチューセッツ州 02174 アーリントン ブラントウッド ロード 87 (72)発明者 ウィリアムズ，メラニー ディー アメリカ合衆国 マサチューセッツ州 01760 ナティック モールデン ストリ ート ７ (72)発明者 シュッツ，トーマス ジェイ アメリカ合衆国 マサチューセッツ州 01702 フラミンガム レキシントン ス トリート 62 (72)発明者 ダニエル，ピーター エフ アメリカ合衆国 マサチューセッツ州 01760 ナティック ノース アヴェニュ ー 100 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA12 CA04 DA02 GA11 4B050 CC03 CC07 DD11 LL01 4C084 AA02 BA02 BA08 BA22 BA23 BA44 DC22 MA01 NA14 ZC212 ZC352 ZC542

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ＳＤＳ−ＰＡＧＥまたは逆相ＨＰＬＣにより測定された場合
   、少なくとも99.5％の均一性まで精製された、ヒトα−Ｇａｌ Ａ調製品を含む
   組成物であって、該調製品が、様々なα−Ｇａｌ Ａグリコフォームを含み、少
   なくとも3.0×10⁶単位／ｍｇタンパク質の比活性を有し、該調製品がレクチンを
   実質的に含まないことを特徴とする組成物。