ITMI951278A1

ITMI951278A1 - Formulazioni di analoghi dell'insulina

Info

Publication number: ITMI951278A1
Application number: IT95MI001278A
Authority: IT
Inventors: Diane Lee Bakaysa; David Nettleship Brems; Bruce Hill Frank; Henry Acken Havel; Allen Howard Pekar
Original assignee: Lilly Co Eli
Priority date: 1994-06-16
Filing date: 1995-06-14
Publication date: 1996-12-14
Also published as: IE68853B1; AU694501B2; ATA101695A; MY115631A; ZA954943B; DK173015B1; JPH083067A; LU88626A1; RS49577B; FR2741078B1; IL114151A; DE19521720B4; PE19496A1; IE950436A1; KR100382326B1; NO952357D0; CO4410203A1; GB9512038D0; JP2001199899A; RO113530B1

Abstract

La presente invenzione descrive un complesso esamerico di analoghi dell'insulina e formulazioni. Più specificamente la presente invenzione riguarda varie formulazioni parenterali che comprendono: analoghi dell'insulina umana in una conformazione esamerica, ioni zinco e almeno tre molecole di un derivato fenolico scelto dal gruppo costituito da m cresolo, fenolo od una miscela di m cresolo e fenolo. La formulazione fornisce un rapido inizio di azione.

Description

D E S C R I Z IO N E

La presente invenzione riguarda analoghi monomerici dell'insulina umana. Più specificamente, la presente invenzione riguarda un complesso esamerico che comprende un analogo dell'insulina, zinco ed un derivato fenolico.

Dall'introduzione dell'insulina negli anni 1920, si sono fatti continui progressi per quello che riguarda il miglioramento del trattamento del diabete mellito. I progressi principali sono stati fatti per quello che riguarda la purezza e la disponibilità dell'insulina. Sono anche state sviluppate varie formulazioni con azioni differenti nel tempo. Nonostante questi miglioramenti, la terapia con iniezioni sottocutanee non riesce ancora a fornire ad un paziente una regolazione conveniente ed un controllo glicemico normalizzato. Frequenti escursioni dai livelli di glicerina normale durante la vita di un paziente portano ad iperglicemia od a ipoglicemia, ed a complicazioni a lungo termine che includono retinopatia, neuropatia, nefropatia e microangiopatia e macroangiopatia.

Per aiutare ad evitare i livelli glicemici estremi, i diabetici effettuano spesso una terapia con parecchie iniezioni in cui si somministra insulina con ogni pasto. Tuttavia, questa terapia non è stata ancora ottimizzata. L'insulina che agisce più rapidamente disponibile in commercio presenta un picco troppo tardi dopo l'iniezione e dura troppo a lungo per controllare in modo ottimale i livelli di glucosio. Di recente, sono stati effettuati sforzi considerevoli per creare formulazioni di insulina e formulazioni di analoghi dell'insulina che alterino le cinetiche del processo di assorbimento sottocutaneo.

Poiché tutte le formulazioni farmaceutiche commerciali di insulina contengono insulina allo stato semi-associato e predominantemente nella forma zinco-esamero, si crede che la fase limitativa della velocità per l'assorbimento dell'insulina dal deposito di iniezione sottocutanea al circolo sanguigno, sia la dissociazione dell'esamero dell'insulina semiaggregato. Brange e al. in Biabetes Care 13: 923-954 (1990). Per accelerare questo processo di assorbimento, sono stati sviluppati analoghi monomerici dell'insulina. Questi analoghi monomerici possiedono un inizio dell'attività relativamente più rapido dell'insulina conservando nel contempo l'attività biologica dell'insulina umana nativa. Essi forniscono un assorbimento rapido per portare il tempo di iniezione e l'azione di picco dell'insulina in più stretta vicinanza con l'escursione di glucosio postprandiale associata in risposta ad un pasto. La preparazione di vari analoghi monomerici è descritta in Chance e al., pubblicazione EPO No. 383472, e Brange e al., pubblicazione EPO No. 214826.

Sfortunatamente, le modifiche all'insulina, che fanno sì che questi analoghi siano monomerici, danno anche luogo ad una velocità elevata di formazione di polimero in formulazioni parenterali. Poiché la scadenza delle preparazioni di insulina si verifica quando si ottengono livelli di polimero dell'1% (U.S. Pharmacopoeia, 1990), rendere minimo questo tipo di degradazione è estremamente importante nel ridurre gli effetti collaterali indesiderabili. Perciò, è desiderabile formulare analoghi monomerici in modo tale da far sì che l'analogo si auto-associ formando una conformazione stabile, mantenendo nel contempo il suo rapido assorbimento.

L'aggiunta di certi ioni metallici, principalmente zinco, fa migliorare la stabilità chimica portando l'insulina ad associarsi ed a formare esameri, in particolare la conformazione Zn(II)-Tg. Inoltre, è stato mostrato che dei composti fenolici si legano specificamente con l'esamero dell'insulina ed inducono una variazione conformazione allosterica per cui gli otto animino acidi N-terminali della catena B vengono convertiti dalla conformazione estesa ad una conformazione ad elica alfa. Derewenda, e al. Nature, 338: 594-596 (1989).

In forte contrasto con queste osservazioni ben stabilite che l'insulina si aggrega facilmente in presenza di zinco formando una struttura di Zn-esamero ben definita, stabile, studi precedenti con analoghi monomerici dell'insulina hanno rivelato che qualsiasi aggregazione fra zinco e l'analogo dell'insulina è distinta da quella osservata con l'insulina. B. H. Frank, copie del testo e delle diapositive della conferenza tenuta alla conferenza sull'insulina "Self-Association and Conformational Studies on Human Proinsulin and Insulin Analogs", University of York, (29 Agosto-1 Settembre 1989). Inoltre, il complesso di Zn-esamero altamente stabile come osservato con l'insulina non viene osservato con analoghi monomerici. Id. Brems e al., Protein Engineering, 5:6, 527-533 (1992), descrivono che Lys Pro -hi monomerico è meno soggetto alla dimerizzazione e all'auto-associazione a forme a peso molecolare più elevato dell'insulina umana. Brems e al. continuano concludendo che AspB28 ProB29 -hi, B28 R29 B28 R29

Ala Pro -hi, e Lys Pro -hi presentano poca o nessuna associazione indotta da Zn e che ProB29 insulina, LysB28insulina, AspB28insulina, e Ala B28 insulina dimostrano un'associazione indotta da Zn, ma inferiore rispetto a Zn-insulina. Successive osservazioni sperimentali non pubblicate degli inventori della presente suggeriscono che si osserva l'associazione con zinco; tuttavia, tale associazione fra l'analogo e lo zinco differisce dall'insulina. L'associazione che viene osservata con questi analoghi è in una moltitudine di forme a peso molecolare più elevato e distinte dagli esameri di Zn-insulina ben definiti, predominanti. Perciò, è chiaro che gli analoghi monomerici dell'insulina non formano la conformazione Zn(II)-Tg in un modo analogo all'insulina.

In vista della letteratura pubblicata, è sorprendente che la presente invenzione fornisca analoghi monomerici dell'insulina in un complesso esamerico con glico-fenolo ben definito, stabile. Questo complesso esamerico è differente in modo unico da questi complessi osservati con l'insulina in condizioni identiche. I complessi dell'insulina con zinco e fenolo sono in una conformazione Zn(II)-Rg. Il complesso esamerico della presente invenzione non è identico a questa conformazione. Ancora in modo molto notevole, il complesso esamerico di un analogo dell'insulina ha una propensione molto maggiore a dissociarsi rispetto all'insulina. Questa propensione a dissociarsi si traduce nella desiderata proprietà di azione veloce.

Brange e al. in Current Opinion in Structural Biology 1_:934:940 (1991) descrivono vari monomeri dell'insulina stabili, ad azione veloce, e stabiliscono che la via ovvia per creare un'insulina ad azione veloce sia di prevenire la formazione di un dimero o di un esamero. In modo simile, Brange e al. in Diabetes Care 13: 923-954 (1990) descrivono che quando si somministra insulina come un esamero, oltre alla sua diffusione libera più lenta, 1'esamero deve essere più stericamente impedito rispetto ad un monoraero durante il trasporto per diffusione sottocutaneo e/o durante il suo passaggio attraverso la membrana dei capillari. Inoltre, quando iniettata per via sottocutanea, la conformazione Zn(II)-Rg non si dissocia direttamente ma si trasforma attraverso la conformazione Zn(II)-T6. Queste variazioni conformazionali e la dissociazione ritardano l'instaurarsi dell'attività. Perciò, un esperto nel settore, al momento dell'invenzione, credeva che gli sforzi per stabilizzare chimicamente l'analogo monomerico dell’insulina con zinco formando un complesso esamerico ben definito, fossero senza successo o, se riusciti, sacrificassero il rapido instaurarsi dell'azione desiderata.

La presente invenzione è un complesso esamerico indotto con zincocomposto fenolico che viene assorbito rapidamente. La velocità di assorbimento per il complesso esamerico è almeno due volte quella osservata con l'insulina. Ancora, quando il complesso esamerico viene formulato, esso è ugualmente stabile, quando confrontato con l'insulina, nei confronti della degradazione chimica. Perciò, è sorprendente che la presente invenzione converta un analogo monomerico dell'insulina in un complesso esamerico con zinco-fenolo, ben definito, stabile. Cosa notevole, quando formulato, questo complesso esamerico conserva le proprietà di azione veloce associate con l'analogo monomerico dell'insulina. Di conseguenza, la presente invenzione fornisce una formulazione parenterale del complesso esamerico di un analogo dell'insulina che è stabile e ad azione veloce.

La presente invenzione fornisce un complesso di analoghi dell'insulina umana, che comprende: sei molecole di un analogo dell'insulina umana, due ioni zinco, ed almeno tre molecole di un derivato fenolico scelto dal gruppo costituito da m-cresolo, fenolo, o una miscela di m-cresolo e fenolo; così che il complesso dell'analogo è un esamero. La presente invenzione fornisce inoltre formulazioni parenterali che comprendono il complesso esamerico.

Come notato sopra, L'invenzione fornisce un complesso di un analogo monomerico dell'insulina umana come un esamero. Il termine "analogo monomerico dell'insulina" o "analogo dell'insulina umana" come qui impiegato, è l'insulina umana in cui:

Pro in posizione B28 è sostituita con Asp, Lys, Leu, Val, o Ala; e Lys in posizione B29 è lisina o sostituita con prolina;

des(B28-B30); o des(B27).

Analoghi monomerici dell'insulina sono descritti in Chance e al., Pubblicazione EPO No. 383 472, e Brange e al., Pubblicazione EPO No.

214 826, e sono qui incorporate mediante riferimento. Gli analoghi monomerici dell'insulina sono meno soggetti alla dimerizzazione o all'auto-associazione rispetto all'insulina.

Ad un esperto nel settore, risulterà chiaro che sono possibili altre modifiche. Queste modifiche sono ampiamente accettate nel settore ed includono la sostituzione del residuo di istidina in posizione B10 con acido aspartico; la sostituzione del residuo di fenilalanina in posizione B1 con acido aspartico; la sostituzione del residuo di treonina in posizione B30 con alanina; la sostituzione del residuo di serina in posizione B9 con acido aspartico; la delezione di animino acidi in posizione B1 soltanto od in combinazione con una delezione in posizione B2; e la delezione di treonina dalla posizione B30.

Tutte le abbreviazioni degli ammino acidi impiegate nella presente descrizione sono quelle accettate dall'United States Patent & Trademark Office come riportate in 37 C.F.R. § 1,822(b)(2). Un analogo monomerico dell'insulina particolarmente preferito è LysB28ProB29-insulina umana (B28 è Lys; B29 è Pro).

Il termine "trattamento", come qui impiegato, descrive il trattamento e la cura di un paziente allo scopo di combattere la malattia, la patologia od il disturbo ed include la somministrazione di un composto della presente invenzione per prevenire l'instaurarsi dei sintomi o delle complicazioni, alleviare i sintomi o le complicazioni o eliminare la malattia, la patologia od il disturbo.

Il termine "agente di isotonicità" si riferisce ad un agente che è tollerato fisiologicamente e conferisce alla formulazione una tonicità adatta tale da prevenire il flusso netto di acqua attraverso la membrana cellulare. Per tali scopi si impiegano comunemente composti come la glicerina, a concentrazioni note.

Il termine "derivato fenolico" o "composto fenolico", è m-cresolo, fenolo od una miscela di m-cresolo e fenolo. Preferibilmente, il composto fenolico è m-cresolo.

Il termine "tampone tollerato fisiologicamente" è noto nel settore. Un tampone tollerato fisiologicamente è preferibilmente un tampone di fosfato, come fosfato di sodio. Altri tamponi tollerati fisiologicamente includono TRIS, acetato di sodio o citrato di sodio. La scelta e la concentrazione del tampone sono note nel settore.

Gli analoghi dell'insulina della presente invenzione formano un complesso con ioni zinco e con un derivato fenolico formando una conformazione esamerica, stabile. Sia lo zinco sia il derivato fenolico sono critici per ottenere un complesso che è stabile e capace di rapida dissociazione e di inizio dell'azione. Il complesso esamerico consiste di due ioni zinco per esamero di analogo dell'insulina umana e almeno tre molecole di un derivato fenolico scelto dal gruppo costituito da m-cresolo, fenolo od una miscela di m-cresolo e fenolo.

Un analogo monomerico solubile viene convertito nel complesso esamerico sciogliendo l'analogo monomerico in un diluente che contiene il derivato fenolico ad un pH di circa 7,5 ed aggiungendo zinco. Le zinco viene preferibilmente aggiunto come un sale. Esempi rappresentativi di sali di zinco includono acetato di zinca, bromuro di zinco, cloruro di zinco, fluoruro di zinco, ioduro di zinco e solfato di zinco. L'esperto nel settore riconoscerà che vi sono parecchi altri sali di zinco che potrebbero anch'essi venire impiegati nel procedimento della presente invenzione. Preferibilmente si impiega acetato di zinco e cloruro di zinco in quanto questi sali non aggiungono nuovi ioni chimici a processi accettati commercialmente.

La dissoluzione dell'analogo può essere aiutata da ciò che è comunemente nota come una dissoluzione acida, cioè, il pH viene abbassato a circa 3,0-3,5 con un acido fisiologicamente tollerato, preferibilmente HC1, per aiutare la dissoluzione dell'analogo monomerico. Altri acidi tollerati fisiologicamente includono acido acetico, acido citrico ed acido fosforico. Il pH viene poi regolato con una base tollerata fisiologicamente, preferibilmente idrossido di sodio, a circa 7,4-7,5. Altre basi tollerate fisiologicamente includono idrossido di potassio ed idrossido di ammonio.

Il complesso esamerico può essere formulato in formulazioni parenterali stabili, ad azione rapida. La concentrazione dell'analogo dell'insùlina nella formulazione è da circa 0,5 mg/ml a circa 20 mg/ml, preferibilmente da circa 1,2 mg/ml a circa 17,5 mg/ml; nel modo più preferibile circa 3,5 mg/ml. In generale, la concentrazione di zinco è da circa 10 pg/ml a circa 50 pg/ml. La concentrazione ottimale di zinco nella formulazione è da circa 14 pg/ml a circa 35 pg/ml, i cui due ioni di zinco sono legati a ciascun esamero. Quando formulato, il complesso esamerico lega sette composti fenolici. Generalmente, quando formulati, sei composti fenolici si legano all'esamero. Di conseguenza, alla formulazione si aggiunge preferibilmente il composto fenolico in eccesso. Il composto fenolico agisce anche come un conservante. Perciò, la concentrazione preferita è da circa 23 mM a 35 mM, nel modo più preferibile 29 mM. Il composto fenolico è preferibilmente m-cresolo.

Alla formulazione si può aggiungere un agente di isotonicità, preferibilmente glicerina. La concentrazione dell'agente di isotonicità è nell'intervallo noto nel settore per formulazioni di insulina, preferibilmente circa 16 mg/ml. Il pH della formulazione può essere tamponato con un tampone tollerato fisiologicamente, preferibilmente un tampone di fosfato come fosfato di sodio.

Al momento dell'invenzione, la letteratura pubblicata suggeriva che era necessario che un esperto nel settore eliminasse l'aggregazione al fine di ottenere un assorbimento rapido. Perciò, è completamente sorprendente che l'analogo esamerico formulato dia un rapido inizio di azione. Diversamente dall'insulina, la formazione di un complesso esamerico di un analogo dell'insulina non influenza sfavorevolmente il tempo richiesto per ottenere una concentrazione di picco dell'analogo dell'insulina nel siero.

La figura 1 dimostra, in pazienti umani, la risposta della velocità media di infusione di glucosio ad una formulazione che contiene Lys Pro -hi monomerico (formulato senza zinco); un esamero Lys Pro -hi formulato; ed insulina umana Regular. Il complesso esamerico formulato conserva l'azione rapida di Lys Pro° -hi monomerico. La velocità di assorbimento è significativamente più rapida dell'insulina umana Regular. Così, i risultati in figura I illustrano: Primo: LysB28ProB2 9-hl esamerico e B28 B29

Lys Pro -hi monomerico hanno velocità di assorbimento simili; secondo, LysB28ProB29-hi sia esamerico sia monomerico hanno velocità più rapide di assorbimento rispetto all'insulina.

La formulazione che comprende un complesso di un analogo dell'insulina come esamero è stabile. In studi comparativi, LysB28ProB29-hi monomerico mostra la velocità più elevata di degradazione con un aumento della formazione di polimero dell'1,63% per settimana nel periodo di studio di sei settimane. L'insulina umana non formulata subisce una più lenta velocità di formazione di polimero di 0,61% per settimana. Dopo la formulazione, tuttavia, la velocità di formazione di polimero ad elevato peso molecolare viene ridotta allo 0,095% per settimana, per l'insulina. LysB28ProB29 -hi formulato, come un complesso esamerico, presenta una diminuita velocità di formazione di polimero a peso molecolare più elevato dello 0,11% per settimana, che è confrontabile con la velocità osservata per l'insulina formulata. Questi studi sono esemplificati nell'Esempio 1 ed illustrati nella FIGURA 2.

L'analogo dell'insulina della presente invenzione può essere preparato mediante qualsiasi di varie tecniche di sintesi di peptidi riconosciute che includono metodo clàssici (soluzione), metodi in fase solida, metodi semi-sintetici e i più recenti metodi a DNA ricombinante. Per esempio, Chance e al., Pubblicazione EPO No. 383472, e Brange e al., Pubblicazione EPO No. 214826, descrivono la preparazione di vari analoghi monomerici .

Gli esempi e le preparazioni che seguono vengono forniti semplicemente per illustrare ulteriormente la preparazione degli analoghi dell'insulina e l'invenzione. L'ambito dell'invenzione non deve essere considerato come semplicemente costituito dagli esempi che seguono.

Preparazione 1

Preparazione di cariche di proteine

Si prepararono campioni non formulati di insulina e di LysBD28ProB29-hi a 3,5 mg/ml in fosfato di sodio /mM, e con o senza 1,25 mg/ml di m-cresolo, 1,09 mg/ml di fenolo e 16 mg/ml di glicerolo, a seconda dell'esperimento effettuato. Si prepararono campioni di Lys Pro -hi come un complesso esamerico in un modo identico eccetto che si aggiunsero 19,7 pg/m,l di zinco. Tutti i campioni vennero fatti passare attraverso una fase di trattenimento con acido fino a pH 3,0 ed a questo punto si aggiunse zinco nei lotti delle formulazioni. Il pH venne poi regolato a 7,4. Le concentrazioni delle proteine vennero determinate prima dell'aggiunta di composti fenolici mediante spettroscopia di assorbimento nell'UV impiegando uno spettrofotometro AVIV modello 14 DS a doppio fascio. Le concentrazioni di proteina vennero calcolate come descritto in Frank, B.H., Pekar, A.H. e Veros, A.J. (1972) Diabetes, 21 (Suppl. 2), 486-491.

Esempio 1

Stabilità chimica

La degradazione viene iniziata incubando preparazioni formulate e non formulate di insulina e LysR28Pro R29-hi monomerico ed esamerico, a 30*C. L'insulina formulata e Lys Pro -hi esamerico formulato contenevano: 3,5 mg/ml di proteina, 16 mg/ml di glicerolo, fosfato di sodio dibasico eptaidrato 7 mM, 1,25 mg/ml di m-cresolo, 1,09 mg/ml di fenolo e 0,0245 mg/ml di ossido di zinco ad un pH di 7,3-7,4. L'insulina non formulata e Lys Pro -hi monomerico non formulato contenevano: 3,5 mg/ml di proteina, 16 mg/ml di glicerolo, fosfato di sodio dibasico eptaidrato 7 mM, 1,25 mg/ml di m-cresolo e 1,09 mg/ml di fenolo ad un pH di 7,3-7,4. A intervalli di sette giorni, si rimossero campioni dall'incubazione a 30“ e si analizzarono per quello che riguarda la formazione di specie a peso molecolare elevato impiegando HPLC ad esclusione in base alla dimensione. L'analisi venne effettuata iniettando campioni da 20 μΐ in una colonna (9,4 x 250 mm) di Zorbax GF-250 Special della DuPont impiegando una miscela di bicarbonato di ammonio 0,4 M e acetonitrile come soluzione di eluizione (velocità di flusso di 0,5 ml/minuto a temperatura ambiente ed il rilevamento a 214 nm). La formazione percentuale di polimero viene determinata dal rapporto fra il picco a peso molecolare e l'area totale del monoraero ed i picchi a peso molecolare elevato. I risultati sono illustrati in FIGURA 2. ;Esempio 2 ;Dispersione statica della luce ;Le proprietà di dissociazione in vitro di Lys B28 Pro B29 -hi , Lys Pro -hi come un complesso esamerico, e dell'insulina, vengono esaminati impiegando una dispersione statica della luce. ;Si prepararono tre soluzioni madre di proteine formulate e non formulate come descritto eccetto che le soluzioni madre di proteine non formulate non contenevano zinco, glicerolo o conservanti. Impiegando queste cariche da 3,5 mg/ml, si prepara una serie di diluizioni sia per l'insulina sia per LysB28ProB2 -9Hi facendo variare 1 intervallo di concentrazione delle proteine da 3,5 mg/ml a 0,2 mg/ml. Tutte le diluizioni vengono effettuate ad un volume finale di 10 mi con tampone di fosfato di sodio 7 mM, pH 7,4, al fine di imitare il sito sottocutaneo dopo l'iniezione. Tutte le soluzioni vennero filtrate attraverso filtri Gelman a basso legame di proteina da 0,2 pm prima di effettuare le misurazioni SLS. La concentrazione di proteina per questi campioni viene determinata impiegando la HPLC a fase inversa. ;Per l'analisi dei campioni formulati, per ciascun gruppo di campioni di proteine si prepararono prove in cieco con solvente privo di proteine. Queste prove in cieco contenevano eccipienti alla stessa concentrazione dei corrispondenti gruppi di campioni di proteine. Per l'analisi dei campioni non formulati, si impiega una singolo prova in cieco di fosfato di sodio 7 mM. Impiegando queste prove in cieco di solvente appropriate, ci si assicurava che i dati riflettessero soltanto la dispersione del soluto e non un contributo aggiunto dovuto alle variazioni del solvente. ;Gli esperimenti di dispersione di luce statica (SLS) vengono effettuati impiegando un autocorrelatore 2030AT della Brookhaven ed un goniometro. Tutte le misurazioni vengono effettuate con un forellino da 1 mm ad un angolo di dispersione di 90’ impiegando un laser lexel Modello 3500 a ioni di argon, impostato a 488 nm. La temperatura viene mantenuta a 25*C mediante un bagno per la temperatura Neslab RTE-110. Il segnale nel tubo fotomoltiplicatore viene tarato impiegando toluene filtrato attraverso un filtro da 0,1 pm.

I pesi molecolari ponderali medi vengono calcolati impiegando l'equazione descritta in Cantor, C.R., e Schimmel, P.R., Biophysical Chemistry, W.H. Freeman and Company, New York, pp. 838-843 (1982). La FIGURA 3 descrive i risultati dello studio di dispersione della luce. Il profilo di dissociazione in vitro Lys Pro -hi come un complesso esamen co e quello dell'insulina sono completamente differenti. L'analogo dell'insulina dà come risultato la dimostrazione di una rapida dissociazione, che permette un assorbimento più rapido rispetto all'insulina umana. Anche se entrambe le preparazioni contengono stati di associazione esaraerici e le formulazioni sono ugualmente stabili nei confronti della degradazione, Lys Pro -hi esamerico ha una maggiore propensione a dissociarsi rispetto all'insulina.

Claims

R I V E N D I C A Z I O N I 1 . Complesso di un analogo dell'insulina umana, che comprende: sei molecole di un analogo dell'insulina umana, due ioni di zinco ed almeno tre molecole di un derivato fenolico scelto dal gruppo costituito da ncresolo, fenolo od una miscela di m-cresolo e fenolo; così che il complesso dell'analogo è un esamero.
2. Formulazione farmaceutica parenterale che comprende il complesso di un analogo dell'insulina umana secondo la rivendicazione 1.
3. Formulazione farmaceutica parenterale secondo la rivendicazione 2, che comprende inoltre un agente di isotonicità ed un tampone tollerato fisiologicamente .
4. Formulazione farmaceutica parenterale secondo la rivendicazione 3, in cui l'analogo dell'insulina umana è LysB28ProB29-insulina umana.
5. Formulazione farmaceutica parenterale secondo la rivendicazione 4, che comprende: circa 3,5 mg/ml di LysB28ProB2 9insulina umana, circa 19,7 pg/ml di zinco, fosfato di sodio circa 7 mM, circa 16 mg/ml di glicerina ed m-cresolo circa 29 mM.
6. Complesso di un analogo dell'insulina umana secondo la rivendicazione 1, in cui l'analogo dell'insulina umana è LysB2°ProB29insulina umana.
7. Complesso di un analogo dell'insulina umana secondo la rivendicazione 1, in cui l'analogo dell'insulina umana è AspB28-insulina umana