ES2328579T3 - Derivados de insulina de larga duracion y procedimientos asociados. - Google Patents

Derivados de insulina de larga duracion y procedimientos asociados. Download PDF

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Jean-Paul Castaigne
Xicai Huang
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Abstract

Un derivado de insulina que comprende una molécula de insulina y un grupo reactivo para unir covalentemente un componente sanguíneo, siendo dicho grupo reactivo un grupo que contiene maleimido, y en el que el grupo reactivo está acoplado a un grupo amino disponible de la molécula de insulina seleccionado de los grupos alfa-amino de los aminoácidos del extremo N-terminal de las cadenas A y B y el grupo épsilon-amino de Lys B29.

Description

Derivados de insulina de larga duración y procedimientos asociados.
Antecedentes de la invención (a) Campo de la invención
La presente invención se refiere a un derivado de insulina de larga duración. Más particularmente, el derivado de insulina comprende una molécula de insulina y un grupo reactivo acoplado a la misma, siendo el grupo reactivo para unir covalentemente un componente sanguíneo generando por tanto un derivado de insulina de larga duración.
(b) Descripción de la técnica anterior
La insulina es una hormona endocrina vital que se une a un receptor de la superficie celular dando lugar a una cascada de acontecimientos que culminan con la absorción de glucosa desde la sangre. Niveles alterados de insulina conducen a graves trastornos tales como diabetes tipos I y II. La diabetes tipo I es una enfermedad potencialmente mortal en la que el paciente debe autoadministrarse diariamente múltiples dosis de insulina para su supervivencia. La diabetes tipo II es también una grave enfermedad médica en la que los niveles endógenos de insulina ya no pueden mantener niveles correctos de glucemia para el paciente debido a una tolerancia desarrollada por el paciente a niveles endógenos de insulina. Con el fin de reducir la aparición de consecuencias a largo plazo, se hace necesario un tratamiento con insulina tras el fallo en el cambio de estilo de vida o cuando los fármacos tradicionales que controlan la glucemia se vuelven ineficaces.
El éxito en el control del trastorno glucémico está sumamente relacionado con la conformidad de los pacientes con el tratamiento, y es deseable reducir la frecuencia de inyección necesaria. Para hacer esto, sería sumamente deseable disponer de un nuevo derivado de insulina de larga duración.
Jonassen et al Fatty acid acylated insulins display protracted action due to binding serum albumin' Peptide Science: Present and Future, proceedings of the international peptide symposium (1999) 674-677, dan a conocer un derivado de insulina en el que un aminoácido lisina en la posición B29 está selectivamente acilado mediante ácidos grasos. Como resultado, se encuentra que el derivado de insulina tiene una afinidad de unión aumentada por la albúmina sérica humana.
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Sumario de la invención
Según la presente invención, se proporciona un derivado de insulina que comprende una molécula de insulina y un grupo reactivo para unir covalentemente un componente sanguíneo, siendo dicho grupo reactivo un grupo que contiene maleimido, y en el que el grupo reactivo está acoplado a un grupo amino disponible de la molécula de insulina que se selecciona de los grupos \alpha-amino de los aminoácidos del extremo N-terminal de las cadenas A y B o un grupo \varepsilon-amino de Lys B29.
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(Fórmula pasa a página siguiente)
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En una realización preferida de la presente invención, la molécula de insulina es de fórmula I:
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y el grupo reactivo está acoplado a un aminoácido de la molécula de insulina en una posición seleccionada de las posiciones Gly A1, Phe B1 y Lys B29.
En una realización preferida de la presente invención, el grupo reactivo es MPA (ácido 3-maleimidopropiónico).
En una realización preferida de la presente invención, el grupo reactivo está acoplado a un aminoácido de la molécula de insulina mediante un conector, tal como, pero sin limitarse a etilendiamina (EDA), ácido 2-[2-(2-amino)etoxi)]etoxi-acético (AEEA), AEEA-AEEA, -NH_{2}-(CH_{2})_{n}-COOH en el que n es un número entero entre 1 y 20 y un motivo de cadena de alquilo (C1-C10) saturada o insaturada en la que podrían incorporarse átomos de oxígeno, nitrógeno o azufre, tales como, pero sin limitarse a glicina, ácido 3-aminopropiónico (APA), ácido 8-aminooctanoico (OA) y ácido 4-aminobenzoico (APhA) y combinación de los mismos.
En una realización preferida de la presente invención, el componente sanguíneo es una proteína sanguínea, más preferiblemente es albúmina sérica.
Según la presente invención, se proporciona un conjugado de insulina que comprende un derivado de insulina de la presente invención y un componente sanguíneo, en el que el grupo reactivo y el componente sanguíneo están conjugados a través de un enlace covalente formado entre dicho grupo reactivo y dicho componente sanguíneo. Este conjugado se forma in vivo o ex vivo.
Según la presente invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende el derivado de insulina de la presente invención en asociación con un vehículo farmacéuticamente aceptable.
Según la presente invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende el conjugado de insulina de la presente invención en asociación con un vehículo farmacéuticamente aceptable.
Según la presente invención, se proporciona un procedimiento para tratar un trastorno o una enfermedad relacionado con la glucemia en un sujeto que padece dicho trastorno o dicha enfermedad relacionada con la glucemia, que comprende administrar al menos uno de los derivados de insulina de la presente invención, el conjugado de la presente invención y las composiciones farmacéuticas de la presente invención al sujeto.
Breve descripción de los dibujos
La figura 1 ilustra del ejemplo I al ejemplo VIII derivados de insulina humana nativa;
la figura 2 ilustra la unión competitiva de insulina, derivados de insulina y conjugado de derivados de insulina sobre la membrana del hígado de ratas wistar;
la figura 3 ilustra la unión competitiva de insulina, derivados de insulina y conjugado de derivados de insulina sobre membranas de hígado de ratas wistar;
las figuras 4A, 4B, 4C, 5A, 5B, 6A, 6B presentan diversas fases de estadios de diferenciación de adipocitos 3T3 L1;
la figura 7 ilustra el transporte de glucosa en adipocitos 3T3-L1 para la insulina, ejemplo III y IV y su conjugado correspondiente;
la figura 8 ilustra el transporte de glucosa en células grasas del epidídimo de adipocitos de ratas wistar para la insulina, ejemplo III y VI y su conjugado correspondiente;
la figura 9 ilustra la delta glucemia en función del tiempo en animales tratados con insulina a 3,6 mg/kg;
la figura 10 ilustra la delta glucemia en función del tiempo en animales tratados con derivados de insulina de los ejemplos I, II y III a 3,6 mg/kg;
la figura 11 ilustra la delta glucemia en función del tiempo en animales tratados con derivados de insulina de los ejemplos I, II y III a 17,9 mg/kg;
la figura 12 ilustra la delta glucemia en función del tiempo en animales tratados con insulina y derivado de insulina del ejemplo I a 3,6 mg/kg y derivado de insulina del ejemplo I a 17,9 mg/kg;
la figura 13 ilustra la delta glucemia en función del tiempo en animales tratados con insulina y derivado de insulina del ejemplo II a 3,6 mg/kg y derivado de insulina del ejemplo II a 17,9 mg/kg;
la figura 14 ilustra la delta glucemia en función del tiempo en animales tratados con insulina y derivado de insulina del ejemplo III a 3,6 mg/kg y derivado de insulina del ejemplo III a 17,9 mg/kg;
la figura 15 ilustra el perfil farmacocinético de la insulina nativa inyectada por vía subcutánea y por vía intravenosa;
la figura 16 ilustra el perfil farmacocinético del conjugado del ejemplo III inyectado por vía subcutánea y por vía intravenosa;
la figura 17 ilustra el perfil farmacocinético del ejemplo III inyectado por vía subcutánea y por vía intravenosa;
la figura 18 ilustra el perfil farmacocinético comparativo de la insulina, ejemplo III y el conjugado del ejemplo III inyectados por vía subcutánea;
la figura 19 ilustra el perfil farmacocinético comparativo de la insulina, ejemplo III y el conjugado del ejemplo III inyectados por vía intravenosa;
la figura 20 ilustra el perfil farmacodinámico comparativo tras inyecciones subcutáneas de insulina, ejemplo I a IV y vehículo en rata diabética inducida con estreptozocina;
la figura 21 ilustra el perfil farmacodinámico comparativo tras inyecciones subcutáneas de insulina, el conjugado del ejemplo I a IV y vehículo en rata diabética inducida con estreptozocina;
la figura 22 ilustra el perfil farmacodinámico comparativo de inyecciones subcutáneas repetidas de ejemplo II I (día 1 frente a día 6 frente a día 12 frente a control); y
la figura 23 ilustra el perfil farmacodinámico comparativo de inyecciones subcutáneas repetidas del conjugado del ejemplo III (día 1 frente a día 6 frente a día 12 frente a control).
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Descripción detallada de la invención
Según la presente invención, se proporciona un derivado de insulina de larga duración. Más particularmente, el derivado de insulina comprende una molécula de insulina y un grupo reactivo acoplado a la misma, siendo el grupo reactivo para unir covalentemente un componente sanguíneo. En la presente solicitud, se pretende que la unión covalente, que da como resultado la formación de un conjugado de insulina-grupo reactivo-componente sanguíneo pueda formarse in vivo tras la administración del derivado de insulina de la presente invención. Se pretende también que la unión covalente pueda producirse ex vivo poniendo en contacto el derivado de insulina de la presente invención con una fuente de albúmina que puede ser albúmina recombinante, o extraída del plasma de un sujeto, o que se proporciona a partir de cualquier otra fuente adecuada, fuente que podría conocer un experto en la técnica.
La molécula de insulina puede ser insulina humana nativa. (Véase la secuencia de la insulina humana nativa a continuación en la fórmula I) o un análogo de la misma tal como una molécula de insulina con sustitución/sustituciones de aminoácidos, deleción/deleciones de aminoácidos o adición/adiciones de aminoácidos. Lo siguiente se enumera como ejemplos de análogo de insulina que puede usarse según la presente invención sin intención de limitar el presente análogo de ninguna manera: insulina glargina denominada Lantus® de Aventis Pharmaceuticals Inc., que tiene una glicina sustituida en la posición A21 y dos residuos de arginina añadidos en el extremo C-terminal de la de la cadena B; insulina detemir denominada Levemir® de Novo Nordisk A/S, que es una insulina humana nativa en la que se deleciona la treonina en la posición B30 y se añade tetradecanoil en la cadena lateral de la lisina B29; insulina lispro denominada Humalog® de Eli Lilly, que es insulina humana Lys B28, Pro B29; insulina aspart denominada NovoLog® de Novo Nordisk A/S, que es insulina humana Asp B28; e insulina glulisina denominada Apidra® de Aventis, que es insulina humana Lys B3, Glu B29.
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El grupo reactivo puede acoplarse a diferentes funcionalidades en la molécula de insulina o análogo de la misma. Preferiblemente, el grupo reactivo está acoplado a un grupo amino disponible de la molécula de insulina, tal como los grupos a-amino del aminoácido del extremo N-terminal de las cadenas A y B o el grupo \varepsilon-amino de Lys B29. Según la invención, el análogo de insulina que contiene aminoácido(s) sustituido(s) y/o añadido(s) puede contener un grupo amino adicional para acoplar el grupo reactivo; u otras funcionalidades apropiadas para acoplar el grupo reactivo al mismo. Grupos reactivos preferidos que pueden unirse covalentemente a un componente sanguíneo in vivo o ex vivo, son aceptores de Michael (resto carbonilo \alpha,\beta-insaturado), grupos que contienen succinimidilo y grupos que contienen maleimido. El grupo reactivo más preferido es un grupo que contiene maleimido, y más particularmente MPA (ácido 3-maleimidopropiónico).
Opcionalmente, el grupo reactivo está acoplado opcionalmente a la molécula de insulina mediante un conector. El conector se selecciona preferiblemente del grupo que consiste en motivos de hidroxietilo tales como ácido (2-amino)etoxi-acético (AEA), etilendiamina (EDA), ácido amino-etoxi-etoxi-succinímico (AEES), ácido 2-[2-(2-amino)etoxi)]etoxi-acético (AEEA), AEEA-AEEA, -NH_{2}-(CH_{2})_{n}-COOH en el que n es un número entero desde 1 hasta 20; una o más cadenas de alquilo (C1-C10) saturadas o insaturadas en las que podrían incorporarse motivos con átomos de oxígeno, nitrógeno o azufre tales como glicina, ácido 3-aminopropiónico (APA), ácido 8-aminooctanoico (OA), ácido 4-aminobenzoico (APhA). Los ejemplos de combinaciones de conectores incluyen, sin limitaciones, AEEA-EDA, AEEA-AEEA, AEA-AEEA, AEES-AEES y similares. El conector preferido es el ácido 8-aminooctanoico (AOA) o el uso de ningún conector con el grupo reactivo MPA. Un experto en la técnica conocería fácilmente qué tipo de conector es adecuado para el fin de la presente invención.
La presente invención también se refiere a un conjugado de insulina. El conjugado comprende un derivado de insulina en el que su grupo reactivo ha reaccionado con un componente sanguíneo in vivo o ex vivo de modo que se forma un enlace covalente. Por tanto, el conjugado puede formarse in vivo mediante la administración del derivado de insulina, o ex vivo poniendo en contacto el derivado de insulina con una disolución sanguínea o componentes sanguíneos purificados ex vivo en condiciones que permiten la formación del enlace covalente. Pueden proporcionarse componentes sanguíneos purificados mediante extracción y purificación a partir de una muestra de sangre o producirse mediante técnicas recombinantes. El componente sanguíneo preferido es una proteína sanguínea, y más preferiblemente, albúmina sérica.
La presente invención se refiere además a un procedimiento para tratar trastornos o enfermedades relacionados con la glucemia, que comprende la administración de los derivados de insulina o conjugados de insulina. Los trastornos o las enfermedades relacionados con la glucemia incluyen diabetes de tipo I y II y diabetes gestacional. Se sabe también que la insulina es un factor de crecimiento y por tanto los derivados de insulina o conjugados de insulina de la presente invención pueden ser útiles en administración tópica para curar heridas y otras indicaciones relacionadas.
Los siguientes ejemplos son para el fin de ilustrar adicionalmente la invención tal como se describió anteriormente en vez de para el fin de limitar el alcance de la presente invención.
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Ejemplos
La figura 1 ilustra la molécula de insulina y los sitios Gly A1, Phe B1 y Lys B29 a los que se hace referencia a lo largo de los siguientes ejemplos.
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Ejemplo I Síntesis de (Gly A1)-MPA-insulina
Se disolvió insulina (100 mg) en DMF (dimetilformamida) (2 ml) y TFA (100 ul). A la disolución, se le añadieron NMM (4-metilmorfolina, 200 ul) y MPA-OSu (3-maleimidopropanoato de N-succinimidilo, 9,2 mg, 2,5 equivalentes) y se agitó la reacción durante 2 h. Se extinguió la reacción mediante adición de agua y se ajustó a pH 4 con AcOH (ácido acético). Se añadió acetonitrilo para disolver el precipitado y el volumen total de agua/acetonitrilo (3:1) era de 20 ml. Se inyectó la disolución en una HPLC semi-preparativa. Columna Phenomenex Luna fenil-hexilo 10 m de 21 mm X 250 mm equilibrada con una disolución acuosa de TFA (TFA al 0,1% en H_{2}O, disolvente A) y una disolución de TFA en acetonitrilo (TFA al 0,1% en acetonitrilo, disolvente B). Se logró la elución a 9,5 ml/min. haciendo pasar un gradiente del 27% al 31% de B a lo largo de 120 min. Se detectaron las fracciones que contenían péptidos mediante absorbancia UV a 214 nm y 254 nm. Se recogieron las fracciones en alícuotas de 9,5 ml. Se identificaron las fracciones que contenían el perfil de producto deseado mediante detección de masa tras inyección directa sobre CL/EM. Se recogieron las fracciones puras a Rt = 36-46 min., se combinaron y se liofilizaron dando un polvo blanco (40 mg) junto con 23 mg de insulina recuperada.
La masa calculada es de 5958,5 g/mol, y la medida mediante CL-EM es de 5958,0 g/mol.
La tabla 1 muestra el análisis de la secuencia de aminoácidos (degradación de Edman usando isotiocianato de fenilo) que se realizó para confirmar que el extremo N-terminal de la cadena A estaba bloqueado y que el extremo N-terminal de la cadena B (fenilalanina) estada todavía libre.
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TABLA 1 
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TABLA 1 (continuación)
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Ejemplo II Síntesis de (Phe B1)-MPA-insulina
Se disolvió insulina (100 mg) en DMSO (dimetilsulfóxido) (4 ml) y Et_{3}N (trietilamina) (100 ul) con sonicación. A la disolución, se le añadió Boc_{2}O (dicarbonato de di-terc-butilo) (9,3 mg, 2,5 equivalentes) y se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 30 min. Se extinguió la reacción mediante adición de agua (15 ml) y acetonitrilo (5 ml) y se ajustó la disolución a pH 4 con AcOH. Se inyectó la disolución en una HPCL semi-preparativa. Columna Phenomenex Luna fenil-hexilo 10 m de 21 mm X 250 mm equilibrada con una disolución acuosa de TFA (TFA al 0,1% en H_{2}O, disolvente A) y una disolución de TFA en acetonitrilo (TFA al 0,1% en acetonitrilo, disolvente B). Se logró la elución a 9,5 ml/min. haciendo pasar un gradiente del 27% al 40% de B a lo largo de 120 min. Se detectaron las fracciones que contenían péptidos mediante absorbancia UV a 214 nm y 254 nm. Se recogieron las fracciones en alícuotas de 9,5 ml. Se identificaron las fracciones que contenían el perfil de producto deseado mediante detección de masa tras inyección directa sobre CL/EM. Se aislaron tres productos (Boc-insulina, Gly A1 Lys B29-BisBoc-insulina y TrisBoc-insulina) y se combinaron las fracciones de (GlyA1 Lys B29)-BisBoc-insulina deseadas y se liofilizaron dando un polvo blanco (72 mg).
Se hizo reaccionar (Gly A1 Lys B29)-BisBoc-insulina (51 mg) en DMF (3 ml) con MPA-OSu (36 mg) en presencia de Et_{3}N (30 ul). Se agitó la reacción durante 2 h a temperatura ambiente. Se evaporó la DMF mediante un a vacío. Se trató el residuo con TFA (2 ml) durante 10 min. y luego se evaporó el TFA. Se disolvió el producto bruto en agua/acetonitrilo (3:1) y se inyectó la disolución en una HPCL semi-preparativa. Columna Phenomenex Luna fenil-hexilo 10 m de 21 mm X 250 mm equilibrada con una disolución acuosa de TFA (TFA al 0,1% en H_{2}O, disolvente A) y una disolución de TFA en acetonitrilo (TFA al 0,1% en CH3CN, disolvente B). Se logró la elución a 9,5 ml/min. haciendo pasar un gradiente del 27% al 32% de B a lo largo de 120 min. Se detectaron las fracciones que contenían péptidos mediante absorbancia UV a 214 nm y 254 nm. Se recogieron las fracciones en alícuotas de 9,5 ml. Se identificaron las fracciones que contenían el perfil de producto deseado mediante detección de masa tras inyección directa sobre CL/EM. Se combinaron las fracciones puras y se liofilizaron dando un polvo blanco (29 mg).
La masa calculada es de 5958,5 g/mol, y la medida mediante CL-EM es de 5958,4 g/mol.
Se usó el análisis de la secuencia de aminoácidos (degradación de Edman usando isotiocianato de fenilo) para confirmar que el extremo N-terminal de la cadena B estaba bloqueado y que el extremo N-terminal de la cadena A (glicina) estaba todavía libre (véase la tabla 1).
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Ejemplo III Síntesis de (B1)-MPA-OA-insulina
Se hizo reaccionar (Gly A1 Lys B29)-BisBoc-insulina (39 mg) en DMF (3 ml) y Et_{3}N (30 ul) con MPA-OA-OSu ([8-N-(3-maleimidopropanilcarbonil)aminooctanoato de N-succinimidilo] 25 mg) durante 4 h. Se evaporó la DMF y se trató el residuo con TFA durante 10 min. Tras la evaporación del TFA, se disolvió el residuo en agua/acetonitrilo (1:3). Se inyectó la disolución en una HPCL semi-preparativa. Columna Phenomenex Luna fenil-hexilo 10 m de 21 mm X 250 mm equilibrada con una disolución acuosa de TFA (TFA al 0,1% en H_{2}O, disolvente A) y una disolución de TFA en acetonitrilo (TFA al 0,1% en acetonitrilo, disolvente B). Se logró la elución a 9,5 ml/min. haciendo pasar un gradiente del 27% al 36% de B a lo largo de 120 min. Se detectaron las fracciones que contenían péptidos mediante absorbancia UV a 214 nm y 254 nm. Se recogieron las fracciones en alícuotas de 9,5 ml. Se identificaron las fracciones que contenían el perfil de producto deseado mediante detección de masa tras inyección directa sobre CL/EM. Se combinaron las fracciones puras y se liofilizaron dando un polvo blanco (21 mg).
La masa calculada es de 6099,5 g/mol, y la medida mediante CL-EM es de 6099,6 g/mol.
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Ejemplo IV Síntesis de (Lys B29)-MPA-insulina
Se disolvió insulina (74 mg) en DMSO (2 ml) y AcOH (46 ul). A la disolución se le añadió Boc_{2}O (6,9 mg, 2,5 equivalentes) y se agitó la reacción durante 5 h a temperatura ambiente. Se añadieron agua (15 ml) y acetonitrilo (5 ml) y se inyectó la disolución en una columna de HPCL semi-preparativa (C18 fenil-hexilo) en un caudal de 9,5 ml/min. y con un gradiente desde el 27-40% a lo largo de 120 min. Se combinaron las fracciones a 43 min. y se liofilizaron dando (Gly A1 Phe Bl)-Boc2-insulina (30 mg).
Se hizo reaccionar (Gly A1 Phe B1)-Boc_{2}-insulina (30 mg) en DMF (2 ml) y NMM (4-metilmorfolina, 100 ul) con MPA-OSu (10 mg) durante 60 min. Se evaporó la DMF y se trató el residuo con TFA durante 10 min. Se disolvió el residuo en agua/acetonitrilo (3:1) y se inyectó la disolución en una HPCL semi-preparativa. Columna Phenomenex Luna fenil-hexilo 10 m de 21 mm X 250 mm equilibrada con una disolución acuosa de TFA (TFA al 0,1% en H_{2}O, disolvente A) y una disolución de TFA en acetonitrilo (TFA al 0,1% en acetonitrilo, disolvente B). Se logró la elución a 9,5 ml/min. haciendo pasar un gradiente del 27% al 32% de B a lo largo de 120 min. Se detectaron las fracciones que contenían péptidos mediante absorbancia UV a 214 nm y 254 nm. Se recogieron las fracciones en alícuotas de 9,5 ml. Se identificaron las fracciones que contenían el perfil de producto deseado mediante detección de masa tras inyección directa sobre CL/EM. Se combinaron las fracciones puras y se liofilizaron dando un polvo blanco (22,2 mg).
La masa calculada es de 5958,5 g/mol, y la medida mediante CL-EM es de 5958,0 g/mol.
Se usó el análisis de la secuencia de aminoácidos (degradación de Edman usando isotiocianato de fenilo) para confirmar que tanto el extremo N-terminal de la cadena B (fenilalanina) como el de la cadena A (glicina) estaban libres (véase la tabla 1).
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Ejemplo V Síntesis del conector MPA-(AEES)_{2}-COOH
Se llevó a cabo la cromatografía en columna de resolución rápida usando un sistema modular de "cromatografía de resolución rápida 40i" Biotage®. Se realizaron las purificaciones mediante HPCL semipreparativa en un sistema "Breeze" de la serie 1500 de Waters usando una columna Phenomex luna (RP- 18, fenil-hexilo 10 u de 250 X 21,2 mm) con un caudal de fase móvil de 9,5 ml/min. Se usó un sistema Gilson 690 para la purificación a escala preparativa usando una columna Phenomex luna (RP-18, fenil-hexilo 10 u de 250 X 50,0 mm) con un caudal de fase móvil de 50 ml/min. Se usó un gradiente de acetonitrilo (CH_{3}CN) (TFA al 0,1%) en agua (TFA 0,1%) con detalles adicionales indicados en cada procedimiento sintético del compuesto. Se realizó la CL-EM usando un espectrómetro de masas de cuadrupolo sencillo LC-MSD de la serie 1100 de Agilent con una fuente de electropulverización ES1.
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Síntesis del conector MPA-(AEES)_{2}-COOH
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Ejemplo VI Síntesis de (Phe B1)-MPA-(AEES)_{2}-insulina
Se hizo reaccionar 2-(2-aminoetoxi)etanol (50,0 g) en metanol (150 ml) con Boc_{2}O (93,4 g) durante 30 min. Se evaporó el metanol a vacío y se llevó el residuo a acetato de etilo, se lavó con agua, salmuera y se secó con sulfato de sodio. Tras la evaporación del disolvente, se usó el producto bruto para la siguiente etapa. EM m/z 205.
Se disolvió el alcohol protegido en N,N-dimetilformamida (500 ml) en presencia de Et_{3}N (66 ml). Se añadió gota a gota MsCl (cloruro de mesilato) (33,4 ml) a 0ºC a lo largo de 30 min. y luego se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Entonces se añadió NaN_{3} (127,6 g) a la mezcla de reacción seguido de NMM (N-metilmorfolina, 215 ml) y se agitó la reacción a 40-50ºC durante 16 h. Se vertió la mezcla de reacción en acetato de etilo (2 l) y se lavó con agua. Se extrajo de nuevo la fase de agua con acetato de etilo (2 l) y se lavaron las fases de acetato de etilo combinadas con agua, salmuera y se secaron. Tras la evaporación del disolvente, se usó el producto bruto para la siguiente etapa (101,4 g contienen algo de DMF). EM m/z 231.
Se disolvió el producto bruto (62,4 g) en metanol (300 ml) seguido de la adición de Pd(OAc)_{2} (3,0 g) y ácido fórmico (96%, 62 g). Tras la finalización de la reacción, se eliminaron las especies de Pd mediante filtración a través de Celite. Se eliminó el metanol a vacío y se secó adicionalmente a vacío. Se usó el producto bruto en la siguiente etapa.
Se disolvió el producto bruto en diclorometano y se neutralizó mediante Et_{3}N hasta que era básico. Se añadió anhídrido succínico (32,3 g) en una porción. Se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 1 h. Se eliminó el disolvente a vacío y se acidificó el residuo mediante HCl 1 N hasta pH 3. Se extrajo el producto con acetato de etilo. Se hizo pasar la fase de acetato de etilo a través de un tapón de gel de sílice (1 kg). Entonces se lavó el gel de sílice con metanol al 2-4% en acetato de etilo. Se combinaron las fracciones puras (tal como se valoró mediante cromatografía en capa fina) y se eliminó el disolvente a vacío dando Boc-AEES como un residuo aceitoso (36 g, 44%). EM m/z 305.
Se trató Boc-AEES (5,5 g) con N-hidroxisuccinimida (NHS, 4,57 g) y clorhidrato de etil-(dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC, 7,62 g) en diclorometano (30 ml) durante 2 h. Se vertió el éster NHS en acetato de etilo (500 ml), se lavó con HCl 0,1 N y se secó con sulfato de sodio. Se eliminó el disolvente a vacío y se usó el residuo como tal en la siguiente etapa.
Se trató Boc-AEES (6,05 g) con ácido trifluoroacético (TFA, 10 ml) durante 10 min. Se eliminó el TFA a vacío y se secó adicionalmente a vacío. Se disolvió el aminoácido (AEES) en N,N-dimetilformamida (20 ml) y se basificó con NMM en exceso. Entonces se añadió el producto bruto del ejemplo V y se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 1 h. Se evaporó el disolvente a presión reducida y se inyectó el residuo en HPCL preparativa usando un gradiente del 5-40% a lo largo de 60 min. Se eliminó el disolvente y se secó el residuo a vacío dando Boc-(AEES)_{2}-COOH como un aceite (5,64 g, 84%). EM m/z 478.
Se trató Boc-(AEES)_{2}-COOH (3,60 g) con ácido trifluoroacético (TFA, 10 ml) durante 10 min. Se eliminó el TFA a vacío y se secó adicionalmente a vacío. Se disolvió el aminoácido (AEES)_{2} en N,N-dimetilformamida y se basificó con NMM. Se añadió MPA-OSu (2,94 g) y se agitó la mezcla durante 30 min. Se eliminó la N,N-dimetilformamida a vacío. Se disolvió el residuo en agua y se inyectó en HPCL preparativa usando un gradiente del 5-40% a lo largo de 60 min. Se combinaron las fracciones puras y se eliminó el disolvente dando MPA-(AEES)_{2}-COOH como un sólido de color hueso (3,8 g, 95%). EM m/z 542,2.
Se disolvió MPA-(AEES)_{2}-COOH (3,04 g) en N,N-dimetilformamida (20 ml) y en presencia de NMM (1,13 ml) y se trató con cloroformiato de p-nitrofenilo (1,13 g). Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 2 h. Se eliminó la N,N-dimetilformamida a vacío. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna de resolución rápida usando el sistema Biotage®. Se enjuagó la columna con acetato de etilo (500 ml) seguido de metanol al 10% en acetato de etilo (1 l). Se combinaron las fracciones puras y se eliminó el disolvente dando MPA-(AEES)_{2}-CO_{2}PNP como un sólido (1,39 g, 37%). EM m/z 663.
Se acopló Gly A1, Lys B29-BisBoc-insulina (200 mg) en N,N-dimetilformamida (10 ml) con MPA-(AEES)_{2}-CO_{2}PNP del ejemplo VIII (200 mg) en presencia de NMM (200 ul) a temperatura ambiente durante 16 h. Se eliminó la N,N-dimetilformamida a vacío y se trató el residuo con TFA durante 10 min. Se eliminó el TFA a vacío, se disolvió el residuo en agua y se inyectó en HPCL usando un gradiente del 27-32% a lo largo de 120 min. Se combinaron las fracciones puras y se liofilizó el disolvente dando (Phe B1)-MPA(AEES)_{2}-insulina como un polvo blanco (95,0 mg, 43,7%). EM m/z 6330,4.
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Ejemplo VII Síntesis de (B29)-MPA(AEES)_{2}-insulina
Se acopló Gly A1 Phe B1-BisBoc-insulina (200 mg) en N,N-dimetilformamida (10 ml) con MPA-(AEES)_{2}-CO2PNP como del ejemplo VI (200 mg) en presencia de NMM (200 ul) a temperatura ambiente durante 16 h. Se eliminó la N,N-dimetilformamida a vacío y se trató el residuo con TFA durante 10 min. Tras eliminar el TFA a vacío, se disolvió el residuo en agua y se inyectó en HPCL usando un gradiente del 27-32% a lo largo de 120 min. Se combinaron las fracciones puras y se liofilizó el disolvente dando (Lys B29)-MPA(AEES)_{2}-insulina como un polvo blanco (56,3 mg, 25,9%). EM m/z 6328,8.
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Ejemplo VIII Síntesis de (B29)-MPA(OA)-insulina
Se acopló Gly A1 Phe B1-BisBoc-insulina (205 mg) en N,N-dimetilformamida (10 ml) con MPA-OA-CO_{2}Su (139 mg) en presencia de NMM (20 ul) a temperatura ambiente durante 16 h. Se eliminó el disolvente a vacío y se trató el residuo con TFA durante 10 min. Tras eliminar el TFA a vacío, se disolvió el residuo en agua y se inyectó en HPCL usando un gradiente del 27-36% a lo largo de 120 min. Se combinaron las fracciones puras y se liofilizó el disolvente dando (Lys B29)-MPA(OA)-insulina como un polvo blanco (64,2 mg, 31%). EM m/z 6098,8.
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Ejemplo IX Ensayos de unión in vitro
Se incubaron membranas de hígado de ratas Wistar con [1251]insulina y concentraciones crecientes de insulina, DAC:insulina tal como se describe en la figura 1 y su conjugado correspondiente durante 16 horas a 4ºC. Se filtraron las membranas y se lavaron 3 veces y se contaron los filtros para determinar la [1251]insulina específicamente unida. Se calculó la CI50 usando el programa GraphPad Prism.
Los resultados de la CI50 se ilustran en la tabla 2.
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TABLA 2
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La figura 2 y la figura 3 ilustran la unión de insulina en membrana de hígado de rata en cuanto al % de inhibición en función de la concentración del derivado de insulina de la presente invención.
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Ejemplo X Bioactividad in vitro
Se usó la captación de glucosa en adipocitos para evaluar la actividad in vitro. Se diferenciaron células 3T3-L1, una línea celular de fibroblastos murina, en adipocitos para su uso en el bioensayo. Se sembraron en placa las células 3T3-L1 y se hicieron crecer hasta la confluencia en DMEM y 10% de FBS, seguido de una incubación durante dos días. Se indujo la diferenciación añadiendo dexametasona e insulina (D0). En el día 7, más del 90% de las células presentaban un fenotipo de adipocitos, es decir, una acumulación de gotitas de lípidos. Las figuras 4A-4C muestran preadipocitos, células tras 3 días y adipocitos a los 7 días. Las figuras 5A y 5B muestran la tinción con aceite rojo O de adipocitos a los 4 días y adipocitos a los 7 días. Las figuras 6A y 6B muestran la tinción con aceite rojo O y azul de metileno a los 4 días y a los 7 días.
Se privaron de alimento los adipocitos 3T3-L1 durante la noche en DMEM que contenía glucosa 5 mM y 0,5% de FBS. Se aclararon las células en tampón Kreb's-Ringer-Hepes que contenía BSA al 1% y se incubaron con concentraciones crecientes de insulina, DAC:derivados de insulina y su conjugado correspondiente durante 20 minutos a 37ºC y con [^{14}C]-2-desoxi-D-glucosa (1 \muCi/pocillo) durante otros 20 minutos. Se solubilizaron las células y se midió la radiactividad. Se calculó la captación de glucosa (%) frente al control de insulina y se calculó la CE50 usando el programa GraphPad Prism^{TM}.
La tabla 3 muestra los resultados de la CE50 para los compuestos sometidos a prueba y la figura 7 ilustra la captación de glucosa en % del control en función de la concentración (M) de los compuestos.
TABLA 3
8
Ejemplo XI
Además, se usó la captación de glucosa en otra fuente de adipocitos para evaluar la actividad in vitro. Se usa grasa del epidídimo obtenida de ratas macho derivadas Wistar que pesaban 175 g \pm 25 g. Se degrada el tejido (0,03 g/ml) mediante colagenasa en disolución de HEPES modificada pH 7,4 a 37ºC. Se incuba el compuesto de prueba y/o el vehículo con alícuotas de 500 \mul en tampón HEPES modificado pH 7,4 y entonces se añade D-[3-3H]glucosa (2,5 \muCi/ml) durante una incubación de 2 horas. El aumento de la incorporación de glucosa inducido por el compuesto de prueba en más del 50 por ciento o más (\geq50%) en relación con la respuesta de insulina 2 nM control indica una posible actividad agonista del receptor de insulina. La inhibición por el compuesto de prueba de la respuesta de incorporación de glucosa inducida por insulina en más del 50% indica una actividad antagonista del receptor de insulina. Se examinan los compuestos a 10, 1, 0,1, 0,01 y 0,001 \muM.
La tabla 4 muestra los resultados de la CE50 para los compuestos sometidos a prueba y la figura 8 ilustra la captación de glucosa en % del control en función de la concentración (M) de los compuestos.
TABLA 4
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Ejemplo XII Experimentos in vivo
Se comparan la eficacia hipoglucemiante de la insulina humana recombinante frente a derivados de insulina de la presente invención cuando se administran por vía subcutánea a ratones db/db hembra diabéticos.
Se administraron los compuestos de prueba mediante una única inyección en bolo subcutánea en ratones db/db hembra de 5-6 semanas de edad que pesaban de 24,3 g a 33,3 g. El volumen promedio de disolución de dosificación inyectada fue de 0,35 ml/ratón (12,5 ml/kg).
Se proporciona insulina humana recombinante (E. coli) (denominada a continuación en el presente documento "insulina rH") por ICNTM a una concentración de 28 UI/mg.
Se prepararon disoluciones madre de derivados de insulina a 14,29 mg/ml (\sim 400 UI/ml) reconstituyendo los derivados de insulina sintetizados con agua acidificada (- pH 2). Se diluyeron posteriormente las disoluciones madre con NaCl al 0,9% y se filtraron a 0,22 \mum (Millex GV) obteniendo las disoluciones de dosificación mostradas en la tabla 5. El grupo 1 recibió NaCl al 0,9% según la USP como disolución control.
TABLA 5
10
Los grupos y tratamientos se resumen en la tabla 6.
TABLA 6
11
Se realizó la toma de muestras de sangre (una gota) a través de la punta de la cola y se determinaron los niveles de glucosa usando un glucómetro manual (modelo: One Touch UltraTM, Lifescan Canadá). Se determinaron los niveles de glucosa en sangre para todos los animales una vez antes de la administración (antes de la dosis), y a 1, 2, 3, 4, 6, 24, 30, 48 y 72 horas tras la dosis.
Resultados in vivo
Todos los animales parecían normales antes de la administración de los compuestos sometidos a prueba. Aproximadamente una hora tras la dosis, el grupo 2 de animales tratados por vía subcutánea con 100 UI/kg de insulina humana recombinante (insulina rH) presentó una ligera disminución en la actividad y una marcha no coordinada. Otros animales tratados parecían normales a lo largo de todo el experimento. Se observó una ligera disminución de consumo de alimentos en los animales tratados con 17,9 mg/kg de compuesto del ejemplo III.
La tabla 7 muestra el consumo de alimentos (peso total/jaula (g)) tras una única administración de insulina rH y derivados de insulina.
TABLA 7
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La tabla 8 muestra el consumo de alimentos frente al control (peso total/jaula (g)) tras una única administración de insulina rH y derivados de insulina.
TABLA 8
13
TABLA 8 (continuación)
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La delta glucemia calculada a partir de los niveles de glucosa en sangre del nivel de glucosa tras la dosis frente al nivel de glucosa antes de la dosis para cada ratón individual se notifica en las figuras 9, 10, 11, 12, 13, y 14. En general, los derivados de insulina (ejemplo I, ejemplo II y ejemplo III) pudieron reducir las concentraciones de glucosa en sangre de una manera dependiente de la dosis y la insulina recombinante, sometida a prueba a un nivel de dosis sólo (100 UI/kg) era activa durante 2 horas. A 3,6 mg/kg, el ejemplo 2 era activo como insulina durante las primeras 2 horas mientras que sólo se observó un efecto marginal con el ejemplo I y el ejemplo III. El efecto reductor de la insulina rH era más pronunciado a 17,9 mg/kg ya que se observó durante hasta 24 horas. Aunque el panorama global tiende a demostrar que los derivados de insulina eran activos durante hasta 24 horas (en comparación con el grupo control), es importante indicar que los niveles de glucosa disminuyeron a las 1-2 horas tras la dosis, aumentaron luego a las 3-4 horas y disminuyeron de nuevo a las 6 horas. Esta respuesta de "subida y bajada" podría indicar que los hábitos de alimentación y el metabolismo de los ratones son parámetros importantes que pueden afectar a la eficacia del fármaco. Es importante mencionar que los ratones db/db desarrollan resistencia a la insulina con la edad, lo que podría explicar la dosis de insulina muy alta que tuvo que inyectarse para observar el efecto hipoglucemiante.
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Ejemplo XIII Perfil farmacocinético en ratas normales
Se administraron la insulina rh, el derivado de insulina del ejemplo III y el conjugado del derivado de insulina del ejemplo III a ratas CD macho de 7-8 semanas de edad o bien a 36 hmol/kg por vía subcutánea (sc) o bien a 12 nmol/kg por vía intravenosa (iv). Se tomaron muestras de sangre hasta las 72 horas (solo hasta las 3 horas para animales tratados con insulina rh). Se determinaron los niveles de fármaco usando un kit de ELISA para insulina humana (Linco). Se calcularon los parámetros farmacocinéticos mediante análisis no compartimental usando el programa WinNonlin, N=4 ratas por compuesto/vía. La figura 15 es el perfil farmacocinético de insulina en ratas SD normales en las que se administró insulina sc a 36 nmol/kg e iv a 12 nmol/kg. La figura 16 es el perfil farmacocinético del conjugado del ejemplo III en ratas SD normales en las que se administró el conjugado sc a 36 nmol/kg e iv a 12 nmol/kg. La figura 17 es el perfil farmacocinético del derivado de insulina del ejemplo III en ratas SD normales en las que se administró el derivado de insulina sc a 36 nmol/kg e iv a 12 nmol/kg. La figura 18 es el perfil PK subcutáneo de la administración de insulina, derivado de insulina del ejemplo III y el conjugado del derivado de insulina del ejemplo III. La figura 19 es el perfil PK intravenoso de la administración de insulina, derivado de insulina del ejemplo III y el conjugado del derivado de insulina del ejemplo III.
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Ejemplo XIV Farmacodinámica de dosis única en ratas diabéticas
Se indujo diabetes en ratas CD macho con una única inyección i.v. de estreptozotocina (60 mg/kg). Dos días más tarde, las ratas recibieron una única inyección sc de DAC^{TM}:derivados de insulina a 120 nmol/kg, conjugados preformados a 300 nmol/kg, insulina rh a 20 U/kg (120 nmol/kg) o vehículo. Se midió el nivel de glucosa en sangre con un glucómetro manual justo antes de la inyección y a las 1, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 11, 24, 30 y 48 horas tras la dosis sometiéndose a prueba 5 ratas/grupo excepto para el vehículo que fueron 3 ratas/grupo. La glucemia de ratas normales oscilaba entre 5,2 mmol/l y 7,6 mmol/l.
La figura 20 muestra el nivel de glucosa en sangre en ratas tras la administración de 120 nmol/kg del ejemplo I al IV. La figura 21 muestra el nivel de glucosa en sangre en ratas tras la administración del conjugado correspondiente del ejemplo I al IV de la presente invención a 300 nmol/kg.
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Ejemplo XV Evaluación de la potencia de un DAC:derivado de insulina y su conjugado preformado correspondiente tras la administración subcutánea repetida
Se realizó este ensayo para evaluar la potencia del derivado de insulina del ejemplo II y su conjugado frente a la insulina recombinante humana tras inyecciones subcutáneas repetidas en ratas CD® macho adultas.
Se indujo diabetes tipo I ratas CD® macho en el día 1 de estudio mediante una única inyección intravenosa (i.v.) de estreptozotocina (60 mg/kg, pH 4,5). Se confirmó la hiperglucemia usando un monitor de glucosa en sangre para someter a prueba la sangre. Se administró el compuesto de prueba una vez al día en los días 3 hasta 14 de estudio a 1 ml/kg de peso corporal mediante inyección subcutánea (s.c.). Se sometieron a prueba los niveles de glucosa en sangre justo antes de la administración de la dosis cada día y a las 2,8 y 18 horas tras la administración. Se controlaron diariamente el consumo de alimentos y agua. Se recogieron los pesos corporales en los días 1, 3, 6, 9, 12, 15 y 17 de estudio.
La figura 22 ilustra el perfil diario de glucosa en sangre en el día 1, 6 y 12 para el derivado de insulina del ejemplo III y la figura 23 ilustra el perfil diario de glucosa en sangre en el día 1, 6 y 12 para el conjugado del derivado de insulina del ejemplo III.
Aunque la invención se ha descrito con respecto a realizaciones específicas de la misma, se entenderá que pueden realizarse modificaciones adicionales y esta solicitud pretende cubrir cualquier variación, uso o adaptaciones de la invención siguiendo, en general, los principios de la invención e incluyendo tales desviaciones de la presente descripción tal como se producen dentro de la práctica conocida y habitual dentro de la técnica a la que pertenece la invención y tal como puede aplicarse a las características esenciales expuestas anteriormente en el presente documento, y tal como sigue en el alcance de las reivindicaciones adjuntas.

Claims (27)

1. Un derivado de insulina que comprende una molécula de insulina y un grupo reactivo para unir covalentemente un componente sanguíneo, siendo dicho grupo reactivo un grupo que contiene maleimido, y en el que el grupo reactivo está acoplado a un grupo amino disponible de la molécula de insulina seleccionado de los grupos \alpha-amino de los aminoácidos del extremo N-terminal de las cadenas A y B y el grupo \varepsilon-amino de Lys B29.
2. El derivado de insulina según la reivindicación 1, en el que el grupo amino disponible es el grupo \varepsilon-amino de Lys B29.
3. El derivado de insulina según la reivindicación 1, en el que el grupo amino disponible es el grupo \alpha-amino de Gly A1 o Phe B1.
4. El derivado de insulina según cualquier reivindicación anterior, en el que la molécula de insulina se selecciona de insulina humana nativa o una molécula de insulina con sustitución/sustituciones de aminoácidos, deleción/deleciones de aminoácidos o adición/adiciones de aminoácidos.
5. El derivado de insulina según cualquier reivindicación anterior, en el que la molécula de insulina es de fórmula I:
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y el grupo reactivo está acoplado a un aminoácido de la molécula de insulina en una posición seleccionada de las posiciones Gly A1, Phe B1 y Lys B29.
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6. El derivado de insulina según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que el grupo reactivo acoplado al grupo amino disponible de la molécula de insulina es:
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7. El derivado de insulina según cualquier reivindicación anterior, en el que el grupo reactivo está acoplado al grupo amino disponible de la molécula de insulina mediante un conector.
8. El derivado de insulina según la reivindicación 7, en el que el grupo reactivo se acopla al grupo amino disponible de la molécula de insulina haciendo reaccionar un conector con el grupo reactivo y el grupo amino disponible de la molécula de insulina, y en el que el conector se selecciona del grupo constituido por etilendiamina (EDA), ácido 2-[2-(2-amino)etoxi)]etoxi-acético (AEEA), AEEA-AEEA y NH_{2}-(CH_{2})_{n}-COOH en el que n es un número entero entre 1 y 20.
9. El derivado de insulina según la reivindicación 7, en el que dicho conector es:
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10. El derivado de insulina según la reivindicación 5, en el que la molécula de insulina está acoplada en la Gly terminal de A1 con 3-maleimidopropanamida, y en el que el grupo \alpha-amino de Gly es el nitrógeno de amida de la 3-maleimidopropanamida.
11. El derivado de insulina según la reivindicación 5, en el que la molécula de insulina está acoplada en la Phe terminal de B1 con 3-maleimidopropanamida, y en el que el grupo \alpha-amino de Phe es el nitrógeno de amida de la 3-maleimidopropanamida.
12. El derivado de insulina según la reivindicación 5, en el que la molécula de insulina está acoplada en la Phe terminal de B1 con 8-N-(3-maleimidopropanilcarbonil)aminooctanamida, y en el que el grupo \alpha-amino de Phe es el nitrógeno de amida de la octanamida de 8-N-(3-maleimidopropanilcarbonil)aminooctanamida.
13. El derivado de insulina según la reivindicación 5, en el que la molécula de insulina está acoplada en la B29 Lys con 3-maleimidopropanamida y en el que el grupo \varepsilon-amino de Lys es el nitrógeno de amida de la 3-maleimidopropanamida.
14. El derivado de insulina según cualquier reivindicación anterior, en el que dicho componente sanguíneo es una proteína sanguínea.
15. El derivado de insulina según la reivindicación 14, en el que dicha proteína sanguínea es albúmina sérica.
16. Un conjugado de insulina que comprende un derivado de insulina según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 y un componente sanguíneo, en el que el grupo reactivo está unido covalentemente al componente sanguíneo.
17. El conjugado de insulina según la reivindicación 16, en el que el componente sanguíneo es una proteína sanguínea.
18. El conjugado de insulina según la reivindicación 17, en el que la proteína sanguínea es albúmina sérica.
19. El conjugado de insulina según la reivindicación 16, formándose dicho conjugado ex vivo.
20. El conjugado de insulina según la reivindicación 17, en el que dicha proteína sanguínea es albúmina recombinante.
21. El conjugado de insulina según la reivindicación 16, en el que dicho componente sanguíneo se produce mediante técnicas recombinantes.
22. Uso del derivado según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, o el conjugado según una cualquiera de las reivindicaciones 16 a 21, para la preparación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno o una enfermedad relacionado con la glucemia.
23. El uso según la reivindicación 22, en el que dicho trastorno o dicha enfermedad relacionado con la glucemia se selecciona del grupo constituido por diabetes, diabetes de tipo I, diabetes de tipo II y diabetes gestacional.
24. El uso según la reivindicación 22, en el que el trastorno o la enfermedad relacionado con la glucemia se selecciona del grupo constituido por diabetes de tipo I y diabetes de tipo II.
25. El derivado según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, o el conjugado según una cualquiera de las reivindicaciones 16 a 21, para su uso en el tratamiento de trastornos o enfermedades relacionados con la glucemia.
26. El derivado o conjugado según la reivindicación 25, en el que dicho trastorno o dicha enfermedad relacionado con la glucemia se selecciona del grupo constituido por diabetes, diabetes de tipo I, diabetes de tipo II y diabetes gestacional.
27. El derivado o conjugado según la reivindicación 25, en el que el trastorno o la enfermedad relacionado con la glucemia se selecciona del grupo constituido por diabetes de tipo I y diabetes de tipo II.
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Families Citing this family (31)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090175821A1 (en) * 1999-05-17 2009-07-09 Bridon Dominique P Modified therapeutic peptides with extended half-lives in vivo
US6514500B1 (en) * 1999-10-15 2003-02-04 Conjuchem, Inc. Long lasting synthetic glucagon like peptide {GLP-!}
ES2209885T3 (es) * 1999-05-17 2004-07-01 Conjuchem, Inc. Peptidos insulinotropicos de larga duracion.
CA2436399A1 (en) * 2001-02-16 2002-08-29 Conjuchem Inc. Long lasting glucagon-like peptide 2 (glp-2) for the treatment of gastrointestinal diseases and disorders
TWI376234B (en) 2005-02-01 2012-11-11 Msd Oss Bv Conjugates of a polypeptide and an oligosaccharide
EP2292653B1 (en) 2005-02-02 2014-05-21 Novo Nordisk A/S Novel insulin derivatives
JP5269767B2 (ja) * 2006-05-09 2013-08-21 ノボ・ノルデイスク・エー／エス インスリン誘導体
WO2008034881A1 (en) 2006-09-22 2008-03-27 Novo Nordisk A/S Protease resistant insulin analogues
WO2008047241A2 (en) * 2006-10-16 2008-04-24 Conjuchem Biotechnologies Inc. Modified corticotropin releasing factor peptides and uses thereof
US9387176B2 (en) 2007-04-30 2016-07-12 Novo Nordisk A/S Method for drying a protein composition, a dried protein composition and a pharmaceutical composition comprising the dried protein
WO2009112583A2 (en) 2008-03-14 2009-09-17 Novo Nordisk A/S Protease-stabilized insulin analogues
JP5749155B2 (ja) 2008-03-18 2015-07-15 ノボ・ノルデイスク・エー／エス プロテアーゼ安定化アシル化インスリンアナログ
EP2262539B1 (en) 2008-04-01 2015-07-15 Novo Nordisk A/S Insulin albumin conjugates
CA2750252A1 (en) * 2009-01-28 2010-08-05 Smartcells, Inc. Synthetic conjugates and uses thereof
MX2014012096A (es) 2012-04-11 2014-11-21 Novo Nordisk As Formulaciones de insulina.
WO2013172967A1 (en) 2012-05-17 2013-11-21 Extend Biosciences, Inc Carriers for improved drug delivery
US9896496B2 (en) 2013-10-07 2018-02-20 Novo Nordisk A/S Derivative of an insulin analogue
PE20161153A1 (es) 2014-01-20 2016-10-27 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Insulina de accion prolongada y uso de la misma
AR100639A1 (es) 2014-05-29 2016-10-19 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Composición para tratar diabetes que comprende conjugados de análogos de insulina de acción prolongada y conjugados de péptidos insulinotrópicos de acción prolongada
AR100695A1 (es) 2014-05-30 2016-10-26 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Composición para el tratamiento de diabetes mellitus que comprende insulina y un agonista dual glp-1 / glucagón
KR20160001391A (ko) * 2014-06-27 2016-01-06 한미약품 주식회사 신규한 지속형 인슐린 아날로그 결합체 및 이의 용도
US9616109B2 (en) 2014-10-22 2017-04-11 Extend Biosciences, Inc. Insulin vitamin D conjugates
CA2964463C (en) 2014-10-22 2024-02-13 Extend Biosciences, Inc. Therapeutic vitamin d conjugates
US9789197B2 (en) 2014-10-22 2017-10-17 Extend Biosciences, Inc. RNAi vitamin D conjugates
JP6755886B2 (ja) 2015-05-07 2020-09-16 コデクシス， インコーポレイテッド ペニシリンｇアシラーゼ
UY36870A (es) 2015-08-28 2017-03-31 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Análogos de insulina novedosos
BR112019005637A2 (pt) 2016-09-23 2019-07-30 Hanmi Pharm Ind Co Ltd análogos da insulina com afinidade reduzida para o receptor de insulina e seu uso
ES2886837T3 (es) 2016-12-16 2021-12-21 Novo Nordisk As Composiciones farmacéuticas que contienen insulina
CA3054899A1 (en) 2017-03-23 2018-09-27 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Insulin analog complex with reduced affinity for insulin receptor and use thereof
CN113855678A (zh) * 2021-09-08 2021-12-31 武汉生命奥义生物科技有限公司 一种用于辅助治疗二型糖尿病的组合物
CN115894719B (zh) * 2022-11-24 2023-10-20 武汉禾元生物科技股份有限公司 一种人血清白蛋白胰岛素偶联物及其制备方法

Family Cites Families (57)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3509120A (en) * 1966-12-28 1970-04-28 Squibb & Sons Inc N-terminal mono- and diaminoacyl-insulin
GB1381273A (en) * 1971-01-28 1975-01-22 Nat Res Dev Insulin derivatives
GB1381274A (en) * 1971-01-28 1975-01-22 Nat Res Dev Insulin derivatives
JPS5272284A (en) * 1975-12-12 1977-06-16 Dainippon Pharmaceutical Co Enzymeeimmunoassay reagent
CA1196863A (en) * 1983-06-08 1985-11-19 Mattheus F.A. Goosen Slow release injectable insulin composition
PH25772A (en) * 1985-08-30 1991-10-18 Novo Industri As Insulin analogues, process for their preparation
US5514646A (en) * 1989-02-09 1996-05-07 Chance; Ronald E. Insulin analogs modified at position 29 of the B chain
US5612034A (en) * 1990-10-03 1997-03-18 Redcell, Inc. Super-globuling for in vivo extended lifetimes
US5422339A (en) * 1991-03-19 1995-06-06 Joslin Diabetes Center, Inc. Peptides having insulin autoantibody but not insulin receptor binding capacity
FR2686899B1 (fr) * 1992-01-31 1995-09-01 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux polypeptides biologiquement actifs, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant.
GB9316895D0 (en) * 1993-08-13 1993-09-29 Guy S And St Thomas Hospitals Hepatoselective insulin analogues
DK72793D0 (da) * 1993-06-21 1993-06-21 Novo Nordisk As Nyt produkt
US6342225B1 (en) * 1993-08-13 2002-01-29 Deutshces Wollforschungsinstitut Pharmaceutical active conjugates
US5474978A (en) * 1994-06-16 1995-12-12 Eli Lilly And Company Insulin analog formulations
US5461031A (en) * 1994-06-16 1995-10-24 Eli Lilly And Company Monomeric insulin analog formulations
US5693609A (en) * 1994-11-17 1997-12-02 Eli Lilly And Company Acylated insulin analogs
US6251856B1 (en) * 1995-03-17 2001-06-26 Novo Nordisk A/S Insulin derivatives
DE19616486C5 (de) * 1996-04-25 2016-06-30 Royalty Pharma Collection Trust Verfahren zur Senkung des Blutglukosespiegels in Säugern
US6576636B2 (en) * 1996-05-22 2003-06-10 Protarga, Inc. Method of treating a liver disorder with fatty acid-antiviral agent conjugates
US5866538A (en) * 1996-06-20 1999-02-02 Novo Nordisk A/S Insulin preparations containing NaCl
DE19726167B4 (de) * 1997-06-20 2008-01-24 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Insulin, Verfahren zu seiner Herstellung und es enthaltende pharmazeutische Zubereitung
HUP0004169A3 (en) * 1997-10-24 2001-06-28 Lilly Co Eli Insoluble insulin compositions and process for production thereof
US20020155994A1 (en) * 1997-10-24 2002-10-24 Svend Havelund Aggregates of human insulin derivatives
US6444641B1 (en) * 1997-10-24 2002-09-03 Eli Lilly Company Fatty acid-acylated insulin analogs
ZA989744B (en) * 1997-10-31 2000-04-26 Lilly Co Eli Method for administering acylated insulin.
JP2002501889A (ja) * 1998-02-02 2002-01-22 トラスティーズ オブ タフツ カレッジ グルコース代謝を調節する方法、およびそれに関連する試薬
AU736951C (en) * 1998-03-19 2003-02-20 Bristol-Myers Squibb Company Biphasic controlled release delivery system for high solubility pharmaceuticals and method
CA2334859A1 (en) * 1998-06-12 1999-12-23 Kings College London Insulin analogue
BR9914519A (pt) * 1998-10-13 2001-07-03 Univ Georgia Res Found Peptìdios bioativos estabilizados e métodos de identificação, sìntese e uso
US20030190740A1 (en) * 1998-10-13 2003-10-09 The University Of Georgia Research Foundation, Inc Stabilized bioactive peptides and methods of identification, synthesis, and use
US20090175821A1 (en) * 1999-05-17 2009-07-09 Bridon Dominique P Modified therapeutic peptides with extended half-lives in vivo
US6887470B1 (en) * 1999-09-10 2005-05-03 Conjuchem, Inc. Protection of endogenous therapeutic peptides from peptidase activity through conjugation to blood components
ES2209885T3 (es) * 1999-05-17 2004-07-01 Conjuchem, Inc. Peptidos insulinotropicos de larga duracion.
AU765753B2 (en) * 1999-05-17 2003-09-25 Conjuchem Biotechnologies Inc. Protection of endogenous therapeutic peptides from peptidase activity through conjugation to blood components
US7169889B1 (en) * 1999-06-19 2007-01-30 Biocon Limited Insulin prodrugs hydrolyzable in vivo to yield peglylated insulin
US6309633B1 (en) * 1999-06-19 2001-10-30 Nobex Corporation Amphiphilic drug-oligomer conjugates with hydroyzable lipophile components and methods for making and using the same
US6323311B1 (en) * 1999-09-22 2001-11-27 University Of Utah Research Foundation Synthesis of insulin derivatives
US6586438B2 (en) * 1999-11-03 2003-07-01 Bristol-Myers Squibb Co. Antidiabetic formulation and method
EP1299418A1 (en) * 2000-07-10 2003-04-09 BTG INTERNATIONAL LIMITED (Company No. 2664412) Insulin derivatives and synthesis thereof
US7060675B2 (en) * 2001-02-15 2006-06-13 Nobex Corporation Methods of treating diabetes mellitus
EP1385549A2 (en) * 2001-03-12 2004-02-04 Novartis AG Combination of nateglinide or repaglinide with at least one further antidiabetic compound
US6828297B2 (en) * 2001-06-04 2004-12-07 Nobex Corporation Mixtures of insulin drug-oligomer conjugates comprising polyalkylene glycol, uses thereof, and methods of making same
UA74912C2 (en) * 2001-07-06 2006-02-15 Merck & Co Inc Beta-aminotetrahydroimidazo-(1,2-a)-pyrazines and tetratriazolo-(4,3-a)-pyrazines as inhibitors of dipeptylpeptidase for the treatment or prevention of diabetes
US7196059B2 (en) * 2001-09-07 2007-03-27 Biocon Limited Pharmaceutical compositions of insulin drug-oligomer conjugates and methods of treating diseases therewith
US7166571B2 (en) * 2001-09-07 2007-01-23 Biocon Limited Insulin polypeptide-oligomer conjugates, proinsulin polypeptide-oligomer conjugates and methods of synthesizing same
US6913903B2 (en) * 2001-09-07 2005-07-05 Nobex Corporation Methods of synthesizing insulin polypeptide-oligomer conjugates, and proinsulin polypeptide-oligomer conjugates and methods of synthesizing same
US7312192B2 (en) * 2001-09-07 2007-12-25 Biocon Limited Insulin polypeptide-oligomer conjugates, proinsulin polypeptide-oligomer conjugates and methods of synthesizing same
EP1506003A1 (en) * 2002-05-07 2005-02-16 Novo Nordisk A/S Soluble formulations comprising insulin aspart and insulin detemir
WO2003105768A2 (en) * 2002-06-13 2003-12-24 Nobex Corporation Methods of reducing hypoglycemic episodes in the treatment of diabetes mellitus
US20040138099A1 (en) * 2002-11-29 2004-07-15 Draeger Eberhard Kurt Insulin administration regimens for the treatment of subjects with diabetes
US20050065066A1 (en) * 2002-12-20 2005-03-24 Kaarsholm Niels Christian Stabilised insulin compositions
GB0309154D0 (en) * 2003-01-14 2003-05-28 Aventis Pharma Inc Use of insulin glargine to reduce or prevent cardiovascular events in patients being treated for dysglycemia
CN1777440A (zh) * 2003-04-11 2006-05-24 Pr药品有限公司 位点特异性蛋白质偶联物的制备方法
JO2625B1 (en) * 2003-06-24 2011-11-01 ميرك شارب اند دوم كوربوريشن Phosphoric acid salts of dipeptidyl betidase inhibitor 4
EP2264065B1 (en) * 2003-08-05 2017-03-08 Novo Nordisk A/S Novel insulin derivatives
CN105801686B (zh) * 2004-07-19 2020-04-07 比奥孔有限公司 胰岛素-低聚物共轭物、制剂及其用途
US7718609B2 (en) * 2006-04-12 2010-05-18 Biodel Inc. Rapid acting and long acting insulin combination formulations

Also Published As

Publication number Publication date
CA2526957C (en) 2011-07-12
DK1648933T3 (da) 2009-09-07
EA200600305A1 (ru) 2006-06-30
NO20060888L (no) 2006-04-25
AU2011201278A1 (en) 2011-04-07
JP2012062311A (ja) 2012-03-29
ATE433994T1 (de) 2009-07-15
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PL1648933T3 (pl) 2010-01-29
WO2005012346A1 (en) 2005-02-10
AU2004261319A1 (en) 2005-02-10
BRPI0412252A (pt) 2006-09-19
EP1648933A1 (en) 2006-04-26
DE602004021603D1 (de) 2009-07-30
JP2007520441A (ja) 2007-07-26
EP1648933A4 (en) 2007-02-28
EP2085406A1 (en) 2009-08-05
CA2526957A1 (en) 2005-02-10

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