ITMI950493A1

ITMI950493A1 - Frazioni polifenoliche di te' loro uso e formulazioni che le contengono

Info

Publication number: ITMI950493A1
Application number: IT95MI000493A
Authority: IT
Inventors: Ezio Bomoardelli; Paolo Morazzoni; Giuseppe Mustich
Original assignee: Indena Spa
Priority date: 1995-03-14
Filing date: 1995-03-14
Publication date: 1996-09-14
Also published as: DK0814823T3; KR100301678B1; KR19980702962A; US5989557A; CN1178467A; US6096359A; WO1996028178A1; JPH10512582A; NO974188D0; IT1275905B1; ITMI950493A0; EP0814823B1; ATE222113T1; DE69622998T2; ES2181873T3; CA2215210C; EP0814823A1; AU5004096A; NO326762B1; DE69622998D1

Abstract

La presente invenzione riguarda la preparazione di nuove frazioni polifenoliche di Camellia Sinensis (tè), il loro uso e formulazioni che le contengono.L'invenzione ha per obiettivo, specificatamente, la preparazione di estratti derivati di caffeina ma contenenti in rapporto naturale i polifenoli derivanti dalla epigallocatechina. Questi estratti possono essere usati da soli od associati ad antiossidanti lipofili, aminoacidi solforati ed oligoelementi di importanza biochimica e nutrizionale.L'uso di questi nuovi estratti, impiegati da soli o in associazione con altri principi attivi, interessa il settore alimentare, farmaceutico e cosmetico.

Description

"FRAZIONI POLI FENOLI CHE DI TE' LORO USO E FORMULAZIONI CHE LE CONTENGONO"

La presente invenzione riguarda nuove frazioni polifenoliche di Camellia sinensis (tè), il loro metodo di preparazione ed il loro uso nonché formulazioni che le contengono.

L'oggetto dell'invenzione riguarda in particolare estratti deprivati di caffeina, ma contenenti prevalentemente i polifenoli derivanti dalla epigallocatechina nel loro rapporto naturale.

L'eliminazione della caffeina, i cui effetti indesiderati sul sistema cardiovascolare oltreché quello mutageno sono ben noti, viene normalmente ottenuta mediante estrazione con anidride carbonica in fase ipercritica o con solventi clorurati; tali metodiche però non sono mirate a salvaguardare in modo standardizzato tutte quelle componenti polifenoliche responsabili di effetti biologici positivi.

Queste sostanze, caratteristiche della pianta del tè, sono state oggetto recentemente di grande interesse a causa del loro potente effetto antiossidante, come descritto in letteratura (1,2). A tale effetto sembra essere in qualche modo correlata la capacità che alcuni di questi polifenoli (per esempio la epigallocatechin-3-O-gallato) hanno di inibire la formazione di neoplasie indotte artificialmente nell1animale da esperimento (3,4).

Recentemente, inoltre, alcuni studi di tipo epidemiologico hanno evidenziato che al consumo di grandi quantità di tè verde è associata una più bassa incidenza di malattie cronico degenerative come per esempio alcune forme di cancro e di aterosclerosi (5-8).

I meccanismi con i quali le sostanze contenute nei derivati del tè verde esplicano la loro azione, a parte il generico effetto antiossidante sopra descritto, non sono allo stato attuale del tutto delucidati. Nei nostri studi si è trovato che la componente polifenolica del tè verde è in grado di esercitare, un effetto citotossico differenziato a seconda del tipo di cellula in studio e che questa differenziazione è in particolare legata al targeting mirato che alcune di queste molecole polifenoliche hanno nei confronti di siti subcellulari quali i mitocondri.

Risulta pertanto evidente 1'importanza di un metodo di estrazione che consenta di ottenere estratti di Camellia sinensis caratterizzati da un contenuto standardizzato di sostanze polifenoliche e da un basso contenuto di caffeina.

Tale scopo è stato raggiunto grazie a un processo che comprende: a) l'estrazione della biomassa vegetale con miscele acqua-alcoli o acqua-chetoni;

b) evaporazione totale o parziale del solvente d'estrazione;

c) sospensione del residuo in una miscela di metanolo acquoso dal 30 al 60% in volume;

d) estrazione della sospensione idrometanolica con solventi clorurati; e) filtrazione dei residui insolubili e concentrazione della fase idrometanolica;

f) eventuale acidificazione con acidi organici;

g) estrazione della fase idrometanolica concentrata ed eventualmente acidificata con solventi scelti fra esteri alitatici, alcoli o chetoni alifatici purché immiscibili con la miscela idrometanolica; h) eventuale aggiunta di un idrocarburo aromatico o alifatico seguita da lavaggio con acidi minerali acquosi diluiti;

i) concentrazione della fase organica immiscibile in acqua e diluizione con solventi clorurati;

k) in assenza degli stadi f) e h), trattamento con resine solfoniche in chetoni o alcoli alifatici anidri.

Secondo una prima forma di attuazione del processo dell'invenzione, la biomassa vegetale viene estratta con alcoli e chetoni alifatici diluiti con acqua o come tali, preferibilmente con miscele di acetone acquoso comprese tra il 40 ed il 90% in volume, (in particolare con acetone al 70%). Gli estratti così ottenuti vengono concentrati, a seconda del solvente usato, o a piccolo volume (da circa 1/5 a circa 1/15 del volume iniziale) o fino alla eliminazione del solvente organico.

Nel primo caso il concentrato acquoso viene diluito con metanolo fino al 50% (v/v) mentre nel secondo caso il residuo viene sospeso in una miscela acquosa di metanolo compresa fra il 30 ed il 60%, preferibilmente 50%. La miscela idrometanolica viene controestratta con solventi clorurati, preferibilmente con cloruro di metilene, fino alla eliminazione di sostanze indesiderate quali la clorofilla, i terpeni e la caffeina non complessata con i polifenoli oligomerici presenti nella biomassa vegetale. Le fasi organiche clorurate vengono scartate mentre la fase idrometanolica viene concentrata fino a eliminazione del metanolo filtrando gli eventuali residui insolubili costituiti da complessi tannici con la caffeina. La soluzione acquosa viene estratta con solventi non miscibili quali chetoni e alcoli alifatici o esteri alifatici. Esempi di tali solventi comprendono metiletilchetone in presenza di sali, quali cloruro o solfato ammonico (che,data la natura acida e salina, possono rompere i complessi con la caffeina trattenendola in acqua e consentendo allo stesso tempo una estrazione selettiva dei polifenoli), butanolo nelle sue forme isomeriche, formato o l'acetato di etile. Questi solventi, preferenzialmente l'acetato di etile, consentono dopo concentrazione e diluizione con solventi clorurati, in particolare cloruro di metilene, un recupero selettivo delle sostanze polifenoliche. Gli estratti ottenuti contengono ancora una quantità di caffeina residua superiore all'1%, complessata con polifenoli, che può essere eliminata mediante assorbimento su resine solfoniche in ambiente anidro utilizzando solventi quali metanolo, etanolo o acetone.

Si ottiene in tal modo un estratto contenente non più dello 0.2% di caffeina.

In una ulteriore forma di attuazione, il processo dell'invenzione comprende l'estrazione della biomassa vegetale con metanolo o acetone acquoso al 40-50% (v/v), concentrando l'eluato fino ad eliminazione del solvente organico, preferibilmente fino a circa lo stesso peso del materiale vegetale estratto. Questo concentrato, dopo essere stato filtrato dal residuo insolubile, viene controestratto con solventi clorurati, preferibilmente cloruro di metilene, per l'eliminazione della caffeina libera e di sostanze inerti di tipo terpenico. La soluzione acquosa viene acidificata con acidi organici, preferibilmente acido citrico in presenza di citrato ammonico, e controestratta con esteri alifatici, preferibilmente etile acetato. La fase organica addizionata di idrocarburi aromatici o alifatici in percentuali comprese dal 2 al 20% in volume, preferibilmente toluene in quantità del 5% in volume rispetto al volume totale della fase organica, viene lavata con acidi minerali diluiti, preferibilmente acido solforico all'1%, fino alla eliminazione della caffeina.

La soluzione organica, dopo lavaggio fino a neutralità, viene concentrata a piccolo volume e versata in quantità sufficiente di cloruro di metilene per il recupero dei polifenoli.

Come biomassa vegetale di Camellia sinensis si utilizzano le foglie, preferibilmente finemente macinate. Le estrazioni vengono condotte a temperatura ambiente (18-25*C circa). Il rapporto droga/solvente non è critico ma è in linea di massima compreso fra 1:1 e 1:5 p/v per ogni singola estrazione. ;I prodotti ottenuti secondo questa tecnologia hanno mediamente (con una oscillazione di ± 10%) un contenuto in derivati catechici più importanti pari a: epigallocatechin-3-O-gallato 58%, epicatechina-3-O-gallato 16%, epicatechina 3% e epigallocatechina 2,5%. ;Le frazioni polifenoliche ottenute con uno dei metodi riportati, sono caratterizzate da un potere antiossidante comparabile o superiore a quello osservato per antiossidanti noti, come è possibile osservare dalla Tabella. ;In questo test "in vitro", l'attività anti-lipoperossidante dei prodotti è stata esaminata utilizzando un modello sperimentale che prevede la sonicazione in provetta di liposomi di fosfatidilcolina e la misura dei prodotti della loro degradazione ossidativa mediante tecniche differenziate (9). ;L'incubazione dei liposomi in presenza di antiossidanti riduce in modo dose-correlato la formazione di dieni coniugati che sono uno stadio preliminare della degradazione ossidativa dei fosfolipidi. ;;TABELLA ;;Attività antiossidante della frazione polifenolica di Tè verde su liposomi di fosfatidilcolina trattati con ultrasuoni (fase di propagazione). Confronto con epigallocatechin-3-0-gallato,vitamina E e vitamina C ;;CI50 (μΜ) ;;Frazione polifenolica di Tè verde 0,52 ;Epigallocatechin-3-O-gallato 0,50 ;Vitamina E 1,25 ;Vitamina C inattiva ;;I dati sono espressi come concentrazioni (μΜ)di prodotto richieste per ridurre del 50% (CI50) la formazione di dieni coniugati in seguito a sonicazione dei liposomi di fosfatidilcolina. ;L'attività antiossidante dei polifenoli viene ritenuta importante anche per un altro effetto, quello antimutageno che recentemente è stato descritto per alcuni polifenoli quali quelli estratti dai semi d'uva (10). ;Sorprendentemente, i polifenoli ottenuti dal Tè verde (pur essendo dotati di elevata attività antiossidante) sono risultati, alle stesse concentrazioni a cui i prodotti estratti dai semi d'uva risultavano essere antimutageni, essere sprovvisti di tale attività; essi sono invece caratterizzati da una citotossicità differenziale (più elevata in ceppi cellulari nei quali una mutazione a livello mitocondriale risulta letale) ritenuta di grande interesse. ;Tale citotossicità risulta essere differente a seconda delle linee cellulari che vengono impiegate; su colture di cellule tumorali ovariche, per esempio, il prodotto oggetto della presente invenzione esercita un effetto citotossico a concentrazioni intorno a 50 μΜ, mentre tale effetto è misurabile a concentrazioni molto più elevate (1000 pM) quando venga valutato su cellule ovariche normali. ;Allo stato attuale delle conoscenze, diverse ipotesi sono state formulate per identificare i meccanismi alla base della mutazione spontanea e tra queste sembra essere molto accreditata quella che indica alcuni prodotti metabolici del ciclo cellulare, in particolare i radicali liberi, come responsabili della modulazione dell'eredità mitocondriale attraverso la perossidazione del sistema di membrane dal quale dipende appunto la replicazione del DNA mitocondriale (11,12). Con queste premesse si accreditano come molto interessanti due categorie di prodotti che, pur utilizzando, almeno in parte, meccanismi di base analoghi (attività antiossidante a livello mitocondriale) operano su due fronti differenziati: antimutageno (come nel caso dei derivati dei semi d'uva) e citotossico differenziato (come nel caso dei prodotti oggetto della presente invenzione). Entrambe le categorie di prodotti possono pertanto essere impiegate nel trattamento preventivo di malattie a carattere degenerativo quali forme neoplastiche, patologie a carico del sistema cardiovascolare quale ad esempio l'aterosclerosi e di forme artritiche e artrosiche di varia origine. ;Inoltre, i prodotti oggetto della presente invenzione possono essere impiegati in terapia, come tali od associati ad altre sostanze in modo da esplicare un effetto sinergico. In oncologia, per esempio, i prodotti possono essere associati alla normale chemioterapia con il duplice vantaggio sia di ridurre il danno ossidativo che generalmente accompagna alcuni trattamenti (per esempio con alcune antracicline o complessi del platino quali cis-platino) sia di distruggere, attraverso meccanismo citotossico differenziale, una parte delle cellule tumorali. ;Nella prevenzione dell'evento neoplastico, la frazione polifenolica assunta con la dieta rappresenta un mezzo efficace di distruzione di cellule mutate in stadio pre-canceroso. In altre patologie quali quella aterosclerotica, i prodotti oggetto dell'invenzione possono vantaggiosamente essere associati ad altri antiossidanti quali i carotenoidi ed in modo particolare a licopene e zeaxantina al fine di preservare e mantenere l'integrità del pool degli antiossidanti fisiologici. ;Nelle patologie degenerative di tipo articolare,i prodotti oggetto della presente invenzione possono essere associati ad amminoacidi solforati quali metionina, cisteina o prolina e idrossiprolina ed eventualmente somministrati in miscela con glucosamina ed acido jaluronico. Il ruolo svolto dalla frazione polifenolica in tali associazioni è da un lato quello antiossidante e dall'altro quello antidegenerativo dei condroblasti dovuto, in presenza di sinergizzanti, alla stimolazione della sintesi di collagene e proteoglicani. ;Le dosi attive di questi estratti variano da 10 a 1000 mg/die, da una a quattro volte al giorno, preferibilmente da 50 a 300 mg/die da 1 a 2 volte al giorno. La DL50 orale è di oltre 2000 mg/kg nel ratto e nel topo. ;I prodotti si prestano ad essere incorporati nelle più comuni forme farmaceutiche quali capsule di gelatina molle e dura, compresse, bustine, sciroppi, supposte e fiale. In caso di associazione con altri principi attivi, le composizioni dell'invenzione potranno essere eventualmente adatte alla somministrazione sequenziale o separata dei singoli principi attivi. ;Gli esempi di seguito riportati illustreranno meglio l'invenzione. Esempio I - Preparazione dell’estratto decaffeinato di Tè verde a contenuto standardizzato di polifenoli. ;1 kg di foglie non fermentate finemente macinate di Camellia sinensis vengono estratte per 4 volte con 3 1 per volta di una miscela di acetone/acqua 7:3 (v/v). Gli estratti riuniti vengono concentrati sotto vuoto ad una temperatura non superiore a 45*C fino a 1 kg. Durante la concentrazione si ha formazione di una abbondante massa gommosa costituita da clorofilla ed altre sostanze lipofile indesiderate che comunque inglobano polifenoli. Si diluisce il concentrato con 1 1 di metanolo e 0,51 di metilene cloruro. La massa gommosa è solubilizzata nel mezzo e dopo agitazione per 30' si separano le fasi; si ripete l'estrazione con cloruro di metilene per altre 3 volte e quindi si scarta la fase clorometilenica. La fase idrometanolica è concentrata sotto vuoto fino alla eliminazione del metanolo e si estrae il concentrato per 3 volte con 0,5 1 di etile acetato. La fase acquosa viene scartata mentre quella organica dopo disidratazione su Na2S0^ viene concentrata a piccolo volume (0,221). Il concentrato, sotto forte agitazione, viene versato in 1,2 1 di metilene cloruro. Si ottiene un abbondante precipitato brunastro che dopo essiccamento sotto vuoto risulta essere del peso di circa 0,12 kg. Questo residuo contiene l'l,6% di alcaloidi e viene sottoposto alla purificazione finale sciogliendolo in atmosfera di azoto in 1,5 1 di metanolo. La soluzione metanolica viene trattata con 250 mi di resina solfonica Amberlite fino alla scomparsa della caffeina, verificata mediante cromatografia su strato sottile. La soluzione metanolica è concentrata a secco sotto vuoto ad una temperatura non superiore a 50 gradi centigradi. Operando in questo modo si ottengono 0,11 kg di un prodotto beige avente la composizione seguente:

Epigallocatechin-3-0-gallato 58,0%

Epicatechin-3-O-gallato 16,0%

Epicatechina 3,0% Epigallocatechina 2,5%

Esenpio li - Preparazione dell'estratto decaffeinato di Tè verde a contenuto standardizzato di polifenoli.

1 kg di foglie non fermentate finemente macinate di Camellia sinensis vengono estratte per 4 volte con 31 per volta di una miscela di acetone/acqua 4:6. Gli estratti riuniti vengono concentrati sotto vuoto ad una temperatura non superiore a 45 gradi centigradi fino a 1 kg. Durante la concentrazione si ha la formazione di un lieve precipitato che viene separato ed eliminato. Il concentrato è estratto per tre volte con 0,51 di metilene cloruro e la fase clorometilenica viene quindi scartata. La fase acquosa è acidificata fino a pH 1,5 con acido citrico in presenza di citrato di ammonio ed estratta per 3 volte con 0,5 mi di etile acetato. La fase acquosa viene quindi scartata mentre quella organica viene diluita con 75 mi di toluene e controestratta per 3 volte con 150 mi per volta di H2SO4 all'1%. Dopo lavaggio con acqua fino a neutralità e disidratazione su Na2S04 la fase organica viene concentrata a 300 mi ed il concentrato viene quindi versato su 1,5 mi di metilene cloruro. Dopo una notte di essiccamento sotto vuoto si ottengono 0,1 kg di una polvere beige avente le caratteristiche del prodotto dell'esempio I.

Esenpio III - Preparazione dell'estratto decaffeinato di Tè verde a contenuto standardizzato di polifenoli.

1 kg di foglie non fermentate finemente macinate di Camellia sinensis vengono estratte per 4 volte con 31 per volta di una miscela di metanolo/acqua 1:1. Gli estratti riuniti vengono concentrati sotto vuoto ad una temperatura non superiore a 45 gradi centigradi fino a 1 kg. Durante la concentrazione si ha la formazione di un lieve precipitato che viene separato ed eliminato. Il concentrato viene estratto per 3 volte con 0,5 1 di metilene cloruro e la fase clorometilenica viene quindi scartata. La fase acquosa viene acidificata fino a pii 1,5 con acido citrico in presenza di citrato di ammonio ed estratta per 3 volte con 0,5 1 di etile acetato. La fase acquosa viene scartata mentre quella organica viene diluita con 75 mi di toluene e controestratta per 3 volte con 150 mi per volta di H2SO4 all'1%. Dopo lavaggio con acqua fino a neutralità e disidratazione su Na2S04, la fase organica viene concentrata a 300 mi ed il concentrato viene versato in 1,5 1 di metilene cloruro. Dopo essiccamento per una notte a 50 gradi centigradi sotto vuoto, si ottengono 0,1 kg di una polvere beige avente le caratteristiche del prodotto dell'esempio I.

Bsenpio IV - Capsule di gelatina contenenti la frazione polifenolica del Tè verde.

50 mg di frazione polifenolica di Tè verde vengono mescolati con 88 mg di cellulosa microcristallina (Avicel FH 102), 3 mg di silice colloidale (Aerosil 200), 8 mg di sodio carbossiroetilcellulosa reticolata (Ac-Di-Sol) e 1 mg di magnesio stearato. La miscela così ottenuta viene incapsulata in capsule di gelatina dura (Formato 3).

Esempio V - Capsule di gelatina contenenti la frazione polifenolica del Tè verde.

150 mg di frazione polifenolica di Tè verde vengono mescolati con 264 mg di cellulosa microcristallina (Avicel PH 102), 9 mg di silice colloidale (Aerosil 200), 24 mg di sodio carbossimetilcellulosa reticolata e 3 mg di magnesio stearato. La miscela così ottenuta viene Incapsulata in capsule di gelatina dura (Formato 0).

Esempio VI - Compresse rivestite contenenti la frazione polifenolica di Tè verde.

50 mg di frazione polifenolica di Tè verde vengono miscelati con 50 mg di cellulosa microcristallina (Avicel PH 101), 33 mg di calcio fosfato bibasico (Emcompress A), 3 mg di silice colloidale (Aerosil 200), 12 mg di sodio carbossimetilcellulosa reticolata (Ac-Di-Sol) e 2 mg di magnesio stearato. Le polveri vengono mescolate per 10 minuti e quindi si procede alla compressione dosando a 150 mg/conpressa. Le conpresse così ottenute (diametro: 7 mm) vengono rivestite con una vernice filmante contenente 4,5 mg di idrossipropilmetilcellulosa (Methocel E5), 0,9 mg di Polietilenglicole 6000 (Carbowax 6000), 1,2 mg di biossido di titanio e 0,9 mg di talco.

Esempio VII - Compresse rivestite contenenti la frazione polifenolica di Tè verde.

150 mg di frazione polifenolica di Tè verde vengono miscelati con 150 mg di cellulosa microcristallina (Avicel PH 101), 99 mg di calcio fosfato bibasico (Emcompress A), 9 mg di silice colloidale (Aerosil 200), 36 mg di sodio carbossimetilcellulosa reticolata (Ac-Di-Sol) e 6 mg di magnesio stearato. Le polveri vengono così mescolate per 10 minuti e quindi si procede alla compressione dosando a 450 mg/conpressa. Le compresse così ottenute (diametro: 11 mm) vengono quindi rivestite utilizzando vernice filmante contenente 13,5 mg di idrossipropilmetilcellulosa (Methocel E5), 2,7 mg di Polietilenglicole 6000 (Carbowax 6000}, 3,6 mg di biossido di titanio e 2,7 mg di talco. Esenpio Vili - Fiale contenenti la frazione polifenolica di Tè verde.

10 mg di frazione polifenolica di Tè verde vengono miscelati con 200 mg di glucosio e disciolti in acqua per preparazioni iniettabili q.b.a 5 mi. Questa soluzione (ph 4,5) può quindi essere utilizzata per l'approntamento di fiale iniettabili da preparare con tecniche convenzionali.

Claims

RIVENDICAZIONI 1. Processo di estrazione di frazioni polifenoliche da Camellia sinensis contenenti non più dello 0,2% in peso di caffeina, che comprende: a) l'estrazione della biomassa vegetale con miscele acqua-alcoli o acqua-chetoni; b) evaporazione totale o parziale del solvente d'estrazione; c) sospensione del residuo in una miscela di metanolo acquoso dal 30 al 60% in volume; d) estrazione della sospensione idrometanolica con solventi clorurati; e) filtrazione dei residui insolubili e concentrazione della fase idrometanolica; f) eventuale acidificazione con acidi organici; g) estrazione della fase idrometanolica concentrata ed eventualmente acidificata con solventi scelti fra esteri alifatici, alcoli o chetoni alifatici purché immiscibili con la miscela idrometanolica; h) eventuale aggiunta di un idrocarburo aromatico o alifatico seguita da lavaggio con acidi minerali acquosi diluiti; i) concentrazione della fase organica immiscibile in acqua e diluizione con solventi clorurati; k) in assenza degli stadi f)e h), trattamento con resine solfoniche in chetoni o alcoli alifatici anidri.
2. Processo secondo la rivendicazione 1 in cui nella fase a) si impiega acetone acquoso dal 40 al 90% in volume.
3. Processo secondo la rivendicazione 2 in cui si impiega acetone acquoso al 70% in volume.
4. Processo secondo una qualunque delle rivendicazioni da 1 a 3 in cui nella fase c) si inpiega metanolo acquoso al 50% in volume.
5. Processo secondo una qualunque delle rivendicazioni da 1 a 4 in cui nella fase d) si impiega cloruro di metilene.
6. Processo secondo una qualunque delle rivendicazioni da 1 a 5 in cui nella fase f) si inpiega acido citrico in presenza di citrato ammonico.
7. Processo secondo una qualunque delle rivendicazioni da 1 a 6 in cui nella fase g) i solventi sono scelti fra acetato di etile, formiato di etile, metiletilchetone, 1-butanolo, ter-butanolo, 2-butanolo.
8. Processo secondo la rivendicazione 7 in cui il solvente è acetato di etile .
9. Processo secondo una qualunque delle rivendicazioni precedenti in cui nella fase h) si impiega toluene in quantità pari al 5% in volume rispetto al volume totale della fase organica e acido solforico acquoso all'1% in volume.
10. Processo secondo una qualunque delle rivendicazioni precedenti in cui nella fase i) si impiega cloruro di metilene.
11. Processo secondo una qualunque delle rivendicazioni da 1 a 10 conprendenti le fasi da a) a e), g), i) e k),
12. Processo secondo una qualunque delle rivendicazioni da 1 a 10 comprendenti le fasi da a) a i).
13. Frazioni polifenoliche da Camellia sinensis contenenti non più dello 0,2% di caffeina ottenibili dai processi delle rivendicazioni 1-12.
14. Composizioni farmaceutiche contenenti le frazioni polifenoliche della rivendicazione 13 in miscela con un adatto veicolo o eccipiente.
15. Composizioni farmaceutiche secondo la rivendicazione 14 in forma di compresse, capsule di gelatina, bustine, sciroppo, fiale.
16. Conposizioni farmaceutiche secondo la rivendicazione 14 o 15 contenenti inoltre antracicline o cis-platino e suoi derivati, eventualmente in forma adatta per la somministrazione sequenziale o separata.
17 . Composizioni cosmetiche contenenti le frazioni polifenoliche della rivendicazione 13 in miscela con adatti veicoli o eccipienti.
18. Composizioni dietetiche contenenti le frazioni polifenoliche della rivendicazione 13 in miscela con adatti veicoli o eccipienti.
19. Uso delle frazioni polifenoliche della rivendicazione 13 per la preparazione di medicamenti ad attività citotossica differenziata e anti-ossidante.
20. Uso delle frazioni polifenoliche della rivendicazione 13 per la preparazione di medicamenti per il trattamento di forme tumorali, patologie cronico-degenerative del sistema cardio-vascolare, forme artrosiche, aterosclerosi.