KR100301678B1 - 차의폴리페놀분획물,그의용도및그를함유한제제 - Google Patents

차의폴리페놀분획물,그의용도및그를함유한제제 Download PDF

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Abstract

본 발명은 차(tea)의 카멜리아 지넨시스(Camellia sinensis)의 신규한 폴리페놀 분획물의 제조, 그들의 용도 및 그들은 함유한 제제에 관한 것이다.
특히 본 발명은 카페인이 함유되지 않은 추출물의 제조에 관한 것이지만 천연비율로 주로 에피갈로카테친으로부터 유도된 폴리페놀류를 함유한 추출물에 관한 것이다.
이들 추출물은 단독 또는 친유성 항산화제, 유황을 함유한 아미노산 및 생화학 및 영양적으로 중요한 올리고 요소와 조합하여 사용될 수 있다.
이들 신규한 추출물의 용도는, 단독 또는 다른 활성성분과 조합하여 식품, 약제 및 화장품 분야에서 유익하다.

Description

[발명의 명칭]
차의 폴리페놀 분획물, 그의 용도 및 그를 함유한 제제
[발명의 상세한 설명]
본 발명은 차(tea)의 카멜리아 지넨시스(Camellia sinensis)의 신규한 폴리페놀 분획물, 그들의 제조방법 및 그들의 용도와, 그를 함유한 제제에 관한 것이다.
특히 본 발명의 목적은 카페인이 함유되지 않은 추출물에 관한 것이지만 천연비율로 주로 에피갈로카테친(epigallocatechin)으로부터 유도된 폴리페놀을 함유한 추출물에 관한 것이다.
카페인은 심장순환계에 대한 바람직하지 못한 효과와 마찬가지로 돌연변이원성 효과를 갖는 것으로 알려져 있으며, 통상 고임계 상태에서 이산화탄소 또는 염소화된 용매로 추출하여 제거된다: 그러나, 이와같은 방법은 유익한 생물학적 효과를 갖는 모든 페놀성분중 표준 함량은 유지하는데 도움이 되지 않는다.
차식물의 특징상 이들 물질들은 최근에, 문헌(1,2)중에 기재된 바와같이, 강한 항산화 효과 때문에 큰 장점이 있다. 이와같은 효과는 분명 실험동물중에서 유발된 인공적인 신종양물(neoplasias)의 형성을 억제하는 폴리페놀류[예를들면, 에피갈로카테친-3-0-갈레이트(epigallocatechin-3-0-gallate)의 일부의 효능을 다소 확대시키는 것이다.(문헌 3,4)
더우기, 몇몇 최근의 역학적 연구에서 녹차의 많은 량의 소비가 퇴행성 만성질환, 예를들면 암과 동맥경화 형성의 낮은 빈도와 연관관계가 있음이 증명되었다.(문헌 5,8)
지금까지, 녹차 성분의 유도체를 함유한 물질의 작용기전은, 전술한 일반적인 항산화 효과외에는 달리 완전하게 규명된바 없다.
이에 출원인은 많은 연구노력 끝에 녹차의 폴리페놀성분이 연구된 세포의 형태에 의존적인 특이한 세포독성효과를 발휘하는 능력이 있으며, 이와같은 특이성은 특히 미토콘드리아(mitochondria)와 같은 부세포부위(sub-cell sites)를 향하여 폴리페놀 분자의 몇몇이 선택적으로 목표대상을 갖는다는 것을 발견하였다.
그러므로, 폴리페놀 물질로 표준함량을 갖고 낮은 카페인 함량을 갖는 카멜리아 지넨시스(Camellia sinensis)의 추출물을 얻을 수 있는 추출방법의 확립은 중요한 것임이 명백하다.
이와같은 목적은 하기와 같이 구성된 방법을 통하여 얻어진다:
a)싱싱한 식물(vegetable biomass)을 물-알콜 또는 물-케톤 혼합물로 추출하고;
b)추출용매를 전체 또는 부분적으로 증발시키며;
c)메탄올을 30∼60% 부피로 함유한 수용성 혼합물중에 잔사를 현탁시키고;
d)염소화된 용매로 수메탄올 현탁액을 추출하며;
e)불용성 잔사를 여과하고 수메탄올 층을 농축시키고;
f)유기산으로 산성화하며;
g)농축된 수메탄올층을 추출하고, 수메탄올 혼합물과 섞이지 않는 지방족 에스텔류, 알콜류 또는 케톤류로부터 선택된 용매로, 산성화하며;
h)방향족 또는 지방족 하이드로카본을 첨가한 다음, 묽은 수용성 광산으로 세척하고;
i)물-불혼화성 유기층을 농축시키고 염소화된 용매로 희석하며;
k)f)와 h)공정의 수행없이, 건조된 지방족 케톤 또는 알콜, 바람직하게는 알콜중에서 거대분자 양이온의 강산 교환수지로 처리하는 것이다.
본 발명의 방법의 첫번째 구체적 예시에 따르면, 싱싱한 식물(vegetable biomass)을 지방족 알콜 또는 케톤을 물에 희석시키거나 단독으로, 바람직하게는 40∼90%용적의 범위내에서의 수용성 아세톤용매(특히, 70% 아세톤)로 추출한다. 얻은 추출액을 농축시키되, 사용된 용매에 따라, 적은 체적(최소용적의 약 1/5 내지 1/15)이 되거나 유기용매을 제거하기 위하여 농축시킨다.
첫째 경우에서는, 수용성 농축액을 메탄올로 50%(v/v)가 되도록 희석시키는 반면, 두번째 경우에서는 잔사를 30 내지 60%, 특히 50%의 범위를 갖는 수용성 메탄올 혼합물중에 현탁시킨다. 수메탄올 혼합물을 싱싱한 식물중에 존재하는 올리고메릭 폴리페놀류(oligomeric polyphenols)와 복합체(complex)를 이루지 않는 클로로필(chlorophyll), 텔펜(terpenes) 및 카페인(caffeine)과 같은 바람직하지 못한 물질이 제거되도록 염소화된 용매, 특히 메틸렌클로라이드로 역추출한다.
염소화된 유기층을 경사하고, 반면 수메탄올층은 메탄올이 제거될때까지 농축시킨후 카페인과 함께 탄닌 복합체를 구성하는 모든 불용성 물질을 여과한다. 수용액을 지방족 케톤류와 알콜류 또는 지방족 에스텔류와 같은 불혼화성 용매로 추출한다. 전술한 용매의 예로는, 암모늄클로라이드 또는 설페이트와 같은, 염존재하 메틸에틸케톤(카페인과의 복합체를 분리할 수 있는데, 물중에 유지하면서 그리고 동시에 폴리페놀류를 가능한한 선택추출하면서, 산성 및 생리식염액 상태로 될때 깨질 수 있다), 이성체 형태의 부타놀, 에틸포메이트 또는 아세테이트가 있다.
이들 용매, 바람직하게는 에틸아세테이트는 농축후 염소화된 용매, 특히 메틸렌클로라이드로 희석시켜 페놀물질을 선택적으로 회수할 수 있다.
얻어진 추출물은 아직 1%이상의 폴리페놀류와 카페인의 복합체 잔류량을 함유하고 있으며, 이들은 메탄올, 에탄올 또는 아세톤과 같은 용매를 사용하면서 무수매질중에서 슬폰수지에 흡수시켜 제거시킬 수 있으며 이렇게하여 얻어진 추출물중에는 0.2%이하의 카페인을 함유하게 된다.
또다른 구체적 예시로서, 본 발명의 방법은, 싱싱한 식물을 40∼50%(v/v) 수용성 메탄올 또는 아세톤으로 추출하고, 용리액을 유기층이 제거될 때까지, 바람직하게는 추출된 식물 재료의 무게와 동일무게가 되도록 농축시킨다. 불용성 물질을 제거한 농축액을 염소화된 용매, 바람직하게는 메틸렌 를로라이드로 유리카페인 및 텔펜과 같은 불활성 물질을 제거하기 위하여 역추출한다.
수용성 용액은 유기산, 바람직하게는 구연산으로 구연산암모늄존재하 산성화시키고, 지방족 에스텔류, 바람직하게는 에틸아세테이트로 역추출한다.
유기층에는 방향족 또는 지방족 하이드로카본을 2 내지 20% 체적이 되도록 가하며, 바람직하게는 유기층의 총체적에 대해 5% 체적량에 해당하는 톨루엔을 첨가하고, 다음 묽은 광산, 바람직하게는 1% 황산으로 카페인이 제거될때까지 세척한다. 중성되도록 세척한 유기용액을 체적이 적도록 농축시키고, 폴리페놀을 회수할 수 있는 충분한 량의 메틸렌클로라이드를 붓는다.
카멜리아 지넨시스(Camellia sinensis)의 잎, 바람직하게는 미세하게 분쇄한 것을 싱싱한 식물(Vegetable biomass)로 사용한다. 추출은 실온(대략 18∼25℃)에서 수행된다. 약물/용매의 비율은 정하여진바 없으나, 일반적으로 각 단일추출시 1:1 내지 1:5w/v 사이로 구성된다.
본 발명의 방법에 따라 제조된 제품은 하기와 같은 가장 중요한 카테친 유도체(catechin derivatives)로 평균적인 함량을 갖는다:
50~65% 에피갈로카테친-3-0-갈레이트, 13-20% 에피카테친-3-0-갈레이트, 2-4% 예피카테친 및 1.5~3% 에피갈로카테친.
보고된 방법중 하나에 따라 얻어진 폴리페놀 분획물은 알려진 항산화제에서 관찰된 산화력과 비교될 수 있거나 또는 그보다 높은 산화력을 갖는다는 것이 특징적으로, 하기 표에서 명백히 입증될 수 있다.
여기 “생체외” 실험에서는 제품의 항-지질과산화제 작용(anti-lipoperoxidant)을 실험관중에서 포스파티딜콜린리포좀의 고주파음에 의한 분해(sonication)를 포함한 실험적 모델을 사용하면서 실험하였고, 공지의 기술(문헌 9참조)로 산화성 분해에 대해 제품을 측정하였다.
항산화제 존재하 리포좀을 인큐베이션시키면 인지질의 산화성 분해의 예비단계인 응집된 디엔류(conjugated dienes)의 생성으로 용량에 관한 관계가 감소된다.
[표 1]
Figure kpo00001
상기 데이타에 포스파티딜 콜린리포좀의 고주파음에 의한 분해로 응집된 디엔류의 생성을 50%(CI50)까지 감소시키는데 필요한 제품의 농도(μM)를 기재한 것이다.
폴리페놀류의 항산화능은 항변이원성 효과가 관계되는한 역시 중요하다고 믿어지며, 최근 포도-씨(grape-seeds)로부터 추출된 폴리페놀류와 같은 몇몇 폴리페놀류에 대해서 기재된바 있다.(문헌 10참조)
놀랍게도, 녹차에서 얻은 폴리페놀류는(비록 높은 항산화능을 가졌다할지라도), 표도씨에서 추출된 제품의 항변이원성을 보이는 농도와 동일한 농도에서 항변이원성 작용이 있고, 항산화작용은 없는 것으로 확인되었으며; 다른 한편 그들은 큰 장점이라고 고려되는 특이한 세포독성(미토콘드리아 변성중에서 있는 세포선에서 더 높은 치사를 보인다)을 나타내었다.
세포독성(cytotoxicity)은 사용된 세포선에 의존성의 차이를 보이며, 예를들면 육종난소세포에서 본 발명의 제품은 약 50μM 농도에서 세포독성효과를 보이는 반면, 정상적인 난소세포에 대한 평가시 매우 높은 농도(1000μM)에서 전술한 효과가 측정될 수 있었다.
현재의 기술측면에서, 자발적인 변성의 기초를 둔 기전을 밝히기 위해 다른 가설이 이루어졌으며, 그들 배경 가운데서도 미토콘드리아 DNA 복제에 의존하는 세포막계의 과산화을 통하여 미토콘드리아의 형질유전을 변조할 능력이 있는 세포싸이클, 특히 자유라디칼(free ridicals)의 몇몇 대사물질이라는 추측을 얻었다(문헌 11, 12 참조).
이들 전제와 함께, 화합물들의 두가지 부류가 매우 흥미있게 고러되는데, 비록 그들이 적어도 부분적으로 동족성 기초기전을 이용한다하여도(미토콘드리아에서의 항산화능), 두개의 다른 입장으로 작용한다는 사실이다: 항변이원성 작용(포도씨로부터 유도된 유도체 경우와 마찬가지의)과 특이한 세포독성작용(본 발명의 제품경우와 마찬가지의)을 뜻한다. 그러므로 제품의 두가지 부류는 종양과 같은 퇴행성 질환, 동맥경화와 같은 심장순환계질환, 관절염 및 여러 원인에 의한 관절염 형성에 예방적 치료에 이용될 수 있다.
더우기, 본 발명의 제품은 상승효과를 얻기 위해서는 치료시에 단독 또는 타제제와 병용하여 사용될 수 있다.
예를들면, 종양학적면에서 본 발명의 제품은, 일반적으로 여러 치료제(예를들면 안트라싸이클린류, 시스푸라틴 같은 백금 착체)에서 볼 수 있는 산화에 따른 손실을 감소시키고, 특이한 세포독성기전을 통하여 암세포부분을 파괴하는 두가지 이점을 배로 갖어, 통상적인 화학요법제와 병용투여할 수 있다.
종양방지면에서, 식사와 함께 투여되는 폴리페놀 분획물은 전-암(pre-cancer)상태에 있는 변이된 세포를 파괴하기 위한 효과적인 수단이다. 동맥경화와 같은 다른 상태에서는 본 발명의 제품은 카로틴노이드류(carotenoids), 특히 리코펜(lycopene)과 지아잔틴(zeaxanthin)와 같은 다른 항산화제를, 생리학상 항산화제물의 본질을 보존하고 유지하기 위하여, 병용하는 것이 유리하다.
관절의 퇴행성 상태에서는 본 발명의 제품을 메티오닌, 시스테인 또는 푸로린과 같은 유황을 갖는 아미노산 및 하이드록시푸포린과 병용할 수 있으며, 글루코사민과 쟈유로닉애시드(jauronic acid)와 혼합물 형태로 임의로 투여될 수 있다. 전술한 병용으로 폴리페놀 분획물의 역활은, 상승제 존재하 콜라겐(collagene) 및 푸로테오글리칸(proteoglycans)의 합성을 증진시키기 때문에, 연골아세포(chondroblast)에 대하여 항산화 및 항퇴행성 작용 모두이다.
이들 추출물의 유효량은 10 내지 1000mg/die범위이고, 하루 1내지 4회 복용하며, 바람직하게는 50 내지 300mg/1일 범위내에서 하루 1 내지 2회 복용한다. 경구 DL50은 랫트와 마무스에서 약 2000mg/kg이다.
본 발명의 제품은 통상의 약제학적 제형, 예를들면 연질 또는 경질의 젤라틴 캅셀, 정제, 샤켓, 시럽, 좌제 및 바이알 형태로 제제화할 수 있다. 다른 유효성분과 병용의 경우 발명의 조성은 단일 유효성분의 연속 또는 분리투여가 임의가능하다.
다음의 실시예로 본 발명을 더욱 구체화한다.
[실시예 I]
[녹차의 폴리페놀-표준함량으로 탈카페인된 추출물의 제조]
발효되지 않고 미세분말화한 카멜리아 지넨시스(Camellia sinensis)의 잎 1Kg을 아세톤/물의 7:3(v/v) 혼합물 각 31로 4회 추출한다. 조합된 추출물을 45℃이하의 온도에서 진공하 1Kg으로 농축시킨다. 농축하는 동안, 폴리페놀을 함유한 클로로필(chlorophyll)과 다른 친유성 물질로 구성된 많은 껌상 덩어리가 형성된다. 농축물을 메탄올 1l와 메틸렌 클로라이드 0.5ℓ로 희석시킨다. 껌상덩어리를 매질중에 용해시키고 30분간 저어준후 층을 분리한다; 메틸렌클로라이드로 추출을 3회이상 반복한 다음 클로로메틸렌층을 경사하여 버린다.
수메탄올층은 메탄올이 제거될때까지 진공하에서 농축하고, 농축액을 에틸아세테이트 0.5ℓ로 3회 추출한다. 수용층은 경사하여 버리고 유기층은 Na2SO4상에서 건조한후 적은 체적(0.221)이 되도록 농축시킨다. 농축액을 강하게 저어주면서 메틸렌클로라이드 1.2ℓ에 부어 많은 량의 갈색 침전물을 얻고, 진공하 건조후 평량시 약 0.12Kg이었다. 이 잔사에는 알칼로이드 1.6%를 함유하고 있으며, 최종 정제를 하기 위하여 질소대기하 메탄올 1.5ℓ중에 용해시킨다. 메탄올 용액을 술폰수지암버리스트(
Figure kpo00002
)250ml로, 박층 클로마토그라피로 조사하여 카페인이 사라질때까지 처리하였다. 메탄올 용액을 건조하기 위하여 50℃이하 온도에서 진공하 농축시킨다. 이와같은 공정으로 베이지색 제품 0.11Kg을 얻었으며 다음의 조성을 갖는다.
조성 :
에피갈로카테친-3-0-갈레이트 58.0%
에피카테친-3-0-갈레이트 16.0%
에피카테친 3.0%
에피갈로카테친 2.5%
[실시예 II]
[녹차의 폴리페놀-표준함량으로 탈카페인된 추출물의 제조]
발효되지 않고 미세분말화한 카멜리아 지넨시스(Camellia sinensis)의 잎 1Kg을 아세톤/물의 4:6혼합물 각 3ℓ로 4회 추출한다. 조합된 추출물을 45℃이하의 온도에서 진공하 1Kg으로 농축시킨다. 농축하는 동안 침전이 형성되며 분리, 경사하여 제거한다. 농축액을 메틸렌클로라이드 0.5ℓ로 3회 추출하고 클로로메틸렌층을 경사하여 제거한다.
수용성층을 구연산 암모늄존재하 구연산으로 pH 1.5로 산성화시키고 에틸아세테이트 0.5ml로 3회 추출한다. 다음 수용성층을 경사하여 버리고 유기층은 톨루엔 75ml로 희석시키고, 1%황산 각 150ml로 3회 역추출한다. 물로 중성이 될 때까지 세척한후 Na2SO4상에서 건조시키고 유기층을 300ml가 되도록 농축시킨후 농축액을 메틸렌클로라이드 1.5ml에 붓는다. 진공하 밤새 건조시킨후, 실시예 I의 제품특징은 갖는 베이지색 가루 0.1Kg을 얻었다.
[실시예 III]
[녹차의 폴리페놀-표준함량으로 탈카페인된 추출물의 제조]
발효되지 않고 미세분말화한 카멜리아 지넨시스(Camellia sinensis)의 잎 1Kg을 메탄올/물의 1:1혼합물 각 3ℓ로 4회 추출한다. 조합된 추출물을 45℃이하의 온도에서 진공하 1Kg으로 농축시킨다. 농축하는 동안 침전이 형성되고 분리, 경사하여 제거한다. 농축액을 메틸렌클로라이드 0.5ℓ로 3회 추출하고 클로로메틸렌층을 경사하여 제거한다.
수용성층을 구연산 암모늄존재하 구연산으로 pH 1.5로 산성화시키고 에틸아세테이트 0.5ℓ로 3회 추출한다. 다음 수용성층을 경사하여 제거하고 유기층은 톨루엔 75ml로 희석시키고, 1%황산 각 150ml로 3회 역추출한다. 물로 중성이 될때까지 세척한후 Na2SO4상에서 건조시키고 유기층을 300ml까지 농축시킨후 농축액을 메틸렌클로라이드 1.5ml중에 붓는다. 밤새 50℃에서 진공하 건조시킨후 실시예 I의 제품특징을 갖는 베이지색 가루 0.1Kg을 얻었다.
[실시예 IV]
[녹차의 폴리페놀 분획물을 함유한 젤라틴캅셀]
녹차의 폴리페놀 분획물 50mg을, 미세결정 셀룰로스(Avicel pH 102) 88mg, 콜로이드성 실리카(Aerosil 200) 3mg, 가교연결된 소디움카복시메틸셀룰로스(Ac-Di-Sol) 8mg 및 마그네슘 스테아레이트 1mg과 혼합한다. 얻은 혼합물을 경질젤라틴캅셀(사이즈 3)중에 엔캅셀화한다.
[실시예 V]
[녹차의 폴리페놀 분획물을 함유한 젤라틴캅셀]
녹차의 폴리페놀 분획물 150mg을, 미세결정 셀룰로스(Avicel pH 102) 264mg, 콜로이드성 실리카(Aerosil 200) 9mg, 가교연결된 소디움카복시메틸셀룰로스(Ae-Di-Sol) 24mg 및 마그네슘 스테아레이트 3mg과 혼합한다. 얻은 혼합물을 경질젤라틴캅셀(사이즈 0)중에 엔캅셀화한다.
[실시예 VI]
[녹차의 폴리페놀 분획물을 함유한 코팅정]
녹차의 폴리페놀 분획물 50mg을, 미세결정 셀룰로스(Avicel pH 101) 50mg, 디염기성 칼슘포스페이트(Emcompress A) 33mg, 콜로이드성 실리카(Aerosil 200) 3mg, 가교연결된 소디움카복시메틸셀룰로스(Ac-Di-Sol) 12mg 및 마그네슘 스테아레이트 2mg과 혼합한다. 분말을 10분간 혼합하고, 다음 1정당 150mg 용량이 되도록 타정한다. 얻어진 정제(직경:7mm)를 하이드록시푸로필메틸셀룰로스(Methocel E5) 4.5mg, 폴리에틸렌글리콜 6000(Carbowax 6000) 0.9mg, 티타늄디옥사이드 1.2mg 및 탈크 0.9mg을 함유한 필름층으로 코팅한다.
[실시예 VII]
[녹차의 폴리페놀 분획물을 함유한 코팅정]
녹차의 폴리페놀 분획물 150mg은, 미세결정 셀룰로스(Avicel pH 101) 150mg, 디염기성 칼슘포스페이트(Emcompress A) 99mg, 콜로이드성 실리카(Aerosil 200) 9mg, 가교연결된 오디움카복시메틸셀룰로스(Ac-Di-Sel) 36mg 및 마그네슘 스테아레이트 6mg과 혼합한다. 분말을 10분간 분쇄하고, 다음 1정당 450mg의 용량으로 타정한다. 얻어진 정제(직경: 11mm)를 하이드록시푸로필메틸셀룰로스(Methocel E5) 13.5mg, 폴리에틸렌글리콜 6000(Carbowax 6000) 2.7mg, 티타늄디옥사이드 3.6mg 및 탈크 2.7mg을 함유한 필름층으로 코팅한다.
[실시예 VIII]
[녹차의 폴리페놀 분획물을 함유한 바이알(vial)]
녹차의 폴리페놀 분획물 10mg을 글루코스 200mg과 혼합한다. 혼합물을 주사제제로 적량 내지 5ml가 되도록 물에 용해시킨다. 다음 이용액(pH 4.5)은 관용기술로 제조될 수 있는 주사용 바이알 제제로 사용될 수 있다.
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Claims (14)

  1. 하기의 공정으로 구성된, 카페인을 0.2%중량 이하로 함유한 카멜리아 지넨시스(Camellia sinensis)의 폴리페놀 분획물의 추출방법; a)싱싱한 식물을 물-알콜 또는 물-케톤 혼합물로 추출하고; b)추출용매를 전체 또는 부분적으로 증발시키며; c)메탄올을 30∼60% 체적의 수용성 혼합물중에 현탁시키고; d)수메탄올 현탁액을 염소화된 용매로 추출하며; e)불용성 잔사를 여과하고 수메탄올층을 농축시키며; f)유기산으로 임의 산성화하고; g)농축된 수메탄올층을 추출하고 수메탄올 혼합물과 섞이지 않는 지방족 에스텔류, 알콜류 또는 케톤류로부터 선택된 용매로, 산성화시키며; h)방향족 또는 지방족 하이드로카본을 임의 부가하고, 다음 묽은 수용성광산으로 세척하며; i)물-불혼화성 유기층을 농축하고 염소화된 용매로 희석시키며; j)f) 공정과 h)공정없이 건조한 지방족 케톤 또는 알콜류중에서 술폰수지로 처리하는 공정으로 구성된, 폴리페놀 분획물의 추출방법.
  2. 제1항에 있어서, 공정 a)에서 40~90% 체적의 수용성 아세톤을 사용하는 방법.
  3. 제2항에 있어서, 70% 체적의 수용성 아세톤을 사용하는 방법.
  4. 제1항 내지 제3항중 어느한항에 있어서, c)공정에서 50% 체적의 수용성메탄올을 사용하는 방법.
  5. 제1항에 있어서, d)공정에서 메틸렌클로라이드를 사용하는 방법.
  6. 제1항에 있어서, f)공정에서 구연산암모늄 존재하 구연산을 사용하는 방법.
  7. 제1항에 있어서, g)공정의 용매로 에틸아세테이트, 에틸포메이트, 메틸에틸케톤, 1-부탄올, tert-부탄올, 또는 2-부탄올중에서 선택하여 사용하는 방법.
  8. 제7항에 있어서, 용매가 에틸아세테이트인 방법.
  9. 제1항에 있어서, h)공정에서 톨루엔을 유기층의 전체 체적에 기초하여 5% 체적의 량으로, 그리고 수용성 황산을 1% 체적으로 사용하는 방법.
  10. 제1항에 있어서, I)공정에서 메틸렌클로라이드를 사용하는 방법.
  11. 하기의 공정으로 구성된, 카페인을 0.2%중량 이하로 함유한 카멜리아 지넨시스(Camellia sinensis)의 폴리페놀 분획물의 추출방법:
    a)싱싱한 식물을 물-알콜 또는 물-케톤 혼합물로 추출하고; b)추출용매를 전체 또는 부분적으로 증발시키며; c)잔사를 메탄올 30∼60% 체적의 수용성 혼합물중에 현탁시키고; d)수메탄올 현탁액을 염소화된 용매로 추출하며; e)불용성 잔사를 여과하고 수메탄올층을 농축시키며; f)농축된 수메탄올층은 추출하고 수메탄올 혼합물과 섞이지 않는 지방족 에스텔류, 알콜류 또는 케톤류로부터 선택된 용매로 임의 산성화시키며; g)물-불혼화성 유기층을 농축하고 염소화된 용매로 희석시키며; h)건조한 지방족 케톤류 또는 알콜류중에서 술폰수지로 처리하는 공정으로 구성된, 폴리페놀 분획물의 추출방법.
  12. 하기의 공정으로 구성된, 카페인을 0.2%중량 이하로 함유한 카멜리아 지넨시스(Camellia sinensis)의 폴리페놀 분획물의 추출방법;
    a)싱싱한 식물을 물-알콜 또는 물-케톤 혼합물로 추출하고; b)추출용매를 전체 또는 부분적으로 증발시키며; c)잔사를 메탄올 30∼60% 체적의 수용성 혼합물중에 현탁시키고; d)수메탄올 현탁액을 염소화된 용매로 추출하며; e)불용성 잔사를 여과하고 수메탄물층을 농축시키며; f)유기산으로 임의 산성화하고; 9)농축된 수메탄올층을 추출하고 수메탄올 혼합물과 섞이지 않는 지방족 에스텔류, 알콜류 또는 케톤류로부터 선택된 용매로 임의 산성화시키며; h)방향족 또는 지방족 하이드로카본을 임의 부가하고, 다음 묽은 수용성광산으로 세척하며; i)물-불혼화성 유기층을 농축하고 염소화된 용매로 희석시키는 공정으로 구성된, 폴리테놀 분획물의 추출방법.
  13. 제1항의 방법으로 얻어질 수 있는, 카페인을 0.2%이하로 함유하는 카멜리아 지넨시스(Camellia sinensis)의 폴리메놀 분획물.
  14. 에피갈로카테친-3-0-갈레이트 50∼65%, 에피카테친-3-0-갈레이트 13∼20%, 에피카테친 2~4%, 에피갈로카테친 1.5~3% 및 카페인 0.2%이하를 함유하는 녹차 폴리페놀 분획물.
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