KR101143717B1 - 연 캘러스 추출물을 함유한 피부외용제 조성물 및 그 제조방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 연 캘러스 추출물을 함유한 피부외용제 조성물 및 그 제조방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 연 캘러스 추출물을 함유하는 피부외용제 조성물은 연 캘러스 추출물에 의해 탄닌산이 다량 함유되어 있어, 모공 수축, 피부 진정, 피부 수렴 및 보습 효과가 탁월하며, 항산화 효과를 가지고 있고, 항염 효능이 있어 피부개선의 목적으로 적용가능하다.

Description

연 캘러스 추출물을 함유한 피부외용제 조성물 및 그 제조방법 {Composition for Skin External Application Comprising Extract of Nelumbo Nucifera Callus}

본 발명은 연 캘러스 추출물을 함유한 피부외용제 조성물 및 그 제조방법에 관한 것이다.

일반적으로 20대 후반부터 모공이 커지게 되는데, 이는 피부가 나이들면서 건조하고 탄력이 없어지면서 모공이 두드러져 보인다. 피부의 탄력이 떨어지면서 모공을 조여 주는 힘이 떨어지기 때문에 모공이 늘어나게 된다. 피부의 탄력성이 떨어지는 것은 피부의 표피를 구성하는 표피세포들과 진피를 구성하는 콜라겐의 탄력이 떨어지기 때문이다.

수렴작용은 이렇게 넓어진 모공과 콜라겐과 같은 피부의 단백질을 수축시키고, 그리고 피부결을 정돈하기 위한 것으로, 일시적으로 피부 단백질을 끌어당겨 과잉의 피지나 땀의 분비를 억제하는 작용이 있는 것을 말한다.

피부에 대한 수렴작용은 화학적 수렴작용과 물리적 수렴작용의 두 가지로 구분된다. 화학적 수렴작용은 탄닌과 같이 단백질 응고작용을 하는 물질에 의해 땀샘과 모공이 일시적으로 수축되는 것을 말한다. 반면에, 물리적 수렴작용은 차가운 물을 피부에 사용하거나 에탄올의 휘발로 피부의 온도를 저하시켜 땀샘과 모공을 일시적으로 수축시키는 것을 말한다.

수렴제를 피부에 도포하였을 때, 피부에서의 효과는 국소적이다. 수렴제에 의한 효과는 머리카락의 직립, 팽팽한 피부(최소한 피부가 팽팽하게 됨을 느낌), 일시적인 모공 또는 땀구멍의 수축, 발한작용의 억제, 지성피부의 완화, 상처부위의 혈액 응고, 상처 치유 및 조직성장의 촉진 등이 있다.

현재 화장품에서 사용하는 수렴제로는 산화아연, 유산아연, 알란토인 히드록시알루미늄, 염화마그네슘, 황산알루미늄, 설포석탄산아연, 탄닌산, 구연산, 젖산 등이 사용된다. 수렴효과를 나타내는 대부분의 원료는 색상이 짙고 안정성이 좋지 않아 실제 수렴효과를 나타낼 만큼의 양을 사용할 수가 없는 실정이다. 산화아연, 유산아연, 탄닌산 등은 효과가 뛰어나고 물에 대한 용해도도 좋으나 피부 자극이 우려되어 그 사용량이 제한적이다.

최근에는 자연성 화장품의 추세에 맞춰 수렴효과를 가지고 있는 식물 추출물들이 수렴제로 개발되고 있는데, 이들 식물 추출물의 대부분은 탄닌(Tannin)을 함유하고 있는 것이 특징이다. 탄닌이란, 다수의 페놀성 수산기를 가지는 방향족 화합물이며, 구성 성분이 단일물질로서 결정상으로 분리된 것도 있지만, 제품의 대부분은 몇 종의 물질이 혼합된 것이며, 백색 또는 담갈색의 부정형 분말로 얻어진다. 화학적으로 말할 때는 그 주성분을 가리킨다.

전 세계적으로 약 30만종의 식물이 알려져 있으며, 다양한 생리활성을 나타내는 유용성분들이 식물에 함유되어 있음이 밝혀지고 있다. 그 유용성분들은 세포의 정상적인 대사과정에서 부차적으로 생산되어 세포 내 특수한 장소에 축적되는 2차 대사산물로서, 생화학적생태학적 관점에서 볼 때 미생물이나 외부 동물들로부터 식물체 자신을 방어하거나 생리활성 면에서 유리한 물질이라는 점에서 관심이 커지고 있다. 식물이 생산하는 2차 대사산물로는 알칼로이드(alkaloids), 플라보노이드(flavonoids), 카로티노이드(carotenoids), 글리코사이드(glycosides), 테르페노이드(terpenoids) 등이 있다. 이러한 2차 대사산물에는 보습, 피부진정 및 수렴, 자외선 차단, 미백, 각질제거, 피부노화 방지, 항산화, 피부주름 개선, 항균, 항염, 항암 등의 효과를 나타내는 것들이 많다.

한편, 캘러스는 식물체에 상처가 났을 때, 상처의 세포가 분열 능력을 회복하여 상처를 막고 비대하여 지는 유상조직으로, 식물체에서 잘라낸 조직을 옥신을 함유한 배지에서 배양하는 방법 등에 의해 생기는 특수한 조직덩어리를 의미하며, 이러한 캘러스의 이용에 관해 최근 관심이 고조되고 있고, 다양한 방면에서 연구중에 있다.

최근 들어 phytochemical 등 식물성 자원을 이용한 기능성 식품 개발 및 활용에 많은 연구가 이루어지고 있으나, 연잎에 대한 보고는 거의 전무하며, 일부 미백, 노화방지 및 주름개선을 위하여 연꽃의 물 또는 에탄올 추출물을 이용하는 연구는 시도되었으나, 연 캘러스에 관한 연구는 미비한 수준이었다. 이에 본 발명자들은, 연 캘러스 추출물을 함유하는 피부개선용 피부 외용제 조성물을 개발하고 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 연 캘러스 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 개선용 피부 외용제 조성물을 제공하는데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은, 상기 연 캘러스 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부개선용 피부외용제 조성물의 제조방법을 제공하는데 있다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 연 캘러스 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 개선용 피부 외용제 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한, (a) 연 종자로부터 캘러스를 유도하여 배양하는 단계; 및 (b) 상기 캘러스를 함유하는 조성물을 제조하는 단계를 포함하는 연 캘러스 추출물을 함유하는 피부 개선용 피부 외용제 조성물의 제조방법을 제공한다.

본 발명에 따른 연 캘러스 추출물을 함유하는 피부외용제 조성물은 연 캘러스 추출물에 의해 탄닌산이 다량 함유되어 있어, 모공 수축, 피부 진정, 피부 수렴 및 보습 효과가 탁월하며, 항산화 효과를 가지고 있고, 항염 효능이 있어 피부개선의 목적으로 적용가능하다.

도 1은 본 발명에 따른 피부외용제 조성물의 탄닌산 함량을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명에 따른 피부외용제 조성물의 피지과다분비 억제효과를 측정한 결과이다.
도 3은 본 발명에 따른 피부외용제 조성물의 DPPH를 이용한 항산화 시험 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명에 따른 피부외용제 조성물의 피부 자극 완화 시험 결과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명에 따른 피부외용제 조성물의 보습력을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.

다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로, 본 명세서에서 사용된 명명법 은 본 기술분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.

본 발명의 상세한 설명 등에서 사용되는 주요 용어의 정의는 다음과 같다.

연(Nelumbo Nucifera)은 연못에서 자라는 다년초(多年草)로서 뿌리가 옆으로 길게 뻗으며 원주형이고 마디가 많으며 가을철에 끝부분이 특히 굵어진다. 잎은 근경(根莖)에서 나와 물위에 높이 솟고 원형(圓形)에 가까우며 엽맥(葉脈)이 사방으로 퍼지며 직경 40 cm 정도이며 물에 잘 젖지 않으며 엽병(葉炳)에 가시 같은 돌기(돌기)가 있다. 7~8월에 홍색, 백색의 꽃이 피고, 직경 15~20cm이고, 화경(花梗)은 엽병(葉柄)처럼 가시가 있고 끝에 1개의 꽃이 달린다. 10월에 열매가 익으며 견과(堅果)는 타원형이고 길이 2 cm 정도로서 먹을 수 있다. 연(Nelumbo Nucifera)의 과실 또는 종자(種子)를 연자(蓮子), 연의 성숙한 종자의 녹색의 배아(胚芽)를 연자심(蓮子心), 연의 수술을 연수(蓮鬚), 잎을 하엽(荷葉), 근경(뿌리줄기)을 우(藕), 근경(뿌리줄기)의 마디를 우절(藕節)이라고 한다. 연(Nelumbo Nucifera)잎인 하엽은 설사 두통과 어지럼증, 토혈, 산후 어혈 치료, 야뇨증, 해독작용에 쓰이며 성분으로는 진통작용, 진정작용이 있는 nuciferin, armepavine, liriodenine, n-nornuciferine, tannin, citric acid, succinic acid 등이 포함되어 있다. 특히 연에 많이 함유되었다고 알려진 탄닌은 모공에 수분을 공급해주는 흡습작용과 피부 모공을 조여주는 수렴작용이 탁월하고, 항균력이 있어 피부 청결에 도움을 준다. .

이러한 연잎이나 녹차 등에서 생리활성을 나타낼 수 있는 성분으로는 식이섬유와 항산화 비타민 및 flavonoid를 비롯한 polyphenol류 등을 들을 수 있다. 그 외에 β-carotene, 비타민C, E와 같은 항산화 비타민은 free radical을 제거함으로써 관상동맥질환, 암, 백내장을 예방할 뿐만 아니라 노화의 지연에도 상당한 작용을 한다. 특히 녹색 잎에 많이 들어있는 flavonoids는 superoxide dismutase(SOD), glutathione peroxide, catalase와 peroxyl nitrate의 scavenging, Fe와 Cu의 chelating 뿐만 아니라 항산화 효소의 활성을 증가시킴으로써 지질 과산화와 low density lipoprotein(LDL)의 산화를 방지한다.

본 발명에 있어서 정의되는 연(蓮)은, 상기 연자(蓮子), 연자심(蓮子心), 연수(蓮鬚), 하엽(荷葉), 우(藕), 우절(藕節)을 모두 포함하여 통칭하는 용어이다.

본 발명에 있어서, "캘러스"는 식물체에서 잘라낸 조직을 옥신을 함유한 배지에서 배양하거나, 어떤 종류의 식물에 상처를 내거나, 상구를 옥신으로 처리하거나 할 때에 생기는 특수한 조직 또는 세포덩어리를 말한다. 보통 캘러스는 정상적인 기관형성이나 조직분화를 일으키는 능력을 잃은 무정형의 조직 또는 세포덩어리로 대부분 유세포로 되어 있다. 넓은 의미로는 아그로박테리움(agrobacterium) 등의 감염에 의해서 생기는 식물종양조직도 포함시키기도 한다.

조직배양을 통한 미분화세포덩어리인 캘러스가 형성되면, 즉, 식물체내의 세포는 증식하면 즉시 방향이 정해져서 특정한 조직 더 나아가서는 기관으로 규칙적으로 조립되어 간다. 그러나, 다양한 식물 성장 호르몬 등을 외부로부터 주게 되면 그때까지 유지되어 왔던 통제가 해제되어 세포가 제멋대로 증식하는 것으로 해석된다.

탈분화에 의해 얻어진 캘러스를 같은 조성을 가진 액체배지에 넣어서 진탕배양하면 세포는 따로 떨어져 현탁 상태로서 증식을 계속한다. 이 캘러스나 배양세포는 새로운 배지에 계대 배양함으로써 영구적으로 분열 및 증식할수 있게 되어 완전 식물체가 노화해서 죽어가는 분화세포와는 본질적으로 차이가 있다. 몇 세대정도 계대 배양한 캘러스 또는 배양세포를 다양한 식물 성장 호르몬을 제거한 고형 배지에 도포해두면 눈과 뿌리가 나와서 개체 식물이 복원된다. 이 재생식물은 한 개의 배양세포의 분열증식에서 유래한 것이며, 그 배양세포의 근원을 말하면 배축이나 수조직에서 유도한 것이다. 다시 말하면, 식물체를 구성하는 한 개의 체세포에서 식물이 복원한다는 것이다. 원래의 식물체는 몇 억 개의 체세포로 구성되어 있고, 그 모든 것이 생식세포와 같은 개체를 창조하는데 필요한 유전자를 모두 갖추고 있다는 것을 의미한다. 모식물체로부터 분리된 식물조직세포는 적정배양환경에서 배양하면 완전한 식물체로 재생될 수 있는 잠재력 즉, 전형성능을 가지고 있다. 이 전형성능은 식물 발생학 등의 학술적인 중요성은 물론이지만 화장품 원료 등의 실용화를 위해서도 활용가치가 크다.

본 발명에 있어서, "연 캘러스"는 연의 어느 부위로부터 유도된 것이든 모두 가능하나, 일 구체예로, 연 종자의 발아된 유묘로부터 자엽을 절취하여 유도시킨 캘러스일 수 있고, 연의 어느 조직이든지 일부 잘라내어 옥신 및 사이토키닌의 함량을 조절한 배지에 놓아두면 캘러스가 형성될 수 있다.

본 발명에 있어서, "추출물"은 상기 연 캘러스 자체 또는 연 캘러스를 분말화하거나, 열수추출법, 에탄올 추출법 등에 의해 수득한 추출물을 의미한다.

본 발명에 있어서, "유효성분으로 함유하는"의 의미는, 피부 외용제 조성물로써 피부 개선 효과를 나타낼 수 있는, 예컨대, 피부 세포의 증식활성을 개선시킬 수 있고, 활성화 시킬 수 있는 정도로 함유하는 것을 의미한다. 또한, 피부 외용제 조성물로써 보습효과, 피부 진정효과 등을 나타낼 수 있을 정도의 유효량을 함유하는 것을 의미한다.

본 발명에 있어서, "피부개선"은 피부의 상태를 바람직한 상태로 개선시키거나, 피부 상태를 한층 더 좋게 만드는 모든 작용을 의미하며, 예컨대, 피부를 진정시키거나, 피부의 보습력을 증가시키거나, 화장료 조성물 등을 피부에 적용시킬 때의 자극을 완화시킨다거나, 피지분비를 억제하여 피부 트러블을 개선시키거나, 피부 각질 또는 피부결을 개선 시키는 모든 작용을 의미한다.

본 발명은 일 관점에서, 상기 연 캘러스 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부개선용 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 있어서, 상기 연 캘러스 추출물은 조성물의 총 중량에 대하여 0.1 내지 10중량%를 함유하는 것을 특징으로 할 수 있다. 상기 0.1 중량% 미만인 경우, 그 효과가 미미하며, 10중량%를 초과하는 경우 안전성과 제형 안정성의 문제점이 있다.

또한, 본 발명에 따른 피부 외용제 조성물은 화장료 조성물 또는 약학적 조성물일 수 있다.

상기 피부외용제 조성물이 약학적 조성물일 경우, 이미 공지되어 사용되고 있는 약학적으로 허용가능한 담체를 추가적으로 포함할 수 있다. 다시말해, 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제 등을 더 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 추출물을 포함하는 약학조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 외용제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 바람직하게는 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제의 피부 외용 약학 조성물을 제공한다. 추출물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 올리고당, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트 (calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 연 캘러스 추출물을 함유하는 미백, 피부노화방지 및 주름 개선용 조성물은 피부에 적용할 수 있는 피부 외용제 제형으로서 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제의 피부 외용제 형태의 약학조성물로 제조하여 사용할 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다.

본 발명에 따른 외용제 조성물이 화장료 조성물인 경우, 본 발명의 연 캘러스 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 개선 효과를 위한 화장품 및 세안제 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 각종 크림, 로션, 스킨 등과 같은 화장품류와 클렌징, 세안제, 비누, 트리트먼트, 미용액 등이 있다.

본 발명의 화장료는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함한다.

본 발명의 화장료에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합해도 된다. 이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.

상기 화장료 조성물에 있어서는, 화장품 제제에 있어서 수용가능한 담체를 포함할 수 있다. 여기서, "화장품 제제에 있어서 수용가능한 담체"란 화장품 제제에 포함될 수 있는 이미 공지되어 사용되고 있는 화합물 또는 조성물이거나 앞으로 개발될 화합물 또는 조성물로서 피부와의 접촉시 인체가 적응 가능한 이상의 독성, 불안정성 또는 자극성이 없는 것을 말한다.

상기 담체는 본 발명의 피부 외용제 조성물에 그것의 전체 중량에 대하여 약 1 중량% 내지 약 99.99 중량%, 바람직하게는 조성물의 중량의 약 90 중량% 내지 약 99.99 중량 %로 포함될 수 있다. 그러나 상기 비율은 본 발명의 피부 외용제 조성물이 제조되는 전술한 바의 제형에 따라 또 그것의 구체적인 적용 부위(얼굴, 목 등)나 그것의 바람직한 적용량 등에 따라 달라지는 것이기 때문에, 상기 비율은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 안 된다.

한편, 상기 담체로서는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료 등이 예시될 수 있다. 상기 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료로 사용될 수 있는 화합물/조성물 등은 이미 당업계에 공지되어 있기 때문에 당업자라면 적절한 해당 물질/조성물을 선택하여 사용할 수 있다.

본 발명의 일 구현예로써, 본 발명에 따른 피부 외용제 조성물은 상기 함초 추출물 이외에 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글키롤, 폴리옥시에틸렌 경화피마자유, 에탄올, 트리에탄올아민 등을 포함할 수 있으며, 방부제, 항료, 색소, 정제수 등을 필요에 따라 미량 포함할 수 있다.

특히, 상기 피부 외용제 조성물은 본 발명에 특별히 개시된 제조방법 이외에도, 통상적으로 알려진 제조방법을 이용하여, 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조될 수 있다.

화장료 조성물로 제조될 경우, 유화 제형의 화장품으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 가용화 제형의 화장품으로는 유연화장수가 있다. 또한, 피부과학적으로 허용가능한 매질 또는 기제를 함유함으로써 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 국소적용 또는 전신적용할 수 있는 보조제 형태로 제조될 수 있다.

또한, 적합한 화장품의 제형으로는, 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.

또한, 본 발명의 피부 외용제 조성물은 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일,염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 그리고, 상기의 성분들은 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하지만, 총중량에 대하여 바람직하게는 0.01 - 5 % 중량 백분율, 보다 바람직하게는 0.01 - 3 % 중량 백분율로 배합된다.

본 발명의 화장료는 용액, 유화물, 점성형 혼합물 등의 형상을 취할 수 있다.본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 추출물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함한다.

본 발명의 미백, 피부노화방지 및 주름 개선용 기능성 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 유액, 크림, 화장수, 팩, 파운데이션, 로션, 미용액, 모발화장료 등을 들 수 있다.

구체적으로, 본 발명의 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저의 제형을 포함한다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트,사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

또한, 본 발명은 다른 관점에서, (a) 연 종자로부터 캘러스를 유도하여 배양하는 단계; 및 (b) 상기 캘러스를 함유하는 조성물을 제조하는 단계를 포함하는 연 캘러스 추출물을 함유한 피부개선용 피부 외용제 조성물의 제조방법에 관한 것이다.

상기 (a)단계에서, 구체적으로는 연의 종자를 발아시켜 캘러스를 유도하기 위해 적절한 배지를 선택할 수 있다. 기술분야에서 캘러스 배양에 일반적으로 사용되고 있는 배지가 있다면, 제한없이 사용가능하다. 식물에서는 일반적으로 MS(Murashige-Skoog)배지, B5배지 등을 주로 사용하고, 일 예로, MS 기초 고체 배지(Murashige and Skoog 1962, Duchefa 사, Cat No. M0221)의 조성(1L기준시)은 NH₄NO₃ 1650 mg, KNO₃ 1900 mg, CaCl₂?2H₂O 440 mg, MgSO₄?7H₂O 370 mg, KH₂PO₄ 170 mg, KI 0.83 mg, H₃BO₃ 6.2 mg, MnSO₄?4H₂O 22.3mg, ZnSO₄?7H₂O 8.6 mg, Na₂MoO₄?2H₂O 0.25 mg, CuSO₄?5H₂O 0.025 mg, CoCl₂?6H₂O 0.025 mg, FeSO₄?7H₂O 27.8 mg, Na₂EDTA?2H₂O 37.3 mg, Myoinositol 100 mg, Nicotinic acid 0.5 mg, Pyridoxine-HCl 0.5 mg, Thiamine-HCl 0.5 mg, Glycine 2 mg, Sucrose 30000 mg 이다.

본 발명에 있어서, 연 종자로부터 캘러스를 유도하기 위한 배지로써, 상기 MS 기초 고체 배지에 Sucrose 40.0 g/L, Agar 5~10.0 g/L, NAA 0.5 mg/L, BAP 1.0 mg/L를 첨가한 배지를 이용할 수 있다. 여기서, 상기 배지의 pH는 5.5~6.0이고, 바람직하게는, pH 5.7~5.8이다. 이 고체 배지에 치상하여, 캘러스 유도가 가능하다.

이것 이외에도, 종래에 연 캘러스 유도 배지로써 알려진 다양한 배지들 또한 본 발명에서 적용가능할 것이다.

캘러스를 유용물질을 함유하는 배지에서 배양하면, 캘러스가 배지에 첨가된 유용물질을 흡수하여 캘러스 내에 유용물질을 함유하게 되므로, 캘러스는 유래된 식물의 생리 활성 뿐만 아니라, 배지 내 첨가된 유용물질에 의한 생리활성을 나타낼 수 있다. 이러한 캘러스 내 유용물질의 도입은, 상기 유도된 캘러스를 유용물질을 포함하는 배지내에 치상하는 단계를 추가적으로 수행하여 배양된 캘러스에 유용물질을 도입시킬 수도 있다.

상기 (b)단계에서, (a)단계에서 얻어지는 캘러스를 분말화하여 조성물에 포함시켜 제조할 수 있다. 구체적으로, 본 발명에 따른 연 캘러스 추출물 피부 외용제 조성물에서, 상기 수상성분, 유상성분 이외에 추가적으로, 첨가제 등이 포함될 수 있다. 상기 첨가제로는 알코올, 착색제, 방향제 등이 있다.

추가적으로, 본 발명에 따른 피부 외용제 조성물은, 다양한 형태로 제조될 수 있는데, 예컨대, 에멀젼, 로션, 크림(수중유적형, 유중수적형, 다중상), 용액, 현탁액(무수 및 수계), 무수 생성물(오일 및 글리콜계), 젤, 마스크, 팩, 분말 등의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명에 따른 연 캘러스 추출물 함유 피부 외용제 조성물의 제조방법은 전술한 제조방법에 한정되는 것은 아니며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 상기 제조방법을 일부 변형시킨 방법으로도 본 발명에 따른 연 캘러스 추출물 함유 피부 외용제 조성물을 제조할 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는 것은 당 업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

실시예 1: 본 발명에 따른 연 캘러스의 제조

무균처리한 연의 종자를 호르몬이 첨가되지 않은 MS(Murashige-Skoog) 기초 고체 배지(Murashige and Skoog 1962, Duchefa 사, Cat No. M0221)에 파종하여 25~28 ℃에서 14~32시간, 바람직하게는 18시간의 일장조건(장일)으로 발아시켰다.

발아된 유묘(幼苗)로부터 하엽을 예리한 칼로 3~5 cm정도 붙은 자엽을 절취하여 MS 기초배지(Murashige and Skoog 1962, Duchefa 사, Cat No. M0221)에 Sucrose 40.0 g/L, Agar 5~ 10.0 g/L, NAA 0.5 mg/L 및 BAP 1.0 mg/L를 함유한 pH 5.5 ~ 6.0, 바람직하게는 pH 5.7 ~ 5.8의 MS 고체배지에 치상하였다. 약 4주 경과된 후, 배지에 치상된 절취된 자엽에서 캘러스가 유도되었다. 상기 유도된 캘러스를 액체 질소 상에서 곱게 갈아서, 정제수에 녹여 하기 실험 예에서 사용하였다.

실험예 1 : 본 발명에 따른 피부 외용제 조성물의 피부 진정효과 시험

본 발명에 따른 연 캘러스 추출물 함유 조성물의 적용 시 피부 자극 완화 효과(피부 진정효과)를 살펴보기 위해, 20~40대 남여 20명을 대상으로 피부 자극 완화 시험을 하였다.

자극원으로 5% 락틱산(L-lactic acid)을 이용하고, 실시예 1에서 제조한 연 캘러스 추출물을 정제수에 하기 표 1에 기재된 각각의 농도로 함유시킨 조성물을 제조하여, 10일간 사용하도록 하여, 락틱산에 의해 유발되는 자극에 대한 완화 효과를 비교하여 보았다. 매일 아침, 저녁으로 사용하게 한 다음 자극 여부 및 강도를 설문지에 표시하게 하였다. 시험 결과의 평가는 1일 1회로 하였으며, 주관적 자극과 객관적 자극으로 나누어 표시하게 하였으며, 그 결과는 다음과 같다.

[표 1]

연 캘러스 추출물은 락틱산에 비하여 자극의 완화효과가 매우 뛰어났으며, 특히, 연 캘러스 추출물이 1% 함유된 조성물이 5% 락틱산에 의해 유발된 피부자극의 완화 효과가 매우 뛰어났고, 전반적으로는, 연 캘러스 추출물 함량이 늘어날 수록 피부 진정효과가 뛰어난 것으로 나타났다.

실험예 2: 탄닌산 함량 측정 시험

실시예 1에서 제조한 연 캘러스 추출물을 하기 표 2의 농도별로 희석한 10 ml, 정제수 40 ml 및 에테르 50 ml을 분액 깔때기에 취하여 세게 흔들어 섞은 다음 정치하였다. 물층을 따로 취하고, 초산에칠 50 ml로 3회 추출하여 추출한 액을 합하고 소량의 물로 씻은 다음 무수황산나트륨 소량을 넣어 방치한 다음 여과하였다. 여액을 증발건조한 다음 잔류물을 50 % 에탄올 용액 10 ml에 정확하게 녹였다. 여기서 1 ml을 취하고 정제수 99 ml을 넣어 정확히 100 ml을 맞추고, 여기서 5 ml을 정확하게 취하여 폴린 5 ml, 10 % 탄산나트륨 5 ml을 넣어 잘 섞은 후 1시간동안 방치한 후 파장 700 nm에서 흡광도를 측정하였다.

비교군으로써, 연 추출물은 정제수에 충분히 세척한 100g의 연의 잎(하엽)을 열탕증류기에서 8~48시간동안, 80~100℃로 가열하여 열수추출물을 얻어 표 2의 농도별로 희석한 10ml을 얻어 상기 방법과 동일한 방법으로 제작하여 흡광도를 측정하였다.

표준액은 탄닌산 1 g을 정제수 100 ml에 녹여 0, 1, 2, 3, 4, 5 ml을 정확하게 취하여 또다시 정제수 100 ml에 녹여 사용하고, 표준액으로부터 만든 표준곡선(Standard Curve)을 작성하여 흡광도를 대입하여 추출물의 탄닌의 양을 구하였다.

[표 2]

표 2 및 도 1에 나타난 바와 같이, 연 추출물에 비하여 본 발명에 따른 연 캘러스 추출물의 경우에 훨씬 높은 탄닌산 함량을 가지며, 탄닌산이 파이토케미칼의 한 종류인 점을 감안해본 다면, 이 효과는 상당한 정도의 것이다.

실험예 3: 헤모글로빈 단백질을 이용한 피지과다분비 억제효과 측정

탄닌과 같은 단백질 응고작용을 하는 물질에 의해 땀샘과 모공이 일시적으로 수축되는 화학적 수렴작용을 이용하여 모공수축으로 인한 피지과다분비 억제효과를 측정하였다. 피부를 대신할 단백질로 뉴질랜드산 Albino rabbit (몸무게 3kg)의 혈액에서 채취하여 얻은 헤모글로빈을 사용하였다. 50배의 정제수로 희석된 헤모글로빈 용액 2.0 ml와 하기 표 2에 기재된 농도별로 희석된 추출물을 함유한 조성물 2.0 ml 을 진탕 혼합한 후, 5000 rpm조건에서 20분간 동안 원심 분리하여 상등액을 취하여 576 nm에서 흡광도를 측정하였다.

피지분비 억제효과(%) = (1-시험군의 흡광도/대조군의 흡광도) X 100

[표 3]

표 3 및 도 2에 나타난 바와 같이, 연 추출물에 비하여 본 발명에 따른 연 캘러스 추출물의 경우에 훨씬 우수한 피지 분비 억제 효과를 가지는 것으로 나타났다.

실험예 4: DPPH (1,1- diphenyl -2- picryl hydrazyl )를 이용한 항산화 시험

본 발명에 따른 추출물의 항산화능 정도를 조사하였다. 1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl (DPPH, Sigma D9132-1G, USA)는 에탄올 내에서 자유라디칼을 발생하는데, 상기 실시예 1에서 제조된 조성물과 일정 비율로 혼합하여 생성된 자유라디칼의 양이 어느 정도 감소하는지를 확인하였다.

에탄올 0.2 ml에 에탄올을 용매로 제조된 0.1 mM DPPH 용액 0.5 ml 및 본 발명에 따른 다양한 농도의 피부외용제 조성물 0.3 ml을 최종농도가 10% ~ 0.1%가 되도록 첨가하였다. 그 다음, 상기 용액을 10초동안 강하게 vortexing 하고, 냉암소에서 30분간 보관한 다음, ELISA를 이용하여 517 nm에서 흡광도를 측정하였다. 본 발명에 따른 조성물의 항산화능의 정도는 순수한 물을 사용한 대조군(무처리군)의 흡광 강도를 기준으로 백분율로 나타내었다.

도 3에 나타난 바와 같이, 대조군, 연 추출물 및 연 캘러스 추출물과 비교하여 1 %, 5 %, 10% 처리시 추출물의 경우 1.2 %, 13.2 %, 24.7 %의 효과를 보였고, 캘러스 추출물의 경우에는 38 %, 51 %, 56 % 효과를 보여, 연 추출물의 경우보다 연 캘러스 추출물이 훨씬 높은 항산화 효과를 보였다.

실험예 5: 피부 자극 완화 시험

본 발명에 따른 추출물의 피부자극완화 효과를 평가하기 위하여 세포 실험을 통한 베타-헥소사미니다제 분비 양의 억제 효과 확인하였다. RBL-2H3 세포를 10% 우태아혈청(FBS)를 함유한 DMEM(Dulbecco' modified Eagle medium)에 현탁시킨 후 24 웰 플레이트의 각 웰 당 2 x 10⁶ 세포가 들어가도록 처리한 다음, 각 웰에 100ng/mL의 마우스 모노클로날 IgE로 감작시킨 후 5% CO₂ 배양기에서 24 시간동안 배양하였다. 세포를 웰당 타이로드 완충액(Tyrode buffer) 500㎕를 사용하여 헹구어내고, 타이로드 완충액 160 ㎕를 첨가한 후, 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 15분 동안 배양하였다. 농도별로 혼합 추출물을 처리한 후 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 15분간 배양하고, 한 시간 동안 DNP-BSA 100ng/mL로 처리하였다. 10분간 얼음에 두어 반응을 정지시키고 원심분리하였다. 상층액에 기질로서 1mM p-nitrophenyl-N-acetyl-β-D-glucosaminide 50㎕로 처리 후 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 한 시간 동안 배양한 후 1M 탄산나트륨 완충액를 넣어 반응을 정지시켰다. ELISA 판독기를 사용하여 405nm 에서 흡광도를 측정하였다.

도 4에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 추출물의 마스트세포(mast cell) 탈과립 억제효과를 평가한 결과, 농도의 증가(대조군, 0.1%, 0.5%, 1%, 5%)에 따라 베타-헥소사미니다제의 방출양이 감소하여 그 억제 효과가 우수하여 피부자극완화 효과가 있음을 확인하였다.

실험예 6: 보습력 측정 시험

10L의 정제수에 100g의 연의 하엽을 상기 방법으로 추출한 추출물 5ml과 본 발명에 따른 연 캘러스 추출물 1%로 함유시킨 조성물 및 1,3-부틸렌 글리콜(BG)의 보습력을 비교하였다.

상기 실험군들 5 mL를 각각 플레이트에 넣은 후 완전건조 된 CaCl₂를 흡습제로 하여 35℃ 데시케이터에서 무게를 측정하였다. 무게는 총 144시간 동안 측정하였다. 화장품 배합의 보습성분으로서 일반적으로 사용되는 1,3-부틸렌 글리콜(BG)과 추출물을 비교하여 실험결과를 나타내었다.

그 결과, 도 5에 나타난 바와 같이, 연 추출물 또는 BG에 비해 본 발명에 따른 추출물의 보습력이 시간 경과에 따라 유의적으로 높은 것을 알 수 있다.

실험예 7: iNOS 활성 저해를 이용한 항염 시험

생쥐의 대식세포인 Raw264.7 세포를 이용하여 인위적으로 유발시킨 염증의 억제 효과를 알아보기 위하여, iNOS가 들어있지 않은 10% FBS-DMEM(Fetal Bovine Serum, 소태아혈청, Dulbecco's Modified Eagle Medium, GIBCO사) 배지에 1×10⁵세포를 현탁시켜 24 well plate에 접종하여 부착시켰다. 하루 후 본 발명에서 제조된 연 추출물과 연 캘러스 추출물을 농도별로 처리하여 18시간 배양한 후 1 ㎍/ml의 Lipopolysaccharide (Sigma사)를 처리하여 24시간 동안 배양하였다. 그 후, 상층액을 회수하여 96 well plate에 100 ㎕씩 넣고 Griess reagent (Sigma사)을 동량 첨가하여 상온에서 10분간 가볍게 흔들어 주어 570 nm에서 흡광도를 측정했다. Sodium Nitrite를 표준품으로 하여 검량선을 작성하고 각 시료를 배양액 중의 Nitric Oxide의 생성량을 구하였다. Lipopolysaccharide를 처리한 군의 Nitric Oxide의 생성량을 100%로 하여 각 시료의 % 수득율을 구하였다.

[표 4]

상기 표 4에서와 같이, iNOS의 활성을 연 캘러스 추출물이 연 추출물보다 더 농도 의존적으로 저해시켰다.

부호없음

Claims (4)

1. 연 (Nelumbo Nucifera) 캘러스 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 진정용 또는 피부자극 완화용 화장료 조성물.
   
2. 연 (Nelumbo Nucifera) 캘러스 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용 화장료 조성물.
   
3. 연 (Nelumbo Nucifera) 캘러스 추출물을 유효성분으로 함유하는 피지 분비 억제용 화장료 조성물.
   
4. 삭제

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