KR101305698B1 - 부활초 캘러스 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 부활초(Myrothamnus flabellifolia ) 캘러스 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 노화 방지용 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 부활초 캘러스 추출물을 함유하는 피부외용제 조성물은 천연물을 함유한 조성물로써, 합성 화학물질에 비해 인체에 무해하고, 피부에 자극적이지 않으며, 콜라겐 합성 증진 효과, 엘라스타제 억제 효능 등을 가지고 있어, 피부 주름 방지, 주름 개선 효과, 항산화 효과를 가지고 있어, 피부 노화 방지, 피부 주름 개선의 목적으로 적용가능하다.

Description

부활초 캘러스 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물 {Skin External Composition Containing Myrothamnus flabellifolia Callus Extract}

본 발명은 부활초(Myrothamnus flabellifolia ) 캘러스 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 노화 방지용 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.

신체의 근육운동이나 관절운동이 자주 일어나는 부위에는 주름이 있어 자유롭게 움직일 수 있도록 해준다. 만약 이런 부위에 주름이 하나도 없이 팽팽하다면 우리가 신체를 자유롭게 움직이는 것은 매우 불편할 것이다. 그러나 자연노화나 광노화에 의해서 눈밑 피부가 처지고 정상적인 피부에 심한 주름이 발생하는 것은 미용적으로 좋은 인상을 주지 못한다. 이러한 주름에는 활성산소와 여러 가지 프리 라디칼이 관여한다. 이러한 광노화 현상은 자외선에 의하여 세포 내부에 활성 산소 라디칼이 생성되고, 이 활성 산소는 염증성 반응을 일으키는 신호전달 체계를 통하여 진피의 I형 콜라겐, III형 콜라겐, 표피층과 진피층 사이를 잇는 기저만(base membrane)의 IV형 콜라겐, 엘라스틴, 라미닌(laminin)의 감소나 변형, 표피진피기저막의 편평화(flattening), 단백질 분해효소(MMP-1, MMP-3, MMP-9 등)의 합성을 촉진하여 (Fisher G.J. et al., Nature, Vol. 379, 335-339) 진피층의 탄력을 감소시킴으로써 피부 주름이 유발되는 것으로 알려져 있다. 즉, 콜라겐이 감소하고 엘라스틴의 가교 결합이 증가할 뿐만 아니라 기질의 저하에 의해 피부의 탄력이 저하되고 주름이 생성되는 것이다. 주름개선 화장품에 필수적인 주름개선제로는 진피의 결합조직 형성을 촉진하는 섬유아세포의 성장을 촉진하는 물질, 섬유아세포의 콜라겐 합성을 촉진하는 물질, 활성산소와 프리라디칼을 제거하는 물질 등이 있다.

주름살은 얼굴 부위에 가장 나타나기 쉽고 눈가나 이마 등 주름살이 나타나기 쉬운 부위의 특징에서도 알 수 있듯이 근육의 움직임에 따라 반복적으로 가해진 피부 변형이 서서히 주름살로 고정되어 형성된다. 그 과정이 분명히 밝혀져 있지 않지만 나이가 들어감에 따라 일어나는 피부의 구조기능의 변화와 깊은 관련이 있다. 만성적인 햇빛 노출이 초래하는 광노화 피부에서는 표피, 진피, 그들의 접합부, 혹은 모세혈관계 등 광범위하게 자연노화 피부와는 다른 조직학적형태학적 변화가 나타난다.

각질층의 두꺼워짐, 건조, 혹은 진피에 있어서 콜라겐의 감소나 변성된 엘라스틴의 축적, 나아가서 기저층의 변형과 그 주변의 손상 등 여러 가지 피부조직의 변화가 피부의 탄력 저하를 초래하고 반복되는 피부의 변형에 대한 복원력을 저하시켜, 이윽고 주름으로 정착하게 되는 것이다.

주름과 관련된 피부의 생리적 변화 가운데 하나가 섬유아세포의 증식 감소이다. 섬유아세포의 증식이 감소되면 콜라겐 합성이 적어지고, 이것은 외부인자에 대한 방어력의 약화로 이어져 주름생성을 측진하게 된다.

식물은 오래 전부터 인류 복지에 도움을 주는 다양한 천연물질들의 공급원이 되어왔다. 이들 물질들은 대부분 이차대사산물로서 의약품, 식품 첨가물, 화장품 원료, 향료, 색소 등의 용도로 사용되고 있다. 유기합성 분야의 발달에 의한 수많은 새로운 화합물들의 합성에도 불구하고 식물은 아직도 신물질의 근원으로 인정받고 있다. 매년 식물에서 발견되는 새로운 화학구조를 갖는 신물질이 수천 가지 이상이며 그 중 상당수는 생리활성을 갖고 있음을 고려한다면 식물은 중요한 원료가 된다고 할 수 있다.

식물은 식물을 구성하는 잎, 줄기, 뿌리 등 그 일부만을 이식하여도 전체 개체가 다시 형성되는 전형성능(totipotency)이 뛰어나다. 식물세포는 식물의 조직으로부터 유도된 미분화(undifferentiated) 세포인 캘러스(Callus)를 말하는데, 캘러스는 정상적인 기관형성이나 조직분화를 일으키는 능력을 잃은 무정형의 조직 또는 세포덩어리로서, 식물체에서 잘라낸 조직을 옥신(Auxin)이나 싸이토카인(Cytokines)을 함유한 배지에서 배양하거나 식물체에 상처를 내거나 또는 식물체의 상구를 옥신으로 처리하였을 때 생긴다. 캘러스는 식물세포 배양, 특히 조직배양을 통하여 잎, 줄기, 뿌리, 근경, 열매 등 식물의 어느 부분에서도 유도될 수 있으며, 계대배양에 의해 계속해서 만들어 낼 수 있다는 특징을 가지고 있다.

식물 세포의 배양의 기본 원칙은, 모든 식물 세포는 그 세포가 유래되는 전체 식물을 건설하는 능력을 갖는다는 생물학적 사실을 이용한다. 이 전형성능은 동물 유래의 배아줄기세포의 다분화성과 비교 가능하고, 윤리적인 문제나 안전성의 문제가 없어 화장품 분야를 포함한 다양한 분야에서 식물 줄기세포의 활용에 대한 관심이 점점 높아지고 있다. 따라서, 식물 세포가 피부 줄기 세포의 보호 및 활성화에 대한 긍정적 영향을 준다는 것을 받아들일 수 있다. 이러한 식물의 성질을 이용한 조직배양을 통한 미분화세포덩어리인 캘러스 배양을 이용한다면 우수한 생리활성 효능을 지닌 화장품 원료로서의 가치가 있다고 볼 수 있다.

따라서, 이러한 기술분야의 흐름에 따라, 본 발명자들은 부활초 추출물이 항노화 효과가 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 부활초 캘러스 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물을 제공하는데 있다.

본 발명의 다른 목적은, 부활초 캘러스 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 노화 방지용 피부 외용제 조성물을 제공하는데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은, 부활초 캘러스 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 탄력증진용 피부 외용제 조성물을 제공하는데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은, 부활초 캘러스 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 형성 예방 및 피부 주름 개선용 피부 외용제 조성물을 제공하는데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은, 부활초 캘러스 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 탄력증진용 피부 외용제 조성물을 제공하는데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은, 부활초 캘러스 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화능을 가지는 피부 외용제 조성물을 제공하는데 있다.

상기의 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 부활초 (Myrothamnus flabellifolia) 캘러스 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 부활초 캘러스 추출물을 조성물의 총 중량에 대하여 0.1 내지 10중량%를 함유하는 피부 외용제 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 부활초 캘러스 추출물은 분말화하여 조성물에 함유된 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 부활초 캘러스 추출물을 함유하는 피부 노화 방지용 피부 외용제 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 부활초 캘러스 추출물을 함유하는 피부 탄력증진용 피부 외용제 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 부활초 캘러스 추출물을 함유하는 피부 주름 형성 예방 및 피부 주름 개선용 피부 외용제 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 부활초 캘러스 추출물을 함유하는 항산화능을 가지는 피부 외용제 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 부활초 캘러스 추출물을 함유하는 콜라겐 합성 증진능을 가지는 피부 외용제 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 부활초 캘러스 추출물을 함유하는 엘라스타제 억제능을 가지는 피부 외용제 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 부활초 캘러스 추출물을 함유하는 피부외용제 조성물은 천연물을 함유한 조성물로써, 합성 화학물질에 비해 인체에 무해하고, 피부에 자극적이지 않으며, 콜라겐 합성 증진 효과, 엘라스타제 억제 효능 등을 가지고 있어, 피부 주름 방지, 주름 개선 효과, 항산화 효과를 가지고 있어, 피부 노화 방지, 피부 주름 개선의 목적으로 적용가능하다.

다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로, 본 명세서에서 사용된 명명법 은 본 기술분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.

본 발명의 상세한 설명 등에서 사용되는 주요 용어의 정의는 다음과 같다.

본 발명에 있어서, "추출물"은 상기 부활초 캘러스 자체 또는 부활초 캘러스를 분말화하거나, 열수추출법, 에탄올 추출법 등에 의해 수득한 추출물을 의미한다.

본 발명에 있어서, "유효성분으로 함유하는"의 의미는, 피부 외용제 조성물로써 피부 노화 방지 효과, 피부 주름 예방, 피부 주름 개선, 항산화 효과, 콜라겐 합성 증진효과, 엘라스타제 억제 효과, 세포 증식능을 나타낼 수 있을 정도로 함유하는 것을 의미한다.

본 발명에 있어서, "캘러스"는 식물체에서 잘라낸 조직을 옥신을 함유한 배지에서 배양하거나, 어떤 종류의 식물에 상처를 내거나, 상구를 옥신으로 처리하거나 할 때에 생기는 특수한 조직 또는 세포덩어리를 말한다. 보통 캘러스는 정상적인 기관형성이나 조직분화를 일으키는 능력을 잃은 무정형의 조직 또는 세포덩어리로 대부분 유세포로 되어 있다. 넓은 의미로는 아그로박테리움(agrobacterium) 등의 감염에 의해서 생기는 식물종양조직도 포함시키기도 한다.

조직배양을 통한 미분화세포덩어리인 캘러스가 형성되면, 즉, 식물체내의 세포는 증식하면 즉시 방향이 정해져서 특정한 조직 더 나아가서는 기관으로 규칙적으로 조립되어 간다. 그러나, 다양한 식물 성장 호르몬 등을 외부로부터 주게 되면 그때까지 유지되어 왔던 통제가 해제되어 세포가 제멋대로 증식하는 것으로 해석된다.

탈분화에 의해 얻어진 캘러스를 같은 조성을 가진 액체배지에 넣어서 진탕배양하면 세포는 따로 떨어져 현탁 상태로서 증식을 계속한다. 이 캘러스나 배양세포는 새로운 배지에 계대 배양함으로써 영구적으로 분열 및 증식할수 있게 되어 완전 식물체가 노화해서 죽어가는 분화세포와는 본질적으로 차이가 있다. 몇 세대정도 계대 배양한 캘러스 또는 배양세포를 다양한 식물 성장 호르몬을 제거한 고형 배지에 도포해두면 눈과 뿌리가 나와서 개체 식물이 복원된다. 이 재생식물은 한 개의 배양세포의 분열증식에서 유래한 것이며, 그 배양세포의 근원을 말하면 배축이나 수조직에서 유도한 것이다. 다시 말하면, 식물체를 구성하는 한 개의 체세포에서 식물이 복원한다는 것이다. 원래의 식물체는 몇 억 개의 체세포로 구성되어 있고, 그 모든 것이 생식세포와 같은 개체를 창조하는데 필요한 유전자를 모두 갖추고 있다는 것을 의미한다. 모식물체로부터 분리된 식물조직세포는 적정배양환경에서 배양하면 완전한 식물체로 재생될 수 있는 잠재력 즉, 전형성능을 가지고 있다. 이 전형성능은 식물 발생학 등의 학술적인 중요성은 물론이지만 화장품 원료 등의 실용화를 위해서도 활용가치가 크다.

본 발명에 있어서, "부활초 캘러스"는 부활초의 어느 부위로부터 유도된 것이든 모두 가능하나, 일 구체예로, 부활초 종자의 발아된 유묘로부터 자엽을 절취하여 유도시킨 캘러스일 수 있고, 부활초의 어느 조직이든지 일부 잘라내어 옥신 및 사이토키닌의 함량을 조절한 배지에 놓아두면 캘러스가 형성될 수 있다.

본 발명에 있어서, "피부노화"는 피부 조직의 탄력성이 저하되면서 피부가 주름지거나, 피부의 색소 침착, 피부의 탄력 감소 등 일반적으로 당업계에 알려져있는 피부 노화 상태를 모두 포함하는 개념이다. 좀 더 구체적으로, 피부 노화는 나이가 들어감에 따라 자연히 발생하는 자연노화(intrinsic aging, 내인성노화)와 주위 환경 특히 자외선에 의한 광노화(photoaging)으로 나눌 수 있다.

광노화(photoaging)는 오랫동안 햇빛에 노출된 얼굴, 손등, 목뒤 등의 피부에서 관찰되는 노화현상을 발하는 것으로 자연노화 현상과 자외선에 의한 영향이 합쳐진 결과로 발생한다. 자연노화와 광노화 사이에는 주름이 생성되는 기전이 세부적으로 차이가 있지만 ① 피부세포의 증식이나 신진대사가 저하되며 ② 표피-진피 사이의 결합이 약해 조그만 자극에도 손상을 입기 쉽고 ③ 콜라겐의 합성양이 감소 ④ 콜라겐 분해 효소인 MMPs(Matrix metalloproteinases)의 과다한 발현 증가등의 생리적 변화들이 나타나 피부가 건조해지며, 표피, 진피층의 구조적인 차이로 인해 탄력성을 잃어버리고, 점차적으로 주름이 깊어진다. 현재는 주름 개선과 예방을 위해 화장품 영역에서 다양한 기전의 많은 기능성 원료들이 개발되고 있는데, 대표적으로 retinol을 주성분으로 사용하는 화장품이 일반적이다. 또한, 여러 원인에 의해 발생되는 피부노화를 억제하거나 개선하기 위해 유해산소 소거 물질, MMP-1 억제나 콜라겐 생성촉진등과 같은 물질들의 개발이 필요하다.

본 발명은 일 관점에서, 상기 부활초 캘러스 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.

부활초(학명: Myrothamnus flabellifolia , 영명: Resurrection Plant)는 덤불처럼 다수의 줄기를 내며 자라는 관목으로 아프리카 중부 이남 지역에만 분포하며, 바위 도상구릉에서 자란다. 크기는 0.5~1.5 m이며, 잎은 접혀져 있으며, 떨어지지 않고 달려 있는데 극히 건조한 서식지에서도 잘 적응하여 오래도록 남아 있으나 재배되지는 않는다.

본 발명에 있어서, 상기 부활초 캘러스 추출물은 조성물의 총 중량에 대하여 0.1 내지 20중량%, 0.1 내지 15중량%, 0.1 내지 10 중량%, 0.1 내지 5 중량%, 또는 0.1 내지 1 중량%, 0.1 내지 0.5 중량%를 함유하는 것을 특징으로 할 수 있다. 상기 0.1 중량% 미만인 경우, 그 효과가 미미하며, 10중량%를 초과하는 경우 안전성과 제형 안정성의 문제점이 있다.

다른 관점에서, 본 발명은 부활초 캘러스 추출물을 함유하는 피부 노화 방지용, 피부 탄력증진용 또는 피부 주름 형성 예방 및 피부 주름 개선용 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.

또한, 다른 관점에서, 부활초 캘러스 추출물을 함유하는 항산화능을 가지는 조성물, 콜라겐 합성 증진능을 가지는 조성물, 엘라스타제 억제능, 또는 세포 증식능을 가지는 조성물에 관한 것이다.

또한, 본 발명에 따른 피부 외용제 조성물은 화장료 조성물 또는 약학적 조성물일 수 있다.

상기 피부외용제 조성물이 약학적 조성물일 경우, 이미 공지되어 사용되고 있는 약학적으로 허용가능한 담체를 추가적으로 포함할 수 있다. 다시말해, 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제 등을 더 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 추출물을 포함하는 약학조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 외용제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 바람직하게는 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제의 피부 외용 약학 조성물을 제공한다. 추출물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 올리고당, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트 (calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 부활초 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물은 피부에 적용할 수 있는 피부 외용제 제형으로서 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제의 피부 외용제 형태의 약학조성물로 제조하여 사용할 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다.

본 발명에 따른 외용제 조성물이 화장료 조성물인 경우, 피부 노화 방지, 피부 주름 개선, 주름 완화, 항산화능, 피부 탄력 증진 등을 위한 화장품 및 세안제 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 각종 크림, 로션, 스킨 등과 같은 화장품류와 클렌징, 세안제, 비누, 트리트먼트, 미용액 등이 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함한다.

본 발명의 화장료 조성물에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합해도 된다. 이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.

상기 화장료 조성물에 있어서는, 화장품 제제에 있어서 수용가능한 담체를 포함할 수 있다. 여기서, "화장품 제제에 있어서 수용가능한 담체"란 화장품 제제에 포함될 수 있는 이미 공지되어 사용되고 있는 화합물 또는 조성물이거나 앞으로 개발될 화합물 또는 조성물로서 피부와의 접촉시 인체가 적응 가능한 이상의 독성, 불안정성 또는 자극성이 없는 것을 말한다.

상기 담체는 본 발명의 피부 외용제 조성물에 그것의 전체 중량에 대하여 약 1 중량% 내지 약 99.99 중량%, 바람직하게는 조성물의 중량의 약 90 중량% 내지 약 99.99 중량 %로 포함될 수 있다. 그러나 상기 비율은 본 발명의 피부 외용제 조성물이 제조되는 전술한 바의 제형에 따라 또 그것의 구체적인 적용 부위(얼굴, 목 등)나 그것의 바람직한 적용량 등에 따라 달라지는 것이기 때문에, 상기 비율은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 안 된다.

한편, 상기 담체로서는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료 등이 예시될 수 있다. 상기 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료로 사용될 수 있는 화합물/조성물 등은 이미 당업계에 공지되어 있기 때문에 당업자라면 적절한 해당 물질/조성물을 선택하여 사용할 수 있다.

본 발명의 일 구현예로써, 본 발명에 따른 피부 외용제 조성물은 상기 함초 추출물 이외에 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글키롤, 폴리옥시에틸렌 경화피마자유, 에탄올, 트리에탄올아민 등을 포함할 수 있으며, 방부제, 항료, 색소, 정제수 등을 필요에 따라 미량 포함할 수 있다.

특히, 상기 피부 외용제 조성물은 본 발명에 특별히 개시된 제조방법 이외에도, 통상적으로 알려진 제조방법을 이용하여, 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조될 수 있다.

화장료 조성물로 제조될 경우, 유화 제형의 화장품으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 가용화 제형의 화장품으로는 유연화장수가 있다. 또한, 피부과학적으로 허용가능한 매질 또는 기제를 함유함으로써 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 국소적용 또는 전신적용할 수 있는 보조제 형태로 제조될 수 있다.

또한, 적합한 화장품의 제형으로는, 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.

또한, 본 발명의 피부 외용제 조성물은 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일,염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 그리고, 상기의 성분들은 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하지만, 총중량에 대하여 바람직하게는 0.01 - 5 % 중량 백분율, 보다 바람직하게는 0.01 - 3 % 중량 백분율로 배합된다.

본 발명의 화장료 조성물의 경우, 용액, 유화물, 점성형 혼합물 등의 형상을 취할 수 있다.본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 추출물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함한다.

본 발명의 기능성 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 유액, 크림, 화장수, 팩, 파운데이션, 로션, 미용액, 모발화장료 등을 들 수 있다. 구체적으로, 본 발명의 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저의 제형을 포함한다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트,사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

또한, 본 발명은 다른 관점에서, (a) 부활초 식물체의 줄기와 뿌리를 IAA, 제아틴, 및 수크로오스 함유 배지에서 배양하여 캘러스를 유도하는 단계; 및 (b) 상기 캘러스를 함유하는 조성물을 제조하는 단계를 포함하는 부활초 캘러스 추출물을 함유한 피부 외용제 조성물의 제조방법에 관한 것이다.

상기 (a)단계에서, 구체적으로는 부활초로부터 캘러스를 유도하기 위해 적절한 배지를 선택할 수 있다. 기술분야에서 캘러스 배양에 일반적으로 사용되고 있는 배지가 있다면, 제한없이 사용가능하다. 식물에서는 일반적으로 MS(Murashige-Skoog)배지, B5배지 등을 주로 사용하고, 일 예로, MS 기초 고체 배지(Murashige and Skoog 1962, Duchefa 사, Cat No. M0221)의 조성(1L기준시)은 NH₄NO₃ 1650 mg, KNO₃ 1900 mg, CaCl₂2H₂O 440 mg, MgSO₄7H₂O 370 mg, KH₂PO₄ 170 mg, KI 0.83 mg, H₃BO₃ 6.2 mg, MnSO₄4H₂O 22.3mg, ZnSO₄7H₂O 8.6 mg, Na₂MoO₄2H₂O 0.25 mg, CuSO₄5H₂O 0.025 mg, CoCl₂6H₂O 0.025 mg, FeSO₄7H₂O 27.8 mg, Na₂EDTA2H₂O 37.3 mg, Myoinositol 100 mg, Nicotinic acid 0.5 mg, Pyridoxine-HCl 0.5 mg, Thiamine-HCl 0.5 mg, Glycine 2 mg, Sucrose 30000 mg 이다.

본 발명에 있어서, 부활초로부터 캘러스를 유도하기 위한 배지로써, 상기 MS 기초 고체 배지에 Sucrose 40.0 g/L, Agar 5~10.0 g/L, NAA 0.5 mg/L, BAP 1.0 mg/L를 첨가한 배지를 이용할 수 있다.

이것 이외에도, 종래에 부활초 캘러스 유도 배지로써 알려진 다양한 배지들 또한 본 발명에서 적용가능할 것이다.

캘러스를 유용물질을 함유하는 배지에서 배양하면, 캘러스가 배지에 첨가된 유용물질을 흡수하여 캘러스 내에 유용물질을 함유하게 되므로, 캘러스는 유래된 식물의 생리 활성 뿐만 아니라, 배지 내 첨가된 유용물질에 의한 생리활성을 나타낼 수 있다. 이러한 캘러스 내 유용물질의 도입은, 상기 유도된 캘러스를 유용물질을 포함하는 배지내에 치상하는 단계를 추가적으로 수행하여 배양된 캘러스에 유용물질을 도입시킬 수도 있다.

상기 (b)단계에서, (a)단계에서 얻어지는 캘러스를 분말화하여 조성물에 포함시켜 제조할 수 있다. 구체적으로, 본 발명에 따른 부활초 캘러스 추출물 피부 외용제 조성물에서, 상기 수상성분, 유상성분 이외에 추가적으로, 첨가제 등이 포함될 수 있다. 상기 첨가제로는 알코올, 착색제, 방향제 등이 있다.

추가적으로, 본 발명에 따른 피부 외용제 조성물은, 다양한 형태로 제조될 수 있는데, 예컨대, 에멀젼, 로션, 크림(수중유적형, 유중수적형, 다중상), 용액, 현탁액(무수 및 수계), 무수 생성물(오일 및 글리콜계), 젤, 마스크, 팩, 분말 등의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명에 따른 부활초 캘러스 추출물 함유 피부 외용제 조성물의 제조방법은 전술한 제조방법에 한정되는 것은 아니며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 상기 제조방법을 일부 변형시킨 방법으로도 본 발명에 따른 부활초 캘러스 추출물 함유 피부 외용제 조성물을 제조할 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

부활초 추출물의 제조

실시예 1-1: 부활초의 살균

부활초의 표면을 살균하기 위하여, 부활초의 식물체의 줄기와 뿌리 부분을 적당한 크기로 자른 후 70% 에탄올에 30초간 침지시키고, 0.3% 치아염소산나트륨(Sodium hypochlorite)에 10~15분 진탕하여 살균 후, 멸균수로 세척하였다.

실시예 1-2: 부활초 캘러스 추출물의 제조

살균된 부활초의 줄기와 뿌리를 IAA(indole-3-acetic acid) 0.5/L, 제아틴(Zeatin) 0.2/L의 생장조절물질과 수크로오스 30g/L, 겔라이트(Gelite) 2.0g/L를 함유한 MS(Murashinge and Skoog, 1962)배지에 접종한 후 23~27℃의 배양실에서 8주간 배양하여 캘러스를 유도하였다. 유도된 캘러스는 4주 간격으로 계대 배양하여 증식하였다. 증식된 캘러스를 수확하여 깨끗한 티슈로 충분히 수분을 제거한 후 60℃로 2일 동안 건조기에서 건조하였다. 건조된 부활초 캘러스 파우더 100g을 용기에 담고, 정제수 1L를 넣은 후, 65℃에서 2 시간 동안 교반하여 반응시키고, 반응 추출물을 여과하여 1L의 부활초 캘러스 추출물을 제조하였다.

비교예 : 부활초 추출물의 제조

부활초 600g 을 정제수 20L를 넣고 열탕 증류기에서 4 내지 8시간 정도, 80 내지 100℃로 가열하여 열수 추출물을 얻었다.

실험예 1: 콜라겐 합성 증진 효과

인간섬유아세포(Human Skin Fibroblast)를 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 일정한 습도를 유지하는 세포 배양기내에서 10% FBS, Penicillin(50U/ml), Streptomycin(50/ml)를 함유하는 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium, Gibco, USA)으로 배양하여, 1×10⁵개/ml로 24 well plate에 500㎕씩 분주한 다음 24시간 배양하였다. 대조군(DMEM 배지)과 0.1 ~ 10 %의 다양한 농도의 실시예 1의 캘러스 추출물을 함유한 배지를 넣고 48시간동안 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 배양하였다. 48시간 후, 배지의 상층액을 각각 20㎕을 취해 Procollagen Type I C-Peptide EIA Kit(PICP, Takara, Cat No. MK101)를 이용하여 측정함으로써 새로 합성된 콜라겐 양을 측정하였다. 비교예의 부활초 추출물과 상기한 방법과 동일한 방법으로 ㅅ실험하여 결과를 얻었다.

PICP양은 ng/1×10⁵세포로 환산하였으며, 하기 수학식 1에 따라 계산하여 그 결과는 표 1에 나타나 있다.

[수학식 1]

	시료 농도 (%)	콜라겐 생합성 증가율(%)
부활초 추출물	0.1 %	0
	0.5 %	0
	1 %	6
	5 %	15
	10 %	19
부활초 캘러스 추출물	0.1 %	3
	0.5 %	10
	1 %	23
	5 %	39
	10 %	57

상기 표 1에서 볼 수 있듯이, 본 발명의 조성물은 부활초 캘러스 추출물의 함량이 증가함에 따라 콜라겐의 생합성량이 증가함을 알 수 있고, 부활초 추출물에 비해서도 본 발명의 조성물이 탁월한 콜라겐 합성 증진 효과를 나타냄을 알 수 있다.

실험예 2: MMP -1 생성 억제 효과

피부의 주름은 콜라겐의 합성과 분해의 불균형에 기안하는데 보통 피부에서 type I 콜라겐의 합성과 그 분해 효소인 MMP-1이 균형을 이루고 있다. 그러나 광노화된 피부에서는 type I, III 콜라겐의 합성이 저하되고, MMP-1의 활성이 증가된다. 이러한 MMPs(matrix metalloproteinases)는 단백분해효소로 세포외 기질(extracellular matrix)을 분해하는 기능을 나타내며 정상적인 상태에서는 상처치유나 조직재생과정에 관여하는 것으로 알려져 있다.

본 발명의 조성물이 MMP-1 생성 억제 효과가 있는지를 확인하기 위해, 아래와 같은 실험을 하였다.

인간섬유아세포(Human Skin Fibroblast)를 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 일정한 습도를 유지하는 세포 배양기내에서 10% FBS, Penicillin(50U/ml), Streptomycin(50/ml)를 함유하는 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium, Gibco, USA)으로 배양하여, 1×10⁶개/ml로 48 well plate에 분주한 다음 24시간 배양하였다. 대조군(DMEM 배지)과 0.1 ~ 10 %의 다양한 농도의 부활초 캘러스 추출물을 함유한 배지를 넣고 48시간동안 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 배양하였다. 48시간 후, 배지의 상층액을 각각 20㎕을 취해 Matrix Metalloproteinase-1, Biotrack Activity(Amersham, Cat No. RPN2629)를 이용하여 측정함으로써 새로 합성된 MMP-1의 양을 측정한 뒤, mg/ml 환산하여, 하기 수학식 2에 따라 계산하여 그 결과는 표 2에 나타나 있다. 비교예도 상기 실시예와 동일한 방법으로 실험하였다.

[수학식 2]

	시료 농도 (%)	MMP-1 생합성 억제율 (%)
부활초 추출물	0.1 %	0
	0.5 %	0
	1 %	5
	5 %	7
	10 %	15
부활초 캘러스 추출물	0.1 %	2
	0.5 %	5
	1 %	15
	5 %	22
	10 %	34

상기 표 2에서 볼 수 있듯이, 본 발명의 조성물 부활초 캘러스 추출물 함량이 증가함에 따라 MMP-1 생성 억제 효과가 증가함을 알 수 있었으며, 이는 부활초 추출물에 비해서도 훨씬 높은 수준의 MMP-1 생성 억제 효능을 나타냄을 알 수 있다.

실험예 3: 엘라스타제( Elastase) 억제 효과

기질 1 mM N-succinyl-(Ala)₃-p-nitroanilide 200㎕ 에 실시예1에서 제조한 부활초 캘러스 추출물 20 ㎕와 2.5 unit Elastase(Porcie pancreas solution) 10 ㎕를 첨가하여 25℃에서 10 min 동안 반응시킨 후 ELISA reader로 410 nm에서 흡광도를 측정하였다. 하기 수학식 3에 따라 계산하여 그 결과는 표 3에 나타나있다.비교예에서 제조한 부활초 추출물도 상기와 같은 방법을 통해 실험하였다.

[수학식 3]

	시료 농도 (%)	Elastase 억제율 (%)
부활초 추출물	0.1 %	1
	0.5 %	1
	1 %	5
	5 %	10
	10 %	17
부활초 캘러스 추출물	0.1 %	9
	0.5 %	14
	1 %	29
	5 %	45
	10 %	60
Ursolic acid (양성 대조물질)	1 %	67.5

상기 표 3에서 볼 수 있듯이, 본 발명의 조성물은 부활초 캘러스 추출물 함량이 증가함에 따라 Elastase 억제 효과가 증가함을 알 수 있었으며, 이는 세포 증식능에 효과가 있음을 의미한다.

실험예 4:ABTS Radical Scavenging Activity

ABTS radical을 이용한 항산화능의 측정은 potassium persulfate와의 반응에 의해 생성된 ABTS free radical이 추출물 내의 항산화 물질에 의해 제거되어 radical 특유의 색인 청록색이 탈색되는 것을 이용한 방법으로 Van den Berg 등의 방법을 변형하여 측정하였다.

1.0 mM의 AAPH(2,2'-azo-bis 2-amidinopropanedeihydrochloride)는 100 mM PBS buffer에 녹인 2.5 mM ABTS(2,2'-azino-bis 3-ethylbenzenothiazolin-6-sulfonic acid)와 혼합한 후 68℃ 의 항온조에서 12분 동안 반응시켰다. 농도별로 희석한 실시예1의 부활초 캘러스 추출물 20㎕ 와 980㎕ ABTS 용액을 37℃ water bath에서 10분간 반응시키면서 734 nm에서 감소하는 흡광도의 정도를 측정하였으며 이때 양성대조군은 Trolox 0.1 % 을 사용하였다. ABTS radical 소거능은 다음의 수학식 4에 따라 계산하였으며, 결과는 표 4와 같았다. 비교예에서 제조한 부활초 추출물도 동일한 방법으로 실험하였다.

[수학식 4]

	시료 농도 (%)	ABTS 라디컬 소거 활성 (%) (항산화효과)
부활초 추출물	0.1 %	1
	0.5 %	2
	1 %	5
	5 %	15
	10 %	40
부활초 캘러스 추출물	0.1 %	8
	0.5 %	21
	1 %	34
	5 %	67
	10 %	81
Trolox (양성 대조물질)	0.1 %	84

상기 표 4에서 볼 수 있듯이, 본 발명의 조성물은 부활초 캘러스 추출물 함량이 증가함에 따라 항산화능이 증가함을 알 수 있었으며, 양성 대조물질과 유사한 수준 정도로 항산화능이 있음을 알 수 있다.

이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (9)

1. 부활초 (Myrothamnus flabellifolia) 캘러스의 건조 분말의 열수 추출물을 조성물 총 중량에 대하여 0.1 내지 10 중량%를 함유하는 피부 탄력 증진용 또는 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
   
2. 삭제
3. 삭제
4. 삭제
5. 삭제
6. 삭제
7. 삭제
8. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 콜라겐 합성 증진능을 가지는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
   
9. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 엘라스타제 억제능을 가지는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.