KR20140095122A - 보리 추출물 또는 에리오딕티올을 포함하는 콜라겐 분해 방지 또는 콜라겐 합성 촉진용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 보리 추출물을 포함하는 피부 광노화 방지용 화장료 조성물 및 에리오딕티올을 포함하는 콜라겐 분해 억제 및 콜라겐 합성 촉진용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 에리오딕티올을 유효성분으로 함유하는 콜라겐 분해 방지 및 콜라겐 생성 촉진용 화장료 조성물은 자외선 조사에 의해 증가된 콜라겐 분해 효소인 MMP-1의 활성을 억제시키며, 콜라겐 합성을 촉진시키며 콜라게나아제의 생성을 억제시킴으로써 피부 광노화 방지용 조성물로서 유용하게 사용될 수 있다.

Description

보리 추출물 또는 에리오딕티올을 포함하는 콜라겐 분해 방지 또는 콜라겐 합성 촉진용 조성물 {A composition for inhibiting degradation of collagen or promoting synthesis of collagen comprising barley extract or eriodictyol}

본 발명은 보리 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 광노화 방지용 화장료 조성물 또는 에리오딕티올을 유효성분으로 포함하는 콜라겐 분해 방지 또는 콜라겐 합성 촉진용 조성물에 관한 것이다.

사람의 피부는 신체조직 중 직접적으로 외부 환경에 노출되어 있어 생물학적, 화학적, 물리적 자극에 의해 가장 민감하게 영향을 받을 수 있다. 사람의 피부는 크게 표피층, 진피층, 피하지방층으로 구성되어 있으며, 피부의 가장 기본적인 역할은 우리 몸으로부터 수분이 증발되는 것을 막아주며 외부로부터 유해성분이 침입하는 것을 막아주는 역할을 한다. 이러한 피부는 항상 외부 자극으로부터 노출되어 있기 때문에 다양한 방어 능력이 있다. 또한 피부는 아름다움을 나타내는 표정으로써 피부가 건강하고 깨끗함은 곧 사람의 아름다움과 연관되어 있다고 할 수 있다.

최근 들어 대기오염 등 환경오염으로 인한 오존층의 파괴로 지상에 도달되는 자외선 양이 증가되고, 자외선의 영역 또한 변화되어 피부노화 및 피부암이 증가되고 있으며, 앞으로 더욱 증가할 것으로 예측된다. 따라서, 자외선으로부터 피부를 보호하는 것이 화장품 분야에서 매우 중요한 부분을 차지하고 있으며, 많은 화장품 제조회사에서 관련상품을 출시하기 위해 많은 연구를 하고 있다. 현재 이용되고 있는 방법은 단순한 자외선 차단제 혹은 자외선 흡수제를 사용하여 자외선으로부터의 피해를 방지하고 있는 실정이다.

대부분의 사람이 성장기에는 일광에 대하여 피부가 쉽게 대응을 하지만, 연령이 높아지면서 피부 조직이 점차 변화함에 따라 일광으로 인한 거칠어짐, 착색 반점, 혈색이 나쁨, 모세혈관확장, 흑점, 자반 및 쉬운 타박상, 위축, 섬유증 탈색 부위 및 극심하게는 전암성 종양 및 악성 종양 등의 현상이 발생하게 된다. 일광에 의한 이러한 영향이 축적되어 생긴 결과를 통칭하는 용어가 바로 광노화 (photo-aging)이다. 이와 같은 피부 광노화는 광에 대한 대응력이 약해진 피부에서 일광으로 인해 표피와 진피 조직이 변화하면서 주름살이 생기고, 피부가 누르스름해지고 두꺼워지면서 탄력성이 점차 감소되는 현상이라고 할 수 있다. 자외선(UV)은 320~400nm 파장의 자외선 A(UVA), 290~320nm 파장의 자외선 B(UVB), 200~290nm 파장의 자외선 C(UVC) 등으로 나뉘고, 이중 자외선 B(UVB)가 광노화를 야기시키는 주요 요인인 것으로 보고된 바 있다 (Kang, S et al., Arch. Dermatol. 133:1280 (1997)).

광노화된 피부에서는 표피가 두꺼워지고, 진피 상층부에 많은 양의 비정상적인 엘라스틴(elastin)이 축적되고, 진피콜라겐(collagen)의 양과 구조의 손상이 나타나며 무코다당류(mucipolysaccharide)가 증가한다. 피부의 콜라겐은 노화가 진행됨에 따라 생성이 저하되며, 자외선 등의 외부 자극에 의해 콜라겐 분해 효소(Matrix Metallo Proteinase, MMP-1)의 활성도가 높아지면서 콜라겐이 쉽게 분해된다. 따라서, 최근에는 MMP-1의 생성의 저해 및 활성을 억제하여 근본적으로 생성되는 콜라겐의 분해를 억제하는 제품들이 개발되고 있다.

콜라겐 분해 효소(MMP)는 세포의 기질을 분해하는 금속단백질 분해효소들을 총칭하는 것이며, 주로 피부에서는 MMP-1, MMP-2, MMP-9 이외에 여러 가지 효소들이 작용을 하는데 콜라겐 분해와 관련되어 가장 근본적으로 작용하는 효소는 MMP-1이다. 한편, 콜라겐 합성을 촉진하는 종래의 물질로는 레티노익산(Retinoic aicd), 레티놀 (Retinol: 비타민 A)과 TGF-β (transforming growth factor) 등이 있으며, MMP-1의 생성을 억제하는 물질로는 TGF-β(transforming growth factor)가 대표적으로 알려져 있다.

한편, 보리(Hordeum vulgare var. hexastichon)는 벼과에 속하는 주요 재배작물의 하나로 마디가 높고 원줄기는 둥글며 속이 비어 있으며 마디 사이가 길다. 잎은 어긋나고 넓은 줄 모양의 바소꼴로, 뒤로 젖혀지지 않는다. 잎자루는 잎집으로 되어 원줄기를 완전히 둘러싸고 녹색으로 털이 없다. 이삭은 줄기 끝에 달리고, 한 이삭에는 15~20개의 마디가 있으며 씨알의 배열이 줄로 된 여섯줄 보리와 세 개의 영화 중 가운데 영화만 여물고 2개의 영화는 퇴화되어, 씨알이 2줄로 배열되는 두줄 보리로 나뉜다. 보리는 폴리페놀성 물질이 함유되어 있고, 이들 화합물은 보리의 내부 배유조직보다 껍질을 포함하는 외층부 및 배아부위에 더 많이 함유되어 있으며, 보리 추출물은 항산화성 및 활성산소 소거능을 가지고 있는 것으로 보고된 바 있다 (석호문 등, 한국 식품과학회지, 34,5, 889, 892, 2002). 또한 보리는 콜레스테롤 억제, 당뇨, 심장병 등에도 효과가 있는 것으로 알려져 있으나, 광노화 방지 효과는 아직 보고된 바가 없다.

본 발명자들은 천연물로부터 기원하는 피부 광노화 방지 물질에 관하여 연구하던 중 보리 추출물 및 보리 추출물의 한 성분인 에리오딕티올이 자외선으로부터 피부를 보호하는 효과가 우수하며 콜라겐 분해 방지 및 콜라겐 생성 촉진을 통해서 피부의 광노화를 방지할 수 있다는 것을 확인하여 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 목적은 보리를 에탄올로 추출한 후 이를 여과하여 수득한 여과 추출물을 부탄올로 분획하여 얻은 보리 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 광노화 방지용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 하기 화학식 1로 표시되는 에리오딕티올을 처리하여 콜라게나제-1(MMP-1)의 활성을 억제하는 방법을 제공하는 것이다.

[화학식 1]

본 발명의 또 다른 목적은 상기 화학식 I의 에리오딕티올을 처리하여 콜라겐 합성을 촉진하는 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 화학식 I의 에리오딕티올을 포함하는 콜라겐 분해 억제용 조성물 또는 콜라겐 합성 촉진용 조성물을 제공하는 것이다.

상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 보리를 에탄올 용매로 추출한 후 이를 여과하여 여과 추출물을 얻은 후 부탄올 용매로 분획하여 얻은 보리 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 광노화 방지용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에서 사용되는 용어 "보리"는, 벼과에 속하는 두해살이풀을 의미하며, 주요 재배작물의 하나로서 보리알이 배열된 열의 수에 따라 두줄 보리와 여섯줄 보리로 분류한다. 또 성숙 후 껍질이 종실에 밀착하여 분리되지 않는 겉보리와 껍질이 종실에서 잘 분리되는 쌀보리로 나눌 수 있다. 보리는 또 찹쌀과 멥쌀처럼 찰성전분을 가진 찰보리와 찰기가 없는 보통의 메성보리로 분류되고, 찰보리는 껍질이 있는 찰겉보리와 껍질이 없는 찰쌀보리가 있다. 본 발명에서 사용되는 보리는 그 종류와 품종에 제한이 없이 사용될 수 있다.

보리는 폴리페놀성 물질이 다량 함유되어 있고, 이들 화합물은 보리의 내부 배유조직보다 껍질을 포함하는 외층부 및 배아부위에 더 많이 함유되어 있으며, 이들 성분은 높은 항산화성 및 활성산소 소거능을 가지고 있는 것으로 보고된 바 있다.

그러나, 보리 추출물의 자외선에 의한 피부세포 (케라티노사이트 또는 섬유 아세포) 손상 방지 효과 및 피부세포에서 콜라게나제-1(MMP-1) 활성을 억제하는 효과에 대해서는 지금까지 보고된 바가 없다.

본 발명에서는, 보리 추출물이 UVB 자극에 의해 증가된 콜라겐 분해 효소인 MMP-1의 활성을 억제 시키며, UV로부터 피부세포를 보호하며 콜라겐의 생성을 촉진하여, 광노화를 방지할 수 있다는 것을 처음으로 확인하였다.

본 발명에서 사용되는 용어“보리 추출물”은, 보리로부터 에탄올 용매를 사용하여 수득한 추출물을 여과한 후, 이에 부탄올 용매를 사용하여 분획한 추출물을 의미한다. 또한, 본 발명에 있어서, 상기 추출물은, 추출 처리에 의해 얻어지는 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 또는 이들 조정제물 또는 정제물 중 어느 하나를 포함하는 것으로 한다.

또한, 본 발명의 보리 추출물은 유효 성분이 파괴되지 않거나 최소화된 조건에서 실온 또는 가온하여 추출할 수 있다. 보다 구체적으로, 본 발명의 보리 추출물은 1) 보리에 에탄올 용매를 가하여 추출하는 단계, 2) 단계 1)의 추출물을 여과하는 단계, 및 3) 단계 2)의 여과한 추출물을 부탄올 용매를 가하여 분획하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조할 수 있다.

상기 방법에 있어서, 단계 1)의 보리는 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있으며, 보리의 다양한 기관 또는 부분(예: 잎, 꽃, 뿌리, 줄기, 가지, 껍질, 열매 및 종자 등)으로부터 추출하여 얻을 수 있으며, 바람직하게는 보리의 종자 및/또는 발아된 보리의 종자를 추출하여 얻을 수 있다. 보리를 발아시킬 경우, 발아 전 상태와는 다른 영양소들을 포함하게 되고 본 발명의 피부 광노화방지 효과를 상승시킨다.

또한, 단계 1)의 추출은 보리 건조 중량의 약 2 내지 20배, 바람직하게는 약 3 내지 5배에 달하는 부피의 에탄올 용매 또는 이들의 약 1:0.1 내지 1:10의 혼합비를 갖는 혼합용매를 용출 용매로써 사용하고, 추출 온도는 20 내지 100℃, 바람직하게는 25℃에서, 추출기간은 약 5 시간 내지 10일, 바람직하게는 5 내지 7일 동안 진탕 추출, 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 추출방법을 사용하여 이루어질 수 있다. 본 발명의 구체적인 실시예에서는, 보리(Hordeum vulgare var. hexastichon) 종자에 70% 에탄올을 섞어 상온에서 3회 환류 냉각 추출하여 보리 추출물을 수득하였다.

또한, 단계 3)의 분획은 상기 여과한 추출물에 부탄올 용매를 사용하여 분획함으로써 보리추출물을 얻을 수 있다.

본 발명의 구체적인 실시 예에서, HaCaT 세포와 NHDF 세포 공동 배양상에서 상기 제조된 보리 추출물의 세포 독성 및 UV 자극에 의해 과발현되는 광노화 관련 생체 지표 MMP-1의 억제 효과를 확인 하였고, 이를 통해 보리 추출물이 우수한 광노화 방지 효과가 있음을 확인하였다.

본 발명에서 사용되는 용어 "광노화"는 광에 대한 대응력이 약해진 피부에서 일광으로 인해 표피와 진피 조직이 변화하면서 일광으로 인한 거칠어짐, 착색 반점, 혈색이 나쁨, 모세혈관확장, 흑점, 자반 및 쉬운 타박상, 위축, 섬유증 탈색 부위 및 극심하게는 전암성 종양 및 악성 종양 등의 현상이 발생하는 것을 의미한다.

본 발명의 보리 추출물은 자외선 등의 광원에 의한 피부 손상으로부터 피부를 보호하는 활성을 갖는다. UVB (ultraviolet-B)는 피부에 가장 많은 영향을 주며 주로 표피까지 침투하여 피부세포에 영향을 준다. UVA (ultraviolet-A)는 피부속 진피까지 침투하여 주로 콜라겐 합성 관련 피부 세포에 영향을 준다. 이들 자외선은 직접적으로 영향을 주거나 간접적으로는 활성 산소를 발생시켜 피부에 영향을 준다.

본 발명에서 사용되는 용어 "피부 손상"은 피부가 그 정상적인 기능을 수행하지 못하는 것을 의미하며, 피부의 구성물질(콜라겐 및 엘라스틴 등)의 손상, 피부 세포의 기능 손상 및 피부 세포의 사멸 등을 포함하며, 본 발명의 피부 세포는 피부에 존재하는 모든 세포를 포함하며, 바람직하게는 케라티노사이트 및 섬유아세포이다.

본 발명에서 사용되는 용어 "피부 보호"는 피부의 손상을 방지하고 손상된 피부를 개선하는 것을 포함한다.

본 발명의 보리 추출물의 함량은 총 조성물에 대하여 0.0001-99.9 중량％일 수 있으며, 바람직하게는 0.01-50 중량％일 수 있다.

다른 하나의 양태로서, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 에리오딕티올 화합물을 처리하여 콜라게나제-1의 활성을 억제하는 방법을 제공한다.

[화학식 1]

또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 에리오딕티올 화합물을 처리하여 콜라겐 합성을 촉진하는 방법을 제공한다.

보다 구체적으로 상기 에리오딕티올 화합물은 보리 추출물로부터 실리카겔(silica gel)이나 활성 알루미나(alumina)등의 각종 합성수지를 충진한 컬럼크로마토그래피(column chromatography) 및 고속액체크로마토그래피(HPLC)를 단독으로 혹은 병행하여 사용하여 에리오딕티올 화합물을 분리 및 정제할 수 있으며, 또는 시판되는 에리오딕티올 화합물을 구매하여 이용할 수도 있다.

상기 방법들에서 에리오딕티올 화합물은 피부세포에 처리되어 콜라게나제-1의 활성을 억제하거나 콜라겐 합성을 촉진할 수 있으며, 피부세포의 예는 섬유아세포/피부 각질형성 세포의 공동배양물일 수 있다.

본 발명의 구체적인 실시 예에서, HaCaT 세포와 NHDF 세포 공동 배양 상에서 에리오딕티올 화합물의 UV 자극에 의해 과발현되는 광노화 관련 생체 지표 MMP-1 억제 효과, TGF-β1 증가 효과 및 Procollagen type Ⅰ의 증가 효과를 확인하였다. 이를 통해 보리 추출물 유래 화합물인 에리오딕티올 화합물이 우수한 콜라겐 분해 방지 및 콜라겐 생성 촉진 효과가 있다는 것을 확인하였다.

따라서, 본 발명은 또한, 에리오딕티올을 포함하는 콜라겐 분해 억제용 조성물 및 콜라겐 합성 촉진용 조성물을 제공한다.

본 발명의 조성물에 있어서 에리오딕티올의 함량은 총 조성물에 대하여 0.0001-99.9 중량％일 수 있으며, 바람직하게는 0.01-50 중량％일 수 있다.

또한, 본 발명은 상기 에리오딕티올을 포함하는 콜라겐 분해 억제용 조성물 또는 콜라겐 합성 촉진용 조성물을 포함하는 피부 광노화 방지용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 조성물이 화장품으로 제제화되는 경우, 본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서의 보리 추출물 또는 에리오딕티올 이외에 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.

본 발명의 피부 광노화 방지용 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 보리 추출물 또는 에리오딕티올을 함유하는 화장료 조성물을 인간의 피부에 도포하는 화장방법을 수행하면, 자외선에 의해 손상되는 DNA 및 피부를 보호, 콜라겐 생합성의 증진 및 콜라겐 분해효소의 생합성 억제를 포함하는 피부 광노화 방지 효과를 얻을 수 있다.

본 발명에 따른 보리 추출물을 포함하는 화장료 조성물은 자외선 조사에 의해 증가된 콜라겐 분해 효소인 MMP-1의 활성을 억제시키며, UV로부터 피부세포를 보호함으로써 피부 광노화 방지용 조성물로서 유용하게 사용될 수 있으며, 에리오딕티올을 포함하는 조성물은 콜라겐 분해 억제 또는 콜라겐 합성 촉진을 위해 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 HaCaT 세포와 NHDF 세포의 공동 배양 상에서 보리 추출물의 세포 독성(A) 및 UVB 자극에 대한 보리 추출물의 효과(B)를 나타낸 결과이다.
도 2는 HaCaT 세포와 NHDF 세포의 공동 배양 상에서 UVB 자극에 의해 과생성되는 MMP-1(Matrix Metallo Proteinase, MMP-1)에 대한 보리 추출물의 효과를 나타낸 결과이다.
도 3은 HaCaT 세포와 NHDF 세포의 공동 배양 상에서 보리 유래 화합물인 에리오딕티올의 세포 독성을 나타낸 결과이다.
도 4는 HaCaT 세포와 NHDF 세포의 공동 배양 상에서 광노화 관련 생체 지표인 MMP-1(Matrix Metallo Proteinase, MMP-1)에 대한 에리오딕티올의 효과(A) 및 UV 자극에 대한 에리오딕티올의 효과(B)를 나타낸 결과이다.
도 5는 HaCaT 세포와 NHDF 세포의 공동 배양 상에서 콜라겐 합성에 관여하는 TGF-βⅠ(transforming growth factor)에 대한 에리오딕티올의 효과(A) 및 UV 자극에 대한 에리오딕티올의 효과(B)를 나타낸 결과이다.
도 6은 HaCaT 세포와 NHDF 세포의 공동 배양 상에서 PIP(Procollagen type Ⅰ)에 대한 에리오딕티올의 효과(A) 및 UV 자극에 대한 에리오딕티올의 효과(B)를 나타낸 결과이다.

이하, 하기 실험예 및 실시예에 의하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 단, 하기 실험예 및 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐 본 발명의 범위가 이들만으로 한정되는 것은 아니다.

실시예 : 보리 추출물의 제조

보리(Hordeum vulgare var . hexastichon)는 전남 영광군 바우 연구소로부터 획득하였다. 보리 50Kg을 분쇄기로 분쇄 한 후 70% 에탄올로 상온에서 3회 추출하였다. 추출물을 와트만 2번 여과지로 여과하여, 냉각 콘덴서가 달린 증류 장치를 이용하여 30~40℃에서 감압 농축하여 보리 추출물 500g(건조 중량)을 얻었다. 그 후 보리 에탄올 추출물을 증류수에 현탁시켜 부탄올(BuOH)로 처리하여 부탄올 추출물을 수득하였다.

실험예 1: 보리 부탄올 추출물의 세포 보호 효과

상기 실시예에서 제조한 보리 에탄올 추출물 및 에탄올 추출물을 부탄올로 분획한 보리 추출물의 UVB 자극에 대한 HaCaT 세포와 NHDF 세포의 공동 배양 상에서의 세포 보호 효과를 확인하였다.

구체적으로, 피부 섬유아 세포(NHDF, Human fibroblast)를 40mm 디쉬에 6 x 10⁴/디쉬로 씨딩한 후, 1일을 배양하고, 피부 각질 형성세포(HaCaT, Human keratinocyte)를 40mm 디쉬에 6 x 10⁴/디쉬로 씨딩하여 공동 배양하였다. 1일 후 PBS 500㎕를 넣고 UVB 100mJ/cm²를 조사한 다음 무혈청 DMEM 배지로 10, 100 및 250㎍/ml 농도로 희석한 보리 에탄올 추출물 및 에탄올 추출물을 부탄올로 분획한 보리 추출물 각각을 농도별로 처리하여 72시간 배양하였다. 72시간 후 세포에 1mg/ml의 MTT를 처리하고 2시간 후, 세포에서 MTT 처리로 인해 생성된 포마잔(formazan)을 DMSO로 녹이고 OD570nm에서 그 흡광도를 측정하여, HaCaT 세포와 NHDF 세포의 공동 배양 상에서의 UVB 자극에 대한 세포의 생존율을 확인 하였다.

그 결과, HaCaT 세포와 NHDF 세포의 공동 배양 상에서 보리 에탄올 추출물 및 에탄올 추출물을 부탄올로 분획한 보리 추출물을 각각 처리한 경우, 에탄올 추출물 자체에서는 세포 생존율에 약간의 영향을 미치는 것을 확인하였으며, 에탄올 추출물을 부탄올로 분획한 보리 추출물은 UVB 자극에 대하여 세포 보호 효과를 나타냈다(도 1).

실험예 2: HaCaT / NHDF 세포 공동배양 상에서의 에탄올 추출물 및 에탄올 추출물을 부탄올로 분획한 보리 추출물의 MMP -1 억제 효과

에탄올 추출물 및 에탄올 추출물을 부탄올로 분획한 보리 추출물의 MMP-1(Matrix Metallo Proteinase) 효소 활성에 대한 효과를 확인하기 위하여, 피부 섬유아세포(NHDF, Human fibroblast)를 40mm 디쉬에 6 x 10⁴/디쉬로 씨딩한 후, 1일을 배양하고, 피부 각질 형성세포(HaCaT, Human keratinocyte)를 40mm 디쉬에 6 x 10⁴/디쉬로 씨딩하여 공동 배양하였다. 1일 후 배지를 제거 후 500ul의 PBS를 넣고 UVB를 조사한 다음, 무혈청 DMEM 배지로 희석한 에탄올 추출물 및 에탄올 추출물을 부탄올로 분획한 보리 추출물을 72시간 동안 처리하여 배양하였다. 이후, 배지를 수집하여 MMP-1 Kit(Amersham bioscience)를 이용하여 배지 내 분비된 MMP-1의 양을 측정하였다.

그 결과, 보리 에탄올 추출물은 UVB에 의해 증가한 MMP-1에 대하여 억제 효과를 나타내었고(도 2), 에탄올 추출물을 부탄올로 분획한 보리 추출물 또한 UVB에 의해 증가한 MMP-1에 대하여 농도 의존적으로 억제 효과를 나타 내었다(도 2.) 이를 통해 본 발명의 에탄올 추출물을 부탄올로 분획한 보리 추출물은 콜라겐 분해 효소인 MMP-1을 억제함으로써, 광노화를 방지하는 효과가 있음을 확인하였다.

실험예 3: 보리 유래 화합물 에리오딕티올의 HaCaT 세포와 NHDF 세포 공동 배양 상에서의 세포 보호 효과

시그마 케미컬 사에서 판매하고 있는 에리오딕티올 화합물을 구입하여 에리오딕티올의 UVB 자극에 대한 피부 각질 형성세포(HaCaT, Human keratinocyte)와 피부섬유아 세포(NHDF, Human fibroblast)의 보호 효과를 확인하였다.

구체적으로, 피부섬유아 세포(NHDF, Human fibroblast)를 40mm 디쉬에 6 x 10⁴/디쉬로 씨딩한 후, 1일을 배양하고, 피부 각질 형성세포(HaCaT, Human keratinocyte)를 40mm 디쉬에 6 x 10⁴/디쉬로 씨딩하여 공동 배양하였다. 1일 후 PBS 500㎕를 넣고 무혈청 DMEM 배지로 1,5 및 10uM 농도로 희석한 에리오딕티올 각각을 농도별로 처리하여 72시간 배양하였다. 72시간 후 세포에 1mg/ml의 MTT를 처리하고 2시간 후, 세포에서 MTT 처리로 인해 생성된 포마잔(formazan)을 DMSO로 녹이고 OD570nm에서 그 흡광도를 측정하여, HaCaT 세포와 NHDF 세포의 공동 배양 상에서의 세포에 대한 에리오딕티올의 독성을 확인하였다.

그 결과, HaCaT 세포와 NHDF 세포의 공동 배양 상에서 에리오딕티올을 처리한 경우, 크게 독성이 나타나지 않는 것을 확인하였다(도 3).

실험예 4: HaCaT / NHDF 세포 공동배양 상에서의 에리오딕티올의 MMP -1 억제 효과

에리오딕티올 화합물의 MMP-1(Matrix Metallo Proteinase) 효소 활성에 대한 효과를 확인하기 위하여, 피부섬유아 세포(NHDF, Human fibroblast)를 40mm 디쉬에 6 x 10⁴/디쉬로 씨딩한 후, 1일을 배양하고, 피부 각질 형성세포(HaCaT, Human keratinocyte)를 40mm 디쉬에 6 x 10⁴/디쉬로 씨딩하여 공동 배양하였다. 1일 후 배지를 제거 후 500ul의 PBS를 넣고 UVB룰 조사한 다음, 무혈청 DMEM 배지로 희석한 에리오딕티올 화합물을 72시간 동안 처리하여 배양하였다. 이후, 배지를 수집하여 MMP-1 Kit(Amersham bioscience)를 이용하여 배지 내 분비된 MMP-1의 양을 측정하였다.

그 결과, 에리오딕티올 화합물은 UVB에 의해 증가한 MMP-1에 대하여 농도 의존적인 억제 효과를 나타내었고 (도 4), 이를 통해 본 발명의 에리오딕티올 화합물이 콜라겐 분해 효소인 MMP-1을 억제함을 확인하였다(도 4).

실험예 5: HaCaT / NHDF 세포 공동배양 상에서의 에리오딕티올의 TGF -β1 합성 촉진 효과

에리오딕티올 화합물의 TGF-β1(transforming growth factor) 활성에 대한 효과를 확인하기 위하여, 피부섬유아 세포(NHDF, Human fibroblast)를 40mm 디쉬에 6 x 10⁴/디쉬로 씨딩한 후, 1일을 배양하고, 피부 각질 형성세포(HaCaT, Human keratinocyte)를 40mm 디쉬에 6 x 10⁴/디쉬로 씨딩하여 공동 배양하였다. 1일 후 배지를 제거 후 500ul의 PBS를 넣고 UVB를 조사한 다음, 무혈청 DMEM 배지로 희석한 에리오딕티올 화합물을 72시간 동안 처리하여 배양하였다. 이후, 배지를 수집하여 TGF-β1 Kit(Amersham bioscience)를 이용하여 배지 내 분비된 TGF-β1의 양을 측정하였다.

그 결과, 에리오딕티올 화합물은 UVB에 의해 감소한 TGF-β1에 대하여 농도 의존적인 증가 효과를 나타내었고 (도 5), 이를 통해 본 발명의 에리오딕티올 화합물이 콜라겐 생성에 관여하는 TGF-β1을 증가시킴으로써, 콜라겐 생성을 촉지하여 광노화를 억제하는 효과가 있음을 확인하였다 (도 5).

실험예 6: HaCaT / NHDF 세포 공동배양 상에서의 에리오딕티올 화합물의 콜라겐 합성 촉진 효과

에리오딕티올 화합물의 PIP(Procollagen type 1)에 대한 활성을 확인하기 위하여, 피부섬유아 세포(NHDF, Human fibroblast)를 40mm 디쉬에 6 x 10⁴/디쉬로 씨딩한 후, 1일을 배양하고, 피부 각질 형성세포(HaCaT, Human keratinocyte)를 40mm 디쉬에 6 x 10⁴/디쉬로 씨딩하여 공동 배양하였다. 1일 후 배지를 제거 후 500ul의 PBS를 넣고 UVB룰 조사한 다음, 무혈청 DMEM 배지로 희석한 에리오딕티올 화합물을 72시간 동안 처리하여 배양하였다. 이후, 배지를 수집하여 PIP Kit(Amersham bioscience)를 이용하여 배지 내 분비된 PIP의 양을 측정하였다.

그 결과, 에리오딕티올 화합물은 UVB에 의해 감소한 Procollagen type 1에 대하여 농도 의존적인 증가 효과를 나타내었고 (도 6), 이를 통해 에리오딕티올 화합물이 콜라겐 생성에 관여하는 Procollagen type 1을 증가시킴으로써, 광노화를 방지하는 효과가 있음을 확인하였다(도 6).

Claims (11)

1. 하기 화학식 1로 표시되는 에리오딕티올을 처리하여 콜라게나제-1(MMP-1)의 활성을 억제하는 방법.
   [화학식 1]
   

   
2. 상기 화학식 I의 에리오딕티올을 처리하여 콜라겐 합성을 촉진하는 방법.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 에리오딕티올을 피부세포에 처리하는 것인 방법.
4. 제3항에 있어서, 피부세포는 섬유아세포/피부각질형성세포인 방법.
5. 상기 화학식 I의 에리오딕티올을 포함하는 콜라겐 분해 억제용 조성물.
6. 상기 화학식 I의 에리오딕티올을 포함하는 콜라겐 합성 촉진용 조성물.
7. 제5항 또는 제6항에 있어서, 에리오딕티올의 함량은 조성물 총 중량에 대하여 0.0001-99.9 중량％인 것을 특징으로 하는 조성물.
8. 제5항 또는 제6항의 조성물을 포함하는 피부 광노화 방지용 화장료 조성물.
9. 보리를 에탄올로 추출한 후 이를 여과하여 수득한 여과 추출물을 부탄올로 분획하여 얻은 보리 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 광노화 방지용 화장료 조성물.
10. 제9항에 있어서, 상기 피부 광노화 방지는 콜라겐 분해 방지 및 UV에 대한 세포 보호를 통해서 이루어지는 것을 특징으로 하는 피부 광노화 방지용 화장료 조성물.
11. 제9항에 있어서, 상기 보리 추출물은 보리의 종자 및/또는 발아된 보리의 종자로부터 얻어지는 것을 특징으로 하는 피부 광노화 방지용 화장료 조성물.
    
    

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