KR101291460B1 - 섬오갈피나무의 캘러스 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 섬오갈피나무 캘러스 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는, 식물조직배양기술에 의해 유도된 섬오갈피나무 캘러스 또는 이러한 캘러스를 UV-A, 시킴산 및 초음파 조사 등의 유인제(elicitor)를 처리하여 생리활성 효능이 개선된 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 섬오갈피나무의 캘러스에 UV-A, 시킴산 및 초음파 조사 등의 유인제를 처리하여 피부 자극이 없는 항염 효과, 미백효과, 피부진정효과를 가지는 피부 외용제 조성물을 제공한다.

Description

섬오갈피나무의 캘러스 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물 {A Skin External Composition Containing Callus Extract Drived from Eleutherococcus koreanum Nakai}

본 발명은 섬오갈피나무 캘러스 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하세는, 식물조직배양기술에 의해 유도된 섬오갈피나무 캘러스를 UV-A, 시킴산 및 초음파 조사 등의 유인제(elicitor)를 처리하여 생리활성 효능이 개선된 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.

섬오갈피나무(학명: Eleutherococcus koreanum Nakai)는 제주도 바닷가에서부터 해발 1,400 m에 이르는 계곡이나 숲속에 드물게 자라고 있는 제주 특산종이며 탐라오갈피라고도 한다(Ko, H.J., Kor. J. Medicinal Crop Sci. 11:46-52, 2003). 고산지대나 아한대지대에서 자생하는 타 오갈피들에 비해 줄기의 기부가 넓고, 강한 갈고리 모양의 가시가 달려 있으며, 잎이 두꺼운 특징을 가지고 있다. 꽃은 산형꽃차례를 이루며 7~8월에 피고, 7 mm내외의 열매는 10월에 흑색을 나타낸다(Jwa, C.S., J. Kor . Soc . Agric . Chem . Biotechnol . 43:106-109 2000) 종자와 삽목번식을 통하여 증식이 이루어지는데 종자번식의 경우 미숙 종자로 생산되기 때문에 발아에 2년 이상이 소요되고 발아율도 낮으며, 삽목번식의 경우도 발근력이 낮아 식물체로의 재생률이 낮다. 또한 수확시기와 부위에 따라 생리활성물질의 함량이 다르기 때문에 생리활성물질 생산을 목적으로 재배할 경우 9월말에 수확하는 것이 생리활성물질 함량이 가장 높다고 보고되어 재배 환경에 따라 생리활성물질의 함량 차이가 큰 단점도 가지고 있다.

종래 섬 오갈피와 관련된 특허로는, 섬 오갈피 식물을 이용한 건강 음료에 관한 특허로써, 대한민국등록특허 10-0337740호에는 섬 오갈피 건강음료의 제조방법에 관하여 개시하고있고, 섬 오갈피나무 추출물과 이로부터 분리하 신규화합물을 탈모 질환 예방 및 치료용도로 개시하고 있는 대한민국공개특허 10-2010-118364가 있으나, 섬 오갈피나무를 조직배양하여 캘러스 추출물을 이용함으로써, 항염효과, 미백효과를 개시하고 있는 기술은 이전에 존재하지 아니하였다.

이에 본 발명자들은 섬오갈피나무를 재료로 하여 캘러스 유도증식시키고, 증식된 캘러스를 이용하여 우수한 생리활성 효능을 가지는 피부외용제 조성물을 제조하고자 예의 노력한 결과, 이차대사산물의 함량이 증가된 섬오갈피나무 캘러스 추출물이 피부 자극이 없는 항염 효과, 미백효과 등의 기능을 가지는 것을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 목적은 피부자극이 없는 항염 효과, 미백효과, 피부진정효과 등을 가지는 섬오갈피나무 캘러스 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물 및 이차대사산물의 함량이 증가된 섬오갈피나무 캘러스 추출물의 제조하는 방법을 제공하는 데 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 섬오갈피나무 캘러스 추출물 또는 그로부터 유도된 부정근 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한, (a) 섬오갈피나무의 성체를 준비하거나, 섬오갈피나무의 종자를 배양하여 발아를 유도하는 단계; (b) 상기 준비된 성체 또는 그 일부나, 발아된 줄기와 잎을 캘러스 유도용 배지에 접종하고 배양하여 캘러스를 유도하고 증식시키는 단계; (c) 증식된 캘러스에 유인제를 처리하고, 배양하여 이차대사산물의 생산을 유도하는 단계; 및 (d) 상기 이차대사산물이 유도된 캘러스를 용매로 추출하는 단계를 포함하는 이차대사산물의 함량이 증가된 섬오갈피나무 캘러스 추출물의 제조방법을 제공한다.

본 발명의 섬오갈피나무의 캘러스에 UV-A, 시킴산 및 초음파 조사 등의 유인제를 처리하여 피부 자극이 없는 항염 효과, 미백효과, 피부진정효과를 가지는 피부 외용제 조성물을 제공한다.

다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로, 본 명세서에서 사용된 명명법 은 본 기술분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.

본 발명의 상세한 설명 등에서 사용되는 주요 용어의 정의는 다음과 같다.

본 발명에 있어서, "캘러스"는 식물체에서 잘라낸 조직을 옥신을 함유한 배지에서 배양하거나, 어떤 종류의 식물에 상처를 내거나, 상구를 옥신으로 처리하거나 할 때에 생기는 특수한 조직 또는 세포덩어리를 말한다. 보통 캘러스는 정상적인 기관형성이나 조직분화를 일으키는 능력을 잃은 무정형의 조직 또는 세포덩어리로 대부분 유세포로 되어 있다. 넓은 의미로는 아그로박테리움(agrobacterium) 등의 감염에 의해서 생기는 식물종양조직도 포함시키기도 한다.

조직배양을 통한 미분화세포덩어리인 캘러스가 형성되면, 즉, 식물체내의 세포는 증식하면 즉시 방향이 정해져서 특정한 조직 더 나아가서는 기관으로 규칙적으로 조립되어 간다. 그러나, 다양한 식물 성장 호르몬 등을 외부로부터 주게 되면 그때까지 유지되어 왔던 통제가 해제되어 세포가 제멋대로 증식하는 것으로 해석된다.

탈분화에 의해 얻어진 캘러스를 같은 조성을 가진 액체배지에 넣어서 진탕배양하면 세포는 따로 떨어져 현탁 상태로서 증식을 계속한다. 이 캘러스나 배양세포는 새로운 배지에 계대 배양함으로써 영구적으로 분열 및 증식할수 있게 되어 완전 식물체가 노화해서 죽어가는 분화세포와는 본질적으로 차이가 있다. 몇 세대정도 계대 배양한 캘러스 또는 배양세포를 다양한 식물 성장 호르몬을 제거한 고형 배지에 도포해두면 눈과 뿌리가 나와서 개체 식물이 복원된다. 이 재생식물은 한 개의 배양세포의 분열증식에서 유래한 것이며, 그 배양세포의 근원을 말하면 배축이나 수조직에서 유도한 것이다. 다시 말하면, 식물체를 구성하는 한 개의 체세포에서 식물이 복원한다는 것이다. 원래의 식물체는 몇 억 개의 체세포로 구성되어 있고, 그 모든 것이 생식세포와 같은 개체를 창조하는데 필요한 유전자를 모두 갖추고 있다는 것을 의미한다. 모식물체로부터 분리된 식물조직세포는 적정배양환경에서 배양하면 완전한 식물체로 재생될 수 있는 잠재력 즉, 전형성능을 가지고 있다. 이 전형성능은 식물 발생학 등의 학술적인 중요성은 물론이지만 화장품 원료 등의 실용화를 위해서도 활용가치가 크다.

본 발명에 있어서, "섬오갈피나무 캘러스"는 섬오갈피나무의 줄기, 잎 등의 어느 부위로부터 유도된 것이든 모두 가능하나, 일 구체예로, 섬오갈피나무 성체의 줄기와 잎의 조직 일부, 또는 섬오갈피나무 종자의 발아된 유묘로부터 자엽을 절취하여 유도시킨 캘러스일 수 있고, 섬오갈피나무의 어느 조직이든지 일부 잘라내어 옥신 및 사이토키닌의 함량을 조절한 배지에 놓아두면 캘러스가 형성될 수 있다. 또한, 상기 캘러스에 유인제 처리를 통한 이차대사산물의 함량을 증가시킨 캘러스도 본 발명의 범위에 포함된다.

본 발명에 있어서, "추출물"은 상기 섬오갈피나무 캘러스 자체 또는 섬오갈피나무 캘러스를 분말화하거나, 열수추출법 또는 그것의 증류액, 에탄올을 비롯한 알코올 등의 유기용매를 이용한 추출법, 호호바오일을 비롯한 식물성 오일을 이용한 추출법, 무기용매를 이용한 추출법 등에 의해 수득한 추출물을 의미한다.

본 발명에 있어서, "유효성분으로 함유하는"의 의미는, 피부 외용제 조성물로써 섬오갈피나무 캘러스 추출물이 가지는 항염효과, 피부진정효과, 미백효과를 나타낼 수 있는 정도로 유효량 함유하는 것을 의미한다.

이하, 본 발명을 보다 상세히 설명한다.

본 발명은 일 관점에서, 상기 섬오갈피나무 캘러스 추출물 또는 그로부터 유도된 부정근 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 있어서, 상기 섬오갈피나무 캘러스 추출물 또는 그로부터 유도된 부정근 추출물은 조성물의 총 중량에 대하여 0.1 내지 0.5 중량%, 0.1 내지 1 중량%, 0.1 내지 5 중량%, 또는 0.1 내지 10중량%를 함유하는 것을 특징으로 할 수 있다. 상기 0.1 중량% 미만인 경우, 그 효과가 미미하며, 10중량%를 초과하는 경우 안전성과 제형 안정성의 문제점이 있다.

또한, 본 발명에 따른 피부 외용제 조성물은 화장료 조성물 또는 약학적 조성물일 수 있다.

상기 피부외용제 조성물이 약학적 조성물일 경우, 이미 공지되어 사용되고 있는 약학적으로 허용가능한 담체를 추가적으로 포함할 수 있다. 다시말해, 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제 등을 더 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 추출물을 포함하는 약학조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 외용제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 바람직하게는 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제의 피부 외용 약학 조성물을 제공한다. 추출물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 올리고당, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트 (calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 피부외용제 조성물은 피부에 적용할 수 있는 피부 외용제 제형으로서 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제의 피부 외용제 형태의 약학조성물로 제조하여 사용할 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다.

본 발명에 따른 외용제 조성물이 화장료 조성물인 경우, 본 발명의 섬오갈피나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 개선 효과를 위한 화장품 및 세안제 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 각종 크림, 로션, 스킨 등과 같은 화장품류와 클렌징, 세안제, 비누, 트리트먼트, 미용액 등이 있다.

본 발명의 화장료는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함한다.

본 발명의 화장료에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합해도 된다. 이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.

상기 화장료 조성물에 있어서는, 화장품 제제에 있어서 수용가능한 담체를 포함할 수 있다. 여기서, "화장품 제제에 있어서 수용가능한 담체"란 화장품 제제에 포함될 수 있는 이미 공지되어 사용되고 있는 화합물 또는 조성물이거나 앞으로 개발될 화합물 또는 조성물로서 피부와의 접촉시 인체가 적응 가능한 이상의 독성, 불안정성 또는 자극성이 없는 것을 말한다.

상기 담체는 본 발명의 피부 외용제 조성물에 그것의 전체 중량에 대하여 약 1 중량% 내지 약 99.99 중량%, 바람직하게는 조성물의 중량의 약 90 중량% 내지 약 99.99 중량 %로 포함될 수 있다. 그러나 상기 비율은 본 발명의 피부 외용제 조성물이 제조되는 전술한 바의 제형에 따라 또 그것의 구체적인 적용 부위(얼굴, 목 등)나 그것의 바람직한 적용량 등에 따라 달라지는 것이기 때문에, 상기 비율은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 안 된다.

한편, 상기 담체로서는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료 등이 예시될 수 있다. 상기 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료로 사용될 수 있는 화합물/조성물 등은 이미 당업계에 공지되어 있기 때문에 당업자라면 적절한 해당 물질/조성물을 선택하여 사용할 수 있다.

본 발명의 일 구현예로써, 본 발명에 따른 피부 외용제 조성물은 상기 함초 추출물 이외에 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글키롤, 폴리옥시에틸렌 경화피마자유, 에탄올, 트리에탄올아민 등을 포함할 수 있으며, 방부제, 항료, 색소, 정제수 등을 필요에 따라 미량 포함할 수 있다.

특히, 상기 피부 외용제 조성물은 본 발명에 특별히 개시된 제조방법 이외에도, 통상적으로 알려진 제조방법을 이용하여, 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조될 수 있다.

화장료 조성물로 제조될 경우, 유화 제형의 화장품으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 가용화 제형의 화장품으로는 유연화장수가 있다. 또한, 피부과학적으로 허용가능한 매질 또는 기제를 함유함으로써 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 국소적용 또는 전신적용할 수 있는 보조제 형태로 제조될 수 있다.

또한, 적합한 화장품의 제형으로는, 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.

또한, 본 발명의 피부 외용제 조성물은 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일,염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 그리고, 상기의 성분들은 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하지만, 총중량에 대하여 바람직하게는 0.01 - 5 % 중량 백분율, 보다 바람직하게는 0.01 - 3 % 중량 백분율로 배합된다.

본 발명의 화장료는 용액, 유화물, 점성형 혼합물 등의 형상을 취할 수 있다.본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 추출물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함한다.

본 발명의 항염,미백, 피부진정용 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 유액, 크림, 화장수, 팩, 파운데이션, 로션, 미용액, 모발화장료 등을 들 수 있다.

구체적으로, 본 발명의 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저의 제형을 포함한다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트,사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 캘러스로부터 유도된 부정근 추출물은, 캘러스로부터 하기 실시예에 제시된 바와같이 종래에 잘 알려진 부정근 유도 배지를 이용하여 부정근을 유도하고, 이러한 부정근을 열수 추출하여 얻은 것이다. 이러한 열수 추출법 이외에도, 앞서 언급한 다양한 추출법이 부정근에서도 적용가능하다.

또한, 본 발명은 다른 관점에서, (a) 섬오갈피나무 성체의 일부 또는 섬오갈피나무의 종자로부터 캘러스를 유도하여 배양하는 단계; 및 (b) 상기 캘러스를 함유하는 조성물을 제조하는 단계를 포함하는 섬오갈피나무 캘러스 추출물을 함유한 항염증, 미백용 또는 피부진정용 피부 외용제 조성물의 제조방법에 관한 것이다.

상기 (a)단계에서, 구체적으로는 섬오갈피나무의 종자를 발아시켜, 또는 섬오갈피나무의 성체의 일부(예컨대, 줄기, 잎 등)로부터 캘러스를 유도하기 위해 적절한 배지를 선택할 수 있다. 기술분야에서 캘러스 배양에 일반적으로 사용되고 있는 배지가 있다면, 제한없이 사용가능하다. 식물에서는 일반적으로 MS(Murashige-Skoog)배지, B5배지 등을 주로 사용하고, 일 예로, MS 기초 고체 배지(Murashige and Skoog 1962, Duchefa 사, Cat No. M0221)의 조성(1L기준시)은 NH₄NO₃ 1650 mg, KNO₃ 1900 mg, CaCl₂2H₂O 440 mg, MgSO₄7H₂O 370 mg, KH₂PO₄ 170 mg, KI 0.83 mg, H₃BO₃ 6.2 mg, MnSO₄4H₂O 22.3mg, ZnSO₄7H₂O 8.6 mg, Na₂MoO₄2H₂O 0.25 mg, CuSO₄5H₂O 0.025 mg, CoCl₂6H₂O 0.025 mg, FeSO₄7H₂O 27.8 mg, Na₂EDTA2H₂O 37.3 mg, Myoinositol 100 mg, Nicotinic acid 0.5 mg, Pyridoxine-HCl 0.5 mg, Thiamine-HCl 0.5 mg, Glycine 2 mg, Sucrose 30000 mg 이다.

본 발명에 있어서, 섬오갈피나무 캘러스를 유도하기 위한 배지로써, 상기 MS 기초 고체 배지에 Sucrose 40.0 g/L, Agar 5~10.0 g/L, NAA 0.5 mg/L, BAP 1.0 mg/L를 첨가한 배지를 이용할 수 있다. 여기서, 상기 배지의 pH는 5.5~6.0이고, 바람직하게는, pH 5.7~5.8이다. 이 고체 배지에 치상하여, 캘러스 유도가 가능하다.

이것 이외에도, 종래에 섬오갈피나무 캘러스 유도 배지로써 알려진 다양한 배지들 또한 본 발명에서 적용가능할 것이다.

캘러스를 유용물질을 함유하는 배지에서 배양하면, 캘러스가 배지에 첨가된 유용물질을 흡수하여 캘러스 내에 유용물질을 함유하게 되므로, 캘러스는 유래된 식물의 생리 활성 뿐만 아니라, 배지 내 첨가된 유용물질에 의한 생리활성을 나타낼 수 있다. 이러한 캘러스 내 유용물질의 도입은, 상기 유도된 캘러스를 유용물질을 포함하는 배지내에 치상하는 단계를 추가적으로 수행하여 배양된 캘러스에 유용물질을 도입시킬 수도 있다.

상기 (b)단계에서, (a)단계에서 얻어지는 캘러스를 분말화하여 조성물에 포함시켜 제조할 수 있다. 구체적으로, 본 발명에 따른 섬오갈피나무 캘러스 추출물 피부 외용제 조성물에서, 상기 수상성분, 유상성분 이외에 추가적으로, 첨가제 등이 포함될 수 있다. 상기 첨가제로는 알코올, 착색제, 방향제 등이 있다.

또는, 상기 (b)단계에 있어서, (i) 증식된 캘러스에 유인제를 처리하고, 배양하여 이차대사산물의 생산을 유도하는 단계; 및 (ii) 상기 이차대사산물이 유도된 캘러스를 용매로 추출하는 단계를 포함하는 이차대사산물의 함량이 증가된 섬오갈피나무 캘러스 추출물을 제공하여, 조성물을 제조할 수 있다. 여기서의 용매는, 하기 실시예에서 예시되는 다양한 종류의 유기, 무기용매 등을 포함한다.

이러한 과정을 포함하는, 증가된 수준의 이차대사산물을 포함하는 캘러스 추출물의 제조방법 또한 본 발명의 범위에 포함된다.

다시말해, 본 발명은 또한, (a) 섬오갈피나무의 성체를 준비하거나, 섬오갈피나무의 종자를 배양하여 발아를 유도하는 단계; (b) 상기 준비된 성체 또는 그 일부나, 발아된 줄기와 잎을 캘러스 유도용 배지에 접종하고 배양하여 캘러스를 유도하고 증식시키는 단계; (c) 증식된 캘러스에 유인제를 처리하고, 배양하여 이차대사산물의 생산을 유도하는 단계; 및 (d) 상기 이차대사산물이 유도된 캘러스를 용매로 추출하는 단계를 포함하는 이차대사산물의 함량이 증가된 섬오갈피나무 캘러스 추출물의 제조방법에 관한 것이다.

상기 유인제와 관련하여, 식물조직배양에 이용되는 elicitor는 크게 biotic elicitor와 abiotic elicitor로 구분된다. biotic elicitor는 식물체 유래 elicitor와 미생물 유래 elicitor로 다시 구분되며, 기내 배양에서 널리 이용되는 식물체 유래 elicitor에는 효소, 세포벽 유래 물질, 식물 방어기작의 발현에 관여하는 신호전달 물질(Signal trnasducer) 등이 있다. Abiotic elicitor에는 온도, 건조, 무기염, 중금속, UV, 오존 등과 같은 배양체의 생장을 억제시키는 환경 스트레스 요인 등이 있다. 식물체가 elicitor를 인시갛게 되면 식물체 내부에 피토알렉신의 증가뿐만 아니라 다양한 방어기작이 발현되므로 식물체의 최종 생장량이 감소할 수 있다. 또한 각각의 생리활성물질들은 서로 다른 생합성 경로를 통하여 최종 합성되므로 생산하고자 하는 생리활성물질의 양을 증가시킬 수 있으면서 배양체의 생장량 감소를 최소화하는 적정 elicitor의 종류와 농도 선정이 필요하다.

본 발명에서는, 생리활성물질을 증가시킬 수 있는 자극이라면 화학적 혹은 물리적인 유인제가 될 수 있으며, 구체적인 예를 들면, 메틸 자스모네이트(Methyl jasmonate, MJ) 및 살리실산(Salicylic acid, SA)를 0 ~ 400 M농도로 처리할 수도 있다.

예컨대 본 발명의 일 실시예에 있어서, 유인제처리는 UV-A 처리의 경우, 0.5 내지12시간, 바람직하게는, 0.5 내지 10시간, 더욱 바람직하게는, 0.5 내지 8시간 동안 처리할 수 있으며, 시킴산의 경우, 10 내지 400uM을 포함할 수 있다. 초음파 처리 시간의 경우, 1 내지 120분, 바람직하게는, 1 내지 90분, 더욱 바람직하게는, 1 내지 60분일 수 있다.

본 발명에 있어서, 카로티노이드, 플라보노이드, 페놀 등을 비롯한 이차대사산물에 의해, 본 발명의 조성물의 항염, 피부진정효과, 미백효과를 증진하는데 기여한다.

본 발명에 있어서, 피부외용제 조성물은 섬 오갈피 캘러스 추출물을 함유함으로써 다양한 기능, 용도를 가지며, 일 구체예로써, 항염, 피부 미백, 피부 진정효과 등을 가지고 있다.

추가적으로, 본 발명에 따른 피부 외용제 조성물은, 다양한 형태로 제조될 수 있는데, 예컨대, 에멀젼, 로션, 크림(수중유적형, 유중수적형, 다중상), 용액, 현탁액(무수 및 수계), 무수 생성물(오일 및 글리콜계), 젤, 마스크, 팩, 분말 등의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명에 따른 섬오갈피나무 캘러스 추출물 함유 피부 외용제 조성물의 제조방법은 전술한 제조방법에 한정되는 것은 아니며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 상기 제조방법을 일부 변형시킨 방법으로도 본 발명에 따른 섬오갈피나무 캘러스 추출물 함유 피부 외용제 조성물을 제조할 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다. 특히, 하기 실시예에서 유인제처리된 캘러스 추출물 또는 처리되ㅈ 않은 캘러스 추출물에 대하여 선택적으로 실험하였으나, 둘 모두 미백, 항염, 피부진정 등의 효능이 있음은 당업자에게 자명할 것이다.

실시예 1-1: 섬오갈피나무 시료의 표면소독

섬오갈피나무 시료의 표면을 살균하기 위하여, 섬오갈피나무 식물체의 줄기와 잎 부분을 적당한 크기로 자른 후 70% 에탄올에 30초간 침지시키고, 2% 치아염소산나트륨(Sodium hypochlorite)에 10~15분 진탕하여 살균 후, 멸균수로 세척한 것을 작은 절편(1X0.5X0.3cm)으로 만들어 배양재료로 이용하였다.

실시예 1-2: 살균된 섬오갈피나무부터 캘러스와 부정근 유도

살균된 섬오갈피나무의 줄기와 잎을 IAA(indole-3-acetic acid) 0.5/L, 제아틴(Zeatin) 0.2/L의 생장조절물질과 수크로오스(Sucrose) 30g/L, 겔라이트(Gelite) 2.0g/L를 함유한 MS(Murashinge and Skoog, 1962) 기본배지에 접종한 후 23~27℃의 배양실에서 8주간 배양하여 캘러스를 유도하였다. 유도된 캘러스는 4주 간격으로 계대 배양하여 증식하였다.

얻어진 캘러스로부터 부정근을 유도하기 위하여 수크로오스(Sucrose) 30g/L, 겔라이트(Gelite) 2.0g/L를 함유한 MS 기본배지에 NAA(1-naphthaleneacetic acid) 0.5 mg/L 의 생장조절물질을 첨가하여 22±1℃의 암조건 배양실에서 8주간 배양하였다. 각각의 배지는 1N 수산화칼륨(KOH)을 이용하여 pH 5.8로 조정한 후, 121 ℃에서 20분간 고압멸균기를 이용하여 살균한 다음, 페트리디쉬에 분주하여 사용하였다.

유도한 부정근의 정단부를 약 1cm 정도 절단하여 수크로오스(Sucrose) 30g/L, 겔라이트(Gelite) 2.0g/L를 함유한 1/2 MS 기본배지에 생장조절물질 IBA(indole-3-butyric acid) 1mg/L 를 첨가한 배지에 접종하여, 22±1℃의 암조건 배양실에서 4 주간 배양하였다.

실시예 1-3: 섬오갈피나무 캘러스 추출 방법

증식된 캘러스를 수확하여 깨끗한 티슈로 충분히 수분을 제거한 후 60℃로 2일 동안 건조기에서 건조하였다. 건조된 섬오갈피나무 캘러스 파우더 100g을 용기에 담고, 정제수 1L를 넣은 후, 80℃에서 2 시간 동안 교반하여 반응시키고, 반응 추출물을 여과하여 1L의 섬오갈피나무 캘러스 추출물을 제조하였다.

또한, 섬오갈피나무 추출물의 경우도, 섬오갈피나무의 잎 또는 줄기를 가지고, 상기와 동일한 추출방법으로 수행하여 얻었다.

캘러스 이차대사 산물인 카로티노이드, 플라보노이드 및 페놀의 함량 측정

실시예 2-1: 카로티노이드의 함량 측정

총 카로티노이드 함량은 AOAC법에 의하여, 건조된 섬오갈피나무 캘러스 시료에 아세톤:핵산(3:7, v/v)혼합액을 가하여 추출한 뒤 여과하여 얻은 추출액을 증류수로 세척하고, 활성화 마그네시아:규조토(1:9, v/v)의 혼합물로 크로마토 칼럼을 만든 뒤 추출액을 주입하고 흡인하면서 아세톤:핵산(1:9, v/v) 혼합액으로 436nm에서 흡광도를 측정하였다.

실시예 2-2: 플라보노이드의 함량 측정

총 플라보노이드 함량은 성분특성에 맞추어 발색물질을 넣어 발색의 정도에 따라 함량을 표준액과 비교 측정하는 비색분석법(Colorimetric method)에 기초한 방법에 따라 측정하였다. 섬오갈피나무 캘러스 추출물과 표준물질용액 0.25ml에 증류수 1.25ml을 첨가한 뒤, 5%(w/v) NaNO₂ 용액 0.075ml을 첨가하였다. 6분 뒤 혼합액에 10%(w/v) AlCl₃용액 0.15ml을 첨가한 후, 5분간 방치한 다음 1N NaOH용액 0.5ml을 첨가하였다. 혼합액의 최종 부피가 2.5ml이 되도록 증류수를 첨가한 뒤 510nm에서 흡광도를 측정하였다. 표준물질로는 (+/-)카테킨 표준용액(catechin standard solution)을 사용하였다.

실시예 2-3: 페놀의 함량 측정

총 페놀 함량은 Foline-Ciocalteu 시약이 섬오갈피나무 캘러스 추출물의 총 페놀물질에 의해 환원되면서 몰리브덴 청색으로 발색하는 Folin-Ciocalteu 방법에 기초한 방법을 이용하여 총 페놀 함량을 측정하였다.

추출액과 표준물질용액 0.05ml에 증류수 2.55ml을 첨가한 후, 2N Folin-Ciocalteu reagent 용액 (10 time dilution; Sigma chemical CO., St. Louis, MO, USA) 0.1 을 첨가하였다. 6분 후 혼합액에 20%(w/v) Na2CO3용액 0.5ml을 첨가한 후 30분간 암상태로 방치한 다음 760nm에서 흡광도를 측정하였다. 표준물질로는 갈릭산(galic acid)을 사용하였다.

섬오갈피나무 캘러스 추출물의 이차대사산물의 함량 증진 및 효과

실시예 1에서 제조한 섬오갈피나무 캘러스에 UV-A, 시킴산 및 초음파 처리하여 유효성분의 함량을 개선하였다.

실시예 3-1: UV -A 처리에 따른 섬오갈피나무 캘러스의 이차대사산물의 함량 증진

실시예 1에서 제조한 섬오갈피나무 캘러스를 MS 기본배지에 IAA 0.5/L, Zeatin 0.2/L 생장조절물질을 첨가하여 22±1℃ 배양 온도로 4주간 암배양하고, 배양 5주부터 UV-A 형광 램프(20W, Sankyo Denki, 일본)를 이용하여 매일 0h, 0.5h, 1h, 4h 및 8h으로 UV-A에 장시간 처리한 후, 실시예 2의 방법으로 섬오갈피나무 캘러스 추출물의 카로티노이드, 플라보노이드 및 페놀 화합물의 함량을 측정하였다. 그 결과, 섬오갈피나무 캘러스의 이차대사산물의 카로티노이드, 플라보노이드 및 페놀 화합물의 함량이 증가한 것을 확인할 수 있었다.

아래 표 1은 UV-A의 변화에 따른 섬오갈피나무 캘러스 이차대사산물의 함량 (단위: mg^-1)에 관한 결과이다.

UV-A	카로티노이드 함량	플라보노이드 함량	페놀 화합물 함량
0h	30	32	45
0.5h	31	37	63
2h	34	36	72
4h	35	37	89
8h	39	38	115

실시예 3-2: 시킴산에 따른 섬오갈피나무 캘러스 이차대사산물의 함량 증진

실시예 1에서 제조한 섬오갈피나무 캘러스를 MS 기본배지에IAA 0.5/L, Zeatin 0.2/L의 생장조절물질을 첨가하여 22±1℃ 온도로 4주간 암배양 하였다. 시킴산을 배양 5주에 200, 400 및 600 μM의 농도로 각각 배지에 첨가하여 배양하고, 실시예 2의 방법으로 섬오갈피나무 캘러스 추출물의 카로티노이드, 플라보노이드 및 페놀화합물의 함량을 측정하였다. 그 결과, 시킴산의 첨가 농도가 높아질수록 캘러스의 이차대사산물의 카로티노이드, 플라보노이드 및 페놀 화합물의 함량이 증가한 것을 확인할 수 있었으나, 시킴산의 농도를 600μM의 농도로 배지에 첨가한 경우는 카로티노이드, 플라보노이드 및 페놀 화합물의 함량이 다소 줄어든 것을 확인할 수 있었다.

아래 표 2는 시킴산 농도의 변화에 따른 섬오갈피나무 캘러스 이차대사산물의 함량 (단위: mg^-1)을 나타낸 결과이다.

시킴산 농도 (μM)	카로티노이드 함량	플라보노이드 함량	페놀 화합물 함량
0	40	37	52
100	42	39	66
200	46	36	80
400	55	35	92
600	50	35	75

실시예 3-3: 초음파 조사 후 따른 섬오갈피나무 캘러스 이차대사산물의 함량 증진

실시예 1에서 제조한 섬오갈피나무 캘러스를 MS 배지에 IAA 0.5/L, Zeatin 0.2/L 의 생장조절물질을 첨가하여 22±1℃ 온도로 4주간 암배양하고, 섬오갈피나무 캘러스에 전압을 20V로 하여 1시간 동안 초음파를 조사한 후 섬오갈피나무 캘러스 추출물의 카로티노이드, 플라보노이드 및 페놀 화합물의 함량을 측정하였다. 0, 20, 40, 60분 동안 20V의 초음파를 조사 후, 캘러스 이차대사산물의 카로티노이드, 플라보노이드 및 페놀 화합물의 함량이 전반적으로 증가하고, 40분 조사시 가장 높은 함유량을 확인할 수 있었으나, 카로티노이드와 플라보노이드 함량증가보다 페놀 화합물의 함량이 훨씬 증가하였다.

아래 표 3은 20V 초음파 조사 후에 따른 섬오갈피나무 캘러스 이차대사산물의 함량 (단위: mg^-1)을 나타낸 결과이다.

초음파조사 시간 (min)	카로티노이드 함량	플라보노이드 함량	페놀 화합물 함량
0	40	37	52
20	51	42	65
40	89	88	250
60	95	92	275

B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌생성저해효과 측정

B16F1 멜라노싸이트를 10% 소혈청(fetal bovine serum)과 1% 항생제를 첨가한 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium)에 1×10⁵ 세포의 밀도로 접종하고 하루 동안 5% CO2, 37℃에서 배양시켰다. 그 후 α-MSH(melanocyte stimulating hormone, 0.2μM)가 처리된 DMEM 10%에 섬오갈피 추출물 10%, 각각의 유인제를 처리한 섬오갈피 캘러스 추출물 시료를 10% 처리하여 48시간 동안 배양하였다. 배양 후 멜라닌 함량을 측정할 세트는 세포를 trypsin-EDTA로 떼어낸 후 원심분리하여 세포를 회수하였다. 세포내의 멜라닌 정량은 Lotan (Cancer Res., 40:3345-3350, 1980)의 방법을 약간 변형하여 실시하였다. 세포 pellet에 1N NaOH(10% DMSO)를 첨가하여 추출된 멜라닌을 용해한 후 마이크로플레이트 리더기로 490nm에서 멜라닌의 흡광도를 측정하였다. 세포 측정용 세트는 배지를 제거하고 1/mL MTT((4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide, Sigma) 용액을 배지의 1/10 처리하여 37℃에서 3시간 반응시키고, 그 후 MTT를 제거한 후 DMSO를 첨가하여 발색 정도를 540nm에서 흡광도를 측정하였다. 하기 표의 값은 생성된 멜라닌의 흡광도를 MTT assay 결과의 흡광도로 보정하였다.

	시료 농도	저해율 (%)
음성 대조군	정제수 처리	0
양성 대조군	알부틴 처리 ( 2 % )	75
섬오갈피나무 추출물	10 %	13
섬오갈피나무 캘러스 추출물	UV-A 처리 (8시간)	57
	시킴산 처리 (400 μM)	59
	초음파 처리 (60분)	67

본 발명에 따른 UV-A(8시간), 시킴산(400 μM) 및 초음파 처리(60분)의 유인제 처리에 따른 섬오갈피 캘러스 추출물은 섬오갈피 추출물에 비하여 미백효과를 검정하는 B16F1 멜라노싸이트를 이용한 뛰어난 멜라닌생성저해효과를 확인할 수 있다.

섬오갈피나무 캘러스의 싸이크로옥시게나아제(Cyclooxygenase) 저해에 의한 항염 효과

싸이크로옥시게나아제는 아라키돈산을 기질로 하여 프로스타그란딘(prostaglandin), 트롬복산(thromboxane) 등을 합성하여 염증에 관여한다고 알려진 효소이다. 1 mM 아라키돈산, 25㎍ 헤모글로빈을 0.1 M Tris완충용액(pH 8.0)에 넣어 기질을 만들고 이 기질에 10,000 unit의 싸이크로옥시게나아제 (Sigma, C0733)와 섬오갈피나무 추출물, 섬오갈피나무 캘러스 추출물을 10%로 첨가한다. 싸이크로옥시게나아제 활성은 초기 산소 소모량을 측정기(Yellow Spring Instrument Company, Model 53 Oxygen monitor)로 측정하여 결과를 하기 표 5에 나타내었다.

	시료 농도 (%)	저해율 (%)
음성 대조군	정제수 처리	0
섬오갈피나무 추출물	10	15.4
섬오갈피나무 캘러스 추출물	UV-A 처리 (8시간)	66
	시킴산 처리 (400 μM)	42.6
	초음파 처리 (60분)	52.4

상기 표 5에서 볼 수 있듯이, 본 발명의 조성물 UV-A(8시간), 시킴산(400 μM) 및 초음파 처리(60분)의 유인제 처리에 따른 섬오갈피 캘러스 추출물은 싸이크로옥시게나아제에 대한 저해효과가 캘러스 추출물보다 우수함을 확인할 수 있었다.

iNOS 활성 저해 시험

생쥐의 대식세포인 Raw264.7 세포를 이용하여 인위적으로 유발시킨 염증의 억제 효과를 알아보기 위하여, iNOS가 들어있지 않은 10% FBS-DMEM(Fetal Bovine Serum, 소태아혈청, Dulbecco's Modified Eagle Medium, GIBCO사) 배지에 1×10⁵세포를 현탁시켜 24 well plate에 접종하여 부착시켰다.

하루 후 실시예 1에서 제조한 섬오갈피나무 캘러스 추출물을 10%로 처리하여 18시간 배양한 후 1 /ml의 Lipopolysaccharide (Sigma사)를 처리하여 24시간 동안 배양하였다. 그 후, 상층액을 회수하여 96 well plate에 100㎕ 씩 넣고 Griess reagent (Sigma사)을 동량 첨가하여 상온에서 10분간 가볍게 흔들어 주어 570 nm에서 흡광도를 측정했다. Sodium Nitrite를 표준품으로 하여 검량선을 작성하고 각 시료를 배양액 중의 Nitric Oxide의 생성량을 구하였다. Lipopolysaccharide를 처리한 군의 Nitric Oxide의 생성량을 100%로 하여 각 시료의 % 수득율을 구하였다.

	시료 농도		수득율 (%)
대조군			14
LPS(Lipopolysaccharide)			100
섬오갈피나무 추출물	LPS 처리	10 %	85
섬오갈피나무 캘러스 추출물		UV-A 처리 (8시간)	61
		시킴산 처리 (400 μM)	64
		초음파 처리 (60분)	56

상기 표 6에서와 같이, UV-A(8시간), 시킴산(400μM) 및 초음파 처리(60분)의 유인제 처리에 따른 섬오갈피 캘러스 추출물은 iNOS의 활성을 섬오갈피나무 추출물에 비해 우수한 수준으로 저해시켰다.

섬오갈피나무 캘러스 인체에 대한 1차 자극성 시험

피험자 50명(평균연령 35세, 연령분포 20세 -50세)을 대상으로 finn chamber를 이용하여 상박에 피부 첩포시험(patch test)을 실시하였다. 단, 건선(Psoriasis), 습진(Eczema), 기타 피부병변 보유자나 임신, 수유부 또는 피임제, 항히스타민제 등을 복용하고 있는 사람은 본 실험에서 제외하였다.

피험자 50명을 대상으로 시험부위인 상박 부위를 1차 증류수로 닦아내고 건조시킨 다음, 섬오갈피나무 캘러스 추출물을 농도별로 함유하는 본 발명의 조성물을 각각 25 씩 finn chamber에 적하 시킨 후 상박 부위에 얹어 고정시켰다.

양성 대조군으로 1 % SLS(Sodium Lauryl Sulfate), 음성 대조군으로 에탄올 10 %를 사용하였다. 48시간 동안 피부에 첩포를 적용하였으며, 첩포를 제거한 후에는 marking pen으로 시험부위를 표시하여 4시간 경과한 다음 육안으로 피부상태 변화를 판독하여 그 결과를 하기 표 7에 나타내었다. 자극도는 하기 수학식에 따라 계산하였다.

< 판정 기준 >

- : 홍반이나 특이한 현상 없음

+- : 주위보다 약간 붉어짐

+ : 주위보다 현저히 붉어짐

++ : 주위보다 심하게 붉어지고 부풀어 오름

시 료	피검자 수	판정 결과				자극도
		++	+	+-	-
1 % 섬오갈피나무 캘러스 추출물	50	-	-	3	47	0.06
5 % 섬오갈피나무 캘러스 추출물	50	-	2	3	45	0.14
10 % 섬오갈피나무 캘러스 추출물	50	2	2	5	38	0.30
1 % SLS	50	2	8	12	28	0.68
10 % 에탄올	50	-	-	10	40	0.20

본 발명에 따른 화장료 조성물의 피부 진정 효과 시험

본 발명에 따른 섬오갈피나무 캘러스 추출물의 적용 시 피부 자극 완화 효과(피부 진정효과)를 살펴보기 위해, 20~40대 남여 20명을 대상으로 피부 자극 완화 시험을 하였다.

자극원으로 5% 락틱산(L-lactic acid)을 실시예 1에서 제조된 화장료 조성물에 첨가하여 10일간 사용하도록 하여, 락틱산에 의해 유발되는 자극에 대한 완화 효과를 비교하여 보았다. 매일 아침, 저녁으로 사용하게 한 다음 자극 여부 및 강도를 설문지에 표시하게 하였다. 시험 결과의 평가는 1일 1회로 하였으며, 따끔거림이나 가려움 같은 주관적 자극과 피부 홍반이나 부종 같은 객관적 자극으로 나누어 표시하게 하였으며, 그 결과는 다음과 같다.

섬오갈피나무 캘러스 추출물 농도(%)	주관적 자극 (따끔거림, 가려움)	객관적 자극 (홍반, 부종)	합 계
0.1	6	3	9
0.5	5	4	9
1.0	11	8	19
5.0	11	8	19
10.0	13	12	25
5% 락틱산	30	19	49

상기 표 8에서 알 수 있듯이, 실시예 1에서 제조된 섬오갈피나무캘러스 추출물이 5% 락틱산에 의해 유발된 피부자극의 완화 효과가 매우 뛰어남을 알 수 있다.

Claims (8)

1. 섬오갈피나무의 캘러스 추출물 또는 상기 캘러스로부터 유도된 부정근 추출물을 조성물의 총 중량에 대하여 0.1 내지 5중량%를 함유하는 피부 진정용 또는 항염 화장료 조성물.
   
2. 제1항에 있어서, 상기 섬오갈피나무 캘러스 추출물은 UV-A 조사, 시킴산 처리 및 초음파 조사로 구성된 군에서 선택되는 방법으로 처리된 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
   
3. 삭제
4. 제1항에 있어서, 상기 섬오갈피나무 캘러스 추출물은 분말화하여 조성물에 함유된 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
   
5. 삭제
6. 삭제
7. 삭제
8. 제1항에 있어서, 상기 섬오갈피나무의 캘러스로부터 유도된 부정근 추출물은 섬 오갈피나무의 성체 또는 종자로부터 얻은 캘러스로부터 유도된 부정근을 열수 추출하여 얻은 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.