KR102202801B1 - 안토시아닌의 함유량이 증대된 아로니아 캘러스 및 이를 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

안토시아닌의 함유량이 증대된 아로니아 캘러스 및 이를 함유하는 화장료 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 안토시아닌의 함유량이 증대된 아로니아 캘러스 추출물 및 이를 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 본 발명에 의하면, 안토시아닌의 생합성이 크게 향상된 아로니아 캘러스를 대량으로 제조할 수 있으므로, 안토시아닌을 포함하는 다양한 제품의 경제적인 생산 및 개발에 널리 활용될 수 있다. 또한, 본 발명의 방법으로 제조된 아로니아 캘러스는 피부 부작용이 없으면서도 항산화, 피부 미백, 피부 재생, 보습 기능이 우수하기 때문에 다양한 제형의 화장료 조성물로 적용이 가능하다.

Description

안토시아닌의 함유량이 증대된 아로니아 캘러스 및 이를 함유하는 화장료 조성물{Aronia Melanocarpa Callus with Improved Anthocyanin and Cosmetic Composition Containing Same}
본 발명은 안토시아닌의 함유량이 증대된 아로니아 캘러스 추출물 및 이를 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 아로니아 캘러스에 특정 광과 전파를 조사하면서 배양함으로써 안토시아닌의 함유량이 크게 증대된 아로니아 캘러스 및 이의 추출물을 함유하는 항산화, 미백, 피부 재생 및 보습 효과가 우수한 화장료 조성물에 관한 것이다.
식물은 과거 식량 자원의 의미였으나, 현재에는 약제, 향료, 색소, 농약, 염료 등을 포함한 광범위한 화학 물질의 공급원으로서 그 의미가 확대되고 있다. 특히, 식물 유래 유용 물질들은 항바이러스, 항박테리아, 항암, 항산화 능력 등의 생리 활성을 갖고 있어, 신규 효능 물질로서 발전 가능한 이상적인 자원으로 주목받고 있으며, 식물을 유래로 하기 때문에 효능이 있으면서도 인체에 친화적이라는 장점 또한 가지고 있다.
그러나, 식물 자원으로부터의 신규 효능 물질을 상업적으로 개발하기에는 현실적으로 어려움이 많다. 식물은 성장 속도가 매우 느리며, 식물 내 효능 물질의 함량이 극히 제한적이고, 식물 내 효능 물질은 식물의 특정 기관 내에만 소량 존재하며, 식물을 자원으로 이용할 경우 자연 훼손의 문제가 발생한다. 또한, 식물 유래의 효능 물질은 화학적인 구조가 매우 복잡하여, 다단계 중합 과정들이 요구되며 이로 인해 생산 비용이 매우 높아지는 경제적인 문제가 있다. 이러한 이유로 인해 식물 유래의 효능 물질이 안정적으로 공급되기 어려웠다.
이러한 문제를 극복하기 위한 기술로서 식물조직 배양기술은 식물 특유의 전형성능(totipotency)을 이용하여 식물체를 세포나 조직의 형태로 형성하거나 식물체를 다시 재생시킬 수 있는 방법이다. 조직배양이라는 특수한 환경에서 배지에 영양분, 생장호르몬, 온도 등의 조절에 의해 실험자의 목적에 맞는 다양한 형태의 조직을 배양할 수 있으며, 이를 이용하여 식물로부터 유용물질을 대량으로 생산할 수 있다.
식물이 생산하는 이차대사산물로는 알칼로이드(alkaloids), 플라보노이드(flavonoids), 카로티노이드(carotenoids), 글리코사이드(glycolsides), 테르페노이드(terpenoids) 등이 있으며, 이러한 이차대사산물에는 보습, 피부 진정 및 수렴, 자외선 차단, 미백, 각질제거, 피부노화 방지, 항산화, 피부주름 개선, 항균, 항염, 항암 등의 효과를 나타내는 것으로 알려져 있다. 따라서, 식물 효능 성분을 함유하는 화장료 조성물에 대한 연구도 활발하게 이루어지고 있다.
한편, 아로니아 열매에는 항산화 성분인 폴리페놀 성분이 풍부하게 함유되어 있으며, 그 중에서도 안토시아닌이 블루베리 보다 많이 함유되어 있다. 보라색의 색소 성분인 안토시아닌은 플라보노이드의 일종으로 항산화 성분인 폴리페놀에 포함된다. 아로니아는 껍질뿐만 아니라 열매에도 많은 안토시아닌 성분을 함유하고 있는 것으로 알려져 있지만, 화장품 등에 활용하기 위하여 추출물 등의 형태로 구성하더라도 여전히 그 농도가 낮아 과도하게 많은 추출물이 필요하거나 활성을 나타내기 어려운 문제가 있다.
본 발명에서는 상기 아로니아를 캘러스로 배양할 때 특정 파장의 광과 전파를 조사하는 경우 안토시아닌 함유량이 크게 향상된 아로니아 캘러스를 제조할 수 있다는 것을 발견하고 본 발명을 완성하였다.
대한민국 공개특허공보 제10-2011-0123934호, 미백, 자외선 차단 및 항산화 효능을 가지는 산삼 줄기세포(캘러스) 및 산삼부정근 추출물, 주식회사 비트로시스 대한민국 공개특허공보 제10-2010-0088463호, 아로니아 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물, 주식회사 코리아나화장품 대한민국 등록특허 제10-1535342호, 아로니아 추출물을 유효성분으로 포함하는 기능성 화장료 조성물 및 그 제조방법, 서원대학교산학협력단
본 발명의 목적은 안토시아닌 함유량이 증대된 아로니아 캘러스를 제조하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 목적은 또한, 상기 안토시아닌 함유량이 증대된 아로니아 캘러스를 함유하는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 (a) 아로니아(Aronia Melanocarpa)의 절편을 배양하여 캘러스(callus)를 형성하는 단계; 및 (b) 상기 아로니아 캘러스에 광을 조사하면서 배양하는 단계를 포함하는, 안토시아닌(anthocyanin) 함유량이 증대된 아로니아 캘러스의 제조방법을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 광은 가시광선인 것이 바람직하다.
본 발명에 있어서, 상기 (b) 단계는 장파(LF), 중파(MF), 단파(HF), VHF(초단파), 극초단파(UHF) 및 마이크로파(SHF)로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 전파를 더 조사하면서 수행되는 것이 바람직하다.
본 발명에서, 상기 전파는 30 내지 300MHz의 초단파(VHF)인 것이 바람직하다.
본 발명에서, 상기 (b) 단계는 48 내지 96시간 동안 수행될 수 있다.
본 발명에서, 상기 (a) 단계의 배양은 24 내지 28℃에서 1 내지 8주간 암배양으로 수행될 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 (a) 및 (b) 단계 중 하나 이상의 배양은 파이클로람(picloram) 및 6-벤질아미노퓨란(6-benzylaminopurane)을 포함하는 배지에서 수행될 수 있다.
본 발명은 또한, 상기 방법으로 제조된 아로니아 캘러스, 또는 상기 아로니아 캘러스의 추출물을 유효성분으로 포함하는, 화장료 조성물을 제공한다.
상기 화장료 조성물은 항산화, 피부 미백, 피부 재생, 표피색소 침착 완화 및 피부보습 효능을 가질 수 있다.
본 발명에서, 상기 화장료 조성물은 상기 아로니아 캘러스 또는 아로니아 캘러스의 추출물을 0.001 내지 25중량% 포함할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 화장료 조성물은 유액, 크림, 화장수, 에센스, 팩, 젤, 파우더, 메이크업 베이스, 파운데이션, 로션, 연고, 패치, 미용액, 클렌징폼, 클렌징크림, 클렌징워터, 바디로션, 바디크림, 바디오일, 바디에센스, 샴푸, 린스, 바디세정제, 비누, 염모제 및 분무제로 이루어진 군에서 선택된 제형을 가질 수 있다.
본 발명에 따른 아로니아 캘러스의 제조방법에 의하면, 안토시아닌의 생합성이 크게 향상된 아로니아 캘러스를 대량으로 제조할 수 있으므로, 안토시아닌을 포함하는 다양한 제품의 경제적인 생산 및 개발에 널리 활용될 수 있다. 또한, 본 발명의 방법으로 제조된 아로니아 캘러스는 피부 부작용이 없으면서도 항산화, 피부 미백, 피부 재생, 보습 기능이 우수하기 때문에 다양한 제형의 화장료 조성물로 적용이 가능하다.
도 1(a)는 본 발명의 실시예에 따라 유도된 아로니아 캘러스를 나타낸다.
도 1(b)는 본 발명의 실시예에 따라 제조된 안토시아닌 생합성이 증대된 아로니아 캘러스를 나타낸다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따라, 광 및 전파의 조사에 따른 아로니아 캘러스의 안토시아닌 발현양을 나타낸 그래프이다.
도 3(a)는 안토시아닌 표준품의 HPLC 측정 결과를 나타낸다.
도 3(b)는 제조예 1의 아로니아 캘러스의 추출물의 안토시아닌 함유량을 HPLC로 측정한 결과를 나타낸다.
도 3(c)는 제조예 2의 아로니아 캘러스 추출물의 안토시아닌 함유량을 HPLC로 측정한 결과를 나타낸다.
도 4는 아로니아 캘러스 추출물의 농도에 따른 멜라닌 추출액의 이미지를 나타낸다.
도 5는 아로니아 캘러스 추출물의 처리 농도에 따른 상처의 재생 증가량을 비교하여 나타낸 것이다.
다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로, 본 명세서에서 사용된 명명법은 본 기술 분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.
본 발명은 안토시아닌의 생합성이 증대된 아로니아 캘러스의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명의 방법으로 제조된 아로니아 캘러스는 안토시아닌 함유량이 일반 아로니아에 비하여 약 100배 이상으로 풍부하기 때문에, 항산화, 미백, 피부 재생, 보습을 위한 화장료 조성물에 효과적으로 활용될 수 있다.
본 발명의 방법은 아로니아의 절편을 배양하여 캘러스(callus)를 형성하는 단계 및 상기 아로니아 캘러스에 광을 조사하면서 배양하는 단계를 포함한다.
상기 아로니아(Aronia Melanocarpa)는 쌍떡잎식물 장미목 장미과 아로니아속에 해당하는 관목과 그 열매의 총칭으로, 베리류의 열매 중에서도 안토시아닌 함량이 가장 높은 종이다.
본 발명에 있어서, 용어 “캘러스(callus)”는 식물체에서 잘라낸 조직을 옥신을 함유한 배지에서 배양하거나, 어떤 종류의 식물에 상처를 내거나, 상처 부위를 옥신으로 처리하거나 할 때에 생기는 미분화 조직 또는 세포덩어리를 말하는 것으로서, 새로운 배지에 계대 배양함으로써 영구적으로 분열 및 증식할 수 있다.
본 발명에 있어서, 용어 "기내배양(in vitro culture)"이란 체외배양이라고도 하며, 생물체에서 끄집어낸 물질을 체외에서 재현시키기 위한 실험실 내 배양을 의미한다. 일반적으로 식물체의 기내배양에 사용되는 식물 호르몬의 종류로는 BAP(6-benzyloaminopurine), 키네틴(Kinetin, N-2-furanylmethyl-1H-purine-6-amine) 및 TDZ(Thiazuron-N-phenyl-N-1,2,3 thiadiazol-5ylurea)와 같은 사이토키닌(Cytokinins); IAA(Indole acetic acid), IBA(Indole butyric acid), NAA(Naphthalene-acetic acid) 및 2,4-D(2,4-dichlorophenoxy-acetic acid)와 같은 옥신(Auxins); GA3와 같은 지베렐린(Gibberellins) 등이 있다.
상기 캘러스는 정상적인 기관형성이나 조직분화를 일으키는 능력을 잃은 무정형의 조직 또는 세포덩어리로 대부분 유세포로 되어 있다. 즉, 식물체 내의 세포는 증식하면 즉시 방향이 정해져서 특정한 조직뿐만 아니라 기관으로 규칙적으로 조립되어 가지만, 조직배양을 통해 형성된 미분화 세포 덩어리인 캘러스는 외부로부터 다양한 식물 성장 호르몬 등의 자극을 주게 되면 그때까지 유지되어 왔던 통제가 해제되어 세포가 제멋대로 증식하는 것으로 해석된다.
본 발명에서는 아로니아 캘러스를 제조한 후 광을 조사하면서 추가로 배양하는 경우 안토시아닌 성분이 매우 풍부한 캘러스를 제조할 수 있다는 것을 발견하였다.
본 발명에서 사용되는 아로니아는 열매, 잎, 줄기, 가지 등을 사용할 수 있지만, 열매를 사용하는 것이 가장 바람직하다. 또한, 상기 아로니아는 미성숙의 아로니아를 사용하는 것이 바람직하다.
본 발명에 있어서, "안토시아닌(anthocyanin)"은 식물의 2차대사산물 중 폴리페놀 성분의 일종이며 꽃이나 과실 등에 주로 포함되어 있는 수용성 물질로서 색소 성분이기도 하다. 안토시아닌은 항산화 물질 중에서도 가장 강력한 항산화 효과를 낸다고 알려져 있으며, 특히 아로니아 열매는 껍질뿐만 아니라 열매 내부에도 많은 안토시아닌 성분을 함유하고 있다.
본 발명의 아로니아 캘러스를 제조하는 방법은, 우선 아로니아를 작은 크기로 절단하여 절편을 제조하는 단계를 수행할 수 있다. 이때, 상기 아로니아를 절단하기 전에 살균 및 세척하는 것이 바람직하다.
살균 및 세척한 아로니아는 칼 또는 절단기를 이용하여 절단하되, 절단된 절편이 2 내지 10mm의 크기를 갖도록 절단하는 것이 바람직하며, 3 내지 5mm의 크기로 절단하는 것이 더욱 바람직하다.
적당한 크기로 절단된 아로니아 절편은 배지에서 배양하여 캘러스화를 유도할 수 있다. 상기 배지는 식물생장 조절물질이 포함된 액체 또는 고체 배지일 수 있으며, 본 기술 분야에서 식물조직배양에 일반적으로 사용되고 있는 배지가 있다면, 제한 없이 사용 가능하다. 일반적으로, MS배지(Murashige-Skoog medium), B5 배지 등을 사용할 수 있다.
상기 캘러스의 유도는 바람직하게는 액체 배지에서 1차 배양 후 고체 배지에 치상하여 2차 배양하여 수행할 수 있으며, 상기 고체 배지에서의 배양은 24 내지 28℃에서 1 내지 8주간 암배양하는 것이 바람직하다.
본 발명에서는 파이클로람(picloram) 및 6-벤질아미노퓨란(6-benzylaminopurane)을 함유하는 배지를 이용하여 아로니아 절편으로부터 캘러스를 유도하고자 하였다.
상기 배양에 의하여 아로니아 캘러스가 유도되면 곰팡이나 미생물에 오염이 되지 않은 캘러스를 선별하여 계대배양을 통하여 안정화시켜 사용할 수 있다. 안정화된 아로니아 캘러스를 액체 또는 고체 배지에서 기내배양을 하여 안토시아닌의 생합성을 증대시킬 수 있으며, 이 과정에서 광을 조사할 수 있다. 상기 배양은 고체배지를 사용하는 것이 바람직하며, 파이클로람 및 6-벤질아미노퓨란을 함유하는 일반적인 MS 고체배지를 사용할 수 있다.
본 발명에서는 아로니아를 캘러스로 형성함에 있어서 특정 광을 복합적으로 조사하는 경우 안토시아닌의 함유량이 크게 증대될 수 있다는 것을 확인하였다.
구체적으로, 본 발명의 방법은 상기 아로니아 캘러스를 배양하는 단계에 있어서 가시광선을 조사할 수 있다. 본 발명의 일 실시예에서는 아로니아 캘러스에 가시광선을 조사하면서 배양하는 경우 안토시아닌 함유량이 크게 증대된 아로니아 캘러스를 수득할 수 있다는 것을 확인하였다.
본 발명의 바람직한 실시 형태에 있어서, 상기 아로니아 캘러스를 배양하는 단계는 가시광선 외에, 장파(LF), 중파(MF), 단파(HF), VHF(초단파), 극초단파(UHF) 및 마이크로파(SHF)로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 전파를 더 조사하면서 수행될 수 있다. 가장 바람직하게는, 상기 아로니아 캘러스의 배양은 가시광선 및 초단파(VHF)를 조사하면서 수행될 수 있다. 본 발명의 일 실시예에서는 아로니아 캘러스를 가시광선을 조사하면서 배양하는 경우 안토시아닌 함유량이 약 70배 이상 향상될 수 있으며, 가시광선 및 초단파를 함께 조사하면 약 200배 이상 향상될 수 있다는 것을 확인하였다.
상기 아로니아 캘러스에 조사되는 초단파(VHF)는 파장 1 내지 10미터, 진동수 30 내지 300MHz인 전자기파를 의미하며, 진동수가 50 내지 150MHz인 범위가 더욱 바람직하다.
상기 광 및 전파의 조사는 48 내지 96시간동안 수행할 수 있으며, 약 72시간이 더욱 바람직하다.
본 발명은 또한, 상기 안토시아닌의 함유량이 증대된 아로니아 캘러스를 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.
상기 아로니아 캘러스는 추출물의 형태로 화장료 조성물에 함유되는 것이 바람직하다. 상기 추출물은 본 기술분야에서 일반적으로 사용하는 추출 방법을 사용하여 추출할 수 있으며, 예를 들어 동결건조된 아로니아 캘러스를 열수추출하는 방법으로 생성할 수 있다.
상기 열수추출은 아로니아 캘러스 5g당 정제수 약 1 내지 3L를 사용하여 추출하는 것이 바람직하며, 물의 온도는 80 내지 100℃일 수 있으나, 100℃가 가장 바람직하다. 상기 열수추출을 하는 시간은 1 내지 3시간일 수 있다.
본 발명에 따른 아로니아 캘러스 또는 아로니아 캘러스 추출물을 함유하는 화장료 조성물은 안토시아닌이 고농도로 함유되어 있어, 항산화 효과가 뛰어나며 피부 미백에 좋고 피부 재생 효과가 우수하다. 또한, 피부에 대한 자극도 적으며, 표피색소침착 완화 효과와 피부보습 유지 효과도 갖추고 있다.
상기 화장료 조성물은 아로니아 캘러스 또는 아로니아 캘러스 추출물을 0.001 내지 25.0중량%로 포함하는 것이 바람직한데, 0.001중량% 미만에서는 유효한 효과를 기대할 수 없고, 25.0중량%를 초과하면 제형 안정성이 감소할 수 있다.
상기 화장료 조성물의 제형은 유액, 크림, 화장수, 에센스, 팩, 젤, 파우더, 메이크업 베이스, 파운데이션, 로션, 연고, 패치, 미용액, 클렌징폼, 클렌징크림, 클렌징워터, 바디로션, 바디크림, 바디오일, 바디에센스, 샴푸, 린스, 바디세정제, 비누, 염모제 및 분무제로 이루어진 군에서 선택된 화장료 제형일 수 있으며, 상기 제형에 대하여 특별히 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 실시예에 따른 상기 화장료 제형은 용액, 유화물, 점성형 혼합물 등의 형상을 취할 수 있으며, 본 발명이 목적으로 하는 주 효과를 손상시키지 않는 범위내에서, 바람직하게는 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분 등을 화장료의 제형 또는 사용목적에 따라 당업자가 어려움 없이 선정하여 배합할 수 있다.
실시예
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
제조예 1: 아로니아 캘러스 제조
어린 아로니아 미성숙 열매를 채취하여 흐르는 물에 세척한 후 70% 에탄올(Merck) 용액을 이용해 60초 간 살균 처리하고, Tween 20을 첨가한 4% NaClO에 3시간 동안 침지시켜 살균하였다.
살균이 완료된 아로니아 열매를 멸균된 증류수로 5회 헹구어 남아있는 살균액을 모두 제거하였다.
상기 살균 및 세척한 아로니아 열매를 약 5mm 크기로 절단하여 절편을 제조하였다. 상기 절편들을 파이클로람(Duchefa) 및 6-벤질아미노퓨린(Duchefa)이 각 1mg/L 첨가된 기본 액상 MS 배지에서 3 주간 배양한 후, 다시 고체 MS 배지에 치상하여 26℃에서 6주간 암배양하였다.
상기 MS 배지의 조성은 1L를 기준으로 NH4NO3 1650mg, KNO3 1900mg, CaCl2·2H2O 440mg, MgSO4·7H2O 370mg, KH2PO4 170mg, KI 0.83mg, H3BO3 6.2mg, MnSO4·4H2O 22.3mg, ZnSO4·7H2O 8.6mg, Na2MoO4·2H2O 0.25mg, CuSO4·5H2O 0.025mg, CoCl2·6H2O 0.025mg, FeSO4·7H2O 27.8mg, Na2EDTA·2H2O 37.3mg, Myoinositol 100mg, Nicotinic acid 0.5mg, Pyridoxine-HCl 0.5mg, Thiamine-HCl 0.5mg, Glycine 2mg 및 Sucrose 30,000mg을 포함하도록 하였다.
상기 과정에 따라 아로니아 캘러스가 유도되면 선별과정을 통하여 캘러스를 안정화시켰다. 유도된 아로니아 캘러스를 도 1(a)에 나타내었다.
실험예 1: 광 조사를 통한 안토시아닌의 발현량 분석
제조예 1에서 제조된 아로니아 캘러스를 추가로 배양하면서 광 조사를 수행하여 안토시아닌 발현량을 분석하였다.
안정화된 아로니아 캘러스에 대하여 아래의 표 1에 기재한 바와 같은 다양한 종류의 광을 조사하면서 고체 MS배지 에서 72시간 동안 배양하였다.
배양이 완료된 비교예 및 실시예의 아로니아 캘러스의 안토시아닌 함량을 HPLC(High Performance Liquid Chromatography)로 측정하여 표 1 및 도 2에 나타내었다.
구분 광 조사 안토시아닌 발현 배수 편차
비교예 1 - 1 6
비교예 2 LF 23 7
비교예 3 MF 29 6
비교예 4 HF 28 13
비교예 5 VHF 28 9
비교예 6 UHF 38 11
비교예 7 SHF 31 3
비교예 8 적외선 69 10
비교예 9 자외선 59 11
실시예 1 가시광선 76 8
실시예 2 LF + 가시광선 86 19
실시예 3 MF + 가시광선 98 21
실시예 4 HF + 가시광선 89 13
실시예 5 VHF + 가시광선 267 37
실시예 6 UHF + 가시광선 68 18
실시예 7 SHF + 가시광선 72 17
- LF(장파): 30kH ~ 300kHz
- MF(중파): 300kHz ~ 3MHz
- HF(단파): 3MHz ~ 30MHz
- VHF(초단파): 30MHz ~ 300MHz
- UHF(극초단파): 300MHz ~ 3GHz
- SHF(마이크로파): 3GHz ~ 30GHz
상기 표에서, 광을 단독으로 조사한 실험에서는 가시광선을 단독으로 조사한 실시예 1의 아로니아 캘러스가 가장 많은 안토시아닌 발현량을 나타내었다. 또한, 가시광선을 다른 광과 함께 조사한 경우 복합 작용에 의해 단독 조사보다 더 많은 안토시아닌 함량을 나타내었다.
특히, VHF(초단파)를 가시광선과 함께 조사한 경우 다른 조합보다 약 4배 가량의 안토시아닌 발현량을 나타내어 안토시아닌 생합성 능력을 크게 향상시킬 수 있다는 것을 확인하였다. 이 결과는 VHF를 단독으로 조사한 경우 UHF나 SHF에 비하여 발현량이 더 낮았던 것과 비교할 때 유의미하다.
광 조사에 의한 배양이 완료된 실시예 5의 아로니아 캘러스를 도 1(b)에 나타내었다. 광 조사 배양 이전의 캘러스에 비하여 짙은 보라색을 나타내어 안토시아닌 색소가 다량 생성된 것을 확인할 수 있다.
제조예 2: 아로니아 캘러스 추출물 제조
상기 실험예 1에서 제조된 실시예 5의 아로니아 캘러스를 정제수로 세척 후 영하 80℃에서 동결 건조하여 아로니아 캘러스 건조물을 얻었다.
동결건조된 아로니아 캘러스 5g을 정제수 2L에 넣어 100℃에서 2시간 열수추출하는 방법으로 아로니아 캘러스 추출물을 생산하였다. 상기 추출물의 건조중량은 약 2 mg/ml 정도의 농도로 유효성분을 함유하고 있다.
이하의 실험예에서는 정확한 농도에 따른 실험을 위하여 추출물을 다시 동결건조하여 시험을 수행하였다.
실험예 2: 아로니아 캘러스 추출물의 안토시아닌 함량 분석
상기 제조예 2에서 제조된 아로니아 캘러스 추출물이 여전히 향상된 안토시아닌 함량을 함유하는 지를 분석하였다.
제조예 1에서 광 조사를 수행하지 않은 아로니아 캘러스를 제조예 2와 동일한 방법으로 추출하여 추출물을 제조하여, 제조예 2에서 제조된 아로니아 캘러스 추출물과 비교하였다.
상기 두 추출물의 동결건조물 0.1g을 이동상으로 용해하여 10ml 검액을 획득하였다. 또한, 안토시아닌(C21H21O11: 449.39) 표준품 10mg을 메탄올로 1,000ml가 되도록 용해한 후, 이 중 0.1ml를 메탄올로 10ml가 되도록 다시 용해하고 1/2, 1/5, 1/10, 1/20 로 희석하여 표준액을 획득하였다. 상기 검액 및 표준액 30㎕씩을 가지고 HPLC 분석을 수행하였다.
HPLC를 통한 분석은 Shimadzu LC-20 Series를 이용하였다. 컬럼은 CAPCELL PAK C18 UG120 250mm x 4.6mm, 5㎛을 사용하였다. 이동상으로는 1% Formic acid 1%(A)과 Formic acid, 22.5% 메탄올 및 22.5% 아세토니트릴(B)의 혼합용액을 이용하였으며, 25분에 걸쳐 A와 B의 함량을 각각 30%와 70%로 일정하게 흘려주면서 진행하였다. 유속은 분당 1.0ml이었고, 자외선 검출기의 검출파장은 520±10nm로 설정하였다.
HPLC를 통해 측정한 아로니아 캘러스 추출물 각각의 안토시아닌 함량을 표 2 및 도 3에 나타내었다.
시료명 분석항목 단위 정량한계 결과
제조예 1의 아로니아
캘러스 추출물		 Cyanidin-3-galactoside mg/L 0.1 불검출
제조예 2의 아로니아
캘러스 추출물		 Cyanidin-3-galactoside mg/L 0.1 215.1
상기 표 2 및 도 3에서 확인 가능한 바와 같이, 광 조사를 수행하지 않은 아로니아 캘러스의 경우 추출물에서 안토시아닌이 검출되지 않는 반면, 광 조사를 수행하여 안토시아닌의 생합성을 향상시킨 아로니아 캘러스 추출물은 안토시아닌이 고농도로 함유됨을 확인하였다.
실험예 3: 세포안전성 시험
본 발명의 아로니아 캘러스 추출물이 장기간 사용 시에도 피부자극 없이 개선 효과를 보일 수 있는지를 확인하기 위하여, 인간 각질 형성 세포에 대한 세포 독성 유무를 시험하였다.
인간 각질 형성 세포인 HaCaT 세포주를 37℃, 5% CO2 배양기에서 배양하였다. 배양 용기의 85~90%의 면적만큼의 배양도를 나타내면, 트립신(trypsin) 처리로 세포를 탈착시켜 계수 후, 5Х103cells/cm2으로 계대 배양하였다.
세포의 배양에는 10% FBS(GIBCO), 100U/ml 페니실린(penicillin) 및 100㎍/ml 스트렙토마이신(streptomycin)이 첨가된 DMEM(Delbecco's Modified Eagle Medium, GIBCO) 배지를 사용하였다. 계대 배양을 위하여 75 T-flask(NUNC)를 사용하였으며, 세포 독성 시험을 위해서는 24 well plate를 사용하였다.
인간 각질 형성 세포를 24 well plate에 5Х103cells/well씩 동일하게 heamacytometer를 이용하여 계수한 후 분주하였다. 10% FBS를 함유하는 DMEM에서 48시간 배양하여 배양용기 표면적의 25 ~ 30%만큼 배양되면, 실시예 5의 아로니아 캘러스 추출물이 함유된 FBS-free DMEM으로 교체하여 24시간 더 배양하였다. 배양 후 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide(MTT, SigmaM5655) 용액(2.5 mg/ml)을 50㎕ 첨가하고 3시간 추가로 배양하였다.
그 후, 세포 배양액을 전부 버리고, 200㎕의 DMSO(dimethyl sulfoxide, Sigma D2650)를 각 well 당 200㎕ 처리하여 교반 후, 100㎕씩을 96 well로 취하여 ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)로 570nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포 독성 정도는 순수한 물을 사용한 대조군의 흡광 강도를 기준으로 백분율로 표시하였다. 그 결과를 아래의 표 3에 나타내었다.
아로니아 캘러스
추출물의 농도(㎍/㎖)		 대조군 실시예 5
- 31.25 62.5 125 250 500
세포 활성도
(Cell Viability, %)		 100 113.9 117.5 137.1 149.5 155.7
※ 세포 활성도(Viability)(%)=(시료 처리군의 흡광도/시료 무처리군의 흡광도)X100
상기 표 3에서, 실시예 5의 아로니아 캘러스 추출물을 500㎍/ml의 농도로 처리한 결과 대조군 대비 약 155%의 증식 정도를 나타내었으며, 모든 농도에서 농도 의존적으로 세포증식 정도를 나타내었다.
상기 결과로부터, 본 발명의 아로니아 캘러스 및 이의 추출물은 장기간 사용하여도 세포 독성에 의한 피부자극이 유발되지 않고, 동시에 인간각질형성세포의 증식을 유도하는 것을 확인할 수 있다.
실험예 4: 아로니아 캘러스 추출물의 항산화 효과 분석
본 발명의 아로니아 캘러스 추출물의 항산화 효과를 확인하기 위한 실험을 수행하였다.
화합물 DPPH(1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl, Sigma D9132-1G)는 에탄올 내에서 자유라디칼을 발생한다. 실시예 5의 아로니아 캘러스 추출물을 일정 비율로 첨가하여 생성된 자유라디칼의 양이 어느 정도 감소하는지를 확인하였다.
에탄올을 0.4ml에 에탄올로 제조된 0.1mM DPPH 용액 0.5ml 및 정제수를 이용하여 최종 농도가 31.25 내지 500㎍/ml이 되도록 조정된 실시예 5의 아로니아 캘러스 추출물을 0.1ml 첨가하였다. 10초간 강하게 교반하고, 냉암소에서 30분간 보관하였다. 효소결합면역흡수법(ELISA)을 이용하여 517nm에서 흡광도를 측정하였다.
항산화능의 정도는 순수한 물을 사용한 대조군의 흡광 강도를 기준으로 백분율로 표시하였으며, 그 결과를 하기 표 4에 나타내었다.
아로니아 캘러스
추출물의 농도
(㎍/㎖)		 대조군 실시예 5
0 7.8 15.6 31.25 62.5 125 250 500
항산화율(%) 0 5.4 5.1 6.57 10.23 17.62 28.16 37.02
※ DPPH 저해율(%) = 100 - [(시료의 흡광도 - 각 시료 blank의 흡광도)/음성 대조군의 흡광도× 100]
상기 표 4에 나타난 바와 같이, 대조군(0㎍/㎖)에 비교하여 500㎍/ml 처리 시 반응계의 DPPH 자유라디칼이 약 37%, 250㎍/ml 처리 시 약 28%, 그리고 125㎍/ml 처리 시 약 18% 감소된다는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 62.5㎍/ml 처리 시에도 대조군에 비해 약 10% 감소로 그 수치는 낮아졌지만 유의적인 차이를 나타내었다.
상기 결과는 본 항산화 및 피부 진정용 한방 조성물을 화장품 등에 응용할 경우, 500㎍/ml 이상의 높은 함량에서도 세포 독성이 적으면서 유의적인 항산화능으로 항염 및 피부 진정효과가 높음을 보여주는 것이다.
실험예 5: 아로니아 캘러스 추출물의 미백 활성 분석
본 발명의 아로니아 캘러스의 미백 효과를 확인하기 위한 실험을 수행하였다.
설치류 멜라노마 세포주인 B16F10 세포주를 DMEM 배지에 10% 우태아 혈청, 100U/㎖ 페니실린, 100㎍/㎖ 스트렙토마이신을 첨가하여 37℃, 5% CO2, 조건에서 배양하였다.
배양된 B16F10 세포를 6-well 플레이트에 well 당 1ⅹ104 개의 세포를 접종하고, 멜라닌자극호르몬인 a-MSH(a-Melanocyte stimulating hormone, Sigma) 각 10μM과 실시예 5의 아로니아 캘러스 추출물이 62.5㎍/ml, 125㎍/ml, 250㎍/ml 및 500㎍/ml의 농도로 포함된 시료액 3,000㎕를 동시에 처리한 이후 72시간 배양하였다. 이후 배지를 제거 한 후 PBS(phosphated buffersaline,GIBCO)로 세척하고 이를 0.05% trypsin-EDTA(GIBCO)를 처리하여 세포를 회수하였다.
회수된 세포는 hematocytometer를 이용하여 세포수를 측정한 후 5,000~10,000rpm으로 10분간 원심분리한 다음 상등액을 제거하고 pellet을 얻었다. 이 세포 pellet를 60℃에서 건조한 후 10% DMSO(Amresco)가 함유된 1M 수산화나트륨액(SAMCHUN Chemicals) 100㎕를 넣어 60℃ 항온조에서 세포 내 멜라닌을 추출하였다.
농도에 따른 멜라닌 추출물을 도 4에 나타내었다. 본 발명의 아로니아 캘러스 추출물의 농도가 높을수록 멜라닌의 생합성이 현저히 저해되었음을 육안으로도 확인할 수 있었다.
이 액을 ELISA reader(BioTek-MQX200R)에서 490nm로 흡광도를 측정하여, 세포 일정 수 당 멜라닌 양을 구하였다. 멜라닌 합성 저해 정도는 순수한 물을 사용한 대조군(무처리 세포)의 흡광 강도를 기준으로 백분율로 표시하였으며, 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다.
아로니아 캘러스
추출물의 농도
(㎍/㎖)		 대조군 실시예 5
0 62.5 125 250 500
멜라닌 합성 저해율 (%) 0 19.08 32.05 32.88 47.12
※ 멜라닌 합성 저해율(%) = 100-(각 시료액의 반응 흡광도/음성 대조군의 반응 흡광도)
표 5에 나타난 바와 같이, 대조군을 100% 멜라닌 생합성으로 보았을 때 실시예 5의 아로니아 추출물을 500㎍/ml로 처리한 경우 약 48%의 멜라닌 생합성이 억제되는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 250㎍/ml에서는 약 33%, 125㎍/ml에서는 약 33%, 62.5㎍/ml에서는 약 19%의 세포 내 멜라닌 생합성이 저해됨을 확인할 수 있었다.
실험예 6: 아로니아 캘러스 추출물의 피부 재생 효과 분석
본 발명의 아로니아 캘러스 추출물의 피부 재생 효과를 확인하기 위한 실험을 수행하였다.
인간각질형성세포주인 HaCaT 6 well plate에 2Х105cells/well씩 동일하게 hemocytometer를 이용하여 계수한 후 분주하였다. 10% FBS를 함유하는 DMEM에서 48시간 배양하여 배양용기 표면적의 90~100%만큼 배양되면, 각 세포에 날카로운 도구를 활용하여 십자형의 상처를 유발한 후, FBS-free DMEM에 실시예 5의 아로니아 캘러스 추출물이 농도별로 함유된 배양 배지로 교체하여 24시간 더 배양하였다.
그 후 현미경을 통하여 대조군(무처리군)과의 상처 후 재생 증가량을 비교한 결과를 도 5에 나타내었다. 도 5에서, 인간 각질 형성 세포주에서 아무 것도 처리하지 않은 대조군에 비하여 농도의존적으로 상처 재생능이 현저하게 증가함을 확인할 수 있었다.
상기 결과로부터, 본 발명의 아로니아 캘러스 추출물이 피부 재생 효능이 우수하다는 것을 확인하였다.
실험예 7: 아로니아 캘러스 추출물을 함유하는 화장료 조성물의 인체 피부 일차 자극 평가
본 발명의 아로니아 캘러스 추출물을 포함하는 화장료 조성물의 피부 자극을 확인하기 위해, Finn Chamber on Scanpor를 이용한 첩포검사를 시행하였다.
피부 자극 시험을 위한 화장료 조성물로서, 아래의 표 6에 기재된 조성으로 크림 타입의 화장료 조성물을 제조하였다. 표 6에서, 수치는 중량%를 의미한다.
성분명 배합목적 실시예
8		 실시예 9 비교예 10
정제수 용제 To 100 To 100 To 100
제조예 2의 아로니아 캘러스 추출물 기능성원료 0.1 2.0 -
나이아신아미드 - - 2.0
다이소듐이디티에이 금속이온
봉쇄제		 0.02 0.02 0.02
글리세린 보습제 5 5 5
부틸렌글라이콜 1 1 1
소듐하이알루로네이트 보습제 1 1 1
메칠프로판디올 3 3 3
카보머 점증제 10 10 10
폴리아크릴레이트-13/ 폴리이소부텐/ 폴리소르베이트20/ 정제수/ 소르비탄이소스테아레이트 0.5 0.5 0.5
글리세릴스테아레이트 유화제 1.5 1.5 1.5
세틸알코올 유화안정제 1.5 1.5 1.5
비즈왁스 0.5 0.5 0.5
폴리소르베이트 0.3 0.3 0.3
하이드로제네이티드폴리(C6-14올레핀) 피부유연화제 4 4 4
사이클로펜타실록세인 2 2 2
스쿠알란 2 2 2
펜타에리스리틸테트라에칠헥사노에이트 2 2 2
트로메타민 중화제 0.2 0.2 0.2
향료 향료 0.02 0.02 0.02
카프릴릴글라이콜/에칠헥실글리세린 보존제 0.2 0.2 0.2
1,2-헥산디올 1.2 1.2 1.2
시험은 임상시험 기관을 통해 진행하였다. 성인 30명을 대상으로 시험을 수행하였으며, 피험자들은 측정 조건을 동일하게 하고자 시험 부위를 깨끗하고 마른 상태로 유지하였다. 시험부위를 70% 에탄올로 닦아낸 뒤 건조시킨 다음 상기 실시예 8 및 9, 및 비교예 10의 유화 타입 크림으로 피부 자극에 대한 평가를 실시하였다.
상기 크림을 일정량(20㎕)을 24시간 동안 첩포한 후 제거하고, 30분, 24시간, 48시간 경과 후 육안으로 피부 상태 변화를 판독하였으며, 피부상태의 변화 정도는 하기의 피부상태 평가 기준에 따라 분류하여 평가하였고, 인체피부 첩포안정성 평가 결과는 표 7에 나타내었다.
시험물질
(함량에 따른 피부자극확인)		 - ± + ++ +++ 평균 점수 판정
비교예 10 30분 - - - - - 0 무자극
24시간 - - - - - 0 무자극
48시간 - - - - - 0 무자극
실시예 8 30분 - - - - - 0 무자극
24시간 - 1 - - - 0.19 무자극
48시간 - - - - - 0 무자극
실시예 9 30분 - - - - - 0 무자극
24시간 - - - - - 0 무자극
48시간 - - - - - 0 무자극
※ 피부상태 평가기준
- 0점 (-): 무자극
- 0.5점(±): 미자극(희미한 또는 가까스로 감지되는 가벼운 홍반)
- 1점(+): 경자극(경계가 뚜렷하거나 약한 홍반, 부종 및 구진)
- 2점(++): 중자극(뚜렷한 홍반, 구진 및 소수포)
- 3점(+++): 강자극
상기 표 7에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 아로니아 캘러스 추출물을 포함하는 화장료 조성물은 피부에 자극을 나타내지 않아 화장료 조성물로서 활용이 가능하다는 것을 확인할 수 있다.
실험예 8: 아로니아 캘러스 추출물을 함유하는 화장료 조성물의 표피 색소 침착 완화 효과 확인
본 발명의 아로니아 캘러스 추출물을 함유하는 화장료 조성물의 표피색소침착 완화 효과를 확인하기 위한 실험을 수행하였다.
본 효능 테스트는 시험 연구(pilot study)로 실험실에서 진행되었으며 피부진단기(Clreo-I)를 이용해 진행되었다. 시험 방법은 사내 직원 중 만 25세 이상 45세 이하의 성인 남녀로 미백 개선을 원하는 건강한 지원자 12명을 대상으로 하였다.
상기 실시예 8 및 9, 및 비교예 10의 크림을 2주간 매일 아침 저녁 피험자가 세안 및 토너로 피부결 정돈 후 안면부에 도포하여 피부에 흡수시켰다. 2주 사용 후 안면부의 색소침착지수를 평가하였으며, 미백효능(표피색소침착) 평가 결과는 표 8에 나타내었다.
시간 비교예 10 실시예 8 실시예 9
표피 완화율(%) 표피 완화율(%) 표피 완화율(%)
시험 전 17.9 - 17.9 - 17.9 -
1주 후 17.4 2.79 17.2 3.91 16.9 5.59
2주 후 17.5 2.23 16.8 6.15 16.2 9.50
상기 표 8에 나타낸 바와 같이, 비교예 10의 색소침착 완화 효과가 약 2% 정도로 미미한 것과 비교하여, 실시예 8 및 9의 표피의 색소침착 완화 효과는 6% 및 9% 이상으로 우수한 것을 확인하였다.
실험예 9: 아로니아 캘러스 추출물을 함유하는 화장료 조성물의 피부 보습 유지 효과 확인
본 발명의 아로니아 캘러스 추출물 함유 화장료 조성물의 보습효과를 확인하기 위한 실험을 수행하였다.
실험을 위한 화장료 조성물은 아래의 표 9의 조성을 혼합하여 로션 타입 화장료 조성물을 제조하였다. 표 9에서, 수치는 중량%를 의미한다.
성분명 배합목적 실시예
10		 실시예 11 비교예 11
정제수 용제 To 100 To 100 To 100
제조예 2의 아로니아 캘러스 추출물 기능성원료 0.1 2.0 -
나이아신아마이드 - - 2.0
다이소듐이디티에이 금속이온
봉쇄제		 0.02 0.02 0.02
글리세린 보습제 1.0 1.0 1.0
부틸렌글라이콜 1.0 1.0 1.0
소듐하이알루로네이트 1.0 1.0 1.0
메칠프로판디올 2.0 2.0 2.0
카보머 점증제 0.2 0.2 0.2
잔탄검 0.05 0.05 0.05
폴리아크릴레이트-13/ 폴리이소부텐/ 폴리소르베이트20/ 정제수/ 소르비탄이소스테아레이트 0.3 0.3 0.3
알지닌 중화제 0.22 0.22 0.22
폴리글리세릴-3메칠글루코오스디스테아레이트 유화제 1.0 1.0 1.0
피이지-100스테아레이트/ 글리세릴스테아레이트 0.5 0.5 0.5
세테아릴알코올 유화안정제 0.8 0.8 0.8
쉐어버터 0.2 0.2 0.2
사이클로메치콘/ 다이메치콘/비닐디메치콘크로스폴리머 1.0 1.0 1.0
하이드로제네이티드레시틴/ 정제수/ 글리세린/ 다이메치콘 첨가제 0.7 0.7 0.7
펜타에리스리틸테트라에칠헥사노에이트 피부유연화제 1.0 1.0 1.0
하이드로제네이티드폴리데센 1.0 1.0 1.0
세틸에칠헥사노에이트 피부유연화제 2.0 2.0 2.0
다이메칠콘 0.9 0.9 0.9
향료 향료 0.07 0.07 0.07
카프릴릴글라이콜/에칠헥실글리세린 보존제 0.4 0.4 0.4
만 25세 이상 45세 이하의 남녀를 대상으로 상기 실시예 10 및 11과 비교예 11의 로션을 피부에 도포한 30분 후, 8시간 후, 24시간 후 수분측정기(Corneometer)를 이용하여 측정 시점별 3회 반복 측정하여 평균치를 구하였다. 데이터 값은 12명에 대한 평균치로 나타내었다. 실내온도는 24℃, 상대습도는 30％였다. 그 결과를 아래의 표 10에 나타내었다.
도포군 피부 수분량
시험 전 30분 후 24시간 후 24시간 피부보습
유지율 (%)
비교예 11 64.5 112.5 69.6 8
실시예 10 64.5 132.1 78.3 21.4
실시예 11 64.5 129.8 85.2 32.1
상기 표 10에 나타난 결과와 같이, 비교예와 실시예의 로션을 도포한 실험군에서 초반에는 피부 수분 증가량이 비슷하였다.
그러나, 비교예 11의 경우 도포 24시간 후 피부 수분량 수치가 처음 도포 전의 수분량과 유사하게 돌아간 것에 비해, 실시예의 경우는 시험물질 도포를 중지하여도 피부보습이 지속적으로 유지되고 있었고 그 정도는 안토시아닌 생합성 증대 캘러스 추출물의 농도 의존적임을 알 수 있었다.
이상으로 본 발명의 내용의 특정부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (11)

  1. (a) 아로니아(Aronia Melanocarpa)의 절편을 배양하여 캘러스(callus)를 형성하는 단계; 및
    (b) 상기 아로니아 캘러스에 가시광선 및 초단파(VHF)를 조사하면서 배양하는 단계
    를 포함하는, 안토시아닌(anthocyanin) 함유량이 증대된 아로니아 캘러스의 제조방법.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 제 1 항에 있어서,
    상기 초단파(VHF)의 진동수가 30 내지 300MHz인 것을 특징으로 하는, 안토시아닌 함유량이 증대된 아로니아 캘러스의 제조방법.
  5. 제 1 항에 있어서,
    상기 (b) 단계를 48 내지 96시간 수행하는 것을 특징으로 하는, 안토시아닌 함유량이 증대된 아로니아 캘러스의 제조방법.
  6. 제 1 항에 있어서,
    상기 (a) 단계의 배양이 24 내지 28℃에서 1 내지 8주간 암배양하는 것임을 특징으로 하는, 안토시아닌 함유량이 증대된 아로니아 캘러스의 제조방법.
  7. 제 1 항에 있어서,
    상기 (a) 및 (b) 단계 중 하나 이상의 배양이 파이클로람(picloram) 및 6-벤질아미노퓨란(6-benzylaminopurane)을 포함하는 배지에서 수행되는 것을 특징으로 하는, 안토시아닌 함유량이 증대된 아로니아 캘러스의 제조방법.
  8. 제 1 항 및 제 4 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항의 방법으로 제조된 아로니아 캘러스, 또는 상기 아로니아 캘러스의 추출물을 유효성분으로 포함하는, 화장료 조성물.
  9. 제 8 항에 있어서,
    상기 화장료 조성물이 항산화, 피부 미백, 피부 재생, 표피색소 침착 완화 및 피부보습 효능을 갖는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
  10. 제 8 항에 있어서,
    상기 화장료 조성물이 상기 아로니아 캘러스 또는 아로니아 캘러스의 추출물을 0.001 내지 25중량% 포함하는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
  11. 제 8 항에 있어서,
    상기 화장료 조성물이 유액, 크림, 화장수, 에센스, 팩, 젤, 파우더, 메이크업 베이스, 파운데이션, 로션, 연고, 패치, 미용액, 클렌징폼, 클렌징크림, 클렌징워터, 바디로션, 바디크림, 바디오일, 바디에센스, 샴푸, 린스, 바디세정제, 비누, 염모제 및 분무제로 이루어진 군에서 선택된 제형을 갖는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
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