KR101947695B1 - 고삼 식물체 유래의 마키아인 대량 생산용 캘러스의 제조방법 및 상기 방법에 의해 제조된 마키아인 대량 생산용 캘러스 - Google Patents
고삼 식물체 유래의 마키아인 대량 생산용 캘러스의 제조방법 및 상기 방법에 의해 제조된 마키아인 대량 생산용 캘러스 Download PDFInfo
- Publication number
- KR101947695B1 KR101947695B1 KR1020170040161A KR20170040161A KR101947695B1 KR 101947695 B1 KR101947695 B1 KR 101947695B1 KR 1020170040161 A KR1020170040161 A KR 1020170040161A KR 20170040161 A KR20170040161 A KR 20170040161A KR 101947695 B1 KR101947695 B1 KR 101947695B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- callus
- derived
- mass production
- medium
- leaf
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 title claims abstract description 96
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 41
- HUKSJTUUSUGIDC-ZBEGNZNMSA-N (-)-maackiain Chemical compound O1C2=CC=3OCOC=3C=C2[C@H]2[C@@H]1C1=CC=C(O)C=C1OC2 HUKSJTUUSUGIDC-ZBEGNZNMSA-N 0.000 title claims description 14
- 241000246044 Sophora flavescens Species 0.000 title claims description 14
- XCDMHEXDCIXKLK-UHFFFAOYSA-N Anhydrosophorol Natural products O1C2=CC=3OCOC=3C=C2C2=C1C1=CC=C(O)C=C1OC2 XCDMHEXDCIXKLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 7
- YLZYAUCOYZKLMA-UHFFFAOYSA-N O-Methyl-maackiain Natural products O1C2=CC=3OCOC=3C=C2C2C1C1=CC=C(OC)C=C1OC2 YLZYAUCOYZKLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 7
- HUKSJTUUSUGIDC-UHFFFAOYSA-N Trifolirhizin-aglykon Natural products O1C2=CC=3OCOC=3C=C2C2C1C1=CC=C(O)C=C1OC2 HUKSJTUUSUGIDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 7
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims abstract description 25
- 241000208340 Araliaceae Species 0.000 claims abstract description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 20
- 206010026749 Mania Diseases 0.000 claims abstract description 6
- NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N N-benzyladenine Chemical compound N=1C=NC=2NC=NC=2C=1NCC1=CC=CC=C1 NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 37
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 30
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 21
- 239000005595 Picloram Substances 0.000 claims description 19
- NQQVFXUMIDALNH-UHFFFAOYSA-N picloram Chemical compound NC1=C(Cl)C(Cl)=NC(C(O)=O)=C1Cl NQQVFXUMIDALNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 8
- 239000012869 germination medium Substances 0.000 claims description 8
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 8
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 claims description 7
- 241000219784 Sophora Species 0.000 claims description 6
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 claims description 4
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 3
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 claims description 2
- 235000021110 pickles Nutrition 0.000 claims 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims 1
- 235000005035 Panax pseudoginseng ssp. pseudoginseng Nutrition 0.000 abstract description 12
- 235000003140 Panax quinquefolius Nutrition 0.000 abstract description 12
- 235000008434 ginseng Nutrition 0.000 abstract description 12
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- NZWOPGCLSHLLPA-UHFFFAOYSA-N methacholine Chemical compound C[N+](C)(C)CC(C)OC(C)=O NZWOPGCLSHLLPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229960002329 methacholine Drugs 0.000 description 7
- PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 1-naphthaleneacetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CC=CC2=C1 PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 229930191978 Gibberellin Natural products 0.000 description 5
- UQHKFADEQIVWID-UHFFFAOYSA-N cytokinin Natural products C1=NC=2C(NCC=C(CO)C)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(CO)O1 UQHKFADEQIVWID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000004062 cytokinin Substances 0.000 description 5
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 5
- IXORZMNAPKEEDV-UHFFFAOYSA-N gibberellic acid GA3 Natural products OC(=O)C1C2(C3)CC(=C)C3(O)CCC2C2(C=CC3O)C1C3(C)C(=O)O2 IXORZMNAPKEEDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000003448 gibberellin Substances 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930192334 Auxin Natural products 0.000 description 3
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 3
- FAIXYKHYOGVFKA-UHFFFAOYSA-N Kinetin Natural products N=1C=NC=2N=CNC=2C=1N(C)C1=CC=CO1 FAIXYKHYOGVFKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 3
- 239000002363 auxin Substances 0.000 description 3
- 208000001848 dysentery Diseases 0.000 description 3
- 239000003630 growth substance Substances 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N indole-3-acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CNC2=C1 SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QANMHLXAZMSUEX-UHFFFAOYSA-N kinetin Chemical compound N=1C=NC=2N=CNC=2C=1NCC1=CC=CO1 QANMHLXAZMSUEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960001669 kinetin Drugs 0.000 description 3
- 239000005631 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid Substances 0.000 description 2
- 239000005972 6-Benzyladenine Substances 0.000 description 2
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 description 2
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 2
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 2
- 241000907663 Siproeta stelenes Species 0.000 description 2
- 239000005708 Sodium hypochlorite Substances 0.000 description 2
- 239000011149 active material Substances 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 235000013527 bean curd Nutrition 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 2
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 2
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000401 methanolic extract Substances 0.000 description 2
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 2
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZTEYEFPSJPSRRA-NRFANRHFSA-N (2s)-2-(2,4-dihydroxyphenyl)-5,7-dihydroxy-6,8-bis(3-methylbut-2-enyl)-2,3-dihydrochromen-4-one Chemical compound C1([C@H]2OC3=C(CC=C(C)C)C(O)=C(C(=C3C(=O)C2)O)CC=C(C)C)=CC=C(O)C=C1O ZTEYEFPSJPSRRA-NRFANRHFSA-N 0.000 description 1
- OVSKIKFHRZPJSS-UHFFFAOYSA-N 2,4-D Chemical compound OC(=O)COC1=CC=C(Cl)C=C1Cl OVSKIKFHRZPJSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 206010015535 Euphoric mood Diseases 0.000 description 1
- 240000008397 Ganoderma lucidum Species 0.000 description 1
- 235000001637 Ganoderma lucidum Nutrition 0.000 description 1
- 208000012671 Gastrointestinal haemorrhages Diseases 0.000 description 1
- 206010021033 Hypomenorrhoea Diseases 0.000 description 1
- SUPRHWQIFJRUCQ-NYHFZMIOSA-N Kushenol F Natural products O=C1c2c(O)c(C[C@@H](C(=C)C)C/C=C(\C)/C)c(O)cc2O[C@H](c2c(O)cc(O)cc2)C1 SUPRHWQIFJRUCQ-NYHFZMIOSA-N 0.000 description 1
- 241000218378 Magnolia Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000237502 Ostreidae Species 0.000 description 1
- 208000006311 Pyoderma Diseases 0.000 description 1
- 241000220317 Rosa Species 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000592342 Tracheophyta Species 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 1
- 150000003797 alkaloid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 210000000576 arachnoid Anatomy 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000002743 euphoric effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 1
- 230000027950 fever generation Effects 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 208000030304 gastrointestinal bleeding Diseases 0.000 description 1
- 229940107131 ginseng root Drugs 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- XCIRMVJXNNMDAI-UHFFFAOYSA-N kushenol E Natural products CC(C)C=Cc1c(O)c(CC=C(C)C)c2OC(CC(=O)c2c1O)c3ccc(O)cc3O XCIRMVJXNNMDAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006870 ms-medium Substances 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- SUPRHWQIFJRUCQ-UHFFFAOYSA-N nor-kuraninone Natural products C1C(=O)C2=C(O)C(CC(CC=C(C)C)C(C)=C)=C(O)C=C2OC1C1=CC=C(O)C=C1O SUPRHWQIFJRUCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 235000020636 oyster Nutrition 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 238000004161 plant tissue culture Methods 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 239000012925 reference material Substances 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 230000007226 seed germination Effects 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000001195 ultra high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/005—Methods for micropropagation; Vegetative plant propagation using cell or tissue culture techniques
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01C—PLANTING; SOWING; FERTILISING
- A01C1/00—Apparatus, or methods of use thereof, for testing or treating seed, roots, or the like, prior to sowing or planting
- A01C1/08—Immunising seed
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/001—Culture apparatus for tissue culture
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/002—Culture media for tissue culture
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/0018—Culture media for cell or tissue culture
- C12N5/0025—Culture media for plant cell or plant tissue culture
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/10—Preparation or pretreatment of starting material
- A61K2236/11—Preparation or pretreatment of starting material involving culturing conditions, e.g. cultivation in the dark or under defined water stress
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/30—Hormones
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Botany (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Soil Sciences (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
본 발명은 고삼 식물체 유래의 마키아인 대량 생산용 캘러스의 제조방법 및 상기 방법에 의해 제조된 마키아인 대량 생산용 캘러스에 관한 것으로, 본 발명은 일반 노지에서 자라는 고삼에서 아주 극미량으로 얻어지는 마키아인을 기내 식물세포 캘러스 배양을 통하여 대량으로 생산이 가능하도록 마키아인 대량 생산용 캘러스를 선발하였다. 본 발명에서 선발된 캘러스는 마키아인 생산성이 자연상태의 고삼 뿌리에서보다 약 5.5배가 높은 것으로, 특이하게도 뿌리 유래가 아닌 잎 유래의 고삼 캘러스임을 확인하였다. 따라서, 본 발명의 고삼 캘러스를 이용하여 다양한 약리적 효과가 뛰어난 마키아인의 대량생산이 가능하므로, 관련 산업에 매우 유용하다.
Description
본 발명은 고삼 식물체 유래의 마키아인 대량 생산용 캘러스의 제조방법 및 상기 방법에 의해 제조된 마키아인 대량 생산용 캘러스에 관한 것이다.
고삼은 너삼, 도둑놈의 지팡이라고도 부르며 현화식물문, 목련강, 장미아강, 콩목, 콩과, 고삼속에 속하는 관속식물로서 중국, 일본, 러시아 극동부 및 우리나라의 산과 들에 비교적 흔하게 자라는 다년생초본이다. 전체에 노란색의 짧은 털이 있고 뿌리는 비대하게 자라며, 줄기는 곧게 서있고, 잎은 호생하며 깃꼴 겹잎이고, 꽃은 연노란색으로 총상화서를 이루며 피어난다. 개화기는 6~8월, 결실기는 9~10월이며, 약용으로 쓰이는 뿌리는 아주 쓴맛이 나며 성질은 차고 무독하다. 한방에서는 이뇨, 이질, 해열, 습진, 위출혈, 향균작용에 사용되어 왔고, 임상적으로는 습진, 피부화농증 등의 피부병에 사용하며, 세균성 이질, 장염에도 효과가 있다고 알려져 있다. 현재까지 알려진 고삼의 성분으로는 알칼로이드 3~4%, 플라보노이드 6~10%, 사포닌 등이 함유되어 있다고 알려져 있다.
또한, 자연상태의 삼 뿌리에 주로 존재하는 마키아인은 습진, 피부 화농증 등의 피부병, 세균성 이질, 장염뿐만 아니라 천식예방 또는 치료용으로 다양한 약리 효과가 알려져 있다. 그러나, 마키아인은 고삼 뿌리에 생체중 대비 약 0.00016% 의 약효성분을 함유하고 있어, 산업화의 큰 제약으로 작용하고 있으며 이를 해결하기 위한 방안이 절실하다.
식물의 우수한 천연 활성소재를 발굴하여 기업화로 넘어가는 과정에서 소재의 대량 확보가 가장 중요한 관건인 경우가 많다. 예를 들어, 성장이 더딘 목본류, 시료 확보가 제한적인 목본류의 특정 기관 (예, 꽃 또는 뿌리), 몸체 (바이오매스)가 작은 초본류, 종자 확보나 발아가 어려운 소재, 재배시에 유효 성분이 달라지는 경우, 끝으로 활성은 매우 뛰어나나 체내 함량이 매우 적은 경우와 같이 소재의 대량 확보가 어려운 경우 이를 해결할 근본적인 방법이 필요하다. 이에 대한 근본적인 해결법으로 식물조직·세포배양 기술이 유일한 방법으로 주목받고 있다. 식물조직·세포배양 기반 천연 활성소재 대량생산은 자연에 서식하는 식물자원을 직접 채취·활용하는 것이 아니라 생물반응기내 식물전체, 식물조직(부정근, 모상근) 혹은 캘러스 유래 식물세포배양을 통하여 무한 증식, 생산하기 때문에 식물자원 고갈 및 환경파괴로부터 자유로울 수 있으며 보다 적극적인 자연환경 보존 수단으로 활용 가능하기 때문이다.
한편, 한국등록특허 제0637342호에서는 '천연 화장품 개발을 위한 캘러스의 용도'가 개시되어 있고, 한국공개특허 제2010-0038633호에서는 '고삼 추출물, 고삼 분획물, 이로부터 분리한 테로카판계 및 플라보노이드계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물'이 개시되어 있으나, 본 발명에서와 같이, '고삼 식물체 유래의 마키아인 대량 생산용 캘러스의 제조방법 및 상기 방법에 의해 제조된 마키아인 대량 생산용 캘러스'에 대해서는 밝혀진 바가 전혀 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명에서는 고삼 식물체의 주로 뿌리에 극미량으로 들어있는 천연물 성분인 마키아인을 식물세포 배양에 의해 대량생산하기 위해, 고삼 종자를 무균 기내 발아시켜 생육된 식물체의 잎, 줄기, 및 뿌리로부터 우수한 캘러스 세포를 유도하는 법, 옥신의 함량이 사이토키닌의 함량에 비하여 상대적으로 높은 농도를 갖는 고삼캘러스 세포배양용 고체배지를 사용하여 백색 혹은 연노란의 캘러스 세포를 유도하여 균질화된 상태로 만드는 계대배양 과정을 거친 후, 마키아인 분석을 수행하여 가장 높은 함량을 보이는 캘러스를 최종 선발, 캘러스의 퇴화없이 지속적으로 유지배양하는 과정을 구측하였다. 즉, 일반 노지에서 자라는 고삼에서 아주 극미량으로 얻어지는 마키아인을 기내 식물세포 캘러스 배양을 통하여 다량으로 생산하는 방법에 관한 것이다.
특히, 본 발명을 통해 마키아인의 생산성을 증가시키기 위한 시스템으로, 고삼으로부터 마키아인 생산성이 특히 높은 캘러스를 선발하였는데, 상기 선발된 캘러스는 0.5 ㎎/ℓ BA + 2.0 ㎎/ℓ 피클로람이 포함된 캘러스 유도배지에서 선발된 것으로, 마키아인 생산성이 자연상태의 고삼 뿌리(마키아인 함량 : 983 ㎍/g 추출물, 145ug/g 건중량)보다 기내 식물세포 캘러스(마키아인 함량 : 5,370 ㎍/g 추출물, 1580ug/g 건중량)에서 건중량 기준으로는 약 10배가 높았고, 추출물 기준으로는 약 5.5배가 높았으며, 특이하게도 뿌리 유래가 아닌 잎 유래의 고삼 캘러스(KCTC18561P)임을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은
(a) 고삼(Sophora flavescens) 식물체의 종자를 멸균시킨 후 발아 배지에서 발아시켜, 줄기, 잎 및 뿌리를 유도하는 단계;
(b) 상기 유도된 줄기, 잎 및 뿌리 절편체를 생장조절물질이 첨가된 캘러스 유도 배지에서 배양하여 줄기, 잎 및 뿌리 유래의 캘러스를 각각 유도 및 증식시키는 단계;
(c) 상기 증식된 줄기, 잎 및 뿌리 유래의 캘러스를 캘러스 증식 배지에 계대배양하여 각각 증식시키는 단계; 및
(d) 상기 계대배양하여 증식시킨 줄기, 잎 및 뿌리 유래의 캘러스를 대상으로 마키아인 함량을 각각 측정하여 마키아인 생산성이 우수한 캘러스를 선발하는 단계를 포함하는 고삼 식물체 유래의 마키아인(maackiain) 대량 생산용 캘러스의 제조방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 방법에 의해 제조된 고삼(Sophora flavescens) 식물체 유래의 마키아인 대량 생산용 캘러스를 제공한다.
또한, 본 발명은 고삼 식물체 유래의 마키아인 대량 생산용 캘러스(KCTC18561P)를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 고삼(Sophora flavescens) 식물체 유래의 마키아인 대량 생산용 캘러스를 배양하여 마키아인을 생산하는 단계를 포함하는 마키아인의 생산 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 0.4~0.6㎎/ℓ 벤질아데닌(BA) 및 1.8~2.2㎎/ℓ 피클로람(picloram)이 첨가된 MS 기본 배지를 유효성분으로 함유하는 고삼(Sophora flavescens) 식물체 유래의 마키아인 대량 생산용 캘러스 유도 및 증식용 배지 조성물을 제공한다.
본 발명은 일반 노지에서 자라는 고삼에서 아주 극미량으로 얻어지는 마키아인을 기내 식물세포 캘러스 배양을 통하여 대량으로 생산이 가능하도록 마키아인 대량 생산용 캘러스를 선발하였다. 본 발명에서 선발된 캘러스는 마키아인 생산성이 자연상태의 고삼 뿌리에서보다 약 5.5배가 높은 것으로, 특이하게도 뿌리 유래가 아닌 잎 유래의 고삼 캘러스임을 확인하였다. 따라서, 본 발명의 고삼 캘러스를 이용하여 다양한 약리적 효과가 뛰어난 마키아인의 대량생산이 가능하므로, 관련 산업에 매우 유용하다.
도 1은 마키아인(maackiain)의 화학구조를 나타낸다.
도 2는 멸균시킨 고삼(Sophora flavescens) 식물체의 종자를 발아 배지에서 발아시켜, 줄기, 잎 및 뿌리를 유도하는 단계를 나타낸 것이다. (a) 발아처리 후 3일, (b) 발아처리 후 5일, (c) 발아처리 후 7일, (d) 발아처리 후 10일, (e) 발아처리 후 14일, (f) 기내배양 상태로 유지 중인 식물체.
도 3은 고삼 식물체 조직 유래별 캘러스의 종류를 나타낸다. A: 덩어리를 형성하며 증식, 물기를 많이 함유, B: 노란색을 넘어 연두색으로 변하며 작은 덩어리를 이루며 증식, C: 쉽게 부스러지기 쉬운 보푸라기 형태로 증식, D: 노란색을 띠며 알갱이로 분리되기 쉬운 캘러스 형태.
도 4는 마키아인 표준물질의 HPLC 분석 결과를 나타낸다. Maac; maackiain, Kurari; kurarinone, Kurari-OCH3; methoxy kurarinone, Kush F; kushenol F, Kush E; Kushenol E.
도 5는 본 발명을 통해 선발된 고삼 잎 조직 유래의 마키아인 대량 생산용 캘러스를 나타낸다(KCTC18561P)
도 2는 멸균시킨 고삼(Sophora flavescens) 식물체의 종자를 발아 배지에서 발아시켜, 줄기, 잎 및 뿌리를 유도하는 단계를 나타낸 것이다. (a) 발아처리 후 3일, (b) 발아처리 후 5일, (c) 발아처리 후 7일, (d) 발아처리 후 10일, (e) 발아처리 후 14일, (f) 기내배양 상태로 유지 중인 식물체.
도 3은 고삼 식물체 조직 유래별 캘러스의 종류를 나타낸다. A: 덩어리를 형성하며 증식, 물기를 많이 함유, B: 노란색을 넘어 연두색으로 변하며 작은 덩어리를 이루며 증식, C: 쉽게 부스러지기 쉬운 보푸라기 형태로 증식, D: 노란색을 띠며 알갱이로 분리되기 쉬운 캘러스 형태.
도 4는 마키아인 표준물질의 HPLC 분석 결과를 나타낸다. Maac; maackiain, Kurari; kurarinone, Kurari-OCH3; methoxy kurarinone, Kush F; kushenol F, Kush E; Kushenol E.
도 5는 본 발명을 통해 선발된 고삼 잎 조직 유래의 마키아인 대량 생산용 캘러스를 나타낸다(KCTC18561P)
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은
(a) 고삼(Sophora flavescens) 식물체의 종자를 멸균시킨 후 발아 배지에서 발아시켜, 줄기, 잎 및 뿌리를 유도하는 단계;
(b) 상기 유도된 줄기, 잎 및 뿌리 절편체를 생장조절물질이 첨가된 캘러스 유도 배지에서 배양하여 줄기, 잎 및 뿌리 유래의 캘러스를 각각 유도 및 증식시키는 단계;
(c) 상기 증식된 줄기, 잎 및 뿌리 유래의 캘러스를 캘러스 증식 배지에 계대배양하여 각각 증식시키는 단계; 및
(d) 상기 계대배양하여 증식시킨 줄기, 잎 및 뿌리 유래의 캘러스를 대상으로 마키아인 함량을 각각 측정하여 마키아인 생산성이 우수한 캘러스를 선발하는 단계를 포함하는 고삼 식물체 유래의 마키아인(maackiain) 대량 생산용 캘러스의 제조방법을 제공한다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 방법에서, 상기 (b) 단계의 생장조절물질은 키네틴, BA (6-Benzyladenine) 또는 TDZ (Tidiazuron)인 사이토키닌류와 2,4-D (2,4-Dichlorophenoxyacetic acid), 피클로람 또는 NAA (alpha-Naphthaleneacetic acid)인 옥신류일 수 있고, 바람직하게는 벤질아데닌(BA) 및 피클로람(picloram)일 수 있고, 바람직하게는, 0.4~0.6㎎/ℓ 벤질아데닌(BA) 및 1.8~2.2㎎/ℓ 피클로람(picloram)일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 방법에서, 상기 (d) 단계의 마키아인 생산성이 우수한 캘러스는 잎, 뿌리 또는 줄기 유래일 수 있으며, 바람직하게는 잎 유래 일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 방법에서, 상기 (a) 단계의 발아 배지는 MS 기본 배지에 0.8~1.2mg/L 지베렐린을 첨가하여 제조된 것일 수 있고, 바람직하게는, MS 기본 배지에 1.0mg/L 지베렐린을 첨가하여 제조된 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 방법에서, 상기 (b) 단계의 캘러스 유도 배지 및 (c) 단계의 캘러스 증식 배지는 MS 기본 배지에 0.4~0.6㎎/ℓ 벤질아데닌(BA) 및 1.8~2.2㎎/ℓ 피클로람(picloram)를 첨가하여 제조된 것일 수 있고, 바람직하게는, MS 기본 배지에 0.5㎎/ℓ 벤질아데닌(BA) 및 2㎎/ℓ 피클로람(picloram)를 첨가하여 제조된 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 방법은, 바람직하게는
(a) 고삼(Sophora flavescens) 식물체의 종자를 멸균시킨 후, MS 기본배지에 0.8~1.2mg/L 지베렐린을 첨가하여 제조된 발아 배지에서 발아시켜, 줄기, 잎 및 뿌리를 유도하는 단계;
(b) 상기 유도된 줄기, 잎 및 뿌리 절편체를 MS 기본 배지에 0.4~0.6㎎/ℓ 벤질아데닌(BA) 및 1.8~2.2㎎/ℓ 피클로람(picloram)를 첨가하여 제조된 캘러스 유도 배지에서 24~26℃, 암상태로 배양하여 줄기, 잎 및 뿌리 유래의 캘러스를 각각 유도 및 증식시키는 단계;
(c) 상기 증식된 줄기, 잎 및 뿌리 유래의 캘러스를 MS 기본 배지에 0.4~0.6㎎/ℓ 벤질아데닌(BA) 및 1.8~2.2㎎/ℓ 피클로람(picloram)를 첨가하여 제조된 캘러스 증식 배지에 각각 계대배양하여 증식시키는 단계; 및
(d) 상기 계대배양하여 증식시킨 줄기, 잎 및 뿌리 유래의 캘러스를 대상으로 마키아인 함량을 각각 측정하여 마키아인 생산성이 우수한 캘러스를 선발하는 단계를 포함할 수 있으며,
더욱 바람직하게는
(a) 고삼(Sophora flavescens) 식물체의 종자를 65~75%(v/v) 에탄올로 표면 소독 후 8~10%(v/v) 소듐 히포클로라이드로 멸균시킨 후, MS 기본배지에 0.8~1.2mg/L 지베렐린을 첨가하여 제조된 발아 배지에서 22~26시간 침지한 후 MS 기본배지로 옮겨 24~26℃, 장일 광주기 조건(15~17 시간 명/ 7~9 시간 암, 40~50μmol photons m-2s-1 백색광)에서 발아시키고, 줄기, 잎 및 뿌리를 유도하는 단계;
(b) 상기 유도된 줄기, 잎 및 뿌리 절편체를 MS 기본 배지에 0.4~0.6㎎/ℓ 벤질아데닌(BA) 및 1.8~2.2㎎/ℓ 피클로람(picloram)를 첨가하여 제조된 캘러스 유도 배지에서 24~26℃, 암상태로 배양하여 줄기, 잎 및 뿌리 유래의 캘러스를 각각 유도 및 증식시키는 단계;
(c) 상기 증식된 줄기, 잎 및 뿌리 유래의 캘러스를 MS 기본 배지에 0.4~0.6㎎/ℓ 벤질아데닌(BA) 및 1.8~2.2㎎/ℓ 피클로람(picloram)를 첨가하여 제조된 캘러스 증식 배지에 각각 계대배양하여 증식시키는 단계; 및
(d) 상기 계대배양하여 증식시킨 줄기, 잎 및 뿌리 유래의 캘러스를 대상으로 마키아인 함량을 각각 측정하여 마키아인 생산성이 우수한 캘러스를 선발하는 단계를 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 본 발명은 상기 방법에 의해 제조된 고삼(Sophora flavescens) 식물체 유래의 마키아인 대량 생산용 캘러스를 제공한다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 상기 캘러스는 기탁번호가 KCTC18561P인 것으로, 한국생명공학연구원에 2017년 03월23일에 기탁하였다.
또한, 본 발명은 고삼 식물체 유래의 마키아인 대량 생산용 캘러스(KCTC18561P)를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 고삼(Sophora flavescens) 식물체 유래의 마키아인 대량 생산용 캘러스를 배양하여 마키아인을 생산하는 단계를 포함하는 마키아인의 생산 방법을 제공한다. 본 발명을 통해 선발된 마키아인 대량 생산용 캘러스를 배양하는 방법은 당업계에 일반적으로 이용된 캘러스 배양하는 방법으로, 특별한 방법에 제한되지 않는다.
또한, 본 발명은 0.4~0.6㎎/ℓ 벤질아데닌(BA) 및 1.8~2.2㎎/ℓ 피클로람(picloram)이 첨가된 MS 기본 배지를 유효성분으로 함유하는 고삼(Sophora flavescens) 식물체 유래의 마키아인 대량 생산용 캘러스 유도 및 증식용 배지 조성물을 제공한다. 본 발명의 고삼 식물체 유래의 마키아인 대량 생산용 캘러스 유도 및 증식용 배지 조성물은 0.4~0.6㎎/ℓ 벤질아데닌(BA) 및 1.8~2.2㎎/ℓ 피클로람(picloram)이 첨가된 MS 기본 배지를 유효성분으로 함유하는 것으로, 마키아인을 대량생산하는 고삼 식물체 유래의 캘러스를 유도 및 증식하는데 효과적이다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예
1.
고삼
(
Sophora
flavescens
Aiton
) 종자 발아 및 기내 배양
고삼 종자를 70% 에탄올로 표면소독하고 멸균수로 1회 세척하였다. 세척한 종자를 10% 소듐 히포클로라이드로 멸균시킨 다음 멸균수로 3회 세척하고, 멸균페이퍼에서 건조시켰다. 건조시킨 종자는 MS 기본 배지(MS 염, 80~120mg/L 미오-이노시톨, 비타민 + 3% 수크로스 + 0.8% 아가)에 GA (지베렐린) 1mg/L을 첨가한 발아 배지에 24시간 침지한 후 MS 기본배지로 계대배양하여 25℃, 장일의 광주기(16 h 명/8 h 암, 45μmol photons m-2s-1 백색광) 배양실에서 발아를 유도하였다. 발아를 유도한지 3일 후에 싹이 나기 시작하였고, 10일경부터 뿌리가 나기 시작하여 2주일 후에는 잎, 줄기, 및 뿌리가 완전한 개체로 성장하였다. 잎과 뿌리가 다 나온 종자는 MS 기본배지로 계대배양하여 캘러스 유도를 위한 실험 재료로 생육시켰다.
실시예
2. 기내 배양 식물체로부터
고삼
캘러스
유도
앞 실험의 결과로 얻어진 고삼 기내배양 식물체를 발아 후 약 2달 생육시킨 후 잎, 줄기, 뿌리를 충분히 확보하였다. 확보된 식물체를 MS 기본 배지와 MS 기본배지에 사이토키닌류인 키네틴, BA (6-Benzyladenine), TDZ (Tidiazuron)와 옥신류인 2,4-D (2,4-Dichlorophenoxyacetic acid), 피클로람, NAA (alpha-Naphthaleneacetic acid)를 농도별로 조합하여 첨가한 배지를 포함하여 총 100개 조합의 캘러스 유도 배지(표 1)에 잎, 줄기, 뿌리의 각 절편을 잘라 치상하여 25℃, 암상태의 배양실에서 캘러스를 유도하였다. 표 1에서, 옥신류는 각각 0.2㎎/ℓ, 1.0㎎/ℓ, 2.0㎎/ℓ의 농도를, 사이토키닌류는 각각 0.02㎎/ℓ, 0.2㎎/ℓ, 1.0㎎/ℓ의 농도를 사용하였다.
각 조직별 치상 후 2~3주 후부터 캘러스가 생성되기 시작하였고, 치상 5주 후에 치상했던 동일 배지에 계대배양 해주어 캘러스를 증식하였고, 각 배지별 캘러스 유도율을 조사하였다. 각 조직별 계대배양 후 2~3주부터 캘러스만 떼어 동일 배지에 계대해주었다. 각 조직별로 유도된 캘러스들은 4주 간격으로 총 3개월 동안 동일 배지에 계대배양하며 캘러스를 증식시켜 주었다. 캘러스 증식 과정에서 캘러스의 증식여부, 상태, 생장 속도, 형태 등을 고려하여 HPLC 분석을 위한 각 조직별 최종 캘러스 라인을 선별하였다.
실시예
3. 기내에서의
고삼
캘러스
유도 결과 분석
고삼 기내식물체를 바탕으로 잎, 줄기, 뿌리의 절편을 각각 15~18개씩 캘러스 유도 배지에 치상하여 25℃, 암배양하여 유도하였다. 앞에서 설명했듯이 2~3주차부터 캘러스가 유도되기 시작하였으며, 5주차에 동일 배지로 계대배양 해주어 캘러스를 유도하였다. 그 후로 4주 간격으로 동일 배지에 계대배양 해주며 캘러스를 증식시켜 주었다. 그 결과, 선발된 캘러스의 특징은 도 3과 같다(도면에 대한 설명 참고).
위의 고삼 캘러스 유도 결과로 보아 조직별 유도에서는 전체적으로 줄기(stem)와 뿌리(root)에서 잘 유도되었고, 잎(leaf)에서는 캘러스 유도가 잘되지 않았다. 호르몬에서는 사이토키닌(cytokinin)류에서 캘러스 유도에 좋은 호르몬으로는 TDZ(Tidiazuron)이 포함된 캘러스 유도배지에서 가장 잘 유도되었고, 그 다음으로 BA, 키네틴(Kinetin) 순서로 유도가 좋았다. 옥신(Auxin)류에서는 피클로람(Picloram)과 NAA가 캘러스 유도에 좋았고 그 다음으로 2,4-D가 좋았다. 종합적인 캘러스 유도 조합으로 보았을 때, TDZ(Tidiazuron) + 피클로람 조합과 TDZ + NAA 조합들의 배지에서 캘러스 유도가 왕성하게 이루어진 것을 확인할 수 있었다. 각 조직별 계대배양 후 2~3주부터 캘러스만 떼어 동일 배지에 계대하여 차년도 실험의 기본 재료로 사용하고자 하였다.
실시예
4.
HPLC
에 의한
마키아인
분석 결과
HPLC 분석은 다음과 같이 수행하였다. 각 시료의 건조시료 중량 1.25mg/ml의 농도로 용매(메탄올)를 가하고, 상온에서 초음파 추출기로 20분 동안 추출하였으며, 총 3회 반복하여 추출액을 합쳤다. 분석용 추출시료의 농도는 메탄올 추출액을 합하여 농축하고 다시 알콜을 가하여 20mg/ml 농도로 맞추고 분석시 5㎕씩 주입하였다. UHPLC, Waters Acquity UPLC; Column, Acquity UPLC BEH C18 1.7um 2.1*100mm; 용매, 아세토나이트릴 (CAN) (0.1% 포름산) + H2O (0.1% FA); 유량, 0.4ml/min; 검출, 254nm; 주입량, 5 ㎕.
야생상태에서 자란 고삼의 뿌리에서 얻어진 마키아인 함량(추출물 기준)은 983 ㎍/g, 기내배양상태에서 자란 고삼뿌리 마키아인 742 ㎍/g인 반면, 본 실험의 각기 다른 식물생장조절제 처리를 통하여 얻은 캘러스에서 확보한 마키아인 함량은 가장 높은 것이 약 5.5배의 증가를 가져왔다. L58 (BA 0.5 mg/l & P 2.0 mg/l): 5370 ㎍/g, S55 (BA 0.1mg/l & P 2.0mg/l): 3334 ㎍/g, S88 (TDZ 0.5mg/l & P2.0 mg/l): 2076 ㎍/g, S18 (KI 0.0 mg/l & P 1.0 mg/l) : 2951 ㎍/g, 그리고 R76 (TDZ 0.5 mg/l & 2,4-D 0.2 mg/l): 3072 ㎍/g의 결과를 보였다(표 2).
고삼 식물체의 뿌리에서 추출한 마키아인은 재료의 배양환경 또는 유래(origin)에 큰 영향을 받지 않고 큰 차이가 없음을 알 수 있었다. 매우 높은 함량을 보이는 네 종류의 캘러스를 확보하였으며, 이들 중 가장 높은 함량을 보인 처리구는 흥미롭게도 일반적으로 예상 가능한 뿌리 유래의 캘러스가 아닌 0.4~0.6㎎/ℓ 벤질아데닌(BA) 및 1.8~2.2㎎/ℓ 피클로람(picloram) 조건에서 유도된 잎 유래의 캘러스였다(KCTC18561P).
Claims (8)
- (a) 고삼(Sophora flavescens) 식물체의 종자를 멸균시킨 후 발아 배지에서 발아시켜, 줄기, 잎 및 뿌리를 유도하는 단계;
(b) 상기 유도된 잎 절편체를 MS 기본 배지에 0.4~0.6㎎/ℓ 벤질아데닌(BA) 및 1.8~2.2㎎/ℓ 피클로람(picloram)이 첨가된 캘러스 유도 배지에서 배양하여 잎 유래의 캘러스를 각각 유도 및 증식시키는 단계;
(c) 상기 증식된 잎 유래의 캘러스를 MS 기본 배지에 0.4~0.6㎎/ℓ 벤질아데닌 및 1.8~2.2㎎/ℓ 피클로람이 첨가된 캘러스 증식 배지에 계대배양하여 각각 증식시키는 단계; 및
(d) 상기 계대배양하여 증식시킨 잎 유래의 캘러스를 대상으로 마키아인 함량을 각각 측정하여 마키아인 생산성이 우수한 캘러스를 선발하는 단계를 포함하는 고삼 식물체 유래의 마키아인(maackiain) 대량 생산용 캘러스의 제조방법. - 삭제
- 삭제
- 삭제
- 제1항의 방법에 의해 제조된 고삼(Sophora flavescens) 식물체 잎 유래의 마키아인 대량 생산용 캘러스.
- 기탁번호가 KCTC18561P인 고삼 식물체 잎 유래의 마키아인 대량 생산용 캘러스.
- 제5항 또는 제6항의 고삼(Sophora flavescens) 식물체 잎 유래의 마키아인 대량 생산용 캘러스를 배양하여 마키아인을 생산하는 단계를 포함하는 마키아인의 생산 방법.
- 0.4~0.6㎎/ℓ의 벤질아데닌(BA) 및 1.8~2.2㎎/ℓ의 피클로람(picloram)이 첨가된 MS 기본 배지를 유효성분으로 함유하는 고삼(Sophora flavescens) 식물체 잎 유래의 마키아인 대량 생산용 캘러스 유도 및 증식용 배지 조성물.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020170040161A KR101947695B1 (ko) | 2017-03-29 | 2017-03-29 | 고삼 식물체 유래의 마키아인 대량 생산용 캘러스의 제조방법 및 상기 방법에 의해 제조된 마키아인 대량 생산용 캘러스 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020170040161A KR101947695B1 (ko) | 2017-03-29 | 2017-03-29 | 고삼 식물체 유래의 마키아인 대량 생산용 캘러스의 제조방법 및 상기 방법에 의해 제조된 마키아인 대량 생산용 캘러스 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20180110508A KR20180110508A (ko) | 2018-10-10 |
| KR101947695B1 true KR101947695B1 (ko) | 2019-02-13 |
Family
ID=63876022
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020170040161A Active KR101947695B1 (ko) | 2017-03-29 | 2017-03-29 | 고삼 식물체 유래의 마키아인 대량 생산용 캘러스의 제조방법 및 상기 방법에 의해 제조된 마키아인 대량 생산용 캘러스 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR101947695B1 (ko) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR102202801B1 (ko) * | 2018-11-21 | 2021-01-15 | 주식회사 리더스코스메틱 | 안토시아닌의 함유량이 증대된 아로니아 캘러스 및 이를 함유하는 화장료 조성물 |
| CN110432148A (zh) * | 2019-09-03 | 2019-11-12 | 南通大学 | 延长胡萝卜愈伤组织保存期的方法 |
-
2017
- 2017-03-29 KR KR1020170040161A patent/KR101947695B1/ko active Active
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| AKIRA YAGI 외 3명, Production of t-Maackiai nGlucoside sin Callu sTissu eof Sophora Flavescens, 1992년 발간, 46(4), 298-301* |
| Berk Benlioğlu 외 3명, Effect of growth regulators on tissue culture parameters in rice, Journal of Crop Breeding and Genetics, 2015년 발간, pp.43-46* |
| D.L. Zhao 외 3명, In vitro Micropropagation of a Medicinal Plant Species Sophora flavescens, 2003년 발간, Volume 47, Issue 1, pp.117-120* |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20180110508A (ko) | 2018-10-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Karuppusamy | A review on trends in production of secondary metabolites from higher plants by in vitro tissue, organ and cell cultures | |
| Sidhu | In vitro micropropagation of medicinal plants by tissue culture | |
| Tripathi et al. | Plant tissue culture technology: Sustainable option for mining high value pharmaceutical compounds | |
| FILOVÁ | Production of secondary metabolities in plant tissue cultures. | |
| Shohael et al. | Application of bioreactor system for large-scale production of Eleutherococcus sessiliflorus somatic embryos in an air-lift bioreactor and production of eleutherosides | |
| Tasheva et al. | Role of biotechnology for protection of endangered medicinal plants | |
| Jang et al. | Production of biomass and bioactive compounds from shoot cultures of Rosa rugosa using a bioreactor culture system | |
| Nakasha et al. | Induction, subculture cycle, and regeneration of callus in safed musli (Chlorophytum borivilianum) using different types of phytohormones | |
| Verma et al. | In vitro mass multiplication of Acorus calamus L.—an endangered medicinal plant | |
| Pandey et al. | In vitro propagation of Aconitum balfourii Stapf.: an important aconite of the Himalayan alpines | |
| Nikam et al. | Multiple shoot regeneration and alkaloid cerpegin accumulation in callus culture of Ceropegia juncea Roxb. | |
| Tsay et al. | Tissue culture technology of Chinese medicinal plant resources in Taiwan and their sustainable utilization | |
| Jaiswal et al. | Micropropagation and in vitro elicitation of licorice (Glycyrrhiza spp.) | |
| Krishnan et al. | In vitro mass multiplication and estimation of camptothecin (CPT) in Ophiorrhiza mungos L. var. angustifolia (Thw.) Hook. f. | |
| KR101947695B1 (ko) | 고삼 식물체 유래의 마키아인 대량 생산용 캘러스의 제조방법 및 상기 방법에 의해 제조된 마키아인 대량 생산용 캘러스 | |
| Al-Ajlouni et al. | In vitro propagation, callus induction, and evaluation of active compounds on Ruta graveolens | |
| Choi | Panax ginseng CA Meyer: micropropagation and the in vitro production of saponins | |
| WO2007107803A2 (en) | Process and modified media for preparing callus- and cell suspension cultures of hypericum perforatum l. | |
| CN112293250B (zh) | 一种甘松愈伤组织细胞的培养方法 | |
| Bathoju et al. | Production of medicinally important secondary metabolites (stigmasterol and hecogenin) from root cultures of Chlorophytum borivilianum (Safed musli) | |
| Aileni et al. | Woodfordia fruticosa (L.) Kurz: in vitro biotechnological interventions and perspectives | |
| KR102236425B1 (ko) | 헐떡이풀 식물체 유래의 티아렐릭산 대량 생산용 캘러스의 제조방법 및 상기 방법에 의해 제조된 캘러스 | |
| Uikey et al. | Secondary metabolite production of reserpine and ajmalicine in Rauvolfia serpentina (L.) Benth. through callus and cell suspension culture | |
| Mallikadevi et al. | In vitro regeneration of the medicinal plant, Plumbago zeylanica L. with reference to a unique population in Maruthamalai, the western ghats, India | |
| Rangaraju et al. | Standardization of various factors for production of adventitious roots in selected varieties of Withania somnifera and estimation of total withanolides by High Performance Liquid Chromatography |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| PA0109 | Patent application |
Patent event code: PA01091R01D Comment text: Patent Application Patent event date: 20170329 |
|
| PA0201 | Request for examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| PE0902 | Notice of grounds for rejection |
Comment text: Notification of reason for refusal Patent event date: 20180719 Patent event code: PE09021S01D |
|
| PG1501 | Laying open of application | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| PE0701 | Decision of registration |
Patent event code: PE07011S01D Comment text: Decision to Grant Registration Patent event date: 20190129 |
|
| GRNT | Written decision to grant | ||
| PR0701 | Registration of establishment |
Comment text: Registration of Establishment Patent event date: 20190207 Patent event code: PR07011E01D |
|
| PR1002 | Payment of registration fee |
Payment date: 20190208 End annual number: 3 Start annual number: 1 |
|
| PG1601 | Publication of registration | ||
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20220104 Start annual number: 4 End annual number: 4 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20240108 Start annual number: 6 End annual number: 6 |