KR20210004672A - 식물 캘러스 고압 균질 파쇄물을 포함하는 외용제용 조성물 및 이의 제조 방법 - Google Patents

식물 캘러스 고압 균질 파쇄물을 포함하는 외용제용 조성물 및 이의 제조 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 사과 캘러스, 구기자 캘러스, 포도 캘러스 및 이들로부터 유도된 체세포배로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상인 식물 캘러스의 200 bar 내지 2000 bar 범위 고압 균질 파쇄물을 포함하는 것을 특징으로 하는 외용제용 조성물 및 이의 제조 방법에 관한 것이다. 이를 통해, 본 발명은 종래의 식물 캘러스 추출물과 비교하여 유효 성분의 피부 침투력 및 피부 흡수력이 현저하게 향상되고, 피부 보습능, 피부 주름 예방능, 피부 주름 개선능, 피부 미백능, 피부 탄력 향상능 및 피부 톤 개선능이 우수하며, 인체에 유해한 추출 용매의 사용을 생략하면서도, 유효 성분의 함량이 높고, 유효 성분의 피부 침투력 및 피부 흡수력이 우수하며, 유효 성분에 대한 보존력 및 안정성이 우수한 식물 캘러스 고압 균질 파쇄물을 포함하는 외용제용 조성물 및 이의 제조 방법을 제공한다.

Description

식물 캘러스 고압 균질 파쇄물을 포함하는 외용제용 조성물 및 이의 제조 방법{EXTERNAL COMPOSITION INCLUDING HIGH PRESSURE HOMOGENIZING EXTRACT OF PLANT AND MANUFACTURING METHOD FOR THE SAME}
본 발명은 식물 캘러스 고압 균질 파쇄물을 포함하는 외용제용 조성물 및 이의 제조 방법에 관한 것이다.
캘러스는 일반적으로, 식물의 분화되지 않은 부정형의 유세포 덩어리를 의미한다. 이러한 캘러스는 식물 생장 조절 물질 등의 처리를 통해 전체 식물로 분화될 수 있는 전형성능을 가지므로 식물 줄기 세포로도 불리우고 있다. 최근에는 식물체 훼손 없이 조직 배양 기술을 통해 캘러스 세포를 대량 배양하여 다양한 식물 유래의 대사 산물을 생산할 수 있으므로 캘러스 배양은 산업적으로 큰 이용 가치를 가진다.
캘러스는 식물 유래의 세포로, 인체 내에서 분해되지 않는 셀룰로오스, 펙틴, 리그닌 등으로 형성된 세포벽으로 감싸져 있다. 때문에, 캘러스 내의 대사 산물을 유효 성분으로서 직접 이용하는 것은 쉽지 않다. 캘러스를 분쇄하거나 마쇄하더라도 일부 세포벽의 파괴만이 일어날 뿐, 여전히 대부분의 유효 성분은 세포벽 내에 존재하므로, 효율적으로 이용하기 어렵다.
더욱이, 종래의 캘러스 추출물은 목적 성분에 대한 용해성이 높은 유기 용매를 이용하여 캘러스로부터 유효 성분을 분획하는 방식을 이용하는데, 이러한 방식으로는 유효 성분을 고효율로 추출하는 것이 쉽지 않다. 이에 따라, 종래의 캘러스 추출물 제조 방법은 일정 정도의 유효 성분 함량을 달성하기 위해, 분획 및 농축을 반복하는 과정에서 피부에 적합하지 않은 유기 용매가 다량으로 사용되는 단점이 있다.
최근에는 상기와 같은 단점을 보완하기 위해, 유기 용매를 사용하지 않는 초임계 추출과 같은 방법이 제시되고 있다. 그러나, 초임계 추출 방식의 경우 고가의 설비를 필요로하거나, 공정 가동에 에너지 소모가 높아 산업적으로 이점이 있는 수준의 경제성을 달성하기 어렵다.
또한, 종래의 캘러스 추출물은 캘러스 유래의 유효 성분을 다양하게 이용하기 어렵고, 목적하는 일부 유효 성분만을 집적하는 방식으로, 정제 및 추출 과정에서 우선하지 않는 성분들이 소실 또는 폐기되는 것도 단점으로 볼 수 있다. 뿐만 아니라, 캘러스의 전체 성분에 의한 복합적인 향상 효과를 기대하기 어렵다.
따라서, 종래의 식물 캘러스 추출물과 비교하여 유효 성분의 피부 침투력 및 피부 흡수력을 현저하게 향상시킬 수 있는 기술에 대한 요구가 증가하고 있다.
본 발명의 하나의 목적은 종래의 식물 캘러스 추출물과 비교하여 유효 성분의 피부 침투력 및 피부 흡수력이 현저하게 향상된 식물 캘러스 고압 균질 파쇄물을 포함하는 외용제용 조성물 및 이의 제조 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 피부 보습능, 피부 주름 예방능, 피부 주름 개선능, 피부 미백능, 피부 탄력 향상능 및 피부 톤 개선능이 우수한 식물 캘러스 고압 균질 파쇄물을 포함하는 외용제용 조성물 및 이의 제조 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 인체에 유해한 추출 용매의 사용을 생략하면서도, 유효 성분의 함량이 높고, 유효 성분의 피부 침투력 및 피부 흡수력이 우수하며, 유효 성분에 대한 보존력 및 안정성이 우수한 식물 캘러스 고압 균질 파쇄물을 포함하는 외용제용 조성물 및 이의 제조 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 상기 및 기타의 목적들은 하기 설명되는 본 발명에 의하여 모두 달성될 수 있다.
본 발명의 일 구현예는 사과 캘러스, 구기자 캘러스, 포도 캘러스 및 이들로부터 유도된 체세포배로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상인 식물 캘러스의 200 bar 내지 2000 bar 범위 고압 균질 파쇄물을 포함하는 것을 특징으로 하는 외용제용 조성물에 관한 것이다.
상기 외용제용 조성물은 상기 고압 균질 파쇄물 0.1 중량% 내지 80 중량% 및 부형제 20 중량% 내지 99.9 중량%를 함유하는 것일 수 있다.
상기 외용제용 조성물의 제형은 화장수, 세럼, 에센스, 로션, 크림, 팩, 패치, 마스크 시트, 젤, 연고 및 캡슐 중 어느 하나일 수 있다.
상기 외용제용 조성물의 제형은 외피가 생물 유래 중합체로 형성된 캡슐일 수 있다.
본 발명의 다른 구현예는 사과 캘러스, 구기자 캘러스, 포도 캘러스 및 이들로부터 유도된 체세포배로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상인 식물 캘러스를 배양하는 단계; 및 상기 식물 캘러스를 200 bar 내지 2000 bar의 압력에서 고압 균질 파쇄하는 단계; 를 포함하는 특징으로 하는 외용제용 조성물 제조 방법에 관한 것이다.
상기 외용제용 조성물 제조 방법은 상기 고압 균질 파쇄하는 단계 이후, 외용제용 조성물을 화장수, 세럼, 에센스, 로션, 크림, 팩, 패치, 마스크 시트, 젤, 연고 및 캡슐 중 어느 하나로 제형화하는 단계;를 더 포함할 수 있다.
상기 제형화하는 단계는 외용제 조성물을 외피로 피복하여 캡슐화하는 것일 수 있다.
상기 캡슐화는 상기 외용제용 조성물을 에멀젼화한 후, 생물 유래 중합체를 용해한 용액에 중에 분산시켜, 캡슐 외피를 형성하는 것을 포함할 수 있다.
상기 구현예들에서, 상기 생물 유래 중합체는 한천, 펙틴, 알긴산, 알긴산염, 카라기난, 커드란, 전분, 젤란검, 글루코만난, 로커스트검, 구아검, 타라검, 아라비아검, 잔탄검, 히알루론산, 카라야검, 트래거캔스검, 라치검, 덱스트란, 셀룰로오스 및 이들의 혼합물 중 1종 이상을 포함하는 것일 수 있다.
상기 구현예들에서, 상기 외용제용 조성물은 피부 보습용 화장료 조성물, 피부 주름 예방용 화장료 조성물, 피부 주름 개선용 화장료 조성물, 피부 미백용 화장료 조성물, 피부 탄력 향상용 화장료 조성물 및 피부 톤 개선용 화장료 조성물 중 어느 하나일 수 있다.
본 발명은 종래의 식물 캘러스 추출물과 비교하여 유효 성분의 피부 침투력 및 피부 흡수력이 현저하게 향상되고, 피부 보습능, 피부 주름 예방능, 피부 주름 개선능, 피부 미백능, 피부 탄력 향상능 및 피부 톤 개선능이 우수하며, 인체에 유해한 추출 용매의 사용을 생략하면서도, 유효 성분의 함량이 높고, 유효 성분의 피부 침투력 및 피부 흡수력이 우수하며, 유효 성분에 대한 보존력 및 안정성이 우수한 식물 캘러스 고압 균질 파쇄물을 포함하는 외용제용 조성물 및 이의 제조 방법을 제공한다.
본 발명의 일 구현예는 사과 캘러스, 구기자 캘러스, 포도 캘러스 및 이들로부터 유도된 체세포배로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상인 식물 캘러스의 200 bar 내지 2000 bar 범위 고압 균질 파쇄물을 포함하는 것을 특징으로 하는 외용제용 조성물에 관한 것이다.
이를 통해, 본 발명은 종래의 식물 캘러스 추출물과 비교하여 유효 성분의 피부 침투력 및 피부 흡수력이 현저하게 향상되고, 피부 보습능, 피부 주름 예방능, 피부 주름 개선능, 피부 미백능, 피부 탄력 향상능 및 피부 톤 개선능이 우수하며, 인체에 유해한 추출 용매의 사용을 생략하면서도, 유효 성분의 함량이 높고, 유효 성분의 피부 침투력 및 피부 흡수력이 우수하며, 유효 성분에 대한 보존력 및 안정성이 우수한 식물 캘러스 고압 균질 파쇄물을 포함하는 외용제용 조성물 및 이의 제조 방법을 제공한다.
특히, 본 발명의 외용제용 조성물은 식물 캘러스의 고압 균질 파쇄물을 포함함으로써, 종래의 식물 캘러스 추출물과 비교하여 유효 성분의 피부 침투력 및 피부 흡수력을 현저하게 향상시키고, 인체에 유해한 추출 용매의 사용을 생략하면서도, 수득하는 유효 성분의 종류를 다양화하는 효과를 구현한다.
또한, 상기 고압 균질 파쇄물은 종래의 압력 범위가 200 bar 미만인 추출 방식에 의한 캘러스 추출물, 종래의 용매 추출 방식에 의한 캘러스 추출물, 종래의 분획 추출 방식에 의한 캘러스 추출물 등에 비해 함유할 수 있는 유효 성분의 종류를 증대시키고, 유효 성분의 함유량을 높이면서도, 피부 침투력 및 피부 흡수력을 현저하게 향상시킬 수 있다.
상기 고압 균질 파쇄물의 압력 범위는 200 bar 내지 2000 bar일 수 있다. 상기 압력 범위가 200 bar 미만인 경우, 식물 캘러스 내의 유효 성분이 세포벽 밖으로 노출되는 효율이 낮다. 상기 압력 범위가 2000 bar를 초과하는 경우, 식물 캘러스 내의 유효 성분이 과도한 압력에 의해 성상 변이 또는 파괴될 수 있다.
구체적으로, 상기 고압 균질 파쇄물의 압력 범위는 300 bar 내지 1800 bar, 보다 구체적으로 500 bar 내지 1500 bar일 수 있다. 상기 범위 내에서, 고압 균질 파쇄물 중 유효 성분의 함량 및 상기 유효 성분의 피부 침투력이 더욱 향상될 수 있다.
본 발명의 외용제용 조성물은 식물 캘러스로 사과 캘러스, 구기자 캘러스, 포도 캘러스 및 이들로부터 유도된 체세포배로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상을 이용한다.
상기 사과 캘러스는 사과 나무의 가지로부터 유래된 캘러스 또는 이로부터 유도된 체세포배를 포함하며, 수크로오스(Sucrose), 겔라이트(Gelite) 및 MS(Murashinge and Skoog, 1962) 미디엄을 포함하는 배지에서 유도될 수 있다. 이러한 경우, 캘러스 또는 이로부터 유도된 체세포배의 배양 효율이 우수할 뿐만 아니라, 함유할 수 있는 유효 성분의 종류를 더욱 증대시킬 수 있다.
상기 사과 캘러스의 배양용 생장 조절 물질은 예를 들면, IAA(indole acetic acid), NAA(naphthalene acetic acid), 제아틴(Zeatin), BA(6-Benzylaminopurine), 키네틴(kinetin) 등을 사용할 수 있다. 또한, 상기 예시의 생장 조절 물질은 1종을 단독으로 사용하거나, 2종 이상을 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 경우, 수득되는 사과 캘러스는 피부 보습능, 피부 주름 예방능, 피부 주름 개선능, 피부 미백능, 피부 탄력 향상능 및 피부 톤 개선능이 우수하고, 외용제용 조성물의 피부 보습능, 피부 미백능, 티로시네이즈 억제능을 특히 더 향상시킬 수 있다.
상기 구기자 캘러스는 구기자 나무의 가지로부터 유래된 캘러스 또는 이로부터 유도된 체세포배를 포함하며, 수크로오스(Sucrose), 겔라이트(Gelite) 및 MS(Murashinge and Skoog, 1962) 미디엄을 포함하는 배지에서 유도될 수 있다. 이러한 경우, 캘러스 또는 이로부터 유도된 체세포배의 배양 효율이 우수할 뿐만 아니라, 함유할 수 있는 유효 성분의 종류를 더욱 증대시킬 수 있다.
상기 구기자 캘러스의 배양용 생장 조절 물질은 예를 들면, IAA(indole acetic acid), NAA(naphthalene acetic acid), 제아틴(Zeatin), BA(6-Benzylaminopurine), 키네틴(kinetin) 등을 사용할 수 있다. 또한, 상기 예시의 생장 조절 물질은 1종을 단독으로 사용하거나, 2종 이상을 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 경우, 수득되는 구기자 캘러스는 피부 보습능, 피부 주름 예방능, 피부 주름 개선능, 피부 미백능, 피부 탄력 향상능 및 피부 톤 개선능이 우수하고, 외용제용 조성물의 피부 주름 예방능, 피부 주름 개선능, 항산화능을 특히 더 향상시킬 수 있다.
상기 포도 캘러스는 포도 나무의 가지로부터 유래된 캘러스 또는 이로부터 유도된 체세포배를 포함하며, 수크로오스(Sucrose), 겔라이트(Gelite) 및 MS(Murashinge and Skoog, 1962) 미디엄을 포함하는 배지에서 유도될 수 있다. 이러한 경우, 캘러스 또는 이로부터 유도된 체세포배의 배양 효율이 우수할 뿐만 아니라, 함유할 수 있는 유효 성분의 종류를 더욱 증대시킬 수 있다.
상기 포도 캘러스의 배양용 생장 조절 물질은 예를 들면, IAA(indole acetic acid), NAA(naphthalene acetic acid), 제아틴(Zeatin), BA(6-Benzylaminopurine), 키네틴(kinetin) 등을 사용할 수 있다. 또한, 상기 예시의 생장 조절 물질은 1종을 단독으로 사용하거나, 2종 이상을 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 경우, 수득되는 포도 캘러스는 피부 보습능, 피부 주름 예방능, 피부 주름 개선능, 피부 미백능, 피부 탄력 향상능 및 피부 톤 개선능이 우수하고, 외용제용 조성물의 피부 주름 예방능, 피부 주름 개선능, 피부 탄력 향상능, 콜라게네이즈 억제능을 특히 더 향상시킬 수 있다.
일 구체예에서, 본 발명의 외용제용 조성물은 상기 고압 균질 파쇄물을 단일로 포함할 수 있다. 이러한 경우, 상기 외용제용 조성물은 유효 성분의 피부 침투력 및 피부 흡수력이 더욱 우수할 수 있다.
다른 구체예에서, 본 발명의 외용제용 조성물은 상기 고압 균질 파쇄물과 함께 부형제를 포함할 수 있다. 이러한 경우, 상기 외용제용 조성물은 화장료로 적용되기에 더욱 유리한 특성을 갖는다.
상기 부형제는 외용제용으로 사용가능한 부형제라면, 특별히 제한되지 않는다. 예를 들면, 상기 부형제는 정제수, 에탄올 등을 포함하는 친수성 용매; 호호바 오일 등을 포함하는 식물성 오일; 스쿠알란 등을 포함하는 동물성 오일; 유동 파라핀 등을 포함하는 활제; 세틸 아릴 알코올 등을 포함하는 지방산 알코올; 프로필렌 글리콜, 부틸렌 글리콜, 글리세린, 토코페릴 아세테이트, 폴리글리세릴-3 메틸 글루코스 디스테아레이트 등을 포함하는 피부 컨디셔닝제; 트리 에탄올 아민, 글리세릴 스테아레이트 등을 포함하는 계면활성제; 카르복시 비닐 폴리머 등을 포함하는 증점제; 유화제; 방부제; 향료 등일 수 있다.
상기 다른 구체예의 외용제용 조성물은 상기 고압 균질 파쇄물을 0.1 중량% 내지 80 중량%, 구체적으로 1 중량% 내지 50 중량%, 보다 구체적으로 10 중량% 내지 50 중량%로 포함할 수 있다. 상기 범위 내에서, 유효 성분의 함량이 높고, 유효 성분의 피부 침투력 및 피부 흡수력이 우수하며, 유효 성분에 대한 보존력 및 제형 안정성이 더욱 우수한 외용제용 조성물을 제공할 수 있다.
또한, 상기 다른 구체예의 외용제용 조성물은 상기 부형제를 20 중량% 내지 99.9 중량%, 구체적으로 50 중량% 내지 99 중량%, 보다 구체적으로 50 중량% 내지 90 중량%;로 포함할 수 있다. 상기 범위 내에서, 유효 성분의 함량이 높고, 유효 성분의 피부 침투력 및 피부 흡수력이 우수하며, 유효 성분에 대한 보존력 및 제형 안정성이 더욱 우수한 외용제용 조성물을 제공할 수 있다.
본 발명의 외용제용 조성물의 제형은 예를 들면, 화장수, 세럼, 에센스, 로션, 크림, 팩, 패치, 마스크 시트, 젤, 연고 및 캡슐 중 어느 하나일 수 있다.
일 구체예에서, 상기 외용제용 조성물의 제형은 외피가 생물 유래 중합체로 형성된 캡슐일 수 있다. 이러한 경우, 상기 외용제용 조성물은 유효 성분에 대한 보존력 및 안정성이 더욱 우수할 수 있다.
구체적으로, 상기 캡슐은 외피 및 상기 외피 내에 함유된 외용제용 조성물로 이루어진 것일 수 있다. 이러한 경우, 상기 외용제용 조성물은 유효 성분에 대한 보존력 및 안정성이 우수하면서, 동시에 상기 외용제용 조성물을 화장료로 적용하기에 유리한 사용감, 미감, 정량 용이성 등의 특성을 갖는다.
구체적으로, 상기 캡슐은 평균 입자 크기가 0.1 mm 내지 30 mm, 구체적으로 0.5 mm 내지 10 mm 보다 구체적으로 1 mm 내지 10 mm 일 수 있다. 상기 범위 내에서, 외용제용 조성물은 유효 성분에 대한 보존력 및 안정성이 더욱 우수할 수 있다.
구체적으로, 상기 캡슐은 상기 외피와 상기 고압 균질 파쇄물의 중량비(외피 중량:고압 균질 파쇄물 중량)가 1:0.001 내지 1:0.9, 구체적으로 1:0.005 내지 1:0.7, 보다 구체적으로 1:0.05 내지 1:0.6 일 수 있다. 상기 범위 내에서, 외용제용 조성물은 유효 성분에 대한 보존력 및 안정성이 더욱 우수하고, 저장 환경에서는 유효 성분 보존력을 높이면서도, 피부에 적용시에는 피부에 도포되기에 유리한 특성을 양립할 수 있다.
상기 생물 유래 중합체는 식물로부터 유래된 또는 균주로부터 유래된 중합체일 수 있다. 구체적으로, 상기 생물 유래 중합체는 한천, 펙틴, 알긴산, 알긴산염, 카라기난, 커드란, 전분, 젤란검, 글루코만난, 로커스트검, 구아검, 타라검, 아라비아검, 잔탄검, 히알루론산, 카라야검, 트래거캔스검, 라치검, 덱스트란, 셀룰로오스 및 이들의 혼합물 중 1종 이상을 포함하는 것일 수 있다. 이러한 경우, 상기 외용제용 조성물은 유효 성분에 대한 보존력 및 안정성이 우수하면서, 동시에 상기 외용제용 조성물을 화장료로 적용하기에 더욱 유리한 특성을 갖는다.
보다 구체적으로, 상기 생물 유래 중합체는 알긴산, 한천 등을 사용할 수 있다. 상기 예시의 생물 유래 중합체는 1종을 단독으로 사용하거나, 2종 이상을 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 경우, 상기 캡슐화된 고압 균질 파쇄물의 유효성분의 성상 변이를 더욱 저해하고, 보존력을 더욱 향상시키며, 화장료로 적용 시 외용제용 조성물과 함께 피부에 도포되어, 피부 보습 효과를 더욱 향상시킬 수 있다.
상기 외용제용 조성물은 예를 들면, 피부 보습용 화장료 조성물, 피부 주름 예방용 화장료 조성물, 피부 주름 개선용 화장료 조성물, 피부 미백용 화장료 조성물, 피부 탄력 향상용 화장료 조성물 및 피부 톤 개선용 화장료 조성물 중 어느 하나일 수 있다. 이와 같은 본 발명의 외용제용 조성물은 상기 예시의 화장료 조성물로 적용 시 각각의 화장료가 갖는 기능성을 더욱 향상시킬 수 있다.
본 발명의 다른 구현예는 사과 캘러스, 구기자 캘러스, 포도 캘러스 및 이들로부터 유도된 체세포배로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상인 식물 캘러스를 배양하는 단계; 및 상기 식물 캘러스를 200 bar 내지 2000 bar의 압력에서 고압 균질 파쇄하는 단계; 를 포함하는 특징으로 하는 외용제용 조성물 제조 방법에 관한 것이다.
이를 통해, 본 발명은 종래의 식물 캘러스 추출물과 비교하여 유효 성분의 피부 침투력 및 피부 흡수력이 현저하게 향상되고, 피부 보습능, 피부 주름 예방능, 피부 주름 개선능, 피부 미백능, 피부 탄력 향상능 및 피부 톤 개선능이 우수하며, 인체에 유해한 추출 용매의 사용을 생략하면서도, 유효 성분의 함량이 높고, 유효 성분의 피부 침투력 및 피부 흡수력이 우수하며, 유효 성분에 대한 보존력 및 안정성이 우수한 식물 캘러스 고압 균질 파쇄물을 포함하는 외용제용 조성물을 보다 경제적이고 효율적으로 제조하는 효과를 구현한다. 이에 따라, 본 발명의 외용제용 조성물 제조 방법은 종래보다 상업적으로 대량 생산하기에 유리한 이점을 갖는다.
상기 식물 캘러스로 사과 캘러스, 구기자 캘러스, 포도 캘러스 및 이들로부터 유도된 체세포배로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상을 이용한다. 이들 각각의 캘러스에 대한 구체적인 내용은 전술한 바와 같다.
상기 식물 캘러스를 배양하는 단계는 각각 사과, 구기자 및/또는 포도 나무의 가지로부터 캘러스를 채취한 후, 캘러스 및 캘러스로부터 유도된 체세포배를 배양하는 것을 포함한다.
상기 각각의 나무 가지로부터 캘러스를 채취하는 방법은, 예를 들면, 준비된 나무 가지를 살균 용액에 진탕한 후, 절편으로 절단하고, 상기 절편을 수크로오스(Sucrose), 겔라이트(Gelite) 및 MS(Murashinge and Skoog, 1962) 미디엄을 포함하는 배지에 치상하여 무균 배양하는 것일 수 있다. 이러한 경우, 수득되는 캘러스 또는 이로부터 유도된 체세포배의 배양 효율이 우수할 뿐만 아니라, 함유할 수 있는 유효 성분의 종류를 더욱 증대시킬 수 있다.
상기 살균 용액은 예를 들면, 과산화수소수, 에탄올, 차아염소산 나트륨 용액 등을 포함할 수 있다. 이들 살균 용액은 각각 단독으로 사용하거나, 2종 이상을 혼합하여 사용할 수 있다.
상기 배지는 생장 조절 물질로 IAA(indole acetic acid), NAA(naphthalene acetic acid), 제아틴(Zeatin), BA(6-Benzylaminopurine), 키네틴(kinetin) 등을 0.01 중량% 내지 1 중량%로 포함할 수 있다. 상기 범위 내에서, 사과 캘러스, 구기자 캘러스, 포도 캘러스 및 이들로부터 유도된 체세포배의 유도 효과가 더욱 우수할 수 있다. 또한, 상기 예시의 생장 조절 물질은 1종을 단독으로 사용하거나, 2종 이상을 조합하여 사용할 수 있다.
상기 배지는 예를 들면, 수크로오스 10 g/L 내지 60 g/L, 겔라이트 4 g/L 내지 10 g/L, MS 파우더 1 g/L 내지 10 g/L, 생장 조절 물질 0.0001 g/L 내지 0.005 g/L 및 잔부의 정제수를 포함하는 것일 수 있다. 상기 범위 내에서, 사과 캘러스, 구기자 캘러스, 포도 캘러스 및 이들로부터 유도된 체세포배의 유도 효과가 더욱 우수할 수 있다.
상기 배양은 15℃ 내지 30℃, 구체적으로 20℃ 내지 30℃, 보다 구체적으로 25℃ 내지 30℃에서 수행될 수 있다. 상기 범위 내에서, 사과 캘러스, 구기자 캘러스, 포도 캘러스 및 이들로부터 유도된 체세포배의 유도 효과가 더욱 우수할 수 있다.
상기 배양은 2주 내지 8주, 구체적으로 3주 내지 8주, 보다 구체적으로 5주 내지 8주 동안 수행될 수 있다. 상기 범위 내에서, 사과 캘러스, 구기자 캘러스, 포도 캘러스 및 이들로부터 유도된 체세포배의 유도 효과가 더욱 우수할 수 있다.
또한, 상기 배양은 캘러스 또는 상기 캘러스로부터 유도된 체세포배를 계대 배양하여 증식 및 순화시키는 것을 더 포함할 수 있으며, 계대 배양 주기는 2주 내지 6주, 구체적으로 3주 내지 6주, 보다 구체적으로 4주 내지 5주일 수 있다. 상기 범위 내에서, 사과 캘러스, 구기자 캘러스, 포도 캘러스 및 이들로부터 유도된 체세포배의 유도 효과가 더욱 우수할 수 있다.
상기 고압 균질 파쇄하는 단계는 전술한 배양하는 단계에서 얻어진 상기 식물 캘러스를 200 bar 내지 2000 bar의 압력에서 고압 균질 파쇄하여, 고압 균질 파쇄물을 수득한다.
본 발명의 외용제용 조성물 제조 방법은 식물 캘러스를 고압 균질 파쇄하여 이용함으로써, 종래의 식물 캘러스 추출물과 비교하여 유효 성분의 피부 침투력 및 피부 흡수력을 현저하게 향상시키고, 인체에 유해한 추출 용매의 사용을 생략하면서도, 수득하는 유효 성분의 종류를 다양화하는 효과를 구현한다.
상기 고압 균질 파쇄 시 압력 범위는 200 bar 내지 2000 bar일 수 있다. 상기 압력 범위가 200 bar 미만인 경우, 식물 캘러스 내의 유효 성분이 세포벽 밖으로 노출되는 효율이 낮다. 상기 압력 범위가 2000 bar를 초과하는 경우, 식물 캘러스 내의 유효 성분이 과도한 압력에 의해 성상 변이 또는 파괴될 수 있다.
구체적으로, 상기 고압 균질 파쇄물의 압력 범위는 300 bar 내지 1800 bar, 보다 구체적으로 500 bar 내지 1500 bar일 수 있다. 상기 범위 내에서, 고압 균질 파쇄물 중 유효 성분의 함량 및 상기 유효 성분의 피부 침투력이 더욱 향상될 수 있다.
상기 고압 균질 파쇄 시 파쇄 시간은 1회당 10분 내지 20분일 수 있다. 또한 파쇄 수행 횟수는 1회 내지 3회일 수 있다. 상기 범위 내에서, 고압 균질 파쇄물 중 유효 성분의 함량 및 상기 유효 성분의 피부 침투력이 더욱 향상될 수 있다.
일 구체예에서, 상기 고압 균질 파쇄물은 추가적인 가공 없이 직접 외용제용 조성물로 이용될 수 있다. 이러한 경우, 상기 외용제용 조성물은 유효 성분의 피부 침투력 및 피부 흡수력이 우수할 수 있다.
다른 구체예에서, 상기 고압 균질 파쇄물은 부형제와 함께 혼합되어 외용제용 조성물로 이용될 수 있다. 이러한 경우, 상기 외용제용 조성물은 화장료로 적용되기에 더욱 유리한 특성을 갖는다.
상기 부형제는 외용제용으로 사용가능한 부형제라면, 특별히 제한되지 않는다. 예를 들면, 상기 부형제는 정제수, 에탄올 등을 포함하는 친수성 용매; 호호바 오일 등을 포함하는 식물성 오일; 스쿠알란 등을 포함하는 동물성 오일; 유동 파라핀 등을 포함하는 활제; 세틸 아릴 알코올 등을 포함하는 지방산 알코올; 프로필렌 글리콜, 부틸렌 글리콜, 글리세린, 토코페릴 아세테이트, 폴리글리세릴-3 메틸 글루코스 디스테아레이트 등을 포함하는 피부 컨디셔닝제; 트리 에탄올 아민, 글리세릴 스테아레이트 등을 포함하는 계면활성제; 카르복시 비닐 폴리머 등을 포함하는 증점제; 방부제; 향료 등일 수 있다.
상기 다른 구체예의 외용제용 조성물은 상기 고압 균질 파쇄물을 0.1 중량% 내지 80 중량%, 구체적으로 1 중량% 내지 50 중량%, 보다 구체적으로 10 중량% 내지 50 중량%로 포함할 수 있다. 상기 범위 내에서, 유효 성분의 함량이 높고, 유효 성분의 피부 침투력 및 피부 흡수력이 우수하며, 유효 성분에 대한 보존력 및 제형 안정성이 더욱 우수한 외용제용 조성물을 제공할 수 있다.
또한, 상기 다른 구체예의 외용제용 조성물은 상기 부형제를 20 중량% 내지 99.9 중량%, 구체적으로 50 중량% 내지 99 중량%, 보다 구체적으로 50 중량% 내지 90 중량%;로 포함할 수 있다. 상기 범위 내에서, 유효 성분의 함량이 높고, 유효 성분의 피부 침투력 및 피부 흡수력이 우수하며, 유효 성분에 대한 보존력 및 제형 안정성이 더욱 우수한 외용제용 조성물을 제공할 수 있다.
본 발명의 외용제용 조성물 제조 방법은 상기 고압 균질 파쇄하는 단계 이후, 상기 외용제용 조성물을 화장수, 세럼, 에센스, 로션, 크림, 팩, 패치, 마스크 시트, 젤, 연고 및 캡슐 중 어느 하나로 제형화하는 단계;를 더 포함할 수 있다.
구체적으로, 상기 제형화하는 단계는 외용제 조성물을 외피로 피복하여 캡슐화하는 것일 수 있다. 이를 통해, 수득되는 상기 외용제용 조성물의 제형은 외피가 생물 유래 중합체로 형성된 캡슐일 수 있다. 이러한 경우, 상기 외용제용 조성물은 유효 성분에 대한 보존력 및 안정성이 우수하면서, 동시에 상기 외용제용 조성물을 화장료로 적용하기에 유리한 사용감, 미감, 정량 용이성 등의 특성을 갖는다.
상기 외용제용 조성물 제조 방법은 상기 고압 균질 파쇄하는 단계 이후, 상기 외용제용 조성물을 외피로 피복하여 캡슐화하는 단계; 를 더 포함할 수 있다.
상기 캡슐화는 상기 외용제용 조성물을 에멀젼화한 후, 생물 유래 중합체를 용해한 용액에 중에 분산시켜, 캡슐 외피를 형성하는 것을 포함할 수 있다.
상기 에멀젼화는 상기 고압 균질 파쇄물을 가용화제형 및 유중수형(W/O), 수중유형(O/W), 수중유중수형(W/O/W) 또는 유중수중유형(O/W/O) 등의 에멀젼 제형으로 제조하는 것일 수 있다.
구체적으로, 상기 캡슐은 평균 입자 크기가 0.1 mm 내지 30 mm, 구체적으로 0.5 mm 내지 10 mm 보다 구체적으로 1 mm 내지 10 mm 일 수 있다. 상기 범위 내에서, 외용제용 조성물은 유효 성분에 대한 보존력 및 안정성이 더욱 우수할 수 있다.
구체적으로, 상기 캡슐은 상기 외피와 상기 고압 균질 파쇄물의 중량비(외피 중량:고압 균질 파쇄물 중량)가 1:0.001 내지 1:0.9, 구체적으로 1:0.005 내지 1:0.7, 보다 구체적으로 1:0.05 내지 1:0.6 일 수 있다. 상기 범위 내에서, 외용제용 조성물은 유효 성분에 대한 보존력 및 안정성이 더욱 우수하고, 저장 환경에서는 유효 성분 보존력을 높이면서도, 피부에 적용시에는 피부에 도포되기에 유리한 특성을 양립할 수 있다.
상기 캡슐화하는 단계는 외피를 보다 효율적으로 형성하기 위해, 상기 고압 균질 파쇄물의 에멀젼을 생물 유래 중합체를 용해한 용액에 중에 분산시킨 이후, 외부 온도를 20℃이하, 구체적으로 -10℃ 내지 15℃, 보다 구체적으로 구체적으로 0℃ 내지 10℃로 조절하는 것을 추가적으로 포함할 수 있다. 이때, 온도 조절 방식은 제한되지 않으나, 예를 들면, 반응기 외부에 실리콘오일, 미네랄오일, 파라핀오일, 액체질소, 액체산소, 액체공기 등과 같은 동결 냉매를 포함하는 장치를 구비하여, 온도를 조절하는 것일 수 있다. 이러한 경우, 캡슐 외피와 캡슐 내의 외용제용 조성물의 중량비 조절이 용이하면서도, 형상성이 우수한 외용제용 조성물 캡슐을 제조할 수 있다.
상기 외피는 생물 유래 중합체로 형성된 것일 수 있다. 이러한 경우, 상기 외용제용 조성물은 유효 성분에 대한 보존력 및 안정성이 우수하면서, 동시에 상기 외용제용 조성물을 화장료로 적용하기에 더욱 유리한 특성을 갖는다.
상기 생물 유래 중합체는 식물로부터 유래된 또는 균주로부터 유래된 중합체일 수 있다. 구체적으로상기 생물 유래 중합체는 한천, 펙틴, 알긴산, 알긴산염, 카라기난, 커드란, 전분, 젤란검, 글루코만난, 로커스트검, 구아검, 타라검, 아라비아검, 잔탄검, 히알루론산, 카라야검, 트래거캔스검, 라치검, 덱스트란, 셀룰로오스 및 이들의 혼합물 중 1종 이상을 포함하는 것일 수 있다. 이러한 경우, 상기 외용제용 조성물은 유효 성분에 대한 보존력 및 안정성이 우수하면서, 동시에 상기 외용제용 조성물을 화장료로 적용하기에 더욱 유리한 특성을 갖는다.
보다 구체적으로, 상기 생물 유래 중합체는 알긴산, 한천 등을 사용할 수 있다. 상기 예시의 생물 유래 중합체는 1종을 단독으로 사용하거나, 2종 이상을 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 경우, 상기 캡슐화된 고압 균질 파쇄물의 유효성분의 성상 변이를 더욱 저해하고, 보존력을 더욱 향상시키며, 화장료로 적용 시 외용제용 조성물과 함께 피부에 도포되어, 피부 보습 효과를 더욱 향상시킬 수 있다.
상기 외용제용 조성물은 예를 들면, 피부 보습용 화장료 조성물, 피부 주름 예방용 화장료 조성물, 피부 주름 개선용 화장료 조성물, 피부 미백용 화장료 조성물, 피부 탄력 향상용 화장료 조성물 및 피부 톤 개선용 화장료 조성물 중 어느 하나일 수 있다. 이와 같은 본 발명의 외용제용 조성물은 상기 예시의 화장료 조성물로 적용 시 각각의 화장료가 갖는 기능성을 더욱 향상시킬 수 있다.
실시예
이하에서는, 실시예 및 비교예를 통하여 본 발명을 상세히 설명하기로 한다. 그러나 이들은 본 발명을 상세히 설명하기 위한 것으로 제공되는 것일 뿐 본 발명의 범위가 이들에 의해 한정되는 것은 아니다.
제조예 1
사과 나무의 당년생 가지(학명: Malus pumila, 품종명: 부사, 채집 부위: 가지의 형성층을 포함한 부분, 생육개월: 1~6개월)를 35v/v% 과산화수소에 10분, 이어서 70v/v% 에탄올에 1분 동안 침지시킨 후, 2v/v% 차아염소산나트륨(Sodium hypochlorite) 용액에 30분 동안 진탕하여 살균하였다.
그 다음 살균한 사과 나무 가지를 멸균수로 5회 이상 세척한 후, 1cm 내외의 작은 절편으로 절단하였다. 상기 절편체를 수크로오스(Sucrose) 30 g/L, 겔라이트(Gelite) 4.0 g/L, 생장조절물질인 NAA 1 ppm, MS 파우더 4.4 g/L 및 잔부의 정제수를 포함하는 기본 배지에 치상한 후 25℃의 배양실에서 8주간 배양하여 캘러스(callus)를 유도하였다.
유도된 캘러스는 5주 간격으로 계대 배양하여 증식 및 순화하였다. 상기와 같이 유도된 캘러스는 공기 부양형 생물반응기 내에 접종하여 25℃의 배양실에서 6주간 암상태로 현탁 배양 후 수확하였다. 이때, 배양 배지는 상기 기본 배지에서 겔라이트(Gelite)를 제외하고, 동량의 MS 미디엄으로 대체하여 제조한 배지를 이용하였으며 25℃의 배양실에서 6주간 암상태로 현탁 배양하였다.
제조예 2
구기자 나무의 당년생 가지(학명: Lycium chinense, 채집 부위: 가지의 형성층을 포함한 부분, 생육개월: 1~6개월)를 35v/v% 과산화수소에 10분, 이어서 70v/v% 에탄올에 1분 동안 침지시킨 후, 2v/v% 차아염소산나트륨(Sodium hypochlorite) 용액에 30분 동안 진탕하여 살균하였다.
그 다음 살균한 구기자 나무 가지를 멸균수로 5회 이상 세척한 후, 1cm 내외의 작은 절편으로 절단하였다. 상기 절편체를 수크로오스(Sucrose) 30 g/L, 겔라이트(Gelite) 4.0 g/L, 생장조절물질인 NAA 1 ppm, MS 파우더 4.4 g/L 및 잔부의 정제수를 포함하는 기본 배지에 치상한 후 25℃의 배양실에서 8주간 배양하여 캘러스(callus)를 유도하였다.
유도된 캘러스는 5주 간격으로 계대 배양하여 증식 및 순화하였다. 상기와 같이 유도된 캘러스는 공기 부양형 생물반응기 내에 접종하여 25℃의 배양실에서 6주간 암상태로 현탁 배양 후 수확하였다. 이때, 배양 배지는 상기 기본 배지에서 겔라이트(Gelite)를 제외하고, 동량의 MS 미디엄으로 대체하여 제조한 배지를 이용하였으며 25℃의 배양실에서 6주간 암상태로 현탁 배양하였다.
제조예 3
포도 나무의 당년생 가지(학명: Vitis vinifera L., 품종명: 캠벨, 채집 부위: 가지의 형성층을 포함한 부분, 생육개월: 1~6개월)를 35v/v% 과산화수소에 10분, 이어서 70v/v% 에탄올에 1분 동안 침지시킨 후, 2v/v% 차아염소산나트륨(Sodium hypochlorite) 용액에 30분 동안 진탕하여 살균하였다.
그 다음 살균한 포도 나무 가지를 멸균수로 5회 이상 세척한 후, 1cm 내외의 작은 절편으로 절단하였다. 상기 절편체를 수크로오스(Sucrose) 30 g/L, 겔라이트(Gelite) 4.0 g/L, 생장조절물질인 NAA 1 ppm, MS 파우더 4.4 g/L 및 잔부의 정제수를 포함하는 기본 배지에 치상한 후 25℃의 배양실에서 8주간 배양하여 캘러스(callus)를 유도하였다.
유도된 캘러스는 5주 간격으로 계대 배양하여 증식 및 순화하였다. 상기와 같이 유도된 캘러스는 공기 부양형 생물반응기 내에 접종하여 25℃의 배양실에서 6주간 암상태로 현탁 배양 후 수확하였다. 이때, 배양 배지는 상기 기본 배지에서 겔라이트(Gelite)를 제외하고, 동량의 MS 미디엄으로 대체하여 제조한 배지를 이용하였으며 25℃의 배양실에서 6주간 암상태로 현탁 배양하였다.
실시예 1
제조예 1에서 제조한 사과 캘러스 배양물을 500ml 채취하여, 고압 호모게나이저(제품명: Scientz-150, 제조사: Ningbo Scientz Biotechnology Co.,Ltd)를 이용해 200bar에서 1회당 20분씩 총 3회 처리하여 캘러스를 파쇄하였다. 이와 같이 제조된 식물 캘러스 고압 균질 파쇄물은 75℃에서 30분 동안 처리하여 저온 살균 및 효소 제거 후처리를 수행한 후 이용하였다.
실시예 2
고압 호모게나이저의 압력을 500bar로 변경한 것을 제외하고, 실시예 1과 동일한 방법으로, 사과 캘러스 고압 균질 파쇄물을 제조하였다.
실시예 3
고압 호모게나이저의 압력을 1,000bar로 변경한 것을 제외하고, 실시예 1과 동일한 방법으로, 사과 캘러스 고압 균질 파쇄물을 제조하였다.
실시예 4
고압 호모게나이저의 압력을 2,000bar로 변경한 것을 제외하고, 실시예 1과 동일한 방법으로, 사과 캘러스 고압 균질 파쇄물을 제조하였다.
실시예 5
제조예 2에서 제조한 구기자 캘러스 배양물을 500ml 채취하여, 고압 호모게나이저(제품명: Scientz-150, 제조사: Ningbo Scientz Biotechnology Co.,Ltd)를 이용해 200bar에서 1회당 20분씩 총 3회 처리하여 캘러스를 파쇄하였다. 이와 같이 제조된 식물 캘러스 고압 균질 파쇄물은 75℃에서 30분 동안 처리하여 저온 살균 및 효소 제거 후처리를 수행한 후 이용하였다.
실시예 6
고압 호모게나이저의 압력을 500bar로 변경한 것을 제외하고, 실시예 5와 동일한 방법으로, 구기자 캘러스 고압 균질 파쇄물을 제조하였다.
실시예 7
고압 호모게나이저의 압력을 1,000bar로 변경한 것을 제외하고, 실시예 5와 동일한 방법으로, 구기자 캘러스 고압 균질 파쇄물을 제조하였다.
실시예 8
고압 호모게나이저의 압력을 2,000bar로 변경한 것을 제외하고, 실시예 5와 동일한 방법으로, 구기자 캘러스 고압 균질 파쇄물을 제조하였다.
실시예 9
제조예 3에서 제조한 포도 캘러스 배양물을 500ml 채취하여, 고압 호모게나이저(제품명: Scientz-150, 제조사: Ningbo Scientz Biotechnology Co.,Ltd)를 이용해 200bar에서 1회당 20분씩 총 3회 처리하여 캘러스를 파쇄하였다. 이와 같이 제조된 식물 캘러스 고압 균질 파쇄물은 75℃에서 30분 동안 처리하여 저온 살균 및 효소 제거 후처리를 수행한 후 이용하였다.
실시예 10
고압 호모게나이저의 압력을 500bar로 변경한 것을 제외하고, 실시예 9와 동일한 방법으로, 포도 캘러스 고압 균질 파쇄물을 제조하였다.
실시예 11
고압 호모게나이저의 압력을 1,000bar로 변경한 것을 제외하고, 실시예 9와 동일한 방법으로, 포도 캘러스 고압 균질 파쇄물을 제조하였다.
실시예 12
고압 호모게나이저의 압력을 2,000bar로 변경한 것을 제외하고, 실시예 9와 동일한 방법으로, 포도 캘러스 고압 균질 파쇄물을 제조하였다.
비교예 1
제조예 1에서 제조한 사과 캘러스 배양물을 500ml 채취하여, 배양액을 제거하고, 1L의 멸균수에 침지하여 80℃에서 60분간 열수 추출하였다. 그 후 수득한 추출액을 여과지(Advantes, No.2)로 여과하여 식물 캘러스 열수 추출물을 제조하였다.
비교예 2
제조예 2에서 제조한 구기자 캘러스 배양물을 500ml 채취하여, 배양액을 제거하고, 1L의 멸균수에 침지하여 80℃에서 60분간 열수 추출하였다. 그후 수득한 추출액을 여과지(Advantes, No.2)로 여과하여 식물 캘러스 열수 추출물을 제조하였다.
비교예 3
제조예 3에서 제조한 포도 캘러스 배양물을 500ml 채취하여, 배양액을 제거하고, 1L의 멸균수에 침지하여 80℃에서 60분간 열수 추출하였다. 그후 수득한 추출액을 여과지(Advantes, No.2)로 여과하여 식물 캘러스 열수 추출물을 제조하였다.
비교예 4
고압 호모게나이저의 압력을 100bar로 변경한 것을 제외하고, 실시예 12와 동일한 방법으로, 포도 캘러스 고압 균질 파쇄물을 제조하였다.
비교예 5
고압 호모게나이저의 압력을 2100bar로 변경한 것을 제외하고, 실시예 12와 동일한 방법으로, 포도 캘러스 고압 균질 파쇄물을 제조하였다.
실시예 13
상기 실시예 12에서 제조한 포도 캘러스 고압 균질 파쇄물 30 중량%, 정제수 65 중량% 및 유화제 5 중량%를 혼합한 후, 60℃~70℃에서 에멀젼화하여 수중유형(O/W) 에멀젼을 제조하였다.
상기 에멀젼을 생물 유래 중합체인 한천 20 중량%가 80℃~90℃에서 정제수 80 중량% 중에 가온 용해된 용액 중에 투입한 후, 온도를 유지하면서 2 시간 동안 분산시켜, 캡슐화하였다. 제조된 캡슐은 평균 입자 크기가 약 5 mm 였다.
실시예 14
반응기에 하기 표 1에 표시된 조성의 성분들을 투입한 후, 70℃로 가열하여 유화시켰다. 유화가 완료된 후 상기 반응기의 온도를 45℃로 냉각시키고, 상기 실시예 12에서 제조한 포도 캘러스 파쇄물 캡슐을 첨가하고 분산시킨 다음 30℃로 냉각하여, 영양 크림 제형의 화장료를 제조하였다.
비교예 6
반응기에 하기 표 1에 표시된 조성의 성분들을 투입한 후, 70℃로 가열하여 유화시켰다. 유화가 완료된 후 상기 반응기의 온도를 45℃로 냉각시키고, 상기 비교예 3에서 제조한 포도 캘러스 추출물을 첨가하고 분산시킨 다음 30℃로 냉각하여, 영양 크림 제형의 화장료를 제조하였다.
비교예 7
반응기에 하기 표 1에 표시된 조성의 성분들을 투입한 후, 70℃로 가열하여 유화시켰다. 유화가 완료된 후 상기 반응기의 온도를 45℃로 냉각시키고, 분산시킨 다음 30℃로 냉각하여, 영양 크림 제형의 화장료를 제조하였다.
(단위 : 중량%) 실시예 14 비교예 6 비교예 7
실시예 12의 포도 캘러스 파쇄물 15 - -
비교예 3의 포도 캘러스 추출물 - 15 -
호호바오일 5 5 5
유동 파라핀 7 7 7
세틸아릴 알코올 2 2 2
폴리 글리세릴-3 메칠 글루코스 디스테아레이트 2 2 2
글리세릴 스테아레이트 0.5 0.5 0.5
스쿠알란 3 3 3
프로필렌글리콜 4 4 4
글리세린 5 5 5
트리에탄올 아민 0.3 0.3 0.3
카르복시 비닐폴리머 0.3 0.3 0.3
토코페릴 아세티이트 0.2 0.2 0.2
방부제, 향 - 0.1 -
정제수 55.7 55.6 70.7
합계 100 100 100
<효능 평가>
(1) 피부 침투 효과성 평가
인공 피부(DE, Dermal Equivalent)를 이용하여 실시예 및 비교예의 시료에 대한 피부 침투 효과를 측정하였다.
상기 인공 피부는 사람 정상섬유 아세포(Human normal fibroblast)를 콜라겐 및 DMEM(Dulbeco's Modified Eagle's Media)을 함유하는 배지에 5% 농도의 CO2 배양기에서 37℃로 24시간 동안 배양한 후, 표면 위에 표피각질형성세포를 EGF(Epidermal Growth Factor)와 BPE(Bovine Pituitary Extract)가 함유된 K-SFM(Keratinocyte Serum Free Medium) 배지에서 7일 간 배양하는 방식으로 다층의 표피와 진피 구조를 형성하여 제조한 것이다.
실시예 1 내지 12 및 비교예 1 내지 5에서 준비된 각각의 시료를 동일한 배양 조건에서 제조된 상기 인공 피부의 맨 위층에 도포한 후, 4 시간 배양 후 침투된 시료의 양을 HPLC로 분석하였다. 시험결과는 하기 표 2에 나타내었다. 상기 HPLC 분석 시의 침투량의 기준으로 사용한 물질은 Chlorogenic acid, Rutin, Resveratrol 등이다.
구분 인공 피부에 대한 침투량 (ug/ml)
실시예 1 사과 캘러스 파쇄물 (200bar) 13.2
실시예 2 사과 캘러스 파쇄물 (500bar) 19.4
실시예 3 사과 캘러스 파쇄물 (1000bar) 33.7
실시예 4 사과 캘러스 파쇄물 (2000bar) 38.4
실시예 5 구기자 캘러스 파쇄물 (200bar) 12.7
실시예 6 구기자 캘러스 파쇄물 (500bar) 19.4
실시예 7 구기자 캘러스 파쇄물 (1000bar) 32.5
실시예 8 구기자 캘러스 파쇄물 (2000bar) 37.2
실시예 9 포도 캘러스 파쇄물 (200bar) 10.4
실시예 10 포도 캘러스 파쇄물 (500bar) 19.5
실시예 11 포도 캘러스 파쇄물 (1000bar) 32.8
실시예 12 포도 캘러스 파쇄물 (2000bar) 37.8
비교예 1 사과 캘러스 추출물 4.8
비교예 2 구기자 캘러스 추출물 5.3
비교예 3 포도 캘러스 추출물 5.1
비교예 4 포도 캘러스 파쇄물 (100bar) 8.4
비교예 5 포도 캘러스 파쇄물 (2100bar) 40.0
상기 표 2를 통해 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 실시예 1 내지 12와 같이 각각 사과 캘러스, 구기자 캘러스, 포도 캘러스를 200 bar 내지 2000bar에서 고압 호모게나이저로 파쇄한 식물 캘러스 균질 파쇄물을 포함하는 경우, 동일한 식물 캘러스의 열수 추출물을 사용한 비교예 1 내지 3에 비해 인공 피부에 대한 침투량이 2.04 배(10.4/5.1) 내지 8 배(38.4/4.8)로 현저하게 향상됨을 알 수 있다.
또한, 균질 파쇄 시 압력이 200 bar 미만인 비교예 4의 경우 시료의 침투량이 본 발명의 실시예들에 미치지 못하였으며, 세포벽이 파쇄돼지 않은 상태를 포함하는 잔여물이 다량으로 발생하였다. 균질 파쇄 시 압력이 2000 bar 초과인 비교예 5의 경우 시료의 침투량은 충분히 우수하였으나, 시료에 변색 및 변취의 성상 변이가 발생하여, 외용제용 조성물로 적용하기 적합하지 않았다.
(2) 피부 보습 효과성 평가
연령이 20대 내지 50대인 남성과 여성, 총 30명의 대상자를 모집하여 피부 보습능 평가를 수행하였다.
각 대상자들은 실시예 및 비교예에서 제조된 시료를 각각 10 g씩 2.5cm*2.5cm 넓이의 복부 부위 피부 표면에 도포하고, 24 시간 경과된 후 경피수분손실량(transepidermal water loss, TEWL)을 TEWA 증발계(Tewameter TM210, Germany)를 사용하여 측정하였다. 상기 TEWA 증발계는 일정하게 설정된 측정 시간 동안의 측정 결과를 자동으로 평균값으로 산출하여 제공한다.
상기 경피수분손실량은 공기의 이동이 없고 직사광선이 없는 실내온도는 22℃, 상대 습도는 40%로 유지되는 항온 항습실에서 측정하였다. 또한, 각 실시예 및 비교예 시료에 대해 총 30명의 대상자들에 대한 측정값을 평균하여, 결과를 하기 표 3에 나타내었다.
구분 경피수분손실률 (단위:g/m2/h)
실시예 1 사과 캘러스 파쇄물 (200bar) 15.2
실시예 2 사과 캘러스 파쇄물 (500bar) 13.7
실시예 3 사과 캘러스 파쇄물 (1000bar) 11.1
실시예 4 사과 캘러스 파쇄물 (2000bar) 10.4
실시예 5 구기자 캘러스 파쇄물 (200bar) 16.3
실시예 6 구기자 캘러스 파쇄물 (500bar) 14.1
실시예 7 구기자 캘러스 파쇄물 (1000bar) 11.5
실시예 8 구기자 캘러스 파쇄물 (2000bar) 10.1
실시예 9 포도 캘러스 파쇄물 (200bar) 14.3
실시예 10 포도 캘러스 파쇄물 (500bar) 12.1
실시예 11 포도 캘러스 파쇄물 (1000bar) 11.2
실시예 12 포도 캘러스 파쇄물 (2000bar) 10.5
실시예 13 포도 캘러스 파쇄물 (2000bar)의 캡슐 제형 9.2
비교예 1 사과 캘러스 추출물 28.4
비교예 2 구기자 캘러스 추출물 25.4
비교예 3 포도 캘러스 추출물 26.7
비교예 4 포도 캘러스 파쇄물 (100bar) 20.3
비교예 5 포도 캘러스 파쇄물 (2100bar) 19.7
상기 표 3을 통해 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 실시예 1 내지 12와 같이 각각 사과 캘러스, 구기자 캘러스, 포도 캘러스를 200 bar 내지 2000 bar에서 고압 호모게나이저로 파쇄한 식물 캘러스 균질 파쇄물을 포함하는 경우, 동일한 식물 캘러스의 열수 추출물을 사용한 비교예 1 내지 3에 또는 파쇄 압력이 본 발명의 범위를 벗어나는 비교예 4 및 5에 비해 피부 보습능이 현저하게 우수함을 확인하였다.
특히, 포도 캘러스 파쇄물을 한천으로 피복한 캡슐 제형인 실시예 13의 경우, 시료의 도포 시 외피가 함께 도포되면서 복합적인 작용에 의해 더욱 우수한 경피수분손실량을 구현하였다.
(3) 피부 주름 예방능 평가
콜라겐을 분해하는 효소인 콜라게네이즈의 활성 정도를 측정하기 위해 항체를 이용하였다.
사람의 정상 섬유아세포(Human normal fibroblast, (주)태평양)를 DMEM 배지가 들어 있는 6-웰 마이크로 플레이트에 접종시키고(2×105 세포/웰), 5% 농도의 CO2 배양기에 37℃로 24시간 동안 배양하였다. 24시간 후, 각 웰에서 배지를 제거하고 농도별로 시료를 처리한 다음 24시간 동안 다시 배양하였다. 24시간 후, 세포배지를 수집하여 샘플을 제조하였다.
콜라게네이즈 활성을 유도하는 물질로 알려진 종양괴사인자 알파(Tumor necrosis factor, TNF-alpha, Sigma, USA)를 10 ng/mL 의 함량으로 상기 섬유아세포가 배양된 6-웰 마이크로 플레이트에 처리한 후, 타입 I 콜라게네이즈 어세이 키트(Amersham Biosciences, RPN2629)를 이용하였으며, ELISA 판독기(Bio-Tek ELx808™ Series Ultra Microplate Reader, 영국)로 450nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군으로 증류수를 사용하고, 측정된 흡광도를 하기 식 1에 대입하여 콜라게네이즈 활성 억제율을 산출하고, 그 결과를 하기 표 4에 나타내었다.
<식 1>
콜라게네이즈 저해율(%) = 100 - {[(A1-B1)-(C1-D1)]/(A1-B1)} X 100
A1: 대조군의 흡광도
B1: 대조군의 블랭크 흡광도
C1: 실험군의 흡광도
D1: 실험군의 블랭크 흡광도
구분 콜라게네이즈 억제율(%)
실시예 1 사과 캘러스 파쇄물 (200bar) 30.2
실시예 2 사과 캘러스 파쇄물 (500bar) 32.7
실시예 3 사과 캘러스 파쇄물 (1000bar) 45.2
실시예 4 사과 캘러스 파쇄물 (2000bar) 47.7
실시예 5 구기자 캘러스 파쇄물 (200bar) 33.5
실시예 6 구기자 캘러스 파쇄물 (500bar) 37.4
실시예 7 구기자 캘러스 파쇄물 (1000bar) 44.2
실시예 8 구기자 캘러스 파쇄물 (2000bar) 47.8
실시예 9 포도 캘러스 파쇄물 (200bar) 33.4
실시예 10 포도 캘러스 파쇄물 (500bar) 39.6
실시예 11 포도 캘러스 파쇄물 (1000bar) 40.6
실시예 12 포도 캘러스 파쇄물 (2000bar) 43.8
실시예 13 포도 캘러스 파쇄물 (2000bar)의 캡슐 제형 51.4
비교예 1 사과 캘러스 추출물 14.8
비교예 2 구기자 캘러스 추출물 15.4
비교예 3 포도 캘러스 추출물 14.5
비교예 4 포도 캘러스 파쇄물 (100bar) 21.8
비교예 5 포도 캘러스 파쇄물 (2100bar) 29.4
상기 표 4를 통해 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 실시예 1 내지 12와 같이 각각 사과 캘러스, 구기자 캘러스, 포도 캘러스를 200 bar 내지 2000 bar에서 고압 호모게나이저로 파쇄한 식물 캘러스 균질 파쇄물을 포함하는 경우, 동일한 식물 캘러스의 열수 추출물을 사용한 비교예 1 내지 3에 또는 파쇄 압력이 본 발명의 범위를 벗어나는 비교예 4 및 5에 비해 피부 주름 예방능이 현저하게 우수함을 확인하였다.
특히, 포도 캘러스 파쇄물을 한천으로 피복한 캡슐 제형인 실시예 13의 경우, 시료의 도포 시 외피가 함께 도포되면서 복합적인 작용에 의해 더욱 우수한 콜라게네이즈 억제능을 구현하였다.
(4) 티로시네이즈 억제능 평가
쥐의 색소세포(B16 melanoma cells)(한국세포주은행)를 이용하여 이소람네틴에 의한 타이로시네이즈의 활성 억제효과를 측정하고, 이를 멜라닌 생성을 억제하는 것으로 알려진 알부틴에 의한 세포내 타이로시네이즈 활성 억제효과와 비교하였다.
본 실험은 뮤라인 멜라노마(murine melanoma)(B-16 F1) 세포(한국세포주은행)를 10%의 우태아혈청(fetal bovine serum)(FBS)이 함유된 DMEM 배지로 6-웰 플레이트에 웰 당 1 x 10^5개로 접종하고 5% CO2 및 37℃하에서 세포가 웰 바닥에 약 80 % 이상 부착될 때까지 배양하였다. 이어 배지를 제거하고 시료를 적당 농도로 희석된 배지에 교체한 다음 5% CO2 및 37℃하에서 3일 동안 배양하였다. 배지를 제거한 세포를 PBS(phosphate buffered saline)로 세척하고, 이를 트립신으로 처리하여 세포를 회수하였다. 회수된 세포는 헤마토사이토미터(hematocytometer)(Tiefe Depth Profondeur 0.100mm, Paul Marienfeld GmbH & Co. KG, 독일)를 이용하여 세포수를 측정하고 5,000 내지 10,000 rpm으로 10분 동안 원심분리한 다음 상층액을 제거하여 펠릿을 얻었다. 이세포 펠릿을 용해 완충액(lysis buffer)을 이용하여 분쇄시키고 12,000 rpm으로 10분 동안 원심분리하여 상층액을 수집하였다.
이를 마이크로플레이트 리더(microplate reader)(Bio-Tek ELx8081U, 미합중국)로 492 nm에서 흡광도를 측정하여 세포 일정수당 티로시네이즈 활성을 구하였다. 상기 흡광도를 하기 식 2에 대입하여 티로시네이즈 활성 억제율을 산출하고, 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다.
실험군의 블랭크(blank)는 티로시네이즈 용액을 제외한 반응물, 즉 티로신, 캘러스 파쇄물 및 추출물, 및 인산나트륨 완충용액으로 된 반응물이며, 대조군의 블랭크는 실험군의 블랭크에서 캘러스 파쇄물 및 추출물 대신에 메탄올을 첨가한 것으로 하였다.
<식 2>
티로시네이즈 저해율(%) = 100 - {[(A2-B2)-(C2-D2)]/(A2-B2)} X 100
A2: 대조군의 흡광도
B2: 대조군의 블랭크 흡광도
C2: 실험군의 흡광도
D2: 실험군의 블랭크 흡광도
구분 티로시네이즈의 활성 저해효과 (%)
실시예 1 사과 캘러스 파쇄물 (200bar) 24.4
실시예 2 사과 캘러스 파쇄물 (500bar) 27.1
실시예 3 사과 캘러스 파쇄물 (1000bar) 30.4
실시예 4 사과 캘러스 파쇄물 (2000bar) 33.5
실시예 5 구기자 캘러스 파쇄물 (200bar) 26.7
실시예 6 구기자 캘러스 파쇄물 (500bar) 27.4
실시예 7 구기자 캘러스 파쇄물 (1000bar) 28.6
실시예 8 구기자 캘러스 파쇄물 (2000bar) 32.4
실시예 9 포도 캘러스 파쇄물 (200bar) 25.4
실시예 10 포도 캘러스 파쇄물 (500bar) 29.7
실시예 11 포도 캘러스 파쇄물 (1000bar) 30.1
실시예 12 포도 캘러스 파쇄물 (2000bar) 33.4
실시예 13 포도 캘러스 파쇄물 (2000bar)의 캡슐 제형 31.7
비교예 1 사과 캘러스 추출물 12.6
비교예 2 구기자 캘러스 추출물 9.7
비교예 3 포도 캘러스 추출물 12.1
비교예 4 포도 캘러스 파쇄물 (100bar) 22.3
비교예 5 포도 캘러스 파쇄물 (2100bar) 25.9
상기 표 5를 통해 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 실시예 1 내지 12와 같이 각각 사과 캘러스, 구기자 캘러스, 포도 캘러스를 200 bar 내지 2000 bar에서 고압 호모게나이저로 파쇄한 식물 캘러스 균질 파쇄물을 포함하는 경우, 동일한 식물 캘러스의 열수 추출물을 사용한 비교예 1 내지 3에 또는 파쇄 압력이 본 발명의 범위를 벗어나는 비교예 4에 비해 티로시네이즈 억제능이 현저하게 우수함을 확인하였다. 균질 파쇄 시 압력이 2000 bar 초과인 비교예 5의 경우 시료의 티로시네이즈 억제능은 충분하였으나, 시료에 변색 및 변취의 성상 변이가 발생하여, 외용제용 조성물로 적용하기 적합하지 않았다.
(5) 피부 미백능 평가
실시예 14 및 비교예 6 내지 7의 방법으로 제조한 영양크림을 기미, 주근깨 및 색소침착증을 갖고 있는 건강한 성인남녀 100명을 대상으로 피부색의 변화를 크로마메타(Minolta CR300)를 이용하여 색의 밝기변화(△L)를 측정하였다.
기미, 주근깨 및 색소침착증을 갖고 있는 건강한 성인남녀 100명을 무작위로 20명씩 3 그룹(A, B, C)으로 나눈 후, A그룹을 대상으로는 시험군 1을, B그룹을 대상으로는 대조군을, C그룹을 대상으로는 비교군 1을각각 1일 2회씩 12주간 도포한 후 피부 밝기 변화를 측정하였다. 그 결과를 표 6에 나타내었다.
피검자 실시예 14
A 그룹		 비교예 6
B그룹		 비교예 7
C그룹
1 6.2 5.7 4.4
2 5.4 4.9 3.4
3 5.6 4.8 3.0
4 6.6 4.5 2.4
5 5.7 4.1 3.6
6 6.6 5.7 2.4
7 6.3 5.9 4.1
8 5.1 5.2 3.3
9 6.8 4.7 3.4
10 6.1 4.2 3.8
11 4.9 3.8 2.6
12 6.2 5.4 4.5
13 6.3 6.2 4.2
14 5.6 4.1 3.4
15 5.8 5.0 3.7
16 6.3 5.3 2.2
17 6.7 5.4 2.5
18 6.9 5.2 3.5
19 6.5 4.9 2.9
20 6.1 5.1 2.7
평균 6.1 5.0 3.3
상기 표 6을 통해 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 실시예 14 같이 포도 캘러스를 200 bar 내지 2000 bar에서 고압 호모게나이저로 파쇄한 식물 캘러스 균질 파쇄물을 포함하여 제조한 영양 크림의 경우, 비교예 7과 같이 비히클(Vehecle)만 처리된 대조군에 비해서 현저한 미백 개선능을 보이며 특히 포도 식물 캘러스의 열수 추출물을 사용한 비교예 6에 비해서도 피부 미백능이 유의하게 우수함을 확인하였다.
(6) 항산화능 평가
자유라디칼인 DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)에 대한 소거능을 측정하여, 항산화능을 평가하였다. DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)는 색을 띄는 라디칼로, 이를 이용해 시료의 라디칼 제거 능력을 직접 확인할 수 있다.
실시예 및 비교예에 따른 시료 50ul와 100 μM DPPH 1㎖ (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)용액을 혼합시킨 후 30분간 20℃(상온)에서 반응 및 항온유지(incubation)하였다. 남아있는 DPPH의 양을 517nm의 흡광도 측정을 통해 파악하였다.
반응이 끝나면 하기 식 3에 의해 시료의 자유라디칼소거능(free radical scavenging activity, %)을 산출하고, 결과를 표 7에 표시하였다. 이때, 양성대조군으로는 아스코르브산(ascorvic acid) 400ug/ml을 사용하였다. 또한, 블랭크로는 정제수를 사용하였다.
<식 3>
라디칼 소거능 (%) = {1-(시료첨가구의 흡광도 /무첨가구의 흡광도) * 100 }
구분 자유 라디칼 소거능 (%)
실시예 1 사과 캘러스 파쇄물 (200bar) 80.2
실시예 2 사과 캘러스 파쇄물 (500bar) 83.6
실시예 3 사과 캘러스 파쇄물 (1000bar) 88.5
실시예 4 사과 캘러스 파쇄물 (2000bar) 90.3
실시예 5 구기자 캘러스 파쇄물 (200bar) 77.2
실시예 6 구기자 캘러스 파쇄물 (500bar) 80.9
실시예 7 구기자 캘러스 파쇄물 (1000bar) 84.3
실시예 8 구기자 캘러스 파쇄물 (2000bar) 89.6
실시예 9 포도 캘러스 파쇄물 (200bar) 82.6
실시예 10 포도 캘러스 파쇄물 (500bar) 85.3
실시예 11 포도 캘러스 파쇄물 (1000bar) 87.3
실시예 12 포도 캘러스 파쇄물 (2000bar) 90.1
실시예 13 포도 캘러스 파쇄물 (2000bar)의 캡슐 제형 88.8
비교예 1 사과 캘러스 추출물 50.4
비교예 2 구기자 캘러스 추출물 38.1
비교예 3 포도 캘러스 추출물 40.4
비교예 4 포도 캘러스 파쇄물 (100bar) 61.2
비교예 5 포도 캘러스 파쇄물 (2100bar) 77.4
대조군 아스코르브산 80.7
블랭크 정제수 0
상기 표 7을 통해 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 실시예 1 내지 12와 같이 각각 사과 캘러스, 구기자 캘러스, 포도 캘러스를 200 bar 내지 2000 bar에서 고압 호모게나이저로 파쇄한 식물 캘러스 균질 파쇄물을 포함하는 경우 및 캡슐 제형인 실시예 13의 경우, 동일한 식물 캘러스의 열수 추출물을 사용한 비교예 1 내지 3에 또는 파쇄 압력이 본 발명의 범위를 벗어나는 비교예 4 및 5에 비해 항산화능 현저하게 우수함을 확인하였다.
특히, 본 발명의 실시예 1 내지 13의 시료는 모두 양성대조군인 아스코르브산과 비교하여도 현저하게 우수한 라디칼소거능을 구현하였다.
(7) 플라보노이드 함량 평가
실시예 및 비교예의 시료를 각각 10 ml로 준비한 후, 0.2um syringe filter로 여과하여 검체를 준비하였다. 총 폴리페놀 함량은 Folin-Denis법(Gutfinger R. 1981)을 응용하였다. 각 시료의 1 mg을 증류수 1mL에 녹이고 증류수로 10배 희석한 희석액 2 mL에 0.2 mL Folin-Ciocalteu's phenol reagent를 가하여 혼합한 후 실온에서 3분간 방치한 후 2 M Na2CO3 2 mL을 넣고 1시간 반응시킨 후 상등액을 microplate reader로 725 nm에서 측정하였으며 gallic acid를 이용하여 작성한 표준 곡선으로부터 함량을 구하였다. 그 결과를 하기 표 8에 나타내었다.
(8) 테르페노이드 함량 평가
실시예 및 비교예의 시료를 각각 10 ml로 준비한 후, 0.2um syringe filter로 여과하여 검체를 준비하였다. 각각의 시료를 -20℃ 에서, 48시간 동안 동결건조한 후, 동결건조물을 석유 에테르 (60-80 "C)로 추출하였다. 추출물을 여과, 농축 후 벤젠 에틸 아세테이트 (99 : 1)를 용매로 사용하여 실리카 겔 C상에서 TLC로 농축물의 분취량을 분석 하였다. 시료는 유리 칼럼 (2m Х 5mm OD)을 사용하여 가스 액체 크로마토 그래피 (Shimadzu GC-7A, Kyoto, Japan)로 분석하였다. artemisinin을 사용하여 표준 곡선을 통해 정량화 하였으며 Arteannuin-B 함량은 HPLC에서 메탄올 - 물 (80:20)을 용리액 (0.8 mL/min)으로 사용하여 측정하였다. 결과를 하기 표 8에 나타내었다.
플라보노이드 함량 (mg/L) 테르페노이드 함량 (mg/L)
실시예 1 178.55 42.15
실시예 2 223.44 45.48
실시예 3 267.89 52.22
실시예 4 303.21 56.31
실시예 5 163.63 38.66
실시예 6 186.59 42.11
실시예 7 200.06 57.67
실시예 8 254.64 73.32
실시예 9 201.66 33.54
실시예 10 264.38 54.22
실시예 11 297.69 66.45
실시예 12 321.28 78.83
실시예 13 110.06 31.22
비교예 1 83.32 10.23
비교예 2 61.55 11.25
비교예 3 88.54 12.82
비교예 4 91.32 22.33
비교예 5 93.27 27.13
상기 표 8을 통해 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 실시예 1 내지 13은 모두 비교예 1 내지 5에 비하여 플라보노이드 및 테르페노이드와 같은 피부 유효 성분의 함량이 현저하게 우수하였다.
(9) 제형 안정성 평가
실시예 및 비교예의 시료에 대해, 빛에 대한 안정성을 하기와 같은 방법으로 평가하였다. 각 시료를 하나당 30ml씩 분취하여 4개 준비한 후, 차광 및 투광 용기에 담아 조도 1000±200lux, 온도 25 ±2℃(상온)로 유지되는 항온기에 보관하여 2주 간격으로 고속 액체 크로마토그래피를 사용하여 분석하였다. 고속 액체 크로마토그래피에 의한 레스베라트롤 분석을 위하여 각 시료 0.1 그램을 취하여 10 밀리리터의 100% 순도의 메탄올에 용해시킨 후 초음파 분쇄기로 10초씩 3번 분쇄 추출하고 12시간 동안 추출하여 원심분리와 0.2마이크로미터의 유기용매용 나이론 필터를 통과시켜 검체액을 제조하였다.
검액 및 표준액 각 10 μL씩을 가지고 아래 조작조건으로 액체크로마토그래프법에 따라 시험하여 레스베라트롤의 피크면적 AT(test area: 검체 시료의 피크 그래프 면적) 및 AS(AS: standard area: 표준 시료의 피크 그래프 면적)를 측정한다.
<식 4>
레스베라트롤(C14H12NO3)의 양(mg)=레스베라트롤 표준품의 양(mg) X AT/AS
[조작 조건]
검출기 : 자외부흡광광도계 (측정파장 305 nm)
칼럼 : 안지름 4.6 ㎜, 길이 15 ㎝인 스테인레스관에 약 5 μm의 액체 크로마토그래프용 옥타데실실릴화한 실리카겔이 충전된 칼럼 또는 이와 동등한 칼럼
칼럼온도: 실온
이동상: 0.1% TFA water : 아세토니트릴 = 70 : 30
유량: 1.0 mL/min
제형 중 레스베라트롤 잔존량 (% of remaining)
Light 시간 실시예 14 실시예 12 비교예 3 비교예 7
빛 차광 / 노출 0주 100 100 100 100
빛 차광 2주 100 91 84 87
빛 차광 4주 98 85 69 75
빛 노출 2주 93 77 55 61
빛 노출 4주 76 55 22 34
상기 표 9를 통해 알 수 있는 바와 같이, 실시예 12에서 제조된 포도 캘러스 파쇄물에서의 레즈베라트롤 잔존량이 비교예 3의 포도 캘러스 열수추출물 에서의 레즈베라트롤 잔존량보다 높게 유지됨을 관찰할 수 있었다. 또한 크림 제형에서 안정성을 관찰한 결과, 실시예 14와 같이 파쇄물을 한천으로 피복한 캡슐 제형에 적용했을 때 레즈베라트롤 안정성이 현저하게 개선됨을 확인하였다.
본 발명의 단순한 변형 내지 변경은 이 분야의 통상의 지식을 가진 자에 의하여 용이하게 실시될 수 있으며, 이러한 변형이나 변경은 모두 본 발명의 영역에 포함되는 것으로 볼 수 있다.

Claims (10)

  1. 사과 캘러스, 구기자 캘러스, 포도 캘러스 및 이들로부터 유도된 체세포배로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상인 식물 캘러스의 200 bar 내지 2000 bar 범위 고압 균질 파쇄물을 포함하는 것을 특징으로 하는 외용제용 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 외용제용 조성물은 상기 고압 균질 파쇄물 파쇄물 0.1 중량% 내지 80 중량% 및 부형제 20 중량% 내지 99.9 중량%를 함유하는 것인 외용제용 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 외용제용 조성물의 제형은 화장수, 세럼, 에센스, 로션, 크림, 팩, 패치, 마스크 시트, 젤, 연고 및 캡슐 중 어느 하나인 외용제용 조성물.
  4. 제3항에 있어서,
    상기 외용제용 조성물의 제형은 외피가 생물 유래 중합체로 형성된 캡슐이고,
    상기 생물 유래 중합체는 한천, 펙틴, 알긴산, 알긴산염, 카라기난, 커드란, 전분, 젤란검, 글루코만난, 로커스트검, 구아검, 타라검, 아라비아검, 잔탄검, 히알루론산, 카라야검, 트래거캔스검, 라치검, 덱스트란, 셀룰로오스 및 이들의 혼합물 중 1종 이상을 포함하는 것인 외용제용 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 외용제용 조성물은 피부 보습용 화장료 조성물, 피부 주름 예방용 화장료 조성물, 피부 주름 개선용 화장료 조성물, 피부 미백용 화장료 조성물, 피부 탄력 향상용 화장료 조성물 및 피부 톤 개선용 화장료 조성물 중 어느 하나인 외용제용 조성물.
  6. 사과 캘러스, 구기자 캘러스, 포도 캘러스 및 이들로부터 유도된 체세포배로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상인 식물 캘러스를 배양하는 단계; 및
    상기 식물 캘러스를 200 bar 내지 2000 bar의 압력에서 고압 균질 파쇄하는 단계; 를 포함하는 특징으로 하는 외용제용 조성물 제조 방법.
  7. 제6항에 있어서,
    상기 고압 균질 파쇄하는 단계 이후,
    외용제용 조성물을 화장수, 세럼, 에센스, 로션, 크림, 팩, 패치, 마스크 시트, 젤, 연고 및 캡슐 중 어느 하나로 제형화하는 단계;를 더 포함하는 외용제용 조성물 제조 방법.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 제형화하는 단계는 외용제 조성물을 외피로 피복하여 캡슐화하는 것인 외용제용 조성물 제조 방법.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 캡슐화는 상기 외용제용 조성물을 에멀젼화한 후, 생물 유래 중합체를 용해한 용액에 중에 분산시켜, 캡슐 외피를 형성하는 것을 포함하는 외용제용 조성물 제조 방법.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 생물 유래 중합체는 한천, 펙틴, 알긴산, 알긴산염, 카라기난, 커드란, 전분, 젤란검, 글루코만난, 로커스트검, 구아검, 타라검, 아라비아검, 잔탄검, 히알루론산, 카라야검, 트래거캔스검, 라치검, 덱스트란, 셀룰로오스 및 이들의 혼합물 중 1종 이상을 포함하는 것인 외용제용 조성물 제조 방법.
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112941010A (zh) * 2021-01-30 2021-06-11 湖北嘉弘福科技有限责任公司 一种植物愈伤组织功效滤液和外泌体提取方法
FR3117034A1 (fr) * 2020-12-04 2022-06-10 Biospectrum, Inc. Lysat de cal comprenant une teneur élevée en métabolite de cal et son procédé de préparation
KR102461314B1 (ko) * 2021-10-27 2022-11-01 주식회사 바이오솔루션 사과 캘러스 유래 엑소좀을 포함하는 피부상태 개선용 조성물
CN116636460A (zh) * 2023-05-29 2023-08-25 江南大学 一种高抗氧化活性的宁夏枸杞愈伤组织诱导培养基及诱导方法

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