ΜΙΊ/m ΛΪ.ΕΝ5, MEMNGOKOKKVSZ-l’.REüETÍ' POUSZACCHAKín ÉS 5-F.HERJE XOXJl GAi f’M ÁT FARI AlAíAZÚ \ AKCÍNA
A lálálofeny áhaiáuosságbaa a gyógyászat, kepkrétabbat) a mikrobiológia, immunológia, vakcinák és a 5 bakteriális pafögének okoz* i < u xfes immnmzáslássai történő megelőzésének rétére tartozik.
A AMsmi'z'ií «uínmgkúfw a bakteriális meténg itta e> szepszis elsőszámú okozója a világszerte, Az utóbbi harminc· évben az sndesuikns metüngokokkasz betegség előfordulása, 100.000 személyre vonatkoztatva, a fejkítt világban 1.-5,. :msg. a fejlődő világban ÍÖ--2.S eset [Retdo és mtsaí, Fed, íafect. D-is. I Iá... 643-657 (1955)1:, llrvány esetén, a menmgokokkusz betegség előfordulása - 1 .ÖŐÖ.ÖÖO fóré vonatkoztatva, elérheti asz ezret Az lő Egyesült Áilasnokbaa évente mintegy 2.600, a fejlődő országokban átlagosan 330.000 bakteriális ssmíngBszes· eset fordul elő, A halálozási arány M és 20% közötti.:
A patogén meníttgokokkuszokat, a miloOorgaítizmus külső metnhránlelszlnéhez kapcsolódott poiiszaeabarid-kapszala burkolja. ííarmiuc különféle meaiagekokkusz szerocsoportot azonosítottak: a kspsímiáris pohszaoeharid Innöunöiőgísi specíűehásánsfc alapján (I'raseh és tntsai., Rév. íufoct Ois. 7,504-510 (1.98.5)3, E haimfee szsröcsoportbol őt ··· az A. fí, C, W135 és Y. okozza a ménisgokokkusz betegségek legnagyobb -részét. Az „A szmesoport tehető felelőssé a legtöbb járványos megbetegedésért A „il’, ..C és ,A okozsn.az endemikus betegségek ős a lokálizáií kitörések túlnyomó részéi
Az emberi orr-garaíürög nyálkahártyája a A’ó/wiwfe »etii»gzí/& egyetlen Ismert természetes rezervcárjá. A kolonizáeíö a nyálkahártya-sejt és az orr-garaíüreg szubepitétsáiis szövetének külső telszmén történik. A mesingofcokknszofc hortlosása: eltarthat hónapokig, -A rneningokokkuszok közvetlen éraúkezéssel vagy cseppfertőzd» Ma® tesjedaek. Á «wtngokokkuszok behatolása úgy történik, hogy a nyálkahártya epitélíumán endíXítOii'. x νκΟί'^Λί'Ι beknxttku/< tt. mtOz vsa? jitwő r* A ga_d. őemolo tncn 'gok' kkus/ ok clto< védekezése a.komplement által km vetített bakterioiizistől fogg. A komplement által közvetített bakteriolfeisért: felelőSv szsrum-andtestek a külső kapszulám políszaccharid nagy része ellen irányulnak.
A liíípszakiris pellszseehartd ellen immunválaszt kiváltani képes, mmagokokkasz-eredefó po&sacchartdokmi alapuló vakcinák már ismertek. Ezen antitestek képesek & meningokokkuszok speciltk® szeroesoportfa-i elleni koröplment által közvetíteti bakrerlolfeist kiváltani, A meamgokokknsz-eredetn po&zae.chnrldokat tartabnazó vakektáteöl már kimutatták. hogy bár gyermekekben ős felnőttekben hatékonyak flfeltída és mísal, New Eng. 3,. Med. 297, <Aó-691 (199?g Artenstein és mísal, New Eng. j, Med. 282,417-420 (1997)3, a hatékonyság az újszülöttekben és fiatal gyermekekben korlátozott [Remgolá és mtsai, -táncét.2,. 114118 (19:85)3. Fiatalokból álló populációnak, egymást követő dózisokban beadott políszaccharid gyenge rthsgho: választ, vagy semmilyen válasz? sem váltott ki [Gokfeehneiáer és mrai, J. Intőét. Dis. 128,769-776 (1973);: Goid ás mlsai, J. iafees. Dis. i 36. 5.31-S35 (1 $77)]. A íueningokokknsz-srodelő pohszacchürtdot tartalmazó vakolnák ahal kiváltott vedelem időtartama nem hosszú, és a becslések szerint felnőttekben és 4 évnél idősebb gyertnekek.35 ben 3-5 év (Brartdí ős Artemvo' í bu.ict. Díx 131.567-S72 (I9't5); Siiybíy és srtsal, X. infect Dis, 192. Sól-dök (19S0!; Ceesey és intsai,, J. Infect Dis, 167,1212 -1216 (199 3 ) j, Az 1 és 4 óv közötti korú gyermekekben a védettség Időtartama kevesebb, mbt 3 év [Reingold és mtsas., Láncéi 2, 114-1 I S (Í.9S5)]:,
Fodszaccbsridok nem képesek kötődni a fő hiszlokompattbíittást kunartev molekuláihoz - amely folyamat előfeltétele az aMigőn-bemutatásaak és a T-helper limfoeiták serken tcsenek. azaz a pobszaechartdek T49 sejtektől nem függő aníigősok. Foliszácchnridök a T-helper limfectiák segnsege nélkül képesek sértettem a B992óíi-n5bl7SG:
P0302999 llmfecitákaí. A T-sejtektöl függetlenül történő, ö-imnoeii&k serkentése eredményeként, az ezea antigénekkel végzett femmnizálás; köveiéért hiányozni fog az immunrendszer „emlékezésének” Wttkátósa. A poiiszaocharíd smigéuek képesek igen hatékony, ^'-sejteki’öí független válaszokat kiváltani felnőttekben, tie e T-sejtektöl független váfeszífe gyengék a csecsemők és fiatal gyermekek éretlen ínrínunrcnászerébert, ífe a poks,,uArtí'iltikn texaleue·' kapcsoltuk fehéré»» kkulákiM? pénoröo.o.< vag\ „horáozofeőcrjek''h akkui t-seitekíoi ütegeken, pohs/aeckard amigem*-. ytafekíthatok J-sejtekte! függő anogenekko, A koajagáttanot tartalmazó vakcina poiiszaccharid-kumpotmasét megkötő B-se;t akuvaihafe a kogtsgslt honiozofehérje valamely részét képező pepiidre spectiikus T-hdper sejttel. .A hordozórehérjere adott 1-heipe; sejtek, általi válasz a poteacchartd efletti tóitesi-imaclés Tokozására szolgál,
KI A „B” poliszaccharid-szefoesöpsxrtrói kimutatták, hogy az emberi populációban gyengén immunogén (Wvle és mts&i., J. Infect. Dia.. 126, 514-522 fl§72)'j. E szerocsoport poltsaccharidjéttek fehérjékkel történő kémiai összekapcsolása nem eredményezte .az lmm»váiasz lényeges mértékű változását laboratóriumi állatokban (jemíisgs és Lugowskí, J. Immunoi 127, 1011-1818 (1881)1 a? e szetocsoportra adott gyenge munuma· feszt fellétslezhetöen az okozza, hogy a „B poiiszaceh&tid szetocsoport és a gazda polisztitiók glikoproteinjei 15 pefeati deg>ep κ'λ/’S .«Μονή 5x- x;?·.. t*·mtwmsts hasé 'k-og ' gsZittem mez
Meuiugokekkösz elleni:, polfezaceharte oerocsoporton alapuló koujugsii vakcina az irodalombig mór ismeri. B mosovgfens vakcina erős, timkeionálfe antitest-választ vált ki a „€ szeroesoportba tartozó Λ1 wnmgiífeti törzseken lévő kapszuláris pofeastebariő ellen, ilyen, vakcina csak .a ozeroesononba tartozó msi u ο só- . t u -'„χ. o t bi s, >\o> c. cr A^epes vedfemU irt» \m
Campagne <3 és mísai (bediatile feíeetieus Disease Journal i.20Ö€:); 19, 14-1-1581 raeaingoooceus A+G pohszaeharid és dtfiátia-ioxteö konjügáhimvakcmát (ÁienD) tárnak fel. A MenD-t stabilnak felültük gyermekek, kőidben Nigerben, és az mwmözátós jelentősen nagyobb fijnkcionális antitest-aktivrtáAfsg. vezeteti, mint a megfelelő :miisz.acfearid-vakclna esetében, lói Q. h. és misai jöeveiopmeste is. biofogicals (208(5): 183, 259-264] ieíravalens konjugá-umvkkcmst tárnak fel, amely kölört-külő», áiBöria-texolöhoss konjugált, Neisseria mertíngitidts Á-ből, C-böl, W135-bŐl és V-M elnu'teott pohsmcfemcooktt írrt.tlrn·’ Λ szer/ek ömouvoNavlk'l afeiímtzswal konsugalt feoaüüásí í mm le ntnefee hatAmvar '«iV’ia'it'k s. ,> vuban e- a \ofett pelrtz,clarulte -i tehavaiem kon;j ugámnivakcsiába®.
.Lamh D. ti. és ártsák (pevelopsnenis is bsoiogicals (2600); 183, 251-258) a Lei Q, P, és. mtsaj által is38 mérteiéit xnentegococcus pollszachariő és ótfiéria-tosoid alkotta kortjugánmvakcma kapíllatis-elektroferézis arfehziség írják: le..
Perktós 8. Á, [.íournatef feh .American Módiéul Assocíaltett (288Ö): 283, 2842-:2843) ismerteti a rendel«.Λ,' e i ΐ'ΛΛΠ’Λ^α'.ρΙίν. Jj’d'lm i a te- Kfe íren m -vnn g < un \akcmat a amelyeket afer kifejlesztettek és amelyet tnég ki kell fejleszteni, köztük A-, C-, W13S- és, Y-koniugáiuiHvakcmaeat is.
A már meglévő, ^^fogofe?kfewz-s#ed«tá poiiszaecharidőri .alapuló vakcinák használhatósága korlátozod a fiatal gyermekek köreben és felnőttekben nem biztosit hosszé ideig tarte védelmet,. Az egyetlen elvan mettbgohekkusz vakcina, amely rőt kunotatiák, hogy képes minden, reefengokokkusz általi fertőzés veszélyének knett csoportban - xgy a gyermekek esetében tó - hosszú ideig tartó védelmet kiváltóm, az Aí nmöőtgrtmfe egyetlen szeroesoportjubói szármázó poHszacehsddon alapul, és más szerocsopefe sifea nem biztosít védelmet.
<>92ő8-B9bl/SÖ
P8302989
Így,. igény mutatkozik széleskörű, bosszú Ideig tartó véúelraal biztosító, mcnmgpkokkusz konjxtgált vakcinára a mettlagohotosz betegség elleni védekezéshez a rsíeríhtgefcök&usz álfeth fertőzés veszélyének kitett gyermekek és hritsőliek számára. A tálálutásv szerinti mukiyafeus ureamgokokkusz-eredetü polis2acehsxidokkal e probléma megoldható oly mádon, hogy az .V »«?rtmgií«&s fő szeroesopor-jaiból származó hnmunogén políszacch&ridokat, boKlozófehéíjékkei tőrtérső korgugáhatásskl T-sojtektol föggó a-rdgásekke .alakítjuk és ezeket vskekuikészítrttéoyekbe építjük be.
_< 'iOi í·'·'1’ 'Jí *_5b t>QG rtíi’n’ 1 l_o
A találmány tárgya négy kSfönállö fehéfje^odszacchmd.konjugáium immunolögiatiag hatékony menyayiseget tartalmazó. úrultrvuleas jueuiugoeooeus-vskeiae, embert A, otoítiárghóéls általi fertőzés elleni védelemiá ben K«rten>» alkalmazásra. amelyben, a kofeugstumuk mindegyike különbözik bordozofehérjéhez kmyugált kapszulán? fvhszacharidot tartalmaz, ..és-.ahol a kapszulám pobszacharidok ;V. w»?«gtth&s A, C, W-135 es Y ve oi.-op-'vtaaso «. o. h.ot á est»<'bt t, \> u h<> dorufet* . s v dikert,-tevődd gr CivriN
A leírásban ismertetünk két vagy több poltszsceharid. és valamilyen ieherie konjugátumát tartalmassáimmunológiai késztfcnényekt, atnelyben a konjugátursok: mindegyike /V. mcttingirtífís-eredetü kapszulám
IS poliszaceharid valamilyen honiozőtebójével képzelt kss-ugátymá· tartahuazza.
A leírásban ismertetünk továbbá: két vagy lőbbpobszíioeharid és valamilyen fehérje konjngtenát tartalma-zö immunológiai készítményt, arnelybesi a koajugástírtiok mindegyike zV z??t?»>jg.úíí/« különböző szeroosoportjaiból származókapszulám pobszam&arid vaferöilyeu Ivs-dozófehórses el képzett konjugátomát tartalmazza.
,3 találmány tárgyát patogén őúA.w'í'ö mesmgífnfe ák&l okozott betegség kezelésére szolgáló, meningo· 2Ö kokkasz-eredetű poiiszaceharld és fehérje kosjugáiustsát tartateasó vakcinák képezik, A találmány tárgyát mnltivalens. meairgokokhosz-vakcinák, képezik, amelyek 2-4 elkülönült, fehérje-pohszaccharíd koajugámmok tmmtmoiógiailag hatásos mennyiségét taríalínaisza, ahol -a kenjugátamok mindegyike különféle kapszulán? poliszaecharid ós hordozófehétje konjugátumát tartalmazza, és ahol az egyes poliszaecharidokaí az A. C. W-l'35 es ú «χίΟκνοροι tőkből s,.ti ha'o AigszuljTts pobscuduóul A korul vala,-’buk hu í.bol i boron, ofebótje rags dlfsér ía-toxoid vagy CRM19?.
A. leírásban Istuerfetutsk továbbá multívaiens, tnertíngokökkuszröredebi pölíszaeossrtá-lehsrje készítmény előállítására szolgáié eljárásokat, amely eljárások: végrehajtása sorás patogeu Muksar/ö wriffigWA-böl két vagy több kapszuiárls poliszaccharidot tisztítunk,a tiszhíok políszsoehttridokat egy vagy több hordozóiéhériével koniugáltotiuk és a konjagátumokat. kombinálva mhidvaleaa, röetilugokokkasz-eredető poliszaeehsríd30 iehérjtí készítményt Részltünk.
A találmány tárgyát képezi továbbá eljárás ember <V. mertmgttfdíS általi fertőzésével: szeshbent védelemben történő alkalmazásra szolgáló vakcina előállítására, /k-Z/ofaarro. éngr (s): hordozéíehérje: és ?V. .wnfeg&ú&s A sacxoesepörtjából származó kapszuláris poliszsteharld köíjjugátursát' (ű) bordozófehétje és A .v!ív;.ó;g;;';h;.< C szeröv sportjából származó kapsznláris poliszachand kpsűugátoát;
fik) hordozófebégs és < vtesösgúhfe? W-135 szeroesopőrdából származó kapszulám poliszae&arld kotgugáíiunáí; és (ív) hordozófehérje és .A tfsevúngúGk's Y szetocsoportjóból származó kapszulám pohszacharid 42 korrjagáíamát alkalmazzak;
Y>2őá-159ol SG to A a; J, íos urtiHizo 5 k w t Mi row kuké ku o’ fe k κ u oelíttM ex a xra tgtttrack k>nnbtsnlasát alkalmas hordozóval,. higiíószerrei -vagy exeípísnssel keverékbe®, ahol s boráozőfetóje vagy dritérs»tasoiá vagy CRM; 97.
A leírásban ismertetőnk továbbá eljárást Λ’. w#t«gtzi<Zis-eredetfi kapszuláris poltszsedtóá «Seat tm5 manválasz ioáükálására, amely eljárásban a találtnánv szerinu immunológiai.tórtimény immunolögbilag hatásos níesmyiségét srnfecmek vagy átlátnák aránk be.
Λ 1 va- xt 5 μ 3« tótunk továbbá vhora< 5 ,μ <0* «{' A^hc „erto/cxra Jogékor v tr;bcr rrays aAk re deimére; -amely eljárásba# a találmány szerinti vakcina iatrautmlógtatlag.'hatásos mennyiségéi embernek vagy állatnák sójuk be.
A leírásban .ismertetünk két vagy több fehérje-pölíszacsharid konjogátiínsoí iariátraazó imniunológiaí késczíraráiyek&h «melyben a konjngátutnok mindegyike kapszulázik pohteaecbartd· vstatíyea hordozóíehétjéveí képzett koajingétarnát tartalmazza. Égy például rámerteiask két vagy több .'kapszrááds potaaccharid kei. vagy több hordozőfehérjével képzett konjngátuxnát tartalmazó; készítmények»!:is.
IS Kapszulára poliszaccharidok elkülöníthetők a. szakember számára isnwf standard eljárásokkal (ref.ji. A találmány szerint előnyösek a N tneningindis A, G, W-135 és Y szerocssíporíokból előállított feapszoiárrs poliszaccharidok.
A talál-rráty előnyös megvalósítási módjában, e meningokokkssz szerocsopcrfekbó! készüli knajagátumokat elkülönült folyamatokban áll ifjúk elő és ezeket egyetlen dozfeismáha; fomtulázzuk. Féldául, az zk, C, W-135 és Y szerocsoportokbol tisztított kapszulám poliszaccharidckat eíkülösSifen riszííJjnk:.
A találmány előnyös megvalósítást módjában, a hordozófehétjébez történő kmíjagállgtás eiütt a tíszttfetí G i-A ö^p'boctt’ál” x A \t tik 5 <*’dn ns O’vos megx A s <x> noOjr'-í! a ?é
W8:btgf?rá«r zk, C, W-135 és Y szerccsoportjaibóí származó· kapszulám poliszacchartdokaí gyenge oxidatív kórühuesyek aMalmazásával részlegesen depolimerzáljuk,
A gölíszaceharídok depolimerizációja vagy részleges áepclirasrizácíója után következhet az aktiválási lépés. A. bírás szerinti értelemben, az ..aktiválás” a poüszaccitarid olyan kémiai kezelését jelenti, -amelyben a hofeozófehérjéve! reagálni képes kémiai csoportok jönnek. léire. A találmány előnyős megvafesttási módjában, az eljárás sorás fiziológiai sóoldstban ípH 5,0 * 0,1) a&pinssv-dxbidraziddaJ körülbelül két órás kezelési: végzünk 15-3Ö“C-en. Az egyik aktiválási eljárás, az US 6.965.714 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi iratban: wt leírva,
Aküváiás után. a kapszulára políszaccbaridökáí égy vágy több hötdozófehérjével konjugáltathatjuk. A találmány előnyös megvalósítási módjában, az egyes kapszstárís pefeaceharídokat egyetlen fehéíjcripnssal küiön\,<lo~t Kor ox·., fet,ok \ klin.'tv e’cnvO' n i.g\ n»s Juvj η·\ρ\ίθ m b roG'tra tntix A G 3> ex Y szerocsopopgaiból származó kapszulám pokszaechariáokaí azonos fehérjstijwsal, külön-külön konjugáh&tjuk.
Hordozőfehétjék lehetnek inakiivált. baktéríumerederá loxínok, például dífiéria toxoid. CRM197, tetanusz toxoid, periussb toxoid. £. coli LT, A. co/í ST, és P^adomönas aeruginosti oxotoxlojs, Baktériumokból szarra uo körió membmn fehérjék, például ,,C” feirió raeínbrattkoruplex tOMPCk poríook, trattszfinmi kötő ráérek ρναηο1..!-, nnetmi'kok-'Vxz-e.cdelu \ l/te'K <P->p'> .agx pnetmohok'w sd'vun iebene’e (PsaA), szintén afelmazlratók. iferdozófebérjék más léhétjék, például ováibasma, kötáősestga-oredets hemoeiamn ΑΓ ) borjóerederá szérumalbumin ÍBSA) vagy a tubetkulin tisztított fehérjeszármazéka tPPD), is
99300-13961. SG »02999 tehetnek. Előnyős, ha a herdozófehériék nem toxikus és oem reaktív, megfelelő ntennylségbea és tisztaságban elérhető fehérjék. A hordozöfebétjék standard konjugációs eljárásokban alkalmazhatók kelt. hagy tegyenek. A találmány előnyös msgvaíösitssí mödjábap, '{jot^e^awrerfe jf/jsármíte tenyészetekből tisztítóit,, és kóntíaí úton, formaldehiddel rtetoxiííkáit difoéria toxhit alkahnázasli hordczőféhérjeként.
A kspszaláris pohszaccharid heKfezófelteijéhez törtéül konlugáltatósa «ián, a pcfeszaecharidl-fodteije ksngjgáhtmot feüíoníete eljárásokkal hszdífesguk: fa poKszaccbaríd-féhége konjugátuxn tekintetébe» foldásithaijakj, A tisztítási lépés «gyík célja a jmiisxaccfesrid-fenerie temingátnínekröl elkülöníteni: a nem kötött poliszacchsridoí, Az egyik bsstításí eljárásban snjmőjámristf’díát jelenlétében ulteaszűtést végzünk [US 6.146,902 sz, amerikai egyesük államokbeli szabadalmi irat]:, Esetleg, az: eí xtem magáit: fehérjétől és: peéiszuoebaridtól a lő kosíugátumokat bármely számú standard eijátással - ideértve, többek között, a méretkízárásos kzoKtaíográtiál, htteföb-teötes&áhatásí kiwrsiográSát vagy ammóniumszolfattal végzett feakcfenálást - válasrihaájuk el (lásd például, Andersen és mtsai.. 1 Immunot. 137, 1181-1186 0ö86y Jeonmgs és Lugowskk J. Immunot j.2.7,
1011-1.018 (IÖ8 I }j.
A políszaecharid és fehérje koajugáltatása öten, a különléte poliszaecharid-fohérjs koRjugáistnok komit 5 btsáiásával elkészítjük a találmány szerinti imtnauolögíui készítményeket A leírásban ismertetett immunológiát készítmények két vagy, egy vagy több hordozófehérjéhez konjugált, kapszulárís pohszacebsridot tartalmaznak. A leírás szerint az Λ’ wew?gÍ.’Íí& A és C szerocsoportjaiból származó, dihéria toxoldhoz küíön-kűión konjugált kapszuláris poliszaccharídokat tartalmazó, blváiéhs imáutRöIegí:® készítményt állítunk elő. Előnyösebb, ha a nhdmam. előnyős megvaiősííasi utódjában a? V A, ( , V,-175 es \ szesoesopnt inból származó, dfeteria toxmdhez külön-kűlőn konjugált kapsztdárís poliszacchanüokat tartalmazó,. tetravaiens ünmoímiógiai késsiisteayt állítunk elő.
Idördozöfebéí-ték elősMrtása és alkalmazása, és különféle lehetséges konjugálást, eljárások ismertek a szatenber számára, A találmány szerinti töaoitások és az általános irodalomban leírtak tsajerelóbes a találmány szertHÓ: líóujugámmokat ilyen szakember elő tudja állítani. Útmutatások elérhetők az alábbi amerikai egyesüli államokbeli szabadakul iratok bármelyikéből vagy mindegyikéből: US 4,356.570 sz., US: 4.6 i 02# sz., US 5.153.812 sz.. US 5.422,427 sz., és US 5.445,017 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi balok:,
A találmány szerinti Immunológiai készítményeket ügy készítjük el. hogy különféle mefengokokkuszszéroíipuaokbői küiön-külön pohszaccharid-íehérje konjugátunsokar állítunk elő és a konjugasumokst kombináljak, A találmány szerinti immunológiai készítményeket vakcinaként alkalmazzuk. A találmány szerinti vakcinák.
ferúíbifeásn történhet a technikában ismertek alkalmazásával. A találmány szerinti vak ctnake>ruaxém ek tártálm.·?! atnaK ,£·. wg;. tv'O ad u\ m\t s dfes rsánsn' ke e tirte/oJ polcául nvmteo kvlatozáx nU\o, - az aláöfebk:. alumínium adjuvánsok, Freuad-féie adjuváns, BÁY. DC~ehol, pepp, notojeszsos d bpad A. UpU, QS15, koieraíexsxt és fornui-taeriosil popod fVaccine Design, the Subánk and Adjuvant Aporpaeb, szerk.: Powell es Neowaa. kiad.: Plonum Press. NY (löfeájj. Az adjováss előnyösen slntekMniüadjuváns, példáid alumínium35 hidroxid vagy alumtuiumfoszíát.
Ahogyan a fentiekben bemutattuk, á találmány szerinti vakcinák T-sejítöl fnggebóz hasonló: immunválaszt: váltanak ki különféle állaimodeHekben, míg a ponszaeeharid-vakc'ma T-xgjriöl függetlenhez hasonló immunválaszt vált ki így a leírásban ismerteiéit készítmények olyan kutatási célokra ?s alkalmasak, amelyek az M wrisgifiófe antigénekre adóit, 7-ssjttől függőhöz hasonló imnmnválaszokban résztvevő biológiai útvonalak és folyamatok tenubnáuj.mzasara uanyufesk.
Öödöil-WbUSÖ
P0302W
A találmány szériád vakerna embernek vagy állatnak beadandó mennyiségét és beadási tsttdjói a gyógyszerem»! és álimgyőgyászah technikákba» jártas azskernber, az alábbi faktorok figyelembe vételével, madard olíátősok alkalmazásával meg ímija lurtáiosm: ilyen faktor a körívéi antlgéts, az adtuvátu (ha jelen vaut, a faj, annak kora, neme, tömege, és a konkrét állat vagy páciens állapota, és a beadás módja. A találmányba», a pohszacchartd-hőrtlozófehéríe, K j»e«t«gtW& elleni vskcínákisra hatékony dózis biztosítására alkalmas meoysyisége tesdömcg-kilogmmmeítként körülbeinl $,02-5 ág: közök lehet A találmány szentül előnyös készít ménybe» és eljárásban a dózis íesíioineg-kilogtaemmnlíéíl kőruihehlí 13.1 -3 pg közötti. Például, egy adott hatékony dózis a fertőződ kővető tdosznk c-íeln-tel kewsebh antiteste'· igények nősei a mákén unióknak kevesebb idő áll rendelkezésükre a prolíferácíóhoz,. Hasonlóképpen, a hatékony dózis függ a diagnózis idején a páeiensW; ben mén bttktérmm mennyiségétől íkchány nap alatt beadöii, töbőszörós injekciók terápiás alkalmazásnak tmnősüluek,
A míálmsay szerinh lefrávalens koplugátumak beadhatók egyeben dózisban s agv os;ozatbar <a taz, „rásegítőként’' vagy „rásegítőkként’ j. Példást egy adóit gyermek kaphat egyeben dózist ez v\u kot ti szakaszában. majd rásegítő dózist adhatunk akár ló év mfilva, ahogyan ez jelenleg, a gyermekkort böegss, m k n egeiozél5 sére szolgáló vakcinák esetében javasolt.
A rásegítő dózis elsődlegesen aktívák („primed} B-sejíekből antitesteket generál, azaz anamnesztíkus választ váll ki, Vagyis, a usaittvídens vakcina az engedélyezett poiiszaccharid vakcinával összehasonlítva, magas primer (azaz, a vakcina egyeben beadását kő ve tó) funkcionális antitest-választ vált ki a iiatólabb populációban, és képes anamnesztiktts választ tazaz, a vakcina egyetlen beadását, követő választ} is kiváltani, amely de2ö monstrálja, hogy a találmány szerinti muldvsiens kospugásímvakeífiu által kiváltott védő imntnnváíusz hosszú idótartanm.
A. találmány szerinti készítmények lehetnek tesmyiláAni át, például szájon át, orrom anáksan, va^aáltsa®, perorallsau történő bevitelre szolgáló, gyomorból, nyálkahártyán (példánk nyelvntattí területről, aiveoiasokhól, msem szsglószervj vagy légzőszerv! nyálkniüztyán} át, stb. ihiszlvódö lőlyadéhkészárttények; headbaiók szósz25 penziókként, szirupokként: vagy ölűitekként; és lehetnek psrenteráiis, szobkoihn, innsdermaks, iuíramuszkálárB, iníínpobtoneáils vagy intravénás ülőn beadható (például kpcktálvn beadható) készihusuyek, például steril szoszpenzíóz vagy emulziók. Előnyösek az intravénás és parentehhk beadási módok, ilyen készítmények összekeverhetók slkalmss hordozóval, díluenssel, vagy adaiékanyaggtít mini: például steril vízzel, ílzáelóginl sóoldahaí, glükózzal o\ w i !χ d \ k rund &\i Md z dMok sv kd\>ηκ \ ,cs >t ϊsérvek ttrta n zJumaK κe^sz ki
3Ő anyagokat p. Idám nevesítő vagy emelgeáiö szereket, pH beállítására szolgáló púdereket, gélképző vagy viszkozitás foko.O adakkenogokat, tartósítószereket, Ízesítő szereket, színezékeké· és hasonlókat, attól függően. hogy miben kes/«tmvov kbauunk előállítani, és hegy azt miképt kl'vánjttk beadni. Standard leírások ftnint például a Kcmmpton's Phurmaccutieal Science, 17. kiadás (1985)], kísérletezés nélkül alkalmazhatók a megfelelő készítmények: előállításához.
A taiáhnárty szerkók vakcinaként aíkaintazoll fcésaihnéayek kényelmesen eiőálilthatók folyadékkésziímenyként, azaz ízotómás vizes oldatokként, szoszpenzlókkérti, emulziókként vagy viszkózus készítményekként, amelyek pH-ját a kiválasztó értékre púderrel beállíthatjuk. Ha az emésztőrendszeren ál történő felszívódást részesítjük előnyben, a találmány szerinti készítmények lőhetnek „szilárd formában, például lehetnek pirulák, kapszulák, tabletták, kapleíták („papiéi} és hasonlók, ideértve az olyan „szilárd’ készítményeket is, amelyeke
4Ö fokozatos (időben eltolódó} íéíszáhaduiást teszik lehetővé és azokat is, amelyeknek folyadék tölteléke van (pél99zőO-139ő:l(SG
P0ÓÖ2999 datd, zselatinnal borkői?: folyadék, a .zselatin a gyontorbaa feloldódik és a töltelék a bélrendszerbe juthat), H'a nazális vagy légzőszerv! (nyálkahártyán át történő) beadásra van szükség, a készítmények lehetnek nyomöfíaiionos dfezpenzerből, pompás dlszpenzerbő) vagy aeroszol diszperzedből dtszpsrgálhatő formában. Az aeroszolok kíperroetezése szükséges íólnyomásí általában szénludrogénekkel biztosítjuk. Λ pompás: dfezgenzersk elő5 tsvösen megbatározott róeímylaóget vagy egy adott konkfot szetóeseméreíet diLszpergáiettk.
folyadékkészihuényfilifit sousálts esetben hőmsyehbeo fokét elkészítési, mist géletek suás viszkózus készítményekét vagy szilárd készítményeket. Ezenfelül, a folyadékkészsötenyekef valahogy kénysltnesebbeu ifiket · kölönösen iojekcióvai vagy orálisa;?, - tearloi állatoknak, g.vennetete.ek, .tómóseo. kisgyertnekeknek. és másoknak, akiknek problémát okoz egy ártott tabletta, pirula kapszula vagy hasonlók lenyelése, 'vagy több1:0 szórós dózisok esetében. Másfelei viszöot, a viszkózus készítményekéi a megfelelő viszkozitást tartományén bem! formtüázva elérhettük, hogy « készítményés & nyálkahártya ~ példáéi a gyomor belsejének vagy az ormuk a nyálkahártya-rétege - közötti érintkezés hossztsbb ideig tartson,
Nyilvánvaló, hogy az alkalmas hordozók és fess átfelskanyagok kiválasztása függ a beadás pontos módjától és a konkrét dózísforma - példán; folyékony dózis (pékiátd, hogy vajon, a készítményt oldattá, szusz,penzfe óvá, géllé vagy más folyékony formává foonulsztakh vagy szilárd dózis (például, hogy vajon a készdmtényí pirulává, tablettává, tepiettává. időben elhúzódó féiszalfedtdást lehetővé tevő vagy felyadékkal töltött formává formaláztuk)- természetétől.
odúm- szrxzpvmrof v g\ go , ; <kto óxxzefovö veled ot m tte „vrtheu o s? vszet tete sósért tisztítod vizet! tarral matattak. Más összetevők, például a pH beállítására szolgáló: anyagok (példáid, bázisok,
2Ő rálát példát;; NoOBs, etmdgeálók vagy dlszpergálő ágensok, ptríferképzo ágensek, tartósítószerek, ntevesitösze·· tok, rtetetto ageítsok tpekiatd 'urtnafiiktkte s/írtozofov vsvigv uuMv .)toáeo« k-s mennyregben s/mten jelen lehetnek. A készítmények fehérnek Izofőníásak, azaz: az ozmotikus nyomásek. megegyezők a vér vagy könny ozmotikus nyomásával,
A találmány szermE készíltuónyek kivámttos tzotoniáját beállíthat luk náfounnaösrák propilénglikol vagy más szervetlen vagy szerves oldott anyagok alkalmazásával. Nátríurokforid előnyösen alkalmazható óátrlnmíoö.ekat tartalmazó gaffersk esetében..
.A készítmények viszkozitása a knábs-rtoh értékén tartható gyégyásznőfeg elfogadható sürősltö szerek alkalmazásával. Előnyös a metiieeifolóz, misül köntrysn és gazdaságosam elérhető és könnyű dolgozni vele. Más alkalmas sörösbe szerek: például az alábbiak:; sántán gtron, kmhöximetíi-eellulőz, lúdroaipropíl-eellnlóz, kafemner, és hasotdók, A sarttsűo szer előnyös kooeentráeiőja a kiválasztott ágenstól függ. Alkalmazzunk olyan n,x.rvtsege, vmlb.1 a kn dtszrort 0--000 . - etelW \ v-ZOvms Sv.olr-nn'-fis', no* ;Ή \ esetten eldtt tokból állítjuk elő az ibvr súrüsstő szerek hozzáadásával.
öyégyásziihfeg elfogadható tartósítószer fofcihnazhstő a készítmény életidejének fokozására. E célra mégis zlo ÓM. vn'1 ,dko tol < a In őrsiek m >» át xtfo, <. a se refeaUp. sr.uvfot krotóvunelt v.,gv henzalkómnm-kloridot is alkalmazhatunk. A tartósítószer megfelelő koncentraekja az osszkm-eg 0,02-2%-a, bár a kiválasztod ágens függvényében bizonyos ellbgadhtttó mértékű variáció Is. elképzelhető,
A. szsttember felismeri, hogy a készítmények összetevőit úgy teli: kiváííiszísm, hogy az '< meumgőátebel származó poiiszaechartd-bordozöfehéíje konjogámmok szempontjából semlegesek legyenek,
A ialáhaányt: az alábbi, illusztratív, a találmányt semmiben sem korlátozó, és a találmány újszerű .kon4ő eepesŐjástak: számős előnyös megvalósítási módját rstner.utő példákkal részletesebbek lerrjuk, A ialáiusáf-y más.
:992ő0-n9ől:/SG
P0302999 példás, a találmány igéeypostokfean meghatározott oltalmi kikéiül való eltérés nélkül világosak szakember SZÍSHlSíS..
FÉL1JÁK
ΐ..1ΐ tLJköáeAA..»i4ywd05---Á,...iA„302A.-es...Y.JO>eih^
OlÖnállb Aéi.ö'ífí'iá réíosfogiróAv A, C, W-I35 és Y wt'ócs^ortok nedvesen fagyasztott téayeszetó felöl vasztettbk -és folyékony W.a$sőa fofoeíp tájaidat segítségével vtmanysréűk és Mudlcr Hintna agartápeláístot tartalmazó Blakc-féle üvegekbe oliettuk, A Biake-fole üvegeket 3-5-37X-ÓÖ, GGs. atmoszférában,
15-19 órás ál. íokubsltuk. Az inkubációs penődus máit - & szaporulatot eltávolítóitok a Blske-fele Üvegekből és
Watsoo. Sckerp tápoldatót tartalmazó, 4 literes Sáskákba eiíottsk. A. Baskákát 35-27<:C-ott, 3-7' óra® át, horizontális rifodgépben inknbálttik, A 4 literes fiaskók tartalmát Watsos Scfeetp lápeldettít tartalmazó fenitantertartályba transzferáltuk, A. fenmdörianályt 5?-í7*C-oa,. 7-12 órán át jnkabáítuk, szabályozva az okfott oxigén koncentrációját, a pki-t az adalékok és a habképző elleni .anyagok hozzáadását Az inkubációs .periódus után,. a fennentorisrtály ártalmát 500 literes tartályba transzfebttek, ehhez Cetavlont adtunk, és az anyagút 1 őrár; át kevertük, A Cettívfeínibl .kezelt szaporulatot leoeutrittígáliuk körülbelül 150(8)-17000 g-vei kötüífeeisi 30--70 Iríerfero átfolyási arány mellett, .A nyers peliszacekaAdo; a feiülöszóból precipitáltattuk Ceiavlorml végzett juásodik 'lecsapással, Getavlont adtunk & felüluszolfoz és az anyagól, legalább egy órán át keverWk smbahőmürsékiélen^ Az anyagot l-SX'-ott, 8-12 érán át tároltuk A lecsapott poliszaccharidot körül20 belül 450ŐÖ-50ŐOO g-vel, 300-4(10 miiperc áifoiyással végzett cmrifegálwai gyűjtöttük. össze. Az összegyűjtött pasztét a ipvabbí íélbaszoélásig: -öO’C'-on tarelluk.
Az laakkvált pasztát felelvasatolkik és aprítógépbe tettük. A pasztát 0,9 M kalclaoddoriádal tnrmixoltuk homogén szuszpeszfo előállítása céljából, A szaszpeszíót körülbelül 10000 g~vel 15 percig centti ingattuk, A folüittszót gézlapon át egy konténerbe dékániéivá jutottunk az első kivonathoz. Második térfogai 0,9 M ksicHöPklorájpí adtunk a pasztához és homogén szsszpenziő'vá tntmixohuk. A szuszpenziót a fentiek szerűd lecentrlfogáltük, és a feíüluszöi kombináltuk az első kivonattak Összesen négy extrakciói végezi link, és a foiölnszékat őaszosaíöttak. Az összeoptSö kivonatokat spirálisan ősszehogssztoít, 10-30 kDA M3VCO ckrasziűo«gységek alkabnsznsával végzett pltraszárés»! hetoményttcíhlk.
-A koaeeatmutnboz magnéziutnktoodm adtunk és a pH-t náaiunddíroaiddal 7,2-7.5-re állítottuk be, A fcotteenttáíttmbozönásí és kuázt adtunk, ós 25-280C-txn, 4 őtán át kevertük. A keverékhez esanolt adtunk 30-5030os véglíoneenttációbati, A lecsapott nukíemsavakat és fehérjéket l'ÖSOO-g-vet, 2 órán át végzett ceníőfegáisssai eltávoifetiuk. A felűiüszó; kinyertük, és a pokszacchsttáofci!· 88M-OS végkotKierédeMhatt hozzáadott eténolkd ;>.v « ptuk > í * t iY < i' 1 in í i <tu\ 9 '.kV Ή a v > í \n loxhll a í -,,, b„s ,o < XK> i?
3.5 vei. 5 percig cííiúrí&gálttík. A kicsapódott poliszuceharidot alkohollal mostuk. A poliszaocharídet..acetottnal mostuk, 1ÖŐOÖ g-vd 15-20 percig tvmotthgal’uk, A polűzaccharidoi vákuumban sxáíiisttak, A kiindulási pchszscefetóáport nátnumaceiái oldaá'un öloklottak. Ehhez magnézluatkfcridot adtunk és pli-t náiriumhidrosid·dai 7,2-7,5-re áihioitnk be, A koneentréréuAmDohai: és Rnázi adtunk, és 25-28cC-oft? 4 érár· át kevertük a mars-clék niAiehtsavsk ehávölitása céljából, Az eaaimekkeí végzett fokubálás után, azonos térfogat oátriumacetát-fettol
4(5 ókláíöt ástok: a poiisMseWtávwám: keverékhez, és feörízösíális rázógépre helyezőik l-S^G-on, 30 percre. A
9)200-13761 SG keveréket lóOOö g-vel 15-20 percig centrifugáltok, A fotsó vizes ideget kinyertük és tároltok. A vizes ideghős azcmös térfoga; «áteujoaceíát-fenol oláh»» aitefsk, és a fentiek szerük extoüátiök. A pohsKfoeldrid-eióadői a lelkűje és endoíoxfo eltávolítása céljából összesen 4 extiafcciót végeztönk. A kotabioáh vizes: káwmtokst,· ikjekíéIssrs szolgáié vízzel, tízszeresére higitottok, és tízszeres térfogak i?óeksálssra szolgáló vészel szemben ddlizálblk,
A dí&lrfálr pofaaccfemdtez. fodctotopriorkfoí adtunk. A poilszaeeharlóot 80%-os végfotoceotíáeiébau tezáaáoti et&noiisl lecsaptok: és 1 -5:>C:<»r, 12 órás; át áötti hagytok. Az: alkoholos -feBífiszól ehávohtottuH és a poliszstcehusidot löööö g~veí 15-20 percig eetorriogálássai Összegyűjtöttük. A tisztított pohszaeeharkfo; kétszer ei&no&l, egyszer pedig seefeanal mostok. A mosott port vákuum alak, deszikkátorhart száritoltok. A szárinál: port a kodogáOairitoé alakításig -3trfC-ea tároltuk.
ló 2. pékki
A.. ókorin, wowí’gwdü iMÜéküWYA.sÍAééh^X‘^-'-é sója
A készítmény előáliiíásábaít sz alábbi anyagokat aíkalosnztük; Aórizsvü? anytótgriísA A, ü, W-155 és Y szeroesispoi'gssből származó, tisztított, kapszulám- pokszacehariíipur (az: 1. példában leírtak szériái elkészítve),
IS- steril 50 ttiM uáírhaoseetáí periét (óéi ó.öi, steril 1 H sósav, steril 1 hí hd.ridhiriík'óxió, 38%-ls hitirogéóperöxkk es steril tsztológtai sooláat (0,85% nátriushdond}.
Az egyes szeroesoportokböl származó poiiszacehuriáot: külősvkülon végzett reakciókba®. áepohtoerizáítuk. Rozsdamentes acélból készül; tartályba 60 g tisztított, kapszularís pohszaecharidper; toltöttitok. A políszacehariához steril 50 tnM náiriuruacetái pullerrel 2,5 g.l koneesitrációjú poliszaeeharid-oldatot áHítottunk ele, A pohszaeeharid-oldatoí h-SAl-ets,. 12-t3 óién át keveredd hagytuk. A reakciós toriályt höcseídó ^ységhez esátfekuztattoL Tovább; 50: mM nátriumacetál pufíér (pH 0,0) hozzáadásával a pohszacehariri-oldatoí 1,25 gél kooeeoííáeiórs. hígítottuk, A pohszaecharfd-oldstoí 5ó°C-ra (±0,!A2) melegítettük fel. A ívakctokeverékhez rfzífoos hídrogénperozídot autónk öiyaa toesnyiségbem hogy a hídrogénperoxiá a keverékben 1 %-os végkonceti Rációim tegyoK jelen , '25 A reakció lefetásáí a pohszaccharló mérete időbeli változásának vizsgálatával követtük nyomon, Minden
15-20 percben mintái vettünk a teakciókexerekböi. és HPSEC oszlopra injektáltuk a poíixzaccharió tnolekulatnéreX't negál a v foto a Vvw a go ’<a„>'ha' o mól·* Jureuto elet e a n yeefooü roo eltkutudet, t keltté > egysége: kikapcsoltok: és a pofisssaccfeariri-oldatot, jegesvlzes iljrdövel gyorsan 5’C-ra foíttofok is. A depolimerizálí pohszaecharid-uldafot 1.6 g/1 ksneeasóeió.ra tóményóetoak be oly módon, hogy a íXtokdőtarttllyt regenerált cella58 iözbői készült, 38Ó8 MWCö szűrőbetéttel ellátóik nltraszhrö-egyxéggel kötőtűik össze. .A koncentrált, depelitnerizáh poliszaceharld-oldatot ló térfogai steril fiziológiai sóeldattal tp.$5% mítrfumkioridj szembe® dializáiüsk. A depolimetizál: póBzavCCa’ triót t 'óhajtott kővetkező lépéséig l-Sü-es tároltuk.
A depoíHséí'foáilí pníiszseebtná o.o.ekdarttorctet „Ultrahydf<»gePM 258'' gélszűrö kromatográfiás oszlopon végzeh krodötegrátiával határoztuk meg. Az oszlopé; dexminból készüli molekuknriéret-ssandat'dokkal kalforáítok és az átfolyó oiriato: több szögű lézerfény-szórással vizsgáitok. A pofozaceh&rid mennyiségét az „A” szetecsopori {ötsrifo;, í. Bioi. Cbem. 254,466-468 (18591J, és a C, VV-13S és Y szerocsoportofc szlátssv-toríabhangk Sveanethölsv-iefo eljárással (Svennerholm, Biodáxa, Btophys. Acta 24, 604-611 (1955)] fortém megbutáKizásávfo állgpifopuk meg, Az Oxfoetíkártahna· Mesterin szerinti (Hésteria, 1. Biok Chem, 180, 249 (1949)] eljárásul mértük, A redukáló aktivitást Park és Jobatsoo eljárásával (Park és .lolmsotg k Biok Chent, fo ÍS» Ifo tJS>- k< ApatO’ tf-g 1 iíití topó Z3v0 V ri Sx.r.Ae?’, ’ í StoítíS t .'-he, v He ü
Ó92ŐiM30öiÓSG
PÖ3Ö2999
- 10 H'MS-rsí. a depói ínjörfeák Jólíszaeehariá· tisztaságál. pedig: & LAL (eadötosia) tartakmr és a visszsértiradt peroxidtanalotn mérésével határoztak meg.
3, példa
Befeg^h^^^dgriyadzádőja
A készítmény előállításában az alábbi anyagokat alkalmaztuk; AbAsem feauótgííáfc A, €, W-135 és Y sz-snocsopot^aiből származó, hidrogéspesomdásl b^oliroertzák:, kagszalárts pebszaschnnti (a 2. példában kártsk szériát élkószlive),. adíp&t'Sav-hts&sszíd,. essk az ,,A szerocsojiört esetében Aetlbo-io-dtmetilanrmöfrt'ZtljkaeK'étímid.<H>AC), oáirínni-cianoboröhídrid, steril 1 N sósav, steril 1 N nátrlunóddröxld, steril 1 N iO oáo nmiklorm, es steril Sriológiaí soold&t (0,85% KátriunÁloridj.
Az egyes szeroesr^örtokból ssmrnazó götiszacebartóöi: különAnlön végzett reakciókban dsrivá-isáhnk. Rcizsdameutes acélból készült tartályba 60 g fiszdtoít, degolimeriKák: polimoeteí^ori: töltöttünk, és ehbss: steril, 0A5%-ös fiztölegiat sóddatoí adtunk 6 g'i pohsztceWtd koncentráció eléréséig. Étihez az oldathoz koncentrált, steril, Q,85%«os fiziológiai sóoldatban ,» doh ad p^sa^-htífcaud;adtunk 1 gll végkoncenitáció eléréséig,
15· Csak:az ,Á szerocsoporínál adipitsssv-hldrazul hehet 4 V iszíolégtat sóoldátfean okirat KDAC-nt adtató az i g 1 '.egkeneentraetv Jerésetg. .A plí < 0<> 1 ertckn alt tettük be, es e píí-ί starti 1 \’ sósat es steril í N nAriínnbiámztd .alkalmazásával, aznbabőrnérsókleten ff:S-36°Cy 2 órás át hmntartoituk A két éra elteltével, ksnceHírált, 0,83%-ös fiziológiai söoldaiban oldott tráfeiijm-eianohnrehióridet adtuttk reakcióké verálíhez C gél végkooesatráclő eléréséig, A reakciót szoAtliőntérsékfeíen (l:S-3ö°C), 44±4 érés át keveríettak, eközben a pkht 5,510,5 értéken tartottuk:, A reakció istán, & pH-t ő,6±0,1 értékre állítottak be, és a derlvartzált pólss?záCchartd<st 12 gó koncentrációra tőmenvadták ke oh módba, begy a rsakeiótartslyf regenerált celhdózből Wv t ' iMlUOui rS-crtel e '>»« o ío’-zu-> 'u> »u>on* osx/e <\ k<^\-' ’ ,\t\ te t pollszsccbartdot .30 sérteget ' M «itt rnntklonddal. ma;d 10 tértbgss 0,15 M natrbmklorlátbl szeíttbeo d, t tvr A 'srtt''\'v .'„vTíívrtenr»·--'™esvsecro' es χ <. v»> * n p ». > Anh < tart’ vt e>,j ov«>' kötöttük ts regenerált cellulózból készüli, 3600 MWCO szüröbetétiel ellátott, ohraszőró-egységgel, és diafilíráittik 38 téribgzt 1 M náirtumkloriddak sittjei 10 térfogat 6,15 M nátrlumkioriódai szemben.
A deriváftmtít poliszaeckártd ntnlekülítatéretéí, a pohszaccharid mennyiségér & O-avefiltarialMáf a dKoolgnerízáli pollszaecbarld előállításánál alkaitnazoft eljárásokkal mértük. A hídrazidtartaimaí a Snyder és SchöCötski féle SAi-Usrutrobenzolszulfonsav eljárással ISoyder és Sohochrskr, Antii. Bioehem. :Ó4, 282-388 (1975)1 állapítottuk még A áepoíirrsertzálf poliszacchsrtd szerkezeti integritását fehérje JH és iJC MMR-rel, a tfeix’lörterízált pnllszacefearid tisztaságát pedig a nent kotor f -emz-d a ' 31 gmtk !o\ n, ,< tv v υ es «* ' ,\\z, saradi. cíímnborohlárid-títrialora mérésé vel határoztuk nteg, iJÁhC kiöííilzáií kilndülásí tenyészeteket rekonstittjátfonk és 1 ó-18 órán át inkubáltaíik. A tenyészetből vett nimfák íáööidatöi iartafnsazó 6,5 literes flaskába rtassztéráitintk, ás a tenyésztő Sáskát 34,5-3Ő,SöC-on. rotációs rázógépbos 7-8 órán át: tskabáltek.. A tenyésztő Sáskából vett tntatát, tápoldatot tartatoaző 4 literes flaskába irsrtszieráiíítsií, és a tenyésztőitekül 34,5--36,5-€~<m,/rotációs rázógépben 14-22 órán ál infcubáltnk. A4 literes flssksból származó tenyészetet alkalmaztuk tápokkttei tartalmazó fortnentor beoltáséin. A fermentprt o4,S8$ 2 68-13 9ó 1 ’SG P0362090
- 11 3b,M€-en. ?{(. {44 ótáo ás mkubálmk. A fertnenlor tartalmat fenésszurün át: egy gyüjttertályba. szűrtök. Az Összegyűjtött anyaghoz 37%-o$ formaldehidet adjunk 0.28a-os vegkoneestráció eléréséig. A pll-t 7,4-7,-6 értekre állítottuk be Az őmzegyiijíött snjago) 0,2 mikronos szúróbetstcEt, steril 20 literes üvegekbe szűrtükát, .Az üvegeket 34,5-3t»,5%'--on napig mkubáhuk. Mindért egye? 20 litere? üveghez ;3'7?á-os· formaldehidet: adtartk
0(4%~ös végkoacenttáció eléréséig, A keverék pl-l-ját 7,4-7.6 értékre úllitertub be. Az: üvegeket 34,5-36»5°C-«a.
napig rázógépen hrkubáltok. Minden egyes 20; literes üveghez 37%-os formaldehidéi adtunk 0,5%-os végkostceutráeio eléréséig. A keverék pH-ját 7,4-7,() értékre állítottuk be. Az üvegeket 34,5-3ő.5cG-ön 8 hétig ktkubaltuk. A nyers főseidet dátemitilíálásra nézve teszteltük. Az üvegeket a tesztelés 'időtartama alsttt l-5nC-on tároltuk.
A. gyers.didéauMg^iehéijegiszgtesg
A jjyers toxcúd&t szobahőmérsékleten kíoívasztottuk, és a 20 literes üvegek tartalmát egy tisztitótartályba öntöttük össze. A toxoid pB-iáí 7,2-7,4-re állítottuk be, a nyers toxoiához aküvszeaet adtunk és 2 percig keverjük. A szén-toxotd keveréket 1 érán át állni hagytuk, maid a tartály alján levő szörötöltelen át egy második tartályba szűrtük át. A szürlethez szilárd ammóttinjuszalfóíot adtunk O'A-os telítettség eléréséig. Λ pll-t b,8-?,2-re j mUk’ro es íz n d.tií o e->it <* ti n h tg\ .k 0 k «.sápo fott te üvget szntesssl gyűjtötték oss^c e- tee-os teeteusegis a.mnemt.n.szthahö' IpP 7 (h s matek \ csap tdé-rof $foj desztillált w’bcj' tetoldotn.k ex ·» feltérjeoidatot rozsdamentes acélból készült gyűjtőtartályba szűrtük, A pH~t 6,8-7,2-re állítottuk be, és az oldathoz amntemumszuilátoi adtunk 40%-os telítettség eléréséig, .A pH-i 7,0-7,2-re állítottuk be, és az oldatot 16 oran at állni hagytuk. A kicsapódott anyagot szűréssel eltávolitottuk és kidobtuk. A szőriéihez tmtmómumszulúhírt
215 adtunk 60%-os telítettség eléréséig, és a pH-t 7,0-7,2-re állítottuk be, A keveréket 16 órán át ájfej. hagytuk, és a kicsapódott íéhériét szőrössel összegyűjtöttük. z\ csapadékot steril, desztillált vízben feloldotok, a nstn oldódó fehérjéket szűréssel eltávoíitothA, és 0,85%-os fiziológiai sőoldaítal szemben dfolízáiíuk.
A fohésjeoidatot: 15 gól koncentrációra betoményítóíük és KI térfogat fo8S%-es ffoiológim sóoldattal:
szembej'., regenerált cellulózból készült, 10990 MWCÖ szűrőbetét alkalmazásával diaiizáliuk,. Á betöményiieíí feherjeoldajci 0.2 mikreu membrán át végzett szűréssel sterilizáltuk, A Ibhérjeöidaiöi: s könjugáhmimá alakításig l~5aC~on tároltuk:,
A fohértskoncesírttolót a Lowry es munkatársai altul kidolgozott elja-ássál jl.oary és tsitsai. J. Biot vtu-u 1 2'V’ 2'' 1 « >i>' ,>·, ou \Uhvrun-, 'gi - uru t Vb aívA tovus) roi.. \>m ex visszamaradt formaldehid mennyisegéguek mérésével állapítottuk meg
5. példa téhé)jeközöttkmtwvaknskon.ugátumck,et(fejtiiÍisu
A készűmégy élüálhtásábiS! az alábbi anyagokat alkalmaztak; wwtgtWts A. €, W-135 és Y
-^erosso’Ot eme' \z<) Jite> kotΐχ.\\λ deronttml pe stexeh rm (< 3 p<lruxm Imitek '.wt ekeszüse> steril dtrtórtstozoid-fehérjs (a 4, példába» fostak szerint elkészítve), EDAC, ammóniám szulfát, stetil 1 N sósav, steril 1 N nátiíumhidrtrttidj. steril. 1 N sáüinmklorid, és steril íjziológiis sóoldat (0.85%-osi.
\ vgvov -te ocroportovbel vartva/é pehs/axhindoka .artahmro koguurtar>»k t kulo’' rolón ,egzert reakciókban állttottek elő. Rozsdamentes acélból készült tartályba töltöttük a tisztflott, adiplnsavval derívahzálf. poliszasehartdet és oldtez literesként 790-1(590 tűnői hldraziot és 3,8-4,0 g áiíforiatoxoid-fehériét
O92öO-Í39ói;ÓSÖ
PÖ3O2OO9 adtunk. A khndalási anyagokat 0.85%-os fiziológiai sóoldattal bighothtk a kijelöli kortcotittáclőra: ás a pH S,ö±O,i -re állitotmk ix:. A poliszaccfeand-fehérje keverékhez literenként 2.22-2.4 g EIMC-et adtunk. A reakció pH-jái 15-3ö°€-on, pH 5,ö±0.1 értéken tartottuk 2 órán át. A 2 óra elteltével a pö-i steril 1 N nátrtumkldroxid<kii ?,ö±ö,l~re· állítottak be. és a reakeióelegyet 3-5cC-on 16-20 órán át tároltuk.
A reafcetókeveréket 15-3ö°C-r& hagytuk felmelegedni és a tartályt regenerál cellulózból készült 30ÖÖÖ
MWCO szűrőbetéttel ellátott. nltraszüró-egységgrt kötöttük össze. Az..elegéhez sztíárd ammóniarnsznlfátot adtunk 60%-os telítettség (A, W-135 és Y számcsoportok} és 50%-os telítettség (€ szeroesoporí} eléréséig. A kööjugátnmot tartalmazó reakoíókeverókct 20 térfogat 6C>%-osen telített anxmóawnszulföt oldattal {A. W-135 és Y szerécsoptírtak) és 5Q%~ osan telííert awnoaiamszuífái oldattal (C szcrocsííport}, mmd 20 térfogat 0,85%·· lö os iZK'ivua ‘-Ootó „ v.--1’,. ! d só tt i fnk kdrtétr. t λ igát, uvt eios/ot 12 u k< >tt Cs 2 -b y n'” poA vereti,-Aittttrirtüm/. v “volí se^en mi u o na‘\ ott s? γοώο-μΟΛ
\.ροΚ κι h< itt e t4 íxctitti tdntt ϊ 0' j,al v-.?ii<ttipj')/?Li.í r J/i Ys tak szerfal mértük, A fehére raemtyisegét a Lowry eljárással határoztuk meg. A keajugáwa. mofekuíwéretét „TSrféOööFW” oszlopon végzett géiszöreses kromatográfiával áfl<3pli«3ttrl< meg. A krsmatogiáfiáóarí a holttérIS tógát tuegáhapítására DNS-t,. a. teljes térfogathoz ATP-t, referenciamarketkéot horjtosáetü tiroglobehaí alkaimarfank,'Ezenfelül,. a.TSK6ŐÖÖPW osslöprói oltsák konjugátumot több szögű lézerfény-szórással mértük. A kv^gatun sttig't e'Yovvet po νι,ό) 'd-vciofi, t v s spev iK. f'^sdíict rab khode-^i .mp < szendvics fiI.4SA-vat mértük; A konjugáturn tisztaságát a nem kötött (nem koojugálií póliszaccisartd, hldröíöb söícsöshaiíísj öszlopróí történt eiáelójávaí, a nem kötött fehérje kapilláris elektmfóréztsével, sterilitás, 1A1.·· (endotoxin) tartatom,. maradvány lEÖAC-tartalom, és visszamaradt ammóniumion mennyiségének mérésével Jtiuibíírfk meg
6, példa tsz szeroesopcrtokból szármázó pellsasgpharíd.
m fiér.· ;üo vmddai kg^gett. kőfijttgóteái
A készíMéa.y elöáltkásáhen az alábbi attyagökat alkalmaztak; A, C, W-OS és Y szeroesopottokból származó, pofaaceharid, difrériatoxotddal képzett konjugátuma (az 5 példában leírtak szerbi elkészítve), és „steril, lOÖtnM.nártlttmíosz tártai pufTemlt, fiziológiai sóoldat (0,85% náirinraklorid).
tezsdam^tes acélból készült tartályban, fiziológiai sóoldathoz (0,85%) annyi ióö-SfiÖ mM -aátriumiosziattal puftereit. frfjológiaí sóoldawn adtunk, hogy a vakchíában a nátriumfoszfát végkoocenlrációja 10 οΆΙ legyen. Két vagy négy, steril, monovaieus, metungokokkosz eredetú pohszaceharld-difiénatoxotd konjugátumot transzferáltunk a steril, 10 mívl-os tiártiumíoszfattal pufferek, fiziológiát sóoldatot tartalmazó tartályba olyan mennyiségben, hogy az egyes szefoesoportökböl származó- pófeaecfearidok kottcentraciója ktilón-külön & ttglml íegyes, A íórröalázott, tetrav&lens kenjugárantot összekevertük és 0,2 pm szőrön al egy második tartályba szűrtük.
A muhivalens készítményben lévő egyes szerocsoportokból származó poliszáért tarídok mennyiségét komponens szaecharxi analízissel, magas ρίί-η veszett untot teserélő kromatopufiával es pulzalo aínperometfiás eletekub\O htt.tczü í\g \ íz\\-e j'enncscgv· < I ott - ehajev-a ktta·\tt<k mv Λ -akiu ρΓ-ta4 pú mcvbór kapcsolt kombinációs elektróddal mértük. A konjugatttm aníigen-jellemzőiét pídiszaccktxtd-szerou'pusra speeifikös «testekhez való kötődéssel, dupla .wsdvfes HdSA-wl Kiértük. .A mukivalens kosjugátumvakema inwnnogwtásst ágy méttök speg, hogy tttégliatáirtztttk, hogy ygjen a. vakcinában lévő egyes konjugátutnok képe99260-1396 l.'SG sék~s a poliszseehariri élte primer ós tásegbó IgG immunválaszt kiváltani áliatmodeiíbes, A ntóivalens vml· 'uinAaui'vvSi’i a >xn xotot uun w'i'jgij md z n And 'xa> Ή-t <veA‘t míoncserélö brimalográSával ás pufeáiő ampetotséiriás detektálással végzett analízisével, a sterilitás, LAL ióttáewtsl tartslosn, pitogóntamloH!. ás általános britoassg m^batórazdsával.á'S^dtoUuk
ALri r 11, οχ,. u^,A,\i.,bv,ik.kjt2io( t r > c v - .u Ά
A készltrttétiy elöáliításahsa az alábbi anyagokat alkalmaztak; A, C, W-135 és Y szerocsoportokítói származó, poLszaecbsrid, ditlóriatoxobidal képzett kenjogámma <az 5 példába» leírtak szériái elkészítve),. és steril, SziolAgiaí sóoldax (6,85% sáíritankloridL es steril Szioiógiai sóoldatfaun (0,85% nátrhunklorid) oldott afeObiiöíStbjd.tOXtií.
Az egyes steril, moaovafens. sneaingiAokkasz-eredetd poltszaccbmd-dlíiériam.wá .koBjugáíastokből feiológiai sóoldatot tartalautző tartályba olyan mennyiségeket adtunk, hogy az: egyes szeroesoportókból szár.15 mastó ptbiszaeehariáok'koscestónöja kólón-kólón 8 μ& ml légyen, A multivaless kosiugáíüntxakcűtatez íiziotágjai sásjáatban (¢1))5% jiátrtamklorsdi oldott alumsnasúüdmxxdet adtenk 6,44 mg afamfesundonóid vakcina koöcestrásíó eléréséig.
A késAirnóöy előállításában az alábbi aayagötet alkafeaztak: A, G, W-135 és ¥ szerocsoportokitól szsriítasá, poliszsccbasíid, díS&sstóxoiddsil képzett tajagfem (az 5 példában leírtak szerint elkészítve), ás steril., Srioiégkö sdoldat (©,8584 náfeiumfcloritl), és steril fiziológiai séoldatbtm tö,85% nálriuadtiorid) óidöít ataikriwribssifst.
Az': egyes steril, monövafens, sseajnaokokkasz-eredotá poliszaceltarid-diílériatöjtoid konjugáíumckhót fiziológiai sóoitfekjt tartalmazó tartályba olyan mennyisógéket adtunk, hogy az egyes szereesopcnokbol saártaszó priliszaechmdok .koaesstrácirijíi fetUönütóída 8 rigóid legyen, A rttehivaietts kmjngámmvakdnához fíztólöglal sóoldatbtm (0,85% uaíriumklorid} oldott: almniíriamü-szlatoi adtunk 0,44 tag alumtómaienZmí vakéba· kotjéepkrieiá eléréséig,
Aáókfe >© AJ-állAL^^
A klinikai értékelés elért megvizsgáltuk, hogy a tetravalens vakcina képes-e IniKamvásaszi kiváltani laboratóriumi kisáilatokoa. Egereket, pttAáttyoLat és nyulakal alkalmaztunk a fca^ngálntnvakdna poliszáét baridvakcinákhoz viszonyított immunogenításának tanulmányozására. Ezen áliaíssAielisk slkaltaosak erre a vizsgálattá,. mert ezekkel képesek vagyunk tnegköíöuböztemt a konjugátumvakeiuát a megfelelő poiiszaocharid.33 vakcinától a vakcinákra adott immunválasz mintázata alapján. A konjugátanxvaksina T-sejttél (aggó immunválaszt, ezzel szemben a políszaceh&rid-vakcina T-seittol független immunválaszt vált ki s modellekbett.
Az egómel íblytatöd intmunogsaitósí kiaérieiekben, a konjugátumot fiziológiai söoldaltal (0,85% rsái~ riomkferiá) ielirigíiotrttk az emberi, dózis A-dídó-ára. Az egereknek egy vagy két dózis— koaiugátum vagy poliszaecteid - vakéinál adtunk be, és a vsfcdsálás okán kei héttel vérmintát gyűjtöttünk. Az egyik egdrcsopöí40 tót nem immunizált kootrolcsoporiKak jelöltök fej.. Az egyes szerocsoportokhól származó poliazacekaridok elleni
99266-1396LSG
PÖ302999 amitestet EUSA-elíárással vizsgáltuk, Á sszérammhíákai slya« BUSA ruikrödter-iemezeken inkxt&áltok, amebc\ lsek, *. ,r eg, v- k'p4t\*' . no 487 eleze ez. öctot. ,κ \ betmvnv, ru',i - k a \ < \ »\u j, albumhtt alkalmaztunk, bduibálás után a suikrmiter-letoKí puiíerrel. mestok, és az aatüesí-poiiszaccharid komplexhez & ztmiug&kotówz-eTédetü 0Msa»&cfeaná: eted antitestei megkötni képes szekuaáer amttsst-eaót» ktnptigátttKmt adtok. A. tnikrötlter-lemezi mustok, és kémiai szakss&átozot adtok a metogekcédmsz-eredeiu peltezacehabd elleni antitest és szbtasder antitest-emum kmbegátertr kvímptexéhez. Az enzim a kémiai szubszíráísm egy részét bídmitzálta, minek e:redntényeként szín képződik. A képződött szín arányos a odkrotder-lemez falához kötődőit, tneningökpkkusz-estedsin ptdlszsccharid elleni antitest és szekettber auíitest-eszim kösmgáito fempfa mennyiségével. A vakcina göicnehgát sz ugyanazon rnikroíííerdentezes inért, égyes szeteesoperíokto vonatkozó retererteíá anttsiíéraínokbő!, négy paraméteres illeszkedés alkalmazásával számított lineáris görbével történt összehasonlítással állapítottuk meg. Az egérereáetn rslef&neiatotiszéraruöí ugyanabból az cgétíörssböl generáltok, amely törzset az egyes szsrocseporthöi készített bvgugáíumvskcma bárom dózisával hmmmiaáhuk. Az egéreredetü teAreneia-antíszémínmal meghatározott literek I ,0 optikai dmrziíást eredményező, inverz hígításon alapultak,
Az 1. táblázásban összefoglaltuk: sut egyes szeroesoportok esetében a pobszaecbarláök elicrsí: lg:G litereket. A Svziss-Webster egereket két dózisban vagy a tetravalens komugáiumvakelnévál - íóiysdék és altoiehrto fernadáelőbsa - vagy pedig: a megfelelő tetravalens pollszaecbarld-vakeiaával úmsuaizáihrk, Az IgG literek 1.8 egérből veti, majd összeöníöít szérumból származnak. Kétezer 10 egerei alkalmaztunk az egyes vakeinafr-rntuláclők elleni inmumválasz mérésére. Mindkét egéresoportot az 1. napon vakcsmiltottk. .A 15, na2ö pon (2 héttel a vakemálás után) 10 egérből vérmintát vettünk, es a második 1Ö egeret a 15, napon második 'to<.'n<'toOtol vöks-t' íö j\ ette s<.vo,o i\ 5ip<.»» ven kv „s qf>ttón\, η\·ο\® Ide^erm nem nunmuzaá konno.ccponbol A, ossac ,torost»· oo libben t tsáknk, a C es 2q napon sert \emun;akut a nem immunizált kontrolokkal és az egéreredetü refereneia-antiszéromtírsn egyidmbleg: vizsgáltok, ldá|4áz&t
Tettoyablá kotgpgáhnstnal yagy
SOhszaceimHd.dteíii.lgtátoerei
|
|
Ember
elleni A |
|
Bmber
elleni (7 |
|
Ember ellent W135 |
|
Ember
ellesi Y |
|
Vaku mse söpört |
Dózis p.g ps |
Dl 5 |
1)29 |
Dl 5 |
D29 |
1915 |
1.)29 |
Dl 5 |
»29 |
konjugátum
(adiuváus nélkül) |
0.25 |
131 |
2641.» |
250 |
1510 |
1750 |
; 6100 |
5060 |
4830: |
koniugábim
(admváns nélkül) |
0,58 |
171 |
6220 |
446 |
2050 |
W |
: 26000 |
5988 |
1/12080 |
kOHiUgíittifb
(adjuváus nélkül) |
1,0 |
249 |
4500 |
525 |
2740 |
1450 |
16600 |
11800 |
59100 |
kenyugátom
(alom, hidr.) |
0,25 |
2020 |
4500 |
1018 |
2980 |
2500 |
58700 |
11600 |
1.24000 |
konjugátum
(alom. hidr.) |
030 |
5800 |
0550 |
2280 |
1010 |
4810 |
21800 |
26400 |
8.30000 |
§8266-139:613»
P0382999
- IS -
kon; ugatom
{alum. Cdr s |
LO |
62K? |
9358 |
2630 |
12800 |
7S7fi |
i 94680 |
32700 |
392000 |
Fotiszacchariö
(adjuváns nélkül) |
L0 |
136 |
Π3 |
i 184 |
205 |
612 |
60b |
4470: |
3910 |
nem immunizált |
nincs adat |
- |
í GO |
- |
145 |
- |
623 |
- |
777 |
A l&tmvafcus kotiptgátótstvakcirta, adjuvánssaí. és adjaváBS. nélkül is. képes poliszaccharid elleni, erős ígö inxítvtutváSasKí kiváltam ebfeea az egémodAben. Az alutníniumhldrtxxld adjuváns az a négy szerocsoporlbo ''ícnxui'i pu v'ií trk ke?jtiVí-furv^ ellen elsődleges v tuscg.o' \a' is fekooisa a szolgai tbbet u egérmoáelibep, a tettavaíeus -polfszMíehmtl-vákémia, sz isrnmmizálatlan kontrollal összehasonlítva jelentéktelen immunválasz; vált ki az A, Céfe W135 szerocsopotíCs «Fen, míg az Y szeroesoport elfogadható immunválaszt, de rásegítő választ nem, vált ki. Ebben a medeliben, a tetxavalens poiiszaccharid-vakcina nem tudort rásegítő választ kiváltani mind a négy szerrtesopoAböl származó polbzaeeharidofe ellen. E modellel könnyön lehet különbséget tenni a poliszaeeharíd-vafesisa és a kee^agátótavakcina között, .mivel az egyes szerocsopostokböl származó konjugánímvaketnák uagyságreuddei nagyobb immunválaszt és rásegítő választ indukáltak.
A. íetevafeíüí kmf&gátnmvakelna nem adjnváh formáját fiatal felnőtteken és fiatal egészséges gyerekeken végzett klinikai vizsgálatban tanulmányoztok a biztonságos alkalmazás és antnunogeniiás szempontjából. A. fetóitékkel végzett vizsgálatban. Anyókát vaksináMimk egyetlen vakehadózissah amelyet ügy készitertóA, hogy tartalmazzon 4-4 pg-t a négy kenjugátmu vagy peliszaechatid mindegyikéből. A vakdnáíást közvetlenül megelőzően és a vakcíxtálás mát; 28 nrpal vérmintákat vettünk. Az egyes szerocsoportokat tartalmazó ksaijíígákmmk elleni asíiíéstekoí, a pol&zuccbarídük ellesi IgC mennyiségi meghatározására szolgáló EtlSAv&l: .mértük,· Az EEíA -eljárás: igen hasonlít az sgéreredetö: szérumban lévő lg<5 antitest mérésére alkalmazott eljáráshoz.
Rövides, a szénnsHiiatákaí meniugokekkusz-eredstű pobszscobariddal bevont (a pöfiszaeeharidokat
2ő rnetiiált emberi szsrumalbumísnal kötöttük, fel) ELISÁ rntksofiísr-lemezen inkbhálbtk. A kötött aídítest menny tségét perövídázzai jelzett, sgérereáetü, emberi ígö-re specifikus, monekkaiáfis antitesttel végzett rézkoréval határoztuk meg 4 reakció során alkaltnazoít peroxidáz-szubsztráítítttbói spektrofótomeíriával merhető kromogén térré és képződik, A képződött' kre-mafár optikai denziíása összefüggésben van a szérumban lé vő - a mikrotites lemezen lévő, mén ingok okkusz-eredetű poliszaecharidhoz kötött - IgG aaíiíest mennyiségével. Az antitest mennyiségét 4-pararoéteres togisztífeus görbe eljárás alkalmazásával meghatározott értékű, emberi réténe-ocíaszétummal (CRC 1 922): történt dstsaabasíOnEíással állapítottuk meg. Ezenfelül, megvizsgáltuk azt is, hogy az antitestek képesek-e saerocsoportra specifikus baktériumokat lizální. A szérummintákat először bővel inaktíváltuk a korupíeusent inaktiválása céljából, Á szérmammtákból kétszeres hígítással, 96-lyukó uiikrutiterleőüezém hígitási sOrözatókut kévziíeöüBk. Szeröcsoporita specifikus baktériumokat és újszülött nyálból származó > kei'ípbmen. et adonx a hgtoí \ é.tmtokhoz e- az -„Hegyeket inkubáliuk. Az inkuhálás után, a szérunkkomplemenVbakíériüin keverékre agait tartalmazó iápoldatot réíegeztünk, az agait hagytuk megdermedni, és 12 órán át 37aC-ös, 5%-as CGy atmoszférabstn isktibáítuL A következő napon, a lyukakban lévő b&ktéríu;»telepeket megszámoltuk, A végpost-fitert, a kontrol lyukak átlagához képest, 50%-osxtál nagyobb pusztulási eredményező, rsciproeiáils szértstdiígháském határozásk meg..
A 2- Ádázaiban bemutaiiuk a öözísonksut 4 pg poliszaccbaridot 'úrtateáző, teCavakms komugátum'öCob-lJdo -hű
Pö38299§ vakcinával vakcináit felnőttekből származó szérumban, az egyes szerocsoportokbóí származó políszaccbsriáok simái Magos IgG konceattációit és az átlagos, szeru«redet§ baksericid antitest (S8A) fitert a vakcináiás dőtt és után. Az engedélyeztstett poltss&ccharid^vakcíaákksl .kiváltott i«as«utválass2al óssseh&soalitva, a négy -szcroesoport-kottjagátuítt nttitdegyike elleni immunválasz, stind. az: IgG nntiíest-válasz és md pedig a fuskcio5 ásíts baktencíd antitest válasz tek intetébets, kielégítő vök, A vakcinát e ksresopöfÉsaa biztonságosnak találtak és biztonság?, profiljukat hasonlónak találtuk sz engedébemeiett pöitszaccbarki-vákcirtáéboz,
AJábtozM
Má2££íÉd2<MGlSSÍ.^^ l ö k>k.askkSAaik i^y§i
í immunvákisz
1 szerocsoport
alapján |
|
IgG GM€ igg/ml)
(95% Cl) |
|
SB/\ GM Ϊ
[95%Clj |
|
|
|
Elölte |
Utána |
Elölte |
Utána |
Á |
2828 |
3.3(23-4,81 |
38:,4 (22,2-66,4) |
48? (231-1022j |
6720 (46663 54281 |
c |
28/28 |
03(0,2-031 |
53 (3,0-10,1) |
16,4 131373 |
1560 (800-4042) |
W- í 55 |
28/28 |
0,6 0533,0) |
5.8(2,9-11.71 |
10.0 (5őM<m>( |
609(25(5-1481) |
¥ |
28/28 |
13 103-2.5) |
6.8! 5,2-14,61 |
1.9,0 (8,0-4 i .2) |
390(143-10611 |
Fiatalabb kotn csoportokba», .2 évesnél óatalafeb gyermekeknél, a pobszscöbarid-v&kcina. elleni jímnan·· vábsa: gyenge: ás egy év más lőcsükben oatv et tt erm te-napos gvunekA* doz sónként & <,g«es szeroesoporioiibóf származó 4-4 pg poliszaecharidot tartalmazó, tetravaleas koajagátotavakcfaa egyetlen dózí15 savai, majd az első dózis mán két hónappal a teíravalens konjugátutnvakcina második dózisával oltottunk. Az első és második yafccinótós döfi, és a második vakclnaiás után egy hónappal vértsiaíát vettünk, A négy szeröesöpört-könjegáimn ellett! axstiteat-válasaokal. a 3. táblázatban foglaltuk össze, Mindegyik s?zeroasöport esetében, a femmless kosjogátmn második dózisa után rásegiíő IgG antitest-választ és iknkclonáitS: bakíeridd aaiiísktváfesA figydtösk meg, A konjugátontvakcina által indukált IgG antitestek színje összevethető sz e
2ő ksresöpörtbaa az •engedélyezett poliszacehariddal kiváltott szmttei; 6 hét után 2,34 ne/»;! (2,96-4,49> IgG antitesi-sjáasz a í szerek söpöri pobs«ae.n,t£ídja ellen Azonban, koujugafuutvakeuia ölni indukált bakáméul mtnesí -válás sokkal magasabb vek. mint nnvt normáin. esetben ,v engedély esen poiiazseeharíd-v.tkeson kh altot’ c laresopóttban; 6 hét után az SBA tifer 7,2 (5,15-10,4):, Az ifjabb populációkban, az IgG antitestek és bakten.k· n úttestek között fettnálló dísszottaiteta oka fdíehetögn az, hogy a poliszaedtarid a fiatalabb populációkban inkább az alacsony aviditású antitestek keletkezését váltja kb míg. ezzel szentben a konjugátunt feltehetően inkább & magas aviditású trábeste.két. A magas aviditású antitesteket tartják felelősnek a baktetfcid nktívitssétt,
3, táblázat lA bv.xdenalvkv'.em fgG GMk..Ud-jj.te köriemfra, .«..^.ssepertnenA, szu xr.rjviMrt.tc.d.u?: tea GM 1 k
ÍÍteOfa3*é£rths«O^
315
09260-13961/SG
8(5302990
Immunválasz
.szerccsoport
afepjáti |
MA
te
M:: |
; IgftÓMC
fggi'ndí
:(9570 Ci! : |
|
|
SBA GlvH
f9S% Cl]: |
|
|
|
|
1. dózis előtt: |
2. dózis előtt: |
3, dózis titán: |
1. dózis előtt |
2. dózis előtt |
3. dózis után |
A |
$/8/8 |
6.2(9204! |
2,1 [Ő,-M.C |
1 WWí..... |
8.7(1,4-55.1} |
1328( STW/Sj |
3158 (1357-5371} |
C |
Os- |
tCl'ttUí: |
telte-XJt |
|
47(2,0-230} |
Í-7(37--307( |
301(128-221} |
A-135 |
5-A8 |
telte-te} |
ttehU-tet |
15 ite-5,?( |
6,2122-0,2} |
22A(28-ÍSő} |
450(172--076} |
¥ |
|
0,3102414} |
íöhcstek |
•lóteteA: |
5.7(32-5,0 |
>s.-p(>44-v |
304(101400} |
Amellett. hogy az eagedélyetéö- póliszseeiíartd-vakchnihoz képest a •iet-mualew köttjggáttttttvskcina képes magas funkcionális aadtesí-váiasrt kiváltási rtatalekbői álló populációkban, a tetevaleus kcttjttgátumvakema awtmessdfcus választ képes· kiváltam, dem&astólva ezzel azt, .hogy a telálinány saertníi tétmvatet kpxyugátemvakeisával kiváltott védelem fetssszü ideig tennáh. A tetrsvalens koaingateinvtikcina kifejlesztésében, először bivalens AC kenmgammd* tartsfentzö készdtméayt vizsgáiteuk. A vakcina az engedélyezett, menovaierts C konjagáttanho^ tsepe-rt :széle»öbb -védelmet -biztosít,. de sexa véd a W-135 és ¥ szerocsoporíok ál te 1 okozok betegség elten.
Osaíkai kísérletekei végezitek ájszSlód alanyokkal:, hegy őssí'ehaseoihSHk: a hsvalens AC potíszaetea1Ö rid-vakemjte adott immunválaszt a bívaleas konjugátmnvakein&ra adottal. £ vizsgálatok során, egy csecsemőkből egy h&rroudik, kőikről! csoportot állítottunk össze és őket ks/h«?fí::íjo b típusú kortjugáíammal kezeltük. Mindhárom vakehavzoit csoport ugyanazt a gyemekgyógyászad vakcinákat kapta A bivaless AC .koHfHgátoxcwpertRak kntpugátesvakciíjst adtunk he 3 -áő-zsfeban (4 pg pe>hszaccharsá/-ddzisí, 6. 10 és 1-4 hetes xneat t b sál v- tv \)<>>< r ,i m. v.!''mo? o '·> , s-^s sv1 vakuta sao-ott 2 u.z!- >ar y>, ,g pohszacchand/dőzís):, lő és 14 -hetes karban. A .??«-íwJpá$«s' teteennns b típusa kotgagáíaímaíd kezek esőpörtnak koptagáhawakcisái adtunk be 3 dózisban, 6, 10 és 14 hetes kórban. Véteththákai győphíttek a d. hétét·, vakeinálás élőd, 18- és 4 héttel a vakclnalás után. Amikor a .gyermekek elérték a 11 - 12 hónapos: kort, vértntruakat gyogóköttk es a hivulens AC kosjngátnmtd vagy a hivtetns AC pohszstehsrtevakctnás kapok gyermekekéi AC puitszaccteridot Ízrtótnste rásegítő dózist adtunk he, A rásegítő políszaceharid-doals beadásával «tekekúk, hogy az aksr.v képes volt-e vagy sem attamrtessdikus választ kiváltani.
A kiset let, a primer és polisaaeehariddal végzett rásegítő immun válasz, eredményeit az ígö antitestekre vonstkozé-atí a 4, táblázat az: SBA antitestre vonalkozakat pedig sz- 5. táblázat tartalmazza. A primer sorozatta adott ígö söíkest-vabsz nagyjából azonos volt a poliszttecharlel- és a konjugátumvakema tekiaíetébes. Azonban, a kongigált késziíttiénttysl vakcinák alanyokban & feaktericid antitest-válasz sokkal magasabb volt, mist-&
.25 políszaechsAádsi vakcinák alanyoknál, Az egyéves alanyok esetében megilgyelték, hogy djsziitótek pőlíszasehsnddui történt vakeinálásé igen kevés funkcionális bakterícid antitesí-tersuelésl eredményezett Giszölőltekben a poliszaeehaxtd-vakcína ellen termelt antitestek ahgteneui alacsony avidításü antitestek, míg á konjagátamvakcina inkább magas avitlháso antitestek megjelenését eredményezte, ez magyarázza a sokkal magasabb bsktmcíd amitest-űert. Az első vtecktette soíozstbsx; konjugáiumvakcmával kezeli személyekben.
3S íáscg.te dóz skojc aóoít poh-zaeshrtfid vektn 3 shal teákért nag,;;-v ♦onketonj. s antitest szart ;cfe . hogy e;en alanyokban betelte az emlékező vagy T-stetöl fhggö snittest Az: első vakteteásí sorozatban pohszaechartd-vateiasvid késéit szentéiyekbett rásegdo dousfcte' «tos pohszuceterid-vatelna ntérsékeh yá99260-1396 GSG
FC3e2''<te
- 13 feszt váltott ki. amely Ϊ-se]írni isggmien választ jelez.
UalÉbai
I&biÍSC9brÍÉÉ„teíSÉjííO®5í(te
Immunválasz
szemeseimet alapján |
Furnér
vskcmáíásí
GMC
(95% en |
|
................................ |
PS rásegítő
vakémálásí
GMC
(95% Cl] |
|
1 |
|
N |
esése |
öíáda |
N |
előtte |
«Sáéa |
: ..A.” szefoesepoA |
|
|
|
|
|
|
AC kesjagáítmt |
34 |
54122-5,4] |
53(4, Wi |
31 |
03(0,)45,3] |
7,0(4342,0] |
AC peliszaecbadd |
35 |
3,9(1,7-53] |
5,5C<t-7.e |
39 |
>(9544] |
3,1 (2.4-13] |
: Hs8 kötífegáttire |
36 |
3-2(22-4,5] |
cmo-wi |
rsaerfxkt: |
XKaessöst : |
feies sebt |
,,C szetocsopo!'! |
|
|
|
|
|
|
0A” azetocsopori: |
3· |
SAjíWj |
2.3(2,933 |
51........... |
Ü, 110.1 -92] |
% (4.5-143) |
AC konjugátum |
35 |
2344-3,91 |
53136-231 |
59 |
03915-1,0] |
22 ;%,η |
AC poliszasehariá |
36 |
2.9(13-5.5] |
:9310,3-0,7] |
ísaeKíslsS |
mesaáát : |
sfecssáa |
gÜ»feÍM3Í
S8JsAÜÍÍÍM<WWfeöOí«í:32SSWiÉite^ va^átexelmLéLmárs
teíítttivákísz
szemcseperl alapján |
Furnér
v&keiríá-
iámGMT
(95% Cl] |
|
|
FS fáségjbi
vakcirntfesi
GMT (95%
Cl} |
|
|
|
N |
efette |
|
N |
eteiie |
ijtáíisi |
,3% siscrocsepert. |
|
|
|
|
|
|
AC kemjugámm |
34 |
: HA [73-)93] |
: 177(09%%) |
24 |
I0J (5%; 351] |
375 (162-353] |
AC peliszaeeharid |
32 |
14,7(53354] |
7,0(4,7-):0,5] |
26 |
6,!:[3,MSj: |
24,1(11-53] |
: H(B kóKjtsgtstat |
™3S:.........: |
, :113(6,3-18,3] |
6,7(4,339,5] |
|
nincs adat |
rancssdat |
: ,4? szerócsepott |
|
|
|
|
|
|
: „A” szeroesoport |
34 |
: 59,3 {24-197] |
130(128-27% |
: 2? |
4,6(33-5,0] |
287 (96,2-853] |
: AC köntngátttm |
32 |
62,7(29-13:1] |
254(144-44,6] |
26 |
4,1(3.0-13] |
144 (7A8o 1 ] |
AC pofaace&aritt |
30 |
45.3(21:9-133]: |
7,3(43-! i ,3] |
«femadat |
est ses adat |
tsoes adat |
A tt-láktfeny által, ijatslökfeől állá popttfedokbat! a tsxeaisgekokkusz betegség ellen fokozott és az A, C, W-t.35 és Y szerocsopotíok ellenszéles köm védelmei biAoslíé elétsvbk mellett, a íetravaiens kotyugámm a hordozöfehótje elleni antitest-válasz iivinkálásávai védelmet biztosíthat más patogénekkel szembet! is. Ha a
99269-· 1396 CSC
PO3O2.999
- 19 teiMVafoas koBjngátmavakcthát (téSámtoxoid-konjegátnm formájában) újszülötteknek adjuk be, ezen alanyok cgvbco megkapjak a ».»kabO\, JnVns^wdo: íuul3i.'?v gs ütnek/', .vass >tn tmnuetZA. oM m bért, ca·) abmokh>.n nne*. cjsertJma tnko/oduv u d\Utuowtd dicm .kíh'vstvAU'/Am A.mnh.m, ha a drt:e;ute\mi knnjugáíumot olyan alanyoknak adtak be, akik kísérőként nent kaptak diftériatosoidot tartahnazó vakcinákat.
dirtsmícxoiá ellem erős rásegítő -választ tapasztaltunk. Ezen alanyok három dózisban. 2, 3 és 4 hónapos korban kaptak DTP-t Ebben a kísérletben, az alanyok vagy hivalens AC konjngátnmot, vagy pedtg bivalens AC pokszsceiiaría-vttfectoáí kaptak gyeden dózisban a 2. és 3, éves, kor között. A vakcinálá-skor és a vakcinálás után 30 nappal vérmintái vettünk, A bivsletts k<snjugátnmh&n hordozófehéneként dtftériatoxoidot alkaltnazínrtk.
A kei vakcina csoportban tapasztalt, dlftériatoxold elleni immunválaszt a 6. táblázatban tnwtatjak be.
A vártaknak megfelelően, s políszaccharid nem serkenti a diftéria elleni Immunválaszt, azonban dii'téria eileai erős bnnuiuválaszt figyeltünk meg az AC .konjagátummal kezelt alanyokban. így. a meningokokkusz elleni tenjagáiumvakehsa további: előnye lehet sz, hogy antnnmálaszt serkent a hordozőfehérje ellen is, ezáltal - ha ditjérs:»í»soKÍo·: alkalmaznak bordozófeh&jekcnt - védelmet biztosít a Co>y«e&?eím« xfytóe/ár által okozod betegség ellen.
ójáblázas §g*feMldg.Mis^£feE3doUAriKh?2íi^ ben
VoktaöacBóport által adott
immunválasz |
|
D iítéria el leni antitest
(mSA~Wml>P5%aj |
|
|
|
előtte |
utána |
AC kösjugátma |
104/103 |
0,647 [&Ö36>0,Ö6bj |
21,2 [11,6-38,6} |
AC políszsccharid |
103/192 |
8,859 [6,645-0.076j |
0,059 [0.645-0,077} |
99260-13961/5(2