SI21352A - Multivalentno meningokokno cepivo iz konjugata polisaharida-proteina - Google Patents

Multivalentno meningokokno cepivo iz konjugata polisaharida-proteina Download PDF

Info

Publication number
SI21352A
SI21352A SI200220009A SI200220009A SI21352A SI 21352 A SI21352 A SI 21352A SI 200220009 A SI200220009 A SI 200220009A SI 200220009 A SI200220009 A SI 200220009A SI 21352 A SI21352 A SI 21352A
Authority
SI
Slovenia
Prior art keywords
polysaccharide
vaccine
conjugate
sero
meningitidis
Prior art date
Application number
SI200220009A
Other languages
English (en)
Inventor
Robert P. Ryall
Original Assignee
Aventis Pasteur
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=23001755&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=SI21352(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Aventis Pasteur filed Critical Aventis Pasteur
Publication of SI21352A publication Critical patent/SI21352A/sl

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/116—Polyvalent bacterial antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/61—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or a derivative thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/6415—Toxins or lectins, e.g. clostridial toxins or Pseudomonas exotoxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/646—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the entire peptide or protein drug conjugate elicits an immune response, e.g. conjugate vaccines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6037—Bacterial toxins, e.g. diphteria toxoid [DT], tetanus toxoid [TT]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/70—Multivalent vaccine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/095—Neisseria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

Predloženi izum opisuje kombinirano cepivo, ki nudi široko zaščito proti meningokoknim boleznim, ki jih povzroči patogeni bakterijski Neisseria meningitidis. Cepivo obsega štiri različne konjugate polisaharida-proteina, ki so formulirani kot ena sama doza cepiva. Očiščene kapsularne polisaharide iz Neisseria meningitidis sero-skupin A, C, W-135 in Y kemično aktiviramo in selektivno vežemo na nosilni protein s pomočjo kovalentne kemične vezi, pri čemer se tvorijo konjugati polisaharida-proteina, ki so sposobni razviti dolgotrajno imunost na številne soje N. meningitidis tako pri otrocih kot tudi pri odraslih.ŕ

Description

Multivalentno meningokokno cepivo iz konjugata polisaharida-proteina
Pri predloženi prijavi se zahteva prednost US provizorične prijave št. 60/263,435, vložene 23. januarja 2001.
Ozadje izuma
Področje izuma
Predloženi izum se nanaša na splošno na področje medicine in natančneje na mikrobiologijo, imunologijo, cepiva ter preprečevanje infekcije z bakterijskim patogenom z imunizacijo.
Povzetek stanja tehnike
Neisseria meningitidis je vodilni vzrok bakterijskega meningitisa in sepse po vsem svetu. Pogostnost endemičnih meningokoknih bolezni v zadnjih tridesetih letih je v območju od 1 do 5 na 100 000 v razvitem svetu in od 10 do 25 na 100 000 v deželah v razvoju (Reido, F.X., et al. 1995). Med epidemijami se pogostnost meningokoknih bolezni približa 1000 na 1 000 000. V ZDA je približno 2600 primerov bakterijskega meningitisa na leto in v deželah v razvoju povprečno 330 000 primerov. Smrtnost je v območju med 10 in 20%.
Patogeni meningokoki so obdani s polisaharidno kapsulo, ki je vezana na zunanjo membransko površino organizma. Trinajst različnih sero-skupin meningokokov so identificirali na osnovi imunološke specifičnosti kapsulamega polisaharida (Frasch, C.E., et al. 1985). Od teh trinajst sero-skupin jih pet povzroči večino meningokoknih bolezni; to so sero-skupine A, B, C, W135 in Y. Sero-skupina A je odgovorna za večino epidemičnih bolezni. Sero-skupine B, C in Y povzroče večino endemičnih bolezni in lokalizirane izbruhe.
Človeška nazo-orofaringealna sluznica je edini znani naravni rezervoar Neisseria meningitidis. Do kolonizacije pride tako pri zunanji površini mukozne celice kot tudi subepitelnem tkivu nazofarinksa. Prenos meningokokov lahko traja mesece. Do razširj anj a meningokokov pride z direktnim stikom ali preko zračnih kaplj ic. Meningokoki postanejo invazivni s prehajanjem skozi mukozni epitelij preko fagocitnih vakuol kot rezultat endocitoze. Obramba gostitelja pred invazivnimi meningokoki je odvisna od komplementno mediirane bakteriolize. Serumska protitelesa, ki so odgovorna za komplementno mediirano bakteriolizo, so v velikem delu usmerjena proti zunanjemu kapsularnemu polisaharidu.
Opisana so bila cepiva na osnovi meningokoknega polisaharida, ki izzovejo imunski odziv proti kapsularnemu polisaharidu. Ta protitelesa so sposobna komplementno mediirane bakteriolize za sero-skupine specifičnih meningokokov. Pokazalo se je, da so meningokokna polisaharidna cepiva učinkovita pri otrocih in odraslih (Peltola, H., et al. 1977, in Artenstein, M.S., et al. 1970), vendar je bila učinkovitost omejena pri dojenčkih in mlajših otrocih (Reingold, A.L., et al. 1985). Naknadne doze polisaharida pri mlajših populacijah so izzvale slab odziv ali nespodbujevalen odziv (Goldschneider, I., et al. 1973, in Gold, R., et al. 1977). Trajanje zaščite, ki jo razvijejo meningokokna polisaharidna cepiva, ni dolgotrajno in ocenili so, daje med 3 in 5 leti pri odraslih in otrocih, starih nad 4 leta (Brandt, B., et al. 1975, Kayhty, H., et al. 1980, in Ceesay, S. J., et al. 1993). Za otroke, stare od 1 do 4 let, je trajanje zaščite manj kot 3 leta (Reingold, A.L., et al. 1985).
Polisaharidi so nesposobni vezave na glavne histokompatibilnostne kompleksne molekule, prvi pogoj za antigensko prezentacijo na T-pomočniške limfocite in stimulacijo T-pomočniških limfocitov, t.j. so od T-celic neodvisni antigeni. Polisaharidi so sposobni stimulirati B limfocite za proizvodnjo protiteles brez pomoči T-pomočniških limfocitov. Rezultat T-neodvisne stimulacije B limfocitov je pomanjkanje spominske indukcije po imunizaciji s temi antigeni. Polisaharidni antigeni so sposobni razviti zelo učinkovite T-neodvisne odzive pri odraslih, vendar so ti T-neodvisni odzivi šibki pri nezrelem imunskem sistemu dojenčkov in mlajših otrok.
T-neodvisne polisaharidne antigene lahko pretvorijo v T-odvisne antigene s kovalentno vezavo polisaharidov na proteinske molekule (nosilci ali nosilni proteini), B-celice, ki vežejo polisaharidno komponento konjugatnega cepiva, lahko aktivirajo s pomočniškimi T celicami, specifičnimi za peptide, ki so del konjugiranega nosilnega proteina. T-pomočniški odziv na nosilni protein služi za povečanje proizvodnje protiteles za polisaharid.
Pokazalo seje, daje polisaharid sero-skupine B šibko do ne-imunogenski pri Človeški populaciji (Wyle, F.A., et al. 1972). Kemična vezava polisaharida te sero-skupine na proteine ni znatno spremenila imunskega odziva pri laboratorijskih živalih (Jennings, H.J., et al. 1981). Misli se, da razlog za pomanjkanje imunskega odziva na saharid te sero-skupine izhaja iz strukturnih podobnosti med polisaharidom sero-skupine B in polisialiliranimi gostiteljskimi glikoproteini, kot so nevralne celične adhezijske molekule.
Opisano je bilo meningokokno konjugatno cepivo na osnovi polisaharida sero-skupine C. To monovalentno cepivo razvije močan funkcionalni odziv na kapsulami polisaharid, prisoten na sojih TV. meningitidis, ustrezajoč sero-skupini C. Tako cepivo je sposobno le zaščite proti boleznim, povzročenim z bakterijami sero-skupine C.
Obstoječa cepiva na osnovi meningokoknega polisaharida so omejeno uporabna pri mlajših otrocih in ne zagotavljajo dolgotrajne zaščite pri odraslih. Edino meningokokno cepivo, za katerega se je pokazalo, da je sposobno razviti dolgotrajno zaščito pri vseh skupinah, vključno otrocih, kjer je riziko meningokokne infekcije, je na osnovi polisaharida iz ene same sero-skupine od TV. meningitidis in ne zagotavlja zaščite proti infekciji z drugimi sero-skupinami. Tako obstaja potreba po meningokoknem konjugatnem cepivu, ki je sposobno, da podeli široko, dolgotrajno zaščito proti meningokoknim boleznini pri otrocih in odraslih, kjer je riziko meningokokne infekcije. Multivalentni meningokokni polisaharidi v smislu predloženega izuma rešijo to potrebo s tem, da zagotovijo formulacije cepiv, kjer so se imunogeni polisaharidi iz glavnih patogenih sero-skupin od N. meningitidis pretvorili v T-odvisne antigene s konjugacijami na nosilne proteine.
Povzetek izuma
Predloženi izum zagotavlja imunološke sestavke za zdravljenje meningokoknih bolezni, povzročenih s patogenim Neisseria meningitidis.
Predloženi izum zagotavlja imunološke sestavke, ki obsegajo dva ali več konjugatov proteina-polisaharida, kjer vsak od konjugatov obsega kapsulami polisaharid od N. meningitidis, konjugiran na nosilni protein.
Predloženi izum zagotavlja imunološke sestavke, ki obsegajo dva ali več različnih konjugatov proteina-polisaharida, kjer vsak od konjugatov obsega kapsulami polisaharid iz različne sero-skupine od TV. meningitidis, konjugiran na nosilni protein.
Predloženi izum zagotavlja cepiva za meningokokne bolezni, povzročene s patogenim Neisseria meningitidis. Predloženi izum zagotavlja multivalentna cepiva, ki obsegajo imunološko učinkovite količine dveh do štirih različnih konjugatov proteinapolisaharida, kjer vsak od konjugatov vsebuje različen kapsulami polisaharid, konjugiran na nosilni protein, in kjer vsak kapsulami polisaharid izberemo iz skupine, ki obstoji iz kapsulamega polisaharida iz sero-skupin A, C, W135 in Y.
Predloženi izum tudi zagotavlja postopke za pripravo sestavka multivalentnega meningokoknega polisaharida-proteina, ki obsegajo čiščenje dveh ali več kapsulamih polisaharidov iz patogenega Neisseria meningitidis·, konjugiranje očiščenih poiisaharidov na enega ali več nosilnih proteinov in kombiniranje konjugatov, da izdelamo sestavek multivalentnega meningokoknega polisaharida-proteina.
Predloženi izum nadalje zagotavlja postopek za induciranje imunološkega odziva na kapsulami polisaharid od N. memngitidis, ki obsega dajanje imunološko učinkovite količine imunološkega sestavka v smislu izuma človeku ali živali.
Predloženi izum zagotavlja multivalentno meningokokno cepivo, ki obsega imunološko učinkovite količine dveh do štirih različnih konjugatov proteinapolisaharida, kjer vsak konjugat vsebuje različen kapsulami polisaharid, konjugiran na nosilni protein, in kjer vsak kapsulami polisaharid izberemo iz skupine, ki obstoji iz kapsularnega polisaharida iz sero-skupin A, C, W135 in ¥.
Predloženi izum zagotavlja postopek za zaščito človeka ali živali, občutljive za infekcijo od N. meningitidis, ki obsega dajanje imunološko učinkovite doze cepiva v smislu izuma človeku ali živali.
Vsi patenti, patentne prijave in druge objave, ki so tukaj navedene, so s tem vključene v celoti kot referenca.
Podroben opis izuma
Predloženi izum obsega imunološki sestavek dveh ali več različnih konjugatov proteina-polisaharida, kjer vsak od konjugatov obsega kapsulami polisaharid, konjugiran na nosilni protein. Tako predloženi izum vključuje sestavke, ki obsegajo dva ali več različnih kapsulamih poiisaharidov, konjugiranih na enega ali več nosilnih proteinov.
Kapsularne polisaharide lahko pripravimo s standardnimi tehnikami, znanimi strokovnjakom (ref.). Pri predloženem izumu so prednostni polisaharidi, pripravljeni iz sero-skupin A, C, W135 in Y od /V. meningitidis.
Pri prednostni izvedbi pripravimo meningokokne konjugate teh sero-skupin z ločenimi postopki in formuliramo v formulacijo z eno samo dozo. Npr. kapsularne polisaharide iz sero-skupin A, C, W135 in Y od A. meningitidis ločeno čistimo.
Pri prednostni izvedbi v smislu predloženega izuma očiščeni polisaharid depolimeriziramo in aktiviramo pred konjugacijo na nosilni protein. Pri prednostni izvedbi v smislu predloženega izuma kapsularne polisaharide sero-skupin A, C, W135 in Y od N. meningitidis delno depolimeriziramo ob uporabi blagih oksidativnih pogojev.
Depolimerizaciji ali delni depolimerizaciji polisaharidov lahko nato sledi aktivacijska stopnja. Z aktivacijo je mišljena kemična obdelava polisaharida, da dobimo kemične skupine, ki so sposobne reagirati z nosilnim proteinom. Prednostna aktivacijska metoda vključuje obdelavo z dihidrazidom adipinske kisline v fiziološki raztopini kuhinjske soli pri pH 5,0±0,l približno dve uri pri 15 do 30°C. En postopek za aktivacijo je opisan v US 5,965,714.
Ko so aktivirani, lahko kapsularne polisaharide nato konjugiramo na enega ali več nosilnih proteinov. Pri prednostni izvedbi v smislu predloženega izuma vsak kapsulami polisaharid ločeno konjugiramo na eno samo vrsto nosilnega proteina. Pri prednostni izvedbi vsakega od kapsulamih polisaharidov iz sero-skupin A, C, W135 in Y od N. meningitidis ločeno konjugiramo na isto vrsto nosilnega proteina.
Nosilni proteini lahko vključujejo neaktivirane bakterijske toksine, kot toksoid davice, CRM197, toksoid tetanusa, toksoid oslovskega kašlja, E. coli LT, E. coli ST in eksotoksin A iz Pseudomonas aeruginosa. Lahko uporabimo tudi bakterijske zunanje
-7membranske proteine, kot zunanji membranski kompleks c (OMPC), porine, transferin vezavne proteine, pnevmolizo, pnevmokokni površinski protein A (PspA) ali pnevmokokni adhezinski protein (PsaA). Kot nosilne proteine lahko uporabimo tudi druge proteine, kot ovalbumin, školjčni (Diodora apertura) hemocianin (KHL), goveji serumski albumin (BSA) ali očiščen proteinski derviat tuberkulina (PPD). Nosilni proteini so prednostno proteini, ki so netoksični in ne-reaktogenični ter se jih da dobiti v zadostni količini in z zadostno čistoto. Nosilni proteini bi morali biti dostopni za standardne konjugacijske procedure. Pri prednostni izvedbi v smislu predloženega izuma uporabimo kot nosilni protein toksin davice, očiščen iz kultur Corynebacteria diphtheriae in kemično detoksificiran ob uporabi formaldehida.
Po konj ugacij i kapsulamega polisaharida na nosilni protein lahko konjugate polisaharida-proteina očistimo (obogatimo glede na količino konjugata polisaharidaproteina) s številnimi tehnikami. En cilj stopnje čiščenja je, da odstranimo nevezan polisaharid iz konjugata polisaharida-proteina. En postopek čiščenja, ki vključuje ultrafiltracijo v prisotnosti amonijevega sulfata, je opisan v US 6,146,902. Alternativno lahko konjugate očistimo od nezreagiranega proteina in polisaharida s številnimi standardnimi tehnikami, ki vključujejo med drugim velikostno izključitveno kromatografijo, gostotno gradientno centrifugiranje, hidrofobno interakcijsko kromatografijo ali frakcionacijo z amonijevim sulfatom. Glej npr. P.W. Anderson, et al. (1986); J.Immunol. 137: 1181-1186. Glej tudi H.J. Jennings in C. Lugowski (1981) J. Immunol. 127: 1011-1018.
Po konjugaciji polisaharida in nosilnega proteina pripravimo imunološke sestavke v smislu predloženega izuma s kombiniranjem različnih konjugatov polisaharidaproteina. Imunološki sestavki v smislu predloženega izuma obsegajo dva ali več različnih kapsulamih polisaharidov, konjugiranih na enega ali več nosilnih proteinov. Prednostna izvedba v smislu predloženega izuma je bivalentni imunološki sestavek, ki obsega kapsularne polisaharide iz sero-skupin A in C od N. meningitidis, ločeno konjugirane na toksoid davice. Bolj prednostno je predloženi izum tetravalentni imunološki sestavek, ki obsega polisaharide iz sero-skupin A, C, W135 in Y od N. meningitidis, ločeno konjugirane na toksoid davice.
Priprava in uporaba nosilnih proteinov in številni postopki potencialne konjugacije so dobro znani strokovnjakom. Konjugate v smislu predloženega izuma lahko pripravijo strokovnjaki ob uporabi navodil, ki jih vsebuje predloženi izum, kot tudi informacij, ki so zlahka dostopne v splošni literaturi. Smernice se lahko tudi dobijo iz kateregakoli ali vseh od naslednjih US patentov, katerih vsebina je tukaj vključena v celoti kot referenca: US 4,356,170; US 4,619,828; US 5,153,312; US 5,422,427 in US 5,445,817.
Imunološke sestavke v smislu predloženega izuma naredimo tako, da posebej pripravimo konjugate polisaharida-proteina iz različnih meningokoknih sero-skupin in nato konjugate kombiniramo. Imunološke sestavke v smislu predloženega izuma lahko uporabimo kot cepiva. Formuliranje cepiv v smislu predloženega izuma lahko izvedemo ob uporabi metod, priznanih v stroki. Sestavki cepiv v smislu predloženega izuma lahko tudi vsebujejo enega ali več adjuvansov. Adjuvansi vključujejo, kot primer in ne kot omejitev, aluminijeve adjuvanse, Freundov adjuvans, ΒΑΥ, DC-hol, pcpp, monofosforil lipid A, CpG, QS-21, toksin kolere in formil metionil peptid. Glej npr. Vaccine Design, the Subunit and Adjuvant Approach, 1995 (M.F. Powell in M.J. Newman, eds., Plenum Press, NY). Adjuvans je prednostno aluminijev adjuvans, kot aluminijev hidroksid ali aluminijev fosfat.
Kot je prikazano spodaj, sprožijo cepiva in imunološki sestavki v smislu izuma Todvisnemu podoben imunski odziv pri različnih živalskih modelih, medtem ko polisaharidno cepivo sproži T-neodvisnemu podoben imunski odziv. Tako so sestavki v smislu izuma tudi koristna raziskovalna orodja za preučevanje bioloških poti in postopkov, ki so vpleteni v T-odvisnemu podobne odzive na N. meningitidis antigene.
Količino cepiva v smislu izuma, ki jo je treba dajati človeku ali živali, in režim dajanja lahko določimo v skladu s standardnimi tehnikami, ki so dobro znane farmacevtskim in veterinarskim strokovnjakom, ob upoštevanju takih faktorjev, kot so posamezen antigen, adjuvans (če je prisoten), starost, spol, teža, vrsta in stanje posamezne živali ali pacienta ter način dajanja. Pri predloženem izumu je lahko količina polisaharida-proteinskega nosilca, da zagotovimo učinkovito dozo za cepljenje proti N. meningitidis, med okoli 0,02 pg do okoli 5 pg na kg telesne teže. Pri prednostnem sestavku in postopku v smislu predloženega izuma je doziranje med okoli 0,1 pg do 3 pg na kg telesne teže. Npr. učinkovito doziranje bo zahtevalo manj protiteles, če je čas, ki je minil po infekciji, krajši, ker je manj časa za razmnoževanje bakterij. Na podoben način bo učinkovito doziranje odvisno od bakterijske obremenitve v času diagnoze. Za terapevtsko uporabo bi lahko upoštevali večkratne injekcije, dajane v Času nekaj dni.
Multivalentne konjugate v smislu predloženega izuma lahko dajemo kot eno samo dozo ali v seriji (t.j. z obnovitvijo ali obnovitvami). Npr. otrok bi lahko prejel eno samo dozo zgodaj v življenju, nato pa bi mu dali obnovitveno dozo do 10 let kasneje, kot sedaj priporočajo za druga cepiva za preprečevanje otroških bolezni.
Obnovitvena doza bo generirala protitelesa iz iniciiranih B-celic, t.j. anamnestičen odziv. To je, multivalentno konjugatno cepivo sproži velik primarni (t.j. po enem samem dajanju cepiva) funkcionalni protitelesni odziv pri mlajših populacijah, če ga primerjamo z odobrenim polisaharidnim cepivom, in je sposobno sprožiti anamnestičen odziv (to je po obnovitvenem dajanju), kar kaže, da je protektiven imunski odziv, ki ga sproži multivalentno konjugatno cepivo v smislu predloženega izuma, dolgotrajen.
Sestavki v smislu izuma lahko vključujejo tekoče pripravke za odprtine, npr. oralno, nazalno, analno, vaginalno, peroralno, intragastrično, mukozalno (npr. perlinkvalna, alveolama, gingivalna, vohalna ali respiratorna sluznica) itd. dajanje, kot suspenzije,
-1010 sirupe ali eliksirje; in pripravke za parenteralno, subkutano, intradermalno, intramuskulamo, intraperitonealno ali intravensko dajanje (npr. dajanje injekcij), kot sterilne suspenzije ali emulzije. Prednostno je intravensko in parenteralno dajanje. Taki sestavki so lahko v zmesi s primernim nosilcem, razredčilom ali ekscipientom, kot je sterilna voda, fiziološka raztopina kuhinjske soli, glukoza ipd. Sestavki so lahko tudi liofilizirani. Sestavki lahko vsebujejo pomožne snovi, kot omočila ali emulgirna sredstva, pH pufma sredstva, želirne dodatke ali dodatke za povečanje viskoznosti, konzervima sredstva, arome, barvila ipd., glede na želeni način dajanja in pripravek. Za pripravo primernih pripravkov brez nepotrebnega eksperimentiranja si lahko pomagamo s standardnimi teksti, kot REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCE, 17. izdaja, 1985, kar je vključeno tukaj kot referenca.
Sestavke v smislu izuma ugodno zagotovimo kot tekoče pripravke, npr. izotonične vodne raztopine, suspenzije, emulzije ali viskozne sestavke, kijih lahko zapuframo do izbranega pH. Če je prednostna absorpcija v prebavnem traktu, so lahko sestavki v smislu izuma v trdni obliki pilul, tablet, kapsul, kaplet ipd., vključno trdni pripravki, ki se časovno sproščajo ali ki imajo tekoče polnjenje, npr. z želatino prekrita tekočina, pri čemer se želatina raztopi v želodcu za oddajo v črevo. Če je želeno nazalno ali respiratorno (mukozalno) dajanje, so lahko sestavki v obliki in jih razdeljujemo s stiskalnim razpršilnim razdelilnikom, razdelilnikom s črpalko ali aerosolnim razdelilnikom. Aerosoli so običajno pod tlakom s pomočjo ogljikovodika. Razdelilniki s črpalko lahko prednostno razdeljujejo odmerjeno dozo ali dozo s posamezno velikostjo delcev.
Tekoči pripravki se dajo normalno laže pripraviti kot geli, drugi viskozni sestavki in trdni sestavki. Poleg tega so tekoči sestavki nekako bolj primerni za dajanje, zlasti z injekcijo ali oralno, živalim, otrokom, zlasti majhnim otrokom, in drugim, ki imajo lahko težave s požiranjem pilule, tablete, kapsule ipd., ali pri več-doznih situacijah. Po drugi strani pa lahko viskozne sestavke formuliramo znotraj primernega območja
-1111 viskoznosti, da zagotovimo daljše kontaktne čase s sluznico, kot je obloga želodca ali nazalna sluznica.
Očitno bo izbira primernih nosilcev in drugih dodatkov odvisna od natančnega načina dajanja in narave posamezne dozirne oblike, npr. tekoča dozirna oblika (npr. če je treba sestavek formulirati v raztopino, suspenzijo, gel ali drugo tekočo obliko) ali trdna dozirna oblika (npr. če je treba sestavek formulirati v pilulo, tableto, kapsulo, kapleto, obliko s časovnim sproščanjem ali s tekočino polnjeno obliko).
Raztopine, suspenzije in geli običajno vsebujejo pretežno količino vode (prednostno očiščene vode) poleg učinkovine. Lahko so prisotne tudi manjše količine drugih sestavin, kot so naravnalci pH (npr. baza, kot NaOH), emulgatorji ali dispergirna sredstva, pufri, konzervima sredstva, omočila, želima sredstva (npr. metilceluloza), barvila in/ali arome. Sestavki so lahko izotonični, t.j. lahko imajo isti osmotski tlak kot kri in solzna tekočina.
Želeno izotoničnost sestavkov v smislu predloženega izuma lahko dosežemo ob uporabi natrijevega tartrata, propilenglikola ali drugih anorganskih ali organskih topljencev. Natrijev klorid je prednosten zlasti za pufre, ki vsebujejo natrijeve ione.
Viskoznost sestavkov lahko vzdržujemo pri izbranem nivoju ob uporabi farmacevtsko sprejemljivega zgostila. Prednostna je metilceluloza, ker je zlahka in gospodarno dosegljiva in je z njo lahko delati. Druga primerna zgostila so npr. ksantanski gumi, karboksimetilceluloza, hidroksipropilceluloza, karbomer ipd. Prednostna koncentracija zgostila bo odvisna od izbranega sredstva. Pomembno je, da uporabimo količino, ki bo dosegla izbrano viskoznost. Viskozne sestavke običajno pripravimo iz raztopin z dodatkom takih zgostil.
Lahko uporabimo farmacevtsko sprejemljivo konzervimo sredstvo za povečanje časa skladiščenja sestavkov. Primeren je lahko benzilalkohol, čeprav lahko tudi uporabimo
-1212 številna konzervama sredstva, vključno npr. parabens, timerosal, klorbutanol ali benzalkonijev klorid. Primerna koncentracija konzervirnega sredstva bo od 0,02% do 2% glede na celotno maso, čeprav lahko znatno variira glede na uporabljeno sredstvo.
Strokovnjaki bodo vedeli, da moramo izbrati take komponente sestavkov, ki so kemično inertne glede na?/, meningitidis polisaharidne-proteinske nosilne konjugate.
Izum bomo nadalje opisali glede na naslednje ilustrativne, neomejevalne primere, kjer so podrobno navedene prednostne izvedbe inventivnega koncepta. Drugi primeri v smislu predloženega izuma bodo očitni strokovnjakom, ne da bi se oddaljili od duha izuma.
PRIMERI
Primer 1
Priprava očiščenih kapsularnih polisaharidnih praškov Neisseria meningitidis seroskupin A, C, W135 in Y
Priprava surove paste
Mokro zamrznjene nasaditvene kulture Neisseria meningitidis sero-skupin A, C, W135 in Y posebej odtajamo in rekuperiramo s pomočjo tekočega Watson Scherp medija in nasadimo v Blake-ove steklenice, ki vsebujejo Mueller Hinton agarni medij. Blake-ove steklenice inkubiramo pri 35 do 37°C v atmosferi CO2 15 do 19 ur. Po inkubacijskem času rast odstranimo iz Blake-ovih steklenic in dodamo v 4-litrske bučke, ki vsebujejo Watson Scherp medij. Bučke inkubiramo pri 35 do 37°C 3 do 7 ur na namiznem stresalniku. Vsebino 4-litrskih bučk prenesemo v fermentorsko posodo, ki vsebuje Watson Scherp medij. Fermentorsko posodo inkubiramo pri 35 do 37°C 7 do 12 ur ob kontroli vsebnosti raztopljenega kisika in pH z dodatnim šaržiranjem in
-1313 dodatki proti penjenju. Po inkubacijskem času prenesemo vsebnost fermentorske posode v 500-litrski tank, dodamo Cetavlon in material mešamo 1 uro. S Cetavlonom obdelano rast centrifugiramo pri približno 15000 do 17000xg pri pretočni hitrosti približno 30 do 70 1 na uro. Surovi polisaharid oborimo iz supernatanta z drugim Cetavlonskim obarjanjem. Supernatantu dodamo Cetavlon in material mešamo vsaj 1 uro pri sobni temperaturi. Material hranimo pri 1 do 5°C 8 do 12 ur. Oborjeni polisaharid zberemo s centrifugiranjem pri približno 45000 do 50000xg pri pretočni hitrosti 300 do 400 ml na minuto. Zbrano pasto hranimo pri -60°C ali manj do nadaljnje predelave.
Praškasti pripravek očiščenega polisaharida
Neaktivirano pasto odtajamo in prenesemo v mešalnik. Pasto mešamo z 0,9M kalcijevim kloridom, da dobimo homogeno suspenzijo. Suspenzijo centrifugiramo pri približno 10000xg 15 minut. Supematant dekantiramo skozi svitek brez pukanice v vsebnik kot prvi ekstrakt. Pasti dodamo drugo količino 0,9M kalcijevega klorida in mešamo, da dobimo homogeno suspenzijo. Suspenzijo centrifugiramo kot zgoraj in supematant kombiniramo s supernatantom iz prve ekstrakcije. Izvedemo skupaj štiri ekstrakcije in supematante zberemo. Zbrane ekstrakte koncentriramo z ultrafiltracijo ob uporabi 10-30 kDA MWC0 spiralnih ultrafiltracijskih enot.
Koncentriranemu materialu dodamo magnezijev klorid in pH naravnamo na 7,2 do 7,5 ob uporabi natrijevega hidroksida. Koncentratu dodamo DNazo in RNazo ter inkubiramo pri 25 do 28°C ob mešanju 4 ure. Dodamo etanol do koncentracije 30 do 50% . Oborjeno nukleinsko kislino in protein odstranimo s centrifugiranjem pri 10000xg 2 uri. Supematant rekuperiramo in polisaharid oborimo z dodatkom etanola do 80% in pustimo stati preko noči pri 1 do 5°C. Alkohol odstranimo z natego in oborjeni polisaharid centrifugiramo 5 minut pri 10000xg. Oborjeni polisaharid izperemo z alkoholom. Polisaharid izperemo z acetonom, centrifugiramo 15 do 20 minut pri 10000xg. Polisaharid sušimo v vakuumu. Začetni polisaharidni prašek
-1414 raztopimo v raztopino natrijevega acetata. Dodamo magnezijev klorid in pH naravnamo na 7,2 do 7,5 ob uporabi raztopine natrijevega hidroksida. Raztopini dodamo DNazo in RNazo ter inkubiramo pri 25 do 28°C ob mešanju 4 ure, da odstranimo rezidualne nukleinske kisline. Po inkubaciji s temi encimi dodamo k polisaharidni-encimski zmesi enak volumen raztopine natrijevega acetata-fenola in damo na namizni stresalnik pri 1 do 5°C za približno 30 minut. Zmes centrifugiramo pri 10000xg 15 do 20 minut. Gornji vodni sloj poberemo in shranimo. Vodnemu sloju dodamo enak volumen raztopine natriejvega acetata-fenola in ekstrahiramo kot zgoraj. Izvedemo v celoti štiri ekstrakcije, da odstranimo protein in endotoksin iz polisaharidne raztopine. Združene vodne ekstrakte do 10-krat razredčimo z vodo za injekcije in diafiltriramo proti 10 volumnom vode za injekcije. Diafiltriranemu polisaharidu dodamo kalcijev klorid. Polisaharid oborimo preko noči pri 1 do 5°C z dodatkom etanola do 80%. Alkoholni supematant odstranimo in polisaharid zberemo s centrifugiranjem pri 10000xg 15 minut. Očiščen polisaharid izperemo dvakrat z etanolom in enkrat z acetonom. Izprani prašek posušimo v vakuumu v desikatorju. Posušeni prašek hranimo pri -30°C ali manj do predelave na konjugat.
Primer 2
Depolimerizacija očiščenega kapsularnnega polisaharidnega praška Neisseria meningitidis sero-skupin A, C, W135 in Y
Materiali, uporabljeni pri pripravi, vključujejo očiščene kapsularne polisaharidne praške iz Neisseria meningitidis sero-skupin A, C, W135 in Y (pripravljene v skladu s primerom 1), sterilen 50 mM natrijev acetatni pufer, pH 6,0, sterilno IN klorovodikovo kislino, sterilen IN natrijev hidroksid, 30%-en vodikov peroksid in sterilno fiziološko raztopino kuhinjske soli (0,85%-en natrijev klorid).
Polisaharid vsake sero-skupine depolimeriziramo v posebni reakciji. V tank iz nerjavečega jekla šaržiramo do 60 g očiščenega kapsulamega polisaharidnega praška.
-1515
Polisaharidu dodamo sterilen 50 mM natrijev acetatni pufer, pH 6,0, da dobimo koncentracijo 2,5 g polisaharida na liter. Polisaharidno raztopino pustimo mešati pri 1 do 5°C 12 do 24 ur, da dobimo raztopino. Reakcijski tank priključimo na toplotno izmenjevalno enoto. Dodamo dodaten 50 mM natrijev acetatni pufer, pH 6,0, da razredčimo polisaharid na reakcijsko koncentracijo 1,25 g na liter. Polisaharidno raztopino segrejemo na 55°C±0,l. Reakcijski zmesi dodamo alikvot 30% vodikovega peroksida, da dobimo reakcijsko koncentracijo 1% vodikovega perooksida.
Potek reakcije kontroliramo s tem, da sledimo časovni spremembi v molekularni velikosti polisaharida. Vsakih 15 do 20 minut odstranimo alikvote iz reakcijske zmesi in injiciramo na HPSEC kolono, da merimo molekularno velikost polisaharida. Ko molekulama velikost polisaharida doseže tarčno molekularno velikost, grelno enoto izključimo in polisaharidno raztopino hitro ohladimo na 5°C s kroženjem skozi kopel ledene vode. Raztopino depolimeriziranega polisaharida koncntriramo na 15 g na liter s priključitvijo reakcijskega tanka na ultrafiltracijsko enoto, opremljeno s 3000 MWCO regeneriranimi celuloznimi patronami. Koncentrirano raztopino depolimeriziranega polisaharida diafiltriramo proti 10 volumnom sterilne fiziološke raztopine kuhinjske soli (0,85%-en natrijev klorid). Depolimeriziran polisaharid shranjujemo pri 1 do 5°C do naslednje stopnje postopka.
Molekularno velikost depolimeriziranega polisaharida določimo s prehajanjem skozi gelno filtracijsko kromatografsko kolono, ki je na tržišču pod blagovno znamko Ultahydrogel™250, ki smo jo kalibrirali ob uporabi standardov dekstranske molekularne velikosti in z multi-kotnim laserskim svetlobnim sipanjem. Količino polisaharida določimo z vsebnostjo fosforja za sero-skupino A ob uporabi metode Bartlet, G.R.J. (1959) Journal of Biological Chemsitry, 234, str. 466-468, in z vsebnostjo sialinske kisline za sero-skupine C, W135 in Y ob uporabi metode Svennerholm, L. (1955) Biochimica Biophysica Acta 24, str. 604-611. O-acetilno vsebnost določimo z metodo Hesterin, S. (1949) Journal of Biological Chemistry 180, str. 249. Reducimo aktivnost določimo z metodo Park, J.T. in Johnson, M.J. (1949)
-1616
Journal of Biological Chemistry 181, str. 149-151. Strukturno integriteto depolimeriziranega polisaharida določimo s proteinsko in 13C NMR. Čistoto depolimeriziranega polisaharida določimo z merjenjem L AL (endotoksin) vsebnosti in vsebnosti rezidualnega vodikovega peroksida.
Primer 3
Derivatizacija depolimeriziranega polisaharida Neisseria meningitidis sero-skupin A, C, W135 in Y
Materiali, uporabljeni pri tej pripravi, vključujejo z vodikovim peroksidom depolimeriziran kapsulami polisaharid sero-skupin A, C, W135 in Y iz Neisseria meningitidis (pripravljen v skladu s primerom 2), dihidrazid adipinske kisline, 1-etil3-(3-dimetilaminopropil)karbodiimd (EDAC) le za sero-skupino A, natrijev cianoborohidrid, sterilno IN klorovodikovo kislino, sterilen IN natrijev hidroksid, sterilen IM natrijev klorid in sterilno fiziološko raztopino kuhinjske soli (0,85%-en natrijev klorid).
Polisaharid vsake sero-skupine derivatiziramo v posebni reakciji. V tank iz nerjavečega jekla šaržiramo očiščen depolimeriziran polisaharid in razredčimo s sterilno 0,85%-no fiziološko raztopino kuhinjske soli, da dosežemo končno reakcijsko koncentracijo 6 g polisaharida na liter. Tej raztopini dodamo koncentriran alikvot dihidrazida adipinske kisline, raztopljenega v sterilni 0,85%-ni fiziološki raztopini kuhinjske soli, da dosežemo reakcijsko koncentracijo 1 g na liter. Le za sero-skupino A dodamo EDAC kot koncentriran alikvot, raztopljen v sterilni 0,85%-ni fiziološki raztopini kuhinjske soli, da dosežemo reakcijsko koncentracijo 1 g na liter. pH naravnamo na 5±0,1 in ta pH vzdržujemo 2 uri ob uporabi sterilne IN klorovodikove kisline in sterilnega IN natrijevega hidroksida pri sobni temperaturi (15 do 30°C). Po dveh urah dodamo reakcijski zmesi koncentriran alikvot natrijevega cianoborohidrida, raztopljenega v 0,85%-ni fiziološki raztopini kuhinjske soli, da dosežemo reakcijsko
-1717 koncentracijo 2 g na liter. Reakcijo mešamo pri sobni temperaturi (15 do 30°C) 44 ur±4 ure ob vzdrževanju pH pri 5,5±0,5. Po tem reakcijskem času naravnamo pH na 6,0±0,l in derivatiziran polisaharid koncentriramo do 12 g polisaharida na liter s priključitvijo reakcijskega tanka na ultrafiltracijsko enoto, opremljeno s 3000 MWC0 regeneriranimi celuloznimi patronami. Koncentriran derivatiziran polisaharid diafiltriramo proti 30 volumnom IM natrijevega klorida, čemur sledi 10 volumnov 0,15 M natrijevega klorida. Tank izključimo od ultrafiltracijske enote in shranjujemo pri 1 do 5°C 7 dni. Tank ponovno priključimo na ultrafiltracijsko enoto, opremljeno s 3000 MWC0 regeneriranimi celuloznimi patronami, in diafiltriramo proti 30 volumnom 1 M natrijevega klorida, čemur sledi 10 volumnov 0,15 M natrijevega klorida.
Molekularno velikost derivatiziranega polisaharida, količino polisaharida in Oacetilno vsebnost merimo z istimi metodami, uporabljenimi na depolimeriziranem polisaharidu. Hidrazidno vsebnost merimo z metodo 2,4,6-trinitrobenzensulfonske kisline Snyder, S.L. in Sobocinski, P.Z. (1975) Analytical Biochemistry 64, str. 282288. Strukturno integriteto derivatiziranega polisaharida določimo s protonsko *H in l3C NMR. Čistoto derivatiziranega polisaharida določimo z merjenjem nivoja nevezanega hidrazida, LAL (endotoksin) vsebnosti in vsebnosti rezidualnega cianoborohidrida.
Primer 4
Priprava nosilnega proteina
Priprava surovega proteina toksoida davice
Liofilizirane nasaditvene kulture rekonstituiramo in inkubiramo 16 do 18 ur. Alikvot iz kulture prenesemo v 0,5-litrsko bučko, ki vsebuje rastni medij, in gojilno bučko inkubiramo pri 34,5 do 36,5°C na rotacijskem stresalniku 7 do 9 ur. Alikvot iz gojilne
-1818 bučke prenesemo v 4-litrsko bučko, ki vsebuje rastni medij, in gojilno bučko inkubiramo pri 34,5 do 36,5°C na rotacijskem stresalniku 14 do 22 ur. Kulture iz 4litrske bučke uporabimo za inokulacijo fermentorja, ki vsebuje rastne medije. Fermentor inkubiramo pri 34,5 do 36,5°C 70 do 144 ur. Vsebino fermentorja filtriramo skozi globinske filtre v zbiralno posodo. Žetvi dodamo alikvot 37%-ne formaldehidne raztopine, da dosežemo koncentracijo 0,2%. pH naravnamo na 7,4 do 7,6. Žetev filtriramo skozi 0,2-mikrometrsko filtrsko patrono v sterilne 20-litrske steklenice. Steklenice inkubiramo pri 34,5 do 36,5°C 7 dni. V vsako 20-litrsko steklenico dodamo alikvot 37%-ne formaldehidne raztopine, da dosežemo koncentracijo 0,4%. pH zmesi naravnamo na 7,4 do 7,6. Steklenice inkubiramo pri
34,5 do 36,5°C 7 dni na stresalniku. V vsako 20-litrsko steklenico dodamo alikvot 37%-ne formaldehidne raztopine, da dosežemo koncentracijo 0,5%. pH zmesi naravnamo na 7,4 do 7,6. Steklenice inkubiramo pri 34,5 do 36,5°C 8 tednov. Surovi toksoid testiramo na detoksifikacijo, Steklenice med časom testiranja shranjujemo pri 1 do 5°C.
Čiščenje surovega proteina toksoida davice
Surovi toksoid pustimo segreti na sobno temperaturo in vsebine 20-litrskih steklenic združimo v čistilni tank. pH toksoida naravnamo na 7,2 do 7,4, surovemu toksoidu dodamo oglje in mešamo 2 minuti. Zmes oglja in toksoida pustimo stati 1 uro in jo nato filtriramo skozi globinsko filtrsko patrono v drugi čistilni tank. Filtratu dodamo trden amonijev sulfat, da dosežemo 70% nasičenja, pH naravnamo na 6,8 do 7,2 in raztopino pustimo stati 16 ur. Oborjeni protein zberemo s filtracijo in izperemo s 70% nasičenja raztopine amonijevega sulfata, pH 7,0. Oborino raztopimo v sterilno destilirano vodo in proteinsko raztopino filtriramo v zbiralno posodo iz nerjavečega jekla. pH naravnamo na 6,8 do 7,2 in amonijev sulfat dodamo do 40% nasičenja. pH raztopine naravnamo na 7,0 do 7,2 in raztopino pustimo stati 16 ur. Oborino odstranimo s filtracijo in zavržemo. Filtratu dodamo amonijev sulfat do 60% nasičenja in pH naravnamo na 7,0 do 7,2. Zmes pustimo stati 16 ur in oborjeni protein zberemo
-1919 s filtracijo. Oborino raztopimo v sterilno destilirano vodo, filtriramo, da odstranimo neraztopljeni protein, in diafiltriramo proti 0,85%-ni fiziološki raztopini kuhinjske soli.
Koncentriranje in sterilno filtriranje očiščenega proteina toksoida davice
Proteinsko raztopino koncentriramo na 15 g na liter in diafiltriramo proti 10 volumnom 0,85%-ne fiziološke raztopine kuhinjske soli ob uporabi 10000 MWC0 regenerirane celulozne filtrske patrone. Koncentrirano proteinsko raztopino steriliziramo s filtracijo skozi 0,2-mikrometrsko membrano. Proteinsko raztopino shranjujemo pri 1 do 5°C do predelave na konjugat.
Proteinsko koncentracijo določimo po metodi Lowry, O.H. et al (1951) Journal of Biological Chemistry 193, str. 265-275. Čistoto proteina merimo s sterilnostjo, LAL (endotoksin) vsebnostjo in rezidualno formaldehidno vsebnostjo.
Primer 5
Priprava monovalentnih konjugatov polisaharida od Neisseria meningitidis seroskupin A} C, W135 in Y na protein toksoida davice
Materiali, uporabljeni pri tej pripravi, vključujejo z adipinsko kislino derivatiziran polisaharid iz Neisseria meningitidis sero-skupin A, C, W135 in Y (pripravljen v skladu s primerom 3), sterilni protein toksoida davice (pripravljen v skladu s primerom 4), EDAC, amonijev sulfat, sterilno IN klorovodikovo kislino, sterilni IN natrijev hidroksid in sterilno fiziološko raztopino kuhinjske soli (0,85%).
Polisaharidni konjugat vsake sero-skupine pripravimo s posebno reakcijo. Vse štiri konjugate pripravimo z naslednjim postopkom. V tank iz nerjavečega jekla šaržiramo očiščen, z adipinsko kislino derivatiziran polisaharid pri reakcijski koncentraciji 700
-2020 do 1000 μιηοίον reaktivnega hidrazida na liter in očiščen protein toksoida davice pri reakcijski koncentraciji 3,8 do 4,0 g proteina na liter. Za razredčenje izhodnih snovi na tarčne reakcijske koncentracije uporabimo 0,85%-no fiziološko raztopino kuhinjske soli in pH naravnamo na 5,0±0,l. Polisaharidni proteinski zmesi dodamo alikvot EDAC, da dosežemo reakcijsko koncentracijo 2,28 do 2,4 g na liter. pH reakcije držimo 2 uri pri 5,0±0,l pri 15 do 30°C. Po 2 urah naravnamo pH na 7,0±0,1 ob uporabi sterilnega IN natrijevega hidroksida in reakcijo shranjujemo pri 1 do 5°C 16 do 20 ur.
Reakcijsko zmes pustimo segreti na 15 do 30°C in reakcijsko posodo priključimo na ultrafiltracijsko enoto, opremljeno s 30000 MWC0 regenerirano celulozno patrono. Dodamo trden amonijev sulfat do 60% nasičenja (za sero-skupine A, W135 in Y) in 50% nasičenja (za sero-skupino C). Konjugatno reakcijsko zmes diafiltriramo proti 20 volumnom 60% nasičene raztopine amonijevega sulfata (za sero-skupine A, W135 in Y) in 50% nasičene raztopine amonijevega sulfata (za sero-skupino C), čemur sledi 20 volumnov 85%-ne fiziološke raztopine kuhinjske soli. Diafiltriran konjugat najprej filtriramo skozi filtrsko kapsulo, ki vsebuje 1,2-mikrometrski in 0,45-mikrometrski filter, in nato skozi drugo filtrsko kapsulo, ki vsebuje 0,22-mikrometrski filter.
Količino polisaharida in O-acetilno vsebnost merimo z istimi metodami, uporabljenimi na depolimeriziranem in derivatiziranem polisaharidu. Količino proteina določimo z metodo Lowry. Molekularno velikost konjugata določimo s prehajanjem skozi gelno filtracijsko kromatografsko kolono, ki je na tržišču pod blagovno znamko TSK6000PW, ki uporablja DNA kot prazen volumski marker, ATP kot celoten volumski marker in goveji tiroglobulin kot referenčni marker. Poleg tega merimo molekularno velikost konjugata, eluiranega iz TKS6000PW kolone, z več-kotnim laserskim svetlobnim sipanjem. Antigenski karakter konjugata merimo z vezanjem na anti-polisaharidno, za sero-skupino specifično protitelo ob uporabi dvojni sendvič-ELISA metode. Čistoto konjugatov določimo z merjenjem količine nevezanega (nekonjugiranega) polisaharida z elucijo skozi hidrofobno interakcijsko
-2121 kromatografsko kolono, nekonjugiranega proteina s kapilarno elektroforezo. sterilnostjo, L AL (endotoksin) vsebnostjo, rezidualno EDAC vsebnostjo in rezidualno vsebnostjo amonijevih ionov.
Primer 6
Formuliranje multivalentnega meningokoknega cepiva iz konjugata A, C, W135 in K polisaharida-toksoida davice
Materiali, uporabljeni pri tej pripravi, vključujejo konjugate polisaharida sero-skupin A, C, W135 in Y-toksoida davice (pripravljeni v skladu s primerom 5), sterilno, s 100 mM natrijevim fosfatom zapufrano fiziološko raztopino kuhinjske soli (0,85%-ni natrijev klorid).
Alikvot sterilne, s 100-500 mM natrijevim fosfatom zapufrane fiziološke raztopine kuhinjske soli dodamo k fiziološki raztopini kuhinjske soli (0,85%) v polnilni tank iz nerjavečega jekla, da dobimo končno koncentracijo 10 mM natrijevega fosfata v cepivu. Alikvot vsakega od dveh do štirih od sterilnih monovalentnih meningokoknih konjugatov polisaharida-toksoida davice dodamo v polnilni tank, ki vsebuje sterilno fiziološko raztopino kuhinjske soli z 10 mM natrijevim fosfatom, da dobimo končno koncentracijo 8 μ g polisaharida vsake sero-skupine na ml pufra. Formulirani tetravalentni konjugat pomešamo in filtriramo skozi 0.2 pm filter v drugi polnilni tank.
Količino polisaharida vsake sero-skupine, prisotnega v multivalentni formulaciji, določimo s komponentno saharidno analizo ob uporabi anionske izmenjevalne kromatografije z visokim pH s pulzirano amperometrično detekcijo. Količino proteina merimo z metodo Lowiy. pH cepiva merimo ob uporabi kombinacijske elektrode, priključene na pH-meter. Antigenski karakter multivaletnega konjugatnega cepiva merimo z vezanjem na anti-polisaharidno, za sero-skupino specifično protitelo ob
-2222 uporabi dvojni sendvič-ELISA metode. Imunogenost multivalentnega konjugatnega cepiva merimo s sposobnostjo vsakega konjugata, prisotnega v cepivu, da sproži tako primaren kot tudi obnovitveni anti-polisaharid IgG imunski odziv pri živalskem modelu. Čistoto multivalentnega konjugatnega cepiva določimo z merjenjem količine nevezanega (nekonjugiranega) polisaharida ob uporabi anionske izmenjevalne kromatografije z visokim pH s pulzirano amperometrično detekcijo, sterilnostjo, LAL (endotoksin) vsebnostjo, pirogensko vsebnostjo in splošno varnostjo.
Primer 7
Priprava multivalentnega meningokoknega konjugata polisaharida-proteina toksoida davice z aluminijevim hidroksidom kot adjuvansom
Priprava konjugata, adsorbiran ega na aluminijev hidroksid. Materiali, uporabljeni pri tej pripravi, vključujejo pripravek konjugatov polisaharida sero-skupin A, C, W135 in Y-toksoida davice, opisan v primeru 5, sterilno fiziološko raztopino kuhinjske soli (0,85%-en natrijev klorid) in sterilni aluminijev hidroksid v fiziološki raztopini kuhinjske soli (0,85%-en natrijev klorid).
Alikvot vsakega od sterilnih monovalentnih meningokoknih konjugatov polisaharidatoksoida davice dodamo v polnilni tank, ki vsebuje fiziološko raztopino kuhinjske soli, da dobimo končno koncentracijo 8 pg polisaharida vsake sero-skupine na ml pufra. Multivalentnemu konjugatnemu cepivu dodamo alikvot sterilnega aluminijevega hidroksida v fiziološki raztopini kuhinjske soli (0,85%-en natrijev klorid), da dosežemo končno koncentracijo 0,44 mg aluminijevega iona na ml cepiva.
Primer 8
Priprava konjugata z aluminijevim fosfatom kot adjuvansom
-2323
Materiali, uporabljeni pri tej pripravi, vključujejo pripravek konjugatov polisaharida sero-skupin A, C, W135 in Y-toksoida davice, opisan v primeru 5, sterilno fiziološko raztopino kuhinjske soli (0,85%-en natrijev klorid) in sterilni aluminijev fosfat v fiziološki raztopini kuhinjske soli (0,85%-en natrijev klorid).
Alikvot vsakega od sterilnih monovalentnih meningokoknih konjugatov polisaharidatoksoida davice dodamo v polnilni tank, ki vsebuje fiziološko raztopino kuhinjske soli, da dobimo končno koncentracijo 8 μ g polisaharida vsake sero-skupine na ml pufra. Multivalentnemu konjugatnemu cepivu dodamo alikvot sterilnega aluminijevega fosfata v fiziološki raztopini kuhinjske soli (0,85%-en natrijev klorid), da dosežemo končno koncentracijo 0,44 mg aluminijevega iona na ml cepiva.
Primer 9
Imunogenost tetravalentnega konjugatnega cepiva
Tetravalentno konjugatno cepivo preučujemo glede na njegovo sposobnost, da sproži imunski odziv pri malih laboratorijskih živalih pred evaluacijo v kliniki. Za preučevanje imunogenosti konjugatnih cepiv glede na polisaharidna cepiva smo uporabili miši, podgane in kunce. Ti živalski modeli so koristni, ker so sposobni razlikovati konjugatno cepivo od ustreznega polisaharida s svojim vzorcem imunskega odziva. Konjugatno cepivo sproži T-odvisnemu podoben imunski odziv pri teh modelih, medtem ko polisaharidno cepivo sproži T-neodvisnemu podoben imunski odziv.
Pri študijah mišje imunogenosti konjugat razredčimo s fiziološko raztopino kuhinjske soli (0,85%-en natrijev klorid) za dajanje med eno četrtino do eno šestnajstino humane doze. Mišim damo eno ali dve dozi cepiva, bodisi konjugatnega bodisi polisaharidnega, in dva tedna po cepljenju vzamemo vzorce krvi. Ena skupina miši služi kot neimunizirana kontrolna skupina. Protitelesa za polisaharid vsake sero-2424 skupine merimo z ELISA metodo. Serumske vzorce inkubiramo s prebitkom vsakega kapsularnega polisaharida, ki je vezan na vdolbino ELISA mikrotitrske plošče. Za vezavo polisaharida vsake sero-skupine na mikrotitrsko vdolbino uporabimo metiliran humani serumski albumin. Po inkubaciji izperemo mikrotitrsko vdolbino s pufrom in sekundami konjugat protitelesa-encima dodamo h kompleksu protitelesa-polisaharida, ki se veže na anti-meningokokno polisaharidno protitelo. Mikrotitrsko ploščo izperemo in h konjugatu polisaharida-meningokoknega protitelesa-sekundarnega protitelesa-encima dodamo kemičen substrat. Encim hidrolizira del kemičnega substrata, rezultat pa je tvorba barve. Količina tvorbe barve je proporcionalna količini konjugata polisaharida-meningokoknega protitelesa-sekundarnega protitelesa-encima, ki je vezan na mikrotitrsko vdolbino. Učinkovitost cepiva določimo s premerjavo referenčnih protiserumov za vsako sero-skupino, kar merimo na isti mikrotitrski plošči s paralelnim računanjem ob uporabi prileganja s štirimi parametri. Mišje referenčne protiserume generiramo pri istem soju miši, kijih posamično imuniziramo s tremi dozami konjugatnega cepiva vsake sero-skupine. Mišjim referenčnim protiserumom določimo titre na osnovi obrata razredčenja, ki daje optično gostoto 1,0.
V tabeli 1 je predstavljen povzetek anti-polisaharidnih IgG titrov za vsako seroskupino, dobljenih pri Swiss-Webster miših, ki smo jih cepili z dvema dozama bodisi tetravalentnega konjugatnega cepiva, tako tekoče formulacije kot tudi formulacije z aluminijevim hidroksidom, bodisi ustreznega tetravalentnega polisaharidnega cepiva. IgG titre merimo pri zbranih serumih iz serije desetih miši. Dve seriji 10 miši uporabimo za merjenje imunskega odziva na vsako formulacijo cepiva. Obe seriji cepimo na dan 1. Na dan 15 (2 tedna po cepljenju) vzamemo vzorce krvi eni seriji 10 miši in drugo serijo desetih miši cepimo z drugo dozo cepiva na dan 15. Dva tedna kasneje na dan 29 vzamemo vzorce krvi drugi seriji 10 miši ter neimunizirani kontrolni skupini. Vsa protitelesa titriramo istočasno, t.j. tako vzorce krvi dneva 15 kot tudi dneva 29 testiramo istočasno z neimuniziranimi kontrolami in mišjimi referenčnimi serumi.
Tabela 1
-2525
Anti-polisaharidni IgG titri na zbranih seruihe Swiss~Webster miši, cepljenih bodisi s tetravalentnim konjugatom ali polisaharidom
skupina cepiva doziranje Pg PS anti- človeski A anti- človeški C anti-človeški W135 anti-človeški Y
D15 D29 D15 D29 D15 D29 D15 D29
konjugat (brez adjuvansa) 0,25 131 2640 250 1510 1350 6100 5660 4830
konjugat (brez adjuvansa) 0,50 171 6220 416 2050 849 26000 5980 112000
konjugat (brez adjuvansa) 1,0 249 4500 525 2740 1450 16600 11300 59100
konjugat (alum. hidroksid) 0,25 2920 4500 1010 2980 2300 33700 11600 124000
konjugat (alum. hidroksid) 0,50 5800 9550 2280 1010 4810 71900 26400 330000
konjugat (alum. hidroksid) 1,0 6210 9350 2630 12800 7870 94000 32700 302000
polisaharid (brez adjuvansa) 1,0 136 173 184 205 612 608 4470 3910
neimunizirano ni - 110 145 - 623 - 777
-2626
Tetravalentno konjugatno cepivo, tako brez adjuvansa kot tudi z aluminijevim hidroksidom kot adjuvansom, je sposobno sprožiti močan anti-polisaharid IgG imunski odziv pri tem mišjem modelu. Adjuvans aluminijev hidroksid služi za izboljšanje tako primarnega kot tudi obnovitvenega odziva na vsakega od polisaharidnih konjugatov štirih sero-skupin. Tetravalentno polisaharidno cepivo sproži zanemarljiv imunski odziv na sero-skupine A, C in W135 pri tem mišjem modelu glede na neimunizirano kontrolo, medtem ko sero-skupina Y sproži znaten imunski odziv , vendar ne obnovitvenega odziva. Tetravalentno polisaharidno cepivo ne sproži obnovitvenega odziva na polisaharide vseh štirih sero-skupin pri tem modelu. Ta model lahko zlahka razločuje med polisaharidnim cepivom in konjugatnim cepivom tako z velikostjo vzorca imunskega odziva kot tudi vzorca obnovitvenega odziva na vsakega od konjugatnih cepiv sero-skupin.
Obliko tetra valentnega konjugatnega cepiva brez adjuvansa smo proučevali na kliniki glede varnosti in imunogenosti pri mladih zdravih odraslih in mladih zdravih otrocih. Pri študiji odraslih smo osebke cepili z eno samo dozo cepiva, formulirano tako, daje vsebovala 4 pg vsakega od štirih konjugatov kot polisaharida. Vzorce krvi smo vzeli tik pred cepljenjem in 28 dni po cepljenju. Protitelesa za konjugate vsake sero-skupine smo merili z ELISA merjenjem, ki kvantificira količino anti-polisaharid IgG. ELISA metoda je zelo podobna metodi, uporabljeni za merjenje količine IgG protitelesa, prisotnega v mišjih serumih.
Na kratko, serumske vzorce inkubiramo v ELISA mikrotitrskih vdolbinah, ki so preslojene s prebitnim meningokoknim polisaharidom, ki je vezan na ploščo z metiliranim humanim serumskim albuminom. Količino vezanega protitelesa določimo z reakcijo z mišji anti-human IgG specifičnim monoklonskim protitelesom, markiranim s peroksidazo. Sledeča reakcija ob uporabi peroksidaznega substrata generira kromogeni produkt, ki ga merimo spektrofotometrično. Dobljena optična gostota kromofora je v vzajemni zvezi s količino IgG protitelesa v serumu, ki je vezano na meningokokni polisaharid na mikro ti trski plošči. Količino protiteles
-2727 izračunamo s primerjavo humanih referenčnih serumov (CDC 1922) z določeno vrednostjo ob uporabi metode 4-parametrske logistične krivulje. Poleg tega protitelesa merimo glede na njihovo sposobnost liziranja za sero-skupine specifičnih bakterij. Serumske vzorce najprej deaktiviramo s toploto, da razkrojimo komplement. Serumske vzorce razredčimo z dvakratnimi razredcenji v sterilni mikrotitrski plošči s 96 vdolbinami. Za sero-skupine specifične bakterije skupaj s komplementom kunčjih mladičev dodamo k serumskim razredčenjem in pustimo inkubirati. Po inkubacijskem času dodamo k zmesi seruma/komplementa/bakterij agarni pokrivni medij. Agarno pokrivalo pustimo strditi in nato inkubiramo preko noči pri 37°C s 5% ogljikovim dioksidom. Naslednji dan preštejemo bakterijske kolonije, prisotne v vdolbinah. Titer končne točke določimo z recipročnim serumskim razredčenjem, ki daje več kot 50% usmrtitve v primerjavi s povprečjem komplementnih kontrolnih vdolbin.
V tabeli 2 je predstavljen povzetek anti-polisaharid povprečnih IgG koncentracij za vsako sero-skupino in povprečen serumski baktericidni protitelesni (SBA) titer v serumih odraslih pred in po cepljenju s tetravalntnim konjugatnim cepivom, formuliranim pri 4 pg polisaharida na dozo. Imunski odziv na konjugate vseh štirih sero-skupin je zadovoljiv, to je primerljiv imunskemu odzivu, doseženemu z odobrenim polisaharidnom cepivom tako glede IgG protitelesnega kot tudi funkcionalnega baktericidnega protitelesnega odziva. Ugotovili smo, da je cepivo varno za to starostno skupino in da je varnostni profil podoben tistemu odobrenega polisaharidnega cepiva.
Tabela 2
Anti-polisaharidna IgG GMC (group mean concentration - skupinska povprečna koncentracija) in serumski baktericidni protitelesni (SBA) GMT (group mean titer s skupinski povprečni titri) za mlade zdrave odrasle, cepljene s tetravalentnim meningokoknim konjugatnim cepivom, formuliranim pri 4 pg na dozo s polisaharidom
-2828
imunski odziv s sero- skupino ΝρΓε/Νρ08( IgG GMC (pg/ml) [95% CI] SBA GMT [95% CI]
Pre Post Pre Post
A 28/28 3,3 [2,3-4,8] 38,4 [22,2-66,4] 487 [231-1027] 6720 [4666- 15428]
C 28/28 0,4 [0,2-0,7] 5,5 [3,0-10,11 16,4 [7,1-37,7] 1560 [800-4042]
W-135 28/28 0,6 [0,3-1,0 5,8 [2,9-11,7] 10,0 [5,9-16,9] 609 [250-1481]
Y 28/28 1,3 [0,7-2,5] 6,8 [3,2-14,6] 19,0 [8,0-41,2] 390 [143-1061]
Pri skupini mlajših, otroci stari manj kot 2 leti, je imunski odziv na polisaharidno cepivo šibak in ocenili smo, da se je imunost po enem letu izgubila. Otrokom, starim 12 do 15 mesecev, damo eno samo dozo tetravalentnega konjugatnega cepiva, formuliranega pri 4 pg polisaharida vsake sero-skupine na dozo, drugo dozo tetravalentnega konjugatnega cepiva pa damo dva meseca po prvi dozi. Vzorce krvi vzamemo pred prvim in drugim cepljenjem in en mesec po drugem cepljenju. Protitelesni odzivi na konjugate štirih sero-skupin so zbrani v tabeli 3. Za vsako seroskupino opazimo obnovitveni odziv za IgG protitelo in za funkcionalno baktericidno protitelo po drugi dozi tetravalentnega konjugata. Nivo IgG protitelesa, sprožen s konjugatnim cepivom, je primerljiv tistemu, sproženemu z odobrenim polisaharidom za to starostno skupino; odziv (po 6 tednih) 3,64 pg/ml (2,96-4,49) IgG protitelesnega odziva na polisaharid skupine C. Vendar je nivo baktericidnega protitelesa, ki ga sproži konjugatno cepivo, mnogo višji, kot kar normalno sproži odobreno polisaharidno cepivo za to starostno skupino; SBA titer (po 6 tednih) 7,2 (5,0-10,4). Mislimo, da razlog za to neskladnost med IgG protitelesom in baktericidnim protitelesom pri mlajših populacijah izvira iz tega, da polisaharid sproži velik delež
-2929 protitelesa nizke avidnosti pri mlajših populacijah. Obratno je videti, da konjugat sproži veliko večji delež protitelesa visoke avidnosti. Mislimo, da je protitelo visoke avidnosti odgovorno za baktericidno aktivnost.
Tabela 3
Anti-polisaharidu a IgG GMC (group mean concentration - skupinska povprečna koncentracija) in serumski baktericidniprotitelesni (SBA) GMT (group mean titers skupinski povprečni titri) za mlade zdrave otroke (stare 1 do 2 leti), cepljene z dvema dozama tetravalentnega meningokoknega konjugatnega cepiva, formuliranega pri 4 pg na dozo s polisaharidom
imunski odziv s sero- skupino n,/n2/n3 IgG GMC (gg/rnl) [95% CI[ SBA GMT 195% Cl]
Pre doza 1 Pre doza 2 Post doza 2 Pre doza 1 Pre doza 2 Post doza 2
A 8/8/8 0,2 [0,1-0,4] 2,1 [0,9-4,8] 4,4 [2,1-9,1] 8,7 [1,4- 55,1] 1328 [179- 9871] 3158 [1857- 5371]
C 8/8/8 0,2 [0,0-0,7] 1,0 [0,3-3,1] 1,5 [0,6-3,6] 6,7 [2,0- 23,0] 117 [37,7- 365] 304 [128- 721]
W-135 8/8/8 0,1 [0,1-0,2] 0,6 [0,2-1,9] 1,5 [0,8-3,1] 6,2 [2,2- 17,2] 22,6 [2,8-185] 430 [172- 1076]
Y 8/8/8 0,3 [0,2-2,8] 1,2 [0,5-2,8] 4,5 [2,7-7,6] 5,7 [3,7-8,8] 98,7 [20,4- 478] 304 [101- 920]
-3030
Poleg sposobnosti tetravalentnega konjugatnega cepiva, da sproži visok funkcionalni proti telesni odziv pri mlajših populacijah v primerjavi z odobrenim polisaharidnim cepivom, je tetravalentno konjugatno cepivo sposobno sprožiti anamnestičen odziv, kar kaže, da je zaščita, ki jo razvije tetravalentno konjugatno cepivo v smislu predloženega izuma, dolgotrajna. Pri razvoju tetravalentnega konjugatnega cepiva smo študije izvedli najprej na bivalentni AC konjugatni formulaciji. Cepivo nudi širše pokritje kot sedanji odobreni monovalentni C konjugat, vendar ne ščiti proti boleznim, povzročenim s sero-skupinama W135 in Y.
Klinično študijo smo izvedli z majhnimi otroki, kjer smo primerjali imunski odziv na bivalentno AC polisaharidno cepivo versus bivalentno AC konjugatno cepivo. V tej študiji smo vključili tretjo skupino majhnih otrok, daje služila kot kontrolna skupina, prejeli pa so konjugat Haemophilus influenzae tipa b. Vse tri skupine za cepivo so prejele ista pediatrična cepiva. Skupina bivalentnega AC konjugata je prejela tri doze konjugatnega cepiva (4 pg polisaharida na dozo) pri starosti 6, 10 in 14 tednov. Skupina bivalentnega AC polisaharida je prejela dve dozi bivalentnega AC polisaharidnega cepiva (50 pg polisaharida na dozo) pri starosti 10 in 14 tednov. Skupina konjugata Haemophilus influenzae tipa b je prejela tri doze konjugatnega cepiva pri starosti 6, 10 in 14 tednov. Vzorce krvi smo odvzeli pri 6 tednih, pred cepljenjem, in pri 18 tednih, 4 tedne po cepljenju. Ko so bili otroci stari 11 do 12 mesecev, smo odvzeli vzorce krvi, in otroci, ki so prejeli bodisi bivalentno AC konjugatno cepivo ali bivalentno AC polisaharidno cepivo, so prejeli obnovitveno dozo AC polisaharida. Razlog za obnovitveno dozo polisaharida je bil, da ocenimo, če osebki bodo ali ne bodo razvili anemestičnega odziva.
Rezultati te študije, tako primarni kot tudi polisaharidni obnovitveni imunski odzivi, so predstavljeni v tabeli 4 za IgG protitelesni odziv in v tabeli 5 za SBA protitelesni odziv. IgG protitelesni odziv po primarni seriji je bil približno enak tako za polisaharidno kot tudi konjugatno cepivo. Vendar je bil baktericidni protitelesni odziv pri osebkih, cepljenih s konjugatom, mnogo večji kot tisti za osebke, cepljene s
-3131 polisaharidom. Kot smo opazili pri osebkih, starih eno leto, sproži cepljenje majhnih otrok s polisaharidom zelo malo funkcionalno-baktericidnega protitelesa. Protitelo, ki ga razvijejo majhni otroci proti polisaharidnemu cepivu, je verjetno protitelo nizke avidnosti, medtem ko je videti, da konjugatno cepivo razvije protitelo visoke avidnosti, s čimer utemeljujemo mnogo višji titer baktericidnega protitelesa. Visok nivo funkcionalnega protitelesa, ki ga sproži obnovitvena doza polisaharidnega cepiva pri osebkih, ki so prejeli konjugatno cepivo v seriji primarnega cepljenja, kaže na to, da so bili ti osebki iniciirani za spominski ali od T-celic odvisen protitelesni odziv. Osebki, ki so prejeli polisaharidno cepivo v seriji primarnega cepljenja, so razvili skromen odziv na polisaharidno obnovitveno dozo, kar kaže na od T-celic neodvisen odziv.
Tabela 4
Anti-polisaharidna IgG GMC (group mean concentration - skupinska povprečna koncentracija) pri majhnih otrocih proti sero-skupinama A in C pred in po tako imunizaciji primarne serije (starih 6f 10 in 14 tednov) kot tudi obnovitvenem cepljenju z bivalentnim ACpolisaharidom, izvedenem pri starosti 11 do 12 mesecev
imunski odziv s skupino cepiva primarno cepljenje GMC [95%CI] PS obnovitveno cepljenje GMC [95%CI]
N Pre Post N Pre Post
sero- skupina A:
AC konjugat 34 3,4 [2,2-5,4] 5,8 [4,3-8,0] 31 0,2 [0,1-0,3] 7,0 [4,0-12,0]
AC polisaharid 35 3,0 [17-5,3] 5,5 14,1-7,3] 30 0,9 [0,5-1,4] 3,1 [2,0-4,7]
-3232
HIB konjugat 36 3,2 [2,2-4,5] 0,6 [0,4-0,8] ni ni ni
sero- skupina C
AC konjugat 31 1,6 [0,9-2,8] 2,8 [2,0-3,9] 31 0,1 [0,1-0,2] 8,1 [4,5-14,5]
AC polisaharid 35 2,3 [1,4-3,9] 5,3 [3,8-7,4] 30 0,6 [0,3-1,0] 2,8 [1,7-4,7]
HIB konjugat 36 2,0 [1,2-3,5] 0,5 [0,3-0,7] ni ni ni
Tabela 5
SBA protitelesni GMT (skupinski povprečni titer)pri majhnih otrocih proti seroskupinama A in C pred in po tako imunizaciji primarne serije (starih 6, 10 in 14 tednov) kot tudi obnovitvenem cepljenju z bivalentnim AC polisaharidom, izvedenem pri starosti 11 do 12 mesecev
imunski odziv s skupino cepiva primarno cepljenje GMT [95%CI] PS obnovitveno cepljenje GMT [95%CI]
N Pre Post N Pre Post
sero- s ku p in a A:
AC konjugat 34 11,8 [7,2-19,3] 177 [101-312] 24 10,1 [5,6-18,0] 373 [162-853]
AC polisaharid 32 14,7 [8,5-25,4] 7,0 [4,7-10,5] 26 6,1 [3,9-9,5] 24,1 [11-53]
-3333
HIB konjugat 35 11,2 [6,8-18,3] 6,7 [4,3-10,5] ni ni ni
sero- skupina C
AC konjugat 34 50,8 [24-107] 189 [128-278] 27 4,6 [3,6-5,6] 287 [96,2-858]
AC polisaharid 32 62,7 [29-131] 25,4 [14,4- 44,6] 26 4,1 [3,9-4,3] 14,4 [7,9-26,1]
HIB konjugat 36 45,3 [21,9-133] 7,3 [4,7-11,3] ni ni ni
Poleg ugodnosti, ki jih predloženi izum nudi za izboljšano zaščito proti meningokoknim boleznim pri mladih populacijah in širšo zaščito proti sero-skupinam A, C, W-135 in Y, lahko tetravalentno cepivo zagotovi zaščito proti drugim patogenom z induciranjem protitelesnega odziva na nosilni protein. Kadar smo tetravalentno konjugatno cepivo ob uporabi konjugata toksoida davice dali majhnim otrokom, so ti osebki prejeli tudi rutinske pediatrične imunizacije, ki so vključevale toksoid davice. Zato pri teh osebkih ni bilo očitnega izboljšanja v protitelesnem odzivu na toksoid davice. Kadar pa smo konjugat toksoida davice dali osebkom, ki niso prejeli hkratnih cepiv, ki bi vsebovala toksoid davice, smo opazili močan obnovitveni odziv na toksoid davice. Ti osebki so prejeli režim treh doz DTP pri starosti 2, 3 in 4 mesece. Pri tej študiji so osebki prejeli bodisi eno samo dozo bivalentnega AC konjugata ali eno samo dozo bivalentnega AC polisaharidnega cepiva pri starosti med 2 in 3 leti. Vzorce krvi smo odvzeli v času cepljenja in 30 dni po cepljenju. Pri bivalentnem AC konjugatu je bil uporabljen toksoid davice kot nosilni protein.
Imunski odziv toksoida davice pri obeh skupinah cepiv je predstavljen v tabeli 6. Polisaharid ni služil za stimuliranje anti-difterijskega imunskega odziva pri teh
-3434 osebkih, kot smo pričakovali, vendar smo opazili močan anti-difterijski imunski odziv za osebke, ki so prejeli AC konjugat. Zato lahko meningokokno konjugatno cepivo zagotovi dodatno ugodnost stimuliranja imunskega odziva na nosilni protein, pri čemer zagotovi zaščito proti boleznim, povzročenim s Corynebacteria diphtheriae, kadar kot nosilni protein uporabimo toksoid davice.
Tabela 6
Anti-difterijsko protitelo z ELISA GMT (skupinski povprečni titer) v IU/mlpri mladih zdravih otrocih, cepljenih bodisi z bivalentnim AC difterijskim toksoidnim konjugatnim cepivom, formuliranim pri 4 pg kot polisaharida na dozo bodisi z bivalentnim AC polisaharidnim cepivom, formuliranim pri 50 pg kot polisaharida na dozo
imunski odziv s skupino cepiva Npr(/Np0St anti-difterijsko protitelo (ELISA - IU/ml) [95% CI]
Pre Post
AC konjugat 104/103 0,047 [0,036-0,060] 21,2 [11,6-38,6]
Ac polisaharid 103/102 0,059 [0,045-0,076] 0,059 [0,045-0,077]
Reference:
Frasch, C.E., Zollenger, W.D. and Poolman, J.T. (1985) Review of Infectious Diseases 7, str. 504-510.
Reido, F.X., Plikaytis, B.D. and Broome, C. V. (1995) Pediatric Infectious Disease Journal 14, str.643-657.
Artenstein, M.S., Gold, R., Zimmerlv, J.G., Wyle, F.A., Schneider, H. and Harkins, C.
-3535 (1970) The New England Journal of Medicine 282, str. 417-420.
Peltola, H., Maketa, H., Kayhty, H., Jousimies, H., Herva, E., Hallstrom, K., Sivonen,
A., Renkonen, O.V., Pettay, 0., Karanko, V., Ahvonen, P., and Sama, S. (1997) The New England Journal of Medicine 297, str. 686-691.
Reingold, A.L., Broome, C.V., Hightower, A.W., Ajello, G.W., Bolan, G.A., Adamsbaum,
C., Jones, E.E., Phillips, C., Tiendrebeogo, H., and Yada, A. (1985) The Lancet 2, str. 114-118. Goldschneider, I., Lepow, M.L., Gotschlich, E.C., Mauck, F.T., Bachi, F., and Randolph, M. (1973) The Journal of Infectious Diseases 128, str. 769-776.
Gold, R., Lepow, M.L., Goldschneider, I., and Gotschlich, E.C. (1977) The Journal of Infectious Diseases 136, str. S31-S35.
Brandt, B.L. and Artenstein, M.S, (1975) The Journal of Infectious Diseases 131, str. S69-S72. Kayhty, H., Karanko, V., Peltola, H., Sama, S, and Makela, H. (1980) The Journal of Infectious Diseases 142, str. 861-868.
Cessey, S.J., Allen, S.J., Menon, A., Todd, J.E., Cham, K,, Carlone, G.M., Turner,
S.H., Gheesling, L.L., DeWitt, W., Plikaytis, B.D., and Greenwood, B. (1993) The Journal of Infectious Diseases 167, str. 1212-1216.
Wyle, F.A., Artenstein, M.S., Brandt, G.L., Tramont, E.C., Kasper, D.L., Altieri, P.L., Berman, S.L., and Lowenthal, J.P. (1972) The Journal of Infectious Diseases, 126, str. 514-522.
Jennings, H. J. and Lugowski, C. (1981) The Journal of lmmunology 127, str. 1011-1018.

Claims (17)

1. Imunološki sestavek, ki obsega dva, tri ali štiri različne konjugate proteina/polisaharida, kjer vsak od konjugatov obsega kapsulami polisaharid iz dveh ali več sero-skupin N. meningitidis, konjugiran na enega ali več nosilnih proteinov.
2. Imunološki sestavek po zahtevku 1, kjer kapsulame polisaharide izberemo iz skupine, ki obstoji iz kapsularnih polisaharidov iz sero-skupin A, C, W135 in Y od N. meningitidis.
3. Imunološki sestavek po zahtevku 1, kjer so kapsulami polisaharidi iz seroskupin A in C od jV. meningitidis.
4. Imunološki sestavek po zahtevku 1, kjer so kapsulami polisaharidi iz seroskupin A, C, W135 in Y od TV. meningitidis.
5. Imunološki sestavek po zahtevku 1, kjer je nosilni protein toksoid davice.
6. Imunološki sestavek po zahtevku 1, ki nadalje obsega adjuvans.
7. Imunološki sestavek po zahtevku 5, kjer je adjuvans aluminijev hidroksid.
8. Imunološki sestavek po zahtevku 5, kjer je adjuvans aluminijev fosfat.
9. Uporaba imunološkega sestavka po zahtevku 1 za pripravo zdravila za induciranje imunološkega odziva na kapsulami polisaharid od N. meningitidis pri človeku ali živali.
-3737
10. Multivalentno meningokokno cepivo, ki obsega imunološko učinkovite količine dveh do štirih različnih konjugatov proteina/polisaharida, kjer vsak od konjugatov vsebuje različen kapsulami polisaharid, konjugiran na nosilni protein, in kjer vsak kapsulami polisaharid izberemo iz skupine, ki obstoji iz kapsulamega polisaharida iz sero-skupin A, C, W135 in Y,
11. Multivalentno meningokokno cepivo po zahtevku 9, kjer kapsularne polisaharide pripravimo iz sero-skupin A in C od N. meningitidis.
12. Multivalentno meningokokno cepivo po zahtevku 9, kjer kapsularne polisaharide pripravimo iz sero-skupin A, C, W135 in Y od N. meningitidis.
13. Multivalentno meningokokno cepivo po zahtevku 9, kjer je nosilni protein toksoid davice.
14. Multivalentno meningokokno cepivo po zahtevku 9, ki nadalje obsega adjuvans.
15. Multivalentno meningokokno cepivo po zahtevku 13, kjer je adjuvans aluminijev hidroksid.
16. Multivalentno meningokokno cepivo po zahtevku 13, kjer je adjuvans aluminijev fosfat.
17. Uporaba imunološko učinkovite količine cepiva po zahtevku 9 za pripravo zdravila za induciranje imunološkega odziva na kapsulami polisaharid od N. meningitidis pri človeku ali živali
SI200220009A 2001-01-23 2002-01-22 Multivalentno meningokokno cepivo iz konjugata polisaharida-proteina SI21352A (sl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US26343501P 2001-01-23 2001-01-23
PCT/US2002/001963 WO2002058737A2 (en) 2001-01-23 2002-01-22 Multivalent meningococcal polysaccharide-protein conjugate vaccine

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SI21352A true SI21352A (sl) 2004-06-30

Family

ID=23001755

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SI200220009A SI21352A (sl) 2001-01-23 2002-01-22 Multivalentno meningokokno cepivo iz konjugata polisaharida-proteina

Country Status (38)

Country Link
US (9) US8722062B2 (sl)
EP (3) EP1355673B1 (sl)
JP (6) JP2005504718A (sl)
KR (2) KR100947751B1 (sl)
CN (1) CN100556459C (sl)
AP (1) AP1897A (sl)
AU (2) AU2007216743A1 (sl)
BE (3) BE2012C050I2 (sl)
BR (1) BRPI0206672B8 (sl)
CA (1) CA2435681C (sl)
CR (1) CR7035A (sl)
CY (2) CY1113072T1 (sl)
DK (2) DK1355673T3 (sl)
EA (1) EA006947B1 (sl)
EC (1) ECSP034701A (sl)
ES (3) ES2892316T3 (sl)
FR (3) FR12C0072I2 (sl)
GE (1) GEP20053691B (sl)
HR (1) HRP20030598B1 (sl)
HU (2) HU230490B1 (sl)
IL (3) IL157060A0 (sl)
IS (1) IS6881A (sl)
LT (1) LT5177B (sl)
LU (1) LU92108I2 (sl)
LV (1) LV13128B (sl)
MX (2) MXPA03006561A (sl)
NO (1) NO20033816L (sl)
NZ (2) NZ602682A (sl)
OA (1) OA12590A (sl)
PL (1) PL226184B1 (sl)
PT (2) PT2332581E (sl)
RO (1) RO122761B1 (sl)
SI (1) SI21352A (sl)
TN (1) TNSN03041A1 (sl)
UA (1) UA92579C2 (sl)
WO (1) WO2002058737A2 (sl)
YU (1) YU66103A (sl)
ZA (1) ZA200306176B (sl)

Families Citing this family (89)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9928196D0 (en) 1999-11-29 2000-01-26 Chiron Spa Combinations of B, C and other antigens
SI21352A (sl) 2001-01-23 2004-06-30 Aventis Pasteur Multivalentno meningokokno cepivo iz konjugata polisaharida-proteina
AU2014218428B2 (en) * 2001-06-20 2016-08-25 Glaxosmithkline Biologicals Sa Capsular polysaccharide solubilisation and combination vaccines
GB0115176D0 (en) * 2001-06-20 2001-08-15 Chiron Spa Capular polysaccharide solubilisation and combination vaccines
MX339524B (es) 2001-10-11 2016-05-30 Wyeth Corp Composiciones inmunogenicas novedosas para la prevencion y tratamiento de enfermedad meningococica.
GB0302218D0 (en) 2003-01-30 2003-03-05 Chiron Sri Vaccine formulation & Mucosal delivery
DE60328481D1 (de) * 2002-05-14 2009-09-03 Novartis Vaccines & Diagnostic Schleimhautapplizierter impfstoff, der das adjuvanz chitosan und menigokokkenantigene enthält
WO2004033623A2 (en) * 2002-05-16 2004-04-22 Aventis Pasteur, Inc. Animal component free meningococcal polysaccharide fermentation and seedbank development
AU2003257003A1 (en) * 2002-07-30 2004-02-16 Baxter Healthcare S.A. Chimeric multivalent polysaccharide conjugate vaccines
AU2003281909A1 (en) * 2002-11-14 2004-06-03 Instituto Finlay. Centro De Investigacion-Produccion De Vacunas Y Sueros. Method of obtaining conjugate vaccines and vaccine compositions containing same
GB0227346D0 (en) 2002-11-22 2002-12-31 Chiron Spa 741
ES2411080T3 (es) * 2003-01-30 2013-07-04 Novartis Ag Vacunas inyectables contra múltiples serogrupos de meningococos
WO2004080490A2 (en) * 2003-03-07 2004-09-23 Wyeth Holdings Corporation Polysaccharide - staphylococcal surface adhesin carrier protein conjugates for immunization against nosocomial infections
US20050002948A1 (en) * 2003-05-07 2005-01-06 Ryall Robert P. Method of enhanced immunogenicity to meningococcal vaccination
CA2528007C (en) * 2003-06-02 2012-03-27 Chiron Corporation Immunogenic compositions based on microparticles comprising adsorbed toxoid and a polysaccharide-containing antigen
WO2005000345A2 (en) * 2003-06-23 2005-01-06 Aventis Pasteur, Inc. Immunization method against neisseria meningitidis serogroups a and c
CA2530364C (en) * 2003-06-23 2014-03-18 Baxter International Inc. Vaccines against group y neisseria meningitidis and meningococcal combinations thereof
PT1670506E (pt) * 2003-10-02 2013-01-28 Novartis Ag Vacinas líquidas para serogrupos meningocócicos múltiplos
GB0323103D0 (en) 2003-10-02 2003-11-05 Chiron Srl De-acetylated saccharides
GB0406013D0 (en) * 2004-03-17 2004-04-21 Chiron Srl Analysis of saccharide vaccines without interference
GB0408977D0 (en) 2004-04-22 2004-05-26 Chiron Srl Immunising against meningococcal serogroup Y using proteins
AU2011204789B2 (en) * 2004-04-22 2013-07-11 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Immunising against meningococcal serogroup Y using proteins
GB0408978D0 (en) 2004-04-22 2004-05-26 Chiron Srl Meningococcal fermentation for preparing conjugate vaccines
GB0409745D0 (en) * 2004-04-30 2004-06-09 Chiron Srl Compositions including unconjugated carrier proteins
GB0500787D0 (en) 2005-01-14 2005-02-23 Chiron Srl Integration of meningococcal conjugate vaccination
PL1740217T3 (pl) * 2004-04-30 2012-03-30 Novartis Ag Szczepienie koniugatem meningokokowym
GB0413868D0 (en) * 2004-06-21 2004-07-21 Chiron Srl Dimensional anlaysis of saccharide conjugates
AU2005279821A1 (en) * 2004-08-30 2006-03-09 Sanofi Pasteur, Inc. Multivalent meningococcal derivatized polysaccharide-protein conjugates and vaccine
GB0419846D0 (en) 2004-09-07 2004-10-13 Chiron Srl Vaccine adjuvants for saccharides
KR20070095868A (ko) * 2004-09-21 2007-10-01 사노피 파스퇴르 인크 다가 수막구균 유도체화된 다당류-단백질 접합체 및 백신
GB0428394D0 (en) * 2004-12-24 2005-02-02 Chiron Srl Saccharide conjugate vaccines
GB0505518D0 (en) 2005-03-17 2005-04-27 Chiron Srl Combination vaccines with whole cell pertussis antigen
US8119146B2 (en) 2005-04-18 2012-02-21 Angelica Medina-Selby Expressing hepatitis B virus surface antigen for vaccine preparation
KR20130122810A (ko) 2005-06-27 2013-11-08 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. 백신 제조 방법
ES2443529T3 (es) 2005-09-01 2014-02-19 Novartis Vaccines And Diagnostics Gmbh Vacunación múltiple incluyendo meningococo del serogrupo C
US20070065462A1 (en) * 2005-09-21 2007-03-22 Ryall Robert P Multivalent meningococcal derivatized polysaccharide-protein conjugates and vaccine
AU2007227504B2 (en) 2006-03-17 2013-10-31 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Methods for preparing complex multivalent immunogenic conjugates
US10828361B2 (en) 2006-03-22 2020-11-10 Glaxosmithkline Biologicals Sa Regimens for immunisation with meningococcal conjugates
GB0605757D0 (en) 2006-03-22 2006-05-03 Chiron Srl Separation of conjugated and unconjugated components
PL2004225T3 (pl) * 2006-03-22 2012-09-28 Novartis Ag Schematy immunizacji koniugatami meningokokowymi
EP2007427A4 (en) 2006-04-11 2012-04-04 Yeda Res & Dev IMPROVED VACCINES COMPRISING PEPTIDE MULTIPLE MEDIA DERIVED FROM HSP60
IN2009KN04098A (sl) 2007-06-04 2015-08-28 Novartis Ag
BR122016015627A2 (pt) 2007-10-19 2018-10-30 Novartis Ag kit, composição antigênica liofilizada e método para preparação de uma composição imunogênica
GB0822633D0 (en) 2008-12-11 2009-01-21 Novartis Ag Formulation
GB0822634D0 (en) 2008-12-11 2009-01-21 Novartis Ag Meningitis vaccines
CA2747340A1 (en) 2008-12-17 2010-06-24 Novartis Ag Meningococcal vaccines including hemoglobin receptor
US8003112B2 (en) * 2009-04-16 2011-08-23 Howard University Meningococcal and pneumococcal conjugate vaccine and method of using same
ES2707778T3 (es) * 2009-12-30 2019-04-05 Glaxosmithkline Biologicals Sa Inmunógenos polisacáridos conjugados con proteínas portadoras de E. coli
CN102802662A (zh) 2010-03-18 2012-11-28 诺华有限公司 用于脑膜炎球菌血清组b的含佐剂疫苗
PL3246044T5 (pl) 2010-08-23 2024-06-17 Wyeth Llc Stabilne preparaty antygenów rLP2086 Neisseria meningitidis
WO2012031271A1 (en) 2010-09-04 2012-03-08 Novartis Ag Bactericidal antibody assays to assess immunogenicity and potency of meningococcal capsular saccharide vaccines
MY166172A (en) 2010-09-10 2018-06-07 Wyeth Llc Non-lipidated variants of neisseria meningitidis orf2086 antigens
WO2012085668A2 (en) 2010-12-24 2012-06-28 Novartis Ag Compounds
BR112013022397A2 (pt) 2011-03-02 2017-09-26 Derek O’Hagan vacinas combinadas com doses menores de antígeno e/ou adjuvante
EP2729178A1 (en) 2011-07-08 2014-05-14 Novartis AG Tyrosine ligation process
JP6170932B2 (ja) 2011-11-07 2017-07-26 ノバルティス アーゲー ｓｐｒ００９６抗原およびｓｐｒ２０２１抗原を含むキャリア分子
EP2822584A1 (en) 2012-03-08 2015-01-14 Novartis AG Combination vaccines with tlr4 agonists
ES2750366T3 (es) 2012-03-08 2020-03-25 Glaxosmithkline Biologicals Sa Ensayo de potencia in vitro para vacunas meningocócicas basadas en proteína
SA115360586B1 (ar) 2012-03-09 2017-04-12 فايزر انك تركيبات لعلاج الالتهاب السحائي البكتيري وطرق لتحضيرها
NZ628449A (en) 2012-03-09 2016-04-29 Pfizer Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
CN102660602B (zh) * 2012-04-17 2015-03-25 江苏康泰生物医学技术有限公司 快速纯化细菌荚膜多糖的方法
JP2015518845A (ja) 2012-05-22 2015-07-06 ノバルティス アーゲー 髄膜炎菌血清群ｘコンジュゲート
DK3421051T3 (da) * 2012-08-16 2020-06-22 Pfizer Fremgangsmåder til glycokonjugering og sammensætninger
CN104602705A (zh) 2012-09-06 2015-05-06 诺华股份有限公司 血清组b脑膜炎球菌和d/t/p的联合疫苗
CN102861326A (zh) * 2012-09-19 2013-01-09 天津康希诺生物技术有限公司 流脑多糖-蛋白质缀合疫苗及制备方法
CN105007935A (zh) 2012-12-18 2015-10-28 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 用于保护免于白喉和/或破伤风的缀合物
ES2685894T3 (es) 2013-03-08 2018-10-15 Pfizer Inc. Polipéptidos de fusión inmunogénicos
CN105188743A (zh) * 2013-03-18 2015-12-23 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 治疗方法
ES2756526T3 (es) 2013-07-11 2020-04-27 Novartis Ag Modificaciones de proteínas quimioenzimáticas específicas para lisina utilizando transglutaminasa microbiana
KR101905278B1 (ko) 2013-09-08 2018-10-08 화이자 인코포레이티드 나이세리아 메닌지티디스 조성물 및 그의 방법
EP3148577B1 (en) 2014-05-24 2021-01-20 Biological E Limited Novel semi-synthetic meningococcal conjugate vaccine
EP3270959A1 (en) 2015-02-19 2018-01-24 Pfizer Inc Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
WO2016134275A1 (en) 2015-02-20 2016-08-25 Bayer Healthcare Llc Contrast imaging agent with dissolved gas-evolving fluid
KR20160011136A (ko) 2015-03-25 2016-01-29 한국기계연구원 내식성이 향상된 마그네슘 합금 및 이를 이용하여 제조한 마그네슘 합금 부재의 제조방법
GB201518668D0 (en) 2015-10-21 2015-12-02 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic Comosition
AU2016383021B2 (en) 2015-12-30 2021-04-29 Ascendis Pharma A/S Auto injector with cartridge locking system
KR102204927B1 (ko) 2016-07-25 2021-01-19 에스케이바이오사이언스(주) 피막 다당류-단백질 접합 백신의 품질 평가 방법
FI3506935T3 (fi) 2016-09-02 2024-04-17 Sanofi Pasteur Inc Neisseria meningitidis -rokote
CA3035320A1 (en) 2016-09-02 2018-03-08 Glaxosmithkline Biologicals Sa Vaccines for neisseria gonorrhoeae
SG11201906519RA (en) 2017-01-31 2019-08-27 Pfizer Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
WO2019198096A1 (en) * 2018-04-11 2019-10-17 Msd Wellcome Trust Hilleman Laboratories Pvt. Ltd. Tetravalent meningococcal vaccine composition and process to prepare thereof
EP3632465A1 (en) 2018-10-03 2020-04-08 Sanofi Pasteur Inc. Combined immunization against meningococcal disease and human papillomavirus
WO2020168146A1 (en) * 2019-02-14 2020-08-20 University Of Florida Research Foundation, Inc. Honeybee commensal snodgrassella alvi vaccine against pathogenic neisseriaceae
CN110903388B (zh) * 2019-12-03 2024-01-02 兰州生物制品研究所有限责任公司 一种将脑膜炎球菌抗血清去交叉反应的方法
US11737987B2 (en) 2019-12-17 2023-08-29 9286-3620 Quebec Inc. Oral delivery systems based on in situ forming protein/polysaccharide coacervates
KR102610292B1 (ko) 2021-02-10 2023-12-04 에스케이바이오사이언스(주) 스트랩토코커스 뉴모니애 다당류와 운반체 단백질의 접합체 제조 방법
CA3211240A1 (en) 2021-02-19 2022-08-25 Sanofi Pasteur Inc. Meningococcal b recombinant vaccine
WO2023200704A1 (en) 2022-04-11 2023-10-19 Sanofi Pasteur Inc. Protein-saccharide conjugation with sodium cyanoborohydride
WO2024030931A1 (en) 2022-08-03 2024-02-08 Sanofi Pasteur Inc. Adjuvanted immunogenic composition against neisseria meningitidis b

Family Cites Families (51)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4351761A (en) 1978-05-15 1982-09-28 Research Corporation Purified antigen to test for Neisseria gonorrhoeae antibodies
US4404371A (en) 1981-01-14 1983-09-13 Battelle Memorial Institute Carboxymethylcellulose with carbonate bridges and preparation thereof
US4351762A (en) * 1981-03-10 1982-09-28 Bioresearch, Inc. Rapid, quantitative peptide synthesis using mixed anhydrides
US4356170A (en) 1981-05-27 1982-10-26 Canadian Patents & Development Ltd. Immunogenic polysaccharide-protein conjugates
US4902506A (en) 1983-07-05 1990-02-20 The University Of Rochester Immunogenic conjugates
US4619828A (en) 1982-07-06 1986-10-28 Connaught Laboratories, Inc. Polysaccharide exotoxoid conjugate vaccines
DE3382433D1 (de) 1982-11-10 1991-11-21 Mitsubishi Heavy Ind Ltd Nickel-chromlegierung.
US4761283A (en) 1983-07-05 1988-08-02 The University Of Rochester Immunogenic conjugates
US4762713A (en) * 1983-07-05 1988-08-09 The University Of Rochester Boosting of immunogenic conjugate vaccinations by unconjugated bacterial capsular polymers
DE3660966D1 (en) 1985-04-17 1988-11-24 Akzo Nv Method of applying a road marking composition
DE3518706A1 (de) 1985-05-24 1986-11-27 Kernforschungszentrum Karlsruhe Gmbh, 7500 Karlsruhe Verfahren zur herstellung von formkoerpern mit verbesserten, isotropen eigenschaften
US4814276A (en) 1986-04-25 1989-03-21 Becton, Dickinson And Company Selective medium for growth of neisseria
ES2070312T5 (es) * 1988-12-19 2003-05-16 American Cyanamid Co Vacuna de proteina de membrana exterior meningococica de clase 1.
US4963534A (en) 1989-05-19 1990-10-16 Merck & Co., Inc. Process for solubilizing polyanoinic bacterial polysaccharides in aprotic solvents
NZ239643A (en) * 1990-09-17 1996-05-28 North American Vaccine Inc Vaccine containing bacterial polysaccharide protein conjugate and adjuvant (c-nd-che-a-co-b-r) with a long chain alkyl group.
US5153312A (en) 1990-09-28 1992-10-06 American Cyanamid Company Oligosaccharide conjugate vaccines
ATE198834T1 (de) 1991-03-12 2001-02-15 Us Health Konjugate bestehend aus polysaccharid und protein
WO1993004183A1 (en) 1991-08-16 1993-03-04 Merck & Co., Inc. Process for converting lipid-containing bacterial capsular polysaccharide into lipid-free polysaccharide
US5314811A (en) 1992-07-13 1994-05-24 Merck & Co., Inc. Process for converting lipid-containing bacterial capsular polysaccharide into lipid-free polysaccharide
US5422427A (en) 1991-09-17 1995-06-06 The United States Of America As Represented By The United States Department Of Health And Human Services Pneumococcal fimbrial protein A
FR2682388B1 (fr) 1991-10-10 1995-06-09 Pasteur Merieux Serums Vacc Procede de preparation d'un oligoside par depolymerisation d'un polyoside issu d'un agent pathogene, oligoside ainsi obtenu et son utilisation notamment comme agent vaccinal.
CA2136429C (en) * 1992-05-23 2001-12-11 Jean Petre Combined vaccines comprising hepatitis b surface antigen and other antigens
US5445817A (en) 1992-08-21 1995-08-29 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Pertussis toxin used as a carrier protein with non-charged saccharides in conjugate vaccines
AU4841693A (en) 1992-08-31 1994-03-29 North American Vaccine, Inc. Vaccines against group c neisseria meningitidis
DK1090642T3 (da) 1995-06-07 2008-09-22 Glaxosmithkline Biolog Sa Vacciner omfattende et polysaccharidantigen-bæreprotein-konjugat og frit bæreprotein
US5811102A (en) * 1995-06-07 1998-09-22 National Research Council Of Canada Modified meningococcal polysaccharide conjugate vaccines
US20030157129A1 (en) 1995-06-23 2003-08-21 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Vaccine comprising a polysaccharide antigen - carrier protein conjugate and free carrier protein
US20020054884A1 (en) 1995-06-23 2002-05-09 Smithkline Beecham Biologicals, Sa Vaccine composition comprising a polysaccharide conjugate antigen adsorbed onto aluminium phosphate
EP0833662B2 (en) 1995-06-23 2011-01-26 SmithKline Beecham Biologicals S.A. A vaccine composition comprsing a Haemophilus influenzae B polysaccharide conjugate antigen adsorbed onto aluminium phosphate
US6248334B1 (en) 1997-01-08 2001-06-19 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Process for preparing conjugate vaccines including free protein and the conjugate vaccines, immunogens, and immunogenic reagents produced by this process
PT959905E (pt) 1997-01-21 2010-02-05 Sanofi Pasteur Conjugados de polissacárido e péptido
EP0975790B1 (de) 1997-01-24 2004-09-29 Schweiz. Serum-&Impfinstitut Bern Neues verfahren zur isolierung von polysacchariden
US6403306B1 (en) * 1997-04-09 2002-06-11 Emory University Serogroup-specific nucleotide sequences in the molecular typing of bacterial isolates and the preparation of vaccines thereto
CA2288267A1 (en) 1997-04-24 1998-10-29 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Coupling of unmodified proteins to haloacyl or dihaloacyl derivatized polysaccharides for the preparation of protein-polysaccharide vaccines
EP2267113B1 (en) 1997-05-28 2013-07-17 Novartis AG Culture medium for Neisseria meningitidis with soy bean extract as amino acid source and no protein complexes of animal origin
JP2002506448A (ja) * 1997-06-24 2002-02-26 カイロン コーポレイション 抗髄膜炎菌ワクチン組成物を使用して成体を免疫する方法
US5965714A (en) 1997-10-02 1999-10-12 Connaught Laboratories, Inc. Method for the covalent attachment of polysaccharides to protein molecules
ES2346022T3 (es) 1997-12-23 2010-10-07 Baxter Healthcare S.A. Procedimiento para la extraccion y el aislamiento de polisacaridos capsulares bacterianos para su uso como vacunas o ligandos a proteinas como vacunas de conjugados.
US7018637B2 (en) * 1998-02-23 2006-03-28 Aventis Pasteur, Inc Multi-oligosaccharide glycoconjugate bacterial meningitis vaccines
US6146902A (en) 1998-12-29 2000-11-14 Aventis Pasteur, Inc. Purification of polysaccharide-protein conjugate vaccines by ultrafiltration with ammonium sulfate solutions
BRPI0007936B8 (pt) 1999-02-01 2021-05-25 Eisai Co Ltd composto, formulação adjuvante imunológica, e formulação de vacina.
AR022963A1 (es) * 1999-03-19 2002-09-04 Smithkline Beecham Biolog Vacuna
ES2563677T3 (es) 1999-05-19 2016-03-15 Glaxosmithkline Biologicals Sa Composiciones de combinaciones de Neisseria
GB9918319D0 (en) 1999-08-03 1999-10-06 Smithkline Beecham Biolog Vaccine composition
GB9925559D0 (en) 1999-10-28 1999-12-29 Smithkline Beecham Biolog Novel method
DE60039450D1 (de) 1999-12-02 2008-08-21 Novartis Vaccines & Diagnostic Zusammensetzungen und methoden zur stabilisierung von biologischen molekülen nach lyophilisierung
US6800455B2 (en) * 2000-03-31 2004-10-05 Scios Inc. Secreted factors
EA006313B1 (ru) 2000-06-29 2005-10-27 Глаксосмитклайн Байолоджикалс С.А. Поливалентные иммуногенные композиции и способы их применения
SI21352A (sl) 2001-01-23 2004-06-30 Aventis Pasteur Multivalentno meningokokno cepivo iz konjugata polisaharida-proteina
GB0115176D0 (en) * 2001-06-20 2001-08-15 Chiron Spa Capular polysaccharide solubilisation and combination vaccines
GB0500787D0 (en) 2005-01-14 2005-02-23 Chiron Srl Integration of meningococcal conjugate vaccination

Also Published As

Publication number Publication date
NZ622900A (en) 2015-11-27
BE2012C050I2 (sl) 2021-03-23
DK1355673T3 (da) 2012-09-17
EP2332581A1 (en) 2011-06-15
CY1113072T1 (el) 2015-08-05
AP1897A (en) 2008-10-10
US20140308311A1 (en) 2014-10-16
US10617766B2 (en) 2020-04-14
BR0206672A (pt) 2005-05-10
US8999354B2 (en) 2015-04-07
ES2544979T3 (es) 2015-09-07
IL225522A0 (en) 2013-06-27
LT5177B (lt) 2004-11-25
HRP20030598A2 (en) 2005-06-30
UA92579C2 (ru) 2010-11-25
IS6881A (is) 2003-07-22
DK2332581T3 (en) 2015-10-05
IL157060A (en) 2013-04-30
US8722062B2 (en) 2014-05-13
CY2012030I1 (el) 2015-08-05
JP2011140522A (ja) 2011-07-21
US9844601B2 (en) 2017-12-19
CA2435681C (en) 2011-06-21
ES2892316T3 (es) 2022-02-03
EP2332581B1 (en) 2015-07-01
AU2010219288A1 (en) 2010-09-23
EP1355673A2 (en) 2003-10-29
WO2002058737A2 (en) 2002-08-01
US10143757B2 (en) 2018-12-04
PL226184B1 (pl) 2017-06-30
FR22C1001I1 (fr) 2022-02-18
PL373710A1 (en) 2005-09-05
US20190060475A1 (en) 2019-02-28
EP2957300B1 (en) 2021-07-14
BE2022C502I2 (sl) 2023-04-12
JP2014065745A (ja) 2014-04-17
JP2005504718A (ja) 2005-02-17
ES2388848T3 (es) 2012-10-19
EA200300827A1 (ru) 2004-06-24
FR15C0094I1 (sl) 2016-01-22
JP2014043474A (ja) 2014-03-13
US20130224241A1 (en) 2013-08-29
AP2003002829A0 (en) 2003-09-30
FR12C0072I2 (fr) 2013-11-01
FR15C0094I2 (fr) 2017-05-19
HRP20030598B1 (hr) 2013-05-31
US9173955B2 (en) 2015-11-03
EP2957300A3 (en) 2016-03-30
LV13128B (en) 2004-07-20
PT2332581E (pt) 2015-10-16
NO20033816D0 (no) 2003-08-27
US20130216571A1 (en) 2013-08-22
RO122761B1 (ro) 2010-01-29
US20160000928A1 (en) 2016-01-07
CN1610560A (zh) 2005-04-27
LU92108I9 (sl) 2019-01-15
US20150174259A1 (en) 2015-06-25
FR12C0072I1 (sl) 2013-01-04
JP2014043475A (ja) 2014-03-13
YU66103A (sh) 2006-05-25
AU2007216743A1 (en) 2007-10-04
EA006947B1 (ru) 2006-06-30
CR7035A (es) 2008-11-25
HUP0302999A2 (hu) 2003-12-29
PT1355673E (pt) 2012-08-31
GEP20053691B (en) 2005-12-12
EP1355673B1 (en) 2012-05-30
CN100556459C (zh) 2009-11-04
KR20090029857A (ko) 2009-03-23
NZ602682A (en) 2014-05-30
TNSN03041A1 (en) 2005-12-23
CY2012030I2 (el) 2016-08-31
BE2015C077I2 (sl) 2021-02-04
BRPI0206672B1 (pt) 2018-11-06
US8741314B2 (en) 2014-06-03
MXPA03006561A (es) 2004-10-15
US20030068336A1 (en) 2003-04-10
LU92108I2 (fr) 2013-01-29
LT2003071A (en) 2004-08-25
OA12590A (en) 2006-06-08
JP2016128526A (ja) 2016-07-14
ZA200306176B (en) 2005-03-30
KR100947757B1 (ko) 2010-03-18
IL157060A0 (en) 2004-02-08
KR100947751B1 (ko) 2010-03-18
HUP0302999A3 (en) 2011-05-30
EP2957300A2 (en) 2015-12-23
IL225522A (en) 2016-04-21
HU230490B1 (hu) 2016-08-29
WO2002058737A3 (en) 2003-05-22
HUS1600040I1 (hu) 2019-05-28
KR20030084913A (ko) 2003-11-01
NO20033816L (no) 2003-09-11
US8734813B2 (en) 2014-05-27
US20130177588A1 (en) 2013-07-11
US20180154010A1 (en) 2018-06-07
ECSP034701A (es) 2003-10-28
JP5795721B2 (ja) 2015-10-14
BRPI0206672B8 (pt) 2021-05-25
MX341760B (es) 2016-09-02
CA2435681A1 (en) 2002-08-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10617766B2 (en) Multivalent meningococcal polysaccharide-protein conjugate vaccine
AU2014201676B2 (en) Multivalent meningococcal polysaccharide-protein conjugate vaccine
AU2002241951A1 (en) Multivalent meningococcal polysaccharide-protein conjugate vaccine

Legal Events

Date Code Title Description
IF Valid on the event date
KO00 Lapse of patent

Effective date: 20120131